UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLN C-1

DEPARTAMENTO DE INGENIERA Y TECNOLOGA SECCIN DE TECNOLOGA FARMACUTICA

Laboratorio de Diseo y Estabilidad de Medicamentos Prctica No.9 Estabilidad de la Vitamina C

Equipo 1: Colin H., Conde G., Correa E.,Nava D.,Santillan E. Grupo 2951 Semestre: 2013-II

RESUMEN
En los estudios de estabilidad, un factor que contribuye muy significativamente a errores en las mediciones es la falta de especificidad del mtodo. Este problema se presenta en estudios de biodisponibilidad cuando los metabolitos del frmaco tienen respuestas similares a las del principio activo en el ensayo y en los estudios de estabilidad cuando los productos de degradacin responden en forma similar cuando los productos de degradacin responden en forma similar al principio activo en el ensayo. La estabilidad se define como la propiedad de un medicamento contenido en un envase de determinado material para mantener durante el tiempo de almacenamiento y uso las caractersticas fsicas, qumicas, fisicoqumicas, microbiolgicas y biolgicas entre los lmites especificados. El cido ascrbico es una lactona no saturada y en solucin acuosa sufre degradaciones, tanto en condiciones de aerobiosis como de anaerobiosis, dando distintos productos. En aerobiosis fcilmente se autoxida reversiblemente a cido dehidroascrbico. En el presente trabajo se efectu un estudio de estabilidad acelerada diseado para incrementar la velocidad de degradacin de la vitamina C, sometiendo una solucin acuosa de vitamina C a condiciones de temperaturas elevadas; presentando una cintica de primer orden.

OBJETIVOS
Efectuar el estudio de estabilidad de una solucin de Vitamina C (cido ascrbico). Efectuar el efecto de la temperatura sobre la estabilidad de la vitamina C en solucin acuosa. Estimar el t y el t 90 a 25C Determinar cules son las mejores condiciones de almacenamiento para la solucin de Vitamina C.

CONTROL DE CAMBIOS
Se sigui el procedimiento indicado en el Manual de prcticas del Laboratorio de Diseo y Estabilidad de Medicamentos, UNAM, pp.41-43

RESULTADOS GRUPALES
Tabla 1- Resultados Experimentales para la Curva de calibracin para cido ascrbico Sistema Alicuota de Solucin stock (mL) Absorbancia Concentracin (mg/mL) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0.5 1 2 3 4 5 6 7 8 0.059 0.131 0.280 0.420 0.568 0.711 0.851 0.972 1.120 0.001 0.002 0.004 0.006 0.008 0.010 0.012 0.014 0.016

CURVA DE CALIBRACION
1.200 1.000 ABSORBANCIA 0.800 0.600 0.400 0.200 0.000 0.000 y = 70.662x - 0.0051 R = 0.9996

0.002

0.004

0.006

0.008

0.010

0.012

0.014

0.016

0.018

CONCENTRACION (mg/mL)

Tabla 2.- Datos de Absorbancia Experimentales de la Cintica de Degradacin del cido Ascrbico a diferentes valores de Temperatura.

CINETICA
t (min) 2.3 5 7.3 10 12.3 15 17.3 20 22.3 25 27.3 30 32.3 35 37.3 40 42.3 Tem Ambiente Abs 1.080 0.999 0.809 0.771 0.672 0.572 0.478 0.428 0.317 0.258 0.211 0.182 0.135 0.132 0.097 0.073 0.069 t (min) 5 7.3 10 15 20 22.3 25 27.3 30 30 C Abs 0.820 0.653 0.465 0.249 0.114 0.066 0.042 0.018 0.028 t (min) 4.36 5.36 6.36 7.36 8.36 9.36 10.36 11.36 12.36 13.36 14.36 15.36 35 C Abs 0.838 0.751 0.641 0.571 0.496 0.445 0.389 0.326 0.280 0.235 0.183 0.125 t (min) 5 7.3 10 12.3 15 17.3 20 40 C Abs 0.731 0.448 0.251 0.139 0.058 0.024 0.018 t (min) 5 7.3 10 12.3 15 17.3 45 C Abs 0.563 0.235 0.087 0.015 0.010 0.011 t (min) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 50 C Abs 0.927 0.783 0.622 0.512 0.414 0.304 0.293 0.176 0.126 0.088 0.069 0.038 0.023

Con los resultados anteriores interpolamos en nuestra curva de calibracin para obtener los mg correspondientes al cido ascrbico que tenemos en cada uno de los tiempos de muestreo y para cada una de las temperaturas, para poder determinar de qu orden es la cintica de nuestro analito.

