Mecanismo molecular de pncreas y la glndula salival Fluid y HCO 3 - Secrecin

Abstracto
Fluido y HCO 3 - secrecin es una funcin vital de todos los epitelios y es necesario para la supervivencia del tejido. Fluido aberrante y HCO 3 - secrecin est asociada con muchas enfermedades epiteliales, tales como la fibrosis qustica, la pancreatitis, sndrome de Sjgren y otras enfermedades inflamatorias y autoinmunes epiteliales. Se ha avanzado mucho en los ltimos 20 aos en nuestro entendimiento de lquido epitelial y HCO 3 - secrecin, en particular por las glndulas secretoras. Fluido y HCO 3 - por la secrecin de glndulas secretoras es un proceso de dos pasos. Las clulas acinares secretan lquido isotnico en el que la sal es NaCl importante. Posteriormente, el conducto modifica la composicin y volumen de electrolito del fluido para absorber el Cl - y secretar HCO 3 - . El volumen relativo secretada por las clulas acinares y el conducto y la modificacin de la composicin de electrolitos de los fluidos secretados vara entre las glndulas secretoras para cumplir con sus funciones fisiolgicas. En el pncreas, las clulas acinares secretan una pequea cantidad de lquido de NaCl-rica, mientras que el conducto absorbe la Cl - y segrega HCO3 - y la mayor parte del lquido en el jugo pancretico. Secrecin de lquido parece estar impulsada por la activa HCO 3 secrecin. En las glndulas salivales, las clulas acinares secretan la mayor parte del fluido en la saliva que es impulsado por Cl activo - secrecin y contiene altas concentraciones de Na + y Cl - . El conducto de las glndulas salivales absorbe tanto el Na + y Cl - y secreta K + y HCO 3 - . En esta revisin, nos centramos en el mecanismo molecular de lquido y HCO 3 - secrecin de las glndulas salivales y el pncreas, para poner de relieve las similitudes de los mecanismos fundamentales de acinar y funciones de las clulas del conducto, y para sealar las diferencias para cumplir especfico de glndula secreciones. Seccin anteriorSeccin siguiente

I. INTRODUCCIN
El bicarbonato (HCO 3 - ) es un in indispensable en los fluidos secretados, incluyendo el jugo pancretico y la saliva. Entre otras funciones, HCO 3 - es el tampn de pH biolgico que protege contra las fluctuaciones intracelulares y extracelulares txicos en el pH ( 368 ). Como un ion caotrpico, HCO 3 - facilita la solubilizacin de las macromolculas (como las enzimas digestivas y mucinas) en fluidos biolgicos y estimula la secrecin de mucina ( 45 , 146 , 414 ). HCO 3 -secretada por el pncreas exocrino neutraliza el cido gstrico y proporciona un entorno de pH ptimo para la funcin de la enzima digestivo en el duodeno ( 238). HCO 3 - secrecin en la cavidad oral protege contra la erosin del esmalte por pH cido ( 51 , 193 ). En efecto, los recientes avances en la biologa epitelial indica que aberrante HCO 3 - transporte tiene un papel fundamental en la fisiopatologa humana ( 349 , 350 ). Por ejemplo, en la fibrosis qustica (FQ), anormal HCO 3 - conduce a la secrecin de mucina alterada hidratacin y solubilizacin ( 351 ), lo que resulta en una mucosidad espesa que bloquea con frecuencia estructuras ductales de los rganos internos. La falta de HCO 3 -secrecin a los resultados de la cavidad oral en acarreos dentales graves ( 51 ).Por lo tanto, alterado HCO 3 - secrecin se asocia con un amplio espectro de enfermedades y trastornos de los tejidos epiteliales, incluyendo sistemas respiratorio, gastrointestinal y genitourinario ( 62 , 286 , 349 , 350 , 436 ). A un pH de 7,4 y 5% de CO 2 , el HCO 3 - concentracin de equilibrio es de ~ 25 mM. Varios fluidos corporales tienen una mayor HCO 3 - concentracin, y entre ellos el jugo pancretico contiene la concentracin ms alta. En los seres humanos y varias otras especies, tales como perros, gatos, cobayas, y HCO 3 -concentracin en el jugo secretada por el pncreas estimulado es mayor que 140 mM ( 87 , 238 ). Esta hazaa de transporte atrae considerable atencin a pancretica HCO 3 - mecanismo secretor, que es el modelo de eleccin para obtener informacin sobre el mecanismo de lquido epitelial y HCO 3 - transporte.Cmo exocrina glndulas secretan abundante cantidad de lquido y HCO 3 - ha sido durante mucho tiempo un rompecabezas. El descubrimiento del jugo pancretico cido en pacientes con CF fue un hito en la comprensin de los mecanismos fisiolgicos de pncreas HCO 3 - secrecin ( 192 ). Adems, se han hecho progresos significativos durante los ltimos 20 aos con la identificacin de la naturaleza molecular de las glndulas exocrinas muchos canales inicos y transportadores, incluido el regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis qustica (CFTR) ( 200 ), el Na + -HCO 3 - cotransportador NBCe1-B (tambin conocida un pNBC1) ( 1 ), y los SLC26 transportadores ( 92 , 316 ).Reglamento y la coordinacin de exocrina

HCO 3 - secrecin se estn definiendo con la comprensin del papel de las protenas reguladoras, tales como PSD95/discs large/ZO-1 (PDZ) basados en protenas adaptadoras, (WNK) quinasas con-no-lisina, la SPAK / OSR1 quinasas, y el inositol-1 ,4,5-trifosfato (IP 3protena de unin) del receptor en libertad con IP 3 (Irbit). Sin embargo, slo hemos empezado a descubrir cmo se organizan en complejos que funcionan en concierto en las membranas luminales (apical) y basolateral y cmo la alta concentracin de HCO las protenas transportadoras 3 - se forma y se mantiene en el espacio luminal de las glndulas exocrinas. Otro aspecto cardinal de la funcin de la glndula exocrina es la secrecin de lquido. Mientras HCO 3 secrecin se lleva a cabo principalmente por los conductos de la glndula, la mayor parte de fluido puede ser secretada por el conducto, como en el pncreas exocrino ( 238 , 408 ), o por las clulas acinares, como en las glndulas salivales ( 276 , 371 ). Mientras que las bases inicas de la secrecin de lquido por el conducto, son poco conocidos, el mecanismo fundamental de la secrecin de fluidos clulas acinares est bastante bien caracterizado. Trabajo mecanicista Early define los mecanismos bsicos de transporte en la membrana basolateral (BLM) y la membrana luminal (LM) ( 334 ).Un trabajo ms reciente se bas en la delecin del gen en ratones ( 50 , 372 ), que confirm el mecanismo bsico, pero tambin dio lugar a sorpresas en cuanto a la diversidad y la funcin de las isoformas del transportador. Esta revisin tiene por objeto consolidar los conocimientos actuales de las glndulas exocrinas fluido y HCO 3 - secrecin. Puesto que se entiende mejor, la secrecin de fluidos por las glndulas salivales se har hincapi como un ejemplo para el mecanismo de secrecin de lquido por las clulas acinares. Funcin ductal se discutir en relacin con el mecanismo molecular de pncreas HCO 3 -secrecin con un intento de explicar cmo el jugo pancretico se puede acumular 140 mM de HCO 3 - , una concentracin que es ms de cinco veces mayor que en el plasma. Tambin vamos a discutir brevemente lquidos y HCO 3 - transporte por conductos de las glndulas salivales para demostrar la adaptacin y la alteracin de los mecanismos bsicos para satisfacer las demandas especficas de tejido. Seccin anteriorSeccin siguiente

II. CONSIDERACIONES GENERALES

A. Informacin general Cuando Bayliss y Starling informaron del descubrimiento de la secretina secretagogo de pncreas, tambin notaron que el pncreas exocrino secreta fluidos alcalinos ( 25 ). En ese momento, se supone que el carbonato es responsable de la fuerte alcalinidad del jugo pancretico. Ms tarde, con una mejor comprensin del carbonato / HCO 3 - / CO 2 sistemas tampn ( 157 ), se hizo evidente que el pncreas exocrino secreta fluido en el que el anin dominante es HCO 3 - , y HCO 3 - est acoplada a la secrecin de la secrecin de fluidos ( 46 , 88 , 144 ). Exocrinas secretan las glndulas macromolculas como las enzimas digestivas y mucinas inmersos en una HCO 3 - de lquido rico. Las enzimas digestivas son sintetizadas y secretadas por las clulas acinares. La secrecin de fluido por las glndulas exocrinas es un proceso de dos pasos ( 416). Dependiendo de la glndula, las clulas acinares tambin secretan una pequea (pncreas) o un gran volumen (salival) de fluido isotnico, similar al plasma, NaCl-rica ( 238 , 276 ). El fluido segregado por las clulas acinares ofrece las macromolculas para el conducto. El conducto modifica la composicin inica del fluido a lo largo del rbol ductal para absorber la mayor parte de la Cl - y segrega la mayor parte de la HCO 3 - . El conducto pancretico tambin secreta la mayor parte del lquido en el jugo pancretico ( 14 , 408 ), y el conducto salival absorbe el Na + y secreta K + para formar la saliva final ( 371 ). Por lo tanto, el rbol ductal tiene varias funciones, que proporciona un marco estructural para tejidos acinares y endocrinas, secretan fluido que acta como un vehculo para el transporte de macromolculas de la glndula, y secretar HCO 3 - para neutralizar el cido y proporcionar un entorno de pH ptimo para las macromolculas secretadas a su destino ( 14 , 44 ). B. Morfologa A continuacin, se describe la anatoma del pncreas como un ejemplo de una glndula exocrina. Sin embargo, la anatoma de otras glndulas exocrinas (como el salivar, lagrimal y mamaria) es parecido. El pncreas es un rgano endocrino-exocrino complejo, con el desarrollo de cada parte de las superficies ventral y dorsal del intestino anterior primitivo, respectivamente. Similar a otras glndulas exocrinas, el pncreas exocrino se compone de dos tipos principales de clulas, las clulas acinares y el conducto. En la mayora de los seres humanos y otros mamferos, las clulas acinares comprenden la mayor masa del pncreas, y clulas de los conductos comprenden slo ~ 10% de las clulas en nmero y 5% del peso total de pncreas ( 44 ). Las clulas acinares son el modelo clsico para las clulas epiteliales polarizadas, que tiene una morfologa tpica con extensa retculo endoplsmico rugoso (ER) en el polo basal y ER liso en el polo apical. El ncleo

est cerca del polo basal y es seguido por el aparato de Golgi, los grnulos secretores que se embalan en el polo apical y la membrana luminal ( 273 ). La polaridad se extiende a otros orgnulos intracelulares y a las protenas individuales. Un buen ejemplo es el Ca 2 + protenas de sealizacin. Estas protenas se organizan de la Ca 2 +sealizacin complejos prximas o en las uniones estrechas, con expresin polarizada de Ca 2 + bombas ( 240 , 478 ), Ca 2 + canales ( 241 ), los receptores acoplados a protenas G ( 396 ) y reguladores protenas ( 164 ), que son esenciales para generar el Ca localizada + 2 seales y las propagadas Ca 2 + olas ( 209 , 340). El acinar lbulo termina y el conducto comienza con las clulas centroacinares, que tienen varias caractersticas ductales, se consideran las clulas terminales del rbol ductal y conecte el acinares y clulas del conducto ( 238 ). El conducto tiene varios segmentos basados en el tamao y la ubicacin. Aunque aqu se destaca la secretora (serosa) clulas de los conductos, es importante tener en cuenta que el conducto tiene varios tipos de clulas, incluyendo las clulas ciliadas y mucinoso. La heterogeneidad celular se encuentra en todos los segmentos del rbol ductal. La porcin terminal del rbol ductal que conduce directamente desde los acinos se llama conducto intercalado ( . la figura 1 ) . Pequeos conductos intercalados se unen y forman secuencialmente los segmentos de conducto intralobulillares, interlobulares, y interlobar ( . la figura 1 ) . En los seres humanos, los conductos interlobulares se unen para formar el conducto pancretico principal (conducto de Wirsung), que comparte una abertura duodenal con el conducto biliar comn en la ampolla de Vater. La mayora de los individuos tienen un conducto pancretico principal, pero algunos tienen un conducto pancretico accesorio adicional, el conducto de Santorini ( 34 ). En roedores, un nmero de conductos interlobulares o intralobulillar abrir directamente en el conducto comn pancreticobiliar sin formar un conducto principal ( 238 ). Se presta mucha atencin en los ltimos aos a los aspectos de desarrollo del conducto, ya que el conducto contiene las clulas madre glandulares que son necesarias para el desarrollo y la glndula reparacin despus de una lesin ( 196, 220 , 250 ).

Figura 1. Los segmentos acinares y ductal de las glndulas secretoras y funciones de secrecin de fluidos y electrolitos. La figura ilustra las relaciones entre las porciones acinares y ductal de las glndulas secretoras. La secretan lquido isotnico acinos con NaCl como sal importante. El fluido pasa a travs de las clulas centroacinares a la del conducto. El conducto pancretico absorbe el Cl - y segrega HCO 3 - y la mayor parte del agua en el jugo pancretico. Activo HCO 3 - impulsa la secrecin de la secrecin de fluidos. El conducto salival absorbe tanto Cl - y Na + y segrega HCO 3 -y K + . ENaC se expresa en las glndulas salivales, pero no en el conducto pancretico, y es la va principal para el Na + absorcin por las glndulas salivales del conducto.

Los conductos intralobulillares intercaladas y pequea son los principales sitios de HCO 3 - secrecin en el pncreas humano y de las glndulas salivales, mientras que en los roedores del conducto interlobulares segrega la mayor parte del fluido y HCO 3 - ( 261 ). El HCO 3 - porcin secretora de estos conductos est revestida por las clulas principales. Estas clulas contienen una cantidad relativamente pequea de los orgnulos celulares requeridos para la secrecin de protenas, tales como retculo endoplasmtico rugoso (RER), complejos de Golgi, y las vesculas secretoras. En cambio, son ricas en mitocondrias para satisfacer la

demanda energtica de transcelular HCO 3 - y la secrecin de lquido. La membrana luminal de las clulas principales est dotado de amplios microvellosidades. La membrana lateral se interdigitados y unidos por uniones estrechas y desmosomas y adherencia. En los conductos ms grandes, las clulas principales se convierten en columnar y el conducto contiene clulas caliciformes, que estn especializadas en la secrecin de mucina ( 44 , 259 ). C. Composicin de electrolitos de los fluidos secretados El pncreas humano segrega 1-2 litros de jugo pancretico por da. El jugo pancretico es un, lquido isotnico alcalina. Los acinos secretan isotnica, lquido similar al plasma. El conducto pancretico no absorbe la Na + , pero absorbe la mayor parte de la Cl - y secretar HCO 3 - . El conducto pancretico humano puede secretar un fluido que contiene 140 mM de HCO 3 - ( 87 ). Sin embargo, el HCO 3 - concentracin en el ratn y el jugo pancretico de rata es 50-70 mM ( 390 ). El HCO 3 - contenido en el jugo aumenta con el aumento de velocidad de flujo. El pico de HCO 3 - contenido se alcanza en 30 a 50% del caudal mximo. El Cl recproco - absorcin y HCO 3 - Resultados de la secrecin de la osmolalidad isotnica a todas las velocidades de flujo ( 46 , 361 , 390 ). La composicin de cationes del jugo es casi constante, 140 mM de Na + y 10-15 mM de K + , independientemente de la velocidad de flujo. Jugo pancretico humano tambin contiene 1-2 mM de Ca 2 + y una pequea cantidad de Mg 2 + , Zn + 2 , PO 4 3 - y SO 4 2 - . Los seres humanos secretan aproximadamente 1 litro de saliva al da. La secrecin de descanso est dominado por las glndulas submandibular y sublingual, mientras que la secrecin es estimulada principalmente por la glndula partida ( 372 ). Como es el caso en el pncreas, la composicin de electrolitos de la saliva vara con la velocidad de flujo y entre las especies. A diferencia del pncreas, la mayora de fluido salival es secretada por las clulas acinares serosas, que secretan fluido isotnico, NaCl-rica. El fluido primario secretada por los acinos en la rata y gato contiene 145-160 mM de Na + , 5-10 K+ , y 120-130 Cl - y tiene un pH de ~ 7,5 ( 386 ). Los conductos de las glndulas salivales expresan el epitelial de Na + ENaC canal ( 66 ) y absorben la mayor parte del Na + y Cl - de la saliva primaria, mientras que secretor de K + y HCO 3 - para generar la saliva final. El colinrgica estimulado y Ca 2 + -dependiente de la saliva en la rata y el ratn en el estado estacionario contiene 2 mM Na + , 135 mM K + , 55 mM HCO 3 - , y 78 mM de Cl - a un potencial transepitelial de -11 mV ( 67 ,466 ). Curiosamente, el -adrenrgico pequeo volumen de saliva estimulada contiene tanto como 140 mM HCO 3 - y tan poco como Cl 20 mM - ( 386 , 466 ).Esto indica que la estimulacin colinrgica y -adrenrgico utilizar diferentes vas para estimular la secrecin de fluido y electrolitos. Seccin anteriorSeccin siguiente

