UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO INSTITUTO DE CINCIAS EXATAS E DA TERRA DEPARTAMENTO DE QUMICA BACHARELADO EM QUMICA ANALTICA V

DETERMINAO POR CROMATOGRAFIA GASOSA ACOPLADA COM ESPECTRMETRO DE MASSA DE RESDUOS DE ENDOSULFAN ALFA, ENDOSULFAN BETA E ENDOSULFAN SULFATO

DISCENTES: DAMIANA LUIZA MAXSUEL RIBEIRO

CUIAB/MT 2013

UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO INSTITUTO DE CINCIAS EXATAS E DA TERRA DEPARTAMENTO DE QUMICA BACHARELADO EM QUMICA ANALTICA V

DETERMINAO POR CROMATOGRAFIA GASOSA ACOPLADA COM ESPECTRMETRO DE MASSA DE RESDUOS DE ENDOSULFAN ALFA, ENDOSULFAN BETA E ENDOSULFAN SULFATO

Relatrio referente disciplina Qumica Analtica V, do curso de bacharelado em Qumica, ministrado pelo Prof. Dr. Eliana Freire Gaspar de Carvalho Dores, como nota parcial para concluso da disciplina.

DOCENTE: PROF. DR. ELIANA FREIRE GASPAR DE CARVALHO DORES

CUIAB/MT 2013

Sumrio
1. Introduo 2. Fundamentao Terica 3. Objetivos 4. Equipamento e Metodologia 4.1 Equipamento utilizado 4.2 Metodologia 5. Resultados e Discusso 5.1 Utilizando o Mtodo do Padro externo 5.2 Utilizando o Metodo do Padro interno 6. Concluso 7. Referencias Bibliogrficas

1. Introduo
Esse experimento busca a quantificao de resduos dos pesticidas organoclorados; endosulfan alfa, endosulfan beta e endosulfan sulfato, por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa. A escolha de compostos to similares (o endosulfan alfa e beta s se diferem na estereoqumica piramidal do enxofre e o endosulfan sulfato o enxofre est em um estado de oxidao maior, ver figura 1) proposital, teve fins didticos com a demonstrao do poder de separao das tcnicas cromatogrficas modernas, com a adequada manipulao de variveis termodinmicas.

A combinao da cromatografia gasosa com a espectrometria de massa utilizada no experimento (GC-MS) tem um poder analtico fantstica, agregando ao potencial de separao da cromatografia gasosa, a alta sensibilidade de deteco da espectrometria de massa bem como a riqueza de informaes qualitativas inseridas no espectro de massa. Os equipamentos GC-MS em geral podem ser configurados para operar no modo full scan, onde uma determinada faixa de massa de ons (produtos da degradao das molculas em anlise) monitorada pelo espectrmetro de massa, gerando um espectro de massa muito rico em termos qualitativos, podendo at mesmo identificar a molcula com alto grau de confiabilidade pela comparao do espectro gerado com o banco de dados de espectros armazenado no equipamento. Outro modo de operao que pode ser configurado o modo SIM (single on monitoring), que foi o modo utilizado no equipamento no experimento, onde apenas algumas massas de ons so monitoradas, reduzindo o potencial qualitativo dos espectros de massa, porm proporcionando ganhos em termos quantitativos, aumentando a sensibilidade e reduzindo os rudos.

2. Fundamentao Terica

A cromatografia gasosa assim com os diversos mtodos cromatogrficos existentes, fundamenta-se na separao de componentes por meio do transporte da amostra por uma fase mvel (no caso da cromatografia gasosa, um gs), que forada a passar por uma fase estacionria, fixa e imiscvel fase mvel. a distribuio em graus variados das substncias entre a fase estacionria e a fase mvel, que proporciona as velocidades de migrao diferente, logo a separao dos compostos em bandas (compostos retidos mais fortemente pela fase estacionria move-se mais lentamente no fluxo da coluna). A eficincia de uma separao cromatogrfica est ligada a reduzidos alargamentos dos picos e a alta separao entre eles, porm contraposto alta separao entre as bandas est a preocupao em reduzir o tempo da corrida cromatogrfica, alm de reduzir o gasto de eluentes. A velocidade relativa de migrao dos compostos no fluxo da coluna determinada pela constante de distribuio das substancias, ou seja, a constante de equilbrio termodinmico que envolve a distribuio do analito entre a fase mvel e a fase estacionria, equao 1. A mvel A estacionria Kc = =

