FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE MEDICINA

PRCTICA DE MICROBIOLOGA TEMA TINCIN, CULTIVO Y AGARES TERCER SEMESTRE DE CARRERA 3ro. B

INTEGRANTES CEVALLOS ZAMBRANO MICHAEL ISAIAS CHVEZ ARVALO ANA ISABEL CHANCAY ARANTXA CRUZATTY SANCN MARA JOSE

DOCENTE DRA. YULY ROMAN

SEPTIEMBRE 2012 FEBRERO 2013

FUNDAMENTOS El tamao de la mayora de las clulas bacterianas es tal que resultan difciles de ver con el microscopio ptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la clula y el medio que la rodea, y el medio ms simple de aumentar el contraste es la utilizacin de colorantes. Estos pueden emplearse para distinguir entre tipos diferentes de clulas o para revelar la presencia de determinados constituyentes celulares, tales como flagelos, esporas, cpsulas, paredes celulares, centros de actividad respiratoria, etc. Las clulas generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de teirlas, proceso llamado fijacin. Para bacterias, la fijacin por el calor es lo ms corriente, aunque tambin puede fijarse con sustancias qumicas como formaldehido, cidos y alcoholes. Despus de la fijacin, si se aade el colorante, no se producen ulteriores cambios estructurales en el protoplasma. La fijacin se realiza habitualmente en clulas que han sido colocadas sobre un portaobjetos, tratando despus ste con el agente fijador, y siguiendo inmediatamente el proceso de tincin. Es de recalcar que la fijacin produce habitualmente el encogimiento de las clulas; la tincin, por el contrario, hace que las clulas aparezcan mayores que lo que son realmente, de manera que las medidas de las clulas que han sido fijadas o teidas no pueden realizarse con mucha precisin. La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos que tienen alguna afinidad especfica por los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia son molculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los cidos nucleicos y los polisacridos cidos. Ejemplos de colorantes catinicos son: El azul de metileno El cristal violeta La safranina

Otros colorantes son molculas cargadas negativamente (aniones) y se combinan con los constituyentes celulares cargados positivamente, tales como muchas protenas. Esos colorantes incluyen: La eosina La fucsina cida El rojo Congo

Otro grupo de colorantes son sustancias liposolubles; los colorantes de este grupo se combinan con los materiales lipdicos de la clula, usndose a menudo para revelar la localizacin de las gotculas o depsitos de grasa. Un ejemplo de colorante liposoluble es el negro Sudn. Algunos colorantes teirn mejor slo despus de que la clula haya sido tratada con otra sustancia qumica, que no es un colorante por s mismo. Esta sustancia se denomina mordiente; un mordiente habitual es el cido tnico. El mordiente se combina con un constituyente celular y lo altera de tal modo que ahora s podr atacar el colorante.

Existen distintos tipos de tincin: TINCIN SIMPLE: Aquella en la que slo se utiliza un colorante, que generalmente tie a los microorganismos. Este tipo de tincin se denomina directa. Si el colorante proporciona una coloracin al fondo, sin alterar el aspecto de las clulas, que permanecen sin teir, la tincin se denomina negativa. Este tipo de tincin permite observar morfologa celular, tamao y agrupacin de los microorganismos. TINCIN DIFERENCIAL: Es aquella que emplea secuencialmente dos colorantes que permiten distinguir tipos de microorganismos en funcin de diferencias en su estructura y composicin qumica. La tincin de Gram y la cido-alcohol-resistente, basadas en las propiedades de la pared celular bacteriana, son las ms utilizadas.

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TINCIN ESTRUCTURAL: Se utiliza para identificar y estudiar determinadas estructuras que pueden estar presentes en los microorganismos. En las tinciones estructurales se colorea nicamente una parte de la clula. Se utilizan este tipo de tinciones para poner en evidencia la presencia de cpsulas, endosporas, flagelos o inclusiones (almidn, polifosfato, etc.).

A pesar de que fue desarrollada en el siglo XIX la tincin de GRAM es la ms utilizada en el diagnstico microbiolgico. De hecho la informacin que ofrece relativa a la composicin de la pared bacteriana es la base de todas las taxonomas en este reino. Se trata de una tincin diferencial que distingue entre bacterias con pared gruesa (Gram positivas) y bacterias con pared fina y membrana externa (Gram negativas). La mayora de las bacterias presentan una de estas dos morfologas generales. La tincin de Gram utiliza violeta de genciana como colorante primario. Tras su aplicacin todos los microorganismos se tien de violeta. Despus el lugol acta como mordiente, acentuando la penetracin del colorante primario. El tercer paso consiste en la aplicacin del decolorante, una mezcla de alcohol y acetona que elimina el violeta excepto en las bacterias con pared gruesa. Por ltimo el colorante secundario o de contraste, la safranina, tie de rojo las bacterias decoloradas, es decir las de pared fina. En resumen las bacterias Gram positivas quedan teidas de violeta y las Gram negativas de rojo.

