INFLUENCIA DE LA VARIACIN TEMPORAL DEL SUSTRATO SOBRE LA BIODEGRADACIN DE COMPUESTOS TXICOS

Germn Buitrn* y Alma Rosa Torres Coordinacin de Bioprocesos Ambientales, Instituto de Ingeniera, Universidad Nacional Autnoma de Mxico, Ap. Postal 70-472, 04510 Mxico D. F., MEXICO, Fax : (52 5) 616-21-64 ; Email : gbm@pumas.iingen.unam.mx *Autor para correspondencia

PALABRAS CLAVE Biodegradacin, compuestos fenlicos, ayuno, cintica, SBR, modelos

INTRODUCCIN Muchos de los procesos industriales que generan aguas conteniendo compuestos txicos orgnicos se caracterizan por su variabilidad. En efecto, en las industrias qumica, farmacutica, de plsticos, papel y celulosa, petroqumica, etc., muchos de los procesos de manufactura son en lotes. De esta manera, al efectuar el lavado de los tanques de proceso se generan aguas residuales con altas concentraciones de txicos de manera puntual y, posteriormente, la concentracin disminuye o se vuelve nula. Estas variaciones temporales de la concentracin de sustrato (o ayuno) tienen como efecto una gran variabilidad en la actividad de los microorganismos presentes en las plantas de tratamiento de aguas residuales. En general, y en el mejor de los casos, las eficiencias de eliminacin de la materia orgnica, no son satisfactorias. En ocasiones los microorganismos simplemente no toleran el txico y son inhibidos a tal grado que su actividad cesa. A pesar que la prdida de actividad debida al paso de los microorganismos por un periodo de ayuno ha sido reportada por varios autores (Arbuckle y Kennedy, 1989 ;Babcock et al., 1992 ; Hess et al., 1993), esta variable no es considerada en el diseo de los sistemas de tratamiento de aguas, ocasionando un mal funcionamiento en la operacin de las plantas de tratamiento de aguas residuales industriales. El presente trabajo tuvo como objetivo el estudio de la influencia de la variacin temporal del sustrato, o periodos de ayuno, sobre las cinticas de degradacin de compuestos fenlicos por microorganismos aerobios. Los resultados de este trabajo son una de las etapas necesarias de un proyecto ms general que busca automatizar y controlar la operacin de los reactores discontinuos secuenciales usados para la degradacin de compuestos txicos. METODOLOGA EXPERIMENTAL

Inculo microbiano Para los estudios se utiliz biomasa aclimatada a la degradacin de compuestos fenlicos. El inculo se obtuvo del tanque de aireacin de una planta de tratamiento de aguas residuales municipales. Se utilizaron dos clases de sustrato (como nica fuente de carbono y energa) 4-clorofenol (4CF) solo y una mezcla, a proporciones iguales, de fenol, 4CF, 2,4-diclorofenol (DCF) y 2,4,6-triclorofenol (TCF), en una proporcin de 25% cada uno. Se estudiaron concentraciones iniciales de 100 y 200 mg/l para el clorofenol y de 50 y 100 mg/l para la mezcla de fenoles. El medio de reaccin se complement con nitrgeno, fsforo y oligoelementos. Se estudiaron tres temperaturas (15, 20 y 25 C).

Reactor piloto utilizado El estudio se llev a cabo utilizando un proceso peridico conocido como SBR (Sequencing Batch Reactor). Los sistemas SBR presentan grandes ventajas sobre los sistemas continuos para la degradacin de compuestos especficos debido a la presin de seleccin que ejercen sobre los microorganismos. En efecto, se puede manipular tanto la distribucin de los microorganismos dentro del reactor como su estado fisiolgico (Irvine et al., 1997). La aclimatacin de los microorganismos se efectu disminuyendo el tiempo de reaccin hasta lograr la degradacin en 4 horas. Una vez aclimatada la biomasa sta fue utilizada para llevar a cabo los experimentos cinticos.