Equao 1

A constante de distribuio, assim como outras derivadas e relacionadas a ela, tais como fator de reteno e fator de separao, so parmetros que retrata a velocidade de eluio do analito, logo a eficincia da coluna em termos da separao dos picos. Devido a dificuldade na medida direta desses parmetros, mais comum a sua obteno pela sua relao com dados experimentais de tempo de reteno e tempo de retardo da fase mvel. * A grosso modo, o alargamento de banda inversamente proporcional a velocidade de transferncia de massa, que por sua vez tem diversas variveis que a influenciam, como: velocidade linear da fase mvel, coeficiente de difuso na fase estacionria e mvel, dimetro das partculas de recheio, espessura do filme lquido que recobre o suporte.Diversas tentativas, com vrios graus de sucesso, foram realizadas com o propsito de quantizar a eficincia da coluna em termos do alargamento dos picos, relacionando algebricamente as variveis que o influenciam, porm nenhuma inteiramente satisfatria. A teoria cintica da cromatografia, baseada em mecanismos aleatrios, hoje a mais aceita e que melhor descreve em termos quantitativos o alargamento dos picos.**

*para mais informaes ver SKOOG, D. A.; WEST, D. M.; HOLLER, F. J.; Princpios de Anlise Instrumental, 6
ed., Bookman, 2009, capitulo 26, pp. 776-801

**para mais informaes,

ver J.C Giddings, Unified Separation Science, New York: Wiley, 1991, PP. 94-96

Todos esses princpios tericos, muito bem fundamentados pela teoria cintica da cromatografia, esto por traz de uma bem sucedida anlise cromatogrfica (picos bem resolvidos e tempo de eluio reduzidos). Em uma corrida cromatogrfica a escolha da fase mvel e da fase estacionria deve ser estratgica, de forma que as suas interaes fsicas com o analito levem a uma melhor resoluo dos picos. Em especial na cromatografia gasosa a variao da temperatura da coluna uma ferramenta poderosssima e muito utilizada na manipulao de variveis que afetam a velocidade de transferncia de massa (o aumento da temperatura aumenta o coeficiente de difuso da fase mvel e da fase estacionria, logo tambm do coeficiente de difuso longitudinal, um parmetro crtico na cromatografia gasosa) e do coeficiente de distribuio. O aumento da temperatura provoca o deslocamento do equilbrio da distribuio do analito da fase estacionria para a fase mvel, reduzindo os tempos de retenes, porm reduzindo tambm a resoluo dos picos em funo da menor interao do analito com a fase estacionria. Assim um programa de temperatura adequado em cromatografia gasosa melhora a separao e diminui o tempo de reteno. Comear com uma temperatura baixa permite a separao dos compostos mais volteis em picos mais resolvidos e o aumento subsequente da temperatura reduz os tempos de retenes dos compostos menos volteis. A espectrometria de massa fundamenta-se em duas etapas principais; a ionizao, no caso do aparelho utilizado no experimento a ionizao se d por impacto eletrnico, onde a molcula bombardeada por um feixe de eltrons de alta energia (70eV), retirando um eltron da molcula, produzindo o on molecular, que se fragmenta em ctions, radicais e molculas neutras, todos os fragmentos carregados positivamente so acelerados por placas carregadas negativamente, passando para a segunda etapa principal; o analisador de massa, onde a classificao e a deteco dos ons ocorrem. No equipamento utilizado o analisador de massa um quadripolo (figura 2), onde apenas os ons com determinada razo carga/massa (m/z), determinado pelo estado eltrico dos quatro tubos em pares, so capazes de viajar atravs da regio quadipolar, sendo que nesse instante somente a intensidade desses ons so medias eletronicamente, os demais so assumem uma orbita estvel colidindo com os tubos. A classificao e deteco de uma faixa de massa de ons podem ser varridas pela variao do estado eltrico dos quatros tubos.