III. Control hormonal de lquido y HCO 3 - Secrecin

A. Informacin general Al igual que cualquier sistema fisiolgico, la funcin de las glndulas exocrinas es controlado por mltiples entradas neurohumorales que forman las vas de regulacin intrincados. Aqu, nos centramos nuestra discusin sobre el pncreas exocrino y las glndulas salivales. Las similitudes fundamentales entre los dos tejidos son que la secrecin de lquido por las clulas acinares es regulada por Ca2 + -movilizacin agonistas ( 276 , 337 , 340 ), y el lquido y HCO 3 - secrecin de los conductos se encuentran reguladas por los receptores de cAMP generadoras (238 , 267 ). La diferencia ms obvia, que est fuera del tema de esta revisin, es que las entradas simpticas contribuyen a la funcin de las glndulas salivales, pero no juegan un papel importante en la funcin del pncreas exocrino. Control neurohumoral de lquido pancretico y la secrecin de electrolitos fue propuesto por primera vez en el siglo 20 ( 25 , 331 ). El conocimiento acumulado en los ltimos 100 aos ha puesto de manifiesto que la regulacin de la secrecin pancretica es altamente complejo con estimulador mltiple y entradas inhibitorias ( 402 ) y vara mucho entre especies. La secrecin basal, en la rata y el ratn es significativa, mientras que la secrecin basal en perro y posiblemente humano es muy pequeo, que asciende a <2% de la HCO 3 - y 10% de las enzimas digestivas secretadas durante la estimulacin mxima ( 74 ). HCO 3 - mecanismos de rescate en el conducto pancretico grandes contribuyen a la baja basal HCO 3 -de salida ( 234 , 252 ). Enzimas pancreticas y HCO 3 - aumenta la secrecin en respuesta a una comida. El control de la secrecin pancretica se divide en fases ceflicos, gstricos, intestinales y ( 44 ). La fase intestinal es la ms importante y comienza con el paso del quimo en el duodeno proximal. Los receptores de los acinos pancreticos y el conducto expresas para una batera de hormonas y neurotransmisores. Los principales receptores en los acinos son para las hormonas colecistoquinina (CCK) y la bombesina y el neurotransmisor acetilcolina. La hormona secretina,

secretada por las clulas en la parte superior del duodeno, y la salida vagal colinrgica a travs de un enteropancreticos vagovagal son reflejo de las dos entradas principales que controlan fluido del conducto y HCO 3 - secrecin. La secretina y CCK son liberados por los rganos distantes y requieren receptores de alta afinidad porque alcanzan el pncreas a travs del torrente sanguneo ( 238 ). Adems de estas hormonas clsicos, un gran nmero de agentes humorales son liberados por el pncreas para modular su funcin. Las clulas en los islotes de Langerhans liberacin de insulina, somatostatina, y varias otras hormonas peptdicas ( 244 ), y agonistas paracrinos liberados de acinares pancreticas y clulas de los conductos, tales como purinas, prostaglandinas, y la tripsina activada, regulan la funcin de las clulas del conducto en estados fisiolgicos y patolgicos . B. Endocrinos y control paracrino 1. CCK Circulacin CCK liberado de los intestinos delgados es un importante estimulador de la enzima pancretica clulas acinares y la secrecin de fluidos. Esto ha quedado ampliamente demostrado en varias especies de roedores. CCK actuando a travs de un aumento de citoplasmtica de Ca 2 + destacado estimula Ca 2 +exocitosis dependiente. Sin embargo, la relevancia de la accin mediada por CCK en las clulas acinares humanos ha sido cuestionado por varios estudios, lo que sugiere que el efecto de la CCK es principalmente mediada por la estimulacin de las fibras aferentes vagales intestinales ( 321 ). Esto se basa en los hallazgos de que el pncreas humano no parecen expresar los receptores CCK-A y las clulas acinares pancreticas humanas aisladas que responden vigorosamente a la estimulacin muscarnico no responder a CCK ( 188 , 189 , 280 ). Este problema fue revisado recientemente para demostrar CCK-evoc Ca 2 + seales y exocitosis en las clulas acinares humanos recin aislados ( 288 ). Sin embargo, la accin directa de la CCK en las clulas acinares pancreticas humanas sigue siendo controvertido ( 381 ), en la medida en que muy bajo, en su caso, los receptores de CCK-A se pueden encontrar en las clulas acinares pancreticas humanas y la respuesta de las clulas acinares pancreticas humanas a CCK necesidades ser confirmado por otros grupos. La CCK endgena lanzado es heterogneo y consiste en mltiples formas, incluyendo CCK-58, CCK33, y CCK-8 ( 102 ).Aunque el papel exacto de cada isoforma no es conocido y aislado en acinos tienen actividad similar ( 70 ), no hay evidencia de las diferencias en su funcin in vivo ( 457 ). CCK tambin acta sobre el conducto pancretico para afectar a la secrecin de fluidos, pero su efecto vara entre las especies. En los seres humanos, la infusin de CCK solo dbilmente estimula la secrecin de fluidos, pero que potencia en gran medida los efectos de la secretina ( 464 ). Esto sugiere sinergia importante entre los Ca 2 + y los sistemas de cAMP en la secrecin estimulada ductal. Esto se discute en ms detalle en otro apartado de esta revisin. 2. Secretin La entrada de quimo cido al duodeno evoca la liberacin de secretina de las clulas neuroendocrinas en la mucosa duodenal. PH intraduodenal por debajo de 4,5 es un estmulo principal para la liberacin de secretina ( 37 , 59 ). La secretina acta principalmente en el conducto pancretico mediante el aumento de AMPc para estimular el fluido del conducto y HCO 3 - secrecin. Que la secretina es la principal hormona en el lquido posprandial y HCO 3 - secrecin es evidente a partir de 1 ) un aumento de la secretina plasma despus de una comida ( 59 , 344), 2 ) una relacin lineal entre el aumento de la secretina plasma y HCO 3 - salida (384 ), y 3 ) la inhibicin de pncreas posprandial HCO 3 - secrecin por el suero anti-secretina ( 58 ). Plasma secretina en respuesta a una comida alcanza slo niveles picomolares, lo cual es suficiente para estimular fluido modesta y HCO 3 -secrecin en todas las especies. CCK y la estimulacin vagal potencia an ms la secrecin de secretina estimulada ( 135 , 217 , 464 ). 3. Purines Receptores purinrgicos (P2Rs) se clasifican en P2Y metabotrpicos y receptores ionotrpicos P2X y transducir sus seales mediante el aumento de citoplasmtica de Ca 2 + . Acinos pancreticos secretan tienda y ATP, pero no aparecen para expresar P2Rs ( 306 ). ATP liberado por acinos acta sobre el conducto, que expresa mltiples P2YRs y P2XRs, tanto en las membranas apical y basolateral (254 ). La estimulacin de P2Rs en los conductos pancreticos aislados de varias especies induce la secrecin de fluidos y activa transportadores de membrana que mejoran HCO 3 - secrecin ( 293 , 306 , 480 ). Sin embargo, la regulacin P2Rs puede ser bastante complicado, por ejemplo, la estimulacin de los P2Rs apical y basolateral tienen efectos opuestos en cobaya ductal secrecin ( 177 ). Las posibles fuentes de ligandos purinergic incluyen la

liberacin de terminales nerviosas en el espacio basolateral, la liberacin de purines almacenados en grnulos de zimgeno de las clulas acinares y ductales transportadores de eflujo de ATP ( 304 , 306 ). Aunque el sistema purinrgico probablemente juega un papel en la regulacin de la secrecin pancretica ductal bajo estados fisiolgicos y patolgicos, su funcin especfica en los seres humanos an no se ha demostrado. Otros mediadores humorales secretados por los islotes, el tracto gastrointestinal y el sistema nervioso intrapancretico tambin pueden modular la funcin del pncreas exocrino, aunque su funcin fisiolgica exacta an no se ha dilucidado (vase la Ref.. 238 para la lectura adicional). C. Control neuronal La secrecin pancretica es controlada por el sistema nervioso entrico, que se compone de un eje intestinocerebro y un sistema de intrapancretico. El sistema nervioso intrapancretico se compone de plexo de interconexin de ganglios y fibras posganglionares situadas en los tejidos conectivos intralobulillares, vasos sanguneos, y, ocasionalmente, en el tronco neuronal ( 208 , 218 ). Se suministra por fibras preganglionares parasimpticas (vagal), fibras simpticas postganglionares (splanchic), y posiblemente otras fibras que emanan directamente de la pared del intestino. Las fibras nerviosas viajan a travs de la lmina propia de los acinos y el conducto, con terminales nerviosas que se encuentra en estrecha proximidad a la membrana basal sin formacin de sinapsis ( 259 , 422 ). El principal neurotransmisor que acta sobre acinares pancreticas y clulas de los conductos es la acetilcolina secretada por fibras parasimpticas vagales. Los acinos y conductos expresan los receptores M1 y M3 colinrgicos, aunque el M3 es el tipo de receptor principal ( 114 ) y acta aumentando citoplasmtica de Ca 2 + ([Ca 2 + ] i ) ( 209 ). Terminales nerviosas parasimpticas que contienen neurotransmisores adicionales, incluyendo polipptido intestinal vasoactivo (VIP) y ATP ( 218 , 305 ). Los efectos de la estimulacin vagal sobre la secrecin pancretica espectculo patrn especfico de la especie de fluido y son muy variables. La estimulacin vagal en cerdos y cuyes hace que el lquido VIP-estimulado y HCO 3 - secrecin ( 163 , 218 ). En los seres humanos, resultados de la estimulacin colinrgica en la secrecin de enzimas por las clulas acinares y mejora la secretina estimula la secrecin ductal, probablemente por el Ca 2 + -cAMP sinergia. La sinergia entre los Ca 2 + y los sistemas de cAMP (vase ms adelante) puede explicar el fuerte efecto estimulador de VIP en el cerdo. VIP (y los receptores -adrenrgicos) puede estimular ambas extremidades de las vas de sealizacin por un G s / G i mecanismo de conmutacin para aumentar tanto el AMPc celular y Ca 2 + ( 253 ). Otros neurotransmisores que actan sobre el pncreas exocrino son neuropptido Y (NPY), galanina ( 94 , 394 ), y la histidina isoleucina ( 162 ), con NPY controlar principalmente el flujo de sangre para inducir la vasoconstriccin e inhibir la secrecin pancretica. La sustancia P y el pptido relacionado con el gen de la calcitonina (CGRP) se colocalized en las mismas neuronas y actuar como inhibidor de la liberacin de neurotransmisores ( 57 ). D. Control de la secrecin salival Reglamento de la funcin de las glndulas salivales no se entiende en la misma medida como la funcin pancretica. Funcin de la glndula salival tambin es controlado por mltiples entradas: endocrino, paracrino, y neuronales ( 276 , 345, 380 ). La principal regulacin neuronal es por las terminaciones nerviosas parasimpticas y simpticas. Las neuronas parasimpticas liberan acetilcolina para activar los receptores M1 y M3, tanto en clulas acinares y conductos ( 38 ,72 , 115 , 455 ) para aumentar la [Ca 2 + ] i y sobre todo estimular la secrecin de fluido. El sistema nervioso simptico activa los receptores -adrenrgicos en las clulas acinares y el conducto para aumentar el cAMP ( 23 , 48 , 76 ). estimulacin -adrenrgico es la va principal para la secrecin de enzimas estimulado en clulas acinares ( 48 ). En la estimulacin del conducto, -adrenrgico controles de transporte de lquidos y electrolitos ( 67 ), incluyendo HCO 3 - secrecin ( 393 ,476 ). Acinares de la glndula salivar y clulas de los conductos expresan una batera de receptores ionotrpicos y metabotrpicos (P2Rs P2), tanto en las membranas luminal y basal ( 419 , 469 ). Los receptores P2Y parecen ms importantes en el desarrollo de la glndula ( 22 , 420 ) y tal vez la reparacin ( 353 ). Los receptores P2X ( 289 , 309 , 469 ) pueden tener un papel en la secrecin de fluido y electrolitos. Un estudio convincente reciente mostr una estimulacin de la secrecin de las glndulas prominente salival por los receptores P2X7 ( 289 ), que se expresan en tanto acinares y clulas de los conductos ( 243 , 357 ) y actuar mediante el aumento de [Ca 2 + ] i ( 243 , 289 , 309 ). Cmo est orquestada la funcin de todas las entradas para producir la saliva final (y para el caso, el jugo pancretico) no se conoce en la actualidad.

E. va de sealizacin en las glndulas secretoras Acinar y funcin de las clulas del conducto en el pncreas y las glndulas salivales es regulado por los receptores que el cambio [Ca 2 + ] i ( 209 , 340 ). Los cambios en la [Ca 2 + ] i tambin estn crticamente involucradas en el pncreas (206 , 333 ) y las glndulas salivales ( 206 ) patologa. Ca 2 + sealizacin implica la activacin mediada por el receptor de la protena G T q para generar G q GTP o G i a libero G, que activa la fosfolipasa C (PLC). Hidroliza PLC fosfatidilinositol 4,5-bifosfato (PIP 2 ) para generar IP 3 y diacilglicerol ( 32 ). IP 3activa la ER-ubicada Ca 2 + canales de liberacin de PI 3 receptores (IP 3 Rs) ( 278), con IP 3 R2 y PI 3 R3 son los principales isoformas en clulas secretoras ( 111 ).Ca 2 + de liberacin es seguido por la activacin de la membrana plasmtica de Ca 2 + canales de afluencia, los llamados canales de la tienda que funciona (SOC).Los dos SOC son la Orai ( 105 , 431 , 472 ) y los canales de TRPC ( 168 , 451 , 467). Los canales TRPC y Orai son activados por el ER Ca 2 + sensor de STIM1 ( 247 ,369 ). En respuesta a Ca 2 + tiendas agotamiento, STIM1 grupos con TRPC ( 6 ,325 , 471 ) y los canales Orai ( 84 , 247 , 251 , 423 ) para activarlos. El aumento de la [Ca 2 + ] i activa el Ca 2 + mecanismos de extrusin, el sarco / endoplasmtico Ca 2 + ATPasa (SERCA) y la membrana plasmtica de Ca 2 + -ATPasa bombas (EPCP), para mover Ca 2 + desde el citosol y restauracin [Ca 2 + ]i hacia el nivel basal. El Ca 2 + seales en las clulas epiteliales es altamente polarizado, iniciando en el polo apical y propaguen al polo basal ( 197 , 418 ). La polarizacin de la Ca 2 +seales se logra por acuerdo polarizado de todas Ca 2 + sealizacin de las protenas y su ensamblaje en complejos en las proximidades de la unin estrecha.Expresin polarizada se ha demostrado para los tres IP 3 R ( 241 , 295 , 450 ), la SERCA y bombas EPCP ( 240 , 478 ), los GPCR ( 360 , 396 ), canales de TRPC ( 204), canales de Orai, y STIM1 ( 164 , 255 ). Tal disposicin lanza el Ca 2 + de la seal en el dominio celular que inicia la funcin celular polarizada de las clulas, siendo la exocitosis de los grnulos secretores o fluido estimulado y la secrecin de electrolitos. El Ca 2 + seal evocada por las concentraciones de agonistas fisiolgicos es en la forma de Ca 2 + oscilaciones, donde el Ca 2 + seal se repite peridicamente. La frecuencia y la amplitud de la oscilacin est determinada por la intensidad de la estimulacin del receptor ( 31 , 209 ). El Ca 2 + oscilaciones siempre comienzan en el polo apical y se propagan al polo basal ( 197 , 418 ) en forma de Ca 2 + olas ( 198 ). A pesar de los aspectos fundamentales de la Ca 2 + sealizacin son similares, los detalles de la Ca 2 + seales son especficas de pncreas y de clulas salivales en trminos de sensibilidad a la estimulacin agonista, la frecuencia de las oscilaciones, y la velocidad de la Ca 2 + olas. En las clulas acinares pancreticas, las oscilaciones pueden limitarse exclusivamente a la polo apical ( 336 , 340 , 418 ). Curiosamente, los aspectos espaciales y temporales de la Ca 2 + oscilaciones varan de pncreas y las clulas acinares de la partida (121 ), que probablemente refleja la adaptacin de la Ca 2 + seal a la funcin especializada de los dos tipos de clulas. El Ca 2 + de sealizacin media la va de la secrecin de enzimas exocitosis por acinos pancreticos ( 442 , 443 ) y la secrecin de lquido por el pncreas y las glndulas salivales acinos ( 276 , 334 ), y modula fluido del conducto y la secrecin de electrolitos (ver ms abajo). La segunda va de sealizacin es la ruta de AMPc / PKA que se activa mediante receptores acoplados a G s , como es el caso en los conductos. La principal estimulador de la secrecin pancretica ductal es secretina y de funciones conductos salivales se noradrenalina acta sobre los receptores -adrenrgicos.Receptores de secretina pertenecen a la BG receptor acoplado a protena clase (GPCR), y los receptores -adrenrgicos son la clase A de GPCR. La estimulacin de los dos tipos de receptores en clulas de los conductos da lugar a un aumento de AMPc y la activacin de la PKA ( 67 , 76 , 89 , 101 , 421 ). La estimulacin de los receptores de VIP VPAC 1 en clulas de los conductos tambin activa el AMPc / PKA va ( 101 , 421 ). Los principales transportadores activados por AMPc evocar lquidos y HCO 3 - secrecin son el CFTR luminal y basolateral Na + -HCO 3 -cotransportador ( 238 , 372 ) NBCe1-B ( 462 ). En el conducto, bloque anticuerpos antisecretina pncreas ~ 80% de postprandial HCO 3 - de salida ( 58 ), poniendo de relieve el papel central de la secretina en la estimulacin de HCO 3 - secrecin. En los ltimos aos, una imagen ms compleja de la regulacin de fluido del conducto y la secrecin de electrolitos ha surgido con la comprensin de que clulas de las glndulas salivales y pancreticas expresan una multitud de tipos de receptores. En el conducto pancretico, estos incluyen los receptores P2 mltiples ( 254 , 299 ) y el receptor activado por proteasa 2 (PAR2) ( 9 , 292 , 294 ,301 ), que adems de estimular la secrecin ( 289 ) pueden mediar pasos crticos en la apoptosis (receptores P2X7) y la respuesta inflamatoria (PAR2) asociado a la pancreatitis. Los receptores P2X7 pueden tener diferentes funciones en las clulas acinares y el conducto, ya que los receptores muestran un comportamiento especfico de la clula ( 243 ) y la expansin de poros ( 242 ). Los estudios funcionales sugieren P2Y2R y expresin de P2X7R en la membrana

