VALIDACIN Y DOCUMENTACION DE LADETERMINACION DE SULFATOS Y CLORO RESIDUAL LIBRE EN AGUAS EN EL LABORATORIO ALISCCA Ltda.

PRACTICA EMPRESARIAL

MICHELL DARWIN APONTE MARIN COD: 1088245026

UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA FACULTAD DE TECNOLOGAS ESCUELA DE QUMICA PEREIRA 10/27/2010

VALIDACIN Y DOCUMENTACION DE LA DETERMINACION DE SULFATOS Y CLORO RESIDUAL LIBRE EN AGUAS EN EL LABORATORIO ALISCCA Ltda.

MICHEL DARWIN APONTE MARIN COD: 1088245026

PROYECTO DE GRADO, REQUISITO PARCIAL PARA OPTAR AL TTULO DE: QUMICO INDUSTRIAL

DIRECTOR: CARLOS HUMBERTO MONTOYA NAVARRETE. QCO. JEFE LABORATORIOS U.T.P. CODIRECTOR: OMAR ANDRS VALENCIA G. QUMICO LABORATORIO ALISCCA LTDA.

UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA FACULTAD DE TECNOLOGAS ESCUELA DE QUMICA PEREIRA 10/27/2010 1

Nota de aceptacin.

Gloria Edith Guerrero

Omar Andrs Valencia G.

Carlos Humberto Montoya N.

Pereira 2010-10-27 1

AGRADECIMIENTOS Esta validacin no se hubiera podido llevar acabo si el apoyo de la familia alisccaL tda, donde siempre se sinti un buen ambiente de trabajo, con personas carismticas, muy ambles y que siempre dan una sonrisa a la hora de saludar. A estas personas, en especial al codirector, del cual tuve un apoyo constante como jefe inmediato. A aquellas personas que siempre creyeron que podra realizar este proyecto y que nunca dudaron ni un solo instante de que podra realizarlo. Quiero agradecer a aquellas personas que dudaron y que pensaron que nunca podra realizar este proyecto, porque gracias a ellos aprend que siempre hay que hacer las cosas sin dudarlo un solo instante, adems, hay que hacerlas con cario y dedicacin para que salgan bien y nunca acobardarse ante las situaciones adversas Hayque ver las grandes oportunidades de triunfar en las amargas experiencia s. A mis maestros quienes siempre me ensearon que el mejor aprendizaje es aquel que yo reestructuro a medida del tiempo, el tiempo siempre ser una escala de un pentagrama que debe ir agregando notas para que su meloda sea la mejor. Esto aplica a nuestras vidas, debemos ser ese pentagrama y agregar ms notas a nuestra vida para llegar a una perfecta meloda.

Agradezco a la Universidad Tecnolgica de Pereira, a sus maestros y a mis compaeros en los cuales siempre encontr una palabra amable una sonrisa clida, una palabra de apoyo y sin fin de momentos memorables. En especial quiero agradecer a mis padres por todo el apoyo prestado durante todo este tiempo, un apoyo incondicional.

Contenido

1. 2. 3. 4. 5. 6.

INTRODUCCION ....................................................................................................... 11 FORMULACIN DEL PROBLEMA ......................................................................... 12 JUSTIFICACIN ........................................................................................................ 13 OBJETIVO GENERAL ............................................................................................... 14 OBJETIVOS ESPECFICOS ....................................................................................... 14 MARCO TERICO ..................................................................................................... 15 6.1 6.2 6.3 DETERMINACION DE SULFATOS METODO TURBIDIMETRICO ............. 15 Determinacin de cloro residual mtodo FAS-DPD ............................................. 16 MARCO REFERENCIAL .................................................................................... 17 LABORATORIO ALISCCA. ........................................................................ 17 Misin ............................................................................................................ 18 Visin ............................................................................................................. 18 Polticas de calidad ......................................................................................... 19 Recurso humano ............................................................................................. 19 Recursos Tcnicos .......................................................................................... 20 Recursos fsicos. ............................................................................................. 20 SISTEMA ANLITICO ................................................................................ 21 3

6.3.1 6.3.2 6.3.3 6.3.4 6.3.5 6.3.6 6.3.7 6.3.8

7.

SECCIN EXPERIMENTAL ..................................................................................... 22 7.1 7.2 Validacin para la determinacin de sulfatos en agua potable.............................. 23 DESCRIPCION GENERAL ................................................................................. 23 FUNDAMENTO ............................................................................................ 23 PRINCIPIO .................................................................................................... 23 INTERFERENCIAS ...................................................................................... 23 DESCRIPCION DE EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS ............... 24 PROCEDIMIENTO ....................................................................................... 24 DIAGRAMA DE FLUJO PARA LA DETERMINACION DE SULFATOS

7.2.1 7.2.2 7.2.3 7.2.4 7.2.5 7.2.6

EN AGUA POTABLE ................................................................................................. 26 7.2.7 7.2.8 7.2.9 7.2.10 7.3 CALCULOS ................................................................................................... 27 REPORTE DE RESULTADOS..................................................................... 27 RESPONSABLES ......................................................................................... 27 Resultados ...................................................................................................... 27

VALIDACION PARA LA DETERMINACION DE CLORO RESIDUAL EN

AGUA POTABLE. .......................................................................................................... 43 7.3.1 7.3.2 7.3.3 DESCRIPCION GENERAL .......................................................................... 43 4.1 FUNDAMENTO ...................................................................................... 43 4.2 PRINCIPIO .............................................................................................. 44 4

7.3.4 7.3.5 7.3.6 7.3.7 7.3.8 7.3.9

INTERFERENCIAS ...................................................................................... 44 DESCRIPCION DE EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS ............... 45 MATERIALES Y EQUIPOS ......................................................................... 45 6.2 REACTIVOS. .......................................................................................... 45 PROCEDIMIENTO ....................................................................................... 45 DIAGRAMA DE FLUJO PARA LA DETERMINACION DE CLORO

RESIDUAL .................................................................................................................. 46 7.3.10 7.3.11 7.3.12 7.3.13 7.3.14 CALCULOS ................................................................................................... 47 REPORTE DE RESULTADOS. .................................................................... 47 RESPONSABLES ......................................................................................... 47 NOMBRES DE LAS PERSONAS QUE PARTICIPAN EN EL PROCESO 47 Resultados ...................................................................................................... 47

ADICIN ESTNDAR ...................................................................................................... 58 Discusin de resultados ........................................................................................................ 60 8. 9. CONCLUSIONES ....................................................................................................... 63 PRESUEPUESTO ........................................................................................................ 66

10. RECURSOS DISPONIBLES ................................................................................ 67 11. 12. CRONOGRAMA ...................................................................................................... 71 BIBLIOGRAFA ...................................................................................................... 72 5

13. 14. 15. 16. 17.

ANEXO A. Calibracin del Turbidmetro ................................................................ 74 ANEXO B: Certificados de calibracin .................................................................... 82 ANEXO C: Certificados calibracin de vidriera ..................................................... 83 ANEXO D: Certificados de pureza de reactivos....................................................... 84 ANEXO E: Estandarizacin de reactivos y control del agua destilada. ................... 85

GLOSARIO

EXACTITUD:(VERACIDAD):La exactitud la medida de hasta qu punto se aproxima el resultado al valor verdadero de concentracin o cantidad que se pretende medir[1-4]. INTERVALO DE LINEALIDAD: Intervalo, desde el lmite de deteccin, hasta la mxima concentracin en que la respuesta del mtodo se comporta linealmente[14]. LIMITE DE CUANTIFICACION:lmite de cuantificacin o determinacin es considerado como el lmite de concentracin ms bajo para mediciones cuantitativamente precisas. Se define como la cantidad de analito que proporciona una seal igual a la del blanco ms diez veces la desviacin estndar del blanco.[1-4] LIMITE DE DETECCION: El lmite de deteccin (LDD) se define habitualmente como la cantidad o concentracin mnima de sustancia que puede ser detectada con fiabilidad por un mtodo analtico determinado. Intuitivamente, el LDD sera la concentracin mnima obtenida a partir de la medida de una muestra (que contiene el analito) que seramos capaces de discriminar de la concentracin obtenida a partir de la medida de un blanco, es decir, de una muestra sin analito presente[1-4]. LINEALIDAD:Se define como la capacidad del mtodo para obtener resultados de las pruebas proporcionales a las concentraciones del analito[1-4]. MATERIAL ESTANDAR DE REFERENCIA:(PATRON PRIMARIO):Un patrn primario es una sustancia utilizada en qumica como referencia al momento de hacer una valoracin o estandarizacin. Usualmente son slidos que cumplen con las siguientes caractersticas: Tienen composicin conocida. Es decir, se ha de conocer la estructura y elementos que lo componen, lo cual servir para hacer los clculos estequiomtricos respectivos. Deben tener elevada pureza. Para una correcta estandarizacin se debe utilizar un patrn que tenga la mnima cantidad de impurezas que puedan interferir con la titulacin. Debe ser estable a temperatura ambiente. No se pueden utilizar sustancias que cambien su composicin y/o estructura por efectos de temperaturas que difieran ligeramente con la temperatura ambiente ya que ese hecho aumentara el error en las mediciones. Debe ser posible su secado en estufa. Adems de los cambios a temperatura ambiente, tambin debe soportar temperaturas mayores para 7

que sea posible su secado. Normalmente debe ser estable a temperaturas mayores que la del punto de ebullicin del agua. No debe absorber gases. Ya que este hecho generara posibles errores por interferentes as como tambin degeneracin del patrn. Debe reaccionar rpida y estequiomtricamente con el titulante. De esta manera se puede visualizar con mayor exactitud el punto final de las titulaciones por volumetra y adems se puede realizar los clculos respectivos tambin de manera ms exacta. Debe tener un peso equivalente grande. Ya que este hecho reduce considerablemente el error de la pesada del patrn[1-4].

PROCESO ANALTICO: Conjunto de operaciones analticas intercaladas que se realizan entre la muestra y el resultado[1-4]. TCNICA ANALTICA: Principio cientfico adaptado a uno o varios instrumentos, que nos es til o necesario para obtener informacin sobre la composicin de la muestra[1-4]. PRECISION: Es el grado de concordancia entre los resultados de pruebas obtenidas en condiciones previamente establecidas[1-4]. REPETIBILIDAD:(PRESICION) Se refiere a el grado de concordancia de los resultados cuando las condiciones son las mismas en todos los anlisis, reactivos, equipos e instrumentos utilizados durante un periodo corto[1-4]. REPRODUCIBILIDAD: (PRESICION) Se refiere a al grado de concordancia de los resultados cuando las condiciones operativas son tan diferentes como sea posible. PRECISIN INTERMEDIA: Es la precisin obtenida de mltiples rplicas de un anlisis dentro del mismo laboratorio pero no simultaneas, en das diferentes, con diferentes curvas de calibracin, con diferentes analistas, etc[1-4]. ERROR TIPO I: Tambin llamado error alfa, es la posibilidad de decidir que un componente de la muestra est presente cuando realmente no lo est[1-4]. ERROR TIPO II: Tambin llamado error beta, es la posibilidad de no detectar un componente en la matriz, cuando en realidad si est presente[1-4]. ROBUSTEZ: La robustez de un mtodo analtico es la capacidad de permanecer inalterable por pequeas, pero deliberadas alteraciones en la ejecucin del mtodo y adems proporciona informacin acerca del funcionamiento de la tcnica[1-4].

SELECTIVIDAD: se define como la capacidad de un mtodo para determinar analitos especficos en mezclas o matrices sin interferencias de otros componentes de comportamiento anlogo. La selectividad es el trmino recomendado de qumica analtica para expresar la capacidad de un mtodo para determinar analitos especficos cuando hay otras especies qumicas presentes en la muestra[1-4]. MTODO ANALTICO Adaptacin variada de una tcnica, para llevar a cabo una medida determinada. (Pueden existir varios mtodos analticos distintos para determinar el mismo analito mediante la misma tcnica)[1-4]. PROCEDIMIENTO ANALTICO Las instrucciones generales escritas necesarias para utilizar un mtodo. (Normalmente son normas de carcter oficial)[1-4]. PROTOCOLO ANALTICO Las directrices especficas escritas que recogen los pasos necesarios para desarrollar el mtodo analtico sin excepcin. (Contiene detalles especficos que no recoge el mtodo)[1-4]. VALIDACION: Se define la validacin analtica como el trabajo experimental encaminado a obtener pruebas documentadas de que un mtodo analtico proporciona consistentemente la informacin requerida al uso al que se destina. Los criterios de validacin se deben relacionar con las especificaciones a examinar, por lo que el mtodo deber poseer la caracterstica bsica necesaria para discriminar de forma segura la informacin analtica de inters[1-4]. VALIDACION DE UN PROCEMIENTO ANALTICO: Validar un mtodo analtico consiste en verificar y documentar su validez, esto es, su adecuacin a unos determinados requisitos previamente establecidos por el usuario para poder resolver un problema analtico particular. Estos requisitos son los que definen los parmetros o criterios de calidad que debe poseer un mtodo a utilizar para resolver el problema analtico. En la siguiente tabla se muestra que estos criterios de calidad son de tipo estadstico[1-4].
Parmetros Exactitud, Rastreabilidad Precisin, incertidumbre Reproducibilidad Especificidad Lmite de deteccin Lmite de cuantificacin Robustez

CALIDAD DEL AGUA: Es el resultado de comparar las caractersticas fsicas, Qumicas y microbiolgicas encontradas en el agua, con el contenido de las normas que regulan la materia[5, 6]. LABORATORIO DE ANLISIS DEL AGUA PARA CONSUMO HUMANO: Es el establecimiento pblico o privado, donde se realizan los procedimientos de anlisis de las caractersticas fsicas, qumicas y microbiolgicas del agua para consumo humano, el cual debe cumplir con los requisitos previstos en el presente decreto[5, 6]. SUSTANCIAS POTENCIALMENTE TXICAS : Son aquellas de origen natural o sinttico que pueden ocasionar efectos nocivos a organismos con los cuales entran en contacto. Incluye sustancias utilizadas en actividades domsticas, produccin de bienes o servicios y plaguicidas, que pueden estar presentes en el agua para consumo humano[5, 6].

