DETERMINACIN DE CARBOHIDRATOS POR MEDIO DEL MTODO MILLER (DNS)

DANIEL GMEZ ANDRES GUTIERREZ JENNY VILLANUEVA

SENA. CENTRO DE GESTIN INDUSTRIAL COMPLEJO PALOQUEMAO BOGOT D.C. 2010

DETERMINACIN DE CARBOHIDRATOS POR MEDIO DEL MTODO MILLER (DNS)

DANIEL GMEZ ANDRES GUTIERREZ JENNY VILLANUEVA

EVIDENCIA PARA EL REA DE ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD DE LOS ENSAYOS DESARROLLADOS EN EL LABORATORIO DE ACUERDO CON LOS PROCEDIMIENTOS DEFINIDOS POR LA EMPRESA

INSTRUCTOR DEL AREA DE QUMICA APLICADA ALA INDUSTRIA JOSE MENDIETA

SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJE SENA CENTRO DE GESTIN INDUSTRIAL QUMICA APLICADA A LA INDUSTRIA BOGOT D.C.

2010 TABLA DE CONTENIDO

INTRODUCCIN.......................................................................................................4 OBJETIVOS...............................................................................................................5 MARCO TERICO....................................................................................................6 MATERIALES Y REACTIVOS...................................................................................7 PROCEDIMIENTO.....................................................................................................8 BIBLIOGRAFA..........................................................................................................9

INTRODUCCIN Los carbohidratos son molculas formadas por carbono, hidrogeno y oxigeno. Todos los carbohidratos son azucares pequeos, solubles en agua (glucosa y fructosa, por ejemplo) o bien cadenas, como el almidn y la celulosa, que se elaboran enlazando subunidades de azcar. Las pruebas de Fehling y de Benedict, por ejemplo, se basan en la capacidad de los azucares reductores de reducir los iones cpricos (Cu2+) y aportan un ensayo sencillo para reconocer azucares que pueden existir como aldehdo o cetona libre. Los azucares que reaccionan se llaman azucares reductores, que pueden unirse de forma inespecfica a otras molculas; los que no lo hacen, azucares no reductores. El mtodo DNS es una tcnica colorimtrica que emplea 3,5-cido dinitrosaliclico para la hidrlisis de polisacridos presentes en una muestra, seguido de la determinacin espectrofotomtrica a 540nm de los azcares reductores.

OBJETIVOS Realizar la determinacin de carbohidratos en una muestra especfica de almidn extrado de la cscara de pltano verde (Mussa paradisiaca), por medio del mtodo Miller o DNS.

MARCO TERICO DETERMINACIN DE LA LONGITUD DE ONDA DE ABSORCIN DEL PRODUCTO DE REDUCCIN DEL DNS La longitud de onda de absorcin del producto de la reduccin de la glucosa con el DNS, se realiz desde una longitud de onda de 500 a 700 nm. La longitud de onda de mayor absorcin del producto fue obtenida por interpolacin de la curva obtenida del espectro de absorcin complejo, que dio como resultado 570 nm. Esta longitud de onda es la empleada para la lectura de las dems soluciones patrn de glucosa a diferentes coordenadas.

CURVA DE CALIBRACIN PARA PATRONE DE GLUCOSA PRO EL METODO DE DNS La curva de calibracin obtenida para el mtodo de cuantificacin de GLUCOSA por el mtodo de DNS, presenta una tendencia lineal donde se aplica a la ley de beer que representa la relacin entre la absorbancia y la concentracin del complejo obtenido por la reduccin de la glucosa con el DNS directamente proporcional. El coeficiente de correlacin de esta curva de calibracin encontrado es de 0,9972, este valor nos indica que los datos se ajustan en una lnea recta. La pendiente de la grfica relaciona el coeficiente de extincin molar, la sensibilidad del mtodo analtico, se expresa en unidades de concentracin y est asociado al cambio mnimo de glucosa que puede detectar el instrumento, este corresponde a 0,0934 mg/ml.

MATERIALES Y REACTIVOS REACTIVOS cido dinitrosaliclico (DNS) Sulfito de sodio NaOH Tartrato de sdico potsico MATERIALES Baln aforado de 50 mL Baln aforado de 100 mL Baln aforado de 1000ml Agitador de vidrio Esptula Vidrio reloj Pipeta aforada de 1 ml Pipeta aforada de 5 ml Pipeta aforada de 10 ml Frasco lavador Beacker de 100 ml, 250ml Tubos de centrfuga de 15 ml Placa y malla de asbesto Frasco lavador Plancha de agitacin

PROCEDIMIENTO PREPARACION SOLUCION DE ALMIDN (Hidrlisis de la muestra) Diluir 2 g de almidn en 100 ml de agua destilada. Se prepara utilizando tampn de acetato 0.02 M a pH 5; se debe calentar el tampn y cuando este ebulla se adiciona lentamente el almidn una vez adicionado todo el almidn se deja ebullir por 2 minutos.

PREPARACIONDEL TAMPON ACETATO 0.02M pH 5. Acetato de sodio 0.36g/L Acido actico 0.3ml/L

PREPARACIN DEL DNS Acido 3,5-dinitrosaliclico (C7H4N2O7; PM 228,1) al 0,1 % (p/v), tartrato sdico Potsico [NaK(COO)2(CHOH)24H2O; PM 282,23] al 30 % (p/v) en NaOH (PM 40) 0,4 M. 1. Disolver 1 g de cido 3,5-dinitrosaliclico y 300 g de tartrato sdico potsico en 200 ml de hidrxido sdico 2 M (16 g de NaOH en 200 ml de agua destilada) 2. Diluir hasta 1000 ml con agua destilada. 3. El reactivo debe guardarse en bote oscuro (color topacio), siendo estable durante varias semanas.

SOLUCIN DE GLUCOSA (C6H12O6, PM 180) 1. 40 mM en agua destilada. Disolver 1,8 g de glucosa en 250 ml de agua destilada. La solucin, cuando no se est utilizando, se guardar en fro. PROTOCLO 1. Siga los pasos 1 a 3, como en Nelson-Somogyi s mtodo para extraer los azcares reductores de el material de prueba. 2. Pipeta de 0,5 a 3 ml de extracto en tubos de ensayo e igualar el volumen de 3 ml con el agua en todos los tubos. 3. Aadir 3 ml de reactivo DNS. 4. Calentar el contenido en un bao de agua hirviendo durante 5 min. 5. Cuando el contenido de los tubos son todava caliente, agregar 1 ml de solucin salina al 40% Rochelle 6. Dejar enfriar y leer la intensidad de color rojo oscuro a 510 nm. 7. Ejecutar una serie de normas con la glucosa (0A "500 g) y trazar un grfico. CLCULOS Calcular la cantidad de azcares reductores presentes en la muestra con el grfico estndar. BIBLIOGRAFA 1. Miller, G.L. (1972). Anal. Chem., 31, p. 426. 2. http://www.newagepublishers.com/samplechapter/000091.pdf