Tabla 3.- Datos de la Cintica de Degradacin del cido Ascrbico a diferentes valores de Temperatura. Interpolacin de absorbancias en curva de calibracin

CINETICA
Tem Ambiente 30 C 35 C 40 C 45 C 50 C t Conc t Conc t Conc t Conc t Conc t Conc (min) (mg/mL) (min) (mg/mL) (min) (mg/mL) (min) (mg/mL) (min) (mg/mL) (min) (mg/mL) 5 2.3 0.0154 0.0117 4.36 0.0119 5 0.0104 5 0.0080 1 0.0132 7.3 0.0093 5.36 0.0107 5 0.0142 7.3 0.0064 7.3 0.0034 2 0.0112 10 7.3 0.0115 0.0067 6.36 0.0091 10 0.0036 10 0.0013 3 0.0089 15 10 0.0110 0.0036 7.36 0.0082 12.3 0.0020 12.3 0.0003 4 0.0073 20 12.3 0.0096 0.0017 8.36 0.0071 15 0.0009 15 0.0002 5 0.0059 22.3 0.0010 9.36 0.0064 17.3 0.0004 17.3 0.0002 15 0.0082 6 0.0044 25 17.3 0.0068 0.0007 10.36 0.0056 20 0.0003 7 0.0042 27.3 0.0003 11.36 0.0047 20 0.0061 8 0.0026 30 22.3 0.0046 0.0005 12.36 0.0040 9 0.0019 25 0.0037 13.36 0.0034 10 0.0013 27.3 0.0031 14.36 0.0027 11 0.0010 30 0.0026 15.36 0.0018 12 0.0006 32.3 0.0020 13 0.0004 35 0.0019 37.3 0.0014 40 0.0011 42.3 0.0010

Con los datos de la tabla 3 se realizan los clculos para conocer el orden de reaccin de la cintica del cido ascrbico

Cinetica de orden cero

0.0180 0.0160 0.0140 0.0120 0.0100 mg/mL 0.0080 0.0060 0.0040 0.0020 0.0000 -0.0020 -0.0040 0 5 10 15 20 25 30 35

y = -0.0004x + 0.0143 R = 0.9341 y = -0.0004x + 0.012 R = 0.901 y = -0.0009x + 0.015 R = 0.9844 y = -0.0006x + 0.0114 R = 0.8475 y = -0.0006x + 0.0086 R = 0.7364 y = -0.001x + 0.0121 R = 0.9224

tem ambiente 30C

35C

40C

45C

40

45

50C

TIEMPO (minutos)

0.0000 0 -1.0000 -2.0000 -3.0000 -4.0000 10 20 30 40 50

y = -0.0715x - 3.8348 R = 0.99 y = -0.1455x - 3.6079 R = 0.9662 y = -0.1574x - 3.6525 R = 0.9705 y = -0.2508x - 3.2302 R = 0.9899 y = -0.3269x - 3.406 R = 0.9302 y = -0.2875x - 3.7957 R = 0.9765

tem ambiente 30C

35C

LN mg/mL

40C

-5.0000 -6.0000

45C

50C

-7.0000 -8.0000 -9.0000 -10.0000

CINETICA ORDEN UNO

TIEMPO (minutos)

6000.00

CINETICA ORDEN DOS

y = 21.675x - 150.39 R = 0.8393 y = 100.67x - 814.23 R = 0.6897 y = 34.43x - 125.49 R = 0.8091 y = 217.82x - 1564.8 R = 0.8414 y = 472.95x - 2853.1 R = 0.9056 y = 157.97x - 498.4 R = 0.7063

tem ambiente 30C 35C 40C 45C 50C

5000.00

4000.00

1/(mg/mL)