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VALIDACIN Y DOCUMENTACION DE LA DETERMINACION DE SULFATOS Y CLORO RESIDUAL LIBRE EN AGUAS EN EL LABORATORIO ALISCCA Ltda. 1. INTRODUCCION

Las principales preocupaciones para las distintas entidades de regulacin ha sido la calidad de agua potable que llega al consumidor final, por tal causa se han adoptado las medidas pertinentes para asegurar que esta se encuentre en la mejor calidad posible antes de ser consumida. Para lo cual se adoptaron y reglamentaron normas especficas dentro de las cuales detallan las concentraciones permitidas con la finalidad de asegurar que no harn dao alguno a la salud del consumidor. Un agua potable de buena calidad ya sea para consumo humano o para las diferentes actividades econmicas es aquella en la cual las sustancias potencialmente toxicas para la salud humana se eliminan totalmente en el tratamiento previo o se lleva a la mxima concentracin permitida por lo las normas que rigen estos parmetros, estas sustancias pueden ser de origen natural o sinttico. Tambin se habla se sustancias potencialmente dainas para los equipos, las cuales pueden causar daos en las tuberas o en la operacin de los mismos equipos. Un ejemplo sencillo seria citar la resolucin 2115del 2007 por la cual se establece el reglamento para Proteccin y Control de la Calidad del Agua para Consumo Humano; En nuestro caso este decreto reglamenta que la mxima concentracin permita de sulfatos en agua para consumo humano es de 250 mg/l y en el caso del cloro residual la mxima concentracin permitida sin causar efectos adversos a la salud humana es de .2 mg/l. Tomando en cuenta los valores consignados en la normatividad se realizan las validaciones para que el mtodo usado sea reconocido y aceptado por los diferentes laboratorios de anlisis o las diferentes entidades gubernamentales. Una tcnica se vlida para verificar criterios analticos de un mtodo; la validacin de mtodos analticos se basa en la reglamentacin actual para control de calidad del agua adems de validar una tcnica ya establecida por los diferentes rganos nacionales o internacionales y reconocida a nivel mundial, en todo caso la tcnica ya est establecida para el anlisis de un analito de inters, lo nico nuevo seria la obtencin de los parmetros estadsticos despus de una serie de experimentos los cuales llevan a la obtencin de una tcnica validada para las condiciones del laboratorio que valida. 11

2.

FORMULACIN DEL PROBLEMA

Un laboratorio qumico analtico debe tener como propsito principal, la produccin de resultados de excelente calidad. Este propsito, solo se puede lograr mediante el establecimiento de planes bien definidos y apropiadamente documentados y desarrollados.

Cuando en un laboratorio de anlisis de aguas se realizan cientos de mediciones anualmente, ste debe contar con un amplio grupo de recursos locativos, humanos y de conocimiento que le permitan asegurar la obtencin de resultados altamente confiables. Si las medidas que se realizan en el mbito de anlisis no estn respaldadas por un adecuado proceso de muestreo, de calibracin de aparatos e instrumentos, de control en la calidad y manejo de reactivos, etc., no se podra garantizar de alguna manera el reporte de resultados veraces[7].

Para un laboratorio acreditado la responsabilidad en el reporte de resultados es predominante. El analista puede decir que ha determinado la presencia de cierto analito en una muestra de agua, pero cmo puede demostrar que los resultados obtenidos son confiables? La persona que solicita el anlisis podra, una vez que cuenta con la respuesta cuantitativa, juzgar si la concentracin es veraz. Para comprobar dichos resultados, el analista debe suministrar evidencias slidas, como por ejemplo, una hoja de vida del equipo en el cual se realiz la medicin; los lmites de deteccin instrumental y del mtodo, un reporte de anlisis estadstico de las mediciones de prueba que se realizaron, con muestras y patrones para verificar la efectividad del mtodo y el procedimiento de las condiciones del laboratorio en el que se realiz el anlisis; la ptima calidad de los reactivos soportada a travs de un certificado de calidad y pureza expedido por el casa productora y un anlisis de incertidumbre del resultado obtenido; manuales y protocolos utilizados, para realizar correctamente las practicas del laboratorio[7].

Es posible determinar de forma experimental y en las condiciones de trabajo la exactitud, repetitividad, robustez, lmite de deteccin para las tcnicas sulfatos y cloro residual en las instalaciones del laboratorio ALISCCA Ltda.?

12

3.

JUSTIFICACIN

A lo largo de la historia la gran preocupacin de la humanidad ha sido la calidad de aguas que se est consumiendo, puesto que estas pueden estar contaminas por fuentes naturales o humanas, en estos momentos otra preocupacin es la aparicin de contaminantes qumicos procedentes de los vertimientos de las industrias; estos vertimientos pueden contener contaminantes de origen orgnico, inorgnico y metales pesados los cuales son perjudiciales aunque se encuentren en trazas[8].

Para evitar estos problemas se establecieron unos requisitos mnimos para que el agua potable cumpla con unas caractersticas fsicas, qumicas y microbiolgicas, las cuales en la actualidad estn consignadas en el decreto 1575 DE 2007 Por el cual se establece el reglamento para Proteccin y Control de la Calidad del Agua para consumo humano[5] y por la resolucin 2115 DE 2007 Por medio de la cual se sealan caractersticas, instrumentos bsicos y frecuencias del sistema de control y vigilancia para la calidad del agua destinada al consumo humano. Con base en estas normas los laboratorios buscan demostrar que sus mtodos analticos pueden dar resultados confiables y adecuados para la finalidad que se requiere, ya que con base en estos se toman decisiones, las cuales estn encaminadas a un mejor control de calidad[3].

La validacin de los atributos bsicos de los mtodos estadsticos aseguran que los anlisis realizados tienen una buena confiabilidad y tambin se demuestra que los laboratorios estn estandarizados, adems, de antemano teniendo en cuenta que los parmetros estadsticos son los que determinan la calidad que debe poseer una tcnica para ser desarrollada con fiabilidad para resolver un problema analtico[2, 9].Tambin la norma NTC/IEC ISO 17025 del 2005Indica que un laboratorio debe disponer de los recursos requeridos para realizar el trabajo con resultados competentes, tales como personal con conocimientos y capacidades adecuadas, un ambiente con instalaciones y equipos necesarios, un sistema de control de calidad y procedimientos[10].Las principales medidas estadsticas estudiadas en una validacin son: Exactitud, precisin, reproducibilidad, especificidad, selectividad, lmite de deteccin, lmite de cuantificacin, y robustez[1, 11, 12].

13

4.

OBJETIVO GENERAL

Validacin y documentacin de la determinacin de sulfatos y cloro residual libre en aguas en el laboratorio aliscca Ltda mediante la aplicacin de protocolos de anlisis de agua potable. 5. OBJETIVOS ESPECFICOS

Documentar y validar el mtodo de anlisis de sulfatos por medio de la tcnica turbidimetrica. Documentar y validar el mtodo de anlisis de cloro residual en agua potable por medio de la tcnica volumtrica FAS-DPD. Por medio de la validacin de las tcnicas se determinara de manera experimental y para las condiciones del laboratorio alisccaLtda, los siguientes parmetros estadsticos: Repetitividad, exactitud, lmite de deteccin y robustez; que servirn como criterio de confianza para la determinacin y validacin de la determinacin de sulfatos y determinacin de cloro residual en agua potable.

14

6.

MARCO TERICO

6.1 DETERMINACION DE SULFATOS METODO TURBIDIMETRICO

Los sulfatos estn ampliamente distribuidos en la naturaleza; ya que estos estn presentes en un amplio espectro de concentraciones[13].Las concentraciones de sulfatos mayores a 250 mg/l son un problema para los laboratorios puesto que estos se combinan con calcio y magnesio ,produciendo taponamiento en las tuberas y daos en los equipos, adems en los humanos pueden generar problemas laxativos y gastrointestinales[14]. Por lo cual la RESOLUCION 2115 DE 2007. Establece una concentracin lmite de 250 mg/L de sulfatos (SO4-2)[6]. Fundamento del mtodo: Para la determinacin de sulfatos se precipita el ion sulfato (SO4-2) con cloruro de bario (BaCl2) en medio acidulado con cido actico y agitacin constante; en esta reaccin se forman cristales de sulfato de bario los cuales tienen un tamao uniforme. Posteriormente se toma un poco de esta solucin y se lleva a una celda de medicin de para luego leer la turbidez (UNT)[15]. SO4-2+BaCl2 BaSO4

Precauciones a tener: En esta tcnica se dan interferencias principalmente por color y presencia de material en suspensin En presencia de materia orgnica algunas bacterias pueden reducir el SO 4-2 a S-2.Para evitar esto se almacenan las muestras a 4 C. Cuando se est determinando el sulfato tener en cuenta la velocidad de agitacin, el tiempo de agitacin y reposo de la muestra despus de que precipite el sulfato de bario.

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6.2 Determinacin de cloro residual mtodo FAS-DPD La cloracin es un mtodo usual para reducir la poblacin bacteriana que podra afectar la vida de sus consumidores, adems, de mejorar la calidad del agua puesto que el cloro reacciona con el amonaco presente en el agua para producir cloro-aminas primarias, secundarias y terciarias. Un pequeo inconveniente sera que intensifica el sabor de algunas sustancias tales como los fenoles y al combinarse con el amonaco produce compuestos potencialmente carcinognicos que pueden afectar la vida acutica[16].Un gran reto para los analistas es encontrar y saber utilizar una tcnica que pueda distinguir entre cloro residual libre y combinado , para efecto de este proyecto se va a utilizar el mtodo del DPDFAS, el cual se encuentra referenciado por el Estndar Method for Examination of Water and wastewarer 20TH.

Fundamento del mtodo: El sulfato de dietil-p-fenilendiamina (DPD DFD) es usado como indicador en el procedimiento titrimetrico con sulfato ferroso hexahidratado, el cloro residual libre reacciona a los 5 segundos para formar un color rojo en ausencia del ion yoduro se puede determinar cloro residual. Posteriormente la determinacin de cloro combinado en la misma muestra,se agrega yoduro el cual acta catalticamente provocando la aparicin de color debido a la monocloroamina[17].

Precauciones a tener: Es importante en titulacin verificar que se tenga un rango de pH ptimo el cual se encuentra entre 6.2 y 6.5 unidades de pH. Puesto que a pH bajos no se puede diferenciar entre cloro residual libre y compuesto y pH demasiado altos hace que el oxgeno disuelto aporte color y se den errores en el momento de la cuantificacin[18]. El cloro es muy inestable a temperatura ambiente por lo cual cuando se tome la muestra se debe titular inmediatamente o someterla a refrigeracin, para asegurar que el cloro presente es el mismo que se tena originalmente en el momento de la toma de la muestra, aunque el cloro residual libre termina perdindose aun en refrigeracin si esta se extiende por largos periodos de tiempo, lo ms aconsejable es analizarla inmediatamente.

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6.3 MARCO REFERENCIAL 6.3.1 LABORATORIO ALISCCA.

La empresa ALISCCA Ltda. Fue fundada en el ao 2004 enfocada directamente a prestar asesoras en calidad a la industria del sector de alimentos, y a realizar anlisis microbiolgico de alimentos y aguas. En el ao 2005 ampli sus servicios a los clientes e inici con el laboratorio de anlisis Fisicoqumico de alimentos, tambin prestando sus servicios de etiquetados nutricionales y asesora. Posteriormente en el ao 2006 ampli su portafolio de servicios al implementar anlisis de aguas a nivel Fisicoqumico. El nombre de ALISCCA proviene: Alimentos Laboratorio Industria Servicios Capacitacin Calidad Asesoras Hoy en da el laboratorio ALISCCA ofrece servicios de: Asesora y capacitacin en desarrollo de nuevos productos y procesos del sector alimentario. Asesora, capacitacin , implementacin y monitoreo de : BPM (Saneamiento, (limpieza y desinfeccin, control de residuos slidos y lquidos, control de plagas), control de proveedores, trazabilidad, plan de muestreo entre otros). HACCP (Constitucin del equipo. Descripcin del producto y proceso, determinacin de riesgos en puntos crticos y puntos crticos de control etc.) ISO 9000 (Compromiso de la direccin, misin, visin, poltica de la calidad, documentacin, principios de la calidad relacionados con los procesos, realizacin de producto, compras, medicin, anlisis y mejoramiento, entre otros). Auditora interna de calidad en BPM y HACCP. (Antes de la supervisin del Ministerio de Salud y/o certificacin especial). Anlisis Fsico (pH, acidez, densidad, Brix, gado alcohlico, humedad, entre otros). 17

Anlisis qumico (protena, grasa total, fibra, minerales, carbohidratos, conservantes de alimentos, azcares reductores y no reductores). Anlisis Microbiolgico (Recuento total de Mesfilos aerobios, Coliformes totales, Coliformes fecales, E. coli, Hongos y Levaduras, Salmonella, Staphilococco, Pseudomonas, Listeria Monocitogenes, Esporas CSR, BacillusCereus). Etiquetado nutricional: parmetros, contenidos y normatividad. Estudio de vida de anaquel: (determinacin de fecha de vencimiento y estabilidad del producto en condiciones experimentales). Anlisis sensorial (prueba de aceptacin / rechazo, pareja do tro). Anlisis microbiolgico de aguas y cosmticos.