Tambin es una tincin diferencial. Se denomina tincin cido-alcohol resistente y es especfica para una serie de bacterias con estructura de pared particular, las micobacterias. La pared de las micobacterias no est basada en peptidoglicano como las bacterias Gram positivas y
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Gram negativas, sino en cidos miclicos. Esta particularidad las hace resistentes a la decoloracin con cido y alcohol que no se produce en casi ningn otro tipo bacteriano. La tincin de Ziehl-Neelsen utiliza tres reactivos. El colorante primario es la fucsina que tie toda la preparacin de rojo brillante. Como mordiente se utiliza flameado de la preparacin con el colorante. La solucin decolorante elimina el colorante primario excepto en los bacilos cido alcohol resistentes. (BAAR). Por ltimo el azul de metileno tie de azul el resto de la preparacin. Esta tincin es til en la deteccin de bacterias del gnero Micobacterium en muestras de esputo. La presencia de bacilos rojos sobre fondo azul constituye un diagnstico casi definitivo de tuberculosis.

Alunas bacterias son capaces de desarrollar formas de resistencia denominadas esporas como mecanismo de defensa a agresiones ambientales. Son estructuras de pared gruesa en las que el microorganismo logra soportar las condiciones desfavorables de calor, desecacin, acidez, etc. Cuando las condiciones ambientales vuelven a ser favorables las esporas "germinan" y vuelven a generarse formas vegetativas. Slo algunas bacterias son capaces de formar esporas y esta caracterstica puede en algunos casos orientar el diagnstico. Estn descritos varios mtodos para teir esporas. Quizs el ms utilizado sea el de Wirtz-Conklin o tincin con verde malaquita. Este colorante se une fuertemente a las esporas gracias a la utilizacin de calor como mordiente. La fase de decoloracin en este caso se realiza con agua abundante. Las formas vegetativas pierden el color verde y se tien con el colorante de contraste (fucsina o safranina). La deteccin de esporas debe realizarse en cultivos con condiciones estresantes para la clula. Suelen utilizarse cultivos viejos en los que la escasez de nutrientes provoca la esporulacin de las bacterias. La presencia de esporas en el mbito clnico no dirige hacia los gneros Clostridium y Bacillus. Algunas esporas se desarrollan sin deformar a la
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clula vegetativa. Otras si lo hacen y generan segn la disposicin formas centrales o terminales (palillo de tambor). La posicin relativa y la morfologa de la espora constituyen caracteres taxonmicos en las especies de ambos gneros.

Algunas bacterias presentan una capa externa a la pared denominada cpsula. Est compuesta de azcares y protenas. No es una estructura vital para la bacteria, de modo que es posible que bajo determinadas condiciones ambientales o del propio desarrollo genere cpsula y bajo otras no lo haga. Se ha comprobado que la presencia de cpsula dificulta de algn modo la fagocitosis de las bacterias, es decir las cpsulas constituyen un factor de virulencia de los microorganismos. La deteccin de cpsulas en las bacterias tambin puede orientarnos en el diagnstico de laboratorio, y es especialmente importante en el diagnstico de meningitis producida por Cryptococcus neoformans. Se trata de una levadura que provoca graves cuadros de meningitis en personas inmunocomprometidas, y su deteccin en LCR lo ms precozmente posible es vital para la supervivencia del paciente. La tincin de cpsula se denomina tincin negativa porque tie el fondo de la preparacin y no el microorganismo. Desde el punto de vista formal no es una tincin propiamente dicha, porque no fija los microorganismos. Se parece ms a una preparacin en fresco. Su realizacin es sencillsima, consiste en colocar la muestra hmeda sobre el porta objetos y mezclarla con tinta china. La tinta cubre toda la preparacin a excepcin de las cpsulas. En el microscopio se observa el fondo negro y los microorganismos con cpsula sin color. Existen otras tcnicas de tincin que ponen de manifiesto ms estructuras bacterianas. Es el caso por ejemplo de las tinciones de flagelos. No obstante no tienen demasiado inters desde el punto de vista del diagnstico, y suelen realizarse ms a menudo en investigacin bsica.

