COLEGIO INGLS SAN JOS DEPTO.

CIENCIAS INTEGRADAS NIVEL:IVMEDIO PLAN ELECTIVO N5 DOCENTE: NORMA CRUZ TAPIA

UNIDAD 2: EXPRESIN DE LA INFORMACIN GNICA RECORDEMOS ALGUNOS ELEMENTOD IMPORTANTES DEL GENOMA

ADN

Contiene toda la informacin gentica de la clula

En la clula animal encontramos: ADN nuclear (99,995 % ADN lineal) y ADN mitocondrial (0,0005 % ADN circular). Mientras que en las clulas vegetal encontramos ADN en el ncleo, en las mitocondrias y en los cloroplastos.

Tamao El ADN nuclear tiene un tamao de 33.000 Mega bases, codificando para 32.000 genes El ADN mitocondrial presenta un tamao de 16,6 Kilo bases, codificando 37 genes. Genoma Nuclear

Genes y secuencias gnicas Relacionadas

10% ADN codificante para ARN Funcionales y polipptidos

ADN no codificante 90%

Pseudo genes Fragmentados Intrones y secuencias No traducidas Pseudo genes: son genes que antes eran activos, tuvieron una mutacin y no se expresan ni transcriben. ADN Procarionte: Se transcribe en un nico transcrito que luego se procesa y da como resultado diferentes polipptidos.

Policistrnico (Da origen a ms de una protena)

ADN EUCARIONTE Se caracteriza por ser monocistrnico, es decir que codifica slo para una protena Se divide en: ADN codificante: Encontramos genes que codifican para una protena de una copia nica. ADN No codificante ADN PROCARIONTE Presentan un solo cromosoma involucrando 3000 genes funcionales, dado que pueden vivir en diferentes hbitat con distintas temperaturas, pH, humedad, carencia de nutrientes, etc. Su sistema de control gentico obedece a 2 grandes mecanismos Control (-): El producto de algn gen impide la expresin gnica Control (+): El estado normal donde uno o ms genes se transcriben En procariontes el ADN se organiza en unidades estructurales llamadas operones en los cuales se encuentran los genes para funciones interrelacionadas OPERN Genes reguladores: Codifican para una protena que se une a la secuencia obstruyendo al promotor y por tanto impide la transcripcin de los genes estructurales, los genes reguladores no tienen que estar adyacentes a los otros genes en el opern. Secuencias Reguladoras Secuencia Operador: Controla el acceso de la ARNpol al promotor Secuencia Promotor: Donde la ARNpol reconoce el sitio de inicio de la transcripcin Genes Estructurales: Codifican las enzimas relacionadas a las protenas estructurales OPERN

Anlisis en E. coli evidenciaron la existencia de dos operones diferentes: OpernInducible: Son aquellos que en condiciones normales no se expresan, sino que lo hacen en respuesta a un agente inductor transcribiendo los genes estructurales. Ejemplo: La lactosa, maltosa, arabinosa. La lactosa, azcar de la leche, es hidrolizada por la enzima -Galactosidasa. Esta enzima es inducible solo se sintetiza en grandes cantidades, en presencia de lactosa que es el sustrato sobre el cual opera. OpernReprimible: Sintetiza molculas necesarias para la clula, al aumentar las concentraciones de estas molculas ellas mismas actan como un agente represor, inhibiendo la transcripcin de los genes estructurales. Ejemplo: OpernTritrofano- Histidina Experimento de Jacob y Monod (1961)

Estudiando el fenmeno de mutacin bacteriana, en diferentes fuentes carbonadas con cultivos de E. coli, se observaron las siguientes cinticas: Grficos
Cintica exponencial Cintica diauxica

Anlisis de los resultados: En la grfica de la glucosa, se observa un crecimiento exponencial. La grfica de la lactosa, el cultivo responde tardamente presentando una fase de latencia. La grafica de lactosa + glucosa, nos indica que las bacterias metabolizan inmediatamente la glucosa, mientras que la lactosa es metabolizada tardamente. Por qu ocurre esto?

