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REDE COOPERATIVA DE PESQUISAS

Manual para estudo de cianobactrias planctnicas em mananciais de abastecimento pblico: caso da represa Lomba do Sabo e lago Guaba, Porto Alegre, Rio Grande do Sul

INSTITUIES PARTICIPANTES DA INTRA-REDE

IPH/UFRGS - DMAE/PMPA - MCN/FZB

APRESENTAO
Esta publicao um dos produtos da Rede de Pesquisas sobre o tema do Programa de Pesquisas em Saneamento Bsico PROSAB - Edital 04, coordenada pelo Prof. Valter Lcio de Pdua da UFMG. O PROSAB visa ao desenvolvimento e aperfeioamento de tecnologias nas reas de guas de abastecimento, guas residurias (esgoto), resduos slidos (lixo e biosslidos lodos) que sejam de fcil aplicabilidade, baixo custo de implantao, operao e manuteno, bem como visem recuperao ambiental dos corpos dgua e melhoria das condies de vida da populao, especialmente as menos favorecidas e que mais necessitam de aes nessas reas. At o final de 2005, foram lanados quatro editais do PROSAB, financiados pela FINEP, pelo CNPq e pela CAIXA, contando com diferentes fontes de recursos, como BID, Tesouro Nacional, Fundo Nacional de Recursos Hdricos (CT-HIDRO) e recursos prprios da Caixa. A gesto financeira compartilhada do PROSAB viabiliza a atuao integrada e eficiente de seus rgos financiadores que analisam as solicitaes de financiamento em conjunto e tornam disponveis recursos simultaneamente para as diferentes aes do programa (pesquisas, bolsas e divulgao), evitando a sobreposio de verbas e tornando mais eficiente a aplicao dos recursos de cada agncia. Tecnicamente, o PROSAB gerido por um grupo coordenador interinstitucional, constitudo por representantes da FINEP , do CNPq, da CAIXA, do Ministrio das Cidades, das universidades, da associao de classe e das companhias de saneamento. Suas principais funes so: definir os temas prioritrios a cada edital; analisar as propostas, emitindo parecer para orientar a deciso da FINEP e do CNPq; indicar consultores ad hoc para avaliao dos projetos; e acompanhar e avaliar permanentemente o programa. O Programa funciona no formato de redes cooperativas de pesquisa formadas a partir de temas prioritrios lanados a cada Chamada Pblica. As redes integram os pesquisadores das diversas instituies, homogeneizam a informao entre seus integrantes e possibilitam a capacitao permanente de instituies emergentes. No mbito de cada rede, os projetos das diversas instituies tm interfaces e enquadram-se em uma proposta global de estudos, garantindo a gerao de resultados de pesquisa efetivos e prontamente aplicveis no cenrio nacional. A atuao em rede permite, ainda, a padronizao de metodologias de anlises, a constante difuso e circulao de informaes entre as instituies, o estmulo ao desenvolvimento de parcerias e a maximizao dos resultados. As redes de pesquisas so acompanhadas e permanentemente avaliadas por consultores, pelas agncias financiadoras e pelo Grupo Coordenador, atravs de reunies peridicas, visitas tcnicas e Seminrios anuais.

Os resultados obtidos pelo PROSAB esto disponveis atravs de manuais, livros, artigos publicados em revistas especializadas e trabalhos apresentados em encontros tcnicos, teses de doutorado e dissertaes de mestrado publicadas. Alm disso, vrias unidades de saneamento foram construdas nestes ltimos anos por todo o pas e, em maior ou menor grau, utilizaram informaes geradas pelos projetos de pesquisa do PROSAB Alm de seu portal (www.finep.gov.br/prosab/index.html), a divulgao do PROSAB tem sido feita atravs de artigos em revistas da rea, da participao em mesas-redondas, de trabalhos selecionados para apresentao em eventos, bem como pela publicao de porta-flios e folders contendo informaes sobre os projetos de cada edital.

GRUPO COORDENADOR DO PROSAB


Jurandyr Povinelli - SAE/SC e EESC saaegabi@terra.com.br, jpovinel@sc.usp.br Ccero O. de Andrade Neto - UFRN cicero@ct.ufrn.br Deza Lara Pinto - CNPq dlara@cnpq.br Marcos Helano Montenegro - Ministrio das Cidades marcos.montenegro@cidades.gov.br Sandra Helena Bondarowsky - CAIXA sandra.bondarowsky@caixa.gov.br Jeanine Claper - CAIXA jeanine.claper@caixa.gov.br Anna Virgnia Machado - ABES annavirginia.abes@gmail.com Ana Maria Barbosa Silva - FINEP anamaria@finep.gov.br Clia Maria Poppe de Figueiredo - FINEP cmfigue@finep.gov.br O edital 4 do PROSAB foi financiado pela FINEP, CNPq e CAIXA com as seguintes fontes de recursos: Fundo Setorial de Recursos Hdricos e Recursos Ordinrios do Tesouro Nacional do Fundo Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico e Caixa Econmica Federal.

REDE DO EDITAL 4
COORDENADORES Valter Lcio de Pdua (coordenador da rede) Departamento de Engenharia Sanitria e Ambiental Universidade Federal de Minas Gerais Luiz Di Bernardo Departamento de Hidrulica e Saneamento da Escola de Engenharia de So Carlos da Universidade de So Paulo Maurcio Luis Sens Departamento de Engenharia Sanitria e Ambiental Universidade Federal de Santa Catarina Cristina Clia Silveira Brando Departamento de Engenharia Civil e Ambiental da Universidade de Braslia Luiz Fernando Cybis Instituto de Pesquisas Hidrulicas Universidade Federal do Rio Grande do Sul Jos Carlos Mierzwa Escola Politcnica da Universidade de So Paulo Edson Pereira Tangerino Faculdade de Engenharia de Ilha Solteira CONSULTORES Beatriz Susana Ovruski de Ceballos - UFCG Carlos Gomes da Nave Mendes - UNICAMP

Luiz Fernando Cybis Maria Mercedes Bendati Carmem Rosalia Marodin Maizonave Vera Regina Werner Carolina Davila Domingues

Manual para estudo de cianobactrias planctnicas em mananciais de abastecimento pblico: caso da represa Lomba do Sabo e lago Guaba, Porto Alegre, Rio Grande do Sul

Porto Alegre - RS 2006

Copyright 2006 ABES - RJ 1 edio: 1500 exemplares. CTP e impresso: Grfica Editora Editora Palotti Diagramao e editorao eletrnica: Jorn. Jos Antonio Meira da Rocha RPMT 5059.
joseantoniorocha@gmail.com

Manual para estudo de cianobactrias planctnicas em mananciais de abastecimento pblico: caso da represa Lomba de Sabo e lago Guaba, Porto Alegre, Rio Grande do Sul. Rio de Janeiro : ABES, 2006. 64p. 1 il.

ISBN

85-7022-153-3

1 Recursos Hdricos 2 Microbiologia I. Cybis, Luiz Fernando II. Bendati, Maria Mercedes III. Maizonave, Carmem Rosalia Marodin IV. Werner, Vera R. V. Domingues, Carolina Davila

CDU 574

AUTORES
Luiz Fernando Cybis
Possui graduao em Engenharia Civil pela Universidade Federal do Rio Grande do Sul (1980), mestrado em Recursos Hdricos e Saneamento Ambiental pelo Instituto de Pesquisas Hidrulicas (IPH) da Universidade Federal do Rio Grande do Sul (1987) e doutorado em Public Health Engineering, pela The University of Leeds (1993). Professor adjunto do IPH da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, onde exerce atualmente a direo. Tem experincia na rea de Engenharia Sanitria e Ambiental, atuando principalmente nos seguintes temas: reator seqencial em batelada, lodos ativados, eutrofizao, qualidade das guas e florao de algas. Participa do Comit de Gerenciamento da Bacia Hidrogrfica do Lago Guaba (RS), sendo atualmente o seu presidente.

Maria Mercedes Bendati


bacharel e licenciada em Cincias Biolgicas pela Universidade Federal do Rio Grande do Sul, com mestrado em Ecologia na mesma universidade. Foi bolsista do DAAD, realizando curso de ps-graduao em Biogeografia e Avaliao Ambiental, pela Universitt des Saarlandes, Alemanha. Tem atuado nos ltimos anos na rea de saneamento, em especial no monitoramento de mananciais e em problemas biolgicos relacionados, como floraes de cianobactrias e espcies invasoras (mexilho-dourado). Foi vice-presidente do Comit de Gerenciamento da Bacia Hidrogrfica do Lago Guaba durante trs gestes. Atualmente exerce atividades junto Coordenadoria Geral de Vigilncia em Sade, da Secretaria Municipal de Sade, da Prefeitura de Porto Alegre.

Carmem Rosalia Marodin Maizonave


Biloga, formada pela Universidade Federal do Rio Grande do Sul, especialista em Ecologia Humana pela Universidade do Rio dos Sinos e especialista em Sistemas e Tratamento de Esgotos Sanitrios pela Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Atua h vrios anos na rea de hidrobiologia aplicada ao saneamento, com nfase no estudo do fitoplncton e cianobactrias, junto a Diviso de Pesquisa do Departamento Municipal de gua e Esgotos de Porto Alegre (DMAE).

Vera Regina Werner


biloga formada pela Pontifcia Universidade Catlica do Rio Grande do Sul, Doutora em Cincias Biolgicas pela Universidade Estadual Paulista - Rio Claro, SP, pesquisadora do

Museu de Cincias Naturais da Fundao Zoobotnica do Rio Grande do Sul (MCN/FZBRS). Especialista em taxonomia de cianobactrias, dedicando-se principalmente ao conhecimento das espcies sul-rio-grandenses. autora de trabalhos cientficos publicados em revistas nacionais e internacional, alm de captulo de livro, manual e de trabalhos apresentados em congressos nacionais e internacionais. Tem orientado estudantes em diferentes nveis e assessorado tcnicos de instituies responsveis pela qualidade da gua e de vigilncia sanitria do RS. Ministra cursos e treinamentos prticos em taxonomia de cianobactrias. Participa tambm de projetos de pesquisas desenvolvidos pela equipe da Seo de Botnica do MCN/FZBRS e de atividades de Educao Ambiental promovidas pela FZBRS. Alm disso, presta assessoria para revistas cientficas nacionais e internacionais.

Carolina Davila Domingues


Graduanda do curso de Cincias Biolgicas na Universidade do Vale do Rio dos Sinos (UNISINOS). Foi bolsista PIBIC-FAPERGS/MCN-FZBRS e atualmente estagiria na Seo de Botnica de Criptgamas do Museu de Cincias Naturais da Fundao Zoobotnica do Rio Grande do Sul, dedicando-se ao estudo das cianobactrias, com nfase taxonomia do grupo.