La auramina es un compuesto que se une especficamente a las bacterias cido-alcohol resistente y que emite luz verde brillante cuando es excitado con luz ultravioleta. Se utiliza en el diagnstico de tuberculosis. En las muestras de esputo de pacientes con esta enfermedad pueden aparecer bacilos que emiten luz verde manzana en el microscopio de fluorescencia cuando se tien con auramina. Esta tcnica es la ms utilizada en el cribado de muestras respiratorias para el diagnstico de tuberculosis, pero tambin es til para la deteccin de otros patgenos como los quistes de Cryptosporidium, protozoo parsito intestinal causante de diarreas en individuos inmunocomprometidos.

Se trata de un compuesto con afinidad por la pared de los hongos. Tambin es un fluorocromo y emite luz blanca brillante cuando recibe luz ultravioleta. El calcofluor se aplica sobre muestras en fresco y se utiliza para detectar tanto levaduras como hongos filamentosos. En las preparaciones en fresco con calcofluor suelen utilizarse soluciones de potasa para aclarar y disgregar la muestra entre portaobjetos y cubreobjetos.

El naranja de acridina es un fluorocromo con afinidad por todo tipo de microorganismos. Suele utilizarse para detectarlos cuando las tinciones ordinarias ofrecen resultados negativos o no es posible realizarlas. Por ejemplo las bacterias del gnero Micoplasma no se tien con la tincin de gram porque carecen de pared. Sin embargo si pueden visualizarse de color naranja brillante con esta tincin.
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Una Tincin argntica es el uso de plata (en latn Argentum) para modificar selectivamente el color o la apariencia de un objeto. Es una tcnica frecuente de tincin en histologa donde se utiliza para revelar detalles extremadamente finos. Es utilizada para teir cortes histolgicos. Este tipo de tincin es importante especialmente para revelar la ubicacin de protenas (por ejemplo colgeno tipo III) y ADN. Es utilizada para demostrar ambos tipos de sustancia tanto dentro como fuera de las clulas; tambin es utilizada en las electroforesis en gel con gradiente de temperatura en geles de poliacrilamida. Algunas clulas son argentafines. Estas reducen las soluciones del catin plata (Ag+) a plata metlica luego de ser fijadas con formalina. Otras clulas sonargiroflicas. Estas reducen las soluciones del cation plata a plata metlica luego de ser expuestas a un colorante que contengan un agente reductor, por ejemplo: Hidroquinona o formalina.

Usada en histologa para identificar material cromosmico o ADN en clulas. Depende de la hidrlisis cida del ADN. El material es sometido a una hidrlisis con cido clorhdrico 1N a 60 C, o 5N a temperatura ambiente, y luego al reactivo de Schiff.

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Mtodo habitual para el examen de frotis sanguneos, cortes histolgicos y otro tipo de muestras biolgicas. Este mtodo tiene utilidad sobre todo para poner de manifiesto las rickettsias localizadas dentro de las clulas huspedes. La coloracin de Giemsa se emplea tambin para teir frotis de sangre en el examen para protozoos.

Es una tincin para lograr observar flagelos de bacterias. Es usada en laboratorios, pero no de rutina. Los pasos que sigue son el de usar Fucsina bsica sirve como tincin principal, y cido tnico es agregado a la solucin como mordiente. Los componentes de la tincin son: Fucsina bsica en Alcohol etlico al 95%, en 1.27%; cido tnico en agua destilada, en 3%; Cloruro de sodio en agua destilada, 1.5%

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Es un tipo de tincin usada en histologa para facilitar la diferenciacin de los tipos de clulas de la sangre. Se usa principalmente para teir frotis de sangre y punciones medulares, para ser examinadas al microscopio. En citogentica se usa para teir cromosomas, para facilitar el diagnstico de sndromes y enfermedades.

Corresponde a la mezcla de hematoxilina y eosina. La tincin hematoxilina y eosina es uno de los mtodos ms populares de tincin utilizado en histologa y medicina diagnstica. El mtodo supone la aplicacin de la tincin de hematoxilina, que por ser catinica o bsica, tie estructuras cidas (basfilas) en tonos azul y prpura, como por ejemplo los ncleos celulares; y el uso de eosina que tie componentes bsicos (acidfilos) en tonos de color rosa, gracias a su naturaleza aninica o cida, como el citoplasma.

Es el proceso de multiplicar microorganismo mediante las condiciones ambientales adecuadas. Los microorganismos en crecimiento realizan copias de si mismo y necesitan los elementos que se encuentran en su composicin qumica; los nutrientes deben proporcionar estos elementos de manera metablicamente accesible desde el punto de vista metablico, asimismo requieren energa metablica para sintetizar macromolculas y conservar los gradientes qumicos esenciales a travs de sus membranas. Los factores que deben controlarse durante la proliferacin son nutrimentos, pH, temperatura, aireacin, concentracin de sales y fuerza inica del medio.