Figura 2

Em GC-MS o espectrmetro de massa varre as massas periodicamente durante toda corrida cromatogrfica, sendo assim vrios espectros de massa so registrados em funo do tempo, esses dados so tambm tratados pelo equipamento para fornecer o cromatograma de ons totais (similar a um cromatograma convencional), que a soma da abundncia dos ons em cada espectro colocado em um grfico em funo do tempo. Na GC-MS tem-se a opo de operar no modo full scan, onde uma faixa prestabelecida de valores m/z varrida, ou o modo SIM (single on monitoring), onde apenas alguns ons selecionados como referncia de um determinado pico so monitorados, a vantagem de se utilizar o modo SIM o aumento da sensibilidade analtica para sua quantificao, isso facilmente compreendido lembrando que no instante em que o estado eltrico do quadripolo est ajustado para um determinado on, os demais so ignorados, logo com o monitoramento de poucos ons, muito mais varreduras por segundo podem ser feitas, alm de reduzir os sinais de rudo no cromatograma, sendo que somente os ons caractersticos dos picos so monitorados. claro que necessrio ter informaes previas do espectro de massa dos picos.

3. Objetivo
Quantificar por cromatografia gasosa acoplada com espectrmetro de massa resduos dos pesticidas endosulfan alfa, endosulfan beta e endosulfan. .

4. Equipamento e Metodologia 4.1 Equipamento Utilizado

Cromatgrafo ( GC System) - fabricante: Agilent Technologies - modelo: 6890 series

Espectrmetro de massa - fabricante: Hewlett Packard - modelo: 5973

Injetor - fabricante: Agilent Technologies - modelo: 5973

Autosampler - fabricante: Agilent Technologies - modelo: 7683 series

Coluna Capilar, J e W Scientific, 0,33 micron; 25mX0,200 mm

4.2 Metodologia
Foi utilizado para a anlise o cromatgrafo a gs , acoplado ao espectrmetro de massa, com o injetor programado para split (com diviso). Foram introduzidos no injetor por meio do autosampler (sistema automtico de amostragem) volumes de 10l da amostra, (uma alquota de 1ml, armazenada em um vail, preparado com fenatreno, endosulfan alfa, endosulfan beta e endosulfan sulfato, nas concentraes

XXXXXXXXX, respectivamente) e dos padres de calibrao (sete alquotas

de 1ml armazenadas em vails, cada uma contendo o fenantreno na concetrao de 0.1 (ppm), e o endosultan alfa, endosulfan beta e o endosulfan sulfato, todos nas concentraes 0.1 , 0.3, 0.6, 0.9, 1.2, 1.5 e 2 (ppm), respectivamente em cada alquota). A temperatura do injetor foi ajustada para 250C. Foi utilizada uma coluna capilar para pesticidas de 25m X 0,200 mm. A temperatura do forno foi ajustada inicialmente para 92 C permanecendo por 1 min, ento foi realizada uma rampa de 20 C/min at atingir a temperatura de 250C, mantendo essa temperatura por cinco minutos. O MS operou no modo SIM, com a relao dos ons selecionados nos seus respectivos tempo, conforme apresentado na tabela 1.

Analito Correspondente Fenantreno Endosulfan alfa Endosulfan beta Endosulfan sulfato

Razo massa/carga(m/z) 176.1; 178.1; 179.1 236.8; 240.8; 264.9 236.8; 240.8; 264.8 271.6; 273.6; 386.9

Intervalo de monitoramento 7 - 9 min 9 - 10.3 min 10.3 - 11.1 min 11.1 - 12.0 min

Tabela 1 ons selecionados

5. Resultados e Discusso
O cromatograma da amostra obtido com os procedimentos descritos no item 4.2 apresentado no grfico 1, o primeiro pico com tempo de reteno (Tr) igual a 8,05min, corresponde ao fenantreno, o segundo com Tr igual a 9,91min ao endosulfan alfa, o terceiro com Tr igual a 10,72 ao endosulfan beta e o quarto com Tr igual a 11,45 ao endosulfan sulfato.