Anlisis de Legionellapneumoniae Nota: los anlisis fsicos, microbiolgicos y etiquetado nutricional se hacen de acuerdo con la normalizacin vigente; INVIMA e ICONTEC. Seminarios: Microbiologa general, microbiologa de alimentos, BPM, HACCP, metrologa. Mercadeo, anlisis de costos, negociacin. Programa de capacitacin contina para manipuladores de alimentos.

6.3.2 Misin Somos Aliscca, una empresa prestadora de servicios en asesora y anlisis de alimentos, agua y cosmticos que trabaja para el cumplimiento de las normas de calidad y los requisitos exigidos por los clientes del sector empresarial, por medio del desarrollo de nuevas tcnicas, sentido de pertenencia y trabajo en equipo de sus colaboradores. 6.3.3 Visin Ser una opcin integral de asesora y anlisis para las industrias de alimentos, cosmticos y bebidas de la regin cafetera a travs de un portafolio de servicio eficiente y confiable que agregue valor a sus clientes, para generar ingresos y bienestar a sus propietarios y colaboradores.

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6.3.4 Polticas de calidad Suministrar a los clientes un servicio adecuado que satisfaga las necesidades de cumplimiento de sus estndares de calidad, con la participacin de personal altamente calificado, actualizado y eficiente, realizando un esfuerzo de mejoramiento continuo en todas las actividades, a travs del sistema de gestin de calidad y la apropiacin tecnolgica. 6.3.5 Recurso humano El laboratorio ALISCCA cuenta con personal interdisciplinario de profesionales capacitados que forman un equipo de trabajo con experiencia en anlisis en la industria de alimentos. La estructura organizacional del laboratorio, en orden jerrquico, se establece as: Gerente general. Administrador. Analista de microbiologa (Bacterilogo). Director Laboratorio de anlisis fisicoqumico (Qumico). Auxiliar de anlisis fisicoqumico (Tecnlogo en control de calidad). Auxiliar pasante de microbiologa. Auxiliar de servicios generales. Secretarias. Mensajero.

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Ilustracin 1.Instalaciones del Laboratorio ALISCCA. Fuente. Plano del laboratorio Aliscca Ltda. 6.3.6 Recursos Tcnicos El laboratorio dispone de todo el equipo necesario para desarrollar las pruebas analticas que ofrece. Cada equipo posee cdigos de identificacin y su respectiva hoja de vida, estos son sometidos a programas de mantenimiento, calibracin, verificacin y ajuste para garantizar su ptimo funcionamiento. Para el desarrollo de las pruebas analticas el laboratorio utiliza los mtodos y procedimientos referenciados en el Standard Methodsfor Examination of Water and Wastewater 20th Editionde 1998, manuales elaborados por el laboratorio con su archivo fsico y documentacin segn la normativa nacional. 6.3.7 Recursos fsicos.

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Para el desarrollo de las actividades el laboratorio cuenta con reas dotadas de fluido elctrico, agua potable, ventilacin, iluminacin, seguridad y sistema de recoleccin de residuos industriales, campana extractora, entre otros. Las instalaciones son adecuadas y presentan condiciones ptimas. 6.3.8 SISTEMA ANLITICO Un sistema analtico es definido como una cadena de informacin que va desde el conocimiento del material que se analiza, hasta la interpretacin de los resultados obtenidos. El sistema analtico puede considerarse dividido en tres etapas: Operaciones previas: muestreo, dilucin, separacin, reacciones analticas. Medicin y traduccin de la seal analtica, es decir, el uso de instrumentos que generan la informacin. Toma y tratamiento de datos. Los resultados generados en un sistema analtico, solo son confiables en la medida en que el mtodo bajo el cual se obtuvieron las mediciones haya sido sometido previamente a un proceso de validacin. Validar un mtodo de anlisis consiste en verificar y documentar su validez, esto es, su adecuacin a unos requisitos previamente establecidos por el usuario, para poder resolver un problema analtico particular. Estos requisitos son los que definen los parmetros o criterios de la calidad que debe poseer el mtodo a utilizar para resolver el problema analtico[19].

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7.

SECCIN EXPERIMENTAL

Para dar cumplimiento a los objetivos establecidos en este proyecto se seguirn las metodologas propuestas por el Standard Methods 20thedicin, el protocolo de estandarizacin de mtodos analticos del IDEAM, tambin se utilizara el estudio del funcionamiento de los mtodos por ensayos de colaboracin propuestos por MILER James Y MILER Jane. El protocolo para la validacin de las tcnicas, se regir por siete fases:

FASE 0

I II

III IV

V VI

VII

DESCRPCION Revisar los procedimientos de las metodologas analticas a validar y elaborar toda la documentacin necesaria y pertinente para el proceso de validacin, (formatos para toma de datos, asignar cdigos internos a los formatos de tomas de datos, etc.). Revisin certificada de vidriera, reactiva y equipos, fechas de calibracin y hoja de vida de los equipos Calibracin de vidriera, evaluacin de cumplimiento de especificaciones de material, aceptacin y/o rechazo de material. Anlisis de estndares por un nico operador durante siete das en condiciones de trabajo similares. Anlisis de estndares desconocidos preparados por el codirector cuya concentracin solo ser revelada al finalizar la fase. Anlisis de muestras reales, anlisis de muestras naturales de diversas concentraciones. Anlisis de variacin en la metodologa, evaluacin del comportamiento de los mtodos y su influencia en los resultados. Ensayos de colaboracin, estudios de funcionamiento de los mtodos y evaluacin de las desviaciones entre laboratorios. Una vez terminada la FASE VII se proceder a realizar todo el anlisis estadstico, los criterios de rechazo de datos aplicando la prueba T, repetitividad, porcentaje de recuperacin, porcentaje de error y error relativo, etc. Posteriormente se har la redaccin del documento final.

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7.1 Validacin para la determinacin de sulfatos en agua potable. 7.2 DESCRIPCION GENERAL 7.2.1 FUNDAMENTO Los sulfatos (SO4-2) estn ampliamente distribuidos en la naturaleza y pueden estar presentes en aguas naturales en un rango de concentraciones de pocos miligramos hasta varios cientos de miligramos por litro. Los sulfatos estn asociados a la dureza del agua en su calidad de permanente y producen en los consumidores una notoria accin catrtica, especialmente en presencia de sodio y magnesio. 7.2.2 PRINCIPIO La determinacin de ion sulfato por el mtodo turbidimetrico, este precipita con cloruro de bario (BaCl2) en medio acidificado con cido actico, para as formar cristales de sulfato de bario de tamao uniforme. La luz absorbida por la suspensin de sulfato de bario (BaSO4) es medida en un turbidimetro y la concentracin de sulfato (SO4-2) se determina por comparacin de la lectura con una grfica estndar[20]. 7.2.3 INTERFERENCIAS El color y/o las grandes cantidades de materia suspendida interfieren en el anlisis. La materia suspendida puede ser retirada por filtracin o centrifugacin. Si ambos parmetros son pequeos en comparacin con la concentracin de sulfatos, esta interferencia se puede corregir usando blancos a los cuales no se les haya agregado cloruro de bario y restando este valor al resultado de sulfatos. Concentracin de silica mayores de 500 mg/L interfieren. En aguas que contengan grandes cantidades de materia orgnica es posible que no se pueda precipitar satisfactoriamente el sulfato de bario. La gran mayora de los iones que se encuentran en aguas potables son iones sulfatos que forman compuestos insolubles con bario bajo condiciones fuertemente acidas, la determinacin se puede hacer la temperatura ambiente pues variaciones en un rango de 10C no causan error. 23

7.2.4 DESCRIPCION DE EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS MATERIALES Y EQUIPOS Erlenmeyer de 250mL Pipetas aforadas y/o graduadas de 10mL Celdas de lectura para Nefelmetro Agitador magntico Matraces aforados de 100 y 1000mL Turbidmetro E y Q, T- 1000 Agitador magntico Cronometro

REACTIVOS. Solucin reguladora A (para concentraciones mayores 10 mg/L de sulfatos) Para preparar esta solucin reguladora se disuelven 30 g de cloruro de magnesio hexahidratado (MgCl26H2O), 5 g de acetato de sodio (CH3COONa*3H2O, 1g de nitrato de potasio (KNO3) y 20 ml de cido actico al 99% (CH3COOH) en 500 ml de agua destilado, posteriormente se afora e un baln de 1L. Solucin reguladora B (para concentraciones menores a 10 mg/L de sulfatos) Para preparar esta solucin reguladora se disuelven 30 g de cloruro de magnesio hexahidratado (MgCl26H2O), 5 g de acetato de sodio (CH3COONa*3H2O, 1g de nitrato de potasio (KNO3), 0.111 g de sulfato de sodio y 20 ml de cido actico al 99% (CH3COOH) en 500 ml de agua destilado, posteriormente se afora e un baln de 1L Cloruro de barrio (BaCl2) al 10%: se disuelven 500 g de cloruro de bario (BaCl2) en 500 ml de agua destilada. Solucin patrn de sulfatos de 100 mg/L: Se disuelven 0.1479 g de sulfato de sodio (Na2SO4) en 1L de agua destilada.

Nota: para la preparacin de los reactivos remitirse al manual de preparacin de soluciones (MFQ-001) 7.2.5 PROCEDIMIENTO 1. Calibracin del equipo ver anexo A (siga el paso nmero 1 del anexo A) 2. Mida en una probeta 100mL de la muestra de agua, transfirala a un Erlenmeyer de 250mL. 3. Adicione 5mL de solucin reguladora A o B segn el caso y mezcle con agitador magntico hasta homogenizar. 24

4. Mida la turbiedad de la muestra y colquela de inmediato en el agitador (turbiedad inicial). 5. Adicione 4 mL de solucin de cloruro de bario, y comience de inmediato a cronometrar, agitando por 60 0.5 segundos. 6. Transfiera inmediatamente la suspensin resultante a la celda de lectura del Turbidmetro. 7. Realice la lectura luego de 5 minutos en la escala adecuada. 8. Calcule la concentracin de SO4-2 en la muestra por comparacin de la turbiedad con la curva de calibracin obtenida con patrones de concentracin conocida. 9. Realice el ensayo de manera simultnea con un patrn de concentracin conocida. 10. Realice el anlisis por duplicado. 11. La curva de calibracin se construye con patrones de 100mL de 0 a 40 ppm en intervalos de 5 en 5 a partir de la solucin madre de 100ppm de sulfato (sobrepasar la concentracin de 40ppm decrece la exactitud y baja la estabilidad de la suspensin de sulfato de bario) siguiendo el mismo proceso que para la muestra al momento de hacer la medicin

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7.2.6 DIAGRAMA DE FLUJO PARA LA DETERMINACION DE SULFATOS EN AGUA POTABLE INICIO

Transfiera 100mL de muestra a un Erlenmeyer de 250mL Adicione 5mL de solucin reguladora, homogenice y lea la turbiedad. Adicione 5mL de solucin de cloruro de bario a los 100mL y agite por 1 minuto

Lleve la solucin a la celda y realice la lectura de la turbiedad luego de 5 min. Realice el mismo procedimiento anterior con el estndar. Calcule la concentracin de sulfatos y registre la lectura FIN

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7.2.7 CALCULOS Interpole en la curva de patrones el valor de la lectura de la turbiedad de la muestra y determine la concentracin de sulfatos, tener en cuenta si se realizan diluciones a la muestra. 7.2.8 REPORTEDERESULTADOS. Se reporta como mg SO4-2 / L 7.2.9 RESPONSABLES La responsabilidad recae sobre el analista el cual debe seguir la metodologa establecida para el anlisis. 7.2.10 Resultados Fase I: se encontr que las metodologas a validar se realizan por medio de mtodos reconocidos y avalados nacionalmente por el Instituto Nacional de Salud (INS) Al revisar los reactivos se encontr que estos son grado analtico adems tienen certificados de anlisis, pureza y con respaldo ACS e ISO Los protocolos de validacin empleados corresponden a los desarrollados por el laboratorio Aliscca Ltda, el estndar methods para el anlisis de agua potable, la AOAC y el IDEAM. Fase II: Se encontr que el laboratorio emplea vidriera clase A que es la apropiada para conseguir resultados analticos de alta trazabilidad. Todo esto respaldado por sus respectivos certificados; aun as se realiz la verificacin del estado del mismo segn protocolo Aliscca. Se encontr que la vidriera clase A cumple segn los requerimientos de aceptacin (Programa de validacin de material de vidrio de Aliscca Ltda basado en NTC: 2454,2322, 2201, 2321). Se revisaron los certificados de calibracin y manuales de la balanza analtica y Turbidmetro con lo cual se pudo establecer que son apropiados para la ejecucin para las tcnicas.