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SUMRIO
Prefcio ............................................................................................. 13 1. Introduo .................................................................................... 15 2. Monitoramento de cianobactrias e cianotoxinas para atendimento da Portaria MS n 518/2004 ......................................................... 17 3. Mtodos de coleta e anlises de cianobactrias......................................................................... 27 4. Cianobactrias planctnicas na represa Lomba do Sabo e no lago Guaba ............................................. 33 Referncias ....................................................................................... 59 Glossrio........................................................................................... 63

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PREFCIO
Tenho a honra e o prazer de apresentar este manual, lanado em momento oportuno para atender uma necessidade sentida no domnio da engenharia sanitria e de sade pblica, em face da dificuldade de encontrar publicao semelhante em lngua portuguesa e referente as caractersticas ambientais do Brasil. O risco da ocorrncia de cianobactrias com a conseqente liberao de cianotoxinas em nveis inaceitveis, ronda os mananciais de abastecimento e as estaes de tratamento de gua de todo o Brasil. Atualmente j se sabe que a presena de cianobactrias no ocorre apenas em guas poludas ou eutrofizadas. H registro de floraes importantes em reservatrios considerados de baixo risco at recentemente. A vigilncia da qualidade da gua dos nossos mananciais uma questo de sade pblica das mais importantes e no pode descuidar da investigao da ocorrncia de cianobactrias, mas para isso fundamental que se disponha de um manual de fcil consulta e compreenso. nesse contexto que se destaca a importncia da publicao deste manual. O manual resultou do esforo dos pesquisadores do Instituto de Pesquisas Hidrulicas da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, do Departamento Municipal de gua e Esgoto de Porto Alegre e do Museu de Cincias Naturais da Fundao Zoobotnica do Rio Grande do Sul, no mbito do PROSAB Programa de Pesquisa em Saneamento Bsico, que fomentado e apoiado por uma ao conjunta coordenada pela Financiadora de Estudos e Projetos (FINEP) do Ministrio de Cincia e Tecnologia, com o Conselho de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico (CNPq) do Ministrio da Educao e Cultura, a Caixa Econmica Federal (CAIXA), o Fundo Setorial de Pesquisa em Recursos Hdricos (CT-Hidro), e a Associao Brasileira de Engenharia Sanitria e Ambiental (ABES), que por isso so merecedores de elogios. Alem da introduo, o manual tem captulos dedicados ao monitoramento, a coleta e anlise e a classificao de cianobactrias, e um glossrio. O captulo de classificao das cianobactrias, embora elaborado especificamente com base nas observaes dos mananciais estudados, servir sem dvidas como fonte de consulta importante para trabalhos semelhantes em outros mananciais. Constitui um verdadeiro atlas das principais cianobactrias que ocorrem nos mananciais de Porto Alegre, mas que tambm so comuns em outros locais

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do Brasil. ricamente ilustrado com fotos e contm chave de identificao, principais caractersticas, dimenses das clulas e comentrios esclarecedores com informaes complementares que certamente ajudaro a muitos na tarefa de observar e identificar esses organismos. um manual prtico. A idia dos autores disponibilizar o manual para as Empresas de Saneamento, para uso do setor responsvel pelo acompanhamento hidrobiolgico dos mananciais de abastecimento de gua, mas tambm esperam que sirva de fonte de consulta para outros tcnicos, alunos, estudiosos e pesquisadores. Que se faa bom proveito, para mais bem proteger a sade pblica. Natal, setembro de 2006. Ccero Onofre de Andrade Neto
Professor da Universidade Federal do Rio Grande do Norte

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1. INTRODUO
Nos ltimos anos, em diversos locais do Brasil, tem ocorrido um aumento expressivo de floraes de cianobactrias, com a presena de cianotoxinas e outros compostos, incluindo substncias causadoras de gosto e odor. Especificamente, no Rio Grande do Sul, na Bacia Hidrogrfica do Lago Guaba, que inclui parte da Regio Metropolitana de Porto Alegre, estas floraes tm ocorrido com uma freqncia cada vez maior, colocando em alerta as autoridades da sade pblica e quelas responsveis pelo abastecimento de gua. Em resposta a esta conjuntura, o Programa de Pesquisa em Saneamento Bsico (PROSAB), dedica o Tema 1 do seu Edital 4 ao Tratamento de guas superficiais visando a remoo de microalgas, cianobactrias e microcontaminantes orgnicos potencialmente prejudiciais sade. Para desenvolver esta temtica, foi formada uma rede de pesquisa que incluiu sete instituies: Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG), Escola de Engenharia de So Carlos da Universidade de So Paulo (EESC/USP), Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC), Universidade de Braslia (UnB), Universidade Estadual de So Paulo/Ilha Solteira (UNESP/SP), Universidade de So Paulo (USP/SP) e o Instituto de Pesquisas Hidrulicas da Universidade Federal do Rio Grande do Sul (IPH/UFRGS). O IPH/UFRGS, por sua vez, organizou-se em uma intra-rede para o desenvolvimento das suas pesquisas, sendo esta composta, alm do IPH/ UFRGS, pelo Departamento Municipal de gua e Esgoto de Porto Alegre (DMAE), atravs de sua Diviso de Pesquisa e pelo Museu de Cincias Naturais da Fundao Zoobotnica do Rio Grande do Sul (MCN-FZB/RS). Dentre os objetivos da pesquisa desta intra-rede citam-se: 1) estudos de tratabilidade para remoo de cianobactrias e de cianotoxinas dissolvidas, envolvendo coagulao, floculao, sedimentao, adio de carvo ativado pulverizado e oxidao com ferrato (VI) de potssio e hipoclorito de sdio; 2) estudos de correlaes entre pigmentos, nmero e massa de clulas, para a sua utilizao no monitoramento de floraes de cianobactrias; 3) aplicao de modelo de simulao para fins de gesto dos aportes de nutrientes de bacias hidrogrficas; e 4) monitoramento de mananciais com problemas de floraes algais e de cianobactrias. Como comentado anteriormente, faz parte da filosofia do PROSAB a adoo de tcnicas simples e de fcil utilizao. No caso da identificao das cianobactrias, esses princpios no se cumprem. Durante o desenvolvimento destas linhas de pesquisa, sempre que se tornou necessrio proceder a observao microscpica das cianobactrias, a dificuldade era uma constante, principalmente na identificao destes organismos. Estas mesmas manifestaes foram corroboradas pelos tcnicos das companhias de saneamento. Essas dificuldades esto relacionadas principalmente complexidade taxonmica do grupo e s tcnicas de observao propriamente ditas, alm da carncia de material bibliogrfico acessvel.

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Codd et al. (1999) no guia da Organizao Mundial da Sade (OMS) para cianobactrias presentes em gua, destacam que o monitoramento corriqueiro dos mananciais de abastecimento no deve requerer um treinamento sofisticado em taxonomia, por parte dos tcnicos de companhias de saneamento que realizam essa atividade. Na maioria das vezes, a identificao em nvel de gnero j suficiente, e que esta deve ser ainda focada na regio de ocorrncia. Na opinio destes autores, somente nos casos em que fcil a identificao em nvel de espcie e, onde isto importante, deve este procedimento ser levado a cabo. Nas suas observaes, permanece a necessidade da consulta a especialistas no assunto, como uma forma de controle de qualidade. Dentro deste contexto, este grupo de pesquisa entendeu oportuno produzir um manual que auxilie os tcnicos responsveis pelos sistemas de abastecimento pblico de gua nos procedimentos de monitoramento e identificao de cianobactrias. Tendo como base os conhecimentos gerados nos projetos de pesquisa do PROSAB, o foco deste manual est nas cianobactrias mais representativas dos mananciais de abastecimento pblico de gua para a cidade de Porto Alegre a represa Lomba do Sabo e o lago Guaba. Para complementar este manual sero abordados os procedimentos de coleta e identificao dos organismos, assim como os procedimentos sobre o monitoramento das cianobactrias para atender a legislao pertinente. Para classificao destes organismos foi elaborada chave de identificao at nvel de espcie. Tambm para auxiliar na identificao das espcies foi realizado o seu registro fotogrfico, complementado com as principais caractersticas morfolgicas e mtricas, alm de comentrios mais especficos. Este manual foi desenvolvido tendo-se em mente, principalmente, os tcnicos responsveis pela qualidade da gua para consumo humano e pela vigilncia em sade. No entanto, pretende-se que tambm sirva de fonte de consulta para alunos e pesquisadores, assim como outros tcnicos da rea.

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2. MONITORAMENTO DE CIANOBACTRIAS E CIANOTOXINAS PARA ATENDIMENTO DA PORTARIA MS N 518/2004


Os mananciais utilizados para abastecimento pblico necessitam de acompanhamento para avaliao tanto da quantidade, quanto da qualidade da gua. Para atender essa demanda, programas de monitoramento devem ser mantidos pelas companhias de saneamento e/ou responsveis por sistemas de abastecimento de gua, de modo a atender os requisitos legais e possibilitar uma avaliao da qualidade desses mananciais. Parmetros fsicos e qumicos so os mais usuais em programas de monitoramento, assim como alguns parmetros microbiolgicos como bactrias enteropatognicas e, mais recentemente, indicadores da biomassa fitoplnctonica, como a clorofila-a e a densidade de cianobactrias. No Brasil, a incorporao das cianobactrias e cianotoxinas como parmetros de monitoramento deu-se a partir da Portaria MS n 1.469 (Brasil, 2000), que substituiu a Portaria GM n 36 (Brasil, 1990). O episdio de Caruaru (Pernambuco), em 1996, onde houve a morte de pacientes que realizavam dilise devido presena de cianotoxinas na gua, ressaltou a importncia da regulamentao desses compostos na gua para consumo humano e tambm do controle das cianobactrias no manancial. Apesar da relevncia dessa questo, verificou-se ainda uma grande dificuldade na implementao das diretrizes da Portaria MS n 1.469 (Brasil, 2000) pelas companhias de saneamento e pelos responsveis por sistemas de abastecimento pblico, tanto para a anlise da cianotoxina microcistina, quanto para a identificao e quantificao de cianobactrias. Na Portaria MS n 518 (Brasil, 2004), que revogou a portaria anterior, o prazo para atendimento das exigncias para o monitoramento de cianobactrias e cianotoxinas foi de 12 meses aps a entrada em vigor deste instrumento legal. Atualmente, portanto, o monitoramento desses itens deve estar plenamente incorporado rotina dos responsveis pelo abastecimento pblico. No entanto, a implementao plena da Portaria MS n 518 (Brasil, 2004) ainda representa um desafio, pois requer o envolvimento no apenas dos responsveis pelo abastecimento de guas para consumo humano, mas tambm do setor de vigilncia em sade, responsvel pela fiscalizao desse instrumento legal, e dos gestores pblicos em geral (Brasil, 2005a).

