CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Los medios de cultivo pueden clasificarse segn diferentes criterios, pero los ms importantes

son aquellos que se basan en: a) Su consistencia b) Su utilizacin c) Su composicin d) Su origen SEGN SU ESTADO FSICO (CONSISTENCIA). 1) Medios lquidos: Son los que se presentan en este estado, denominndose por esta razn caldos. El medio lquido ms utilizado es el llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la obtencin de una suspensin bacteriana de una determinada concentracin. 2) Medios slidos: Se preparan a partir de los medios lquidos, agregndoles un agente gelificante. Los ms utilizados son la gelatina y el agar. Gelatina: Es una protena animal obtenida de los huesos. Tiene el inconveniente de que es hidrolizada por muchas bacterias, y adems su uso est muy limitado porque su punto de fusin es bajo (lica a temperatura ambiente) razn por la que no puede utilizarse para cultivos a 37C, que es la tempera ptima de crecimiento para muchos microorganismos. Agar-agar:Es un polmero de azcares obtenido de algas marinas. Se trata de una molcula insoluble enagua pero soluble en agua caliente; una solucin al 1,5% p/v forma un gel firme entre 32 y 39C y nose funde por debajo de 85C. Funde a 90C y solidifica una vez fundido alrededor de los 45C. Tiene el inconveniente de que introduce compuestos orgnicos indefinidos que pueden falsear los resultados de las necesidades nutritivas de un microorganismo. Aunque el agar es una mezcla de polisacridos, Araki, en 1937, los dividi en dos grupos:- agarosa, con poco sulfato, libre de cido pirvico, y- agaropectina, con mucho sulfato y gran cantidad de cenizas. La proporcin de agarosa a agaropectina en el agar vara segn el alga de origen. El agar puede utilizarse para diferentes fines, aunque los ms importantes son: agar comercial para la industria alimenticia, agar bacteriolgico, agares purificados y agarosa, utilizada para electroforesis en gel. Aproximadamente la mitad de todo el agar que se produce, se utiliza en trabajo microbiolgico, por lo que es importante la ausencia de metales txicos.

3) Medios semislidos: Se preparan a partir de los medios lquidos, agregando a stos un agente solidificante en una proporcin menor que para preparar medios slidos. Uno de sus usos es la investigacin de la movilidad de las bacterias

SEGN SU UTILIZACIN. 1) Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes mnimos para que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten requerimientos especiales. El medio ms conocido de este grupo es el agar nutritivo o agar comn, que resulta de la adicin de agar al caldo nutritivo. Otros representantes de este grupo son el agar tripticase de soja, el agar Columbia, etc. 2) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, adems de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por adicin de sangre u otros productos biolgicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis, etc.) que aportan dichos factores. En ocasiones es posible aadir suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo (p. ej. Polivitex, Isovitalex, etc)El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cistena para su crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada al medio de cultivo (agar chocolate). 3) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una poblacin polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una poblacin microbiana especfica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias. 4) Medios inhibidores: Cuando las sustancias aadidas a un medio selectivo impiden totalmente el crecimiento de una poblacin microbiana, se denomina inhibidor. Los medios inhibidores podran considerarse como una variante ms restrictiva de los medios selectivos. Los medios inhibidores se consiguen habitualmente por adicin de sustancias antimicrobianas o de cualquier otra que inhiba completamente el desarrollo de una poblacin determinada. Un medio inhibidor es el MacConkey que permite el crecimiento de los grmenes Gram negativos e impide el crecimiento de los Gram positivos. 5) Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia caractersticas bioqumicas que ayuden a diferenciar gneros o especies. La adicin de un azcar fermentable o un sustrato metabolizable se utilizan para este fin. El medio MacConkey es un medio diferencial porque permite distinguir los grmenes que fermentan la