luminal y tal vez P2Y1R, P2Y2R, y P2X4R en la membrana basolateral del conducto ( 254 ).Tanto la seal de los receptores P2Y y P2X mediante cambios en la [Ca 2 + ] i ( 304). Posteriormente, se inform de que los P2Rs basolateral inhiben HCO 3 - y la secrecin de fluidos en conejillo de conducto pancretico porcino ( 177 ). El P2Y11R esa seal a travs de cambios en cAMP estimula luminal Cl - canal CFTR ms probable ( 299 ). El PAR2 basolateral que las seales a travs de los cambios en la [Ca 2 + ] i activa el luminal Ca 2 + activated Cl - y K + canales ( 301 ) y estimula el conducto pancretico HCO 3 - secrecin ( 9 ). Una vez ms, en qu medida estos diferentes receptores contribuyen al lquido y HCO 3 - secrecin in vivo no est claro en la actualidad. Sin embargo, los receptores P2X7 PAR2 y pueden resultar particularmente activa en los estados patolgicos cuando significativa tripsina y ATP se liberan para proteger a las clulas. F. sinergismo El campamento y Ca 2 + vas de seales muestran sinergia importante en muchas funciones fisiolgicas. Un sinergismo particularmente bien definido es fluido y HCO 3 - secrecin por el conducto pancretico y se utiliza aqu para ilustrar el fenmeno. Aunque la secretina es el principal estimulador de lquido pancretico y HCO 3 - secrecin, la aplicacin exgena de la secretina que eleva la concentracin plasmtica con el nivel observado en el estado postprandial evoca slo modesta HCO 3 - y de salida de fluido ( 88 , 137 ). Esto sugiere que otros factores, tales como la CCK y la estimulacin vagal, sinergia con secretina para estimular el fluido del conducto y HCO 3 - secrecin. Una disminucin de la secretina-evoc HCO 3 - secrecin por el colinrgico receptores antagonistas atropina y por el bloqueo vagal indica que una entrada colinrgico vagal es importante para postprandial HCO 3 - secrecin ( 135 , 217 ). Adems, exgeno en aplicacin in vivo de la CCK potencia el fluido de la secretina-estimulado y HCO 3 - secrecin ( 464 ). La estimulacin de la M1, M3, y CCK A los receptores en las clulas del conducto pancretico provoca un aumento de la [Ca 2 + ] i y potencia el efecto de los agonistas de campamento, tales como secretina y VIP (238 ). El mecanismo de sinergia entre cAMP y Ca 2 + seales en clulas de los conductos pancreticos todava no es completamente entendido. La activacin de Ca 2 + -K activado + canales en la membrana basolateral, que facilita la secrecin de aniones a travs de CFTR en la membrana apical, parece ser un mecanismo plausible que se ha demostrado en varios epitelios ( 61 , 227 ). Un segundo mecanismo es Ca 2 + -dependiente de la activacin de CFTR Cl-dependiente - / HCO 3 - intercambio muestra en Capan-1 clulas de los conductos pancreticos humanos ( 293 ). Este mecanismo puede implicar la activacin de CFTR por Irbit.El papel regulador de Irbit se discute en detalle ms adelante y en una revisin reciente ( 461 ). Para el debate actual, es necesario saber que Irbit une a IP 3 R para inhibir su funcin, y se libera del IP 3 rupias por IP 3 ( 11 ). Irbit tambin activa tanto el Na + -HCO 3 - cotransportador NBCe1-B ( 398 , 462 ) y la CFTR (462 ). La estimulacin de una Ca 2 + movilizacin de receptores que se traduce en un aumento de la PI 3 pueden dar lugar a la disociacin de Irbit de los IP 3 R y su unin a NBCe1-B y / o CFTR para activar ellos y aumentar el fluido activada por AMPc y HCO 3 - la secrecin. Una forma recproca de sinergia es un aumento de la [Ca 2 + ] i seal de cAMP. En las clulas acinares partidas, AMPc / PKA fosforila la IP 3 R2 para aumentar la probabilidad de apertura del canal y por lo tanto aumenta el Ca + 2 de seal ( 38 ). Finalmente, Ca 2 + puede controlar positivamente el AMPc / PKA sistema. Varios adenilil (CCAA), como AC1 y AC8, se activan por la elevacin de [Ca 2 + ] i ( 444 ). Seccin anteriorSeccin siguiente

IV. FLUIDO y secrecin electrolito clulas acinares

A. Informacin general Fluido y la secrecin de electrolitos por las glndulas secretoras es un proceso de dos pasos en el que las clulas acinares secretan isotnica, lquido similar al plasma y el conducto modifica la composicin de electrolito para generar el fluido final. El volumen secretada por las clulas acinares es diferente en cada glndula.Por ejemplo, las clulas acinares pancreticas secretan una pequea cantidad de volumen, y la mayor parte del fluido en el jugo pancretico final, es secretada por el conducto ( 238 , 408 ). Por otro lado, en todas las glndulas salivales, las clulas acinares serosas se especializan en la secrecin de fluidos y secretan la mayor parte del lquido en la saliva ( 276 ). Sin embargo, en la medida en que son conocidos, el mecanismo fundamental de la secrecin de fluido y electrolitos por los dos tipos de clulas acinares es similar, si no idntica. Los nicos dos caractersticas conocidas que pueden explicar la diferente velocidad y el volumen de pncreas y secretada por clulas de las glndulas salivales son las propiedades de sus receptores evocados Ca 2 + seales, que son mucho ms rpido en las clulas acinares de las glndulas salivales ( 121 ), y tal vez la expresin de el canal de agua acuaporina 5 en las clulas acinares pancreticas salivales pero no en

( 81 ). Ms informacin sobre el mecanismo de fluido de las clulas acinares pancreticas y la secrecin de electrolitos proviene de estudios funcionales relativamente tempranas, y la identidad molecular de la mayora de los transportadores se conoce slo en una medida limitada (para una revisin, vase Ref.. 334 ). La mayora del trabajo reciente se ha hecho con las clulas acinares de las glndulas salivales y se bas en la delecin del gen en ratones, que revel varias caractersticas inesperadas y los papeles de los transportadores ( 50 , 276 ,372 ). Por lo tanto, en su mayor parte, hablaremos de la secrecin de lquidos y electrolitos por las clulas acinares de las glndulas salivales y proporcionar informacin sobre las clulas acinares pancreticas cuando est disponible. B. Las clulas acinares electrolito transportistas 1. El Na + -K + -ATPasa de la bomba Fluid y la secrecin de electrolitos es alimentado por el celular Na + gradiente generado por la basolateral Na + -K + -ATPasa de la bomba, que hidroliza ATP para intercambiar 3Na + en por 2K + a cabo y una H + en ( 282 ) y generar el Na transcelular + y K + gradientes, y por lo tanto tambin determina el potencial de membrana ( 334 ). 2. K + canales El potencial de membrana de clulas acinares est cerca de la K + potencial de difusin, que es fijado por K + canales. El potencial de membrana proporciona la fuerza motriz para la salida de Cl - en la membrana luminal, que es el paso clave iniciar la secrecin de fluido y electrolitos. Trabajo microelectrodos Early registr un K + conductancia en las clulas acinares que fue activado por Ca 2 + ( 335 ).Con la invencin de la tcnica de patch-clamp ( 140 ), se demostr que las clulas acinares expresan dos tipos de Ca 2 + -activated K + canales ( 334 ), un Ca 2 + - y K activados por voltaje + canal de un gran conductancia ( 269 ) y un tiempoy tensin independiente de K + canal de conductancia intermedia ( 148 ,296 ). La identidad molecular de los canales se determin posteriormente como los canales MaxiK codificadas por el KCNMA1 gen ( 296 , 363 ) y los Ik1 canales codificados por el KCNN4 gen ( 27 , 147 ), respectivamente. Supresin de genes en ratones revel que ambos canales se requieren para mantener las clulas acinares y la funcin de la glndula salival. As, la supresin de KCNN4 no tuvo efecto sobre la regulacin ya sea en reposo o estimulado partida clulas acinares volumen o fluido glandular y la secrecin de electrolitos, incluyendo K +secrecin ( 27 ). Por otra parte, la supresin de la KCNMA1 gen no tuvo ningn efecto en el lquido glndula salival y la secrecin de electrolitos ( 363 ), si bien K+ secrecin se ve afectada en las glndulas salivales que carecen de la canal MaxiK que se expresa en la membrana luminal del conducto ( 290 ) (y probablemente clulas acinares). Fue necesario eliminar tanto el KCNN4 y losKCNMA1 genes en ratones para reducir receptor estimulada por fluido y K +secrecin por las clulas acinares y por lo tanto por las glndulas salivales ( 365 ).Las clulas acinares parecen bastante plstico, y la falta de efecto debido a la eliminacin de uno de los K + canales pueden ser resultado de la adaptacin de las clulas acinares. Un ejemplo de plasticidad de las clulas acinares y la capacidad de adaptacin tambin se observ en ratones con supresin de la Na +/ H + de cambio de NHE1, lo que result en un aumento de la glndula salival de clulas acinares Cl - / HCO 3 - actividad de intercambio, probablemente por aumento de la expresin de la anhidrasa carbnica II , y aumento de la expresin de NKCC1 ( 122 ). Otro ejemplo es la eliminacin parcial de la ER Ca 2 + SERCA2 bomba que dio lugar a la adaptacin de la Ca 2 + sealizacin y granulares mecanismos exocytotic en clulas acinares pancreticas ( 478 ). 3. NKCC1 Un transportador de clave para el fluido de las clulas acinares y la secrecin de electrolitos es el Na + / K + / 2Cl - NKCC1 cotransportador. NKCC1 es ubicuo y se activa por contraccin de la clula para mediar aumento de volumen regulatorio para restaurar el volumen de clulas despus de la contraccin celular ( 79 , 226 ). NKCC1 se expresa en la membrana basolateral de las clulas acinares ( 100 ) y se inhibe por el diurticos furosemida y bumetanida ( 138 ). La manipulacin de iones externos y el uso de los inhibidores de NKCC mostr que media la actividad NKCC ~ 70% de la Cl - captacin que es secretada a travs de la membrana luminal para conducir pncreas y la secrecin de fluido de la glndula salival ( 276 , 312 , 334 ). NKCC1 junto con el Na + / H + intercambiador de NHE1 tambin proporcionan el citosol con la mayor parte de la Na + necesaria para alimentar el Na + / K + de la bomba ( 473 , 474 ). El papel central de NKCC1 en el fluido de la glndula salival y la secrecin de electrolitos, se estableci por la eliminacin de la NKCC1 gen en ratones, lo que result en ~ 70% de inhibicin de la secrecin salival ( 100 ).

4. NHE1 y AE2 Los hallazgos de que la inhibicin ( 312 ) y la supresin de NKCC1 en ratones (100 ) inhiban la secrecin de fluido y electrolitos por slo el 70% indican que otro mecanismo puede alimentar el proceso de secrecin. La inhibicin parcial de la secrecin glandular por el Na + / H + intercambiador de inhibidor de la amilorida y por el Cl - / HCO 3 - DIDS inhibidor del intercambiador ( 228 , 268 ,312 ) sugiri que estos transportadores que actan en concierto median la parte de la membrana basolateral Cl - captacin necesaria para luminal Cl secrecin.El Na + / H + intercambiador familia incluye cinco miembros que se expresan en la membrana plasmtica NHE1-NHE5 ( 33 , 319 ), y el Cl - / HCO 3 -intercambiadores de familia incluye cuatro miembros AE1-AE4 ( 8 ). Funcionales (274 , 285 , 473 , 474 ), inmunolgica ( 99 , 274 , 375 estudios), y moleculares (99 , 407 ) identifican el pncreas y acinares salivales membrana basolateral celular Na + / H + intercambiador de isoforma como NHE1 y el Cl - / HCO 3 -intercambiador isoforma como AE2. NHE1 y AE2 son ubicuos, como funcin de las amas de casa de pH citoplasmtico, y se activan por pequeos cambios en el pH intracelular (pH i ). NHE1 es activado por pH cido i ( 16 ) para extruir el cido generado por el metabolismo celular, mientras que AE2 es activado por el pH alcalino i para extruir excesiva de base citoslica ( 318 ). En virtud de la regulacin de pH i en reposo y las clulas estimuladas, NHE1 y AE2 estn involucrados en muchas funciones celulares que en las glndulas secretoras incluyen la mediacin de parte del fluido de clulas acinares y la secrecin de electrolitos. En efecto, la supresin de NHE1 ( 28 ) y AE2 ( 116 ) en ratones dio lugar a fenotipos graves. Aunque los fenotipos graves impidieron el uso de los ratones para estudiar el papel de NHE1 y AE2 en funciones de las glndulas exocrinas in vivo, los ratones knockout fueron tiles para demostrar el papel funcional de NHE1 y AE2 en clulas secretoras aisladas. 5. TMEM16A/ANO1 Se ha reconocido desde hace tiempo que Cl - salidas clulas acinares por una va conductora ( 187 ) que ms tarde se demostr que el apical Ca 2 + -activated Cl -canal (CACC) ( 17 , 201 , 338 ). El canal ha sido ampliamente caracterizado biofsicamente ser una tensin, y Ca 2 + , el canal exteriormente rectificar en funcin del tiempo activado ( 225 , 276 ). Sin embargo, la identidad molecular de la canal eludi extensas bsquedas hasta hace poco. Varios familia CLC ( 276 ) y bestrophins (la mejor), en particular Best2 ( 187 ), se han sugerido como la identidad molecular de CACC. Sin embargo, la caracterizacin de expresadas va heterloga mejores canales no recapitular completamente de las caractersticas de la CACC nativo ( 225 ), y la supresin en ratones mostraron que Best2 no es el acinares CACC ( 364 ). Recientemente, tres grupos independientes han utilizado diferentes enfoques para identificar TMEM16A/Anoctamin 1 (ANO1) como la CACC en varios tipos de clulas ( 43 , 387 , 463 ). Por otra parte, TMEM16A/ANO1 se expresa en altos niveles en la membrana luminal de salival ( 387 , 463 ) y las clulas acinares pancreticas ( 167 ), desmontables de TMEM16A/ANO1 de siRNA reduccin de la secrecin salival ( 463 ), y knock-out en ratones elimin la CACC actividad en las clulas acinares ( 364 ). No fue posible utilizar ratones con supresin global de la TMEM16A/ANO1 para estudiar su papel en la funcin de la glndula secretora, desde TMEM16A/ANO1 se requiere para el desarrollo de las vas respiratorias y la mayora de los ratones mueren en el tero o poco despus del nacimiento ( 362 ). Delecin dirigida de TMEM16A/ANO1 es necesaria para superar este problema y para examinar ms a fondo el papel de TMEM16A/ANO1 en las clulas acinares y la funcin glandular. TMEM16A/ANO1 se expresa en las clulas acinares, pero no el conducto. Desde el conducto tambin expresa CACC (129 , 469 ), es posible que el conducto expresa otra isoforma de la familia TMEM16, que consta de 10 miembros ( 225 ). Esto se discute ms adelante. 6. Aquaporins Transcelular de iones resultados secrecin del flujo de agua osmtica obligatorio.Aunque el agua puede atravesar la bicapa de la membrana, el flujo de agua en las clulas secretoras se ve facilitada por el canal de agua acuaporinas (AQPs). La familia AQP consta de 13 miembros, todos los cuales pueden funcionar como canales de agua, pero algunos pueden transportar otras molculas como el glicerol, la urea, iones, y CO 2 ( 429 ). Los AQPs estn implicados en varias funciones celulares, incluyendo la adhesin celular, la proliferacin, la migracin, y la supervivencia celular ( 429 ). Aunque nuestro conocimiento del complemento de AQPs expresadas en las glndulas secretoras no es completa y, en algunos casos contradictoria, la expresin y tal vez la funcin de varios AQPs se asocia con varias enfermedades de las clulas secretoras, como el sndrome de Sjgren (81 ) y la pancreatitis ( 211 , 317 ). Cuando est presente en las glndulas, los AQPs muestran un patrn de expresin altamente restringido y especfico de clulas. Por ejemplo, AQP1 se expresa en las clulas endoteliales y mioepiteliales de glndulas salivales ( 16 ), mientras que se encuentra en

el conducto pancretico humano ( 212 ), en las clulas centroacinares, y en ambas los dominios apical y basolateral de conductos intercalados y intralobulillar ( 42 ) .Sin embargo, la supresin de AQP1 en ratones no tiene efecto sobre la funcin de la glndula salival ( 274 ), sin embargo, la supresin de AQP1 en ratones resulta en defectos de procesamiento de grasa en la dieta ( 256 ), y la insuficiencia pancretica exocrina en LXR - / - ratones se asoci con una reduccin AQP1 en la expresin ( 112 ). Esto sugiere que quizs los AQPs tienen funciones de clulas especficas en diferentes clulas acinares. Otra posibilidad es la adaptacin de las glndulas salivales a AQP1 eliminacin. El AQP establecido en las clulas acinares es AQP5, que se expresa en la membrana luminal de las clulas acinares de las glndulas salivales ( 81 ). Un papel crtico de AQP5 en la secrecin de fluidos glndula salival se estableci por nocaut en ratones ( 8 , 274 ) y el trfico aberrante de AQP5 en los pacientes con sndrome de Sjgren ( 99 , 375 , 407 ). AQP5 nocaut en ratones reduce la secrecin de la glndula salival en ms de un 60% ( 274 ) y los cambios en el volumen celular romas en respuesta a la perturbacin osmtica ( 319 ). Un mecanismo regulador clave de la actividad AQP5 es el trfico a la membrana plasmtica en respuesta a la estimulacin de clulas ( 8 ). Adems, AQP5 parece regular la permeabilidad al agua de la va paracelular. Supresin de AQP5 interrumpe la integridad de la unin estrecha y reduce la permeabilidad paracelular agua ( 99 ). Trata de AQP5 en la membrana plasmtica se altera en las glndulas salivales de pacientes con sndrome de Sjgren ( 99 , 375 , 407 ). El conducto de la glndula salival segrega poco lquido ( 67 , 276 ) y no expresa AQP5 ( 260 ) o AQP1 ( 16 ). Sin embargo, deliberadamente, la transferencia de genes de AQP1 para el conducto de la glndula salival result en un marcado incremento en la secrecin de fluido de las glndulas salivales y el aumento de Na+ en el fluido secretado ( 113 ). Transducidas AQP1 se expresa en la membrana luminal de la rata ( 285 ) y mini cerdos conductos de las glndulas salivales ( 116). Esto es una reminiscencia de la expresin de AQP1 en el conducto pancretico (211 - 213 ), que secreta la mayor parte del lquido en el jugo pancretico y no absorbe el Na + . La interpretacin ms simple de estas observaciones es que el pncreas y conductos de las glndulas salivales tienen diferentes permeabilidades al agua, y la permeabilidad al agua de la membrana luminal de los conductos dicta su funcin en las glndulas secretoras. En las glndulas salivales, el conducto regula principalmente la composicin de electrolitos del lquido secretado, mientras que el conducto pancretico determina tanto la composicin de electrolito y el volumen del fluido segregado. Adems, la AQP1 expresado puede reducir la funcin de ENaC en los conductos de las glndulas salivales para permitir que la red Na + flujo de salida que se requiere para alimentar la secrecin de fluidos. C. Modelo y el Reglamento

La informacin disponible sobre la localizacin y funcin de clulas acinares transportadores de iones conduce al mecanismo de las clulas acinares y la secrecin de fluido de electrolito se ilustra en la FIGURA 2 . Fluido clulas acinares y secrecin de electrolitos es alimentada por la basolateral Na + -K + -ATPasa de la bomba, que establece Na intracelular + a ~ 20 mM y K intracelular +a ~ 140 mM ( 65 , 222 , 339 , 341 ). El basolateral NKCC1 y NHE1 son las principales vas de Na + afluencia que alimenta la Na + -K + -ATPasa de la bomba ( 473 , 474 ). Los basolateral Ca 2 + -activated K + canales establecidos el potencial de membrana de -50 a -60 mV ( 187 , 334 ). NKCC1 es la principal va de Cl - afluencia en las clulas acinares y junto con el Cl - / HCO 3 -intercambiador AE2 establece Cl intracelular - a ~ 60 mM, que es cinco veces por encima del equilibrio electroqumico ( 187 , 476 ). NHE1 y AE2, adems, fij el pH a ~ 7,2 citoplsmica ( 274 , 284 , 285 , 297 ), que es un orden de magnitud por debajo de la H + equilibrio electroqumico, y el protector contra la gran fluctuacin en el pH i . Los principales transportadores en la membrana luminal son el Ca 2 + -activated Cl - canal TMEM16A/ANO1 ( 225 , 364 ) y el canal de agua AQP5 ( 81 , 219 , 257 ). La clula acinar unin estrecha es permeable al Na +y es la principal ruta transcelular de Na + de flujo ( 238 , 276 , 408 ).