Todas las enzimas que participan en el metabolismo de la glucosa, se encuentran en el citoplasma, mientras que en un medio con lactosa, se debe ocupar la maquinaria metablica para sintetizar las enzimas necesarias, que la degradaran en glucosa + galactosa. OPERON LACTOSA El opernlac es un ejemplo de un opern inducible. Al igual que todos los operones est constituido por genes reguladores, secuencias reguladoras y genes estructurales. Los genes estructurales codifican para la sntesis de: Genes Z Y a Protena - Galactosidasa Permeasa Transacetilasa Funcin Hidrolizar la lactosa Permite el ingreso de la lactosa Desconocida

La sntesis de protenas est regulada por interacciones que involucran a un represor y a un inductor. Pasa de "desconectado" a "conectado" cuando un inductor se une al represor y lo inactiva. El gen regulador tiene como funcin, sintetizar la protena pR (represor) que se une al operador impidiendo la transcripcin. Cuando en el medio existe la presencia de lactosa o de algn anlogo de ella como el IPTG (Isopropil B-D tiogaloctsido), estos funcionan como inductores. El inductor se une la protena represora (pR), cambiando su forma, disminuyendo su afinidad por el operador, permitiendo que la ARNpol se una al promotor transcribiendo los genes estructurales.

Adems de los genes que lleva el cromosoma bacteriano, estas Pueden contener otros genes, llevados en los plsmidos. Son molculas de ADN de doble cadena mucho ms pequea

Los cientficos han analizado diversos tipos de cepas bacterianas mutantes para observar el comportamiento Del Opernlac, que se muestran, en el siguiente cuadro: - Galactosidasa No Inducida Inducida + + + +

Cepa 1 2 3

Genoma I Z Y + + + - + + I Z Y /FI Z Y - - + - + + I Z Y /FI Z Y

+ + +

Permeasa No Inducida Inducida + + + +

CONTROL POSITIVO DEL OPERN Lac Cuando se cultivan bacterias en un medio con lactosa + glucosa. Las bacterias degradan en primer lugar la glucosa, una vez que se agota se sintetiza un nucletido llamado AMPc, a partir del ATP, por una enzima denominada Adenilatociclasa. El aumento del AMPc, se comporta como una seal de alerta, que indica una baja concentracin de glucosa. Las bacterias E.coli, presentan una protena llamada CAP (protena activadora del gen del catabolito), sta se une al promotor del opern cuando se asocia al AMPc, para aumentar la sntesis de - Galactosidasa.

Gua de Trabajo Actividades 1. Seleccin Mltiple 1.- El promotor de un gen es una secuencia de nucletidos que permite la unin: a) De la ARN polimerasa al ADN b) De la ADN polimerasa al ADN c) Del ARNm al ribosoma. 2.- Qu ocurre con el funcionamiento del opern lactosa si ocurre una mutacin en el gen regulador que provoca la prdida de afinidad por la lactosa? a) La ARN pol transcribir activamente los genes estructurales. b) El represor se unira permanentemente al operador. c) Se acumularan grandes cantidades de ARN policistronico.

3.- A diferencia de los eucariotas, en la transcripcin de los procariotas. a) Se utilizan tres tipos de ADN polimerasas diferentes. b) Pueden generarse molculas de ARNmpolicistronico. c) Se requieren factores basales de transcripcin. 4.- Un gen de una bacteria puede contener informacin para: a) Exones e intrones y para una sola cadena polipeptdica b) Exones, intrones y para varias cadenas polipeptdicas c) Varias cadenas polipeptdicas, sin exones ni intrones 5.- Cul (es) de las siguientes enzimas permiten el ingreso de la lactosa, al interior de la bacteria? a) Beta galactosidasa. b) Permeasa. c) ARNpol II.

6.- En organismo procarionte, la presencia de lactosa: a) Induce la sntesis de una protena inductora. b) Inhibe la sntesis de la protena represora. c) Se une a la protena represora y la inactiva. 7.- La cintica exponencial utiliza como medio de cultivo a) Glucosa. b) Lactosa. c) Glucosa + Lactosa.

PROFUNDIZACIN
REGULACIN DE LA EXPRESIN GNICA EN BACTERIAS En las bacterias, a pesar de ser organismos unicelulares, tambin es necesario regular la expresin de los genes adaptndola a las necesidades ambientales. Es un principio de economa celular el que la expresin de los genes este regulada segn las circunstancias celulares. Un buen ejemplo de esta situacin en bacterias es la regulacin de las enzimas implicadas en el metabolismo de los azcares. Las bacterias pueden emplear para obtener energa distintas fuentes de carbono, como la glucosa, lactosa, galactosa, maltosa, ramnosa y xilosa. Existen enzimas capaces de introducir cada uno de estos azcares en la bacteria y enzimas capaces de romperlos para obtener energa. Lgicamente, sera un despilfarro energtico producir simultneamente todos los enzimas necesarios para metabolizar los diferentes azcares mencionados. Por consiguiente, sera mucho ms econmico para la clula producir solamente las enzimas necesarias en cada momento, es decir, si en el medio en el que vive la bacteria la principal fuente de carbono es la lactosa, solamente se expresaran los genes necesarios para metabolizar la lactosa, mientras que los otros genes no se expresaran. Por tanto, es esencial que exista un mecanismo de regulacin de la expresin gnica, de manera que los genes se expresen cuando sea necesario. La regulacin de la produccin de protenas (sntesis de protenas) considerando el proceso en su conjunto, puede llevarse a cabo en tres niveles: Replicacin Transcripcin Traduccin. De los tres niveles de regulacin, uno de los mejor conocidos actualmente es la regulacin durante la transcripcin. Aunque la regulacin de la transcripcin en eucariontes es ms compleja que en bacterias, muchos de sus aspectos son similares. Por tanto, comenzaremos por el estudio de la regulacin de la transcripcin en bacterias.

