DETERMINACIN DE ETANOL EN CERVEZA POR CROMATOGRAFA DE GASES

RESUMEN

DATOS, CLCULOS Y RESULTAOS Para realizar la curva de calibracin se uso una solucin de etanol y 1-propanol como patrn interno, se les midi el rea a diferentes concentraciones y se hiz la relacin de rea entre los dos picos. Los datos para esta se muestran en la tabla No. 1 y con estos se realiza la grfica No. 1 relacin de rea vs porcentaje de etanol (v/v).
Tabla No. 1 Relacin del rea de la solucin de etanol.

% (v/v) 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5

Relacin de rea

Relacin de rea 0.3491 0.7461 1.1216 1.5038 1.8301

1.8491 1.5491 1.2491 0.9491 0.6491 0.3491 0.5 1 1.5 2 2.5 R = 0,9989

% (v/v) de etanol
Grafica No. 1 Relacin de las reas de los picos de etanol y 1propanol en funcin de la concentracin de etanol.

Con la grfica anterior se calcula la cantidad de etanol en la alcuota mediante la siguiente ecuacin, a la cual se le hiciern 4 lecturas y se obtuvo un promedio de relacin de rea de 0.6989. Los intervalos de confianza se realizaron al 95% con la tn-2 de 3,18.

(( ( ( )

) ( ) ) ( ( ) )

( ) ( ) ( )

Con estos datos se procede a determinar la cantidad de etanol en la muestra.

( )

( (

) )

( )

Ecuacin No. 1

Ecuacin No. 2

Para calcular los lmites de deteccin (LD) y de cuantificacin (LC) se hace uso de las ecuaciones 1 y 2, teniendo en cuenta las diluciones realizadas y que el SR es 0.02259 se obtiene como resultado

( )

( )

Para calcular la eficiencia de a columna en trminos del nmero de platos tericos (N) y la altura equivalente a un plato terico (H), del etanol y el patrn interno en la muestra, se hace uso de las ecuaciones 3 y 4.

( )
Ecuacin No. 3 Ecuacin No. 4

Donde tR es el tiempo de retencin; W es la anchura del pico y L es la longitud del relleno de la columna. Nmero de platos tericos para el etanol

(
Nmero de platos tericos para el patrn interno

(
Nmero total de platos tericos

Altura equivalente a un plato terico

ANLISIS Y DISCUSIN DE RESULTADOS En la cromatografa de gases (CG), la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna cromatogrfica, la elucin se produce por el flujo de una fase mvil de un gas inerte, a diferencia de otros tipos de cromatografa, la fase mvil no interacciona con las molculas del [1] analito, ya que su nica funcin es transportar el analito a travs de la columna. El desarrollo de esta tcnica, se debe a su gran sensibilidad, a su polivalencia, a la rapidez de la puesta a punto de anlisis nuevos y a las posibilidades de automatizacin que acrecientan ms su inters, en esta los