Figura 2. Un modelo que representa el mecanismo de las clulas acinares y la secrecin de fluido de electrolito. Se muestran los principales transportadores en las membranas basolateral y luminal de las clulas acinares y su regulacin. La principal Cl- transporte de carga en la membrana basolateral es NKCC1, con parte de la Cl carga (~ 30%) que produce la actuacin paralela de NHE1 y AE2. El potencial de membrana se determina por dos Ca 2 + -activated K + canales, la MaxiK y Ik1 canales. TMEM16a/Ano1 es el mayor Ca 2 +-activated Cl - canal en la membrana luminal, que tambin expresa el canal de agua AQP5. Fluid y la secrecin de electrolitos por las clulas acinares se rige por Ca 2 + -receptores de la movilizacin y es un Cl -proceso de secrecin de motor. El receptor-evoc [Ca 2 + ] i aumento inicia en el polo apical donde los Ca 2 + se encuentran complejos de sealizacin para activar TMEM16a/Ano1. El Ca 2 + seal se propaga hacia el polo basal para activar los K + canales. El Ca 2 + canales resultados activacin mediada en luminal Cl eflujo y basolateral K +flujo de salida. Na + fluye entonces a travs de la unin estrecha al espacio luminal. La secrecin de NaCl conduce a flujo de salida de agua a travs de la AQP5 y la contraccin de la clula. Contraccin de la clula reduce la [Ca 2 + ] i para inhibir el Cl - y K + canales y al mismo tiempo activa el NKCC1 volumen sensible (y NHE1 y AE2) para restaurar Cl intracelular - y K + . El ciclo se repite durante cada pico de Ca 2 + oscilaciones.

Fluido de clulas acinares y la secrecin de electrolitos es un Ca 2 + -proceso iniciado y regulado que puede ser aumentada por el AMPc / PKA sistema. El proceso de secrecin se inicia por un aumento de la [Ca 2 + ] i . Como se ha indicado anteriormente, el receptor-evocado fisiolgica Ca 2 + de la seal es en forma de Ca 2 + oscilaciones que inician en el polo apical y propagacin al polo basal en forma de propagadas Ca 2 + olas ( 197 , 209 , 418 ) . En consecuencia, la activacin de la apical de Cl - canal es el paso clave que inicia fluido de las clulas acinares y la secrecin de electrolitos ( 225 , 364 , 463 ). Una vez que el Ca 2 + ola llega a la membrana basolateral, se activa el K + canales ( 296 , 334 ,365 ). La activacin de la Cl - y K + canales conduce a Cl - flujo de salida en el espacio luminal y K + flujo de salida en el espacio intersticial. El Ca 2 + aumento tambin activa AQP5 ( 185 , 186 ). Por lo tanto, KCl flujo de salida es seguido por el flujo de salida de agua a travs de la AQP5 obligatoria para el espacio luminal y contraccin de la clula ( 8 , 17 , 338 ). Para compensar la carga negativa debido a Cl - secrecin, Na + cruces de la basal para el lado luminal principalmente a travs de la ruta paracelular, lo que resulta en la secrecin de NaCl. Encogimiento celular tiene dos consecuencias: facilita la reduccin de la [Ca 2 + ] ia la lnea base, y activa afluencia de iones a travs de la membrana basolateral.Por lo tanto aumentar en volumen de la celda facilita y una disminucin del volumen celular disminuye el Ca 2 + seal ( 201 , 291 ), por la modulacin de la PI3 mediada por Ca 2 + liberacin y el SOC mediada por Ca 2 + afluencia ( 248 ,328 ). Reduccin de la [Ca 2 + ] i al nivel basal inhibe la Cl - y K + canales para detener temporalmente la secrecin de fluidos y electrolitos. Lo ms importante, el encogimiento celular activa la NKCC1 volumen sensible ( 138 , 160 ), NHE1 ( 5), y AE2 ( 8 ). El mecanismo molecular para la activacin de NHE1 y AE2 por contraccin de la clula no se entiende bien, a pesar de que implica la activacin de varias quinasas, como la PKC y p38 MAPK, y la inhibicin de la PP1 ( 332 ).Contraccin de la clula conduce a la fosforilacin de NKCC1 por el volumen sensible SPAK quinasa ( 77 ). Aunque probable, an no se ha establecido el papel de estos mecanismos de regulacin en funcin de las glndulas secretoras,. Los NKCC1 media activadas la mayor parte de la Na + , K + , y Cl - captacin para restaurar el contenido inico y el volumen de las clulas acinares. El activado AE2 y NHE1 contribuyen ~ 30% de la Na + y Cl - transporte. Restauracin del volumen celular y el contenido inico se prepara la clula para el prximo ciclo de Ca 2 + -fluido regulado y la secrecin de electrolito que se produce durante cada pico de Ca 2 + oscilaciones. El ciclo del proceso secretor est altamente sincronizada, y los Ca 2 +oscilaciones son seguidos de cerca por la oscilacin de Cl intracelular - (y probablemente K + ) que son seguidos por oscilaciones en el volumen celular (107 , 108 ). Por otra parte, la sincronizacin se extiende a la totalidad de los acinos que funcionan como un sincitio. El sincitio acinares se acopla por uniones hechas de conexinas 26 y 32 ( 272 ). Seccin anteriorSeccin siguiente

V. DUCTAL FLUIDO Y HCO 3 - Secrecin

A. Informacin general Durante mucho tiempo, los estudios de la funcin ductal zaga estudios de la funcin acinar. Los factores que contribuyen fueron que los acinos secretan las protenas, como las enzimas digestivas y mucinas, y la mayor parte del fluido en el caso de las glndulas salivales, que se consideraban la funcin central especializado de las glndulas secretoras. Adems, los conductos comprenden slo entre el 5% (pncreas y partida) y 20% (submandibular) del volumen de la celda glndula, que un acceso limitado a los conductos. Los avances en las tcnicas moleculares, celulares y fisiolgicos en los ltimos 25 aos cambiaron esto y revelaron la identidad molecular, funcin y regulacin de los transportadores de iones ductal en las membranas basolateral y luminal ( 276 ,475 ). Los principales descubrimientos son la identificacin de los canales de aniones en la membrana luminal, tales como CFTR y CACC, la identificacin de la basolateral Na + -HCO 3 - cotransportador ( 234 , 475 ), que ha demostrado ser crtico para pancretica HCO 3 - secrecin ( 181 ) y clonado como pNBC1 ( 1 ) y ms tarde fue renombrado NBCe1-B ( 35 ). Un gran avance se hizo con el descubrimiento de la familia SLC26 de Cl - / HCO 3 - intercambiadores ( 161 ) y el reconocimiento de su papel esencial en el epitelio HCO 3 - secrecin ( 92 , 216 ).Sin embargo, otro hallazgo significativo fue el descubrimiento de HCO 3 -absorcin de mecanismos como NHE3 ( 234 , 252 ) y NBC3 (NBCn1-A) ( 252 , 330) en la membrana luminal del pncreas y de los conductos salivales, que sugirieron los conductos absorben y limpian HCO 3 en el estado de reposo. Los principales transportadores de iones expresadas en las membranas luminal y basolateral del conducto se resumen en la Tablas 1 y 2 , respectivamente, y se ilustran en la Figura 3 . Expresin y localizacin de membrana de estos transportadores se han demostrado en el pncreas y los

conductos salivales, incluyendo la de ENaC, que se expresa slo en la membrana luminal de los conductos de las glndulas salivales ( 66 , 67 ). En consecuencia, conductos de las glndulas salivales absorben Na + de la saliva, mientras que el conducto pancretico no absorbe, pero segrega Na + en el jugo pancretico.

Un modelo que representa el mecanismo de lquido ductal y HCO 3 -secrecin. Se muestran los principales transportadores en las membranas basolateral y luminal de las clulas del conducto. En el pncreas, la secrecin ductal es impulsado por HCO 3 - secrecin. La principal HCO 3 - mecanismo de carga es la basolateral Na + -HCO 3 -cotransportador NBCe1-B. Luminal HCO 3 - secrecin est mediada por el complejo de CFTR-Slc26a6. El conducto tambin expresa la HCO 3 -mecanismos de rescate NHE3 y NBCn1A. El salival, pero no el de pncreas, el conducto tambin expresa ENaC en la membrana luminal (*). El funcionamiento de los transportadores en el fluido ductal y HCO3 - secrecin se ilustra en la figura. 6

B. Las clulas de los conductos transportistas electrolitos 1. Na + -K + -ATPasa El Na + -K + -ATPasa de la bomba est abundantemente expresado en la membrana basolateral de la pncreas y los conductos salivales ( 258 , 372 , 403 ,414 ). El principal Na + -K + -ATPasa de la bomba junto con el basolateral K +canales utiliza y convierte la energa qumica en el ATP a la energa osmtica en la forma de la Na + y K + gradientes y un potencial de membrana negativo, la cual el fluido de combustible y la secrecin de electrolito por el conducto. El Na +gradiente se utiliza para HCO 3 - acumulacin en el citosol, y el potencial de membrana facilita HCO 3 - flujos por los transportistas electrgenos en las membranas basolateral y luminal. 2. K + canales Aunque la actividad de varios K + canal se ha demostrado en clulas de los conductos, la identidad molecular de la K importante + canal no est completamente establecido. En el conducto pancretico, canales MaxiK son los candidatos probables que mantienen un potencial de membrana negativo durante HCO 3 - secrecin ( 125 ). Estos canales estn activados por Ca 2 + , tienen un gran conductancia (125-250 pS), y se codificada por el KCNMA1 gen ( 30 ). En informes anteriores, se pensaba que los canales MaxiK estar localizado en la membrana basolateral de las clulas de los conductos pancreticos ( 300 ). Sin embargo, un estudio reciente revel que los canales de MaxiK se expresan en la membrana luminal de las clulas de los conductos pancreticos del conejillo de Indias ( 427 ). Esta localizacin puede explicar el aumento de Ca 2 + sensibilidad de los canales MaxiK a la cAMP / PKA va, y puede contribuir a la secrecin de secretina ductal inducida

( 125 ). Adems, la activacin de los canales de MaxiK luminal puede dar cuenta de parte de la potenciacin de fluido del conducto y HCO 3 - secrecin por Ca 2 + movilizacin de receptores. Tambin se observ la localizacin luminal de los canales MaxiK en conductos de las glndulas salivales ( 290 ). Esta localizacin sugiere que otra K + canales deben expresarse en la membrana basolateral del conducto. En efecto, los canales de MaxiK no parecen contribuir a la celda conducto de potencial de membrana en reposo, posiblemente debido a que tienen una probabilidad de apertura muy bajo en el estado no estimulado. Un potencial basolateral de K + es un canal de Ba 2 +canal sensible a la de 82 pS conductancia, que es el canal principal responsable de la K en reposo + permeabilidad ( 307 ). A este respecto, como se indic anteriormente, las glndulas salivales expresan dos K + canales: el MaxiK ( 296 ,363 ) y los Ik1 canales ( 27 , 147 ). Los conductos de las glndulas salivales absorben Na + y secretan K + en el fluido salivar. Supresin de la KCNMA1 gen que codifica para MaxiK no tuvo ningn efecto sobre la secrecin de fluido de la glndula salival ( 363 ), pero deterioro de K + secrecin ( 290 ), el establecimiento de MaxiK como el canal que controla K + flujo de salida y determina el potencial de la membrana luminal. Dado que la supresin de la KCNN4 y los KCNMA1genes en ratones reducida disponibilidad del receptor estimulada por fluido y K +por la secrecin de las glndulas salivales ( 365 ), es probable que LK1 es el K +canal en la membrana basolateral del conducto. Los ratones con delecin nica y conjunta de los KCNN4 y KCNMA1 genes deben permitir hacer frente a este problema de manera directa en los conductos salivales y pancreticas. 3. Na + -HCO 3 - cotransportadores HCO 3 - secrecin requiere HCO 3 - entrada en la membrana basolateral de caractersticas de transporte adecuados para mantener HCO 3 - acumulacin en el citoplasma. La bsqueda de este tipo de mecanismos identific un Na + / H +actividad de intercambio con las propiedades de NHE1 y Na + -HCO 3 -cotransport (NBC) la actividad con las propiedades de lo que se conoci como NBCe1-B en la membrana basolateral del pncreas de rata conducto ( 474 ). Tras el descubrimiento inicial de la actividad NBC en el conducto pancretico de rata, actividad similar se demostr en todas las dems especies examinadas, incluyendo el conducto de conejillo de indias ( 179 , 350 ). El basolateral NBC isoforma fue clonado a partir del pncreas y nombrado pNBC1 ( 1 ). Tras la identificacin de todos los miembros de la superfamilia de Na + -impulsado HCO3 - transportistas, que pas a llamarse NBCe1-B ( 35 ). NBCe1-B se expresa en la membrana basolateral de la mayor parte, si no todos, los epitelios, incluyendo acinares de la glndula salivar y clulas de los conductos ( 252 ). Mientras NHE1 funciona como un intercambiador de electroneutro, NBCe1-B es un transportador de electrognico con ms probable 1Na + -2HCO 3 -estequiometra, aunque NBCe1-B estequiometra parece depender del tipo de clula en la que se expresa ( 132 ), y puede ser alterado por la fosforilacin dependiente de PKA en la Ser-1026 ( 131 ). El electrognico NBCe1-B utiliza el Na+ gradiente de forma ms eficiente que NHE1 acumular citoslica HCO 3 - y de hecho media NBCe1-B el grueso de basolateral HCO 3 - de entrada durante fluido ductal y HCO 3 - secrecin ( 181 , 184 ). Significativamente, NBCe1-B se comporta como un 1Na + -2HCO 3 - cotransportador cuando se expresa en una lnea celular ductal pancretico ( 132 ). Aunque la estequiometra del transporte no se midi directamente en los conductos pancreticos nativas, que se considera que es 1Na+ -2HCO 3 - en el conducto estimulada, ya que interviene en HCO 3 - afluencia travs de la membrana basolateral ( 408 ), que en una membrana potencial de -60 mV slo es posible con una 1Na + 2HCO 3 - estequiometra. La actividad de NBCe1-B est regulada por la protena llamado Irbit ( 398 , 461 ), el mecanismo y la importancia de que se discute a continuacin. El conducto tambin expresa una NBC electroneutro en la membrana luminal ( 330) que se clon como NBC3 ( 346 ) y posteriormente renombrado NBCn1-A. El hallazgo de Na + y HCO 3 - absorcin de los mecanismos en la membrana luminal de los conductos pancreticos y salivales fue inesperado. Al igual que en el caso de NHE3 ( 3 ), NBCn1-A ( 330 ) est regulada por CFTR en un AMPc / PKA dependiente de forma. La estimulacin de CFTR con PKA conduce a la inhibicin de NHE3 y NBCn1-A ( 3 , 330 ). NHE3 ( 151 ) y tal vez NBCn1-A ( 35 ) tambin se activan por Irbit (ver ms abajo). Basado en su regulacin por Irbit y CFTR estimulado, hemos propuesto que NHE3 y NBCn1-A son parte de una HCO 3 - de regulacin de complejo en el conducto, que sirve como una HCO 3 - mecanismo de salvamento que mantiene jugo pancretico se acidific ( 119 , 265 ) y de la saliva ( 252 ) en el estado de reposo. 4. CFTR CFTR se descubri que la protena mutada en la fibrosis qustica ( 200 , 359 , 367). Desde su descubrimiento, CFTR se convirti en una de las protenas ms extensamente estudiado y sirve como modelo para entender la