SISTEMAS CONSTITUTIVOS Y SISTEMAS ADAPTATIVOS Es evidente que existen algunos procesos metablicos que son necesarios para el funcionamiento normal de casi todas las clulas, de manera que existen una serie de necesidades bsicas para el mantenimiento normal de una clula. Por consiguiente, los genes que codifican para las enzimas necesarias para el metabolismo bsico celular se estn expresando continuamente, es decir, se expresan de forma constitutiva o continua. Por tal motivo, a este tipo de genes se les denomina, " genes

que guardan la casa" o genes constitutivos. Estos genes que se estn expresando continuamente no significa que su actividad no est regulada, simplemente estn sometidos a un tipo de regulacin diferente que hace que se estn expresando siempre. Los genes constitutivos codifican para sistemas enzimticos constitutivos, que se necesitan siempre para la actividad normal de la clula. Frente a los genes constitutivos, nos encontramos con los genes que se expresan solamente en determinadas situaciones y que, por consiguiente, codifican para enzimas que solamente se necesitan en momentos concretos. A este tipo de genes se les llama genes adaptativos y a las enzimas codificadas por ellos, sistemas enzimticos adaptativos. Se denominan as pensando en que se expresan cuando la clula se adapta a una determinada situacin ambiental. En algunos libros de texto se denomina a este tipo de genes, genes regulados, sin embargo, esta nomenclatura no es demasiado buena, ya que parece que los nicos genes cuya expresin est regulada seran estos. SISTEMAS INDUCIBLES Y SISTEMAS REPRESIBLES Sistemas inducibles: cuando el sustrato sobre el que va actuar la enzima provoca la sntesis del enzima. Al efecto del sustrato se le denomina induccin positiva. Por ejemplo, en E. coli en ausencia de galactsido (sustrato) hay de una diez unidades de galactosidasa (enzima) por miligramo de materia seca, mientras que en presencia de galactsido se detectan hasta 10.000 unidades de galactosidasa por miligramo de materia seca. Al compuesto que desencadena la sntesis del enzima se le denomina Inductor. Sistemas represibles: cuando el producto final de la reaccin que cataliza el enzima impide la sntesis de la misma. Este fenmeno recibe el nombre de induccin negativa. Al compuesto que impide la sntesis del enzima se le denomina correpresor. Los sistemas inducibles se corresponden a procesos catablicos de degradacin, por ejemplo, el opern lactosa, el opern arabinosa, el opern maltosa. Se trata de sistemas enzimticos encargados de degradar la lactosa, arabinosa, maltosa, etc. Los sistemas represibles se corresponden con procesos sntesis o Anabolismo, por ejemplo el opern triptfano y el opernhistina. Se trata de las rutas metablicas que conducen a la sntesis de triptfano y sntesis de histidina. CONTROL POSITIVO Y CONTROL NEGATIVO Control positivo: Se dice que un sistema est bajo control positivo cuando el producto del gen regulador activa la expresin de los genes, acta como un activador. Control negativo: se dice que un sistema est bajo control negativo cuando el producto del gen regulador reprime o impide la expresin de los genes, acta como un represor. ELEMENTOS DEL OPERN Jacob, Monod y colaboradores analizaron el sistema de la lactosa en E. coli, de manera que los resultados de sus estudios permitieron establecer el modelo gentico del Opern que permite comprender como tiene lugar la regulacin de la expresin gnica en bacterias. Jacob y Monod recibieron en 1965 el Premio Nobel pos estas investigaciones. Un Opern es grupo de genes estructurales cuya expresin est regulada por los mismos elementos de control (promotor y operador) y genes reguladores. Los principales elementos que constituyen un opern son los siguientes: Los genes estructurales: llevan informacin para polipptidos. Se trata de los genes cuya expresin est regulada. Los operones bacterianos suelen contener varios genes estructurales, son polignicos o policistrnicos. Hay algunos operones bacterianos que tienen un solo gene estructural. Los operoneseucariticos suelen contener un slo gen estructural siendo monocistrnicos. El promotor (P): se trata de un elemento de control que es una regin del ADN con una secuencia que es reconocida por la ARN polimerasa para comenzar la transcripcin. Se encuentra inmediatamente antes de los genes estructurales. Abreviadamente se le designa por la letra P. El operador (O): se trata de otro elemento de control que es una regin del ADN con una secuencia que es reconocida por la protena reguladora. El operador se sita entre la regin promotora y los genes estructurales. Abreviadamente se le designa por la letra O. El gen regulador (i): secuencia de ADN que codifica para la protena reguladora que reconoce la secuencia de la regin del operador. El gen regulador est cerca de los genes estructurales del opern pero no est inmediatamente al lado. Abreviadamente se le denomina gen i.

