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MANUAL DE AULAS PRTICAS

DATA: 12/08/2013

CURSO: NUTRIO

PROFESSOR: Jos Roberto C. Lima

MANUAL DE AULAS PRTICAS DA DISCIPLINA DE BIOQUMICA DA NUTRIO

Professor: Jos Roberto da Cunha Lima Bloco II

Parnaba Piau

SUMRIO

PRTICA 1: DO ESTUDO E USO DO LABORATRIO DE QUMICA, BIOQUMICA, BIOFSICA E FISIOLOGIA 01 10


a) De Ordem Pessoal Trabalhe com ateno e NO FUME, COMA OU BEBA dentro do laboratrio; Use calados e avental de mangas compridas fechadas; Use sempre culos de segurana no laboratrio; Use EPIs apropriados nas operaes que apresentarem riscos potenciais; No use roupas de tecido sinttico, facilmente inflamveis; No coloque reagentes de laboratrio no seu armrio de roupas; No picote nenhum tipo de produto com a boca; No leve as mos boca ou aos olhos quando estiver trabalhando com produtos qumicos; RECOMENDAES GERAIS

Prtica 1: Do estudo e uso do laboratrio de qumica, bioqumica, biofsica e fisiologia Prtica 2: Vidrarias e equipamentos

Prtica 3: pH e tampes

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Prtica 4: Determinao da concentrao das protenas

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Prtica 5: Presso Sangunea Arterial no Homem

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Prtica 6:

Registro e Interpretao de um 27

Eletrocardiograma

Bibliografia

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No use lentes de contato quando estiver trabalhando em laboratrios; No se exponha a radiaes ultravioleta, infravermelho etc; Feche todas as gavetas e portas que abrir; Leia o roteiro, atenciosamente, antes de executar a prtica; Planeje o trabalho a ser realizado;

Trabalhe com quantidades indicadas de substncias evitando o desperdcio dos reagentes, gs, luz e outros. Verifique as condies de aparelhagem; Em caso de incndio NUNCA USE EXTINTOR EM HUMANOS; Conhea as periculosidades dos produtos qumicos que voc manuseia.

parar o trabalho, isolando na medida do possvel a rea; advertir pessoas prximas sobre o ocorrido. s efetuar a limpeza aps consultar a ficha de emergncia do produto; alertar a chefia; verificar e corrigir a causa do problema; no caso do envolvimento de pessoas, lavar o local atingido com gua corrente e procurar o servio mdico.

b) Referentes ao Laboratrio Mantenha as bancadas sempre limpas e livres de materiais estranhos ao trabalho; Faa limpeza prvia, com material apropriado, aps esvaziar um frasco de reagentes, antes de coloc-los para lavagem; Rotule os reagentes ou solues preparadas e as amostras coletadas; Jogue papis usados e materiais inservveis no lixo somente quando no apresentar riscos de contato com produtos qumicos oxidantes; Use pinas e materiais de tamanho adequado e em perfeito estado de conservao; Utilize a capela ao trabalhar com reaes que liberam fumos venenosos ou irritantes; Evitar descartar produtos qumicos nas pias de laboratrio.

EQUIPAMENTOS DE SEGURANA Os seguintes equipamentos de segurana devem estar ao alcance de todos: luvas e aventais; protetores faciais; culos de segurana; mscaras contra gases e ps; extintores de incndio; chuveiros de emergncia; lavador de olhos; cobertores de segurana.

Use-os corretamente, em caso de dvidas, consulte o seu PROFESSOR OU TECNICO DO LABORATORIO.

Em caso de derramamento de produtos txicos, inflamveis ou corrosivos, tomar as seguintes precaues: USO DE EQUIPAMENTOS E APARELHAGEM EM GERAL

Planeje as operaes com novos equipamentos; Leia previamente as instrues sobre o equipamento a ser utilizado; Saiba de antemo o que fazer em uma situao de emergncia.

Remova

frascos

de

inflamveis

do

local

onde

ir

usar

equipamentos eltricos ou fonte de calor; Enxugue qualquer lquido derramado no cho antes de operar com equipamentos eltricos.