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Fase III: Teniendo toda la metodologa y los manuales necesarios para esta fase se procedi a realizar el anlisis de siete lotes de diferente concentracin de sulfatos durante siete das sucesivos y siete curvas de calibracin durante siete das sucesivos dando como resultado los datos consignados en la tabla 1 Tabla 1. Datos para la determinacin de la precisin para sulfatos en agua potable.
Tcnica: Sulfatos Concentracin Terica (mg/L) 5,00 Concentracin Experimental(mg/L) 5,58 1 23,00 2 19,20 3 20,60 Turbidez sulfatos experimental (NTU) (No. De ensayo) 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Promedio Desviacin Desviacin relativa Desviacin media Mediana Moda X mnimo X mximo Datos Descartados por regla T (D) % error relativo 16,50 19,00 12,80 19,30 19,00 18,30 19,20 11,80 18,50 17,70 19,60 18,20 2,90 0,16 1,99 19,00 38,30 23,00 11,80 0,00 11,60 10,00 9,87 38,00 39,10 37,00 32,00 30,10 31,50 30,60 29,70 30,20 28,90 29,20 36,00 35,30 38,00 33,30 3,80 0,11 3,41 31,75 75,00 39,10 28,90 0,00 1,32 15,00 14,55 53,00 55,40 55,20 55,00 47,80 45,50 46,80 46,40 45,90 48,20 46,20 54,00 49,00 48,40 49,80 3,80 0,08 3,39 48,30 120,50 55,40 45,50 0,00 2,98 20,00 19,98 72,00 69,00 69,10 67,00 69,10 69,50 69,20 69,50 68,90 69,70 69,80 69,00 65,00 67,60 68,90 1,60 0,02 1,01 69,10 17,60 72,00 65,00 0,00 0,12

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Continuacin Tabla 1

Tcnica: Sulfatos Concentracin Terica (ppm) Concentracin Experimental(ppm) 1 Turbidez sulfatos experimental (NTU) (No. De ensayo) 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 25,000 24,779 89,200 88,600 88,100 81,000 87,600 86,200 86,800 86,500 86,700 87,900 87,400 85,000 81,000 79,400 85,814 3,101 0,036 2,989 86,750 81,000 79,400 89,200 0,000 0,882 30,000 29,625 102,000 101,000 106,000 103,000 104,900 104,800 104,600 104,300 104,700 104,800 105,200 98,0000 99,0000 98,0000 102,879 2,79922 0,027 2,697 104,450 104,800 98,0000 106,000 0,00000 1,24981 35,00 35,65 120,00 130,00 115,00 121,00 129,50 129,30 128,50 128,10 128,80 128,70 128,40 115,00 113,00 122,00 124,09 6,2497 0,050 6,022 128,25 115,00 113,00 130,00 0,0000 1,8544

Promedio Desviacin Desviacin relativa Desviacin media Mediana Moda X mnimo X mximo Datos Descartados por regla T (D) % error relativo

Despus de la obtencin de los datos para la curva de calibracin (Tabla.1) se puede concluir con base en las desviaciones relativas que el mtodo tiende a tener pocas variaciones entre cada determinacin, adems los errores relativos 29

tienden a mantenerse constantes a medida que aumenta la concentracin del analito de inters en la solucin. Los valores de la tabla 1 se obtuvieron al realizar el anlisis de 7 lotes de concentracin desconocida durante 7 das sucesivos valores presentados en la tabla 1.1 y 7curvas de calibracin montadas durante 7 das sucesivos presentados en la tabla 1.2.
Tabla 1.1.Siete lotes analizados durante 7 das sucesivos

Muestra 1 2 3 4 5 6 7 Concentracin Media Desviacin Desviacin relativa

Turbidez

Turbidez

Turbidez

Turbidez

Turbidez

Turbidez

Turbidez

19 12,8 19,3 19 18,3 19,2 11,8 5 17,06 3,28 0,191

30,1 31,5 30,6 29,7 30,2 28,9 29,2 10 30,03 0,88 0,021

47,8 45,5 46,8 46,4 45,9 48,2 46,2 15 46,69 0,99 0,022

69,1 69,5 69,2 69,5 68,9 69,7 69,8 20 69,39 0,33 0,0047

87,6 86,2 86,8 86,5 86,7 87,9 87,4 25 87,01 0,63 0,0072

104,9 104,8 104,6 104,3 104,7 104,8 105,2 30 104,76 0,28 0,0026

129,5 129,3 128,5 128,1 128,8 128,7 128,4 35 128,76 0,50 0,0038

Como se puede observar los valores de turbidez correspondientes para cada lote de diferente concentracin son muy cercanos entre cada determinacin, adems, en los datos obtenidos durante el anlisis de los 7 lotes sucesivos se puede observar que las desviaciones son mnimas entre las siete determinaciones para para cada lote. Las desviaciones relativas tienen valores pequeos. En la tabla 1.2 correspondiente a los valores obtenidos despus de realizar 7 curvas de calibracin se puede concluir: Los valores no son tan cercanos entre s, adems de tener variaciones considerables entre cada determinacin. Tomando en cuenta lo anteriormente dicho son mucho ms consistentes los valores de la tabla 1.1, adems de ser ms precisos y exacto, adems con estas comparaciones se puede concluir a la robustez del mtodo que se mencionara ms adelante en el documento. 30

Tabla1.2.siete curvas de calibracin durante 7 das sucesivos Lote Turbidez Turbidez Turbidez Turbidez Turbidez Turbidez Turbidez

1 2 3 4 5 6 6 7 Concentraci n Desviacin Media Desviacin relativa

23 19,2 20,6 16,5 18,5 17,7 17,7 19,6 5 2,026 19,1 0,106

38 39,1 37 32 36 35,3 35,3 38 10 2,225 36,3 0,0612

53 55,4 55,2 55 54 49 49 48,4 15 3,0620 52,4 0,0585

72 69 69,1 67 69 65 65 67,6 20 2,341 68,0 0,0344

89,2 88,6 88,1 81 85 81 81 79,4 25 4,0348 84,2 0,0479

102 101 106 103 98 99 99 98 30 2,815 100,8 0,0279

120 130 115 121 115 113 113 122 35 5,829 118,6 0,0491

Teniendo en cuenta las diferencias entre las siete lotes analizados durante siete das sucesivos y las siete curvas de calibracin hechas durante siete das sucesivos se puede llegar a la conclusin de que los valores obtenidos durante el anlisis de 7 lotes durante siete das sucesivos tiene variaciones mucho ms pequeas durante cada determinacin, por lo cual estos datos son ms precisos y exactos. La desviacin entre la concentraciones de un lote realizado el mismo da son menores que la misma concentracin analizada en diferentes das. El laboratorio Aliscca Ltda. Para asegurar que los datos obtenidos (consignados en la tabla 1) tienen una tendencia lineal, adems, de que tienen pocas variaciones en las desviaciones relativas y errores pequeos, analiza tres parmetros fundamentales en el momento de la validacin, estos parmetros son: I. Correlacin grafica(r2) II. Comparacin entre t terico y experimental. III. Homocedasticidad. Con los datos obtenidos (tabla1) se procedi a graficar la curva de calibracin del mtodo la cual resulto ser:

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Grafica1.Curva de calibracin para sulfatos en agua potable.

140,0 120,0 100,0 Seal(UNT) 80,0 60,0 40,0 20,0 0,0 0 5 10 15 20 25 Concentracion (ppm) 30 35 40 y = 3,5216x - 1,45 R = 0,9983

Con los datos que arroja la grfica de calibracin del mtodo se procedi a calcular otros parmetros adicionales tales como el lmite de deteccin, cuantificacin y por ultimo uno de los valores ms importantes, el cual es el t experimental, el cual es mayor que el t terico. Esto confirma que a medida que aumenta la concentracin de sulfatos en agua, tambin aumenta la turbidez al realizar el tratamiento necesario a muestra para el anlisis. Tabla2.Datos obtenidos de la curva de calibracin.
Pendiente r 3.5 0,998 Intercepto r^2 -1.5 0.999

Lmite de cuantificacin 11.7 Lmite de deteccin 5 TTerico 2.18 Texperimental 84.78 El coeficiente de correlacin es significativo, ya que aplicando una prueba t de dos colas y (n-2) grados de libertad, la t calculada fue mayor a la t de tablas, por lo tanto se rechaza la hiptesis nula, y se concluye que existe una correlacin significativa entre la concentracin y la turbidez generada por la misma.

Teniendo todos los valores experimentales y la curva de calibracin se procedi a confirmar que la varianza es constante en todos los puntos de la recta, para asegurar que estos datos cumplen con lo requerido para una validacin o sea que se trata de valores precisos y con poca variacin. 32

Primero se realiz el anlisis de la correlacin de la grfica 2 (r). El valor de la correlacin de la grfica r debe estar en un rango de 1 para asegurar que los puntos de la grfica tienden a formar una lnea recta; en nuestro caso el r resultante toma un valor de 0.998 el cual asegura la linealidad de los puntos obtenidos en la parte experimental. El segundo parmetro estudiado fue la homocedasticidad. La homocedasticidad es una propiedad fundamental del modelo de regresin lineal general y est dentro de sus supuestos clsicos bsicos. Se dice que existe homocedasticidad cuando la varianza de los errores aleatorios de la regresin es la misma para cada observacin, en otras palabras asegura que no hubo manipulacin de datos por parte del operador y adems que los datos obtenidos dan una tendencia lineal o /y que la variacin entre cada punto de la recta es mnima. Del anlisis de los datos experimental se obtuvo la grfica 2: Grafica2.Homocedasticidad tcnica de sulfatos en agua potable.
2 1,5 1 0,5 Yg-Y MEDIA 0 0 -0,5 -1 -1,5 -2 -2,5 CONCENTRACION(ppm) 5 10 15 20 25 30 35 40

En la grfica 2 podemos ver que no hay ms de tres puntos formando una lnea recta por lo cual se confirma que la varianza es constante en todos los puntos, por lo tanto se confirma la homocedasticidad de los datos. 33

Con la confirmacin de que los datos obtenidos son homocedasticos se cumplieron los tres parmetros internos del laboratorio AlisccaLtda para asegurar que: Los datos obtenidos tienen tendencia lineal. Sus variaciones son mnimas entre cada determinacin de cada lote. Existe una correlacin significativa entre la concentracin y la turbidez generada por la misma. Las variaciones son mnimas entre cada determinacin, por lo tanto se asegura el buen funcionamiento de la tcnica en el rango lineal de trabajo. .Los errores relativos son casi constantes a lo largo de las determinaciones de cada lote, exceptuando el lote de menor concentracin ya que este tubo un error significativo.

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7.2.11 Calculo de un factor de incertidumbre por regresin lineal de la recta del mtodo. Empleando la desviacin estndar de los residuos de la recta de la regresin lineal y basndonos en los ensayos realizados durante la validacin podemos calcular la desviacin estndar de la regresin lineal y un factor correspondiente a la incertidumbre estndar que aporta el empleo de dicha regresin para calcular la concentracin de sulfatos.

( )

Dnde: N=7 K=14 YExp.=69.5 Ym=68.9 a=3.5 (Xt-Xm) ^2=3700

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Fase IV En esta fase fueron preparados estndares de concentracin desconocida por el codirector; posteriormente fueron entregados al analista el cual fue el encargado realizar las mediciones pertinentes, para posteriormente comparar los resultados tanto tericos como los experimentales y obtener con estos resultados en nivel de concordancia el error porcentual del mtodo al realizar el anlisis con muestras de concentracin desconocida. Estos datos estn consignados en la tabla 3.

Tabla 3.Datos de anlisis de muestras de concentracin desconocida

Muestra 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Media S Desviacin relativa Concentracin terica 20 22 20 14 30 18 25 30 14 18 25 21,5 5,6 0,3 Promedio 20,5 21,7 20,5 13,4 29,6 17,2 24,1 29,6 13,4 17,7 24,2 21,2 5,4 0,3 % Error concordancia relativo 102,4 2,4 98,7 1,3 102,5 2,5 95,7 4,3 98,7 1,3 95,5 4,5 96,4 3,6 98,7 1,3 95,6 4,4 98,1 1,9 97,0 3,0 20,7 5,5 0,0 21,1 5,6 0,5

Como se puede observar los errores relativos son bajos a concentraciones altas, esto indica que a medida que aumenta la concentracin el error se hace ms pequeo, con base en esta informacin se puede concluir que el mtodo tiene variaciones mnimas, por lo tanto este mtodo es preciso y adems exacto en las determinaciones de las concentraciones de sulfato en agua potable. Adems de 36

que las concordancias a lo largo de las 7 determinaciones se encuentran dentro de los rangos permitidos para este tipo de determinacin segn la normatividad de la AOAC. Fase V Se realizaron anlisis de muestras reales de diversos orgenes, las cuales fueron analizadas tanto por el codirector como por el analista para hallar un porcentaje de concordancia en la concentracin de las muestras entre los operadores o mejor dicho probar si la tcnica es reproducible, datos consignados en la tabla 4. Tabla 4.Reproducibilidad para sulfatos en agua potable.
Muestra 1 2 3 4 5 6 7 Media 23,5 s 5,4 Desviacin relativa 0,2 5,6 0,2 2,4 0,0 23,9 98,5 Concentracin Operador1 33,8 19,6 21,9 22,5 27,8 23,3 15,9 Concentracin Operador2 34,6 20,2 23,1 21,9 28,5 23,3 15,8 Concordancia 98 97 95 103 97 100 101

En genera la concordancia entre operadores tuvo valores muy cercanos, adems, desviaciones pequeas por lo cual se puede concluir que la tcnica tiene una precisin intermedia muy buena, al ser analizada por varios operadores, siempre y cuando se sigan los mismos protocolos y se reproduzca en las mismas condiciones operativas.

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Fase VI Se analiz la robustez de la tcnica por medio del cambio de algunos parmetros en la tcnica, en este caso se redujo a un 50% el volumen total de muestra a analizar. Se tomaron10 ml de solucin estndar de sulfatos con concentracin de 100ppm y fueron llevados a un baln 50ml, para posteriormente ser aforado con agua destilada tipo 2,los resultados obtenidos se consignan en la tabla 5.

Tabla 5.Robustes para la tcnica de sulfatos en agua potable.