lactosa de aquellos que no lo hacen. Tambin lo son el C.L.E.D. (lactosa +/lactosa -), el agar sangre (tipo de hemlisis), el SS (que es doblemente diferencial), etc. 6) Medios de identificacin: Son los destinados a comprobar alguna cualidad especfica que puede servirnos para reconocer la identidad de un microorganismo. Estos medios han de poseer los elementos necesarios para asegurar el crecimiento de los microorganismos, el sustrato especfico que vaya a ser metabolizado y el indicador que nos muestre el resultado. El agar Kligler, el medio de Simmons y en general, cualquier medio al que se le haya aadido un elemento diferencial de un microorganismo, son medios utilizados en identificacin. Actualmente estn apareciendo en el mercado una gran cantidad de medios especficos de identificacin para ciertos microorganismos, con lo cual se consigue simultneamente abaratar el costo y reducir el tiempo de identificacin. Son ejemplos de esto ltimo los medios CPS ID3 o Uriline ID(Biomerieux), utilizados para identificar los grmenes urinarios ms importantes a partir de la placa de cultivo gracias a la utilizacin de sustratos cromognicos especficos. 7) Medios de multiplicacin: Sirven para obtener una gran cantidad de clulas a partir de un microorganismo ya aislado. Seemplean en la obtencin de vacunas, en la investigacin y en la industria. Los medios ms adecuados para la multiplicacin suelen ser lquidos. El caldo-infusin cerebro-corazn (BHI), es un ejemplo tpico de estos medios. 8) Medios de conservacin: Se utilizan para conservar una cepa que, por diversas razones nos interese mantener. Fundamentalmente se utilizan como controles de calidad de las pruebas y reactivos utilizados en elLaboratorio de Microbiologa. En el laboratorio se pueden conservar las cepas de tres formas: a) haciendo pases peridicos de placa a placa, b) mediante liofilizacin de una suspensin bacteriana, y c) congelando las cepas en leche descremada estril al 0,1%. 9) Medios de transporte: Se usan para el transporte de muestras clnicas que no pueden sembrarse inmediatamente. Suutilizacin debe hacerse introduciendo la torunda con la que se obtuvo la muestra en el interior delmedio (generalmente en un tubo). Son ejemplos tpicos de este grupo los medios de Stuart-Amies,Cary-Blair, etc. ATENDIENDO A SU COMPOSICIN. Segn las sustancias que entren a formar parte en su composicin, los medios de cultivo pueden ser clasificados en:

1) Medios complejos: Fueron los primeros utilizados, y los ms empleados se preparan a partir de tejidos animales, y ms raramente de vegetales. Su composicin no es exactamente definida, y por consiguiente no es rigurosamente constante. Esto puede tener ciertos inconvenientes en condiciones experimentales, donde la reproductibilidad no podr ser exacta. En la prctica corriente estos medios dan excelentes resultados y son los ms empleados. 2) Medios sintticos: Son aquellos que contienen en su composicin exclusivamente sustancias qumicas conocidas y disueltas en agua destilada en proporciones determinadas, resultando un medio de composicin perfectamente definida. 3) Medios semisintticos: El gran nmero de factores de crecimiento exigidos para ciertos grmenes hace que la fabricacin de un medio sinttico para estos grmenes sea imposible o demasiado cara. En este caso se aportan los factores de crecimiento bajo la forma de un extracto orgnico complejo (extracto de levadura, extracto de tejidos, etc.).Ciertos grmenes no crecen en ningn medio por muy enriquecido que est ste, hacindolo exclusivamente en clulas vivas con unas caractersticas determinadas. Ejemplos de este tipo son, aparte de los virus, las Chlamydias, Rickettsias, etc.

Segn su origen:

a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composicin qumica no se conoce exactamente. b) SINTTICOS: son los medios que contienen una composicin qumica definida cuali y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles. c) SEMISINTTICOS son los sintticos a los que se les aaden factores de crecimiento bajo una forma de un extracto orgnico complejo, como por ejemplo extracto de levadura.

MICROBIOLOGIA. METABOLISMO BACTERIANO Ahora que conocemos la estructura de las clulas bacterianas, podemos estudiar las actividades que permiten la proliferacin de estos microorganismos. Hasta los procesos vitales de los organismos muy simples incluyen una gran cantidad de reacciones bioqumicas complejas. Aunque no la totalidad, la mayora de los procesos bioqumicos de las bacterias se observan en los eucariotas y en las clulas de los organismos pluricelulares, incluido el hombre. Sin embargo las reacciones especficas de las clulas bacterianas les permiten hacer cosas que el ser humano no puede hacer. Por ejemplo, algunas bacterias pueden vivir de la celulosa y otras del petrleo, los procesos metablicos bacterianos permiten que las bacterias reciclen elementos previamente utilizados por otros organismos. Las bacterias quimioauttrofas pueden vivir de sustancias inorgnicas como el dixido de carbono, el hierro, el azufre, el hidrgeno o el amonaco. Definimos al metabolismo microbiano como el conjunto de procesos por los cuales un microorganismo obtiene la energa y los nutrientes (carbono, por ejemplo) que necesita para vivir y reproducirse. Los microorganismos utilizan numerosos tipos de estrategias metablicas distintas y las especies pueden a menudo distinguirse en base a estas estrategias. Las caractersticas metablicas especficas de un microorganismo constituyen el principal criterio para determinar su papel ecolgico, su responsabilidad en los ciclos biogeoqumicos y su utilidad en los procesos industriales. A travs del metabolismo, se transforman en el interior de la clula, distintas sustancias nutritivas que el organismo obtiene del medio. Estas transformaciones se llevan a cabo por distintas reacciones enzimticas. Las principales funciones del metabolismo son:

formar las subunidades que luego sern utilizadas en la sntesis de macromolculas Proporcionar la energa necesaria para todos aquellos procesos que la requieran como transporte activo, movilidad, biosntesis, etc. El metabolismo de las bacterias tiene muchos procesos en comn con el metabolismo de las clulas eucariotas, pero algunos procesos son exclusivos del metabolismo bacteriano Algunas particularidades del metabolimo bacteriano son:

el metabolismo de la bacteria est adaptado para el crecimiento veloz y transcurre entre 10 y 100 veces ms rpido que en las clulas humanas la bacteria tiene mayor versatilidad en cuanto al tipo de nutrientes que puede utilizar para obtener energa la bacteria tiene una mayor versatilidad en la utilizacin de oxidantes y no estn limitadas al slo uso del O2

existe una grandiversidad de requerimientos nutricionales entre las bacterias debido a que ellas no poseen todos los caminos biosintticos el cuerpo de los procariotas es muy sencillo, lo que le permite sintetizar macromolculas por mecanismos menos engorrosos que los que utilizan las clulas eucariotas algunos procesos biosintticos son nicos de las bacterias, como los que conducen a la sntesis de murena, cidos teicoicos y lipopolisacrido El metabolismo de las bnacterias es bastante complejo. Mediante unas dos mil reacciones metablicas diferentes la bacteria puede sintetizarse a s misma y puede generar energa para procesos como transporte activo, motilidad y otros procesos. Tipos de metabolismo Los distintos tipos de metabolismo microbiano se pueden clasificar segn tres criterios distintos: 1.segn la forma en la que el organismo obtiene el carbono para la construccin de la masa celular:

Auttrofo. El carbono se obtiene del dixido de carbono (CO2). Hetertrofo. El carbono se obtiene de compuestos orgnicos (glucosa, por ejemplo). 2. segn la forma en la que el organismo obtiene los equivalentes reductores para la conservacin de la energa o en las reacciones biosintticas: Litotrofo. Los equivalentes reductores se obtienen de compuestos inorgnicos. Organotrofo. Los equivalentes reductores se obtienen de compuestos orgnicos. 3. segn la forma en la que el organismo obtiene la energa para vivir y crecer: Quimiotrofo. La energa se obtiene de compuestos qumicos externos. Fototrofo. La energa se obtiene de la luz. Por lo tanto existen distintos tipos de organismos segn como aprovechan el carbono y el tipo de energa que utilizan: Los quimiolitoauttrofos obtienen energa de la oxidacin de compuestos inorgnicos y el carbono de la fijacin del dixido de carbono. Ejemplos: bacterias nitrificantes, bacterias oxidantes del azufre, bacterias oxidantes del hierro, bacterias oxidantes del hidrgeno. Los fotolitoauttrofos obtienen energa de la luz y el carbono de la fijacin del dixido de carbono, usando compuestos inorgnicos como equivalentes reductores. Ejemplos: Cyanobacteria Los quimiolitohetertrofos obtienen energa de la oxidacin de compuestos inorgnicos, pero no pueden fijar el dixido de carbono. Ejemplos: algunas bacterias oxidantes del hidrgeno. Los quimioorganohetertrofos obtienen energa, carbono y equivalentes reductores para las reacciones biosintticas de compuestos orgnicos. Ejemplos: la mayora de las bacterias, como Escherichia coli, Bacillus spp.,