2.1. Cianotoxinas
As cianotoxinas so compostos produzidos pelas cianobactrias que podem afetar a biota aqutica, resultando em efeitos txicos tambm em mamferos terrestres (Sivonen et Jones,

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1999), no sendo ainda clara a razo de sua produo, embora possa estar relacionada proteo contra herbivoria e tambm a alelopatia, como em vegetais superiores. As cianotoxinas esto presentes no interior da clula, sendo liberadas em situaes de lise celular, decorrentes de processo de senescncia natural ou pela ao de fatores ambientais. Para avaliar o risco especfico das toxinas de cianobactrias necessrio compreender as suas propriedades qumicas e fsicas, sua ocorrncia nas guas, os fatores que regulam a sua produo e o seu decaimento no ambiente. Em termos de estrutura qumica, as cianotoxinas so divididas em peptdeos cclicos, alcalides e lipopolissacardeos. Quanto aos mecanismos da toxicidade, so muito diversos e variam de efeitos hepatotxicos, neurotxicos e dermatotxicos at a inibio geral de sntese protica (Sivonen et Jones, 1999). Dentre as hepatotoxinas, as produzidas por cianobactrias de ambientes aquticos continentais so: q Microcistinas: heptapeptdeos cclicos que tm efeito na inibio de fosfatases, atuando como potentes produtores de tumores, com ao hepatotxica. q Cilindrospermopsina: composto alcalide guanidnico cclico, que inibe a sntese protica, tendo efeito predominantemente hepatotxico, mas tambm afetando clulas dos rins, bao, corao e outros rgos. q Nodularina: produzida por Nodularia spumigena, uma espcie de ocorrncia preferencial em guas salobras ou levemente salinas (Karjalainen, 2005). um pentapeptdio, com semelhana estrutural com a microcistina, inclusive no seu modo de ao. As cianotoxinas de efeito neurotxico so: q Saxitoxinas: alcalides carbamatos, que podem ser no sulfatados (saxitoxinas), monossulfatados (goniautoxinas) ou dissulfatados (C-toxinas), que produzem efeitos neurotxicos, por inibio da transmisso nervosa atravs de bloqueio dos canais de sdio nas clulas. q Anatoxina-a: alcalide que bloqueia os receptores nicotnicos e colinrgicos de sinapses neuromusculares, mimetizando a ao da acetilcolina, sendo essa ligao irreversvel, j que a toxina no degradada pela acetilcolinesterase (FUNASA, 2003). q Anatoxina-a(s): organofosforado natural que atua inibindo a atividade da acetilcolinesterase, sendo consideravelmente mais txica que a anatoxina-a (Fitzgerald, 2001). Os lipopolissacardeos (LPS) so componentes da membrana celular das cianobactrias, formados por carboidratos (normalmente hexoses) e lipdeos (cidos graxos) e encontrados em outras bactrias Gram-negativas. Esses LPS so endotoxinas pirognicas, capazes de produzir irritaes na pele e alergias (Kuiper-Goodman et al., 1999). Esses compostos so relevantes especialmente onde haja risco de exposio s clulas de cianobactrias, como em locais destinados para balneabilidade, pois o contato com as toxinas pode causar dermatites ou outros efeitos quando acidentalmente ingeridas. No Quadro 1 so apresentadas as caractersticas das principais cianotoxinas e gneros de cianobactrias potencialmente txicas.

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Quadro 1. Caractersticas das principais cianotoxinas e gneros de cianobactrias aquticas reconhecidas como potencialmente produtoras de toxinas. Baseado em Fernandes et al. (2005) e Sivonen et Jones (1999).

Toxina

Ao

Dose letal injetvel (DL50)

Gnero
Microcystis, Anabaena, Planktothrix, Nostoc, Anabaenopsis, Aphanocapsa Nodularia

Microcistinas

Hepatotxica

25 a 150 g/kg

Nodularinas

Hepatotxica

50 a 200 g /kg

Anatoxina-a

Neurotxica

200 g /kg

Anabaena, Planktothrix, Aphanizomenon

Anatoxina-a(s)

Neurotxica

20 g /kg 2,0 mg/kg (24 horas) 0,2 mg/kg (5-6 dias)

Anabaena Cilindrospermopsis, Aphanizomenon, Umezakia Anabaena, Aphanizomenon, Cilindrospermopsis, Lyngbia todas

Cilindrospermopsinas

Hepatotxica

Saxitoxinas

Neurotxica

10 g /kg

Lipopolissacardeos (LPS) Pele, trato gastro-intestinal

2.2. Atendimento Portaria da Potabilidade


No Quadro 2, so resumidos os aspectos referentes s freqncias de monitoramento e o nmero de amostras exigidos no acompanhamento da presena de cianobactrias em mananciais de abastecimento pblico e na gua para consumo humano. A Portaria MS n 518 (Brasil, 2004) estabelece que a presena de cianobactrias no manancial, junto ao ponto de captao, o parmetro bsico que desencadeia o monitoramento das cianotoxinas na gua para consumo humano. Assim, os programas de monitoramento devem obrigatoriamente acompanhar, com freqncia mensal, as cianobactrias presentes na gua do manancial. A partir da avaliao da presena e densidade das cianobactrias, os demais parmetros previstos na legislao devero ser implementados. O atendimento dessas normativas acarreta um acompanhamento contnuo dos resultados da anlise fitoplanctnica, assim como de outros parmetros que possam subsidiar a avali-

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Quadro 2. Resumo de normativas da Portaria MS n 518 (Brasil, 2004) referentes s freqncias de monitoramento e nmero de amostras para ensaios toxicolgicos com camundongos, cianotoxinas e contagem de cianobactrias, em mananciais e gua para consumo humano.
Parmetro Local Condio
Quando as cianobactrias > 20.000 cl/ml (ou 2 mm3/l biovolume) At 10.000 cl/ml (ou 1mm3/l biovolume) Acima de 10.000 cl/ml (ou 1 mm3/l biovolume)

Freqncia/ nmero de amostras


Semanal, uma amostra por ponto de captao Mensal, uma amostra por ponto de captao Semanal, uma amostra por ponto de captao

A r ti g o

Ensaio toxicolgico com camundongos

gua do manancial

Artigo 18, 5

Contagem de cianobactrias

Ponto de captao

Artigo 19, 1

Contagem de cianobactrias

Ponto de captao

Artigo 19, 1

Anlise de cianotoxinas

Na sada do tratamento, na entrada (hidrmetros) de clnicas de hemodilise e indstrias de injetveis

Quando as cianobactrias > 20.000 cl/ml (ou 2mm3/l biovolume)

Semanal, uma amostra por unidade de tratamento

Tabela 7 e Artigo 18, 5 Tabela 6 e Artigo 18, 5

ao das condies de qualidade do manancial, bem como da susceptibilidade a eventuais ocorrncias de floraes de cianobactrias ou de algas. A identificao e quantificao das cianobactrias presentes no ambiente permite que se possam avaliar as etapas seguintes no monitoramento, bem como as anlises necessrias a serem realizadas. A identificao e a contagem das cianobactrias fundamental para que possam ser avaliados os riscos de uma possvel cepa produtora de toxina. O bioensaio em camundongo indica se h ou no toxicidade na amostra. Caso seja identificada toxicidade, dever ser realizada, obrigatoriamente, anlise semanal de cianotoxinas na gua tratada (FUNASA, 2003). Essa anlise da cianotoxina tambm se aplica aos casos em que no possvel a realizao prvia do bioensaio ou tenha-se optado em no realiz-lo. O ensaio de toxicidade em camundongos realizado aplicando-se uma injeo intraperitonial de 0,1 a 1,0 ml de uma soluo obtida com a lise de clulas de cianobactrias (obtida da amostra de florao), em animais padronizados (camundongo albino suo, macho, de 20 g) (Carvalho, 2006). A utilizao do bioensaio em camundongo pode ser uma alternativa de menor custo para a identificao de eventual toxicidade de uma florao, tendo em vista que este um ensaio que

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praticamente no requer equipamentos sofisticados e tem grande sensibilidade. No entanto, a sua limitao que no permite definir a cianotoxina ou cianotoxinas presentes na florao. Nos casos em que as densidades de cianobactrias no manancial encontram-se elevadas e a concentrao de cianotoxinas acima do valor mximo permitido na legislao, so necessrios ento procedimentos operacionais para garantir a qualidade da gua de abastecimento pblico. Em tais situaes, o responsvel pelo sistema de abastecimento deve informar ao rgo de vigilncia em sade, as condies que esto registradas no manancial, bem como as providncias j tomadas para minimizar a presena de cianotoxinas na gua tratada, de modo que sejam avaliadas as alternativas possveis e necessrias para a segurana da gua distribuda, conforme definido no Artigo 9 da Portaria n 518 (Brasil, 2004). O estabelecimento de limites mximos permitidos para a presena de cianotoxinas em gua para consumo humano est expresso no artigo 14 da referida Portaria, conforme apresentado no Quadro 3. Quadro 3. Resumo da Portaria MS n 518 (Brasil, 2004) referente aos limites mximos permitidos e recomendados para cianotoxinas em guas para consumo humano.
Parmetro
Microcistina

Condio
Anlise obrigatria em gua para consumo humano Anlise obrigatria em gua para consumo humano Recomendao de anlise em gua para consumo humano Recomendao de anlise em gua para consumo humano

Limite
1 g/l

Referncia Portaria n 518/04


Artigo 14

Microcistina

At 10 g/l em at 3 amostras, consecutivas ou no, nos ltimos 12 meses

Artigo 14, notas

Cilindrospermopsina

15 g/l

Artigo 14, 1

Saxitoxina (SXT )

3 g/l de equivalente SXT

Artigo 14, 1

O monitoramento de cianobactrias nos ambientes aquticos utilizado como uma estimativa do risco da presena de toxinas. No entanto, esta abordagem apresenta algumas limitaes, conforme citado por Codd et al. (1999): q os tipos de toxinas e os nveis por unidade de biomassa de cianobactrias podem variar amplamente, desde nveis no detectveis at de toxicidade aguda; q os nveis de toxinas por clulas podem variar grandemente entre cepas individuais e entre floraes de uma mesma espcie; q cepas de cianobactrias da mesma espcie podem conter mais de um tipo de toxina; q as toxinas podem persistir nos mananciais e nas estaes de tratamento de gua em forma solvel (extracelular), sendo liberadas aps a lise das cianobactrias, por ao de agentes biolgicos, fsicos ou qumicos. As cianotoxinas podem, portanto, persistir no ambiente, por um perodo, como frao solvel, aps eventos de florao de cianobactrias.

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Alguns estudos tm registrado a bioacumulao de microcistinas em organismos aquticos, como peixes, moluscos bivalvos e zooplncton. Tambm h registros de nveis de saxitoxina acima do recomendado em bivalvos, expostos a uma florao txica de Anabaena circinalis (Sivonen et Jones, 1999). Monitorar as densidades das populaes de cianobactrias, e a ocorrncia dos principais gneros, pode proporcionar uma excelente base para a avaliao de risco, particularmente se apoiada periodicamente com testes de toxicidade ou anlise de toxinas. Embora no previsto na legislao brasileira da potabilidade, o monitoramento de cianobactrias potencialmente txicas em gua tratada, permite avaliar a eficincia das diferentes etapas do tratamento na remoo e/ou rompimento das clulas sendo j realizado por muitas companhias de saneamento. O uso de indicadores visuais simples, de baixo custo e que permitem freqncia elevada de observaes, como a cor e a presena de escumas (Figura 1), pode proporcionar informaes valiosas relativas ao desenvolvimento de cianobactrias no manancial. Se complementadas pela anlise microscpica, permitem confirmar a presena de cianobactrias na gua. Nos pontos de captao para estaes de tratamento de gua, o treinamento da equipe de operadores, e a sua experincia nesta rea, juntamente com o monitoramento e registro de variaes na transparncia, colorao e formao de escumas, podem permitir um acompanhamento flexvel e rpido das condies do manancial. O monitoramento de variveis que favorecem o crescimento de cianobactrias e/ou sua acumulao valioso para se reconhecer que o manancial est com risco de desenvolvimento de florao, assim como os locais mais provveis para formao e acmulo de escumas. O acompanhamento do nvel de fsforo total um aspecto importante, pois um nutriente relevante para as cianobactrias e outros organismos fotossintticos. Dados sobre outras variveis ambientais e condies hidrolgicas do manancial (como tempo de deteno e condies de estratificao trmica), disponibilidade de luz (relao entre a profundidade de penetrao da luz e a profundidade de mistura), assim como o nitrognio dissolvido (nitrato e amnia), proporcionam a base para o entendimento de porque certas espcies ou gneros de cianobactrias dominam naquele ambiente. As cianotoxinas, de acordo com a sua caracterstica qumica, podem se degradar no ambiente com maior ou menor rapidez. As microcistinas, devido sua estrutura peptdica cclica, so muito estveis e resistentes hidrlise e oxidao. Algumas bactrias encontradas naturalmente em rios e reservatrios e tambm em efluentes de esgotos so capazes de degradar microcistinas, podendo esse processo levar degradao de 90% do total de microcistinas entre dois a dez dias, dependendo da concentrao inicial das toxinas e da temperatura da gua (Sivonen et Jones, 1999). Para a anatoxina-a, verifica-se uma rpida degradao fotoqumica com a luz solar, que acelerada por condies alcalinas. Sob condies naturais de iluminao, com pH 8-10 e concentraes iniciais baixas (10 mg/l), o tempo necessrio para degradar 50% da toxina de 14 dias (Sivonen et Jones, 1999) A anatoxina-a(s) relativamente instvel e se decompe rapidamente em condies alcalinas, mas relativamente estvel em guas neutras e cidas. Para as saxitoxinas, o tempo necessrio para degradar 50% do total dessas toxinas varia de uma a dez semanas, sendo freqentemente necessrio mais de trs meses para a degradao de 90% dessas molculas.