compuestos deben estar en estado gaseoso, el anlisis de lquidos o solidos implica poder transformarlos en vapor por calentamiento. Es sin duda el principal obstculo antes de elegir esta tcnica, puesto que limita su empleo al estudio de compuestos moleculares termostables y [2] suficientemente voltiles. La determinacin de etanol por CG se realiz con un cromatgrafo de gases Hewlett Packard. El equipo contiene un inyector, una columna y un detector. En este como fase mvil se utiliza helio proveniente de un cilindro bajo presin, este gas portador, debe estar exento de trazas de hidrocarburos, de vapor de agua y de oxgeno, ya que se comportan como impurezas perjudiciales para la fase estacionaria y puede disminuir la sensibilidad en el detector. La naturaleza del helio no modifica de forma significativa los valores de los coeficiente de distribucin K del etanol, como consecuencia de la ausencia de interaccin entre gas y disoluciones, al ser la temperatura el nico factor de modificacin importante. Sin embargo, la viscosidad y la velocidad del gas en la columna tiene una influencia sobre la dispersin de los compuestos en la fase estacionaria y sobre la [3] eficiencia y la sensibilidad de la deteccin (figura No. 1). Tiene un inyector de vaporizacin directa, consiste en un tubo metlico doblado, forrado de vidrio de tipo insert, recorrido por el helio y calentado a una temperatura de 200C. La aguja de la micro-jeringa que contiene la muestra atraviesa una de las extremidades del inyector obturada por una pastilla de un elastmero de silicona (septum), la otra extremidad est ajustada a la columna tambin calentada (figura No. 2). La totalidad de la muestra introducida es inmediatamente vaporizada, y pasa a la columna en varios segundos. La columna es de tipo capilar (figura No. 3), es mucho ms estrecha y suele ser mucho ms larga que una columna empacada. La Hewlett Packard INNOWax est hecha de slice fundida muy pura, obtenida por combustin de tetraclorosilano (SiCl4) en una atmosfera de oxgeno. El dimetro interno del tubo es de 0.5 m tiene un espesor de 0.32 mm y una longitud de 30 m. Esta columna se hace menos frgil gracias a un revestimiento externo de un polmero trmicamente estable de alto peso molecular, en este caso el poli-etilenglicol, sirve para compuestos polares, tambin para compuestos como glicoles, alcoholes, teres, aceites esenciales. Una fase estacionaria lquida inmovilizada debe cumplir con unas propiedades como la baja reactividad, baja volatilidad, el punto de ebullicin de la fase estacionaria debe ser al menos 100 C mayor que la mxima temperatura alcanzada en el horno, debe tener una estabilidad trmica, para evitar su descomposicin durante [4] la elucin. Po ultimo est el detector, en este caso se utiliz un de ionizacin de llama prcticamente considerado universal para compuestos orgnicos, donde la corriente gaseosa que sale de la columna penetra en la llama de un pequeo quemador alimentado por una mezcla gaseosa H 2 y aire. Este detector destruye la muestra, cuya combustin produce iones y partculas cargadas -12 responsables del paso de una corriente inica extremadamente dbil (10 A) entre dos electrodos. Las extremidad del quemador sirven de electrodo de polarizacin, mientras el segundo electrodo, de forma anular, rodea la llama (figura No. 4). Luego esta se amplifica la seal por un electrmetro [1] la cual el registrador la convierte en seal de salida de rea. La calibracin por el mtodo del estndar interno, se utiliza con frecuencia en el anlisis cuantitativo para compensar posibles errores derivados de la manipulacin de la muestra. Este mtodo consiste en esencia en aadir una cantidad conocida de un compuesto patrn a la muestra a analizar antes de realizar con ella cualquier manipulacin; en el cromatgrama, aparecen los picos correspondientes al analito y al patrn aadido. De la relacin entre el rea de ambos, se calcula la cantidad de analito existente en la muestra. Para efectuar el calibrado en este mtodo, se presentan disoluciones de concentracin creciente del compuesto a analizar a las que se aade una cantidad idntica en todos los casos del etanol patrn; tras obtener los correspondientes coromatgramas, se representa la concentracin del etanol a cuantificar en funcin de la relacin de los picos etanol/1-propanol, con lo que se obtiene la (grafica No. 1) en la que es posible interpolar la relacin de los dos picos. Un producto para ser utilizado como patrn interno debe dar un pico totalmente resuelto de los de la mezcla a analizar, el pico del compuesto patrn debe estar situado en el cromatgrama en las proximidades de los picos de inters, a lo largo de todo el

proceso de anlisis, debe tener un comportamiento similar al de los compuestos a cuantificar, debe ser qumicamente estable, frente a los componentes de la muestra como frente a los compuestos [5] que se puedan utilizar durante el proceso del anlisis. Por esta tcnica se obtiene que la cantidad de etanol en la muestra de cerveza es de (3.8 0.3) % (v/v), la determinacin de este por CG fue ptima al obtener resultados similares a los reportados en la etiqueta de la cerveza. Se obtuvieron los lmites de deteccin y de cuantificacin de 0.4 y 1.2 % (v/v) de etanol respectivamente, indicando la cantidad de analito presente derivada de la menor seal analtica que puede ser medida con precisin y exactitud. Tambin se obtuvo la cantidad 4 total de platos tericos de 5.2 * 10 , que indican la eficiencia de la columna, cuanto mas elevado sea el nmero de platos se consideran ms eficiente la columna. Una eficiencia de la columna alta es til, ya que se requiere menos separacin entre los picos (lo que implica valores del factor de separacin inferiores). En las fases estacionarias en las que los valores del factor de separacin son bajos, se requiere el uso de columnas ms eficientes. Otra medicin de la eficiencia de la columna es la altura equivalente a un plato terico, el cual es igual en este caso a 0.6 mm, cuanto ms corto sea cada plato terico, mayor ser el nmero de platos incluidos a lo largo de la columna, esto se traduce en un nmero mayor de platos por metro y una mayor eficiencia de la [4] columna.

Figura No. 1 Eficiencia en funcin de la naturaleza y de la velocidad del gas portador.

[1]

Figura No. 2 inyeccin de vaporizacin directa.

[1]

Figura No. 3 Detector de ionizacin de llama (FID).

[1]

PREGUNTA Explique clara y concretamente los diferentes mtodos de inyeccin utilizados en CG y cul es su utilidad? Inyeccin con divisin: Este modo de inyeccin se usa para soluciones relativamente concentradas en donde el analito compone el mas del 0.1% de la muestra, si inyectan por medio de una micro jeringa con la cual se atraviesa un septum agregndose volmenes del orden de los L que posteriormente son evaporizados pero debido a las altas concentraciones de analito que pueden saturar la columna es necesaria hacer una divisin en la salida de la cmara de mezclado, en donde se deja pasar aproximadamente 0,2 o 2% a la columna y el resto es desechado por medio de la vlvula de Split, esta porcin se le denomina razn de divisin, la cual puede ser programable segn el anlisis (Figura No. 4). En anlisis este sistema de inyeccin tiene dos inconvenientes a causa de la divisin se pierde sensibilidad lo cual aumenta los lmites de deteccin y la discriminacin de compuestos cuando llegan al detector por estar a una concentracin relativamente baja pero se logran unos picos cromatogrficos muy finos y con buena resolucin lo que quiere decir que hay una buena [6] separacin.