Cinticas de degradacin Se monitore la degradacin de los compuestos fenlicos antes y despus de someter a los microorganismos a periodos de ayuno del sustrato de 4, 8, 12, 24 y 36 horas. Durante los periodos de ayuno no se suministr ninguna fuente de carbono y de energa externa, nicamente se prolong la etapa de reaccin aireada del SBR. Las cinticas se realizaron utilizando 4CF o la mezcla de fenoles. La tabla 1 muestra la combinacin de experimentos realizados.

Tcnicas analticas La concentracin de fenoles se determin de acuerdo con APHA (1992) utilizando el mtodo colorimtrico de la 4-aminoantipirina y el carbono orgnico total (TOC Shimadzu modelo 5050). Antes y despus de los periodos de ayuno de monitore la viabilidad de las bacterias por medio de la cuenta hetertrofa en placa utilizando agar R2A y 0.1 mg/l de 4CF o mezcla de fenoles.Para el anlisis de los resultados se utiliz el modelo de Haldane. Las constantes max, Ks y Ki se obtuvieron a travs del ajuste de la curva de degradacin al modelo de Haldane (ecuacin 1).

La ecuacin se integr numricamente y las estimaciones se realizaron de acuerdo con el mtodo de Hook y Jeevs (Buitrn 1994).

donde:

max S KS S S 2 K I
-1

(1)

max
KS KI

: Tasa mxima de crecimiento especfico, h : Constante de afinidad, mg/l : Constante de inhibicin, (mg/l)
2

Tabla 1. Cinticas efectuadas para determinar la influencia del periodo de ayuno sobre los coeficientes max, Ks y Ki y la viabilidad. Temperatura, C
4 clorofenol mezcla de fenoles Tiempo de ayuno, h 36 4 8 12 24 36

Concentracin l Inicial, mg/ 50

4

Tiempo de ayuno, h 8 12 24

15 25

15 25 15 25

15 25 15 25

15 25 15 25

15 25 15 25

100

15 20 25

15 20 25 15 25

15 20 25 15 25

15 20 25 15 25

15 20 25 15 25

15 25

200

15 25

RESULTADOS Y DISCUSIN Cinticas de biodegradacin La figura 1 muestra una serie de datos tpica obtenida en los experimentos de biodegradacin. Como se puede observar, despus de 8 horas de ayuno las prdidas de actividad de la biomasa son evidentes, siendo la cintica efectuada a 36 horas la ms afectada por el ayuno.

La figura 2 presenta una serie de resultados cinticos para la mezcla de fenoles a una concentracin inicial de 100 mg/l. De igual manera que para el caso del clorofenol, se observa que los tiempos de biodegradacin aumentan al aumentar el tiempo de ayuno.
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 0 0.5 1 1.5 2 2.5 TIEMPO,h 3 3.5
CONCENTRACION DE 4-CF, mg/L

Antes de ayuno 4h 8h 12h 24h 36h

4.5

Figura 1. Influencia del periodo de ayuno sobre las cinticas de biodegradacin del 4CF Concentracin inicial 100 mg/l ; 20C
120 100 80 60 40 20 0 0 0.5 1 1.5 2 TIEMPO, h 2.5 3 3.5 4

CONCENTRACION DE MEZCLA DE FENOLES, mg/l

Antes de ayuno 4 h 8 h 12 h 24 h 36 h

Figura 2. Influencia del periodo de ayuno sobre las cinticas de biodegradacin de la mezcla de fenoles. Concentracin inicial 100 mg/l ; 25C

Tasa mxima de crecimiento. Los resultados muestran que la tasa mxima de crecimiento se ve severamente afectada por el paso de un periodo de ayuno. Para todos los casos estudiados, la tasa mxima disminuye al aumentar el tiempo de ayuno. Lo anterior se puede observar en las figuras 3 a 6.

0.2 0.15 Tasa de crecimiento, h

-1

0.1 0.05 0 4 8 12 24 36 15 20 Temperatura 25 (C)

Tiempo de ayuno, h

Figura 3. Influencia del tiempo de ayuno y de la temperatura sobre la tasa mxima de crecimiento. 4CF, 100 mg/l.

0.4 0.3 Tasa de crecimiento, 0.2 h

-1

0.1 15 0 4 8 12 24 36 25 Temperatura (C)

Tiempo de ayuno, h

Figura 4. Influencia del tiempo de ayuno y de la temperatura sobre la tasa mxima de crecimiento. 4CF, 200 mg/l.