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Na presena de luz solar e de pigmentos fotossintticos, a degradao da cilindrospermopsina pode ocorrer rapidamente, levando a destruio de 90% do total entre dois e trs dias (Sivonen et Jones, 1999).

2.3. Gosto e odor


Certas espcies de algas so reconhecidas por produzirem substncias que provocam gosto e odor desagradvel gua. Tambm as cianobactrias podem produzir odores de terra ou mofo, como por exemplo espcies de Anabaena, Aphanizomenon, Microcystis e Planktothrix. Todos esses gneros possuem espcies potencialmente produtoras de toxinas. No entanto, a ausncia de gosto e odor no significa que as cianobactrias no estejam presentes. Dessa forma, no se pode relacionar esse fato ausncia de cianotoxinas (Falconer et. al, 1999). Dentre os compostos causadores de gosto e odor, os mais reconhecidos so a geosmina e o metilisoborneol (MIB), que conferem um gosto de terra ou mofo gua, que podem ser produzidos por cianobactrias e actinomicetes.

2.4. Remoo de cianobactrias no tratamento de gua


As algas e cianobactrias podem ter um importante papel como precursores de trihalometanos, especialmente em eventos de florao (FUNASA, 2003). Nesse sentido, os sistemas de tratamento de gua devem monitorar a formao de trihalometanos quando for registrado um aumento na densidade de organismos do fitoplncton, especialmente quando o agente oxidante empregado no tratamento o cloro. As cianotoxinas podem ser encontradas tanto dentro, quanto fora das clulas. No tratamento de gua para abastecimento pblico, a remoo das toxinas deve considerar a frao solvel e a particulada. Portanto, os processos que promovem a remoo de clulas intactas removem tambm as cianotoxinas intracelulares. Quando a clula da cianobactria se rompe (lise), as toxinas so liberadas. A lise pode ocorrer naturalmente ou causada por produtos qumicos ou por ao mecnica, como, por exemplo, turbulncia e bombeamento que ocorrem nas etapas de tratamento da gua. Dessa forma, sistemas de tratamento que promovam o rompimento das clulas apresentam um risco aumentado de liberao de cianotoxinas. Para a remoo da frao extracelular, os sistemas de tratamento podem dispor de mtodos de adsoro e/ou de oxidao. Para a adsoro usualmente utilizado carvo ativado (em p ou granulado). J para a oxidao, so empregados cloro, oznio, permanganato de potssio, etc. No entanto, em ambos os casos, as condies de operao so crticas para a eficincia da remoo. Nessas situaes, o monitoramento da toxina importante para avaliar a qualidade da gua para consumo humano.

2.5. Informao para o consumidor


Os resultados obtidos atravs do programa de monitoramento do manancial constituem tambm informaes relevantes para os usurios do sistema de abastecimento pblico. No Brasil, essa preocupao recente e embora j tenha sido destacada na Portaria MS 518 (Brasil, 2004), somente a partir do Decreto n 5.440 (Brasil, 2005) foram regulamentados os procedimentos para divulgao sistemtica aos consumidores dos dados de qualidade da gua.

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Esse Decreto, promulgado pelo Presidente da Repblica, estabelece definies e procedimentos sobre o controle de qualidade da gua de sistemas de abastecimento e institui mecanismos e instrumentos para divulgao de informao ao consumidor sobre a qualidade da gua para consumo humano, definindo os prazos para a divulgao e as informaes a serem rotineiramente repassadas aos consumidores. Dessa forma, tornou-se obrigatria a divulgao dos resultados do monitoramento dos mananciais e tambm da qualidade da gua para consumo humano. Nos casos em que ocorrem floraes de algas ou cianobactrias junto aos pontos de captao para abastecimento humano, essa informao deve ser repassada ao pblico, especialmente se houver situaes de risco sade humana, conforme explicitado no Captulo III, artigo 5, item j, do Anexo (Brasil, 2005).

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Nvel 1 Monitoramento normal do manancial


Captaes: Dados dirios da gua: pH, temperatura, turbidez, transparncia, nvel do reservatrio (se for o caso) Anlise mensal do fitoplncton: densidade de organismos, % de cada grupo, gneros mais representativos Presena de gosto ou odor, escuma ou alteraes na colorao da gua

Avaliao dos dados:

No

Temperatura da gua > 24 C por mais de 4 dias? Densidade total do fitoplncton > 1.000 org/ml? Densidade de cianobactrias > 10.000 cl/ml? Presena de gosto e odor na gua? Turbidez < 50 UNT ? pH > 7,5?

Nvel 2 - Monitoramento intensivo dos mananciais


Monitoramento: Aumentar a freqncia das anlises de fitoplncton para semanal Verificar presena de gosto e odor na gua Avaliar pontos de captao (eventual presena de escuma) Operao das ETAs: Preparar medidas operacionais para controle

Sim

No

Nvel 3 - Medidas operacionais e corretivas


Monitoramento: Realizar anlise de fitoplncton 2-3 vezes por semana Avaliar toxicidade da amostra Operao das ETAs: Realizar captao seletiva (em diferentes profundidades) Realizar lavagem dos filtros com maior freqncia (para evitar toxina) Reduzir, se possvel, a produo de gua na ETA Adicionar carvo ativado Vigilncia e alerta: Informao ao rgo de vigilncia em sade Informao ao consumidor Avaliao dos riscos para o consumidor Avaliao de alternativas de abastecimento, caso seja necessrio

Densidade de cianobactrias Aumentou em 2 ou 3 amostras sucessivas para > 20.000 cl/ml? H presena de espcies potencialmente txicas? Persiste gosto e odor na gua? H escuma na superfcie?

Avaliao dos dados:

Sim

Avaliao dos dados: diria

Figura 1. Esquema para monitoramento de cianobactrias em manancial, de acordo com a Portaria n 518 (Brasil, 2004) e Codd et al. (1999).

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3. MTODOS DE COLETA E ANLISES DE CIANOBACTRIAS


A metodologia de coleta a ser utilizada em estudos da comunidade de cianobactrias deve atender aos objetivos do programa de monitoramento, de acordo com os usos especficos do corpo hdrico, considerando as caractersticas do manancial (lntico ou ltico), assim como os demais aspectos do ambiente que podem interferir na distribuio dos organismos planctnicos. No caso de floraes, para que a amostra seja coletada em local representativo do sistema, deve-se considerar sua distribuio espacial (horizontal e vertical) e a ao dos ventos, em especial para as cianobactrias que formam escumas superficiais, pela sua deposio junto s margens. A seguir, sero detalhados alguns dos procedimentos utilizados na coleta e anlise de cianobactrias, empregados com maior freqncia no monitoramento de mananciais de abastecimento pblico pelas companhias de saneamento. Esses procedimentos variam de acordo com o tipo de anlise a ser realizada, qualitativa ou quantitativa.

3.1. Coleta para anlise qualitativa


A coleta para anlise qualitativa empregada em estudos que buscam, primordialmente, identificar as espcies fitoplanctnicas que caracterizem esse ambiente aqutico. No entanto, em monitoramentos de mananciais para abastecimento pblico este tipo de coleta no utilizado de forma rotineira. A amostragem para anlise qualitativa utiliza rede de plncton de nilon, com 20 m de abertura de malha, com o objetivo de concentrar o material e obter melhor caracterizao especfica do fitoplncton encontrado no local. No entanto, deve-se ter em mente que a utilizao da rede seleciona os organismos coletados, uma vez que os menores de 20 m, como algumas espcies de cianobactrias, teoricamente no ficam retidos. A coleta pode ser realizada atravs de arraste horizontal da rede de plncton com o auxlio de embarcao, ou passando manualmente vrias vezes a rede na subsuperfcie da gua (20 cm abaixo da superfcie), ou ainda atravs de arraste vertical, onde a rede mergulhada at uma profundidade previamente estabelecida, puxando-a em seguida at a superfcie.

3.2. Coleta para anlise quantitativa


A coleta para anlise quantitativa usualmente empregada para estudos que relacionam no s a diversidade de espcies fitoplanctnicas, mas tambm as densidades em que esses organismos ocorrem no ambiente.

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A coleta de amostra para anlise quantitativa pode ser realizada manualmente ou com o auxlio de amostradores especiais, como as garrafas de amostragem e bombas de suco. A coleta manual realizada com frasco de coleta (polietileno ou vidro neutro), a uma profundidade de 20 cm, aproximadamente. Em casos de floraes superficiais, a coleta realizada atravs da passagem do frasco diretamente nos pontos onde existe maior concentrao de organismos (escuma). Para coletas em diferentes profundidades so utilizadas as garrafas dos tipos Kemmerer e van Dorn. Esses equipamentos consistem basicamente de um tubo cilndrico aberto em ambas as extremidades, preso a uma corda (cabo) graduada, que mergulhado at a profundidade desejada, quando, ento, acionado um mensageiro (peso) que dispara um dispositivo fechando hermeticamente ambas as extremidades da garrafa. Tambm se podem utilizar bombas de suco, principalmente quando houver a necessidade de coletar grande nmero de estaes de amostragem em menor tempo. As bombas peristlticas e de diafragma so menos prejudiciais aos organismos do que as bombas centrfugas (APHA, 1998).

3.3. Transporte e preservao da amostra


A amostra viva deve ser transportada em caixas de isopor com gelo e ocupar no mximo dois teros do volume do frasco, para garantir quantidade de oxignio suficiente at o momento da anlise. Normalmente, para a anlise qualitativa no necessria a preservao da amostra, desde que alguns cuidados sejam tomados, como evitar exposio ao excesso de luz, manter a amostra refrigerada e realizar a anlise no prazo mximo de 24 horas aps a coleta. Caso isso no ocorra, a amostra deve ser preservada com soluo de formol, numa concentrao de cerca de 4%. Em casos de floraes, recomenda-se que a amostra seja preservada com formol, visando oportunizar outros estudos que complementem as anlises j realizadas e permitam manter um registro das espcies formadoras de floraes em mananciais de abastecimento pblico. Para a anlise quantitativa, a amostra usualmente preservada com soluo de Lugol, em concentraes de 0,3% a 0,5% para ambientes oligotrficos e de 0,5 a 1,0% para ambientes eutrficos. O material deve ser mantido em frascos de vidro mbar e acondicionado em ambiente protegido da luz. A soluo de Lugol facilita a sedimentao dos organismos, por outro lado, pode dificultar a identificao, alm de ser muito voltil. Para o preparo da soluo de Lugol so utilizados: q 10 g de iodo puro; q 20 g de iodeto de potssio; q 20 ml de cido actico glacial; q Completar at 200 ml de gua destilada. Esta soluo deve, tambm, ser mantida em vidro mbar e em ambiente protegido da luz.