3000.00

2000.00

1000.00

0.00 0 -1000.00 TIEMPO (MINUTOS) 10 20 30 40 50

El orden de la reaccin de degradacin de la vitamina C segn la literatura es de orden 1 (Connors, 1980) y como se puede apreciar en las grficas anteriores se confirma este dato, ya que en el orden uno se observan r2 ms cercanas a la unidad por lo tanto se logra confirmar el dato bibliogrfico. Por lo tanto las constantes de degradacin obtenidas para cada temperatura son:

K velocidad (min-1)

Temperatura (C)

0.0715 0.1455 0.1574 0.2508 0.3269 0.2875

25 30 35 40 45 50

Tabla 4.- Resultados Experimentales obtenidos para las constantes de velocidad de degradacin (K) de la Vitamina C para cada temperatura analizada para obtener el grafico de Arrhenius.

T (K) 293.15 303.15 308.15 313.15 318.15 323.15

1/T 0.003411 0.003299 0.003245 0.003193 0.003143 0.003094

K 0.0715 0.1455 0.1574 0.2508 0.3269 0.2875

Lnk -2.6381 -1.9276 -1.8490 -1.3831 -1.1181 -1.2465

GRAFICO DE ARRHENIUS
0.0031 0.0031 0.0032 0.0032 0.0033 0.0033 0.0034 0.0034

LN K (min -1)

y = -5463.4x + 15.907 R = 0.8801

1/T ( C-1)
Considerando que de la ecuacin linealizada de Arrehnius:

Entonces dado que m= -5463.4 R=1.987 Cal/molK ( )

Determinacin del t1/2 y t90 con base a las constantes de degradacin del cido ascrbico Se interpolan los 25C en el grfico de Arrhenius para obtener la constante correspondiente y as poder aplicar las frmulas de t y t90 K= 0.0790 min-1
t 1/2 = Ln 2 / K t 1/2 = 0.693/0.0790 min t 1/2 = 8.0886

T 90= 0.104/0.0790 min-1 T90= 1.3165

ANALISIS DE RESULTADOS. La vitamina C es una lactona de seis carbonos, hidrosoluble, esta no es sintetizada por el humano pero ha sido reconocido como un compuesto esencial en el organismo vivo. Esta toma parte en muchos de los procesos metablicos actuando como un cofactor para enzimas contribuye en la qumica de cerebro y al sistema inmune y esta indirectamente relacionado con la sntesis de colgeno (Sienkiewicz, Szymula, & Narkiewicz, 2012). Es por ello que radica la importancia de elaborar productos que la contengan para hacerla llegar al organismo y que este desempee sus funciones de forma adecuada, pero dada su rpida degradacin se requiere de evaluar su estabilidad. La vitamina C tiene una alto actividad reductora debido a dos reacciones oxidativas. 1) Se sabe que la vitamina C en presencia de agua y electrolitos se oxida en un proceso que involucra dos electrones y la liberacin de dos protones de acuerdo con la reaccin reversible formando el cido Ldehidroascrbico (DHAA) a travs del intermediario obtenido va radicales libres el cido monodehidroascrbico (MDAH-) (Sienkiewicz, Szymula, & Narkiewicz, 2012; Drach, Narkiewicz, Sienkiewicz, Szymula, & Bravo, 2011). 2) Una vez alcanzado el equilibrio de la primera reaccin el DHAA es hidrolizado de forma irreversible a cido 2,3-diquetoglucnico (DKGA) (Serpen & Gkmen, 2007).