funcin de las protenas de estructura y funcin similar. CFTR (ABCC7) pertenece a la ATP vinculante cassette (ABC) superfamilia de transportadores. La mayora de los transportadores ABC funcionan como bombas de membrana para molculas orgnicas, que transportan sus sustratos contra el gradiente electroqumico usando la energa generada a partir de la hidrlisis de ATP ( 75 ). A diferencia de otros transportadores ABC, CFTR tiene actividad de canal de aniones que lleva a cabo la molcula sustrato por el gradiente electroqumico. CFTR funciona como una pequea conductancia (5-10 pS) Cl - canal con un lineal de corriente-voltaje (I-V relacin) que se activa por el AMPc / PKA va ( 415 ). Canales con propiedades similares se han identificado en el pncreas y las glndulas salivales clulas de los conductos de muchas especies, incluyendo los seres humanos. La presencia de CFTR en la membrana luminal del pncreas y conductos de las glndulas salivales ahora ha sido firmemente establecida en muchas especies mediante tcnicas de inmunohistoqumica ( 49 , 408 , 470 ). Funciones CFTR como Cl - canal con una permeabilidad limitada a HCO 3 - en Cl intra y extracelular normal, - las concentraciones ( 246 , 343 , 391 ). En gran parte sobre la base de modelado por ordenador, se ha sugerido que CFTR puede funcionar como un HCO 3 - canal en el conducto pancretico ( 182 , 314 , 356 ,391 , 441 ). Sin embargo, varios hallazgos clave indica que CFTR mediada HCO 3 -flujo tiene un papel limitado y definido en ductal HCO 3 - . secrecin 1 ) El pncreas y los conductos salivales expresan luminal, Cl DIDS sensible - / HCO 3 -actividad de intercambio ( 236 , 428 , 475 ) que est mediada por los luminales SLC26 transportadores ( 409 , 437 ). 2 ) CFTR est regulado por Cl extracelular e intracelular - , y en un Cl extracelular - superiores a 30 mM, no transportar una cantidad significativa de HCO 3 - ( 391 , 452 ). 3 ) Cl - tiene que ser eliminado del espacio luminal para el conducto para secretar HCO 3 - a travs de CFTR ( 182 ,327 ). 4 ) Supresin de Slc26a6 perjudica el fluido ductal y HCO 3 secrecin (437 ). Por lo tanto, si bien por tener una HCO 3 - canal-selectiva en la membrana luminal de los conductos de secrecin es tericamente posible para secretar fluido que contiene 200 mM de HCO 3 - en un potencial de membrana de -60 mV, el CFTR P HCO3 / P Cl es entre 0,2 y 0,5 en clulas de los conductos pancreticos cuando se mide con Cl simtrica - soluciones ( 314 , 404 ). Con esta relacin de la permeabilidad, el canal de aniones CFTR segrega Cl - mucho ms rpido que HCO3 - , por lo que CFTR sera incapaz de secretar suficiente HCO 3 - para dar cuenta de la mayor parte de la secretada HCO 3 - . Por ltimo, la secrecin de fluidos requiere osmtica HCO 3 - secrecin. Intercambio estricta de HCO 3 - de Cl - por CFTR no dar lugar a la secrecin de soluto osmtico. Sin embargo, CFTR mediada HCO 3 - flujo puede llegar a ser importante en la parte distal de los conductos para determinar el final de HCO 3 - concentracin en el fluido segregado. Una forma nica de regulacin de la actividad CFTR descubierto recientemente es por la va WNK / SPAK. Las quinasas WNK fueron descubiertos en la bsqueda de homlogos MAPK, y la familia se compone de cuatro miembros con un dominio conservado quinasa, pero diversa NH 2 y COOH termini (revisado en ref. 165 ). El inters en los WNKs aument mucho con el descubrimiento de que las mutaciones en WNK1 y WNK4 causa hipertensin en humanos ( 446 ). Los WNKs actan principalmente mediante la regulacin de la expresin en superficie de Na + , K + , y Cl - transportadores ( 195 ), a travs de la regulacin de su endocitosis ( 166 ). Trabajos posteriores revelaron que muchas de las funciones de los WNKs estn mediadas por la quinasa aguas abajo oxidativo de respuesta al estrs 1 (OSR1) y cinasa prolina / alanina-rica STE20/SPS1-related (SPAK) (revisado en ref. 78 ). La va de la quinasa WNK / SPAK parece tener funciones duales en el conducto. En fisiolgica normal [Cl - ] i , las quinasas WNK reducen la expresin de superficie de CFTR ( 459 , 460 ). En las glndulas salivales y pancreticas, el acto WNKs a travs SPAK para controlar la actividad de NBCe1-B y CFTR, y desmontables de la WNKs y SPAK aumenta estimulado fluido del conducto pancretico y HCO 3 secrecin ( 460 ). Sin embargo, a bajo citoplasmtica [Cl - ] i , como ocurre en el conducto distal, la va WNK / SPAK parece tener un papel opuesto. El CFTR HCO 3 - permeabilidad parece estar regulada dinmicamente por Cl intracelular - ( 327 ). Durante la secrecin pancretica, [Cl - ] i puede caer hasta un mnimo de 5 mM. Este [Cl baja - ] i a su vez activa WNK1 y la OSR1 aguas abajo y SPAK. La activacin de la va WNK1/SPAK a baja [Cl - ] i condiciones dio lugar a un aumento de la CFTR HCO 3 -permeabilidad, haciendo CFTR principalmente una HCO 3 - canal ( 327 ). La funcin de CFTR como HCO 3 - canal en el conducto distal podra ser esencial para la secrecin de jugo pancretico que contiene 140 mM de HCO 3 . Por lo tanto, parece que en condiciones de reposo y en el conducto proximal de la va WNK / SPAK reduce NBCe1-B y la actividad del CFTR para estabilizar el estado de reposo y tal vez minimizar HCO 3 - flujos a travs de CFTR. Por otro lado, en el conducto distal, la va WNK / SPAK cambia CFTR a partir principalmente Cl - canal a HCO 3 - canal para establecer el final de HCO 3 - concentracin en los fluidos secretados.

Adems de Cl - y HCO 3 - actividad del canal, funciones de CFTR como un regulador central de fluido del conducto y la secrecin de electrolitos en virtud de la regulacin de la funcin de muchos transportadores en la membrana luminal del conducto. El papel central de CFTR en funcin ductal est bien ejemplificado por el fluido aberrante y transporte de los electrolitos y la insuficiencia pancretica se ve en los pacientes con FQ ( 95 ). CFTR existe en un complejo macromolecular en la membrana luminal del epitelio secretor, que se monta con la ayuda de protenas de andamiaje. Los tres aminocidos en el extremo COOH-terminal de CFTR forma un PDZ ligando que se une al dominio PDZ que contiene andamios en epitelios ( 399 , 435 ). Adems, CFTR interacta con las protenas SNARE, AKAPs, quinasas, fosfatasas y ( 136 ). En los complejos, CFTR directa o indirectamente regula la actividad de varios transportadores. Se reportaron interacciones funcionales con CFTR por ENAC, exteriormente rectificar Cl -canales, Ca 2 + -activated Cl - canales, ROMK2 y KvLQT1 K + canales, los transportistas, SLC26 NBCn1-A (NBC3), y tal vez acuaporinas ( 223 , 238 ) . A continuacin se discute la importancia de varias de estas interacciones para la secrecin ductal. 5. CaCCs CaCCs estn presentes en la membrana luminal de las clulas de los conductos (126 , 129 , 428 , 469 ). La identidad molecular de ductal CACC es an desconocido. El descubrimiento de la familia TMEM16/Anoctamin (ANO) como la CACC en las clulas acinares ( 43 , 387 , 463 ) sugiere que la CACC ductal es probable que un miembro de esta familia. Sin embargo, la inmunotincin TMEM16A/ANO1 muestra que se expresa en la membrana luminal de acinares, pero no clulas de los conductos ( 387 , 463 ). Hasta la fecha, varios miembros de la familia TMEM16/ANO demostraron funcionar como Cl canales, incluyendo TMEM16B/ANO2, TMEM16G/ANO7, TMEM16J/ANO10, y tal vez TMEM16F/ANO6 (410 ). Humanos y de pncreas de roedor y el conducto salival mRNA expreso por varios miembros de la familia, incluyendo TMEM16/ANO TMEM16B/ANO2, TMEM16F/ANO6 y TMEM16J/ANO10 (Lee y Muallem, observaciones no publicadas). Aunque TMEM16F/ANO6 se inform recientemente de funcionar como un codificador de fosfolpido ( 414 ), que tambin puede funcionar como Cl- canal. Ser interesante determinar cmo se relacionan las dos actividades de TMEM16F/ANO6. Si las otras isoformas TMEM16/ANO tambin median CACC ductal espera ms estudios. El inters por la CACC ductal se deriva de la posibilidad de que pueda reemplazar el Cl - la funcin del canal de CFTR. Estudios en el pncreas humano conducto Panc1 lnea celular ( 480 ) plantean cuestiones en cuanto a la viabilidad de ese papel. Por otra parte, un aumento en [Ca 2 + ] i solo por la estimulacin de la colinrgico y los receptores de CCK no evoca fluido y HCO significativa 3 -secrecin por el conducto pancretico ( 464 ), y la simulacin de colinrgica de las glndulas salivales produce bajo HCO 3 - la secrecin ( 45 ). El P HCO3 / P Clde TMEM16A expresado heterloga es 0,1-0,5 en [Ca 2 + ] i niveles normalmente inducidas por la estimulacin del receptor. Curiosamente, el P HCO3 / P Clpermeabilidad de TMEM16A parece estar regulada por [Ca 2 + ] i (Lee, observaciones no publicadas). El papel fisiolgico de este hallazgo en el epitelio HCO 3 - secrecin no se conoce en la actualidad. 6. Cl - / HCO 3 - intercambiadores: AES y los transportistas SLC26 El conducto pancretico se segrega la mayor parte del lquido en el jugo pancretico. La secrecin de lquido abundante debe implicar transporte de sal transcelular neta grande. Desde el conducto pancretico absorbe el Cl - y secreta lquido que contiene Na + y HCO 3 - , y desde Na + es en gran medida la secrecin de paracelular, se deduce que el conducto pancretico HCO 3 -secrecin debe ser un proceso activo y un 1Cl - / 1HCO 3 - cambio, ya sea en transporte enganchados o no enganchados, no puede conducir a la secrecin de electrolitos neta necesaria para conducir la secrecin de lquido. Esto pone un termodinmica limitan en cuanto a la naturaleza de la Cl - absorbente y HCO 3 -mecanismo secretor que debe funcionar con una estequiometra de HCO 3 - / Cl -> 1. Vamos a discutir a continuacin que el SLC26 transportador Slc26a6 cumple este requisito y es fundamental para el fluido del conducto pancretico y la secrecin de electrolitos. Debido a la ausencia de la actividad de CFTR en los resultados de CF en el jugo pancretico cida, se asumi que media la CFTR directamente el Cl fuertemente acoplado - absorcin y HCO 3 - secrecin o funciones en concierto con Cl - / HCO 3 - intercambio de mediar HCO 3 - secrecin por el conducto ( 49 , 170 , 408). Un modelo temprano para pancretica HCO 3 - sugiri que la secrecin de Cl electroneutro - / HCO 3 intercambiador en la membrana apical media HCO 3 - en conjunto con la secrecin de Cl - canal que los ciclos de la Cl - ( 238 , 404 , 405 ,408 ). Posteriormente, se revel que media la CFTR Cl apical - actividad de los canales y que la actividad de la apical de Cl - / HCO 3 - intercambiador depende de la expresin de CFTR ( 236 , 239 ). Por otra parte, las mutaciones CFTR asociadas con la insuficiencia pancretica mostraron un defecto grave en Cl CFTR dependiente de - / HCO 3 - actividad de intercambio ( 62 ). Estos hallazgos

llevaron a una bsqueda exhaustiva para identificar la naturaleza molecular y la funcin del luminal ductal Cl - / HCO 3 - intercambiadores. La primera familia de Cl - / HCO 3 - intercambiadores de considerarse son miembros del transportista soluto 4 (SLC4) familiar ( 366 ). Los conductos no expresan el transportador SLC4 AE2 (SLC4A2), pero se encuentra en la membrana basolateral de pncreas y conductos de las glndulas salivales ( 373 , 375 ). AE2 junto con NHE1 es esencial para la regulacin del pH i y protege las clulas contra una carga de lcali, pero no parece jugar un papel importante en transcelular ductal HCO 3 - transporte. Un gran avance en nuestra comprensin de luminal Cl -/ HCO 3 - cambio en el epitelio se hizo con el descubrimiento de que la protena previamente identificada como downregulated en adenoma (DRA) es un Cl -transportador altamente expresado en la membrana luminal del colon, y que mutaciones en DRA conducen a la enfermedad congnita Cl - diarrea ( 161 , 283 ).Poco despus, se demostr que la DRA funciona como un Cl - / HCO 3 -intercambiador ( 275 ). Con el cambio de nombre de la familia, la DRA se design de nuevo SLC26A3 y se encontr que se expresa en la membrana luminal de varios epitelios. El transportador de la familia SLC26 (SLC26Ts) consta de 11 genes y 10 miembros (SLC26A10 es un pseudogene) con varios miembros asociados con enfermedades humanas (para una revisin, ver ref. 92 ). Los miembros de la familia tienen diversas propiedades funcionales ( 316 ), con SLC26A1 y SLC26A2 funcionamiento como SO 4 2 - transportistas ( 264 ), SLC26A3 y Slc26a6 electrognico como Cl - / HCO 3 intercambiadores ( 214 , 453 ), SLC26A4 como Cl electroneutro - / HCO 3 - / I - intercambiador ( 393 ), SLC26A5 funciona como un anin regulada, la protena de deteccin de voltaje del motor ( 379 ), y SLC26A7 ( 205 ) y SLC26A9 ( 91 funcionan como Cl bona fide) - canales. La funcin de SLC26A11 no se conoce en la actualidad. Pncreas y conductos de las glndulas salivales expresan varios miembros de la familia, incluyendo el ubicuo SLC26A2 y SLC26A11 y Slc26a6 ( 216 , 316 ), con glndulas salivales tambin expresar SLC26A4 ( 393 ). En particular, SLC26A3 funciona como un Cl electrognico - / HCO 3 - con un intercambiador de 2Cl - / 1HCO 3 -estequiometra ( 216 , 392 ), mientras que Slc26a6 funciona como un 2HCO 3 - / 1Cl - intercambiador ( 210 , 392 ). SLC26A3 y Slc26a6 tambin puede mediar en las corrientes de aniones no acoplados, con el tipo de transporte determinado por un residuo de glutamato que se conserva en todas las especies y en todos SLC26Ts ( 315 ). Slc26a6 es el principal Cl - / HCO 3 - intercambiador en los conductos salivales y pancreticas y es esencial para el fluido y HCO 3 - secrecin por los conductos (393 , 409 , 437 ). Slc26a6 fue inicialmente identificado en la bsqueda de nuevos SLC26Ts ( 249 ), y como el transportador de oxalato en el tbulo proximal renal (210 ). Oxalato manipulacin por Slc26a6 media la homeostasis de oxalato por oxalato de secretar al lumen intestinal, y la supresin de Slc26a6 resultados en urolitiasis debido a un aumento de la carga renal de oxalato ( 190 ). Oxalato de transporte por Slc26a6 no es probable que sea relevante para el conducto pancretico, pero puede tener un papel en esta patologa glndula salival ( 143 ).Una caracterstica importante de la SLC26Ts y CFTR es su regulacin mutua. Por lo tanto el dominio STAS en el extremo COOH de los SLC26Ts interacta con el dominio R de CFTR, y se requiere la interaccin para la activacin tanto de los SLC26Ts y de CFTR ( 216 ). Este modo de regulacin se discute ms adelante. 7. Na + / H + intercambiador

Los Na + / H + intercambiador (NHEs) son 1Na electroneutro + / 1H +intercambiadores. El anlisis filogentico indica que la familia de genes catin / protn alcalino de mamferos (el portador SLC9A soluto o de la familia de NHE) se compone de tres grupos de genes generales: 1 ) cinco de membrana de plasma Na+ NHES-selectivos (NHE1 NHE5); 2 ) cuatro cationes organoides NHEs no selectivos (NHE6-NHE9), y 3 ) dos alejadas genes NHE-como la llaman, Na + / H+ antiporter 1 (NHA1) y NHA2, que tiene ms de homologa con el hongo / planta NHA1 y NhaA bacteriana ( 36 , 320 ). El NHE1 limpieza ubicua es esencial para el pH i la homeostasis ( 28 ) y se localiza en la membrana basolateral en clulas de los conductos ( 152 , 234 , 252 , 329 , 373 ). Adems, NHE1 puede proporcionar una porcin de HCO 3 - afluencia travs de la membrana basolateral durante HCO3 - secrecin. Sin embargo, NHE1 contribucin a HCO 3 - afluencia debe ser de menor importancia, ya que la inhibicin de NHE1 por amilorida tiene un efecto mnimo en el lquido secretina-estimulado y HCO 3 - secrecin por el conducto pancretico en la mayora de las especies ( 426 , 449 ). NHEs tambin se expresan en la membrana luminal de los conductos salivales y pancreticas ( 252 , 329 ), que puede salvar HCO 3 - cuando HCO 3 - secrecin no es necesario. El jugo pancretico a velocidades de flujo en reposo o bajo es cida y contiene un alto nivel de CO 2 , lo que indica que un activo H + mecanismo secretor es funcional en este estado ( 119 , 265 ). NHE2 y NHE3 se localizan en la membrana luminal del interlobulares y pancretico principal del ratn y glndulas salivales conductos