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PREPARACION PARA UN MEDIO DE CULTIVO Agregar agua destilada o desmineralizada con un pH prximo a 7. Para preparar el medio de cultivo se utiliza un erlenmeyer limpio y enjuagado con agua destilada o desmineralizada. El volumen del erlenmeyer deber ser el doble del volumen de medio de cultivo que se desea preparar. Pasos a realizar: Dependiendo del volumen de medio de cultivo que se prepare, pesar en un vidrio de reloj la cantidad necesaria del medio de cultivo deshidratado. Medir en una probeta la cantidad de agua destilada necesaria. Aadir parte del agua a un erlenmeyer adecuado al volumen que vamos a preparar, y aadir al erlenmeyer el medio de cultivo. Agitar hasta la disolucin parcial y calentar un poco. Aadir el resto del agua que sirve para limpiar la superficie del objeto utilizado para pesar. Colocar el erlenmeyer sobre el mechero, apoyado en una rejilla que permita la difusin del calor y calentamos durante un tiempo que viene determinado en el prospecto del producto. Por ltimo pasar por el proceso de esterilizacin. Todos los medios de cultivo se preparan en erlenmeyer, independientemente de si es slido o lquido. Lo que diferencia su preparacin es la forma de esterilizar: MEDIOS DE CULTIVO SLIDOS EN PLACA: se preparan y esterilizan en el erlenmeyer. Para la esterilizacin se coloca un tapn de algodn envuelto en una gasa, tapado con papel y sellado con una cinta adhesiva.

MEDIOS DE CULTIVO SLIDOS O LQUIDOS EN TUBO: se preparan en el erlenmeyer y se esteriliza en el tubo, estos se llenan con un volumen que oscila entre los 5-10 mL (mediante la utilizacin una pipeta), se tapan con un tapn metlico y cubiertos con papel y cinta adhesiva. Se esterilizan colocados en una gradilla, aunque para aumentar la superficie se suelen colocar de forma inclinada.

REQUERIMIENTOS PARA EL CRECIMIENTO La mayor parte del peso seco de los microorganismos consiste en materia orgnica que contiene elementos como carbono, hidrogeno, nitrgeno, oxigeno, fosforo y azufre. Adems se requieren iones inorgnicos como potasio, sodio, hierro, magnesio, calcio y cloro para facilitar los procesos enzimticos y mantener los gradientes qumicos a travs de la membrana celular.

FUENTES DE ENERGA METABLICA Los tres mecanismos importantes para formar energa metablica son: FERMENTACIN: Se caracteriza por la fosforilizacion de sustrato, proceso enzimtico en el cual los enlaces de pirofosfato se donan directamente al ATP por un intermediario metablico fosforilado, este se forma por procesos metablicos de sustrato susceptible de fermentacin como la glucosa, lactosa Arginina. RESPIRACIN: Es anloga a los procesos de acoplamiento dependientes de energa para descargar una batera. La reduccin qumica de un oxidante a travs de una serie especfica de transportadores de electrones en la membrana establece la fuerza motriz protnica a travs de la membrana bacteriana. FOTOSNTESIS: Similar a la respiracin en el sentido de que la reduccin de un oxidante por medio de una serie especfica de transportadores de electrones establece una fuerza motriz protnica.

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La diferencia entre ambos procesos consiste en que la fotosntesis se crea el reductor y el oxidante por medios fotoquimicos por medio de energa luminosa absorbida por los pigmentos en la membrana; as, la fotosntesis contina en tanto exista una fuente de energa luminosa. Las plantas y algunas bacterias son capaces de invertir cantidades sustanciales de energa luminosa para hacer del agua un reductor para el dixido de carbono.

Es la provisin de nutrientes para el crecimiento de un organismo. Los nutrientes de los medios de cultivo deben tener todos los elementos necesarios para las sntesis biolgicas de los microorganismos e incluyen carbono, nitrgeno, azufre, fosforo, elementos trazas y vitaminas.

Las plantas y algunas bacterias son capaces de utilizar energa de fotosntesis para reducir el dixido de carbono a expensas del agua, pertenecen al grupo de microorganismos auttrofos. Otros microorganismos auttrofos son los quimiolitotrofos, que utilizan sustratos inorgnicos como hidrogeno y tiosulfato como reductor y dixido de carbono como fuente de carbono.