3.4. Anlise de cianobactrias


Para realizar a identificao e contagem de cianobactrias, necessria a utilizao de microscpios equipados com oculares de 10 X ou 15 X e objetivas de 10, 20, 40 e 100 X. Em uma

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das oculares deve ser colocado o retculo de Whipple, utilizado para a contagem e na outra, uma rgua micromtrica calibrada, para obter as dimenses dos espcimes analisados.

3.4.1. Anlise qualitativa


A identificao dos organismos presentes em uma amostra requer experincia e qualificao do analista e utilizao de bibliografia especializada. O nvel de identificao depende dos objetivos do estudo, da experincia do analista, do tipo de equipamentos e materiais disponveis. Nas empresas de abastecimento pblico deve-se empenhar todo esforo para identificar, pelo menos o organismo dominante, at o nvel de gnero. Isto possibilitar a tomada de medidas necessrias na operao do sistema de tratamento da gua e providenciar a realizao de anlises complementares, nos casos de cianobactrias potencialmente txicas. Quando a amostra proveniente de floraes no necessrio concentr-la. No entanto, quando a densidade de cianobactrias baixa, a amostra deve ser concentrada, atravs de procedimentos de sedimentao, filtrao ou centrifugao. Sempre que possvel, deve-se observar a amostra viva, principalmente quando da ocorrncia de cianobactrias filamentosas, pois a observao da presena e do tipo de movimento do tricoma importante na identificao. Para anlise qualitativa coloca-se uma gota da amostra em lmina de vidro coberta com lamnula. A observao ao microscpio tico pode ser realizada com diferentes aumentos, com objetiva de 10 at 100 X (usar leo de imerso), o que facilita a visualizao de detalhes morfolgicos importantes para a identificao das cianobactrias. Os caracteres mais utilizados na identificao de cianobactrias so os seguintes (Werner, 2002): q morfologia externa; q plano de diviso celular; q tipo de colnia; q disposio das clulas na colnia; q presena ou ausncia de envelope mucilaginoso ou bainha mucilaginosa; q forma e dimenses das clulas vegetativas; q relao celular entre comprimento e largura ou largura e comprimento; q relao entre o dimetro e a distncia das espiras; q estrutura dos tricomas; q forma do pice dos tricomas; q presena ou ausncia de grnulos e de aertopos; q forma e tamanho dos heterocitos; q origem dos acinetos; q disposio, nmero, forma e tamanho dos acinetos. A visualizao das paredes transversais de tricomas de cianobactrias facilitada pela adio, no momento da anlise, de uma gota de cloreto de zinco iodado e uma de iodeto de potssio, misturando com a amostra colocada na lmina. Para evidenciar a mucilagem, utilizase tinta nanquim.

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3.4.2. Anlise quantitativa


Para anlise quantitativa a amostra deve estar preservada, sendo recomendado realizar a identificao prvia dos organismos. Deve-se observar se h necessidade de concentrar a amostra antes de realizar a contagem dos organismos. Quanto menor a quantidade de organismos na amostra, maior deve ser o volume a ser concentrado. J em casos em que ocorram elevadas densidades, pode-se diluir a amostra com gua destilada. Em APHA (1998) esto descritas trs tcnicas utilizadas para concentrar a amostra: sedimentao, filtrao por membrana e centrifugao. Dentre essas, as mais utilizadas so as de sedimentao e centrifugao. A sedimentao o mtodo de concentrao mais recomendado, no seletivo (ao contrrio da filtrao) e no causa o rompimento das clulas (ao contrrio da filtrao e centrifugao). Utilizando-se microscpio invertido, a sedimentao realizada diretamente nas cmaras de sedimentao, de diferentes volumes (2 a 100 ml), dependendo da quantidade de organismos presentes na amostra. Amostra concentrada por sedimentao tambm pode ser analisada em microscpio tico. Neste caso, coloca-se a amostra em uma proveta graduada, deixando-a sedimentar. O sobrenadante sifonado e o volume restante, registrado. Desse volume, 1 ml colocado em cmara de Sedgwick-Rafter para a contagem dos organismos. O tempo para que ocorra a sedimentao dos organismos de uma hora por milmetro de coluna (APHA, 1998) ou de trs horas por centmetro (Margalef, 1983). A centrifugao pode ser utilizada em casos de amostras com pouca quantidade de organismos, ou quando existe urgncia na realizao da anlise. Segundo APHA (1998), a centrifugao deve ser por 20 minutos a 1.000 g. Para anlise quantitativa utiliza-se o retculo de Whipple acoplado ocular, que delimita a rea a ser contada. Recomenda-se, para contagem, utilizar os maiores aumentos disponveis no equipamento, usualmente de 200 X ou 400 X. A contagem pode ser realizada em campos aleatrios (um campo corresponde rea de um retculo de Whipple) ou em faixa de campos contnuos. Esta faixa delimitada pela largura do retculo e pelo comprimento total da cmara, de uma borda a outra. O nmero de campos ou faixas a serem contados depende da quantidade de organismos na amostra. A definio do nmero de organismos que necessita ser contado em cada amostra, depende da sua distribuio. Se a distribuio dos organismos ocorre ao acaso e a populao segue a distribuio de Poisson (APHA,1998), pode-se estimar o erro na contagem. Para atingir um limite de confiana de 95% e variao estimada em 20%, recomendada a contagem de 100 organismos da espcie predominante (Jardim et al., 2002). Ao aumentarmos o nmero de organismos contados para 400, a variao reduz-se para 10%, conforme a expresso a seguir:

onde: N = nmero de organismos contados da espcie predominante. A unidade utilizada na contagem de cianobactrias depende dos objetivos a serem alcanados. No atendimento Portaria MS n 518 (Brasil, 2004) e ao CONAMA 357 (Brasil, 2005b), onde a preocupao o risco potencial de produo de cianotoxinas pelas clulas, a expres-

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so do resultado pode ser em clulas por mililitro (cl/ml) ou em biovolume (mm/l). Para outros estudos, os resultados tambm podem ser expressos em organismos por mililitro (org/ml).

Contagem de clulas
O tcnico responsvel pela contagem de clulas deve ser treinado previamente em funo da complexidade envolvida neste processo. As cianobactrias podem apresentar talo unicelular, colonial ou filamentoso. Nas formas unicelulares a contagem do nmero de organismos corresponde ao nmero de clulas registradas. Para as formas coloniais, Jardim et al. (2002) sugerem a realizao de uma mdia do nmero de clulas que ocupam um quadrado do retculo de Whipple, sendo esse valor multiplicado pelo nmero de quadrados ocupados pela colnia. Quando as cianobactrias coloniais ocorrerem formando floraes, Agujaro (2006) recomenda dissolver as mucilagens e transformar as colnias em clulas soltas. Em seguida, as clulas podem ser contadas em microscpio comum com cmara de Sedgwick-Rafter ou em microscpio invertido, utilizando-se cmara de sedimentao. A dissoluo da mucilagem pode ser feita por digesto a quente com hidrxido de potssio (KOH) a uma molaridade de 0,03M. Coloca-se o hidrxido de potssio na amostra na proporo 1:1 ou 1:2, mantendo-se as amostras em estufa por 15 minutos ou mais (Agujaro, 2006). Para cianobactrias filamentosas que no apresentam grandes variaes no comprimento do filamento, coloca-se o material entre lmina e lamnula, e conta-se as clulas de aproximadamente 30 filamentos, aleatoriamente. Calcula-se a mdia de clulas por filamento, para cada espcie presente na amostra. Aps, na cmara de contagem, conta-se o nmero de filamentos encontrados e multiplica-se pela mdia de clulas calculada anteriormente. Para os filamentos que apresentam grande variao em seu comprimento, calcula-se a mdia do nmero de clulas que ocupam um quadrado do retculo de Whipple e multiplica-se este valor pelo nmero de quadrados ocupados pelo filamento.

Biovolume
A determinao do biovolume de cianobactrias, embora expressa na Portaria MS n 518 (Brasil, 2004), no usualmente empregada na rotina das companhias de saneamento. Consiste em determinar o volume mdio das clulas de cada espcie a partir de modelos geomtricos que mais se aproximem da forma da clula. Este valor multiplicado pelo nmero de clulas contadas na amostra.

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4. CIANOBACTRIAS PLANCTNICAS NA REPRESA LOMBA DO SABO E NO LAGO GUABA


So apresentadas as 20 espcies de cianobactrias planctnicas mais comuns na represa Lomba do Sabo e no lago Guaba, mananciais de abastecimento pblico para a cidade de Porto Alegre, Rio Grande do Sul. As espcies foram observadas em amostras coletadas em diferentes locais dos dois mananciais, dando nfase anlise das obtidas de floraes de cianobactrias e de ocorrncia junto a pontos de captao de estaes de tratamento de gua. O material foi identificado com base em caractersticas morfolgicas e mtricas de clulas vegetativas e reprodutivas, de populaes da natureza, conforme relacionadas em Mtodos de coleta e anlises de cianobactrias (item 3.4.1). De acordo com o sistema de classificao adotado (Komrek et Anagnostidis, 1989; 1998; 2005 e Anagnostidis et Komrek, 1990), as cianobactrias so classificadas em quatro ordens: Chroococcales - talos unicelulares ou coloniais. Oscillatoriales - talos filamentosos homocitados (sem heterocitos e acinetos). Nostocales - talos filamentosos, heterocitados (com heterocitos e/ou acinetos), sem ramificaes ou com ramificaes falsas. Stigonematales - talos filamentosos heterocitados (acinetos raros), com ramificaes verdadeiras. Do total das 20 espcies, distribudas em 11 gneros, a maioria pertenceu ordem Chroococcales (55 %), seguindo-se representantes da Nostocales (30 %) e da Oscillatoriales (15 %). Microcystis foi o gnero melhor representado, com cinco espcies. Dentre todas as espcies, destaca-se Planktothrix isothrix (Skuja) Komrek et Komrkov pela periodicidade e densidade de suas floraes, estendendo-se ao longo do lago Guaba nos veres de 2004, 2005 e 2006. Estes eventos conferiram colorao esverdeada, odor e sabor de terra s suas guas. A seguir, apresentada a sinopse das espcies, uma chave para identificao destas cianobactrias e ilustraes das mesmas, acompanhadas de suas principais caractersticas morfolgicas e mtricas e, quando pertinente, de comentrios. A maioria das ilustraes apresentadas de exemplares que foram observados na represa Lomba do Sabo e/ou no lago Guaba. No entanto, quando necessrio, foram includas ilustraes de espcimes de outros mananciais, visando melhor elucidao das caractersticas morfolgicas das espcies apresentadas no presente manual.