( 33 , 234 , 252 , 266 , 329 ). El papel de NHE2 no est claro ya que la delecin de NHE2 en ratones no tena ningn fenotipo obvio, alteraciones en la homeostasis del pH, o HCO 3 - metabolismo en varios rganos que expresan NHE2 ( 388 ), incluyendo el pncreas ( 234 ) y las glndulas salivales conductos ( 99 , 252 ). Por otro lado, la supresin en ratones mostr que el NHE3 es funcional en la membrana luminal del conducto ( 3 ). En particular, el NHE3 luminal se asocia con CFTR con la ayuda de protenas de andamiaje PDZ que contienen, y su actividad est regulada por CFTR en el HCO 3 - transporte de complejo ( 3 ). Adems, la actividad de NHE3 est regulada por Irbit ( 150 , 151 ) (ver ms abajo). 8. V-tipo H + bomba y H + -K + -ATPasa bombas Los primeros estudios en cerdos sugieren que un V-tipo vacuolar H + -ATPasa de la bomba puede funcionar como un HCO 3 - mecanismo de carga en la membrana basolateral del conducto ( 432 ). Estos estudios se basaron principalmente en los inhibidores farmacolgicos con especificidad incierta. A este respecto, no hay efecto de H + se encontr inhibicin de la bomba de fluido y HCO 3 - secrecin en el conducto de conejillo de indias ( 184 ). El conducto de la glndula salival se inform para expresar un H de tipo V + -ATPasa de la bomba que se desplaza de orgnulos intracelulares a la membrana luminal a la acidosis crnica ( 377 ). Sin embargo, no hay evidencia funcional est disponible para demostrar la participacin de la bomba de cido (en lugar de HCO 3 - ) en la secrecin de los conductos salivales. El tema de ductal H + bombas fue revisado recientemente en el conducto pancretico de rata, para concluir funcin de dos H + -K + -ATPasa bombas en el conducto, el estmago y las bombas de tipo no gstricas ( 311 ).Inmunolocalizacin sugiri que ambos H + -K + -ATPasa bombas se expresan en las membranas laterales y luminal. Sobre la base de estudios de inhibidores, la H+ -K + -ATPasa bombas se muestran para mediar modesta H + aclaramiento desde el citosol de clulas de los conductos acidificados ( 311 ). Sin embargo, la inhibicin de las bombas con omeprazol y SCH-28080 inhibi fuertemente la secretina estimulada por la secrecin de fluido del conducto ( 311 ). La inhibicin de la secrecin de lquido por la inhibicin de la H + -K + -ATPasa bombas parece ser la evidencia ms fuerte para su expresin y funcin en el conducto.Funcionamiento de H + -K + -ATPasa en las bombas de la membrana basolateral puede ser de importancia que las bombas pueden generar un gran H hacia el interior + gradiente usando la energa en ATP. El gstrica H + -K + -ATPasa de la bomba genera el gradiente inico ms pronunciada en las clulas de mamfero de seis rdenes de magnitud ( 397 ). Tal una bomba en la membrana basolateral puede funcionar con NBCe1-B para mejorar notablemente HCO 3 - carga del conducto de fluido durante estimulado y HCO 3 secrecin. Sin embargo, este tema necesita estudios adicionales in vivo e in vitro utilizando los ratones disponibles con alteracin dirigida de la H + -K + -ATPasa bombas para establecer y comprender mejor la funcin de estas bombas en funcin pancretica y salival ductal de la glndula. 9. Aquaporins Dado que la va paracelular es permeable al agua, los primeros modelos de la secrecin de lquido epitelial pensaban que el agua fluye hacia abajo de su gradiente osmtico de la basolateral a la cara luminal a travs de la ruta paracelular. De hecho, una parte significativa del agua secretada por la glndula salival acinos hace fluir a travs de la ruta paracelular ( 145 , 287 ), incluyendo en las glndulas salivales de AQP5-/ - ratones ( 199 ). Sin embargo, el flujo de agua a travs de la ruta paracelular no puede dar cuenta de la mayor parte de la glndula salival y el flujo de agua de pncreas. Ahora est claro que una porcin significativa del transporte de agua est mediada por AQPs, y es un proceso regulado. Hay por lo menos 13 genes AQP (AQP0-AQP12) en clulas de mamferos ( 430 ). Aunque varios miembros de la familia AQP se ha informado que se expresa en el pncreas exocrino ( 171 ), AQP1 y AQP5 parecen ser las principales AQPs en el conducto pancretico. Inmunolocalizacin indica la expresin de AQP1 en ambos las membranas basolateral y luminal, y AQP5 en la membrana luminal de las clulas de los conductos pancreticos ( 42 , 212 , 213 ). En particular, el conducto de la glndula salival no expresa AQP1, pero cuando transducidas con AQP1 en la rata ( 24 , 80 ) y mini-cerdo ( 113 ), que segrega un gran volumen de fluido, destacando la funcin e importancia de AQP1 en el membrana luminal de la secrecin de lquido por el conducto. 10. El ENAC Al igual que muchos otros epitelios, los conductos de las glndulas salivales expresan el epitelial de Na + canal ENaC en la membrana luminal ( 49 , 66 ). ENaC parece ser el principal Na + absorcin de va en el conducto de la glndula salival.Supresin de tanto NHE2 y NHE3 no tuvo efecto sobre ductal Na + absorcin, pero la inhibicin de la ENaC por amilorida inhibe tanto Na + y Cl - absorcin por el conducto en las glndulas estimuladas ( 49 ). Estos hallazgos sugieren que el principal papel de los NHEs es HCO 3 -

salvamento en el estado de reposo, ya que estn inhibidas en el estado estimulado cuando CFTR se activa ( 3 , 234 ). ENAC est regulado ampliamente aguda y crnica de mltiples vas fisiolgicas, como se espera de su funcin central en epitelios sensibles a la sal ( 229 ). En el conducto de la glndula salival, la estimulacin de los receptores P2Y2 luminal y basolateral inhibe la actividad del ENaC por una toxina pertussis-sensible y una toxina de la tos ferina independientes de las vas ( 313 ). El mecanismo exacto por el cual los receptores P2Y2 regulan ENaC es desconocida en la actualidad, a pesar de que puede implicar, en parte, el agotamiento de los PIP 2 , que activa ENaC (224 , 468 ). De particular importancia fisiolgica es la regulacin de ENaC por los receptores que estimulan el suero y glucocorticoides inducida por la quinasa 1 (SGK1), incluyendo mineralocorticoides, tales como la aldosterona ( 229 ). Reglamento de ENAC por sgk1 es bifsica. En la primera fase que se ha completado en ~ 30 min, activado SGK1 aumenta la expresin en superficie de la Na + -K + -ATPasa de la bomba en la membrana basolateral y de ENaC en la membrana luminal sin afectar a su transcripcin y traduccin. En la segunda fase que requiere de 6-8 h, SGK1 aumenta la transcripcin y la traduccin de ENaC ( 229 ). Expresin en la superficie ENaC est regulado por un mecanismo de endocitosis bien definido que implica la ubiquitina ligasa Nedd4-2 ( 370 ). Nedd4-2 regula ENaC por la interaccin de Nedd4-2 dominios WW con los motivos ricos en prolina (PY) (PPPxYxxL) situados en los extremos COOH de la , , y subunidades de ENaC (142 ). Nedd4-2 luego polyubiquitinates las subunidades ENaC para causar su internalizacin por endocitosis de vesculas de clatrina recubiertos ( 434 ).Nedd4-2 parece interactuar principalmente con ENaC madura, y la interaccin requiere su localizacin en caveolas y la interaccin de Nedd4-2 y ENaC con caveolina-1 ( 230 ). La clave de la regulacin de la expresin y la actividad ENaC por Nedd4-2 se demostr recientemente in vivo por que muestra que la supresin de Nedd4-2 en el pulmn aumenta notablemente la actividad ENaC y las vas respiratorias Na + absorcin para reproducir el fenotipo de pulmn observado en la fibrosis qustica ( 207 ). Sin embargo, si esto ocurre en la fibrosis qustica sigue siendo controvertido, puesto que el pulmn del modelo de fibrosis qustica porcino no muestra actividad ENaC alterado y Na + de absorcin ( 54 ). Reglamento de ENAC por sgk1 implica la fosforilacin de Nedd4-2 por sgk1 de residuos especficos. El fosforilada Nedd4-2 es secuestrado a continuacin, por los andamios 14-3-3 para prevenir su interaccin con y por lo tanto la inhibicin de la ENaC ( 229 ). La fosforilacin de Nedd4-2 por sgk1 se rige por las quinasas WNK, en funcin de los WNKs como andamios para reclutar tanto Nedd4-2 y sgk1 para mediar Nedd4-2 fosforilacin y la insercin superficial ENAC ( 156 ). Este sistema es funcional en el conducto de la glndula salival, ya que la modulacin de Nedd4-2 y SGK1 actividades tiene el efecto esperado sobre la funcin ENaC (86 , 354 ). Por otra parte, el tratamiento de las ratas con dexametasona y bajo Na+ dieta produjo marcada upregulation de y expresin ENAC (Lee y Muallem, observaciones no publicadas). Adems, ENaC y RTFQ parecen afectar a la actividad de uno al otro, pero en un modo que parece ser diferente de la que en el pulmn ( 29 , 49 ). En el pulmn, se propone CFTR para inhibir la funcin del canal ENaC, y la supresin de CFTR puede aumentar la actividad ENaC, que puede ser claramente demostrado en modelos in vitro ( 29 ). Sin embargo, en las glndulas salivales, la supresin de CFTR inhibe Na + absorcin por ENaC y la inhibicin de la funcin ENaC marcadamente inhibida Cl-dependiente de CFTR -absorcin ( 49 ). Supresin de CFTR result en casi una eliminacin de la expresin de ENaC ( 49 ). Esto probablemente explica la marcada reduccin de la actividad de ENAC en CF conductos del sudor del paciente ( 355 ). Ser de particular inters para determinar la expresin de CFTR y ENaC en diferentes tejidos en los diversos modelos de CF. C. Diversidad de otros canales y transportadores Varios transportadores muestran rgano-y la expresin especfica de la especie y sus roles se refiere al rgano y especfica de la especie. El conducto pancretico es nico entre los epitelios de absorcin y secrecin, como conductos de las glndulas salivales, en la que no expresa ENaC, y por lo tanto no absorbe Na + .De hecho, el conducto pancretico segrega Na + , que pasa a paracelular ( 14 ,408 ). Paracelular Na + es esencial para la secrecin de la secrecin de lquido por el conducto para mantener la electroneutralidad, y como un osmolito. NKCC1 (SLC12A2) muestra la expresin especfica de la especie. Se expresa en la membrana basolateral en una variedad de Cl - epitelio secretor y en la rata y el ratn ( 104 ), pero no en el cerdo y el conejillo de conducto pancretico porcino (104 , 134 ) o el conducto de la glndula salival ( 100 , 469 ) . NKCC1 mantiene [Cl- ] i por encima de su equilibrio, y por lo tanto facilita Cl - secrecin apical al Cl -canales se abren. Esto puede dar cuenta de la relativamente alta Cl -concentracin de la rata secretina-estimulado y jugo pancretico ratn y quizs la falta de fenotipo pancretico en los modelos de ratones con fibrosis qustica CFTR-/ - y Df / Df. La falta de actividad NKCC en el cerdo y el pncreas de cobaya ( 104 , 134 ) (y probablemente pncreas humano) podra explicar el fenotipo de pncreas grave en el hombre con FQ ( 445 ) y

los cerdos con CFTR suprimido ( 54 ). Como veremos ms adelante, un bajo ductal [Cl - ] i es requerida para la produccin de jugo pancretico con el final de 140 mM HCO 3 - . Para permitir que la alta HCO 3 concentracin en el jugo pancretico, la falta de NKCC1 en el cerdo y el conducto pancretico humano puede servir a este propsito. Seccin anteriorSeccin siguiente

VI. PROTENAS REGULADORAS DE FLUIDO epitelial y HCO 3- SECRECIN

Adaptadores A. PDZ-Based HCO 3 - por el conducto de transporte est mediada por mltiples transportadores que se ensamblan en complejos de protenas adaptadoras que contienen dominios PDZ. PDZ dominios fueron identificados como un dominio conservado en tres protenas postsinptica densidad-95, Disco-grande, y zonula occludens-1. El dominio PDZ es un mdulo de interaccin protena-protena que consiste en 80-90 aminocidos que normalmente se une a protenas diana que albergan secuencias COOH-terminales especficas denominadas motivos o ligandos de unin a PDZ ( 202 ). Dominios PDZ tienen dos funciones principales.1 ) Se protenas de anclaje, incluyendo las protenas integrales de membrana, tales como receptores, transportadores, canales y protenas de adhesin, a travs de sus motivos de unin a PDZ, y 2 ) se unen a los dominios PDZ de otras protenas PDZ, por lo tanto la formacin de redes de andamiaje mediadas por homo-y heteromultmeros ( 118 ). Inicialmente, adaptadores PDZ basados, se mostr a desempear un papel importante en la eficiencia y la fidelidad de la transmisin sinptica en las neuronas ( 202 ). Estudios posteriores revelaron que las clulas epiteliales expresan una batera de adaptadores con dominios PDZ y que estas protenas tienen papeles crticos en el fluido transepitelial y transporte de electrolitos. El papel de los adaptadores PDZ basadas en la secrecin ductal se ilustra en la Figura 4 .

Protenas ductales con ligandos PDZ que participan en el lquido y HCO3 - secrecin. Todos los receptores que estimulan la secrecin ductal y transportadores principales que median fluido ductal y HCO 3 -secrecin tienen ligandos PDZ, destacando el papel clave de los andamios PDZ en funcin ductal. Ver texto para ms detalles.

La primera familia de protenas PDZ se demuestre que estn involucrados en el transporte epitelial es el Na + / H + intercambiador factor regulador (NHERF) familia. NHERF1 (EBP50), NHERF2 (E3KARP) y NHERF3 (CAP70, PDZK1) facilitan la fosforilacin PKA-dependiente y el trfico de membrana de CFTR y NHE3 en las clulas epiteliales, incluyendo clulas de los conductos ( 90 , 439 ). En virtud de expresar mltiples dominios PDZ, estos adaptadores de montar un gran complejo proteico en la membrana apical en el que las funciones de CFTR como un regulador central de los epitelios secretores. El requisito de la CFTR y los SLC26 transportadores de fluidos y HCO 3 - secrecin por las clulas del conducto plante la cuestin de cmo CFTR y los transportistas SLC26 comunicar a regular HCO 3 - secrecin. La respuesta fue

proporcionada por el descubrimiento de la interaccin y la regulacin recproca de CFTR con el ductal HCO 3 - maquinaria secretora. Especficamente, la interaccin y la regulacin mutua de CFTR con el HCO 3 secretor de SLC26 transportadores (SLC26Ts) est mediada por el dominio fosforilado R CFTR y el dominio STAS SLC26Ts y se ve reforzada por la interaccin de CFTR y los SLC26Ts con protenas de andamiaje (PDZ 214 ).Adems, CFTR est implicada en la regulacin de la luminal HCO 3 - absorcin de transportadores de NHE3 y NBCn1-A mediante la formacin de un complejo de protenas a travs de adaptadores con mltiples dominios PDZ como NHERF1 y NHERF2 ( 3 , 252 , 330 ). Como resultado de ello, la va cAMP / PKA activa Cl CFTR y apical - / HCO 3 - intercambio e inhibe NHE3 y NBCn1-A ( 90 , 439 ). Montaje de un complejo con un gran nmero de transportadores con la ayuda de adaptadores PDZ mejora en gran medida la eficiencia de sealizacin y la fidelidad de la AMPc / PKA va en microdominios de membrana luminal dedicados. Tras la estimulacin con AMPc, CFTR activa HCO 3 secretor y, al mismo tiempo inhibe HCO 3 - de absorcin de transportadores para optimizar fluido y HCO 3 secrecin. Adems de los NHERFs, clulas de los conductos expresan varios otros andamios con dominios PDZ, tales como Shank2, S-SCAM, SAP97, y PSD-95 ( 117 , 203 ). La familia de protenas del vstago se descubri como andamios moleculares en las clulas neuronales, donde sirven como coordinadores de membrana y complejos de protenas citoplasmticas en la densidad postsinptica (PSD) ( 245 , 395 ). Los Shanks contienen varios dominios que interactan entre protenas, incluyendo ankyrin repite, una SH3, un PDZ, una regin rica en prolina, y un motivo estril (SAM) ( 395 ). La familia de la caa se compone de tres miembros, Shank1-3.Shank2 se concentra en el polo apical de las clulas de los conductos pancreticos y modula la actividad de CFTR y NHE3 ( 141 , 203 ). Expresin de Shank2 regula al alza la expresin en la membrana de CFTR y NHE3, y esto parece estar relacionado con la activacin de Rho GTPasas pequeas mediante la contratacin de Pix (factor de intercambio de PAK-que interactan), un factor de intercambio de nucletidos de guanina (GEF) para las pequeas GTPasas Rho ( 233). En contraste con las protenas NHERF que entregan seales de AMPc / PKA a CFTR y NHE3, Shank2 media un efecto inhibitorio sobre el AMPc / PKA va.Examen de las parejas de unin de Shank2 revel que Shank2 asocia con fosfodiesterasa 4D (PDE4D) que hidroliza cAMP, por lo tanto, la reduccin de la concentracin de cAMP local en los microdominios apicales ( 232 ). Estos resultados revelaron una forma nica de regulacin, lo que las seales opuestas pueden ser entregados a la misma PDZ vinculante motivo de una protena dada por diferentes adaptadores, que sirve como un sistema homeosttico para regular la intensidad del estado estimulado ( 232 ). En particular, la mayora ductal GPCRs tienen ligandos PDZ en sus extremos COOH (ver la fig. 4 ). Este recluta a los GPCR al complejo que resulta en el transporte de expresin polarizada de los GPCRs ( 240 , 241 , 360 , 396 ) y la entrega de los segundos mensajeros a los microdominios de iones que transportan. Esto debera permitir espacialmente confinada y mejor controlado de entrega del estmulo. Un buen ejemplo de tal disposicin es el receptor de VIP VPAC 1 , que se une a travs de su ligando PDZ a la molcula de andamio sinptica (S-SCAM), tambin conocida como la asociada a la membrana guanilato quinasa invertida-2 (MAGI-2) ( 117 ) . S-SCAM/MAGI-2 asociados con E-cadherina, una protena clave en la unin adherente, de una manera -catenina-dependiente ( 412 ) y reclutas VPAC 1 a la zona de unin en el polo apical de las clulas epiteliales. Por lo tanto S-SCAM/MAGI-2 confines VPAC 1 al dominio de unin para restringir AMPc inducida por VIP de sealizacin para activar CFTR en una microdominios en las proximidades de la polo apical. Esto, a su vez, permite electrolito eficiente y la secrecin de fluidos en respuesta a VIP con efectos mnimos sobre el interior de la clula ( 117 ). Figura 4 muestras una lista de los muchos ductal HCO 3 - transportistas y GPCRs que tienen un ligando PDZ tpica en sus extremos COOH. B. Con-No-lisina y estriles quinasas 20-Like Recientemente, dos familias de protenas quinasas, las quinasas con-no-lisina (WNK) y la estril 20 (STE20)como quinasas, han surgido como sensores osmticos que modulan la actividad de los diversos transportadores de iones ( 13, 195 , 358 ). La familia WNK fue descubierto por la bsqueda de (MAPK) homlogos de la protena quinasa activada por mitgenos ( 454 ) y se encontr que falta la lisina conservada en el sitio cataltico de la quinasa. Estructura cristalina del dominio quinasa mostr la lisina es aportado por la 2, en lugar de la hebra 3 ( 279 ). La familia consiste en cuatro grandes miembros de protena con slo el dominio quinasa altamente conservado ( 165 ). Los WNKs ganaron la prominencia con el descubrimiento seminal que las mutaciones en WNK1 y WNK4 conducir a la hipertensin en humanos ( 446 ). Extensos estudios posteriores de su funcin mostraron que WNK1, WNK3, y WNK4 funcin principalmente para reducir la expresin en la superficie de diversos Na + , K + , y Cl -transportadores, incluyendo NKCC1, NKCC2, NCCT, KCCT, ENaC, ROMK, y Cl -canales ( 165 , 166 , 195 , 358 ), incluyendo CFTR