Los fotoorganotrofos obtienen energa de la luz y el carbono y los equivalentes reductores para las reacciones biosintticas de compuestos orgnicos. La mayora de las bacterias patgenas son parsitos hetertrofos de seres humanos o de otras especies eucariontes. Los microorganismos hetertrofos son extremadamente abundantes en naturaleza y responsables de la degradacin de los polmeros orgnicos tales como celulosa, quitina o lignina que son generalmente indigeribles para los animales ms grandes. Esta degradacin, generalmente, requiere la colaboracin de varios organismos distintos, cada uno de los cuales realiza uno de los pasos de la degradacin hasta obtener dixido de carbono Bioqumicamente, el metabolismo hetertrofo procariota es mucho ms verstil que el de los organismos eucariotas, aunque muchos procariotas comparten los modelos metablicos ms bsicos con los eucariotas, por ejemplo, usando la glicolisis para el metabolismo del azcar y elciclo del cido ctrico o Ciclo de Krebs en la degradaccin del acetato, produciendo energa bajo la forma de ATP y reduciendo energa bajo la forma de NADH . Estas rutas metablicas bsicas estn muy extendidas porque tambin estn implicadas en la biosntesis de muchos componentes necesarios para el crecimiento de la clula (a veces en la direccin contraria). Sin embargo, muchas bacterias utilizan rutas metablicas alternativas Catabolismo y Anabolismo Dado que las reacciones qumicas que ocurren en la clula liberan o consumen energa, el metabolismo se puede dividir en dos clases de reacciones: catablicas y anablicas Catabolismo: consiste en la degradacin enzimtica de macromolculas como lpidos, hidratos de carbono y protenas que el organismo obtiene del entorno en el que vive o de sus propias sustancias de reserva. Esta degradacin se acompaa de la liberacin de una gran cantidad de energa, ya que a partir de estas macromollculas de gran complejidad estructural y alto contenido energtico se obtienen molculas sencillas estructuralmente y de bajo contenido energtico. La energa que se libera durante el catabolismo es captada por la clula en forma de ATP que tiene enlaces fosfatos ricos en energa. Anabolismo: es el proceso inverso, es la sntiesis enzimtica de macromolculas a partir de compuestos sencillos, con consumo de energa. Es decir que a partir de molculas sencillas de escasa complejidad estructural y bajo contenido energtico se sintetizan macromolculas complejas, ricas en energa. Las reacciones catablicas aportan las materias primas y la energa necesaria para las reacciones anablicas. Este acoplamiento de reacciones que liberan energa y otras que requieren energa es posible gracias al ATP (adenosintrifosfato). Las molculas de ATP almacenan la energa proveniente de las reacciones catablicas y la liberan en una fase ulterior para impulsar las reacciones anablicas y el cumplimiento de otras

tareas celulares. Mucha de la energa producida en el catabolismo se disipa en forma de calor. Ambos procesos, anablicos y catablicos, se dan en la clula en forma simultnea e interdenpendiente. Los intermediarios qumicos de ambos procesos reciben el nombre de metabolitos. Veremos algunas vas metablicas comunes a procariotas y eucariotas: En el catabolismo se distinguen tres fases, en la primera, las macromolculas se degradan hasta sus unidades constitutivas, en la segunda fase, estas son transformadas por una serie de reacciones enzimticas en Acetil Coenzima A (Acetil CoA), y en la tercera fase, la Acetil CoA ingresa al Ciclo de Krebs, donde se libera CO2 y H2O. este proceso catablico va acoplado a un proceso de liberacin de energa. Respiracin celular Es un proceso generador de ATP en el cual las molculas experimentan oxidacin y el aceptor final de electrones es, casi siempre, una molcula inorgnica. Un rasgo esencial de la respiracin es la presencia de una cadena transportadora de electrones. Existen dos tipos de respiracin que dependen de si el organismo es aerobio, es decir que utiliza O2, o si es anaerobio, es decir que no necesita O2, e incluso el O2 puede destruirlo. En la respiracin aerobia el aceptor final de electrones es el O2, en la respiracin anaerobia el aceptor de electrones es una molcula inorgnica distinta al O2, y muy raramente una molcula orgnica. La respiracin consiste en una primera fase donde se obtiene Acetil CoA por oxidacin de piruvato, que proviene de la degradacin de la glucosa por la va glicoltica, o por la oxidacin de cidos grasos o aminocidos. En la segunda fase la acetil CoA se degrada en el Ciclo de Krebs con produccin de CO2, H2O y H+. En la tercera fase se produce un transporte electrnico hasta el O2, este proceso llamado cadena de transporte electrnico o cadena respiratoria va acoplado a un proceso de produccin de ATP llamado fosforilacin oxidativa. En las clulas procariotas, la respiracin aerobia puede generar hasta 38 molculas de ATP a partir de cada molcula de glucosa. En la respiracin anaerobia el aceptor final de electrones es otra sustancia inorgnica distinta del O2. Algunas bacterias como Pseudomonas y Bacillus, pueden utilizar el in nitrato, otras bacterias pueden usar el ion carbonato o el sulfato. La respiracin anaerobia de las bacterias que utilizan nitrato y sulfato como aceptores finales es un proceso esencial en los ciclos naturales del nitrgeno y del azufre. La cantidad de ATP generada durante la respiracin anaerobia, vara de un organismo a otro pero siempre es menor que la cantidad producida por respiracin aerobia. En consecuencia los microorganismos anaerobios se desarrollan mas lentamente que los aerobios.