USO DE EQUIPAMENTOS ELTRICOS Instrues Gerais: S opere equipamentos eltricos quando: fios, tomadas e plug estiverem em perfeitas condies; o fio terra estiver ligado; tiver certeza da voltagem compatvel entre equipamentos e circuitos; No instale nem opere equipamentos eltricos sobre superfcies midas; Verifique periodicamente a temperatura do conjunto plug-tomada; Caso esteja anormal desligue-o e comunique ao PROFESSOR; No use equipamentos eltricos sem identificao de voltagem.

Chapas ou Mantas de Aquecimento Use chapas ou mantas de aquecimento, para evaporao ou refluxos de produtos inflamveis, dentro da capela; No ligue chapas ou mantas de aquecimento com resduos aderidos sobre suas superfcies; Use termo-isolantes sob chapas ou mantas de aquecimento. (Amianto ou similar).

USO DE CHAMA EM LABORATRIO Use chama na capela ou nos locais onde for permitido.

No acenda o bico de Bunsen sem verificar e eliminar os seguintes problemas: de Vazamentos; dobra no tubo de gs; ajuste inadequado entre o tubo de gs e conexes; existncia de inflamveis ao redor; Fechar o registro da linha de gs aps seu uso; No acenda maaricos, bico de Bunsen, etc, com a vlvula de gs combustvel muito aberta;

Solicite ao Departamento competente que faa a identificao. No confie completamente no controle automtico

equipamentos eltricos; Inspecione-os quando em operao; No deixe equipamentos eltricos ligados no laboratrio, fora do expediente normal, sem avisar a Superviso de turno e anotao em livro de avisos ou dispositivo similar;

No deixe o bico de Bunsen aceso quando no estiver sendo utilizado.

pare a anlise imediatamente; feche ao mximo a janela da capela; coloque mscara contra gases, quando houver risco de exposio a gases e vapores;

OPERAO EM CAPELAS A capela s oferecer mxima proteo se for adequadamente utilizada. OPERAO EM CAPELA COMUM Nunca inicie um servio em capelas, sem que: O sistema de exausto esteja operando; Piso e janela estejam limpos; As janelas estejam funcionando perfeitamente; Nunca inicie qualquer trabalho que exija aquecimento, sem remover produtos inflamveis da capela; Deixe na capela apenas a poro de amostra a analisar, remova todo o material desnecessrio, principalmente produtos txicos. A capela no local de armazenamento de reagentes ou solues; Mantenha as janelas das capelas com o mnimo de abertura possvel, para maior proteo e maior velocidade facial do ar; No coloque o rosto dentro da capela; O sistema de exausto somente deve ser desligado 10 a 15 minutos aps o trmino dos trabalhos, para permitir limpeza do sistema. (gases txicos). Observe os seguintes cuidados, ao sinal de paralisao do exaustor de capelas:

avise o supervisor e o pessoal do laboratrio; s reinicie a anlise no mnimo 5 minutos aps a normalizao de exausto; Procure instalar os equipamentos, vidros, dispositivos que gerem contaminantes (gases, fungos e poeiras), a uma distncia maior que 20 cm da face da capela; Proteja o tampo da capela com folha plstica ou similar, quando manusear cido fluordrico; Nunca utilize a capela comum para cido perclrico ou substncias radioativas.

RESDUOS Definio Toda substncia, no desejvel, resultante de um processo qumico no qual ocorre transformao. Cuidados No jogue fora nenhum tipo de resduo sem antes verificar o local adequado para faz-lo;

Para cada tipo de resduo existe uma precauo quanto a sua eliminao, em funo da sua composio qumica e/ou biolgico. Ex.: INSTRUES GERAIS PRIMEIROS SOCORROS (BSICOS)

no jogue produtos corrosivos concentrados na pia, eles s podem ser descartados depois de diludos ou neutralizados; no descarte lquido inflamveis no esgoto descarte os materiais biolgicos em local adequado

cido na pele Lave imediatamente com soluo de bicarbonato de sdio. Aplique glicerina com Mg (OH)2 a 10%. Bata esta mistura at obter uma pasta homognea. Passe sobre a queimadura. cido na boca Faa bochecho com leite de magnsia. Aps, lavar com bastante gua. cido nos olhos Lave imediatamente com soluo de bicarbonato de sdio 1%. lcali na pele Lave o local com soluo de cido actico 0,1 mol/L ou vinagre. lcali nos olhos Lave os olhos com soluo de cido brico 2%. lcali na boca Faa bochecho com soluo de vinagre 1: 4 Slido nos olhos ou ouvidos Pingue algumas gotas de leo de cozinha. Queimadura na pele (fogo, gordura, metais quentes, etc). Aplique uma pasta de Picrato de Butesin sobre o local.