Muestra Concentracin. Terica (ppm) Concentracin Experimental (ppm) %concordancia Error Absoluto Error Relativo

1 2 3 4 5 6 7

20 20 20 20 20 20 20

19,7 18,1 18,7 21,3 20,0 21,0 19,0

98,7 90,5 93,6 106,4 99,9 104,9 95,2

0,1 1,6 1,0 1,6 -0,3 1,3 0,7

0,3 8,1 4,9 8,1 1,4 6,5 3,3

media S

20 0

19,7 1,2

98,5

9,9 28,7

5,2 145,6

Se tomaron15 ml de solucin estndar de sulfatos con concentracin de 100ppm y fueron llevados a un baln 50ml, para posteriormente ser aforado con agua destilada tipo 2, los resultados obtenidos se consignan en la tabla 5.

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Tabla 6.Robustezpara la tcnica de sulfatos en agua potable 2.

Muestra Concentracin terica (mg/L) Concentracin Experimental (ppm) % concordancia Error Absoluto Error Relativo

1 2 3 4 5 6 7 media S
Desviacin relativa

30 30 30 30 30 30 30 30,00 0,00
0,000

30,1 29,6 29,8 31,7 27,7 31,7 31,4 30,30 1,46

0,048

100,4 98,6 99,5 105,7 92,4 105,7 104,8 101,00 4,86

0,048

0,1 0,4 0,2 1,7 2,3 1,7 1,4 1,12 0,88

0,782

0,4 1,4 0,5 5,4 8,3 5,4 4,6 3,71 2,99

0,807

Como se puede ver en las tablas 5 y 6, al reducir el volumen de muestra a la mitad se pueden obtener datos robustos y consistentes, ya que las desviaciones relativas y los errores relativos tiene variaciones muy pequeas. Los procedimientos seguidos para la validacin de la tcnica de sulfatos son satisfactorios para realizar los anlisis y dar un reporte confiable de las concentraciones de sulfatos permitidas en Colombia.

39

Anlisis de un lote de 20 muestras (Repetividad del mtodo) Se tomaron 25 ml de solucin de sulfatos de 100 mg/L, se llevaron a un baln , se complet el aforo y se procedi el anlisis por el correspondiente mtodo de las 20 muestras. Los datos se consignan en la tabla 7. Tabla 7.Repetitividad de la tcnica de sulfatos en agua potable. TECNICA: sulfatos VALOR REAL(ppm) ENSAYOS 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 MEDIA 0,5 s Desviacin relativa 0,0 0,28 0,64 1,18 0,64 VALOR OBSERVADO ( O) 24,828 24,855 24,722 25,282 24,908 23,335 24,188 23,601 23,948 23,335 24,081 23,948 24,028 24,108 23,868 23,735 24,001 24,615 24,455 24,562 24,2 25 ERROR ( O T) 0,608 0,635 0,501 1,062 0,688 0,886 0,032 0,619 0,272 0,886 0,139 0,272 0,192 0,112 0,352 0,485 0,219 0,395 0,235 0,341 0,45

ERROR RELATIVO % ( E / T ) *100 2,511 2,621 2,070 4,383 2,841 3,656 0,132 2,555 1,123 3,656 0,573 1,123 0,793 0,463 1,454 2,004 0,903 1,630 0,969 1,410 1,84

40

Incertidumbre estndar por repetitividad

Incertidumbre relativa

Tomando en cuenta la magnitud del error promedio del lote de 20 muestras analizados, se puede concluir que la tcnica tiene una muy buena repetitividad, lo cual es muy importante en la tcnica a la hora de la estimacin de resultados. Tal como lo muestra los anlisis de un lote con la misma concentracin, esta tcnica es perfectamente vlida para obtener resultados con una buena confiabilidad, as se hagan por duplicado o triplicado, puesto que las desviaciones y los errores relativos tienen poca variacin. Fase VII Ensayos de colaboracin, estudios de funcionamiento de los mtodos y evaluacin de las desviaciones entre laboratorios. Una vez terminada la FASE VII se procedi a realizar todo el anlisis estadstico, los criterios de rechazo de datos aplicando la prueba T,
Laboratorio Salud publica Resultado (ppm SO4) 35.4 Laboratorio Aliscca Resultado 34.34 % Concordancia 103.1

Para comprobar que la tcnica funciona se realizaron estos ensayos de colaboracin, dando una concordancia del 103 % en la concentracin de la misma solucin de sulfatos. Por lo tanto la tcnica es reproducible y adems es exacta a la hora de la determinacin de sulfatos en agua potable. Estos ensayos de colaboracin son muy importantes puesto que con esto se determina la concordancia entre laboratorios; los anlisis deben hacerse en laboratorios reconocidos y acreditados.

ADICIN ESTNDAR

Se tomaron 50mlde agua tratada de grifo, se llevaron a un baln de 100ml donde posteriormente se agreg las cantidades de solucin estndar de sulfatos consignadas en la tabla.7, luego se agreg agua destilada tipo 2 hasta el aforo.

41

Se grafica el dopaje de sulfatos vs la turbidez generada y obtenemos la Grafica 3. El blanco es la muestra. Y el corte en eje x negativo es la concentracin es la concentracin de la muestra, como se aforo a 100, se multiplica el valor por el factor de dilucin que es 2.Del corte negativo con x de la grfica 3 obtenemos una concentracin real de 13,8.La concentracin que se obtiene de la curva de calibracin del mtodo (Grafica 1.) es de 13,80 Comparando estas dos concentraciones se puede notar que son casi idnticas, por lo cual se puede decir que este mtodo es apropiado para realizar el anlisis de sulfatos en agua potable Tabla8.Adicion estndar de la tcnica de sulfatos en agua potable.
Muestra 1 2 3 4 5 6 7 Dopaje de sulfatos(ml) 0 5 10 15 20 25 30 Turbidez generada 50,05 65,5 78,8 93,05 116,5 136 150,5 Diferencia % Recuperacin 104,2 95,7 98,9 95,8 98,8 95,9

15,45 28,75 43 66,45 85,95 100,45

Grafica3.Regresion lineal adicin estndar de la tcnica de sulfatos en agua potable.

160 140 120 Turbidez generada 100 80 60 40 20 0 -20 -10 0 10 20 -20 Volumen(ml) de sulfatos agregados 30 40 y = 3,4581x + 46,406 R = 0,9969

42

El mtodo de adicin estndar se utiliza en anlisis instrumental para determinar la concentracin de una sustancia en una muestra desconocida por la comparacin a un sistema de muestras de la concentracin sabida, similares a usar a curva de calibracin. La adicin estndar se puede aplicar a la mayora de las tcnicas analticas y se utiliza en vez de a curva de calibracin para solucionar efecto de la matriz problema. Adems , para que sea vlida la adicin estndar la correlacin grafica debe estar en un rango de 1, en nuestro caso se obtuvo una correlacin grafica de casi 1, por lo cual se puede concluir que se obtuvo buenos resultado de la adicin estndar para comparar con la curva de calibracin del mtodo de sulfatos en agua a comparar la concentracin real de la muestra obtenida por medio de la adicin estndar y la obtenida en la curva de calibracin se muestran resultados muy similares como se muestra en la tabla; por lo tanto se comprueba la especificidad del mtodo.
Dato obtenido adicin estndar 13.76 %Concordancia Dato obtenido curva de calibracin 13.80 99,7

7.3 VALIDACION PARA LA DETERMINACION DE CLORO RESIDUAL EN AGUA POTABLE. 7.3.1 DESCRIPCION GENERAL 7.3.2 4.1 FUNDAMENTO La cloracin del agua tiene como beneficio la gran mejora de su calidad, al destruir microorganismos patgenos, reaccionar con el amoniaco, hierro, manganeso, sulfuros y algunas substancias orgnicas. No obstante tambin puede producir efectos adversos tales como la intensificacin del sabor y el olor caracterstico de fenoles y otros compuestos orgnicos. Adems puede formar compuestos organoclorados potencialmente cancergenos como cloroformo, cloraminas, tricloruro de nitrgeno, etc., que producen efectos adversos a la vida acutica. El cloro aplicado al agua en forma molecular (Cl2) o de hipoclorito(ClO-) inicialmente se hidroliza a la forma de cloro libre Cl-, o sea en un cloro molecular acuoso, ion hipoclorito y cido hipocloroso, cuyas proporciones relativas dependen del pH y la temperatura. Al cloro libre reacciona fcilmente con el amoniaco y ciertos compuestos nitrogenados para formar monocloraminas, dicloraminas y tricloruro de nitrgeno, que se conocen como cloro combinado. 43

La presencia y concentracin de estas formas combinadas dependen principalmente del pH, la temperatura, la relacin inicial cloro-nitrgeno, la demanda absoluta de cloro y el tiempo de reaccin. Tanto el cloro libre como el combinado pueden estar presentes simultneamente en una muestra.

7.3.3 4.2 PRINCIPIO La N,N- dietil-p-fenilendiamina (DPD) se usa como indicador en el procedimiento de titulacin con sulfato ferroso amoniaco (FAS).Cuando no se requiere diferenciar las especies de cloro presentes en la muestra, el procedimiento puede ser simplificado para obtener resultados de cloro libre, combinado y cloro residual total. En ausencia del ion Yoduro, el cloro libre reacciona instantneamente con el indicador DPD y produce un color rosado. Si posteriormente se adiciona una pequea cantidad del ion yoduro, este acta catalticamente permitiendo la reaccin del indicador DPD con las monocloraminas y produce el color mencionado. Al adicionar un exceso del ion yoduro, reaccionan tanto las dicloraminas como las dems especies de cloro residual presentes en la muestra. El pH es una variable crtica en la reaccin. A pH bajos, las cloraminas tienden a reaccionar como cloro libre y las dicloraminas como monocloraminas; a pH altos hay disolucin de oxgeno y se genera un color que no es debido a cloro residual. Por esta razn es necesario ajustar el pH de la muestra de 6,2 a 6,5 y el color rosado que se genera en cada paso debe titularse inmediatamente para obtener resultados exactos[20]. 7.3.4 INTERFERENCIAS El manganeso es probablemente la substancia que interfiere en forma ms significativa entre las encontradas en las aguas. Para corregir esta interferencia debe colocar 5 ml de la solucin reguladora de fosfatos, 0,5 ml de solucin de Arsnico de sodio (5 g de NaAsO 2 en un litro de agua dd) o 0,5 ml de solucin de tioacetanida de 0,25% (p/v) y 100 ml de la muestra de agua. Homogenice y adicione 5 ml de la solucin indicadora. El volumen de FAS gastado es proporcional al manganeso presente en la muestra; por lo tanto debe restar este valor al volumen cuantificado de la titulacin de cloro libre para lograr la exactitud de su determinacin. Las temperaturas altas producen disminucin del color. Las concentraciones de cobre mayores de 10 mg/l interfieren, pero este efecto se contrarresta con el EDTA adicionado a los reactivos. Las concentraciones de cromatos mayores de 2 mg/L intervienen con la determinacin del punto final. 44

Adiciona cristales de Cloruro de Bario (BaCl2.2H2O) para corregir esta interferencia. Los contaminantes orgnicos pueden producir resultados falsos de cloro libre especialmente en mtodos colorimtricos. Las concentraciones de cloro combinado (Monocloraminas, NCl 3, etc.) mayores de 0,5 mg/l interfieren en la determinacin del cloro libre. Esta interferencia se ve fuertemente incrementada por la presencia de trazas de ion yoduro.

7.3.5 DESCRIPCION DE EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS 7.3.6 MATERIALES Y EQUIPOS Bureta de 10mL Erlenmeyer de 250mL Pipetas aforadas y/o graduadas de 5mL Probeta de 100mL Matraces aforados de 100 a 1000mL Vasos de precipitado Pinzas para bureta Nueces Balanza analtica 7.3.7 6.2 REACTIVOS. Agua destilada y/o desionizada Solucin reguladora de fosfatos Solucin indicadora de N,N-dietil-p-fenilendiamina (DPD) Sulfato ferroso amoniacal (FAS) Cristales de yoduro de potasio Dicromato de potasio 0.1N Difenilaminosulfonato de bario 0.1% Cristales de cloruro de bario Nota: para la preparacin de los reactivos remitirse al manual de preparacin de soluciones (MFQ-001) 7.3.8 PROCEDIMIENTO 1. En un Erlenmeyer de 250mL, Mezcle 5mL de solucin reguladora de fosfatos y 5mL de solucin indicadora DPD y adicione 100mL de muestra 2. Si no hay aparicin de color, el cloro residual libre es igual a cero (0) verifique adicionando con la punta de una esptula metlica hipoclorito de calcio, en caso contrario contine con el paso siguiente. 3. Empleando una bureta titule con la solucin estndar de sulfato ferroso amoniacal la muestra rosada gota a gota, agitando suave y 45

4.

5.

6. 7.

constantemente el Erlenmeyer, hasta que desaparezca completamente el color, anote el volumen de FAS gastado. Adicione sobre la solucin remanente de la titulacin anterior (aun en el caso en el que el cloro residual libre haya sido cero) cristales de yoduro de potasio (aproximadamente 1g). Mezcle hasta la dilucin completa y observe despus de dos minutos en reposo, si no hay coloracin alguna el cloro residual combinado es cero, si aparece coloracin contine con el siguiente paso. Titule la muestra rosada con solucin de FAS gota o gota, hasta la desaparicin del color y anote el volumen de FAS gastado. Realice el anlisis por duplicado.

