1. Qu mtodo utilizara para reconocer un cultivo para reconocer un cultivo puro, joven, injuriado y envejecido.

CULTIVOS PUROS: MEDIOS DE OBTENCIN Los microorganismos en estado natural crecen de forma heterognea o mixta. Cuando queremos estudiar un microorganismo dado, debemos aislarlo. Un cultivo puro es aquel que contiene un solo tipo de microorganismo. El modo de obtener estos cultivos consiste en obtener colonias aisladas, que provienen de una sola clula (son clones). Hay diferentes mtodos para obtenerlas: MTODO DE SIEMBRA POR AGOTAMIENTO O EN ESTRA Necesitamos: Placa petri con medio de cultivo Muestra (slida o lquida) Asa de siembra de platino Con el asa estril tomamos la muestra y hacemos extensiones en la placa. Volvemos a esterilizar el asa de siembra y extendemos parte de la extensin anterior en otra direccin. Volvemos a esterilizar el asa de siembra y volvemos a extender parte de la segunda extensin en otra direccin. Esterilizamos y repetimos la operacin. Incubamos a 37 durante 24 horas y, en la primera zona, habr un amasijo de clulas. En la segunda, parte de la primera zona estar mejor extendida, y en la tercera y en la 4 mejor an. Si tomamos una colonia y la ponemos sobre una placa petri, tendremos un cultivo puro. MTODO DE LAS DILUCIONES SUCESIVAS Consiste en diluir una muestra hasta conseguir muy pocas clulas que, tras inocularse en un medio de cultivo, generen colonias aisladas. Metodologa: Ahora tomamos 0.1 ml de cada tubo y lo depositamos en una placa petri con medio de cultivo. Con un asa de vidrio se extiende esa cantidad sobre la placa, e incubams a 37 C durante 24 horas. En la primera dilucin habr un amasijo de colonias. En la siguiente habr diez veces menos nmero de colonias, y as sucesivamente hasta conseguir colonias aisladas. Este mtodo nos permite calcular el nmero de microorganismos viables que existen en la muestra que estamos analizando: N=C 1/D 1/i donde: N es el nmero de microorganismos presentes en la muestra C es el nmero de colonias contadas UFC (unidades formadoras de colonias) D es la dilucin I es el inculo

Debe haber entre 30 y 300 colonias. Si hay menos, no es significativo (puede tratarse de una contaminacin) y, si hay ms, no estn aisladas. TCNICA DEL CULTIVO POR ENRIQUECIMIENTO Consiste en ajustar las condiciones de cultivo para seleccionar el microorganismo que nos interesa aislar. Ejemplo: Nos interesa aislar bacterias fotoauttrofas. Tomamos un matraz con agua y sales y lo incubamos a la luz, de manera que crezcan las bacterias fotoauttrofas. Ejemplo 2: Queremos aislar bacterias quimiolittrofas del azufre; ponemos azufre, CO2 como fuente de carbono (disuelto en agua) e incubamos en la oscuridad para eliminar fotoauttrofos. Para incubar enterobactrias como enterobacter hay que incubar a 37, mientras que para incubar otra enterobacteria, E. Coli, hay que incubar a 45. Una de las caractersticas principales de las bacterias es su apariencia seguida del crecimiento en diferentes medios de cultivo. Estas caractersticas generales como el color, abundancia de crecimiento y aun el olor del cultivo nos pueden servir de guas para la identificacin. Para determinar las caractersticas de desarrollo de un cultivo puro es costumbre observar lo siguiente: Tipo de colonias en agar. Desarrollo en agar inclinado. Desarrollo en caldo. Desarrollo en gelatina por picadura. Despus de la siembra del medio de cultivo y despus de la incubacin se pueden determinar las caractersticas de cultivo del microorganismo. Los aspectos ms peculiares de desarrollo son: COLONIAS EN PLACAS CON AGAR:

Tamao: los tamaos de las colonias son desde fracciones de milmetro de dimetro hasta 5 o 10mm de dimetro. Margen o borde: pueden formar un crculo perfecto o mostrar gran variedad de irregularidades como salientes redondos, hendiduras irregulares, proyecciones filiformes, o proyecciones en forma de raz. Elevacin: pueden ser muy finas (aplanadas) o gruesas (elevadas). Cromognesis o pigmentacin: las colonias pueden estar coloreadas o sin color. Caractersticas pticas: hay opacas, trasnparentes u opalescentes. DESARROLLO EN AGAR (INCLINADO) POR ESTRAS: Cantidad: escaso, moderado o abundante. Margen o borde de desarrollo: uniforme o presentando varias irregularidades. Consistencia de la masa desarrollada: mantecosa o de mantequilla, fcilmente removibles con una aguja de siembras. Cromognesis o pigmentacin: colonias pueden estar coloreadas o sin color. DESARROLLO EN CALDO NUTRITIVO: Cantidad de desarrollo: escaso, moderado o abundante. Distribucin del desarrollo en el caldo: uniformemente distribuido (turbidez), desarrollo confinado (nata o pelusa) o desarrollo que se acumula como sedimento. Olor: ptrido, a frutas o aromtico, o imperceptible. DESARROLLO EN GELATINA POR PICADURA:

Desarrollo (sin licuefaccin) a lo largo de la lnea de inoculacin. El desarrollo puede estar limitado a la zona de la picadura o puede haberse expandido. Licuefaccin de la gelatina: se puede presentar desde arriba suavemente o adquirir aspectos varidos de embudos al licuar la gelatina. Para detectar Coliformes injuriados (CI) en el agua considerada apta para el consumo humano segn la normatividad peruana,se tomaron y procesaron 100 muestras de agua de edicios del distrito de Lima-Cercado. Se determin el cloro libre residual(CLR) mediante la tcnica DPD y el pH usando varillas indicadoras Merck. Para el recuento de bacterias heterotrcas (BH)se emple la tcnica de spread plate; para cuanticar Coliformes totales (CT) y Coliformes fecales (CF) se emple la tcnicade tubos mltiples y deltracin por membrana. Para recuperar y enumerar CT y CF injuriados se utiliz el medio m-T7. Parala especi cacin bacteriana las pruebas estndar y el sistema API 20E. Para la deteccin de CI se utilizaron las muestras queresultaron negativas para CT y CF y/o tenan un recuento de BH igual o inferior a 500 UFC/mL. Empleando los mtodos con-vencionales se demostr que el 15% de las muestras de agua eran inaptas para el consumo humano. De las 85 consideradasaptas, el 29.41% (25) contena CI. En las muestras inaptas empleando los mtodos convencionales, el 60% (9) tena entre 0,1y 0,5 ppm de CLR y en las muestras consideradas inaptas por tener CI, el 88% (22) tena entre 0,1 y 1,0 ppm. No se demostrrelacin entre el pH y las muestras inaptas. Entre los CI se identi caron: Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, E. cloacae,Enterobacter sp, Citrobacter freundii, Citrobacter spp y Klebsiella sp. El agua para consumo humano considerada apta por lanormatividad peruana puede estar contaminada con microorganismos intestinales y constituir un riesgo para la salud; el CLRentre 0,1 y 1,0 ppm no garantiza la eliminacin de las bacterias intestinales 2. Por qu algunos microorganismos de importancia industrial desarrollan en caldo una caracterstica de forma de pelcula. 3. Cmo se visualiza el polisacrido extracelular y a qu bacteria puede corresponder?

4. Qu es la prueba de catalasa, cmo se realiza y qu utilidad tiene?

La catalasa es una enzima que poseen la mayora de las bacterias aerobias. Descompone el perxido de hidrgeno en agua y oxgeno. El desprendimiento de burbujas procedentes del oxgeno indica que la prueba es positiva.

Materiales y reactivos

Para el correcto desarrollo de la prctica sern necesarios los siguientes materiales: Portaobjetos. H2O2 de 10 volmenes Cultivos en fase exponencial de bacterias. Asas e hilos de siembra. Pipetas Pasteur. Mtodo

1. Colocar una gota de agua oxigenada sobre un portaobjetos con ayuda de una pipeta Pasteur. 2. Suspender la bacteria. 3. Detectar la formacin de burbujas. Se utiliza para comprobar la presencia del enzima catalasa que se encuentra el la mayora de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen citocromo. La principal excepcin es Streptococcus. Originariamente, esta prueba era utilizada para diferenciar entre los siguientes gneros: Streptococcus (-) de Micrococcus (+) y/o Staphylococcus (+). Bacillus (+) de Clostridium (-). Lysteria monocytogenes (+) y/o Corynebacterium (+, con las excepciones de C.pyogenes y C.haemolyticum, ambos -) de Erysipelothrix (-) Una prueba de rutina de la catalasa a temperatura ambiente puede hacerse siguiendo dos tcnicas: Mtodo del portaobjetos (recomendado): Con el asa de siembra recoger el centro de una colonia pura de 18-24 horas y colocar sobre un portaobjetos limpio de vidrio. Agregar con gotero o pipeta Pasteur una gota de H2O2 al 30% sobre el microorganismo sin mezclarlo con el cultivo. Observar la formacin inmediata de burbujas (resultado positivo). Desechar el portaobjetos en un recipiente con desinfectante. Si se invierte el orden del mtodo (extender la colonia sobre el agua oxigenada) pueden producirse falsos positivos. Mtodo del tubo de ensayo: Agregar 1ml de H2O2 al 3% directamente a un cultivo puro de agar en slant densamente inoculado. Observar la formacin inmediata de burbujas (resultado positivo). Precauciones: Si se utilizan para esta prueba cultivos procedentes de agar sangre, se debe tener la precaucin de no retirar algo de agar con el asa al retirar la colonia ya que los eritrocitos del medio contienen catalasa y su presencia dar un falso resultado positivo. 5. Cmo se interpretan los resultados de una prueba de fermentacin de hidratos de carbono?

Capitulo 9
1. Por qu se calibra el espectrofotmetro a 100% de transmitancia con medio de cultivo estril? Porque con este medio sin inoculo la muestra no presenta turbidez y es transparente lo que determina un estado inicial donde la luz emitida no es absorbida por la muestra, sino nicamente por el medio Cuando el medio no contiene aun al microorganismo se considera un estado cero, por tanto al calibrar el espectrofotometrocon el medio nicamente, los valores de absorbancia registrados solo considerar a los microorganismos 2. Por qu motivo puede ser de alguna forma til conocer la curva de multiplicacin de una bacteria? Para conocer los tiempos en que duran cada una de las etapas del crecimiento de un microorganismo, reconocer los periodos de Acostumbramiento, de crecimiento, estacionario y el periodo de muerte; para nuestro caso solo se puede identificar las fases de acostumbramiento y de crecimiento Estos datos se pueden utilizar en el control de un anlisis de este mismo microorganismo, ya sea de control de crecimiento para aprovechar su velocidad de multiplicacin, o tambin para conocer la velocidad de infeccin que puede producir 3. Identificar en la grafica las fases del desarrollo microbiano.