0.25 0.2 Tasa de 0.15 crecimiento, 0.1 -1 h 0.05 0 4 8 12 24 36 15

25 Temperatura, C

Tiempo de ayuno, h

Figura 5. Influencia del tiempo de ayuno y de la temperatura sobre la tasa mxima de crecimiento. Mezcla de fenoles, 50 mg/l.

0.25 0.2 Tasa de 0.15 crecimiento, 0.1 -1 h 0.05 0 4 8 12 24 36 15

25 Temperatura, C

Tiempo de ayuno, h

Figura 6. Influencia del tiempo de ayuno y de la temperatura sobre la tasa mxima de crecimiento. Mezcla de fenoles, 100 mg/l. Se encontr que existe una relacin log-log entre el tiempo de ayuno y max (figura 7), es decir : log max = mlog tay + logk reescribiendo la ecuacin 2 : (2)

max = k(tay)m

(3)

Donde, max = tasa mxima de crecimento, h-1 k y m = constantes que dependen del tipo de sustrato Cabe aclarar que el modelo (3) es aplicable en el intervalo 4 tay 36, y para el intervalo de temperatura de 15 a25 C.
1
Tasa especfica de crecimiento, h-1

15 C, 100 mg/l 20 C, 100 mg/l 25 C, 100 mg/l 15 C, 200 mg/l 25 C, 200 mg/l 0.1

0.01 1 10 Tiempo de ayuno, h 100

Figura 7. Relacin logartmica entre el tiempo de ayuno y la tasa mxima de crecimiento para el 4CP a varias temperaturas y concentraciones iniciales. En la tabla 2 se presentan los valores de las constantes del modelo para las temperaturas estudiadas. Tabla 2. Coeficientes k y m del modelo (3) 4CP Mezcla

Condicin m k m k 50 mg/l 15 C -0.1587 0.2387 25 C -0.2923 0.3822 100 mg/l 15 C -0.2743 0.2412 -0.1253 0.2047 20 C -0.5411 0.3700 25 C -0.2111 0.1511 -0.1480 0.3545 200 mg/l 15 C -0.3139 0.5404 25 C -0.2583 0.1889 En la tabla 3 se analiza especficamente la influencia de periodos de ayuno de 36 horas a 25 C ya que en este caso se observaron las mayores prdidas. Para los

cuatro casos presentados, stas prdidas oscilan entre 41 y 60%. Lo anterior significa que el tiempo necesario para degradar, con una eficiencia constante, la misma concentracin inicial de sustrato aumentar en la misma proporcin. Buitrn et al. (1994) atribuyeron la disminucin de actividad a las prdidas de la actividad enzimtica y de viabilidad. Tabla 3. Influencia de un periodo de ayuno de 36 horas sobre los coeficientes cinticos para una temperatura de 25 C Concentracin Ks, mg/l Ki, mg/l comentario max, h-1 inicial, mg/l 100, 4CF 0.452 90.0 9.0 antes del ayuno 100, 4CF 0.180 0.2 4.6 despus del ayuno 200, 4CF 0.138 92.2 56.8 antes 200, 4CF 0.070 7.4 40 despus 50, mezcla 0.194 17.3 22.0 antes 50, mezcla 0.110 68 116 despus 100, mezcla 0.324 46.0 19.0 antes 100, mezcla 0.190 49.0 19.0 despus En esta misma tabla 3 se analiza tambin el efecto del periodo de ayuno sobre los coeficientes cinticos Ks y Ki. Para el caso de la constante de afinidad, Ks, el ayuno afect de manera diferente, dependiendo del tipo de sustrato. Cuando se utiliz nicamente 4CP, el ayuno de 36 horas provoc una disminucin de Ks, es decir, un incremento de la afinidad. Por otro lado, el ayuno provoc una prdida de afinidad para los microorganismos que degradaron la mezcla, pues la constante Ks increment. Si se analizan los resultados de la figuras 1 y 2, se puede observar que la curvatura final de la degradacin para la cintica con 36 horas de ayuno no es muy pronunciada, esto es, el efecto de la constante de afinidad no es muy grande. Sobre todo al efectuar la comparacin con la cintica para 4 horas de ayuno. De esta manera podemos establecer que las variaciones observadas en la constante Ks en realidad no son significativas. Los diferentes valores solo son ajustes al modelo matemtico pero en la prctica no influyen sobre el proceso de degradacin. El paso por el ayuno no tuvo efecto significativo sobre la constante de inhibicin, pues sta no se vio afectada, tanto para el clorofenol como para la mezcla de fenoles.