Constituyente importante de las protenas, cidos nucleicos y otros compuestos, y constituyen casi 5% del peso seco de una bacteria tpica.

Componente de muchas sustancias orgnicas de las clulas. En su forma elemental no puede utilizarse por plantas o animales. Sin embargo, algunas bacterias auttrofas pueden oxidarse a su forma de sulfato.

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Se lo emplea para sintetizar el ATP, cidos nucleicos y coenzimas como NAD, NADP y flavinas. Adems, muchos metabolitos, lpidos, componentes de las paredes celulares, algunos polisacridos capsulares y algunas protenas sufren fosforilizacin.

Son necesarias para algunos microorganismos incluyen inositol acido flico vitamina b12 y vitamina k. Por esta razn los microorganismos son capaces de crecer solamente cuando pueden obtener esas sustancias a partir de organismos hospederos.

A este cultivo slido se le aade un agente gelificante o solidificante. Se preparan en erlenmeyer, se dejan enfriar y luego se pueden pasar o bien a una placa o bien a un tubo. Los gelificantes ms habituales son: Alga que se caracteriza por ser inerte frente a los microorganismos y porque es lquido a la temperatura de ebullicin y solidifica entre los 45-50C. GELATINA. contiene los nutrientes y, en lugar de aadir el agar, tienen el agua que se utiliza para diluir el medio de cultivo. Se preparan en tubo. contienen agar (<5-10%). Se utilizan cuando se quiere observar movilidad bacteriana. Se hace en tubo y se utiliza la siembra en picadura con asa recta.

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EN FUNCIN DE SU COMPOSICIN ____________________________________________ 1

EMPRICOS: _________________________________________________________________ 1 QUMICAMENTE DEFINIDOS:____________________________________________________ 1 COMPLEJOS O INDEFINIDOS: ____________________________________________________ 1

EN FUNCIN DEL USO QUE SE LE DA ___________________________________________ 1

ENRIQUECIDOS: ______________________________________________________________ 1 DE ENRIQUECIMIENTO: ________________________________________________________ 1 DIFERENCIALES: ______________________________________________________________ 1 SELECTIVOS: _________________________________________________________________ 1 TRANSPORTE Y MANTENIMIENTO: _______________________________________________ 2

MEDIOS DE USO COMN EN EL LABORATORIO ______________________________ 2

AGAR SANGRE _____________________________________________________________ 2 AGAR CHOCOLATE __________________________________________________________ 3 AGAR MAC CONKEY_________________________________________________________ 3 AGAR SCHAEDLER __________________________________________________________ 4 AGAR DE CZAPEK ___________________________________________________________ 4 AGAR DE HEKTOEN _________________________________________________________ 5 AGAR CETRIMIDA __________________________________________________________ 5 AGAR SALMONELLA- SHIGELLA (SS) ____________________________________________ 5 AGAR LEGIONELLA GVPC _____________________________________________________ 6 AGAR THAYER MARTIN _____________________________________________________ 6 AGAR KANA-VANCO ________________________________________________________ 7 AGAR BBE (BACTEROIDES BILIS ESCULINA) ______________________________________ 7 AGAR LOWENSTEIN-JENSEN __________________________________________________ 9 AGAR BIGGY _______________________________________________________________ 9

BIBLIOGRAFA________________________________________________________ 10

No se conoce exactamente su composicin. se conoce la composicin y la concentracin de cada uno de los nutrientes que componen el medio de cultivo. Contienen sustancias altamente nutritivas, pero de composicin indefinida. Suelen llevar sustancias como extractos de carne, peptona, extractos de levadura. La ventaja de este medio de cultivo es que contiene muchos factores de crecimiento, por lo que podemos cultivar en l gran nmero de microorganismos. El inconveniente es que no se conoce lo que el microorganismo est consumiendo.

son aquellos medios en los cuales a una media base se le aaden determinadas sustancias nutritivas que son necesarias para el crecimiento de un microorganismo exigente. Ejemplo: agar-sangre. se utilizan solamente cuando se sospecha que el microorganismo de la muestra se encuentra en un nmero muy pequeo. Se le aporta los nutrientes y se espera que crezcan de 6 a 8 horas. Esto se utiliza, por ejemplo, cuando se sospecha la contaminacin en alimentos por Salmonella. incorpora determinadas sustancias que nos permiten diferenciar entre dos tipos de microorganismos. Ej. El agar de sal y manitol: nos permite diferenciar en el caso de los staphylococos, los que utilizan el manitol en su metabolismo de los que no. Si lo utilizan originan cidos, con lo que el pH disminuye y el indicador cambia de color. llevan incorporadas determinadas sustancias que inhiben el crecimiento de un microorganismo y facilita el crecimiento del microorganismo que nos interesa. Ej. Agar de sal y manitol: el NaCl (5%) inhibe el crecimiento de ciertos m.o y facilita el desarrollo de otros que crecen mejor en ese medio.

se utilizan cuando la muestra no se puede procesar inmediatamente despus de haberla tomado.