7.3.9 DIAGRAMA DE FLUJO PARA LA DETERMINACION DE CLORO RESIDUAL INICIO

Adicionar a 100mL de muestra, 5mL de solucin reguladora de fosfatos y 5mL de solucin DPD Si no aparece coloracin el cloro residual libre es cero

Si aparece color rosado titule con solucin de FAS hasta desaparicin de este Si aparece color rosado titule con solucin de FAS hasta desaparicin de este Registre el resultado

FIN 46

7.3.10 CALCULOS Aplique la siguiente relacin para cloro residual libre y cloro residual combinado

CRT: Cloro residual total CRL: Cloro residual libre A: volumen de FAS gastado en la titulacin (mL) B: Titulo del FAS (0.1 mg Cl2 / L) 1000: factor de correccin mL-----L M= volumen de muestra titulada (mL) 7.3.11 REPORTE DE RESULTADOS. Se reporta como mg Cl2 / L 7.3.12 RESPONSABLES La responsabilidad recae sobre el analista el cual debe seguir la metodologa establecida para el anlisis. 7.3.13 NOMBRES DE LAS PERSONAS QUE PARTICIPAN EN EL PROCESO Michel Darwin Aponte Marn Omar Andrs Valencia Gutirrez 7.3.14 Resultados Fase I: Se encontr que las metodologas a validar se realizan por medio de mtodos reconocidos y avalados nacionalmente por el Instituto Nacional de Salud (INS) Al revisar los reactivos se encontr que estos son grado analtico adems tienen certificados de anlisis, pureza y con respaldo ACS e ISO Los protocolos de validacin empleados corresponden a los desarrollados por el laboratorio Aliscca Ltda, el estndar methods para el anlisis de agua potable, la AOAC y el IDEAM. Fase II: Se encontr que el laboratorio emplea vidriera clase A que es la apropiada para conseguir resultados analticos de alta trazabilidad. Todo esto respaldado por sus respectivos certificados; aun as se realiz la verificacin del estado del mismo segn protocolo aliscca. Se encontr que la vidriera clase A cumple segn los requerimientos de aceptacin (Programa de validacin de material de vidrio de AlisccaLtda basado en NTC: 2454, 2322, 2201, 2321). Se revisaron los certificados de calibracin y manuales de la balanza analtica y Turbidmetro con lo cual se pudo establecer que son apropiados para la ejecucin para las tcnicas. 47

Fase III: Teniendo toda la metodologa y los manuales necesarios para esta fase se procedi a realizar el anlisis de siete lotes de diferente concentracin de sulfatos durante siete das sucesivos dando como resultado los datos consignados en la tabla 9. Tabla9.Datos curva de calibracin de la tcnica de cloro residual libre en agua potable. Tcnica: Cloro residual Concentracin Terica (mg) Concentracin Experimental(ppm) Volmenes de FAS experimentales (No. De ensayo) 1 2 3 4 5 6 7 0,011 0,011 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,15 0,107 0,019 0,176 0,017 0,1 0,1 0,1 0,15 0 2,625 0,018 0,019 0,2 0,15 0,2 0,2 0,15 0,2 0,15 0,179 0,027 0,15 0,025 0,2 0,2 0,15 0,2 0 5,883 0,035 0,036 0,35 0,35 0,35 0,35 0,35 0,3 0,35 0,343 0,019 0,055 0,017 0,35 0,35 0,3 0,35 0 1,25 0,089 0,087 0,8 0,85 0,8 0,8 0,85 0,85 0,85 0,829 0,027 0,032 0,025 0,85 0,85 0,8 0,85 0 2,13

Promedio Desviacin Desviacin relativa Desviacin media Mediana Moda X mnimo X mximo Datos Descartados por regla T (D) % error relativo

48

Continuacin Tabla9. Tcnica: Cloro residual Concentracin Terica 0,177 0,457 (mg) Concentracin 0,174 0,448 Experimental(ppm) Volmenes experimentales (No. De ensayo) 1 2 3 4 5 6 7 1,7 1,7 1,65 1,65 1,65 1,65 1,65 1,664 0,024 0,015 0,023 1,65 1,65 1,65 1,7 0 1,71 4,3 4,25 4,3 4,3 4,3 4,2 4,3 4,279 0,039 0,009 0,036 4,3 4,3 4,2 4,3 0 2,02

0,882 0,866 8,3 8,3 8,3 8,2 8,25 8,3 8,3 8,279 0,039 0,005 0,036 8,3 8,3 8,2 8,3 0 1,825

1,219 1,204 11,5 11,5 11,5 11,55 11,5 11,5 11,5 11,507 0,019 0,002 0,017 11,5 11,5 11,5 11,55 0 1,296

Promedio Desviacin Desviacin relativa Desviacin media Mediana Moda X mnimo X mximo Datos Descartados por regla T (D) % error relativo

Despus de la obtencin de los datos para la curva de calibracin (Tabla.6) se puede concluir con base en las desviaciones relativas que el mtodo tiende a tener pocas variaciones entre cada determinacin, adems los errores relativos tienden a mantenerse constantes a medida que aumenta la concentracin del analito de inters en la solucin. El laboratorio Aliscca Ltda. Para asegurar que los datos obtenidos (consignados en la tabla 9) tienen una tendencia lineal, adems, de que tienen pocas variaciones en las desviaciones relativas y errores pequeos, analiza tres parmetros fundamentales en el momento de la validacin, estos parmetros son: I. Correlacin grafica(r2) II. Comparacin entre t terico y experimental. III. Homocedasticidad. 49

Con estos datos se procedi a graficar Curva de calibracin (Grafica 4), la cual resulto ser: Grafica 4.Curva de calibracin del mtodo de la tcnica de cloro residual libre en agua potable.

mg DE CLORO RESIDUAL EXPERIMENTALES

CONCENTRACION TEORICA VS EXPERIMENTAL

1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4 mg DE CLORO RESIDUAL TEORICO y = 1,002x - 0,001 R = 0.999

Con los datos que arroja la grfica de calibracin del mtodo se procedi a calcular otros parmetros adicionales tales como el lmite de deteccin, cuantificacin y por ultimo uno de losvaloresmsimportantes, el cual es el t experimental,el cual es mayor que el t terico, Esto confirma que a medida que aumenta la concentracin de sulfatos en agua, tambin aumenta la turbidez al realizar el tratamiento necesario a muestra para el anlisis.
Pendiente r Lmite de cuantificacin 1.0027 1 0,028 Intercepto r^2 Lmite de deteccin -0.0013 0.999 0,0084 para una bureta 0.5ml como escala mnima

tTerico 2.57 texperimental 304.2 El coeficiente de correlacin es significativo, ya que aplicando una prueba t de dos colas y (n-2) grados de libertad, la t calculada fue mayor al t de tablas, por lo tanto se rechaza la hiptesis nula, y se concluye que existe una correlacin significativa entre la concentracin de cloro residual y el volumen de FAS gastado en la valoracin.

50

Teniendo todos los valores experimentales y la curva de calibracin se procedi a confirmar que la varianza es constante en todos los puntos de la recta, para asegurar que estos datos cumplen con lo requerido para una validacin o sea que se trata de valores precisos, exactos y con poca variacin. Primero se realiz el anlisis de la correlacin de la grfica 4 (r). El valor de la correlacin de la grfica r debe estar en un rango de 1 para asegurar que los puntos de la grfica tienden a formar una lnea recta; en nuestro caso el r resultado toma un valor de 1 el cual asegura la linealidad de los puntos obtenidos en la parte experimental. El segundo parmetro estudiado fue la homocedasticidad. La homocedasticidad es una propiedad fundamental del modelo de regresin lineal general y est dentro de sus supuestos clsicos bsicos. Se dice que existe homocedasticidad cuando la varianza de los errores estocsticos de la regresin es la misma para cada observacin. Del anlisis de los datos experimentales se obtuvo la siguiente grfica: Grafica 5.Homocedasticidad tcnica de cloro residual en agua potable.
0,05 0,04 0,03 0,02 Y gorrito -Yi 0,01 0 0 -0,01 -0,02 -0,03 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4

mg de cloro teoricos

51

En la grfica podemos ver que no hay ms de tres puntos formando una lnea recta por lo cual se confirma que la varianza es constante en todos los puntos por lo tanto se confirma la homocedasticidad de los datos. Con la confirmacin de que los datos obtenidos son homocedasticos se cumplieron los tres parmetros internos del laboratorio Aliscca Ltda para confirmar que: Los datos obtenidos tienen tendencia lineal. Sus variaciones son mnimas entre cada determinacin de cada lote. Existe una correlacin significativa entre la concentracin de cloro residual y el volumen de FAS gastado en la valoracin. Las variaciones son mnimas entre cada determinacin, por lo tanto se asegura el buen funcionamiento de la tcnica en el rango lineal de trabajo Los errores relativos son casi constantes a lo largo de las determinaciones de cada lote, exceptuando el lote de menor concentracin ya que este presento un error significativo.

52

7.3.15 Calculo de un factor de incertidumbre por regresin lineal de la recta del mtodo. Empleando la desviacin estndar de los residuos de la recta de la regresin lineal y basndonos en los ensayos realizados durante la validacin podemos calcular la desviacin estndar de la regresin lineal y un factor correspondiente a la incertidumbre estndar que aporta el empleo de dicha regresin para calcular la concentracin de cloro residual.

( ) Dnde: N=7 K=7 YExp.=0.35 Ym=0.343 a=1

(Xt-Xm) ^2=1.4467

53

Fase IV En esta fase fueron preparados estndares de concentracin desconocida por el codirector; posteriormente fueron entregados al analista el cual fue el encargado realizar las mediciones pertinentes, para posteriormente comparar los resultados tanto tericos como los experimentales y obtener con estos resultados en nivel de concordancia y el error porcentual del mtodo al realizar el anlisis con muestras de concentracin desconocida. Estos datos fueron consignados en la tabla 10. Tabla 10.Estndares de concentracin desconocida
Mtodo Muestra Concentracin terica (ppm cloro) 1 2 3 4 5 6 7 8 Media Desviacin Desviacin relativa 0,07 0,14 0,22 0,19 0,09 0,07 0,05 0,04 0,11 0,06 0,58 Cloro residual en agua potable Concentracin % Experimental Concordancia (ppm cloro) 0,069138608 104,7 0,138277215 99,2 0,218052532 99,1 0,196779114 104,2 0,090412025 100,5 0,074456962 103,5 0,053183544 98,5 0,037228481 103,5 0,11 101,65 0,06 2,40 0,58 0,02 Error relativo 4,72 0,79 0,92 4,17 0,51 3,47 1,46 3,47 1,30 0,41 0,88

Como se puede observar en la tabla 10 las concordancias son casi perfectas en este mtodo, adems de que los errores relativos disminuyen al aumentar la concentracin de cloro residual en agua; con base en esta informacin se concluye que el mtodo es apto para emitir resultados precisos.

54

Fase V Para determinar la reproducibilidad del mtodo se realizaron anlisis de muestras de diversos orgenes, las cuales fueron analizadas tanto por el codirector como por el analista para hallar un porcentaje de concordancia en la concentracin de las muestras entre los operadores o mejor dicho probar si la tcnica tiene una buena repetitividad. Tabla 11.Reproducibilidad para cloro residual en agua potable
Muestra Concentracin(mg Cl2) Operador1 1,28 1,89 1,91 1,22 2,34 0,27 1,22 1,46 0,63 0,43 0,5 0,1 Concentracin(mg Cl2) Operador2 1,3 1,9 1,9 1,3 2,4 0,3 1,3 1,4 0,6 %Concordancia

1 2 3 4 5 6 7 Media S Desviacin relativa

100,0 98,6 100,0 95,8 97,8 100,0 95,8 101,1 8,2

En general la concordancia entre operadores tuvo valores muy cercanos, adems, desviaciones pequeas por lo cual se puede concluir que la tcnica tiene una precisin intermedia muy buena, al ser analizada por varios operadores, siempre y cuando se sigan los mismos protocolos y se reproduzca en las mismas condiciones operativas.

55

Fase VI Para analizar la robustez del mtodo, se tomaron dos muestras de 100ml de agua, a una de ellas se le realizo el procedimiento normal, mientras que a la segunda se invirti el orden de los reactivos dando como resultado los datos consignados en la tabla 12. Tabla 12.Robustez alterando el orden de los reactivos.
Muestra 1 2 3 4 5 6 7 Media S desviacin relativa Error relativo Muestra invertida 1,2 1,2 1,1 1,2 1,1 1,1 1,2 0 1,13 0,07 0,06 11,3 Muestra normal 1,28 1,28 1,28 1,28 1,28 1,28 1,28 0,0 1,28 0,00 0,00 0 Concordancia muestra normal 95,8 91,7 83,3 91,7 83,3 83,3 91,7 100,00 0,00 0,00 0

Como se puede observar la muestra a la cual se le realizo el procedimiento normal tubo datos repetibles y robustos, sin cambio alguno, mientras que a la cual se le invirti el procedimiento tuvo cambios considerables en las 7 determinaciones, adems, los resultados fueron muy alejados de los obtenidos por la metodologa normal. Con lo cual se puede concluir que el mtodo es poco robusto al variar la metodologa, ya que se obtienen datos no muy precisos Anlisis de un lote de 20 muestras (Repetividad del mtodo) Se prepararon 1 L de solucin de 1,537 ppm de cloro residual libre, se llevaron a un Erlenmeyer donde se agreg la solucin reguladora de sulfatos y el indicador DPD. Se procedi a valorar con solucin de FAS dando como resultado los datos consignados en la tabla 13.