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4.1. Sinopse das cianobactrias planctnicas mais comuns na represa Lomba do Sabo e no lago Guaba
Cyanophyta (= Cyanobacteria ou Cyanoprocaryota) Cyanophyceae Chroococcales Synechococcaceae Radiocystis Skuja R. fernandoi Komrek et Komrkov-Legnerov Merismopediaceae Merismopedia Meyen M. convoluta Brbisson M. glauca (Ehrenberg) Ktzing M. tenuissima Lemmermann Microcrocis Richter Microcrocis sp. Sphaerocavum Azevedo et SantAnna S. brasiliense Azevedo et SantAnna Microcystaceae Microcystis Ktzing ex Lemmermann M. aeruginosa Ktzing M. novacekii (Komrek) Compre M. panniformis Komrek et al. M. protocystis Crow M. wesenbergii (Komrek) Komrek Oscillatoriales Pseudanabaenaceae Pseudanabaena Lauterborn P . galeata Bcher Geitlerinema (Anagnostidis et Komrek) Anagnostidis G. splendidum (Greville ex Gomont) Anagnostidis Phormidiaceae Planktothrix Anagnostidis et Komrek P . isothrix (Skuja) Komrek et Komrkov

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Nostocales Nostocaceae Anabaena Bory ex Bornet et Flahault A. circinalis Rabenhorst ex Bornet et Flahault A. crassa (Lemmermann) Komrkov-Legnerov A. spiroides Klebhan Aphanizomenon Morren ex Bornet et Flahault A. gracile Lemmermann A. issatschenkoi Proschkina-Lavrenko Cylindrospermopsis (Wolosynska) Seenayya et Subba Raju C. raciborskii (Wolosynska) Seenayya et Subba Raju

4.2. Chave para identificao destas cianobactrias


1a. Talos unicelulares ou coloniais ....................................................... Ordem Chroococcales 2 1b. Talos filamentosos ..................................................................................................................12 2a. Diviso celular por fisso binria em um nico plano ................................................................... Famlia Synechoccaceae Clulas arredondadas, agrupadas no centro da colnia, partindo em direo periferia, formando fileiras mais ou menos radiadas ................................................ Radiocystis fernandoi (p. 48) 2b. Diviso celular por fisso binria em dois ou mais planos .................................................................................................... 3 3a. Diviso celular em dois planos................................................ Famlia Merismopediaceae 4 3b. Diviso celular em trs planos ...................................................... Famlia Microcystaceae 8 4a. Colnias arredondadas, alongadas, ocas; clulas arredondadas com aertopos ..................... Sphaerocavum brasiliense (p. 49) 4b. Colnias tabulares, planas ou convolutas, regulares ou no......................................... 5

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5a. Colnias retangulares ou quadrticas; clulas em vista apical ovais, arredondadas ou hemisfricas aps a diviso, dispostas em fileiras regulares ............................................ Merismopedia 6 5b. Colnias irregulares; clulas em vista apical poligonais, alongadas ou ovais, no dispostas em fileiras regulares .................................................... Microcrocis sp. (p. 42) 6a. Clulas em vista lateral cilndricas ou oblongas (1,5-2,5 vezes mais longas que largas) ..................... Merismopedia convoluta (p. 39) 6b. Clulas em vista lateral arredondadas ............................................................................. 7 7a. Clulas 1-1,6 m de dimetro ............................................................... M. tenuissima (p. 41) 7b. Clulas 3-6 m de dimetro ......................................................................... M. glauca (p. 40) 8a. Contorno da colnia firme, refringente ....................... Microcystis wesenbergii (p. 47) 8b. Contorno da colnia difluente ........................................................................................ 9 9a. Mucilagem estreita na periferia da colnia (inconspcua); clulas densamente dispostas ........................................................... M. panniformis (p. 45) 9b. Mucilagem usualmente ampla na periferia da colnia; clulas esparsa ou densamente dispostas, ou apenas prximas uma das outras .....................................................................................10 10a. Clulas com envelope mucilaginoso individual, esparsamente dispostas na mucilagem ..................................... M. protocystis (p. 46) 10b. Clulas sem envelope mucilaginoso individual, densamente dispostas ou apenas prximas uma das outras no centro da colnia .........................................................................11 11a. Clulas densamente dispostas no centro da colnia, com clulas solitrias na periferia ...................................................... M. novacekii (p. 44) 11b. Clulas apenas prximas umas das outras no centro da colnia, sem clulas solitrias na periferia ................................ M. aeruginosa (p. 43) 12a. Filamentos homocitados .................................................... Ordem Oscillatoriales 13 12b. Filamentos heterocitados ......................................................... Ordem Nostocales 15

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13a. Clulas mais longas que largas; fragmentao do tricoma sem formao de necrdios ................................................. Famlia Pseudanabaenaceae 14 13b. Clulas isodiamtricas; fragmentao do tricoma com formao de necrdios .................................................................... Famlia Phormidiaceae Clulas com aertopos; clulas apicais arredondadas ou arredondado-achatadas, no capitadas, sem caliptra ou espessamento .................. Planktothrix isothrix (p. 52) 14a. Tricomas nitidamente atenuados; clulas sem aertopos, clulas apicais alongadas, capitadas .............................................. Geitlerinema splendidum (p. 50) 14b. Tricomas no atenuados, clulas com aertopos polares, clulas apicais cilndrico-arredondadas, no capitadas ................ Pseudanabaena galeata (p. 51) 15a. Heterocitos intercalares; acinetos distribudos ao longo do tricoma ou subterminais ...............................................................................16 15b. Heterocitos terminais; acinetos subterminais, separados dos heterocitos por 2-3 clulas ........................... Cylindrospermopsis raciborskii (p. 58) 16a. Tricomas espiralados, no atenuados; clulas apicais no diferenciadas ........................................................... Anabaena 17 16b. Tricomas retos ou levemente curvos, atenuados; clulas apicais diferenciadas ....................................................... Aphanizomenon 19 17a. Altura das espiras de 70-120 m; acinetos cilndricos, arredondados ou angulares nas extremidades, distantes dos heterocitos ......................... Anabaena circinalis (p. 53) 17b. Espiras mais estreitas; acinetos elpticos, geralmente levemente curvos, distantes dos heterocitos .......................................................................................18

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18a. Altura das espiras de 40-70 m; clulas de 9,7-15 m de dimetro ...................................................... A. crassa (p. 54) 18b. Altura das espiras de 20-45 m; clulas de 6-8 m de dimetro ...................................................... A. spiroides (p. 55) 19a. Tricomas gradualmente atenuados; clulas apicais levemente capitadas, pigmentadas ........ Aphanizomenon gracile (p. 56) 19b. Tricomas bruscamente atenuados; clulas apicais pontiagudas, no pigmentadas ............................ A. issatschenkoi (p. 57)

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Merismopedia convoluta Brbisson 1849

Aspecto geral de parte de uma colnia.

Principais caractersticas
Colnias tabulares, retangulares, margens convolutas, com numerosas clulas, arranjadas em grupos de 16-32 clulas, dispostas em fileiras regulares. Mucilagem homognea, hialina, difluente. Clulas - Em vista apical arredondadas ou hemisfricas aps a diviso (2 planos); - Em vista lateral cilndricas ou oblongas (1,5-2,5 vezes mais longas que largas). Contedo celular verde-azulado, homogneo, sem aertopos.

Dimenses das clulas


Dimetro: (3,2)*4-5,2 m (vista apical) Comprimento: 4,4-6,5 m (vista lateral) Comentrios: a espcie pode ser facilmente confundida com Merismopedia glauca (Ehrenberg) Ktzing, da qual difere pelo comprimento das clulas obtido no sentido do eixo perpendicular colnia. De acordo com Geitler (1932), estas em M. convoluta so at 2 vezes mais longas que largas, enquanto que em M. glauca as clulas so to longas quanto largas ou mais largas.

* ( ) = dimenses raras.

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40 Manual para estudo de cianobactrias planctnicas em mananciais de abastecimento pblico

Merismopedia glauca (Ehrenberg) Ktzing 1845

Aspecto geral de parte de uma colnia.

Principais caractersticas
Colnias tabulares, retangulares, planas, usualmente com at 64 clulas, dispostas em fileiras regulares, prximas umas das outras. Mucilagem homognea, hialina, contorno inconspcuo. Clulas arredondadas ou hemisfricas aps a diviso (2 planos). Contedo celular verde-azulado, homogneo, sem aertopos.

Dimenses das clulas


Dimetro: 3-6 m

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Merismopedia tenuissima Lemmermann 1898

Vista geral de parte de uma colnia. (Foto de SantAnna et Azevedo, 2006)

Principais caractersticas
Colnias tabulares, quadrticas ou retangulares, planas, s vezes levemente onduladas, com numerosas clulas, arranjadas em grupos de 8-32, dispostas em fileiras mais ou menos regulares, prximas umas das outras. Mucilagem homognea, hialina, difluente. Clulas arredondadas ou ovais, hemisfricas aps a diviso (2 planos). Contedo celular verde-azulado claro, homogneo, sem aertopos.

Dimenses das clulas


Dimetro: 1-1,6 m Comentrios: Espcie de ocorrncia comum na represa Lomba do Sabo.

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42 Manual para estudo de cianobactrias planctnicas em mananciais de abastecimento pblico

Microcrocis sp.

1. Aspecto geral de uma colnia. 2. Parte de uma colnia. 3. Detalhe de parte da colnia.

Principais caractersticas
Colnias tabulares, planas, irregulares, constitudas por vrias clulas dispostas irregular e levemente distantes uma das outras. Mucilagem homognea, hialina, difluente. Clulas em vista apical poligonais, as das extremidades alongadas ou ovais, hemisfricas aps a diviso (2 planos). Contedo celular verde-azulado homogneo, sem aertopos.

Dimenses das clulas


Dimetro: 2,3-3,6 m Comprimento: 3,2-5,6 m (vista apical) 3,8-6 m (vista lateral) Comentrios: txon encontrado em amostras do lago Guaba.

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Microcystis aeruginosa (Ktzing) Ktzing 1846

3 Aspecto geral de colnias de Microcystis aeruginosa. 1. colnia com buraco, no clatrada. 2-4. colnias clatradas.

Principais caractersticas
Colnias arredondadas quando jovens, tornando-se alongadas, irregulares ou lobadas; s vezes com buracos, clatradas ou no. Mucilagem homognea, hialina, difluente; margem geralmente ampla (5-8 m). Clulas - Dispostas desordenadamente no envelope mucilaginoso, prximas umas das outras; - Arredondadas ou hemisfricas aps a diviso celular, s vezes levemente alongadas antes da diviso (3 planos); - Sem envelope mucilaginoso individual. Contedo celular verde-azulado escuro com numerosos aertopos.

Dimenses das clulas


Dimetro: (3)4-6,5 m Comentrios: espcie responsvel pela formao de floraes com potencial de produzir microcistinas.

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44 Manual para estudo de cianobactrias planctnicas em mananciais de abastecimento pblico

Microcystis novacekii (Komrek) Compre 1974

EM CS

CS

Aspecto geral de Microcystis novacekii, mostrando clulas solitrias (CS) distribudas na periferia do envelope mucilaginoso (EM).

Principais caractersticas
Colnias arredondadas, alongadas ou lenticulares, no clatradas. Mucilagem hialina, firme, espessa. Clulas - Densamente arranjadas no centro da mucilagem, apresentando clulas solitrias na periferia da colnia; - Arredondadas ou hemisfricas aps a diviso celular (3 planos); - Sem envelope mucilaginoso individual. Contedo celular verde-azulado, com aertopos.