El agar sangre es una combinacin de un agar base (agar nutritivo) con fuente proteica (digeridos trpticos, digeridos proteicos de soja) el cual tiene un agregado de 5 % de sangre ovina, (tambin puede usarse sangre humana, para cultivos en una placa de Agar) con una pequea cantidad de hidratos de carbono naturales y cloruro sdico. El agar sangre aporta muchos factores de enriquecimiento. Se usa tambin para ver la capacidad hemoltica de los microorganismos patgenos (que es un factor de virulencia). Observando los halos hemolticos alrededor de las colonias se determina el tipo de hemlisis que posee: Alfa: halos verdosos Beta: halos incoloros Gamma: inexistencia de halos.

La produccin de hemolisinas por las bacterias depende de muchos factores ambientales como pH o atmsfera de incubacin. La aportacin de casena y peptonas de soja al agar de Tripticasa-soja hace el medio en muy nutritivo por el suministro de nitrgeno orgnico, particularmente aminocidos y pptidos de cadena ms larga. La presencia de estas peptonas en el medio permite el cultivo de una gran variedad de grmenes aerobios y anaerobios que crecen rpidamente, as como los del gnero Candida. Tambin permite el crecimiento de algunos grmenes exigentes como estreptococos, pneumococos, Brucella, corinebacterias, Erysipelothrix y Pasteurella. Las muestras que puedan contener Brucella o Neisseria deben incubarse en atmsfera enriquecida en CO2. Si se aade al medio el 0,5% de telurito potsico es muy til para el cultivo y aislamiento selectivo de Corynebacterium diphteriae, Candida albicans, Listeria y estreptococos.
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El agar chocolate es una combinacin de sangre calentada y adicionada a la media base, conteniendo hemoglobina, que aporta al medio un importante elemento para el crecimiento: el factor X o hemina termoestable, no contiene factor V. Es un medio destinado para el aislamiento de Neisserias (gonococosymeningococos), Haemofilus y otros microorganismos existentes; incluso puede convertirse en unos de los medios ms enriquecidos si le aadimos una mezcla de factores de crecimiento no contenidas en la sangre, segn las casas comerciales (Polvitex, Isovitalex, etc). El agar chocolate con Polyvitex, peromite el cultivo de la mayor parte d elos grmenes encontrados en la patologa humana o veterinaria. La siembra de lquidos cefalorraqudeos, pus, resiembra de hemocultivos, etc. Se vuelve favorable en este medio ya que contiene el factor aadido.

El Agar MacConkey es un medio selectivo y diferencial recomendado para el cultivo y aislamiento de microorganismos Gram negativos a partir de muestras clnicas, de alimentos, agua, productos lcteos y productos farmacuticos. En este medio se aislan y diferencian bacilos entricos Gram negativos fermentadores y no fermentadores de la lactosa. El Agar MacConkey en su frmula original fue utilizado para diferenciar cepas de Salmonella typhosa de otros miembros del grupo coliforme. La frmula fue modificada para mejorar el crecimiento de cepas de Salmonella y Shigella y con ello tambin se mejoraron las reacciones diferenciales entre los microorganismos patgenos entricos y el grupo coliforme. El Agar MacConkey contiene cristal violeta y sales biliares como inhibidores de organismos Gram positivos. Las colonias aisladas de bacterias que fermentan la lactosa son rosadas y pueden estar rodeadas de una zona de precipitado de sales biliares el
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cual es debido a una cada en el pH por la fermentacin de la Lactosa. Las colonias que no fermentan la lactosa (como las de S. typhi, S. paratyphi y S. disentery) permanecen incoloras. sta contiene: Digerido Pancretico de Gelatina 17.0 Sales Biliares 1.5 Digerido Pptico de Tejido Animal 1.5 Cloruro de Sodio 5.0 Digerido Pancretico de Casena 1.5 Cristal Violeta 0.001 Lactosa 10.0 Agar Bacteriolgico 13.5 Rojo Neutro 0.03 pH 7.1 0.2

Este medio reductor est particularmente adaptado al cultivo de los grmenes anaerobios. La presencia de factores de crecimiento tales como el extracto de levadura, la hemina y la vitamina K3, as como la adicin de la sangre de cordero, permiten el crecimiento de especies exigentes. Debido al elevado contenido en glucosa de este medio, la intensidad de la hemlisis de los estreptococos puede disminuir. Sembrar lo ms rpidamente posible la muestra a su llegada al laboratorio. Las muestras deben ser transportadas en un medio que garantice la anaerobiosis (Portagerm tubo o frasco). Despus de sembrar, colocar inmediatamente las placas en la jarra de anaerobiosis o bien en sistema individual.