( 459 , 460 ) y Slc26a6 ( 194 ).Los WNKs reducir transportistas expresin en la superficie, promoviendo su endocitosis ( 149 , 166 ). En la mayora de los casos examinados, los WNKs no actan directamente sobre los transportadores de iones, sino que actan sobre las quinasas aguas abajo, las quinasas STE20 como pak y OSR1. Los WNKs pueden fosforilar la SPAK/OSR1 en su T-loops, que activa el SPAK/OSR1 y SPAK/OSR1 activado fosforila los transportadores de iones para disparar su endocitosis ( 358 ). En varios casos, la funcin quinasa de los WNKs no se requiere para la regulacin de los transportadores de iones. En estos casos, el acto WNKs como andamios protenas que se unen SPAK/OSR1 para reclutar a los transportadores ( 13 , 149 , 156 , 165 , 460 ). La funcin de andamiaje de los WNKs reside en sus primeros 119 residuos ( 149 , 156 , 460 ). Las mutaciones en humanos WNK1 y WNK4 resultado en la inhibicin de la NKCC2, PTNC, y endocitosis ENaC para aumentar su expresin en la superficie en el rin, lo que lleva a un exceso de Na + absorcin y la hipertensin ( 166 , 195 , 358 ). WNK1 ( 327 , 446 , 460 ), WNK3 ( 460 ), WNK4 ( 446 , 460 ), SPAK y OSR1 ( 327 ,460 ) se expresa abundantemente en sistemas de conductos, incluido el pncreas ( 327 , 460 ) y conductos de las glndulas salivales ( 460 ). Estudios recientes de nuestros laboratorios revelaron que la va WNK / SPAK parece tener la doble funcin en la regulacin de la funcin ductal en los estados de reposo y estimulado. La va WNK / SPAK estabiliza el estado de reposo ductal mediante la reduccin de la expresin en la superficie prominente de todos los transportadores implicados en el fluido ductal y HCO 3 - secrecin ( 460 ). As, el acto WNKs como andamios en la que slo un corto segmento de la WNK NH 2 -terminal de dominio que carece de la funcin de quinasa ( 156 , 460 ) se une y recluta SPAK a la Na + -HCO 3 - cotransportador NBCe1-B (pNBC1) y CFTR para reducir su expresin en la superficie y reducir drsticamente su actividad en la membrana plasmtica ( 460 ). La va WNK / SPAK tambin reduce la expresin en la superficie ( 327 ) y la actividad ( 194 , 327 ) de los ductales SLC26 transportadores. En particular, desmontables de los WNKs aumenta la actividad de ductal NBCe1-B y CFTR, y estimula la secrecin de fluido del conducto ( 460 ). La inhibicin prominente de fluido del conducto y la secrecin de electrolito por la va de WNK / SPAK sugiere que la va WNK / SPAK estabiliza el estado de reposo del conducto. Regulacin de la actividad WNK/SPAK/OSR1 quinasa in vivo no se conoce bien, y en su mayor parte, no se sabe cmo estas quinasas se activan por estimulacin de los receptores de la superficie celular o durante los cambios de la actividad celular. Una excepcin bien establecida es la regulacin de las quinasas WNK/SPAK/OSR1 por estrs osmtico. Las quinasas WNK, incluyendo WNK1, se activan por estrs osmtico, tales como la causada por una disminucin en la [Cl- ] i . El WNK1 activado fosforila y activa a continuacin el SPAK y OSR1 quinasas (358 ). En efecto, cuando el pncreas humano de clulas del conducto line Panc1 y conductos de cuyes se exponen a bajas Cl externa e intracelulares - , la va WNK1/SPAK/OSR1 afecta la funcin de dos apical HCO 3 - transportistas ( 327 ).El WNK1/SPAK/OSR1 modifica CFTR Cl - / HCO 3 - selectividad para aumentar la CFTR HCO 3 - permeabilidad apical e inhibe Cl / HCO 3 - cambio por los SLC26 transportistas. Cuando se producen en la porcin terminal del conducto pancretico estimulado, las dos funciones se traducir en el jugo pancretico que contiene HCO 3 - a una concentracin mayor que 140 mM. C. Irbit

Irbit fue descubierto varias veces en diferentes contextos ( 84 , 461 ), la ltima en una bsqueda de protenas que interactan con el IP 3 dominio de unin de las PI3 receptores (IP 3 Rs) ( 11 ). Irbit compite con IP 3 para la interaccin con NH 2 -terminal de dominio de IP 3 R para inhibir la funcin de la PI 3 Rs y Ca 2 + de sealizacin ( 10 , 83 ). Bsqueda subsiguiente de las protenas que interactan con Irbit Irbit descubri que interacta con y regula la actividad de la Na + -HCO3 - cotransportador NBCe1-B ( 398 ). Existen dos isoformas altamente homloga Irbit, una corta y una larga Irbit, con la larga Irbit tener un NH 2 -terminal de extensin ( 12 ). Los dominios comunes a IRBITs cortas y largas se ilustran en laFigura 5 e incluyen un NH 2 terminal PP1 sitio de anclaje que es seguido por un dominio de plagas ( 82 , 84 ), un dominio enrollado de la bobina, y un ligando PDZ al final de la COOH terminal ( 84 ). El dominio plaga tiene mltiples sitios de fosforilacin ( 10 ), con la fosforilacin de residuos clave (S68, S72, y S74) se requiere para todas las funciones Irbit conocidos, incluyendo la regulacin de IP 3R ( 10 , 83 ) y la activacin de transportadores de iones ( 398 , 462 ). La larga Irbit tiene un NH 2 -terminal de extensin rica en prolinas y alaninas, que diferencia las funciones de los IRBITs corto y largo ( 12 ).

Figura 5. El IRBIT/PP1 y WNK / SPAK vas en funcin ductal. El modelo superior muestra los lmites de los dominios Irbit conocidos. El principal modelo ilustra la funcin de Irbit en glndulas de secrecin de fluidos y HCO 3 secrecin. Irbit es un regulador clave de fluido del conducto y HCO 3 - que regula la secrecin de ambos los estados de reposo y de la secrecin estimulada ductal.Andamios PDZ montar un complejo de la membrana basolateral compuesto por NBCe1-B, las quinasas WNK / SPAK y Irbit (que puede contratar la fosfatasa PP1 al complejo). Existe un complejo similar en la membrana luminal con CFTR y quizs Slc26a6 como los principales transportadores. En el estado de reposo, las quinasas WNK / SPAK fosforilan todos los transportadores para reducir su expresin en la superficie y por lo tanto la actividad. Parte de Irbit es secuestrado por IP 3 R y parte est obligado a NHE3 y NBCn1-A para activarlos y afectar as HCO 3 - de salvamento. Tras la estimulacin de clulas reclutas Irbit PP1 a los complejos, que anula la funcin de la va de WNK / SPAK y dephosphorylates el HCO 3 - transportadores que secretan para aumentar su expresin en la superficie. Irbit a continuacin, se une y neutraliza el efecto de la HCO 3 - transportadores secretoras de dominios inhibitorios. Los efectos combinados estabilizan el estado secretor del conducto. La estimulacin mutua de CFTR y Slc26a6 en los complejos aumenta an ms la secrecin de ductal.

En el conducto, Irbit se acumula en el polo apical ( 462 ), un sitio de alto nivel de expresin de IP 3 R, pero IP 3 Rs y por lo tanto Irbit tambin estn presentes en el polo basal ( 241 ). En la Irbit polo apical regula CFTR ( 460 , 462 ), y, posiblemente, NHE3 ( 151 ) y NBCn1-A ( 35 ), mientras que en el polo basal Irbit regula NBCe1-B ( 398 , 460 , 462 ). Los NBCs son miembros de la superfamilia de Na + -junto HCO 3 Transportadores (NCBT), que incluye el electrognico NBCe1-A ~ C y la electroneutro NBCn1-A ~ H ( 35 ). La estructura de dominio y la funcin de los NCBTs se discuten en varias revisiones recientes ( 35 , 347 ). Cabe destacar que las primeras 45 a 62 residuos de la NH 2 terminal de varias NBCTs, incluyendo los resultados de eliminacin de marcada activacin de los NCBTs relevantes (NBCe1-B y NBCn1-A, forma un dominio inhibidor y 270 ). Es importante destacar que, Irbit interacta con el NH 2 terminal de dominio inhibitorio de NBCe1-B para activar marcadamente NBCe1-B ( 398 ). La activacin de NBCe1-B por Irbit est mediada por el dominio de plagas ( 398 , 462 ) y requiere los ligandos PDZ para ensamblar el complejo Irbit-NBCe1-B ( 462 ). Estos hallazgos sugieren que Irbit induce un cambio conformacional en NBCe1-B para disociar su NH 2 -terminal de dominio inhibidor de la transmembrana dominios mediar el transporte de iones. En particular, Irbit activa el NBCe1-B nativa de pncreas ( 460 , 462 conductos de las glndulas salivales () y 460 ). La activacin de NBCe1-B por Irbit Irbit indica que debe tener un papel destacado en la regulacin del epitelio HCO 3 - secrecin. En efecto, desmontables de Irbit marcadamente inhibida pncreas fluido del conducto y HCO 3 - secrecin ( 462 ).Otra funcin importante de Irbit es la coordinacin de la secrecin de ductal mediante la regulacin de la actividad de CFTR en la membrana luminal del conducto. Por lo tanto, Irbit activa el CFTR ductal nativo y CFTR se expresa en el sistema modelo de la interaccin directa con

CFTR para aumentar CFTR probabilidad de apertura ( 462 ). Como se encontr con NBCe1-B, la activacin de CFTR por Irbit est mediada por el dominio de plagas y es asistido por ensamblaje de complejos de IrbitCFTR a travs de sus ligandos PDZ ( 462 ). Los hallazgos en el conducto nativa y con expresado NBCe1-B y CFTR se resumen en el modelo enla Figura 5 , que ilustra cmo Irbit coordina lquido epitelial y HCO 3 secrecin. La activacin de NBCe1-B y CFTR por Irbit establece el estado ductal estimulada de fluidos y HCO 3 secrecin. Esto plantea la cuestin de cmo se establece el estado de reposo del conducto y si Irbit comunica con los reguladores del estado de reposo. La inhibicin de la CFTR ( 459 , 460 ) y Slc26a6 ( 194 , 327 ) por las quinasas WNK llevaron a examinar el papel de las quinasas WNK / SPAK en el conducto y su comunicacin con Irbit ( 460 ). Como se discuti anteriormente, el primero 120 NH 2 -terminal de los residuos de los WNKs aguas arriba de la funcin de dominio quinasa como andamios ( 149 , 156 , 460 ) que reclutan SPAK a NBCe1-B y CFTR. A su vez, fosforila SPAK NBCe1-B y CFTR para causar su endocitosis y la inhibicin de lquido ductal y HCO 3 - secrecin ( 460 ).Significativamente, Irbit anula la funcin de la va de WNK / SPAK mediante la contratacin de la fosfatasa PP1 a dephosphorylate NBCe1-B y CFTR, insertarlos en las membranas basolateral y luminal, respectivamente, y estimular el fluido del conducto y HCO 3 - secrecin ( 460 ) ( figura . 5 ) . Como se indic anteriormente, otro componente del estado de reposo del conducto es HCO 3 - salvamento por el luminal NHE3 y NBCn1-A ( 234 , 252 ). Es de notar que otros miembros de la Na + -impulsado HCO 3 transportadores tienen un NH 2 -terminal de dominio similar a la de NBCe1-B ( 35 ), incluyendo la NBCn1 electroneutro y el Na + Cl-dependiente - / HCO 3 - intercambiadores NDCBE. Por lo tanto, es posible que el NBCn1 ductal est regulada por Irbit, como fue sugerido ( 35 ). Sin embargo, no est claro que NBCn1 y NDCBE isoformas son activados por Irbit y si Irbit los activa por el mismo mecanismo que NBCe1-B, ya que el NH 2 -terminal de dominio de NBCe1-A ~ C, NBCn1-A ~ H, y NDCBE-A ~ D diferir sustancialmente. NHE3 tambin se inform que se modestamente activado por Irbit ( 150 ), que puede ser dependiente de citoplasmtica Ca 2 + ( 151 ).Curiosamente, NHE3 ( 3 ) y NBCn1 ( 330 ) se inhiben por CFTR en la membrana luminal. Por lo tanto, Irbit parece participar en el estado de reposo y estimulado.Es posible que en la parte del estado de reposo de Irbit est secuestrado por IP 3 R y parte de Irbit se asocia con NHE3 y NBCn1-A a promover HCO 3 - salvamento.Una vez que las clulas son estimuladas, Irbit puede disociarse del HCO 3 -transportadores de salvamento, interactuar con el HCO 3 - transportadores de secrecin, y estimular el fluido del conducto y HCO 3 - secrecin. El modelo de laFigura 5 ilustra las mltiples funciones de regulacin de Irbit. D. carbnico Anydrases Una clase de protenas esenciales para todos HCO 3 - funciones relacionadas son los anhidrasas carbnica (AC). El inhibidor de la acetazolamida mundial CA inhibe significativamente de pncreas ( 96 , 323 ) y mnimamente inhibe la saliva ( 465lquidos) y HCO 3 - secrecin. Otros estudios revelaron que las CA estn presentes en el HCO 3 - transporte complejos y suministro HCO 3 - a varios transportistas. Las AC interactuar fsicamente con y regular la actividad de varios HCO 3 - transportistas, incluyendo NBC y la AE y el SLC26A6 Cl - / HCO 3 -intercambiadores ( 271 ). Inmunolocalizacin indica la localizacin de CAII, CAIV, CAIX y CAXII en el conducto pancretico ( 303 ), y mltiples isoformas en conductos de las glndulas salivales ( 18 , 173 ). Varias de las CA ductal son citoplsmica, y varios son protenas integrales de membrana con el dominio cataltico en la superficie de la clula. No est claro en la actualidad que de estas CA se acopla directamente a la basolateral NBCe1-B y AE2 en los conductos.Curiosamente, el trfico de CAIV a la membrana luminal es dependiente de CFTR, y acetazolamida inhibe HCO 3 - transporte por SLC26A3 ( 103 ) y SLC26A6 ( 271 ).Estos resultados implican la participacin de la ductal CA en HCO 3 - transporte por el complejo de CFTR-SLC26Ts en la membrana luminal. Seccin anteriorSeccin siguiente