56

Tabla 13.Repetitividad de la tcnica de cloro residual en agua. TECNICA: Cloro residual libre. VALOR ASIGNADO(ppm)1,537

VALOR ENSAYOS OBSERVADO (O) 1 1,54 2 1,54 3 1,49 4 1,49 5 1,49 6 1,49 7 1,49 8 1,49 9 1,49 10 1,49 11 1,49 12 1,54 13 1,44 14 1,44 15 1,49 16 1,44 17 1,49 18 1,44 19 1,44 20 1,49 MEDIA 1,48 s 0,03 Desviacin 0,02 relativa

ERROR ( O T) 0,06 0,06 0,01 0,01 0,01 0,01 0,01 0,01 0,01 0,01 0,01 0,06 0,05 0,05 0,01 0,05 0,01 0,05 0,05 0,01 0,02 0,02 0,99

ERROR RELATIVO % ( E / T ) *100 3,94 3,94 0,36 0,36 0,36 0,36 0,36 0,36 0,36 0,36 0,36 3,94 3,23 3,23 0,36 3,23 0,36 3,23 3,23 0,36 1,61 1,18 0,73

57

Incertidumbre estndar por repetitividad

Incertidumbre relativa

Tomando en cuenta la magnitud del error promedio del lote de 20 muestras analizados, se puede concluir que la tcnica tiene una muy buena repetitividad, lo cual es muy importante en la tcnica a la hora de la estimacin de resultados. Tal como lo muestra los anlisis de un lote con la misma concentracin, esta tcnica es perfectamente vlida para obtener resultados con una buena precisin en trminos de repetitividad, as se hagan por duplicado o triplicado, puesto que las desviaciones y los errores relativos tienen poca variacin. Fase VII Ensayos de colaboracin, estudios de funcionamiento de los mtodos y evaluacin de las desviaciones entre laboratorios. Una vez terminada la FASE VII se proceder a realizar todo el anlisis estadstico, los criterios de rechazo de datos aplicando la prueba t.
Laboratorio Resultado (ppm cloro) 100 Laboratorio Resultado % Concordancia

Salud publica

Aliscca

95

95

Para comprobar que la tcnica funciona se realizaron estos ensayos de colaboracin, dando una concordancia del 95 % en la concentracin de la misma solucin de cloro residual. Por lo tanto la tcnica es reproducible y adems es exacta a la hora de la determinacin de cloro residual en agua potable. Estos ensayos de colaboracin son muy importantes puesto que con esto se determina la desviacin entre laboratorios; los anlisis deben hacerse en laboratorios reconocidos y acreditados. ADICIN ESTNDAR Se tomaron 50mlde agua tratada de grifo, se le agrego volmenes desde 0 a 7 ml de solucin estndar de cloro de concentracin de 18.48 ppm (Volmenes consignados en la tabla 13), a estas soluciones se les calculo el cloro agregado 58

tericamente agregado y se valor obteniendo el cloro total contenido en la muestra. Se grafica Los mg/l de cloro agregados vs volumen de Fas gastado y obtenemos la grfica 5. El blanco es la muestra. Y el corte en eje x negativo es la concentracin e de la muestra, como se aforo a 100 ml, se multiplica por el factor de dilucin que es 2. Del corte negativo con x de la grfica obtenemos la concentracin de la muestra 0.148 mg/L Cl2.La concentracin que se obtiene de la curva de calibracin del mtodo (Grafica 4) es de 0.14 mg cloro.

Tabla 14.Adicinestndar de cloro residual libre en agua potable.

Muestra Volumen Agregado(ml) Cloro agregado(mg) Volumen FAS gastado(ml) Cloro agregado exp(mg) Cloro agregado terico(mg) %Recuperacin

1 2 3 4 5 6 7 8

0 1 2 3 4 5 6 7

0 0,01848 0,03696 0,05544 0,07392 0,0924 0,11088 0,12936

1,3 1,45 1,575 1,775 1,95 2,075 2,275 2,4 1,54 1,68 1,89 2,07 2,21 2,42 2,55 0,18 0,36 0,54 0,71 0,88 1,05 1,21 87,20 80,73 93,87 97,27 93,68 99,14 96,78

Comparando estas dos concentraciones se puede notar que son casi idnticas, por lo cual se puede decir que este mtodo es apropiado para realizar el anlisis de cloro residual en agua potable.

59

Grafica 6.Grafica adicinestndarpara la tcnica de cloro residual en agua potable.

3 y = 8,6967x + 1,2875 R = 0,9994 Vmedio fas gastado 2,5 2 1,5 g 1 0,5 0 -0,2 -0,15 -0,1 -0,05 0 0,05 0,1 0,15 Mg cloro agregados

El mtodo de adicin estndar se utiliza en anlisis instrumental determinar la concentracin de una sustancia en una muestra desconocida por la comparacin a un sistema de muestras de la concentracin sabida, similares a usar a curva de calibracin. La adicin estndar se puede aplicar a la mayora de las tcnicas analticas y se utiliza en vez de a curva de calibracin para solucionar efecto de la matriz problema. Adems , para que sea vlida la adicin estndar la correlacin grafica debe estar en un rango de 1, en nuestro caso se obtuvo una correlacin grafica de 0.999, por lo cual se puede concluir que se obtuvo buenos resultados en la adicin estndar para comparar con la curva de calibracin del mtodo de cloro residual en agua; al comparar la concentracin real de la muestra obtenida por medio de la adicin estndar y la obtenida en la curva de calibracin se muestran resultados muy similares como se muestra en la tabla 15. Tabla 15.Comparacin de resultados para cloro residual libre.
Concentracin por medio de adicin estndar (Grafica 6.) 0.148 Concentracin por medio de curva de calibracin del mtodo (grafica 4.) 0.14

Discusin de resultados 60

Las desviaciones relativas de los mtodos tienen poca variacin, indicando que las tcnicas tienen una buena repetitividad. En el caso de sulfatos en agua potableTomando en cuenta la magnitud de la desviacin de 20 muestras analizadas, que fue de 0.002, se puede concluir que la tcnica tiene una muy buena repetitividad, lo cual es muy importante en la tcnica a la hora de la estimacin de resultados. Tal como lo muestra los anlisis de un lote con la misma concentracin, esta tcnica es perfectamente vlida para obtener resultados con una buena confiabilidad, as se hagan por duplicado o triplicado, puesto que las desviaciones y los errores relativos tienen poca variacin.En el caso de cloro residual en agua potable la mxima desviacin relativa fue de 0.176 lo cual indica que la tcnica tiende a ser repetible atreves de los ensayos a realizar conservando los protocolos y condiciones determinadas por este. Error relativo al para la tcnica de sulfatos en agua potable estuvo entre 0.12 y 11.60, el cual es un error es un error bajo puesto que este disminuye al aumentar la concentracin de sulfatos. Para cloro residual libre el error vario entre 1.3 y 5.9, por medio de la comparacin del anterior rango de error se concluye es la tcnica tiene una buena precisin intermedia, adems, de asegurar que el error disminuye al aumentar la concentracin. Segn los criterios del laboratorio aliscca se busca que los lmites de deteccin de los mtodos validados sean como mnimo 10 veces menores que el menor valor de la normatividad en aplicacin. Se buscan que estos lmites tengan valores mucho ms bajos que los establecidos por la normatividad vigente para asegurar la calidad de los anlisis realizados, adems, de la veracidad de estos a la hora de reportar resultados. Los lmites de deteccin obtenidos experimentalmente para la tcnica fueron: 0.1 mg/L para Cloro residual libre y 2.5 mg/L para sulfatos. La resolucin 2115, establece que para cloro residual libre debe ser de 0,3 mg/L, (por lo tanto el de aliscca debe ser 0,03 mg/L (lo cual no es posible de lograr con este mtodo) el cual es un buen lmite teniendo en cuenta la complejidad de la tcnica. Para sulfatos la normativa establece tanto que el lmite de deteccin debe ser de 30 ppm, comparndolo con el obtenido se observa que este mtodo cumple con los requerimientos internos del laboratorio. Para el anlisis de sulfatos se obtuvo un lmite de deteccin ms bajo que el de la normatividad vigente puesto que la concentracin sulfatos permanece invariante a condiciones de temperatura. Al estudiar la robustez de los mtodos se encontr que: En el caso del cloro cuando se vari el orden de los reactivos esto dio lugar a variaciones considerables, con lo cual se debe ser precavido en el momento del anlisis en el cual se debe agregar los reactivos en las cantidades y volmenes establecidos dentro de la metodologa interna del laboratorio aliscca. Para los sulfatos cuando se realiz en anlisis a la mitad del volumen se encontr que el mtodo tiene poca 61

variacin en los resultados, adems, de esto se encontr que el tiempo y la velocidad de agitacin a la hora de agregar el cloruro de bario (BaCl 2) son muy delicados, puesto que si no hay la suficiente agitacin en el momento de agregar en cloruro de bario la turbidez generada se podra reducir a la mitad o a muchos menos dando resultados no exacto y errneos. El anlisis de cloro se ve afectado pormicro perdidas prdidas desde la toma de la muestra hasta el anlisis de la misma. Estas prdidas son causadas por el aumento en la temperatura, complejidad del transporte incluso el almacenamiento a bajas temperaturas no es una garanta para preservar el cloro en una muestra. Segn los datos obtenidos durante toda la validacin de las tcnicas se puede afirmar que estos mtodos son funcionales a la hora de la determinacin de la concentracin ya sea de sulfatos o cloro residual libre.

62

8.

CONCLUSIONES

Se realiz y se document la validacin de las tcnicas de sulfatos en agua potable por el mtodo turbidimetrico y cloro residual por el mtodo FAS-DPD

Por medio de la validacin de las tcnicas se determin de manera experimental y para las condiciones del laboratorio alisccaLtda., los siguientes parmetros: Repetitividad, exactitud, lmite de deteccin y robustez. Se document y valido el mtodo de anlisis de sulfatos por medio de la tcnica turbidimetrica. Se document y valido el mtodo de anlisis de cloro residual en agua potable por medio de la tcnica volumtrica FAS-DPD. La tcnica de sulfatos en agua potables mostro ser apropiada para la determinacin de sulfatos segn las concentraciones establecidas por la normativa vigente, si esta cambia el mtodo estar sujeto a una revalidacin. La tcnica de sulfatos en agua potable es apta para la determinacin de sulfatos en concentraciones grandes, a bajas concentraciones las desviaciones aumenta considerablemente. La tcnica de sulfatos demostr ser reproducible, tener desviaciones pequeas en cada una de las repeticiones de los diferentes lotes analizados, adems, que cuando se vari la metodologa las variaciones fueron mnimas por lo cual el mtodo es funcional. La tcnica de cloro residual en agua potables mostro ser apropiada para la determinacin de cloro segn las concentraciones establecidas por la normativa vigente en Colombia, si esta cambia el mtodo estar sujeto a una revalidacin. La tcnica de cloro residual en agua potable es apta para la determinacin de cloro tanto en concentraciones grandes como a concentraciones bajas,esta es muy exacta a la hora de la determinacin. La tcnica de cloro residual demostr ser reproducible, tener desviaciones pequeas en cada una de las repeticiones de los diferentes lotes analizados, adems, que cuando se vari la metodologa las variaciones en la 63

determinacin de las concentraciones fueron mnimas por lo cual el mtodo es funcional.

64

9.

RECOMENDACIONES

Se recomienda adquirir vidriera nueva con la misma calidad de la existente para una prxima validacin.

Realizar ms ensayos de colaboracin para cada validacin.

65

10. PRESUEPUESTO Tabla 16.Estimacin de costos para la tcnica Sulfatos (SO4-2)

ESTIMACION DECOSTOS PARA SULFATOS(SO4-2) Etapa de realizacin Curva de trabajo Fase III Fase IV Fase V Fase VI Fase VII Valor total N de veces que se realiza la tcnica 49 7 7 7 40 7 Valor(Pesos) 931000 133000 133000 133000 760000 133000 2223000

Costo total realizacin del proyecto $ 2.223.000 Tabla 17. Estimacin de costos para la tcnica de cloro
ESTIMACION DE COSTOS PARA Cl(residual) Etapa de realizacin N de veces que se Valor(pesos) realiza la tcnica Curva de trabajo 49 671300 Fase III 7 95900 Fase IV 7 95900 Fase V 7 95900 Fase VI 40 548000 Fase VII 7 95900 Valor total 1602900

Costo total realizacin del proyecto $ 1.602.900

Costo total realizacin de toda la validacin: 3825900

66

11. RECURSOS DISPONIBLES

Tabla18.materiales necesarios para la validacin

Materiales 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 20 Balones aforados de 1L Balones aforados de 100mL clase A Bureta de 10mL clase A Pipetaaforada 5mLl Pipetaaforada 1mL Beaker 250mL Beaker 100mL Vidrio reloj Pesa sales Erlenmeyer 100mL Soporte universal Pinzas Esptulas Embudos

Unidades 3 8 1 6 4 4 4 4 4 8 2 4 8 8

NOTA: Todos los materiales necesarios para la validacin ser aportada por el laboratorio ALISCCA Ltda.

67

Tabla 19.Equipos necesarios para la validacin

Equipos 1 Balanza analtica marca OHAUS de cuatro cifras significativas Manta de calentamiento Corning con 2 3 4 agitacin magntica Cabina de extraccin Turbidmetro

Unidades 1

1 1 1

NOTA: Todos los equipos necesarios para la validacin sern aportados por el laboratorio ALISCCA Ltda.

68

Tabla 20.Reactivos necesarios para la validacin de sulfatos

REACTIVOS 1 2 3 4 5 6 7 Cloruro de magnesio Acetato de sodio cidoactico Nitrato de potasio Sulfato de potasio Cloruro de bario cidosulfrico

NOTA: Todos los reactivos necesarios para la validacin sern aportados por el laboratorio ALISCCA Ltda.

69

Tabla 21.Reactivos para la validacin de cloro residual

REACTIVOS 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Fosfato acido de sodio Fosfato di acido de potasio EDTA cido sulfrico Oxalato de DPD Sulfato de DPD Sulfato anhidro DPD Sulfato ferroso amnico Dicromato potsico Yoduro potsico Difenilaminasulfonato Hipoclorito de calcio

NOTA: Todos los reactivos necesarios para la validacin sern aportados por el laboratorio ALISCCA Ltda.