Figura 1. Oxidacin de la vitamina C (cido L-ascrbico) a DHAA (cido dehidroascrbico) e hidrolisis de DHAA a DKGA

De los factores que pueden afectar la cintica de degradacin de la vitamina C es la presencia de protones ya que como se muestra en la

Figura 1 la reaccin implica la presencia de dos protones lo que hace a esta una reaccin pH dependiente, otro factor es la presencia de metales, presencia de algn otro solvente diferente al agua, la concentracin de los reactivos y la temperatura que fue el factor de Variable independiente en este estudio. Los datos experimentales se analizaron con las ecuaciones de velocidad de diferentes rdenes, y una ecuacin de primer orden se ha encontrado para proporcionar el mejor ajuste para describir la prdida de vitamina C en condiciones de almacenamiento diferentes. Como deterioro de la vitamina C puede seguir caminos diferentes al mismo tiempo, la vitamina C medida el cambio aqu es el resultado combinado de diferentes reacciones, no una reaccin elemental en s. Por lo tanto, estrictamente hablando, el orden de reaccin debe ser mejor llamado pseudo primer orden. Para la ecuacin de velocidad de primer orden, la retencin de cido ascrbico puede ser escrito como:

(1)

o,

Donde el cido ascrbico se convierte en cido dehidroascrbico. Los resultados muestran que el cido ascrbico va decreciendo al ir aumentando temperatura. La degradacin trmica del cido ascrbico es usualmente descrita en la literatura como un modelo de primer orden (Hiwilepo-van Hal, 2011). La ecuacin de Arrehnius muestra la que la dependencia de la concentracin de velocidad con la temperatura sigue una modelo exponencial:

Como se observa en la grfica 5 de la ecuacin de Arrhenius, se observa que no presenta una tendencia lineal esto puede deberse a: la posibilidad de que haya una reaccin en cadena ya estas se presentan principalmente en reacciones fotoqumicas y de oxidacin las cuales preceden en su mayora por radicales libres en donde cada paso del mecanismo de degradacin de un frmaco (cido ascrbico) posee constantes de velocidad especficas las cuales difieren unas de otras lo cual produce una prdida de linealidad al graficar el Ln k. Dado a que no se cumple con la linealidad en la ecuacin de Arrhenius es imposible realizar una prediccin pues la constante extrapolada a la temperatura ideal de almacenamiento estar alejada de la realidad as que el clculo diferir en la vida del medicamento. Conclusiones

El cido ascrbico, es muy inestable, ya que pierde con facilidad tomos de hidrgeno, se transforma en cido deshidroascrbico, ms an si se encuentra en medio acuoso y peor an si se expone a condiciones de luz,

calor, tiempo, por decir algunas condiciones por lo que se recomienda realizar estudios de estabilidad de la vitamina C para determinar cules deben de ser sus condiciones de anaquel. Como se pudo constatar a bajas temperaturas el tiempo de vida del cido ascrbico mejora es decir es ms duradero, por lo cual a temperaturas por debajo de 25C el tiempo de vida media y el t 90 ser mucho mayor a que si se descuidan las condiciones de almacenamiento adems de que tambin debe estar protegido de la luz.

La energa de activacin para la reaccin que implica el cido ascrbico se calcul utilizando la ecuacin de Arrhenius. La energa de activacin para la reaccin de degradacin del cido ascrbico con respecto a la temperatura fue de 10.85 Kcal/mol, este valor indica que el cido ascrbico es ms sensible a los cambios de temperatura, razn por la cual el tiempo de vida media es menor. Durante el almacenamiento, los parmetros ms controlables son la temperatura y la humedad relativa o actividad de agua y la intensidad y el tiempo de exposicin a la luz.

Bibliografa
Hiwilepo-van Hal, P. B. (2011). Kinetics of thermal degradation of vitamin C in marula fruit (Sclerocarya birrea subsp. caffra) as compared to other selected tropical fruits. LWT-Food Sciencie and Technology, 1-4. Matei, S., Birghila, S., Popescu, V., Soceanu, A., Oprea, C., & Magearu, V. (2006). KINETIC STUDY OF VITAMIN C DEGRADATION FROM PHARMACEUTICAL PRODUCTS. Rom. Journ. Phys, 53(1-2), 343-351. Serpen, A., & Gkmen, V. (2007). Reversible degradation kinetics of ascorbic acid under reducing, and oxidizing conditions. Food Chemistry, 104, 721-725. Sienkiewicz, A., Szymula, M., & Narkiewicz, J. (2012). Studies of ascorbic acid electroactivity in the H2O/ACN(EtOH) solutions containing SDS. Colloids and Surfaces A: Physicochem. Eng. Aspects xxx (2012) xxx xxx, 1-6.