Es

un

medio

especializado

para

estudios

de

hongos.

Se utiliza de forma muy especial para estimular las caractersticas diferenciales de Aspergillus spp, lo que facilita su identificacin, y para estimular la filamentacin de Sporothrix schenckii.

Este es un medio ideal para el aislamiento selectivo de Salmonella y Shigella spp., a partir de heces y alimentos. Este contiene sales biliares que inhiben el desarrollo de la flora acompaante, y 2 sistemas indicadores: (i) azul de bromotimol y fucsina cida como indicadores de la fermentacin de carbohidratos, y (ii) el citrato de hierro como un indicador de la formacin de SH2 a partir del tiosulfato. El desarrollo de Shigella spp., es adecuado debido a que la inhibicin de estos microorganismos por las sales biliares est disminuida por la adicin de cantidades elevadas de peptona y carbohidratos. El medio de cultivo, permite una buena diferenciacin de las colonias e inhibe el desarrollo de algunos coliformes y otras bacterias no fermentadoras de lactosa, facilitando as la identificacin de Salmonella y Shigella a partir de la muestra.

Medio de cultivo selectivo para el aislamiento de Pseudomonas aeruginosa a partir de diversas muestras. La cetrimida (Bromuro de cetiltrimetilamonio) inhibe el crecimiento de las bacterias debido a su accin como un compuesto cuaternario de amonio. La base de Agar Cetrimida promueve la produccin de piocianina y fluoresceina que se observan con luz ultravioleta en los cultivos de Pseudomonas aeruginosa, lo que puede considerarse como prueba presuntiva para su identificacin. Posteriormente se puede realizar la prueba de oxidasa.

Altamente selectivo que se utiliza para el aislamiento de Salmonella y de alguna especies de Shigella. Se dise para diferenciar fermentadores de lactosa de los que no la fermentan, proporcionando buena inhibicin de coliformes sin restringir el crecimiento de otros BGN patgenos. Salmonella y Shigella (y otros no fermentadores de lactosa) producen colonias transparentes, translcidas, mientras los pocos fermentadores de lactosa que se desarrollan dan colonias mucosas, rojizas.

El agar Legionella GVPC ha sido especialmente desarrollado para el aislamiento a partir de muestras respiratorias de la mayora de las especies de Legionella, sobretodo de aqullas responsables de infecciones: Legionella pneumophila, especie ms frecuentemente involucrada (fiebre de Pontiac) y tambin L.bozemanii, L. longbeachae, L. dumoffii, L. jordanis, L. gormanii, L. anisa y L. micdadei. El carbn activado absorbe cualquier sustancia txica en el extracto de levadura y estimula el crecimiento de Legionella. El tampn ACES estabiliza el pH del medio en 6.9 para un ptimo crecimiento. Las colonias caractersticas de Legionella son azul-grisceas, pero pueden llegar a carecer de color o ser blancas encultivos envejecidos. Tienen el borde regular rosceo y, cuando se observa bajo microscopa, tienen aspecto cristalino. El medio GVPC proporciona una excelente inhibicin del crecimiento de las bacterias Gram-positivas, de la mayora de las bacterias Gramnegativas, levaduras y hongos, mediante la combinacin optimizada de tres antibiticos.

El medio de Thayer Martin es utilizado principalmente para el aislamiento y desarrollo de especies de Neisseria El Medio de Thayer Martin es preparado a partir de la Base de Agar GC adicionada de Hemoglobina, de la mezcla de antibiticos VCNT ( Vancomicina, Colistina, Nistatina, Trimetoprim) y de Enriquecimiento GC.

En 1970 Martin y Lester modificaron la frmula original de Thayer y Martin incrementando la concentracin de glucosa y substituyendo la mezcla original de antibiticos por el VCNT.

