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1 pH

3.1 Procedimento

A determinao potenciomtrica do pH feita pela medidada diferena de potencial entre dois eletrodos adequados, imersos na soluo em exame. Um destes eletrodos sensvel aos ons hidrognio e o outro o eletrodo de referncia, de potencial constante.

Primeramente,

A operao

dimetro

deve ser

Verificada em seu manual e/ou Pop, contudo o princpio bsico inclui: Manter o eletrodo em KCl quando no estiver em uso. Lavar o eletrodo com gua destilada e enxugar com papel apropriado. Calibrar o equipamento com duas solues tampo padro de pH conhecido e adequado. Verificar a sensibilidade. Repetir o passo 2. Determinar o pH da soluo problema. Repetir o passo 2 e guardar o eletrodo (mergulhado em KCl).

3.2 Solues-tampo para calibrao do medidor de pH

Tais solues devem ser recm-preparadas com gua isenta de dixido de carbono e empregadas em prazo de trs meses, tomando-se cautela para evitar o crescimento de fungos e bactrias. Se aceita o emprego de conservantes desde que no interfira na medio potenciomtrica do pH.

A gua utilizada no preparo das solues deve ser recentemente destilada, aquecida ebulio por, no mnimo, 15 minutos, resfriada e mantida em recipiente impermevel a dixido de carbono. Preparar, individualmente, as seis solues-padro e armazen-las em frascos de vidro ou de polietileno

adequados. Observar o prazo de validade das solues, uma vez que o pH sofre alteraes com o passar do tempo.

4 TESTES DE SEGURANA BIOLGICA

4.1 Contagem do nmero total de micro-organismos Mesofilos Com esse teste possvel determinar o nmero total de bactrias mesfilas e fungos em produtos e matrias-primas no estreis e aplicado para determinar se o produto satisfaz s exigncias microbiolgicas farmacopeicas.

Esse teste consiste na contagem da populao de microorganismos que apresentam crescimento visvel, em at 5 dias, em gar casena-soja a 32,5 oC 2,5 oC e em at 7 dias, em gar Sabouraud-dextrose a 22,5 oC 2,5 oC. Mtodos microbiolgicos alternativos, inclusive os automatizados, podem ser utilizados desde que sua equivalncia com o mtodo farmacopeico tenha sido devidamente validada.

4.2 Preparao das Amostras

Produtos de natureza no lipdica insolveis em gua

Preparar uma suspenso de 10 g ou 10 mL da mistura de amostra em soluo tampo cloreto de sdio-peptona, pH 7,0 ou caldo de casena-soja ou um outro diluente adequado. Em geral, a proporo de diluente e amostra de 10:1, mas as caractersticas do produto podem exigir que seja alterada essa relao. Pode ser adicionado agente tensoativo como polissorbato 80, na concentrao de 1 g/L, para facilitar a disperso. Se necessrio, ajustar o pH para 6,0 a 8,0. Preparar diluies decimais sucessivas com o mesmo diluente.

4.3 Anlise do Produto

Procedimentos A determinao pode ser efetuada pelo Mtodo de filtrao por membrana, Mtodo em placa ou Mtodo dos Tubos Mltiplos (MNP). Esse ltimo reservado para as determinaes bacterianas que no possam ser realizadas por um dos outros mtodos e quando se espera que o produto apresente baixa densidade bacteriana.

A escolha do mtodo determinada por fatores tais como a natureza do produto e o nmero esperado de micro-organismos. Qualquer mtodo escolhido deve ser devidamente validado.

Contagem em placa

Mtodo de profundidade - Adicionar 1 mL da amostra preparada como descrito em Preparao das amostras, em placa de Petri e verter, separadamente, 15 - 20 mL de gar casena soja e, gar Sabouraud-dextrose mantidos a 45 50 C. Utilizar duas placas para cada meio e diluio. Incubar as placas contendo gar casena-soja a 32,5 C 2,5 C durante 3 - 5 dias e as placas contendo gar Sabourauddextrose a 22,5 C 2,5 C durante 5-7 dias para determinao do nmero de micro-organismos aerbicos totais e bolores e leveduras, respectivamente. Somente as placas que apresentarem numero de colnias inferior a 250 (bactrias) e 50 (bolores e leveduras) por placa devero ser consideradas para o registro dos resultados. Tomar a mdia aritmtica das placas de cada meio e calcular o nmero de UFC por grama ou mL do produt

4.4 Pesquisa de Micro-Organismos Patognicos

Esse mtodo possibilita verificar a presena ou a ausncia de microorganismos especficos em meios seletivos. Os procedimentos experimentais devem incluir etapas de prenriquecimento para garantir a recuperao dos microorganismos, se presentes no produto.

Mtodos microbiolgicos alternativos, inclusive os automatizados, podem ser utilizados desde que sua equivalncia ao mtodo farmacopeico tenha sido devidamente validada.

Procedimento

Bactrias gram-negativas bile tolerantes Preparo da amostra e pr-incubao - Preparar a amostra usando a diluio 1:10 de no menos que 1 g ou 1 mL do produto a ser testado, conforme descrito em Contagem do nmero total de micro-organismos mesoflicos, usando caldo casena-soja (Diluio A) como diluente.

Homogeneizar e incubar a 22,5 C 2,5 C por 2 horas e no mais que 5 horas (tempo necessrio para reativar a bactria, mas no o suficiente para estimular a multiplicao do micro-organismo).

Escherichia coli

Preparo da amostra e pr-incubao - Preparar a amostrausando a diluio 1:10 de no menos que 1 g do produto aser examinado conforme descrito em Contagem do nmerototal de micro-organismos mesoflicos. Utilizar 10 mL da diluio para 90 mL de Caldo de Enriquecimento (Caldo Casena-soja), ou quantidade correspondente a 1 g ou 1 mL. Homogeneizar e incubar 32,5 C 2,5 C durante 18 a 24 horas. Seleo e subcultura - Agitar e transferir 1 mL da amostra enriquecida para 100 mL de Caldo MacConkey. Incubar a 43 C 1 C durante 24 48 horas. Realizar subcultura em placa de Agar MacConkey e incubar a 32,5 C 2,5 Cdurante 18 a 72 horas. Interpretao - O crescimento de colnias vermelhas, geralmente no mucosas, com micromorfologia caracterstica de bacilo Gram-negativo, indica presena provvel de E.coli que deve ser confirmada por testes de identificao microbiana. O produto cumpre o teste se no for observado crescimento de tais colnias ou se as provas microbianas forem negativas.