70

12.

CRONOGRAMA

ACTIVIDADES 1 2

MESES 3

FASE 0 X X FASE I X X FASE II X FASE III X X FASE IV X X FASE V X X X X X X X X X X X X FASE VI X X FASE VII X X X X X X X X X X X X INFORME DE X X X AVANCE ELABORACION X X X X X ANTEPROYECTO ANALISIS X X X ESTADISTICO REVISION X X X X X BIBLIOGRAFICA

71

13.

BIBLIOGRAFA

Fuentes bibliogrficas para la redaccin: ICONTEC, Referencias documentales para fuentes de informacin electrnica. Contenido, forma y escritura NTC 5613. 2008, Contacto grafico Ltda. ICONTEC, Referencias bibliogrficas. Contenido, forma y escritura NTC 5613. 2008: Contacto grafico Ltda. ICONTEC, Documentacin. Presentacin de tesis, trabajos de grado y otros trabajos de investigacin NTC 1486. 2008: Contactografico Ltda. Fuentes bibliogrficas:

1.

2. 3. 4. 5.

6.

AOAC Guidelines for Single Laboratory Validacion of Chemical methods for Dietary, Supplements and Botanics.2002; Available from: http://www.aoac.org/Official_Methods/slv_guidelines.pdf. AYRES, G., ANALISIS QUIMICO CUANTITATIVO. 2 ed. 1974: Editorial Harla. Miller, j., Estadistica y quimiometria para quimica analitica. 2002: Pearson education S.A. 278. EURACHEM, The Fitness for Purpose of Analytical Methods, in A Laboratory Guide to Method Validation and Related Topics. 1998. COLOMBIA, MINISTERIO DE LA PROTECCIN SOCIAL., in Decreto 1575 (09, mayo, 2007).Por el cual se establece el sistema para proteccin y control de calidad del agua para consumo humano. 2007: Bogot D.C. COLOMBIA, Ministerio de la Proteccin Social, Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial, in RESOLUCION 2115 DE 2007.Por medio de la cual se sealan
caractersticas, instrumentos bsicos y frecuencias del sistema de control y vigilancia para la calidad del agua para consumo humano. 2007: Bogota D.C. Valencia, O., Gmez ,David, METODO PARA VALIDAR TECNICAS VOLUMETRICAS EN 5 FASES. Programa de Qumica, Facultad de Ciencias

7.

8. 9. 10. 11. 12. 13. 14.

Bsicas y Tecnologas, Universidad del Quindo: p. 6. Stanley E, M., Introduccin a la qumica ambiental. Reverte, 2007 ed. 2007. 725 pginas. IDEAM, lineamientos para el control de caliadad. beltran, T., Validacion de metodos. 2002. Skoog, D.D., West, Fundamentos de qumica analtica. 8 ed. 1184 pginas. IDEAM, Protocolo de estandarizacion de metodos analiticos. 1999. Water Pollution Control Federation.Mtodos normalizados para el anlisis de aguas potables y residuales, ed. E.D.d.s. S.A. 1992, Madrid. OMS, Sulfate in drinking. 3 ed. Documento de referencia para la elaboracion de las guias de la OMS para la calidad del agua potable. Vol. 1. 2003, Ginebra(Suiza): WHO. 540. 72

15.

16.

17.

18.

19. 20.

Espaa. Determinacin de sulfatos.Grupo de Tratamiento de Aguas Residuales. Escuela Universitaria Politcnica. Universidad de Sevilla.; Available from: http://www.bonatura.com/2.01.18.16_1r.html. Ozone Safe Food Technologies, I. Elimina el USO de CLORO y Productos Qumicos(Cloroaminas). 2007; Available from: http://www.acambiode.com/nota_prensa_81415090071456676849575353524568.ht ml. FERNNDEZ-CREHUET NAVAJAS, M.M.A., O; PREZ LPEZ J.A., Determinacin de cloro residual. Mtodo del DPD. Departamento de Medicina Preventiva y Salud Pblica. Facultad de Farmacia. Campus Universitario de Cartuja. 18071 Granada, Espaa.Higiene y Sanidad Ambiental, 2001: p. 2. Espaa. Determinacin del cloro residual.Grupo de Tratamiento de Aguas Residuales. Escuela Universitaria Politcnica. Universidad de Sevilla. Available from: http://www.ambientum.com/enciclopedia/aguas/2.01.18.41_1r.html. MAROTO, A, et al. Incertidumbre en Mtodos Analticos de Rutina. Tesis Doctoral. Universidad Rovira i Virgili. Facultad de Qumica, Tarragona. 2002. p, 23. American Public Health Association, American Water Works Association, Water Environment Federation..Standard Methods for Examination of Water & Wastewater (Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater). 1998, Washingtonn, DC.

73

14.

ANEXO A. Calibracin del Turbidmetro

Note: Para una mayor precisin, emplear la misma celda para muestras o cuatro celdas armonizadas durante todas las mediciones de la calibracin. Introducir siempre la celda de modo que la marca de orientacin colocada sobre la celda durante el procedimiento de armonizacin est correctamente alineada .

1.

Enjuagar varias veces una celda para muestras limpia con agua de dilucin. A continuacin, verter agua de dilucin o el patrn StablCal< 0,1 NTU hasta la lnea de llenado de la celda (unos 15 ml).

Nota: En este paso se debe emplear la misma agua de dilucin empleada para preparar los patrones.
2.

Introducir la celda en su compartimento, alineando la marca de orientacin sobre la celda con la marca delantera del compartimento de la celda. Cerrar la tapa. Pulsar I/O.

Nota: Se debe seleccionar el modo de medicin promediada antes de pulsar la tecla CAL, ya que la tecla SIGNAL AVERAGE no est disponible en el modo calibracin.

74

3.

Pulsar: CAL

Los iconos CAL y S0 se visualizarn, con el 0 parpadeando. La pantalla de 4 dgitos mostrar el valor del patrn S0 de la calibracin anterior. Si el valor de referencia fue forzado a cero, la pantalla permanecer sin indicacin alguna (tal como se muestra). Pulsar para obtener una presentacin numrica.

4.

Pulsar: READ

El instrumento contar desde 60 a 0 (67 a 0 si se ha seleccionado la medicin promediada ), leer el valor de referencia de la dilucin sin muestra y lo emplear para calcular el factor de correccin para la medicin del patrn de 20 NTU. Si el agua de dilucin es > 0,5 NTU, aparecer E 1 al calcular la calibracin . La pantalla pasar automticamente al siguiente patrn. Extraer la celda para muestras de su compartimento.

Nota: La turbidez del agua de dilucin puede ser forzada a cero pulsando la tecla en lugar de dar la lectura para el agua de dilucin. La pantalla indicar S0 NTU y pulsando la tecla se contina con el siguiente patrn
5.

La pantalla mostrar el icono S1 (con el 1 parpadeando) y 20 NTU, o el valor del patrn S1 de la calibracin anterior. Si el valor es incorrecto, corregir el valor pulsando la tecla hasta que aparezca centelleando el nmero correspondiente al valor correcto. Emplear la tecla para desplazarse hasta se nmero. Tras introducir el valor correcto, llenar una celda para muestras hasta la lnea de llenado con el patrn de 20 NTU o el patrn StablCal de 20 NTU bien mezclado. Introducir la celda en su compartimento, alineando la marca de orientacin sobre la celda con la marca delantera del compartimento de la celda. Cerrar la tapa.

6.

Pulsar: READ 75

El instrumento contar desde 60 a 0 (67 a 0 si se ha seleccionado el medicin promediada), medir la turbidez y guardar el valor. La pantalla pasar automticamente al siguiente patrn. Extraer la celda para muestras de su compartimento.

La pantalla mostrar el icono S2 (con el 2 parpadeando) y 100 NTU, o el valor del patrn S2 de la calibracin anterior. Si el valor es incorrecto, editar el valor pulsando la tecla hasta que parpadee el nmero a editar. Emplear la tecla para desplazarse hasta el nmero correcto. Tras introducir el valor correcto, llenar una celda para muestras hasta la lnea de llenado con el patrn de 100 NTU o el patrn StablCal de 100 NTU bien mezclado. Introducir la celda en su compartimento, alineando la marca de orientacin sobre la celda con la marca delantera del compartimento de la celda. Cerrar la tapa.
7.

8.

Pulsar READ

El instrumento contar desde 60 a 0 (67 a 0 si sehaseleccionado la medicin promediada), medir la turbidez y guardar el valor. La pantalla pasar automticamente al siguiente patrn. Extraer la celda para muestras de su compartimento.

9.

La pantalla mostrar el icono S3 (con el nmero 3 centelleando) y 800 NTU, o el valor del patrn S3 de la calibracin anterior. Si el valor es incorrecto, editar el valor pulsando la tecla hasta que parpadee el nmero a editar. Emplear la tecla para desplazarse hasta el nmero correcto. Tras introducir el valor correcto, llenar una celda para muestras hasta la lnea con patrn de 800 NTU o patrn StablCal de 800 NTU bien mezclado. Introducir la celda en su compartimento, alineando la marca de orientacin sobre la celda con la marca delantera del compartimento de la celda. Cerrar la tapa.

10. Pulsar READ

76

El instrumento contar desde 60 a 0 (67 a 0 si se ha seleccionado el modo medicin promediada), medir la turbidez y guardar el valor. A continuacin la pantalla volver a la presentacin de S0.Extraer la celda de su compartimiento

11. Pulsar: CAL para aceptar la calibracin. El instrumento regresar auto-

mticamente al modo de medicin.

Nota: Pulsando CAL se termina el clculo de los coeficientes de calibracin. Si se hubieran producido errores durante la calibracin, aparecern mensajes de error al pulsar CAL. Si aparecen E1 o E2, controlar la preparacin de los patrones y revisar la calibracin; repetirla en caso necesario. Si aparece CAL?, indica que podra haber ocurrido un error durante la calibracin. Si CAL? parpadea, el instrumento est empleando los valores de calibracin por defecto.

Si se pulsa la tecla I/O durante la calibracin, se pierden los nuevos datos de calibracin y se emplearn los de la calibracin anterior. En el modo calibracin, slo estn disponibles las teclas READ, I/O, , y . La medicin promediada y el modo de seleccin de intervalo deben seleccionarse antes de entrar en el modo de calibracin. Si aparecen E1 o E2, se produjo un error durante la calibracin. Controlar la preparacin de los patrones y revisar la calibracin; repetirla en caso necesario. Pulsar DIAG para suprimir el mensaje de error (E1 o E2). Para continuar sin repetir la calibracin, pulsar dos veces la tecla I/O para recuperar la calibracin anterior. Si aparece CAL?, indica que podra haber ocurrido un error durante la calibracin. No se puede recuperar la calibracin anterior. Recalibrar o emplear la calibracin obtenida. Para revisar una calibracin, pulsar CAL y a continuacin para ver los valores de los patrones de calibracin. Mientras no se pulse READ y CAL no parpadee, la calibracin no se actualizar. Pulsar CAL del nuevo para regresar al modo de lectura. 77

Empleo de los Patrones de Turbidez Secundarios Gelex Nota: Conservar los patrones Gelex El instrumento viene equipado con los Patrones Secundarios Gelex, a la temperatura ambiente. Evitar que son suspensiones de macropartculas similares al formazina en sus su congelacin o exposicin a caractersticas difractoras de la luz. Los valores NTU de los patrones Gelex ,temperaturas superiores a 50 C indican el intervalo en el que se deben emplear. No obstante, y debido a las pequeas variaciones del cristal y de los sistemas pticos de cada instrumento, el verdadero valor de los patrones Gelex deber ser determinado con relacin al formazina, en el mismo instrumento que servir para los controles de calibracin posteriores Asignacin de los Valores a los Patrones Gelex

1. Calibrar el instrumento con formazina.

2. Seleccionar el modo de seleccin automtica de intervalo con la tecla

RANGE.

78

3. Limpiar bien el exterior de las ampollas Gelex y aplicar una capa delgada

de aceite de silicona.

4. Colocar el patrn Gelex de 0-10 NTU en el compartimiento de modo que el

diamante de la ampolla quede alineado con la marca de orientacin del instrumento. Cerrar la tapa de la celda para muestras.

Nota: La correcta orientacin de la celda es esencial para obtener valores precisos de los patrones Gelex. Orientar la celda de modo que la marca del diamante se alinee con la marca de orientacin sobre el instrumento.

5. Pulsar: READ Registrar los valores de la pantalla, retirar la ampolla del

instrumento y marcar el valor sobre la banda situada en la parte superior de la ampolla.

79

6. Repetir los pasos 3 a5 para los otros patrones Gelex, poniendo cuidado en

la correcta orientacin de las celdas.

7. Reasignar los valores de los patrones Gelex cada vez que el instrumento

sea calibrado con formazina.

Comprobacin Peridica de la Calibracin con los Patrones Gelex A diferencia de algunos otros turbidmetros, el Turbidmetro 2100P no requiere calibracin antes de cada medicin. nicamente requiere la comprobacin de la calibracin del instrumento, con la periodicidad que dicte la experiencia, empleando los Patrones Secundarios Gelex adecuados. Controlar la correcta 80

alineacin de los patrones Gelex al introducirlos en el instrumento (diamante alineado con la marca de orientacin). Si la lectura no est dentro del 5% del valor calibrado anteriormente, proceder al recalibrado con el patrn primario de formazina.

81

15.

ANEXO B:Certificados de calibracin

82

16.

ANEXO C:Certificados calibracin de vidriera

83

17.

ANEXO D: Certificados de pureza de reactivos

84

18.

ANEXO E:Estandarizacin de reactivos y control del agua destilada.

85