Se utiliza para el aislamiento rpido de Bacteroides sp. Contiene 75 g/ml de Kanamicina, que inhibe a la mayora de los bacilos aerobios, facultativos y anaerobios excepto Bacteroides, y 7,5 g/ml de Vancomicina, que inhibe a la mayora de los microorganismos 12grampositivos. Contiene tambin sangre "lacada" de conejo que permite la pigmentacin precoz de los Bacteroides sp pigmentados. Muchas cepas de B. assaccharolyticus y B. gingivalis no crecern en este medio debido a su sensibilidad a la Vancomicina. Las levaduras y otros microorganismos resistentes a la Kanamicina pueden crecer en este medio, en consecuencia, debe realizarse una tincin Gram y confirmar la tolerancia al aire de todos los organismos aislados.

El medio BBE es un medio selectivo para el aislamiento e identificacin presuntiva de bacterias del grupo Bacteroides fragilis.

Fue presentado en 1978 por Livingston y sus colaboradores. La mayor parte de las infecciones humanas producidas por bacterias anaerobias son debidas a grmenes pertenecientes al grupo Bacteroides fragilis (B. fragilis, B. thetaiotaomicron, B. ovatus, B. distasonis y B. vulgatus). Es importante una rpida deteccin e identificacin de estos microorganismos ya que se ha observado un incremento de la resistencia a antibiticos mayor que en otros grupos de anaerobios.

El agar BBE permite una inhibicin selectiva de microorganismos anaerobios facultativos y de la mayor parte de los anaerobios Gram negativos debido a que contiene amikacina y oxgall.

La diferenciacin del grupo Bacteroides fragilis se basa en la hidrlisis de la esculina con produccin de esculetina y dextrosa. La esculetina reacciona con la sal de hiero presente en el medio (citrato frrico amnico) produciendo una coloracin marrn oscuro-negro rodeando a las colonias de de las cepas del grupo Bacteroides fragilis.

Contiene Amikacina que inhibe el desarrollo de los microorganismos aerobios, Bilis que inhibe a la mayora de anaerobios excepto los del grupo B. fragilis y otras pocas especies, y Esculina que es til para la deteccin de este grupo de microorganismos ya que por lo general son Esculina positivos. Tambin pueden crecer en este medio: Fusobacterium mortiferum, Klebsiella pneumoniae, Enterococcus sp, levaduras y algunos otros microorganismos.

Es esta una base para la preparacin de varios medios destinados al aislamiento, cultivo y diferenciacin de micobacterias. Los nutrientes de este medio basal, ms los aportados por el agregado de la mezcla de huevos, constituyen un rico soporte para el crecimiento de una gran variedad de micobacterias. El verde de malaquita inhibe a gran parte de la flora acompaante. Con el agregado de glicerina se estimula el crecimiento de Mycobacterium tuberculosis, aunque gran parte de M. bovis es inhibido. Agregando un 5% de NaCl, se pueden seleccionar micobacterias tolerantes a la sal, como es el caso de M. smegmatis.

El Agar Biggy (por sus siglas en ingls Bismuth-Glucose-Glycine-Yeast) es utilizado para el aislamiento y diferenciacin de especies de Candida. Tambin es conocido como Agar de Nickerson. El Agar Biggy es una modificacin de la frmula desarrollada por Nickerson quin realiz estudios sobre la reduccin de sulfito por especies de Candida. La diferenciacin est basada en la morfologa colonial y la pigmentacin tpica que se presenta en este medio. La reduccin del sulfito de bismuto se manifiesta en una pigmentacin de la colonia que en ocasiones difunde en el medio. En este medio el extracto de levadura proporciona vitaminas y aminocidos. La glicina es utilizada para estimular el crecimiento. La dextrosa es la fuente de carbono. El indicador sulfito de bismuto acta tambin como un inhibidor del desarrollo bacteriano. El agar es adicionado como agente solidificante.

Jawetz. Melnick. Adelberg. Microbiologia Medica. 25 ed. Mxico: El manual Moderno; 2010 http://www.ucm.es/info/mfar/pdfs/odonto/GuiaMicrobiologiaOd ontologia.pdf

http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm

http://www.danival.org/600%20microbio/5000micro_dvf/micro_dvf _222b.html

http://www.educa2.madrid.org/web/educamadrid/principal/files /0e8a6919-7eeb-423f-9fa8b9c866aab3ff/T%C3%89CNICAS%20DE%20VISUALLIZACI%C3%93N% 20MICROSC%C3%93PICA%20DE%20MICROORGANISMOS.pdf

http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/cat edraMicro/08_Tema_5_Cultivo.pdf

http://danival.org/600%20microbio/6000notasmicro/medioscult/m edios_110_algunos.html

http://danival.org/600%20microbio/6000notasmicro/medioscult/m edios_ch.html

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