Grafico 1 Cromatograma da amostra

As reas dos picos do cromatograma da amostra e dos padres de calibrao relacionados com os analitos que o representam, bem como as concentraes em que foram preparadas, so apresentadas na tabela 2.

Concentraes
Analito Vail 1 Vail 2 Vail 3 Vail 4 Vail 5 Vail 6 Vail 7 Amostra Fenantreno 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0.1

Respostas Analtica (rea dos picos)

Endosulfan Endosulfan Endosulfan Endosulfan Endosulfan Endosulfan Fenantreno alfa beta sulfato alfa beta sultato 2 2 2 5895264 40346 76805 56104 1,5 1,5 1,5 5948905 30207 57621 41679 1,2 1,2 1,2 5745375 23689 45219 31591 0,9 0,9 0,9 5720475 17923 34103 23432 0,6 0,6 0,6 5602143 11999 22737 14906 0,3 0,3 0,3 5585115 5661 10736 6649 0,1 0,1 0,1 5701035 1844 3352 1919 * * * 5093884 14944 28097 18445

* essas so as concentraes em que os analitos foram preparados na amostra, as estimadas analticas das concentraes esto nos itens; resultados pelo
mtodo do padro externo e resultados pelo mtodo do padro interno

Tabela 2 rea dos Picos

5.1 Utilizando o Mtodo do Padro Externo

Fundamentando-se na proporcionalidade da rea do pico com a concentrao do analito que ele representa, foram utilizados os mtodos do padro externo e o mtodo do padro interno (item 5.2) para estimar as concentraes dos analitos presentes na amostra por meio dos dados experimentais. Pelo mtodo do padro externo faz-se primeiramente, para cada analito, um grfico relacionando a rea de cada pico com a respectiva concentrao do padro de calibrao e atravs do tratamento estatisco de regresso linear obtem-se a curva de calibrao, pela qual se calcula a concentrao da amostra (equao de uma reta que melhor se ajusta faixa de concentrao dos padres utilizados). Os grficos 2, 3 e 4 representam as curvas de calibrao dos analitos: endosulfan alfa, endosulfan beta e endosulfan sulfato respectivamente, obtidas por meio do software Excel 2007 utilizando os pontos concentrao/rea do pico dos padres de calibrao (mostrados na tabela 2).

Curva Calibrao endosulfan alfa

45000 40000 35000 30000 25000 20000 15000 10000 5000 0 0 y = 20276x - 307.08 R = 0.9998

rea dos picos

0.5

1.5

2.5

concentrao do analito

Grafico 2 - curva de calibrao endosulfan alfa

Curva de calibrao endosulfan beta

90000 80000 70000 60000 50000 40000 30000 20000 10000 0 0 y = 38705x - 696.99 R = 0.9999

rea dos picos

0.5

1.5

2.5

concentrao do analito

Grafico 3 - Curva de calibrao endosulfan beta

Curva de calibrao do endosulfan sulfato

60000 50000 rea dos picos 40000 30000 20000 10000 0 0 0.5 1 1.5 2 2.5 concentrao dos analitos y = 28734x - 1908.8 R = 0.9987

Grafico 4 Curva de calibrao endosulfan sulfato

Utilizando as reas dos picos de cada analito da amostra (tabela 2) com suas respectivas curvas de calibrao, apresentados nos grficos 2, 3 e 4 (Y = bX + a, sendo Y=a rea do pico, b= coeficiente angula, X= concentrao do analito e a= coeficiente linear), calculou-se as seguintes concentraes: Endosulfan alfa: 0,752173 0,8 ppm Endosulfan beta: 0,743857 0,7 ppm Endosulfan sulfato: 0,708352 0,7 ppm

5.2 Utilizando o Mtodo do Padro Interno

O mtodo do padro interno utiliza a razo das concentraes e reas dos picos dos analitos pelas concentraes e reas do padro interno (no caso o fenantreno) no lugar de simplesmente a concentraes e reas do analito como feito no mtodo do padro externo.