VII. ENFERMEDADES DE DUCTAL HCO 3 - SECRECIN

Alteracin del fluido y HCO 3 - secrecin estn asociados con varias enfermedades que afectan a diversos rganos, aunque el pncreas y conductos deferentes son los ms vulnerables a fluido aberrante y HCO 3 secrecin. La ms conocida de estas enfermedades es la CF ( 95 ). Es obvio por qu la falta de funcin de CFTR prcticamente elimina la funcin ductal. Sin embargo, CF tiene un espectro de fenotipos de leve a muy grave dependiendo de la mutacin y, ocasionalmente, incluso dentro de la misma mutacin ( 479 ), en particular con respecto a la funcin pulmonar ( 277 ). En particular, el genotipo-fenotipo CF mejor se correlaciona con el estado de la funcin pancretica ( 378 , 382 ). El examen de varias mutaciones sugirieron

que esto se relaciona con la capacidad de CFTR para apoyar HCO 3 - transporte ( 62 ), probablemente mediante la estimulacin de los SLC26 transportadores. Otra enfermedad asociada con la aberrante HCO 3 - secrecin es pancreatitis ( 71 ,212 , 413 ). La pancreatitis es una enfermedad inflamatoria que resulta en la destruccin del pncreas por las toxinas que afectan a las clulas acinares y el conducto ( 237 ). Las formas ms comunes son los clculos biliares y pancreatitis alcohlica, aunque se conocen otras muchas causas de la pancreatitis ( 139 , 324), incluyendo la pancreatitis autoinmune ( 212 , 342 ). Sin embargo, los casos significativos de la pancreatitis se consideran idioptica. El papel central de CFTR en la funcin ductal llev a la bsqueda de mutaciones CFTR asociadas a la pancreatitis ( 64 ). La bsqueda identific varias mutaciones CFTR que no dan lugar a cualquiera de los sntomas de la FQ bien definidos, pero se asocian con pancreatitis crnica ( 63 , 64 , 231 ). Un anlisis reciente de dos de estas mutaciones mostr que no tenan efecto en CFTR Cl - conductividad, pero redujo especficamente CFTR mediada HCO 3 - de transporte ( 385 , 440 ), haciendo hincapi adems en la importancia de HCO 3 - en funcin de la secrecin ductal. De particular inters es un estudio reciente que pregunta si la funcin de CFTR aberrante est asociada con formas idiopticas de la pancreatitis crnica ( 212 ).Los pacientes con pancreatitis autoinmune han reducido fluido y HCO 3 -secrecin. El examen de la localizacin de CFTR en las biopsias de pncreas mostr mislocalization de CFTR y su acumulacin en los compartimentos intracelulares ( 212 ). En particular, el tratamiento de los pacientes con corticosteroides corregir la localizacin de CFTR, restaurado pncreas HCO 3 -secrecin y gravedad de la enfermedad mejor ( 212 ). Por otra parte, los resultados preliminares sugieren que mislocalization CFTR similar ocurre en la pancreatitis alcohlica ( 212 ). Ser de particular inters para analizar la mayor expresin de CFTR en todas las formas de pancreatitis y, si aberrante, determinar si la correccin de CFTR localizacin reduce los sntomas de la enfermedad.Adems, ser informativo para determinar el destino de los SLC26 transportadores en la enfermedad, ya que estn estrechamente asociados con CFTR tanto fsica como funcionalmente ( 214 , 216 ). Otra enfermedad inflamatoria autoinmune en la que HCO 3 - por la secrecin de las glndulas salivales es aberrante es la boca seca, el sndrome de ojo seco enfermedad de Sjgren ( 7 ). La causa de la aberrante HCO 3 - secrecin no se conoce. Sin embargo, un estudio inform que el tratamiento de los pacientes con sndrome de Sjgren con el dao reducido prednisolona esteroides y aumento de la secrecin de las glndulas salivales ( 281 ). Los resultados del tratamiento de la pancreatitis autoinmune con corticosteroides ( 212 ) sugieren que CFTR, y tal vez SLC26 transportadores, localizacin y / o funcin se alteran en el sndrome de Sjgren para reducir HCO 3 - secrecin. Por otra parte, el fluido del conducto reducida y HCO 3 - secrecin en las dos enfermedades inflamatorias autoinmunes plantea la posibilidad de que otras enfermedades inflamatorias de las glndulas secretoras, tienden a reducir ductal HCO 3 - secrecin. HCO 3 - secrecin tambin se reduce en pacientes sometidos a tratamiento de radiacin para tumores de cabeza y cuello ( 7 , 93 ). En este caso, es probable que la radiacin dio lugar a dao de la clula ductal. El dao por radiacin es ms comnmente asociado con el dao oxidativo severo ( 2 , 477 ). Por lo tanto, es posible que otras formas de causa dao oxidativo reducen ductal HCO 3 -secrecin, en particular, considerando la posibilidad de que la actividad de CFTR es susceptible al dao oxidativo ( 389 ). En efecto, en los modelos de rata y de ratn de la pancreatitis inducida por el cido biliar, el estrs oxidativo causa una marcada reduccin en la funcin ductal que se puede prevenir por estimulacin in vivo de las vas de sealizacin que redujeron el estrs oxidativo ( 292 , 294 ).Anlisis de los transportadores de ductales en estas enfermedades debe revelar la causa de la enfermedad, sugiere modalidades de tratamiento, y aclarar an ms el mecanismo y la regulacin de fluido del conducto y HCO 3 - secrecin. Seccin anteriorSeccin siguiente

VIII. MECANISMO Y UN MODELO PARA DUCTAL HCO 3 -Secrecin

A. Conceptos bsicos
Una caracterstica nica del conducto en la mayora de las especies, incluyendo los seres humanos, es la secrecin de grandes cantidades de HCO 3 - con el conducto pancretico secretor de fluido que contiene tanto como 140 mM de HCO 3 - ( 238 ). En consecuencia, el mecanismo y la regulacin de epitelial HCO 3secrecin se entiende mejor en el conducto pancretico, y por lo tanto el modelo se discuten refleja mejor el mecanismo de fluido y HCO 3 - secrecin por el conducto pancretico. Sin embargo, aunque no se entiende en la misma medida, los datos disponibles indican que el mecanismo se discute a continuacin para el conducto pancretico es aplicable a otros conductos de las glndulas exocrinas con variaciones que satisfagan las glndulas especializacin, pero no se desvan de los principios bsicos.

El conducto segrega mayor parte del fluido en el jugo pancretico, y mientras se hace por lo que absorbe la Cl - y segrega HCO 3 - para generar jugo pancretico que contiene ~ Cl 20 mM - 140 mM y HCO 3 - . Esta tarea impone varios criterios para el mecanismo de fluido del conducto pancretico y HCO 3 - secrecin que se deben cumplir. En primer lugar, la basolateral HCO 3 - mecanismo de afluencia debe ser capaz de concentrarse HCO 3 - en el citosol conducto. En segundo lugar, el HCO 3 - mecanismo de eflujo en la membrana luminal debe ser capaz de concentrarse HCO 3 - en el espacio luminal, y la membrana luminal debe tener un bajo HCO 3 - fugas y mantener un potencial transcelular negativo. En tercer lugar, mientras que la absorcin Cl - y secretar HCO 3 - , el conducto pancretico debe mediar gran secrecin de sales transcelular neta necesaria para la secrecin de lquido abundante por el conducto. Dado que la nica osmolito secretado activamente por el conducto pancretico es HCO 3 - , la mayor parte de HCO 3 -secrecin no puede ocurrir por un osmticamente silencio HCO 3 - mecanismo de transporte, tales como junto electroneutro 1Cl - / 1HCO 3 - intercambio o desacoplado 1Cl - / 1HCO 3 - cambio por un Cl - - y HCO 3 - canales permeables, tales como CFTR o Cl - y K + cotransport por luminal Cl - y K + canales. Estas limitaciones especficas establecidas en la basolateral HCO 3 - mecanismo de afluencia y el luminal Cl - que absorbe y HCO 3 mecanismo secretor. La capacidad de la basolateral HCO 3 - mecanismo de absorcin debe exceder la capacidad de la basolateral HCO 3 - los mecanismos de eflujo, tales como AE2, y el luminal HCO 3 mecanismo de salida debe funcionar con una estequiometra de HCO 3 - / Cl - > 1 . El primer intento de explicar el fluido del conducto pancretico y HCO 3 -secrecin se hizo a finales de 1980 por Argent y la sentencia ( 14 ). Los principios bsicos de su modelo son la basolateral Na + / K + de la bomba y K + , que generan canales de Na + y K + gradientes y establecen el potencial de membrana que se necesita para alimentar la secrecin. A HCO 3 - entrada equivalente es proporcionada por NHE. HCO 3 - a continuacin, sale de la membrana luminal por medio de un Cl - / HCO 3 - intercambio que absorbe el Cl - , con recirculacin de Cl - que sale a travs de CFTR ( 14 , 408 ). Aunque el modelo no se ajusta a las limitaciones mencionadas anteriormente y por lo tanto no puede explicar fluido ductal y HCO 3 - secrecin, es un modelo importante llamar la atencin sobre el problema y estimular el estudio de la secrecin ductal. Varios descubrimientos clave llevaron a revisiones significativas de este modelo.La principal basolateral HCO 3 - mecanismo de afluencia se identific como NBCe1-B, que funciona como un 1Na + -2HCO 3 cotransportador ( 1 , 181 , 475). El principal luminal Cl - / HCO 3 - intercambiador en los conductos pancreticos y salivales se identific como Slc26a6 ( 216 , 249 ), que funciona como un electrognico, junto 1Cl - / 2HCO 3 - intercambiador ( 315 , 392 ) que interacta con CFTR, con Slc26a6 CFTR y la activacin de uno al otro ( 216 ).Modelado y estudios en los conductos pancreticos de cobaya sugiri un requisito para HCO 3 - la actividad del canal para establecer el jugo pancretico ltima HCO 3 - concentracin de 140 mM ( 404 , 405 , 441 ). Estos hallazgos llevaron a un modelo de dos etapas en el que inicialmente HCO 3 - est mediado por electroneutro Cl - / HCO 3 - de cambio. Superior HCO 3 - concentracin en el jugo pancretico se consigue mediante CFTR acta como HCO 3 - canal (para una revisin, vanse las referencias. 238 , 408 ). Un problema significativo con el modelo es que no da lugar a la secrecin de suficiente osmtica de HCO 3 - , mientras que la absorcin de la Cl - . Aunque el modelo puede generar un poco de flujo osmtico, no puede explicar la fisiologa o la secrecin de lquido por el conducto. As, en el potencial de membrana constante durante la secrecin de fluidos, cambio de 1:01 no cambiar el potencial transepitelial o generar un gradiente osmtico. En este modelo, el Cl - que entra en la clula a cambio de HCO 3 - sale a travs de CFTR, que debe llevarse a cabo para mantener el proceso en marcha. El Cl secretada - resultados en Na + secrecin, y la reduccin en Cl -concentracin en el jugo pancretico slo se logra debido a la dilucin por el fluido secretado. Sin embargo, cuando el luminal Cl - enfoques de equilibrio a ~ 80 mM, la fuerza motriz de HCO 3 - se elimina flujo de salida y la secrecin de lquido. Adems, el modelo no tiene en cuenta el alto HCO 3 - en el lquido secretado y no explica cmo CFTR puede realizar HCO 3 - a la porcin terminal del conducto. De intercambio de aniones Por lo tanto electroneutro y CFTR no pueden generar un fluido con la composicin del jugo pancretico humano. B. Un modelo de fluido del conducto y HCO 3 - Secrecin Los siguientes resultados se utilizaron para elaborar el modelo de la figura 6 .La prdida de pncreas HCO 3 secrecin en los pacientes con FQ ( 192 ) indica que CFTR desempea un papel crtico en HCO 3 secrecin. La actividad de la Cl apical del conducto - / HCO 3 - intercambiador se inhibe por DIDS ( 236 , 409 ) (que no inhiba CFTR) y es dependiente de la expresin de CFTR ( 236 , 239 ).Mutaciones CFTR asociadas a la insuficiencia pancretica presentan un defecto grave en Cl-dependiente de CFTR - / HCO 3 actividad de intercambio ( 62 ).Enganchados o no enganchados, canal mediada Cl 1:01 - / HCO 3 - de intercambio no puede explicar ni HCO 3 - , o secrecin de lquido por el conducto ( 155 ). HCO 3 - secrecin

debe ser un proceso osmticamente activa. Electrgeno HCO 3 - transportadores pueden generar un fluido con alta HCO 3 -concentraciones utilizando la fuerza motriz generada por el potencial de la membrana luminal negativo. Apical Cl - / HCO 3 - cambio por el conducto es electrognico con distinta Cl - / HCO 3 estequiometra ( 216 ). El conducto expresa Slc26a6 ( 214 , 216 ) que funciona como un 1Cl - / 2HCO 3 intercambiador ( 315 , 392 ). La va WNK / SPAK estabiliza el estado de reposo en la porcin proximal del conducto ( 460 ), mientras que la regulacin CFTR HCO 3 -selectividad y permeabilidad en la porcin distal del conducto, de conmutacin de CFTR en una HCO 3 - canal (permeable al 327 ) . Irbit gobierna fluido del conducto y HCO 3 - secrecin y anula la accin inhibidora de la WNK / SPAK va ( 460 ). Los resultados conducen a un modelo de dos etapas. En la etapa uno, el conducto proximal segrega la mayor parte de fluido y HCO 3 - secrecin que est mediada por Slc26a6 con CFTR reciclar el Cl - , la va WNK / SPAK regular el estado de reposo y Irbit establece el estado estimulado. En la segunda etapa, la va WNK / SPAK cambia CFTR de preferencia una HCO 3 - canal de secretar HCO 3 - y puso la final HCO 3 - concentracin en el jugo pancretico ( Fig. 6. ) .

La Figura 6. Un modelo de fluido del conducto pancretico y HCO 3 - secrecin.Fluido ductal y HCO 3 - secrecin es un proceso de dos etapas. En el conducto proximal, Irbit antagoniza el efecto de la va de WNK / SPAK para estimular la secrecin ductal. HCO 3 - se acumula en el citosol por conducto NBCe1-B y sale a la luz en su mayora por Slc26a6, que media 1Cl - / 2HCO 3 - intercambio con el reciclaje del CFTR Cl - . Esto resulta en una secrecin osmtica de HCO 3 - que junto con transcelular de Na + flujo a travs de la ruta paracelular impulsa la secrecin de fluidos. El agua es secretada por AQP1. El conducto proximal por lo tanto absorbe parte de la Cl - y segrega tanto como 100 mM de HCO 3 - para mediar la secrecin de una gran fraccin del fluido en el jugo pancretico. A medida que el fluido llega a las porciones ms distales del conducto, el luminal Cl reducida - y el resultado CFTR activado en un Cl intracelular - concentracin ([Cl - ] i ) de <10 mM. El [Cl baja - ] i activa WNK1 que fosforila SPAK/OSR1, que, a su vez, acta sobre CFTR para cambiar su Cl - / HCO 3 - selectividad, conversin a un principalmente HCO 3 - canal. Al mismo tiempo, la va de

WNK / SPAK inhibe la funcin de Slc26a6 para evitar HCO 3 -reabsorcin. HCO 3 - flujo de salida por CFTR determina as la final HCO 3 - concentracin en el lquido secretado. Con la fuerte Na hacia el interior + gradiente de ~ 15 veces, 1Na + -2HCO 3 -cotransport por NBCe1-B lleva a la acumulacin de activos de citoslica HCO 3 - .La secrecin de HCO 3 - por el 1Cl - / 2HCO 3 intercambiador de Slc26a6 conduce a la secrecin osmtica de HCO 3 - . El movimiento obligatorio de Na + a travs de los resultados va paracelular en Na neta + -HCO 3 - que impulsa la secrecin de flujo de salida de agua por AQP1 y se inicia el proceso de acumulacin de HCO 3 - en el lumen del conducto. En el estado de reposo, la va WNK / SPAK mantiene grandes fracciones de NBCe1-B y CFTR en los compartimentos intracelulares, mientras que Irbit puede estar asociada con y activar NHE3 y NBCn1-A (no incluido en el modelo) para salvar cualquier Na + y HCO 3 - fugas para el lumen del conducto. Iniciacin de la secrecin de ductal requiere antagonismo de la va WNK / SPAK por el reclutamiento Irbit-mediada de PP1 a dephosphorylate NBCe1-B y CFTR y ellos exocitosis a su membrana plasmtica respectiva. Una vez en la membrana plasmtica, los transportadores son fosforilados por PKA, y ahora Irbit interacta directamente con los dominios inhibidores en NBCe1-B, CFTR, y tal vez Slc26a6 para activarlos y establecer el estado estimulado. En un potencial de membrana luminal de -50 mV y abajo y los gradientes inicos de HCO 3 - y Cl - fijado por NBCe1-B y CFTR, 1Cl - / 2HCO 3 -Intercambio de Slc26a6 puede lograr una luminal HCO 3 concentracin de ~ 135 mM ( 408 ). Los eventos de transporte en el conducto proximal descrito anteriormente puede dar cuenta de la mayor parte de fluido y HCO 3 - secrecin por el conducto de roedor. Sin embargo, el cerdo de guinea, cerdo, y los conductos pancreticos humanos pueden generar jugo pancretico que contiene ms de 120 a 130 mM HCO 3 - . Como luminal Cl - es absorbida, la reduccin de Cl - gradiente a travs de los lmites de la membrana luminal HCO 3 - secrecin Slc26a6, y por lo tanto una va alternativa de HCO 3 - Se requiere flujo de salida para mantener HCO 3 -secrecin. La disminucin en luminal Cl - y el CFTR activado en un potencial de membrana de -50 mV y reduce por debajo de [Cl - ] i por debajo de 10 mM, que sirve como una seal alternativa para modular la actividad de la va de WNK / SPAK. La activacin de la va WNK / SPAK por baja [Cl - ] i convierte CFTR de un Cl- canal de preferencia HCO 3 - canal, lo que permite ms HCO 3 flujo de salida.La va WNK / SPAK inhibe luminal Cl - / HCO 3 - actividad de intercambio para evitar HCO 3 - absorcin debida a la fuerte HCO 3 - conjunto degradado CFTR (327 ). Actividad Irbit en esta porcin del conducto necesita ser reducido (no incluido en el modelo) para permitir que la va de WNK / SPAK para actuar en CFTR y los SLC26 transportadores. El modelo en la Figura 6 puede explicar la informacin disponible sobre el mecanismo de fluido y HCO 3 secrecin por conductos de las glndulas secretoras, incluyendo la forma del conducto puede secretar tanto un gran volumen de fluido y una alta cantidad de HCO 3 - . De ninguna manera esto pretende ser la ltima palabra en el mecanismo por el cual los conductos de las glndulas secretoras segregan fluidos y electrolitos. Al igual que con otros modelos, incluyendo los modelos anteriores, continuar evolucionando a medida que el conocimiento de la funcin y regulacin de los aumentos de las vas conocidas y las nuevas vas que se descubren. Sin embargo, esperamos que en esta etapa el modelo estimule nuevas investigaciones sobre este tema tan importante de lquido epitelial y HCO 3 - secrecin que es aberrante en un gran nmero de enfermedades epiteliales. Seccin anteriorSeccin siguiente

SUBVENCIONES
Este trabajo fue apoyado por la Fundacin Nacional de Investigacin de Corea Subvenciones 2010-0001670 y 2010-0017752, el Ministerio de Educacin, Ciencia y Tecnologa de Corea (a MG Lee), y los Institutos Nacionales de la Salud Instituto / Nacional de Investigacin Dental y Craneofacial Intramural Research Fund Z1A DE000735-01 (a S. Muallem). Seccin anteriorSeccin siguiente

AVISO LEGAL
No hay conflictos de inters financiero o de otra manera, son declarados por los autores. Seccin anteriorSeccin siguiente

AGRADECIMIENTOS
Damos las gracias a Jang Dong-do para la preparacin de las ilustraciones.

Direccin para solicitudes de reimpresin y otra correspondencia: MG Lee, Departamento de Farmacologa de la Universidad de Yonsei University College of Medicine, Seoul 120-752, Corea (e-mail: mlee@yuhs.ac ) o S. Muallem, la sealizacin epitelial y la Seccin de Transporte , Fisiologa Molecular y Teraputica Branch, Instituto Nacional de Investigacin Dental y Craneofacial, Institutos Nacionales de Salud, Bethesda, MD 20892 (e-mail: shmuel.muallem @ nih.gov ).