Dimenses das clulas


Dimetro: 3-5,5 m Comentrios: Microcystis novacekii facilmente reconhecida pela disposio de suas clulas, densamente agrupadas no centro da colnia e algumas solitrias na periferia.

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Microcystis panniformis Komrek et al. 2002

Aspecto geral de uma colnia.

Principais caractersticas
Colnias inicialmente irregulares, tornando-se arredondadas ou alongadas, s vezes com buracos irregulares, no clatradas. Mucilagem hialina, inconspcua. Clulas - Densamente arranjadas, prximo superfcie do envelope mucilaginoso; - Arredondadas ou hemisfricas aps a diviso celular (3 planos); - Sem envelope mucilaginoso individual. Contedo celular verde-azulado-amarelado, verde-oliva ou acastanhado, com numerosos aertopos semelhantes a pontos.

Dimenses das clulas


Dimetro: (2,5)3-4,6(4,8) m - (material tipo Komrek et al. 2002) Comentrios: Microcystis panniformis foi recentemente descrita a partir de populaes brasileiras que viviam em lago eutrfico subtropical de So Paulo, SP, por Komrek et al. (2002). Espcie que pode ser confundida com M. aeruginosa. As diferenas entre as mesmas consistem na espessura do contorno do envelope mucilaginoso e pela disposio de suas clulas na mucilagem. Alm da forma das colnias, as clulas de M. panniformis so menores do que as de M. aeruginosa. Microcystis panniformis uma espcie potencialmente txica, produtora de microcistina (Dogo et Carvalho, 2006).

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46 Manual para estudo de cianobactrias planctnicas em mananciais de abastecimento pblico

Microcystis protocystis Crow 1923

EMi

1. Aspecto geral de uma colnia. 2. Detalhe de parte da colnia. 3. Detalhe de clulas com envelope mucilaginoso individual (EMi ).

Principais caractersticas
Colnias irregulares, no clatradas, no lobadas. Mucilagem homognea, hialina, difluente, delgada. Clulas - Esparsas e irregularmente dispostas; - Arredondadas, hemisfricas aps a diviso celular ou levemente alongadas antes da diviso (3 planos); - Com envelope mucilaginoso individual. Contedo celular verde-azulado, com aertopos.

Dimenses das clulas


Dimetro: (3)3,5-6,5 m Comentrios: Microcystis protocystis facilmente distinguida das demais espcies do gnero pela presena de envelope mucilaginoso envolvendo individualmente cada clula, normalmente perceptvel somente com nanquim. Alm disso, a disposio de suas clulas na mucilagem tambm tpica da espcie.

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Microcystis wesenbergii (Komrek) Komrek in Kondrateva 1968

2 1

1. Aspecto geral de uma colnia. 2-4. Detalhes de partes de colnias.

Principais caractersticas
Colnias arredondadas ou alongadas, irregulares, lobadas, com buracos quando velhas, freqentemente clatradas, usualmente compostas por subcolnias. Mucilagem homognea, hialina, firme, no difluente, com contorno espesso, firme e refringente. Clulas - Esparsas at densamente dispostas; - Arredondadas ou hemisfricas aps a diviso celular, s vezes levemente alongadas antes da diviso celular (3 planos). Contedo celular verde-azulado com aertopos.

Dimenses das clulas


Dimetro: 4-7 m Comentrios: Microcystis wesenbergii facilmente distinguida das demais espcies do gnero pelo fato de suas colnias apresentarem-se envolvidas por mucilagem bastante caracterstica: firme, homognea com contorno evidente, refringente. Espcie de ocorrncia comum no lago Guaba. Esteve bem representada durante as floraes de Planktothrix isothrix Komrek et Komrkov.

Chroococcales
48 Manual para estudo de cianobactrias planctnicas em mananciais de abastecimento pblico

Radiocystis fernandoi Komrek et Komrkov-Legnerov 1993

Aspecto geral de colnias com envelope mucilaginoso, mostrando a disposio radiada bem evidente em uma das colnias.

Principais caractersticas
Colnias arredondadas ou irregulares, constitudas por um ou vrios grupos de clulas dispostas em fileiras radiadas, partindo do centro para a periferia da colnia. Mucilagem homognea, hialina, contorno inconspcuo, difluente, envolvendo todos os grupos de clulas. Clulas arredondadas ou ovais, hemisfricas aps a diviso celular (1 plano). Contedo celular verde-azulado escuro, com aertopos.

Dimenses das clulas


Dimetro: 6-8 m Comentrios: A espcie pode ser facilmente confundida com Microcystis aeruginosa Ktzing, da qual difere pela disposio de suas clulas em fileiras radiadas, partindo do centro para a periferia da colnia. Alm disso, as clulas de Radiocystis fernandoi dividem-se por fisso binria em um nico plano, enquanto que as de M. aeruginosa dividem-se em trs planos. Radiocystis fernandoi uma espcie com potencial de produzir microcistinas.

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Sphaerocavum brasiliense Azevedo et SantAnna 2003

3 1-2. Aspecto geral de uma colnia jovem (1) e uma colnia adulta (2) com proliferao de colnias-filhas (setas); 3. detalhe da disposio das clulas em fileiras mais ou menos regulares na periferia da colnia.

Principais caractersticas
Colnias ocas; esfricas quando jovens, tornando-se alongadas e irregulares. Mucilagem hialina, inconspcua, usualmente delgada ou hialina. Clulas - Frouxamente dispostas, irregularmente ou em fileiras mais ou menos regulares na superfcie da colnia; - Arredondadas ou oblongas antes da diviso celular (2 planos). Contedo celular marrom ou esverdeado, com aertopos.

Dimenses das clulas


Dimetro: 2,4-3,6 m Comentrios: espcie de ocorrncia comum em densas floraes em diferentes corpos dgua, geralmente acompanhada de espcies de Microcystis. Gnero e espcie descritos a partir de populaes brasileiras que viviam em lago eutrfico subtropical, So Paulo (SP), por Azevedo et SantAnna (2003).

Oscillatoriales
50 Manual para estudo de cianobactrias planctnicas em mananciais de abastecimento pblico

Geitlerinema splendidum (Greville ex Gomont) Anagnostidis 1989

Aspecto geral de tricomas, destacando uma clula apical (seta) tpica da espcie: alongada, nitidamente atenuada e capitada.

Principais caractersticas
Tricomas - Solitrios ou emaranhados; - Retos ou flexuosos; - No constrictos, atenuados, curvos nos pices; - Mveis (ondulam). Clulas - Apicais alongadas, nitidamente atenuadas e capitadas; - Intermedirias usualmente mais longas do que largas (2-4 vezes); - Septos granulosos (1-2 grnulos) ou no. Contedo celular verde-azulado, homogneo, sem aertopos. Reproduo: fragmentao sem formao de necrdios, originando hormognios.

Dimenses
Tricomas: 2-3,1 m de dimetro Clulas: 3-9 m de comprimento Comentrios: espcie bastante caracterstica, facilmente distinguida das demais espcies do gnero pela morfologia de sua clula apical: alongada, nitidamente atenuada e capitada.

Oscillatoriales
Manual para estudo de cianobactrias planctnicas em mananciais de abastecimento pblico 51

Pseudanabaena galeata Bcher 1949

T Ae

Ae 2 3

1. Aspecto geral de tricomas emaranhados. 2-3. detalhes de tricomas (T) mostrando aertopos polares (Ae) em clulas apicais e intermedirias.

Principais caractersticas
Tricomas - Solitrios ou emaranhados formando talos finos verde-azulados; - Retos ou levemente curvos; - Constrictos, no atenuados; - Usualmente formados por 10-30 clulas, raramente 50-150; - Mveis (deslizamento para frente). Clulas - Intermedirias cilndricas; - Apicais cilndrico-arredondadas ou arredondado-achatadas, raramente cnica, no capitadas, sem caliptra ou espessamento; Contedo celular - Verde-azulado, plido ou vivo at verde-acinzentado; - 1-2 aertopos polares. Reproduo: fragmentao sem formao de necrdios, originando hormognios com aertopos polares, caractersticos da espcie.

Dimenses
Tricomas: 1,2-2,4 m de dimetro Clulas: 2-6 m de comprimento Comentrios: A presena de aertopos polares caracterstica da espcie. A espcie foi observada somente no lago Guaba.

Oscillatoriales
52 Manual para estudo de cianobactrias planctnicas em mananciais de abastecimento pblico

Planktothrix isothrix (Skuja) Komrek et Komrkov 2004


Sinnimo: Planktothrix mougeotii (Bory ex Gomont) Anagnostidis et Komrek 1988

1 2

3 1-4. Aspecto geral de tricomas de Planktothrix isothrix.

Principais caractersticas
Tricomas - Retos ou levemente curvos; - No ou levemente constrictos, no atenuados; - Mveis (movimento muito lento - oscila). Clulas - Levemente mais curtas que largas ou isodiamtricas; - Apicais cilndricas arredondadas ou arredondado-achatadas, raramente cnica, no capitadas, sem caliptra ou espessamento. Contedo celular - Verde-azulado ou verde-acinzentado; - Inmeros aertopos, conferindo colorao marrom a marrom-escuro s clulas. Reproduo: fragmentao com formao de necrdios, originando hormocitos imveis (Komrek et Anagnostidis, 2005).

Dimenses
Tricomas (5-)5,5-9,7(10) m de dimetro Clulas (1,5-)2-5,5(9,5) m de comprimento Comentrios: Espcie com ocorrncia registrada para o lago Guaba, responsvel por determinar, quando em florao, colorao esverdeada, odor e sabor de terra gua. Segundo Komrek et Anagnostidis (2005) hormognios de Planktothrix provavelmente hibernam no bentos, sem aertopos em suas clulas.

Nostocales
Manual para estudo de cianobactrias planctnicas em mananciais de abastecimento pblico 53

Anabaena circinalis Rabenhorst ex Bornet et Flahault 1988


1 2

Ac

H H

1. Aspecto geral de um filamento sem heterocitos e acinetos. 2. Aspecto geral de um filamento com heterocitos (H). 3. Aspecto geral de um filamento com acinetos (Ac) e heterocitos.

Principais caractersticas
Tricomas - Solitrios ou emaranhados; - Espiralados, sem envelope mucilaginoso ou muito estreito; - Espiras amplas, regulares ou no. Clulas em forma de barril at esfricas. Contedo celular verde-azulado, com aertopos. Heterocitos arredondados. Acinetos cilndricos, arredondados ou angulares nas extremidades, geralmente solitrios, distantes dos heterocitos.

Dimenses
Espiras: altura - 70-120 m distncia - 30-50 m Clulas: 7,2-11,7 m de dimetro 7-10 m de comprimento Heterocitos: 7-11 m de dimetro Acinetos: 15-22,5 m de dimetro 21,2-27,4 m de comprimento Comentrios: espcie de ocorrncia comum nos dois mananciais, por vezes destacou-se como dominante ou acompanhando floraes de Planktothrix isothrix. Referida na bibliografia como potencialmente txica (Sivonen et Jones, 1999).

Nostocales
54 Manual para estudo de cianobactrias planctnicas em mananciais de abastecimento pblico

Anabaena crassa (Lemmermann) Komrkov-Legnerov et Cronberg 1992

Ac H

EM

Parte de um tricoma com acinetos (Ac) e Heterocito (H), dentro de envelope mucilaginoso espesso (EM).