Figura No. 4. Sistema de Inyeccin de split.

[7]

Este sistema de inyeccin se usa para muestras que contienen concentraciones de analitos menores al 0,01%, comparte muchas similitudes en cuanto a partes pero solo se diferencia en que no tienen una cmara de mezcla y de un punto de divisin, en este mtodo de inyeccin se pierde aproximadamente el 20% de la muestra que ingresa a la columna, al interior de este sistema se manejan temperaturas ms bajas que el punto de ebullicin de los compuestos ms voltiles, se da el efecto de la condensacin del solvente que conlleva a picos estrechos, debido a que los compuestos ms voltiles se eluyen primero y se debe aumentar la temperatura para eluir los compuestos de mayor punto de ebullicin. La principal ventaja de usar este sistema de inyeccin es la sensibilidad al no haber divisin de la muestra lo cual es til para el anlisis de analitos a nivel de trazas pero el efecto de la condensacin del solvente hace que los picos sean ms estrechos lo que no es bueno para un [6] anlisis cuantitativo. Inyeccin en columna: Para este sistema de inyeccin se busca que la muestra sea introducida directamente sobre la columna a una temperatura menor al punto de ebullicin del solvente, entonces se puede analizar compuestos termolbiles porque se da un aumento brusco despus de la inyeccin, es importante recalcar que las aguja es de slice fundida con un dimetro de 0.15mm, la cual estn fina que no puede romper el septum es por ellos que se usa un sistema de vlvulas y guas para lograr la inyeccin de la muestra a la columna las cuales deben ser de 0,25 a 0,30mm para una buena resolucin. La ventaja que ofrece este sistema de inyeccin es que no hay discriminacin de los compuestos, buena precisin, no se altera la muestra y a adecuado para compuestos inestables trmicamente.
[6]

Figura No. 5 Esquema de inyeccin on-column.

[7]

Inyectores de espacio de cabeza Este sistema se puede usar para muestras slidas, ya que lo que se hace es almacenar la muestra de forma hermtica con un gas inerte en un vial y donde despus son calentados en un horno una temperatura constante que genera la evaporizacin de las muestras, el anlisis empieza cuando hay un equilibrio de fases o la presin de vapor parcial de los analitos sea igual a la presin de vapor a la que se est trabajando causando un aumento en la presin en el espacio de cabeza del vial, al llegar a este punto una jeringa termos atizada que es controlada por un sistema de [8] presurizacin hace el muestreo y posteriormente es depositada en la columna. Vlvulas de inyeccin de gases Son sistemas de 6 vas con bucles de capacidad variable as como los de HPLC pero se utilizan para el muestreo de gases de forma automtica, ms precisa y es muy til si se tiene varias muestras.

Figura No. 6 Esquema de una vlvula de inyeccin de gases.

[7]

CONCLUSIONES

BIBLIOGRAFA [1] Skoog D., Holler F. y Nieman T.; Principios de Anlisis instrumental; 5 Ed. Mc GRAW HILL, Espaa 2001; pg. 738, 739, 759, 765, 770, 771. [2] Rouessac F. y Rouessac A.; Anlisis Qumico: Mtodos y Tcnicas Instrumentales Modernas; 1 Ed. Mc GRAW-HILL, Espaa 2003; pg. 60-73. [3] http://mmrc.caltech.edu/GCMS/6890-operating-manual.pdf (Act: ao 2000) [4] Gua de seleccin de columnas Agilent J&W para CG; 1 Ed. Agilent Technologies, EE.UU 2010; pg. 4, 7, 8. [5]http://www.mncn.csic.es/docs/repositorio//es_ES//investigacion/cromatografia/principios_de_cro matografia.pdf (Act: ao 2009) [6] Harris D.; Anlisis Qumico Cuantitativo; 3 Ed. Grupo Editorial Iberoamrica S.A. de C.V., Mxico 1992; pg. 665-637. [7]http://www.mncn.csic.es/docs/repositorio//es_ES//investigacion/cromatografia/cromatografia_de_ gases.pdf (Act: ao 2009) [8]A_EFoSw&hl=es&sa=X&ei=Kz6xUeeXE4vFywHz3oCgAg&ved=0CCoQ6AEwAA#v=onepage&q =Inyectores%20de%20espacio%20de%20cabeza&f=false (Act: no data)