Razo:
Analito Vail 1 Vail 2 Vail 3 Vail 4 Vail 5 Vail 6 Vail 7

Razo:
Endosulfan Endosulfan Endosulfan Endosulfan Endosulfan alfa beta sulfato alfa beta 20 20 20 0,0068438 0,01302825 15 15 15 0,0050777 0,00968598 12 12 12 0,0041231 0,0078705 9 9 9 0,0031331 0,00596157 6 6 6 0,0021419 0,00405863 3 3 3 0,0010136 0,00192225 1 1 1 0,0003235 0,00058796 Tabela 3 - Pontos Mtodo Padro Interno Endosulfan sultato 0,00951679 0,00700616 0,00549851 0,00409616 0,00266077 0,00119049 0,00033661

Os grficos 5, 6 e 7, representam as curvas de calibrao pelo mtodo do padro interno, obtidas por meio do software Excel 2007 utilizando os pontos apresentados na tabela 3.

Curva de calibrao endosulfan alfa

0.008 0.007 0.006 0.005 0.004 0.003 0.002 0.001 0 0 5 10 15 20 25 y = 0.0003x + 2E-05 R = 0.9996

Grafico 5 Curva de calibrao endosulfan alfa

Curva de Calibrao endosulfan beta

0.014 0.012 0.01 0.008 0.006 0.004 0.002 0 0 5 10 15 20 25 y = 0.0007x + 2E-05 R = 0.9996

Grafico 6 Curva de calibrao endosulfan beta

Curva de calibrao endosulfan sulfato

0.01 0.008 0.006 0.004 0.002 0 0 5 10 15 20 25 y = 0.0005x - 0.0002 R = 0.9997

Grfico 7 - Curva de calibrao endosulfan sulfato Pelo aplicativo do equipamento GC-MS obteve-se com o mtodo do padro interno as seguintes curvas de calibrao: Endosulfan alfa: Y= 3,409e-4 X + 2,234e-5 Endosulfan beta: Y= 6,509e-4 X + 2,271e-5 Endosulfan sulfato: Y = 4,838e-4 X 2,318e-4 r= 0,999580 r= 0,999610 r=0,999686

Utilizando a razo das reas dos picos de cada analito / rea do pico do padro interno da amostra (tabela 2) com suas respectivas curvas de calibrao, (Y = bX + a,

sendo razo:

Y=

Razo:

,b=

coeficiente

angula,

X=

e a = coeficiente linear), calculou-se as seguintes

concentraes: Endosulfan alfa: 0,85402588 0,8 ppm Endosulfan beta: 0,84392692 0,8 ppm Endosulfan sulfato: 0,79636400 0,8 ppm

Obs: nos clculos foram utilizadas as curvas de calibrao obtidas pelo equipamento GC-MS por se considerar mais casas decimais na obteno das equaes.

6. Concluso
No se observou diferenas significativas nas estimativas de concentrao utilizando o mtodo de padro externo e o mtodo de padro interno, nem mesmo no coeficiente de correlao das curvas de calibrao. O experimento cumpriu com seus objetivos didticos de associar a prtica cromatogrfica com seus princpios tericos, porm com os procedimentos realizados no possvel obter resultados analticos adequados, o que se obteve foram resultados pobres e vagos, medidas de concentrao sem nenhuma incerteza associada (desvio padro ou intervalo de confiana, para um dado nvel de significncia), mtodo sem estimativa de limites de quantificao e deteco.

7. Referncias Bibliogrficas

SKOOG, D. A.; WEST, D. M.; HOLLER, F. J.; Princpios de Anlise Instrumental, 6 ed., Bookman, 2009.

SKOOG, D. A.; HOLLER, F.; WEST, D. M.; CROUCH, S. R.; Fundamentos de Qumica Analtica. Trad. Marco Tadeu Grassi, Pioneira Thomsom Learning LTDA, So Paulo, 2006.