Principais caractersticas
Tricomas - Solitrios, espiralados, com envelope mucilaginoso espesso (at 20 m largura); - Espiras usualmente regulares; - Clulas em forma de barril ou esfricas, geralmente comprimidas nas extremidades. Contedo celular verde-azulado, com aertopos. Heterocitos arredondados. Acinetos elpticos, geralmente levemente curvos, solitrios, s vezes aos pares, distantes dos heterocitos.

Dimenses
Espiras: altura 40-70 m distncia 30-55 m Clulas: 9,7-11,8(15) m de dimetro 9-12,2 m de comprimento Heterocitos: 9-15 m de dimetro Acinetos: 14-16,5 m de dimetro 21,2-25 m de comprimento Comentrios: espcie de ocorrncia comum, especialmente na represa Lomba do Sabo. Com potencial de produo de anatoxina a (S) e microcistina (Becker et al. 2004).

Nostocales
Manual para estudo de cianobactrias planctnicas em mananciais de abastecimento pblico 55

Anabaena spiroides Klebahn 1895

Ac H Ac H 1

1. Espiras regulares, com acineto (Ac) e heterocito (H). 2. Espiras irregulares, com heterocito. 3. Filamento senescente, com acineto e heterocitos.

Principais caractersticas
Tricomas - Solitrios ou emaranhados; - Regular ou irregularmente espiralados, com envelope mucilaginoso estreito. Clulas em forma de barril ou esfricas. Contedo celular verde-azulado, com aertopos. Heterocitos arredondados. Acinetos elpticos, geralmente levemente curvos, solitrios, distantes dos heterocitos.

Dimenses
Espiras: altura 20-45 m distncia ca. 20-45 m Clulas: 6-8 m dimetro Heterocitos: 6-8 m de dimetro Acinetos: 10-14 m de dimetro 17-21 m de comprimento Comentrios: sua ocorrncia nos dois mananciais foi espordica, no tendo sido registradas floraes da espcie.

Nostocales
56 Manual para estudo de cianobactrias planctnicas em mananciais de abastecimento pblico

Aphanizomenon gracile Lemmermann 1907

H Ac

1. Tricoma com heterocito (H) e clula apical capitada (*). 2. Aspecto geral de um tricoma com acineto (Ac).

Principais caractersticas
Tricomas - Solitrios, retos ou levemente curvos, constrictos; - Gradualmente atenuados em direo s extremidades; - Sem envelope mucilaginoso. Clulas - Intermedirias cilndricas, arredondado-truncadas nas extremidades; - Apicais capitadas ou cilndricas com extremidades arredondadas. Contedo celular verde-azulado, granuloso, sem aertopos. Heterocitos - Intercalares, solitrios; - Em forma de barril a elpticos, truncados nas extremidades. Acinetos - Cilndricos, solitrios ou aos pares, distantes dos heterocitos.

Dimenses
Tricomas: 2,3-2,7(3,5) m de dimetro Clulas: intermedirias 4,6-7 m de comprimento apicais 1,7-2,3(3) x 4,5-6,4 m Heterocitos: 3,7-5 m de largura 4,7-7 m de comprimento Acinetos: 2,8-5,1 m de dimetro 8,3-18,5 m de comprimento Comentrios: clulas apicais capitadas constituem-se em uma caracterstica tpica desta espcie.

Nostocales
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Aphanizomenon issatschenkoi (Ussaczew) Proschkina-Lavrenko 1962


Ac Ac Ac

Parte de um tricoma com acinetos (Ac) e heterocito (H).

Principais caractersticas
Tricomas - Solitrios, retos, no constrictos; - Bruscamente atenuados nas extremidades; - Sem envelope mucilaginoso. Clulas - Apicais pontiagudas, usualmente levemente curvas, no pigmentadas, hialinas; - Intermedirias cilndricas. Contedo celular verde-azulado, com aertopos. Heterocitos - Intercalares, solitrios; - Cilndricos com extremidades arredondadas. Acinetos - Cilndricos com extremidades arredondadas, usualmente solitrios, distantes dos heterocitos.

Dimenses
Tricomas: 2-3(4,4) m de dimetro Clulas: intermedirias 4-8 m de comprimento apicais 1,2-2,9 x 5-20 m Heterocitos: 2-3(6,5) m de largura (4,5)6-10,9 m de comprimento Acinetos: 2-4,5(7) m de dimetro 6-20 m de comprimento Comentrios: espcie de ocorrncia comum nos dois mananciais, especialmente na represa Lomba do Sabo, freqentemente apresentando-se como dominante nestes ambientes. A espcie assemelha-se a Aphanizomenon tropicale Horeck et Komrek. No entanto, diferem entre si, essencialmente, pela forma dos acinetos e heterocitos. Alm disso, os acinetos de A. tropicale se desenvolvem adjacentes aos heterocitos.

Nostocales
58 Manual para estudo de cianobactrias planctnicas em mananciais de abastecimento pblico

Cylindrospermopsis raciborskii (Wolosynska) Seenayya et Subba Raju 1972


H

Tricomas com heterocitos terminais (H), sem acinetos.

Principais caractersticas
Tricomas - Solitrios ou emaranhados; - Retos ou levemente curvos; - No ou apenas levemente constrictos; - Atenuados nas extremidades; - Sem envelope mucilaginoso. Clulas - Apicais cnico-arredondadas, pontiagudas ou cilndricas com extremidades arredondadas; - Intermedirias cilndricas. Contedo celular: verde-azulado, usualmente com numerosos aertopos. Heterocitos - Terminais, solitrios; - Cnicos ou cnico-alongados, arredondados nas extremidades. Acinetos - Cilndricos, arredondados nas extremidades ou ovais - Intercalares (subterminais) distantes 2-3 clulas das extremidades.

Dimenses
Tricomas: 2-3,5 m de dimetro Clulas: 32,-11 m de comprimento Heterocitos: 3-5 m de largura 6-13 m de comprimento Acinetos: 2,8-5,1 m de dimetro 8,3-18,5 m de comprimento Comentrios: Os tricomas dos gneros Aphanizomenon e Raphidiopsis podem ser facilmente confundidos com Cylindrospermopsis, quando constitudos apenas por clulas vegetativas. A presena ou ausncia de heterocitos, assim como a posio dos mesmos no tricoma, so os principais caracteres distintivos entre os gneros. Aphanizomenon desenvolve heterocitos intercalares, enquanto Raphidiopsis no forma heterocitos, apenas acinetos. Cylindrospermopsis raciborskii mundialmente conhecida pelo potencial de produo de diferentes tipos de toxinas (hepato e neurotoxinas).

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REFERNCIAS
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GLOSSRIO
Acinetos: Clulas vegetativas diferenciadas que aumentam de tamanho, com parede espessada e contedo celular densamente granulado, constituindo-se em esporos de resistncia. Aertopos: grupos de vesculas de gs relacionadas com a flutuao. Vistos ao microscpio tico como corpos irregulares e refringentes rosados, negros ou incolores. Biomassa: refere-se ao peso da matria viva (organismo, populao ou comunidade), normalmente expressa em peso seco ou peso fresco. Biovolume: volume ocupado pela clula ou organismo, considerando o volume da forma geomtrica mais prxima do indivduo considerado. Caliptra: espessamento proeminente, semelhante a um capuz, sobre a clula apical de tricomas, originada de resqucios de bainha mucilaginosa ou de necrdios. Cmara de Sedgwick-Rafter: cmara utilizada para quantificao de organismos em microscpio tico comum, com capacidade de 1 ml e dimenses de 20 mm de largura, 50 mm de comprimento por 1 mm de altura. Capitado: que lembra a forma de cabea. Clatradas: colnias perfuradas de maneira irregular, que no conjunto lembram uma rede. Constricto: reentrncia nas paredes transversais de tricomas. Ensaio toxicolgico com camundongo: bioensaio para a determinao da toxicidade de uma amostra, com a utilizao de organismo padro (camundongo albino suo, macho). Envelope ou Bainha Mucilaginosa: mucilagem formada de polissacardeos excretados pelas clulas, envolvendo clulas ou tricomas. Nas formas coloniais normalmente denominada de envelope mucilaginoso (fechado), enquanto que nas filamentosas de bainha (aberta). Escuma: tambm denominada de nata ou espuma superficial, originada pelo acmulo de indivduos de uma florao de cianobactrias, depositando-se geralmente nas margens, sob efeito do vento dominante, e em locais protegidos. Espessamento: aumento na espessura da parede celular na extremidade externa da clula apical de tricomas. Eutrfico: ambiente com alta concentrao de nutrientes, especialmente nitrognio e fsforo, que pode ser devido a processos naturais ou a despejos de esgotos domsticos e/ou industriais e tambm pela lavagem de solos ricos em nutrientes (adubo), causando a chamada eutrofizao. A eutrofizao normalmente acompanhada de aumento de biomassa vegetal e multiplicao excessiva de cianobactrias. Filamento: conjunto constitudo pela bainha mucilaginosa e pela fileira de clulas (tricoma). Fisso primria: diviso da clula em duas clulas-filhas que atingem o tamanho da clulame antes da prxima diviso.

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Floraes: proliferao excessiva de uma ou algumas espcies fitoplanctnicas, normalmente conferindo colorao esverdeada, amarelada ou avermelhada gua. Grnulos: incluses no protoplasma visveis ao microscpio tico; armazenam substncias de diferentes tipos ou carotenides. Vistos ao microscpio tico como corpos arredondados (regulares), escuros. Heterocitados: tricomas constitudos por clulas vegetativas e clulas diferenciadas, os heterocitos e acinetos. Heterocitos: clulas vegetativas diferenciadas onde ocorre a fixao de nitrognio atmosfrico. Apresentam parede espessada, contedo celular freqentemente verde-amarelado e possuem ndulos polares na zona de contato com as clulas vizinhas. Homocitados: tricomas constitudos somente por clulas vegetativas. Hormocistos: hormognios envolvidos por bainha mucilaginosa; funcionam como estrutura de resistncia. Estes crescem atravs de divises celulares formando novos tricomas. Hormognios: pedaos de tricomas resultantes da fragmentao dos mesmos, geralmente constitudos por poucas clulas, com funo de reproduo. Estes crescem atravs de divises celulares formando novos tricomas. Lise: destruio da clula, com rompimento da membrana celular e liberao do contedo citoplasmtico. Monitoramento: observao, medio e avaliao contnua ou repetida do ambiente para propsitos definidos, considerando a variao espacial e temporal, utilizando mtodos comparveis para a coleta e medio de dados. Necrdios: clulas mortas que auxiliam a fragmentao do tricoma para formao de hormognios, hormocitos e ramificaes. Oligotrfico: ambiente aqutico onde o teor de nutrientes, principalmente nitrognio e fsforo, muito baixo. Ramificaes falsas: ramificaes produzidas sem mudana no plano de diviso celular em relao ao eixo principal do tricoma. Ramificaes verdadeiras: ramificaes produzidas quando ocorre mudana no plano de diviso celular, passando a ser paralelo ao eixo principal do tricoma. Retculo de Whipple: retculo colocado em uma das oculares do microscpio, utilizado para contagem de clulas, apresentando-se dividido em 100 quadrados, sendo que o quadrado central apresenta 25 subdivises. Tricoma: fileira de clulas.