Efecto del ayuno sobre la viabilidad Para todos los casos estudiados, el paso por un periodo de ayuno tuvo como consecuencia la prdida de viabilidad de los microorganismos. Se observ que a 15 C las prdidas de actividad son menos severas que a 25 C; es decir, las prdidas causadas por las variaciones temporales del sustrato inductor de los microorganismos se ven atenuadas a bajas temperaturas. Las figuras 8 y 9 presentan el caso del 4CP y para la mezcla de fenoles a 100 mg/l. Se observa que a 25 C la prdida de viabilidad fue del 76 y 86% para el 4CP y la mezcla de fenoles, respectivamente, mientras que a 15C stas fueron del 41 y del 81%, respectivamente. Lo anterior muestra que a mayor toxicidad, los periodos de ayuno provocarn una mayor prdida de viabilidad.

3.5 3 2.5 2 UFC (1011 ) 1.5 1 0.5 0

V. Inicial 4h 8h 12 h 24 h 36 h

25 15 Temperatura (C) 20

Figura 8. Efecto del ayuno y la temperatura sobre la viabilidad de los microorganismos. 4CP a 100 mg/l

2 1.5 UFC (1011 ) 1 0.5 0

V. Inicial 4h 8h

15 25
12 h 24 h 36 h

Temperatura (C)

Figura 9. Efecto del ayuno y la temperatura sobre la viabilidad de los microorganismos. Mezcla de fenoles a 100 mg/l CONCLUSIONES Los resultados experimentales mostraron que la ausencia prolongada del sustrato inductor de los microorganismos aclimatados, produce prdidas considerables en la actividad de las bacterias. Dichas prdidas pudieron ser cuantificadas a travs de los coeficientes cinticos del modelo de Haldane. Se encontr que la viabilidad de los microorganismos disminuye al aumentar el tiempo de ayuno. Estas prdidas son mayores a altas temperaturas y cuando la toxicidad del sustrato es elevada. A partir de las variaciones encontradas se encontr una correlacin que asocia la tasa mxima especfica con el tiempo de ayuno. Esta relacin es de gran importancia pues ser incluida en el modelo de control del proceso con miras a su optimizacin. En efecto, al tomar en cuenta las prdidas de actividad se podr prever mejor el comportamiento del reactor y as mantener las eficiencias de biodegradacin en el punto deseado. Se estableci que las constantes de inhibicin y de afinidad no se ven significativamente afectadas por el ayuno.

AGRADECIMIENTOS Se agradece el apoyo financiero otorgado por la Direccin General de Apoyo al Personal Acadmico de la UNAM a travs del proyecto IN500396.

REFERENCIAS APHA, AWWA, WPCF (1992). Standard methods for examination of water and wastewater. American Public Health Association, 18th ed., New York Arbucke WB y Kennedy MS (1989) Activated sludge response to a parachlorophenol transint, JWPCF, 61, 476-480 Babcock RW Jr., Ro K, Hsie C. y Strenstom MK (1992) Develpment of an of-line enricher reactor process for activated sludge degradation of hazardous wastes, Wat. Environ. Res., 64, 782-791. Buitrn G, Capdeville B. y Horny P. (1994)Improvement and control of the microbial activity of a mixed population for degradation of xenobiotic compounds, Wat. Sci. Tech., 29, (7), 317-326 Hess TF, Silverstein J y Schmidt SK (1993) Effect of glucose on 2,4-dinitrophenol degradation kinetics in sequencing batch reactors, Environ, Res., 65, 7381. Irvine RL, Wilderer P y Flemming H-C (1997) Controlled unsteady state processes and technologies - an overview, Wat. Sci. Tech., 35 (1), 1-10.