Protena reguladora: protena codificada por el gen regulador. Est protena se une a la regin del operador. Inductor: sustrato o compuesto cuya presencia induce la expresin de los genes. Elementos de control Molculas difusibles Promotor Operador Protenas reguladoras Efectores Inductores Codifican para polipptidos Codifica para protena reguladora

Elementos que intervienen en la regulacin de la expresin gnica en bacterias. Elementos del Opern.

Genes Estructurales Gen regulador

OPERN LACTOSA: CONTROL NEGATIVO El Opern lactosa, que abreviadamente se denomina Opernlac, es un sistema inducible que est bajo control negativo, de manera que la protena reguladora, producto del gen regulador i, es un represor que impide la expresin de los genes estructurales en ausencia del inductor. El inductor del sistema es la lactosa. Como veremos ms adelante, el opernlac tambin est bajo control positivo, ya que existe otra protena que estimula la transcripcin de los genes estructurales. Los genes estructurales del opern lactosa son los siguientes: El gen z+: codifica para la b-galactosidasa que cataliza la hidrolisis de la lactosa en glucosa ms galactosa. El gen y+: codifica para la galactsidopermeasa que transporta b-galactsidos al interior de la clula bacteriana. El gen a+: codifica para la tiogalactsidotransacetilasa que cataliza la transferencia del grupo acetil del acetil Coenzima A al 6-OH de un aceptor tiogalatsido. Este gen no est relacionado con el metabolismo de la lactosa.

El verdadero inductor del sistema es la Alolactosa y no la lactosa de manera que la galactosidasatransforma la lactosa en Alolactosa. En los estudios del opern lactosa se utiliza como inductor un anlogo sinttico de la lactosa que es el Isopropiltiogalactsido (IPTG). El IPTG no necesita ser transportado por la galactsidopermeasa para entrar en la bacteria. Las cepas normales de E. coli son inducibles, de manera que en ausencia del inductor (la lactosa), la protena represora producto del gen i se encuentra unida a la regin operadora e impide la unin de la ARN-polimerasa a la regin promotora y, como consecuencia, no se transcriben los genes estructurales

Opern lactosa en ausencia de lactosa

Sin embargo, en presencia del inductor (la lactosa), este se une a la protena reguladora que cambia su conformacin y se suelta de la regin operadora dejando acceso libre a la ARN-polimerasa para que se una a la regin promotora y se transcriban los genes estructurales. Por consiguiente, la presencia del inductor hace que se expresen los genes estructurales del opern, necesarios para metabolizar la lactosa.

Opern lactosa en presencia de lactosa

Tambin es conveniente recordar que los tres genes estructurales del opern lactosa se transcriben juntos en un mismo ARNm, es decir que los ARN mensajeros de bacterias suelen ser policistrnicos, polignicos o multignicos. Sin embargo, en eucariontes los mensajreos suelen senmonocistrnicos o monognicos, es decir, corresponden a la transcripcin de un solo gen estructural.

Opern lactosa: ARNmmultignico o policistrnico

En la siguiente tabla se muestra la expresin de los genes del opern lactosa en ausencia y en presencia + + + + del inductor (lactosa) en una bacteria normal i p o z y a . SI = significa que se expresan, NO = significa que no se expresan. Bacteria normal Genotipo + + + + i poz y a Expresin de los genes estructurales del Opern lactosa Ausencia de inductor (Sin lactosa) Presencia de inductor (Con lactosa) + + + + + + z y a z y a NO NO NO SI SI SI

El conocimiento profundo del funcionamiento del opern lactosa se obtuvo gracias a la obtencin de mutantes que afectaban a los genes estructurales, a los elementos de control (promotor y operador) y al gen regulador. Adems, tambin fue muy importante el estudio del opern lactosa en bacterias diploides parciales o merocigotos.

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