(DESCARTEX).

RECOMENDAES FINAIS

Tenha este Guia sempre mo no laboratrio e releia-o periodicamente. O risco de acidente maior quando nos acostumamos a conviver com o perigo e passamos a ignor-lo. A segurana de um laboratrio est apoiada na determinao de cada um de seus elementos: VOC TAMBM RESPONSVEL 193 BOMBEIROS. 192 SAMU

RISCO

QUMICO (VERMELHO) Fumos metlicos e vapores

FSICO (VERDE) Rudo e ou som muito alto

BIOLGICO (MARROM) Microorganismos (Vrus, bactrias, protozorios) Lixo hospitalar, domstico e de animais

ERGONMICO (AMARELO) M postura do corpo em relao ao posto de trabalho Trabalho estafante e ou excessivo

A G E N T E S C A U S A D O R E S

ACIDENTES (AZUL) Equipamentos inadequados, defeituosos ou inexistentes Mquinas e equipamento sem Proteo e ou manuteno Risco de queda de nvel, leses por impacto de objetos Mau planejamento do layout e ou do espao fsico Cargas e transportes em geral Risco de fogo, detonao de explosivos, quedas de objetos Risco de choque eltrico (corrente contnua e alternada)

Gases asfixiantes H, He, N e CO2

Oscilaes e vibraes mecnicas

Pinturas e nvoas em geral

Ar rarefeito e ou vcuo

Esgoto, sujeira, dejetos

Falta de Orientao e treinamento

Solventes (em especial os volteis)

Presses elevadas

Objetos contaminados

Jornada dupla e ou trabalho sem pausas

cidos, bases, sais, alcois, -teres, etc.

Frio e ou calor e radiao Picadas de animais (ces, insetos, rpteis, roedores, aracndeos, etc.) Aerodispersides no ambiente (poeiras vegetais e minerais)

Contgio pelo ar e ou insetos Lixo em geral, fezes e urina de animais, contaminao do solo e gua Alergias, intoxicaes e queimaduras causadas por vegetais

Movimentos repetitivos

Reaes qumicas

Equipamentos inadequados e no ergonmicos

Ingesto de produtos durante pipetagem

Fatores psicolgicos (no gosta do trabalho, presso do chefe, etc)

DIAMANTE DE HOMMEL Vermelho Inflamabilidade: 4 - Gases inflamveis, lquidos muito volteis, materiais pirotcnicos (<22C) 3 - Produtos que entram em ignio a temperatura ambiente (<37C) 2 - Produtos que entram em ignio quando aquecidos moderadamente (<93C) 1 - Produtos que precisam ser aquecidos para entrar em ignio (>93C) 0 - No inflamvel

Azul - Perigo para Sade: 4 - Produto Letal 3 - Produto extremamente txico 2 - Txico 1 - Ligeiramente txico 0 - Produto no perigoso ou de risco mnimo

OXY Oxidante Forte ACID cido Forte ALK - Alcalino (Base) Forte COR - Corrosivo W - No misture com gua

Amarelo - Reatividade: 4 - Podem explodir 3 - Podem explodir com choque mecnico ou calor 2 - Reao qumica violenta 1 - Instvel se aquecido 0 Estvel

RELATRIOS Os relatrios, quando solicitados, devero ser entregues nas datas combinadas, para no haver diminuio de nota. Eles devero ser escritos de acordo com o modelo apresentado a seguir, que tambm se baseia nas normas da ABNT. O relatrio dever apresentar a seguinte estrutura: (1) Capa Deve identificar, de forma clara e organizada, a autoria do trabalho, a instituio na qual ele foi realizado e o ttulo do mesmo. Os itens que devem constar da capa so: (a) Nome da Universidade; (b) Centro de Cincias...; (c) Curso; (d) disciplina; (e) ttulo; (f) aluno; (g) professor; (h) local; (i) data. Nesta ordem. Deve conter ainda: Introduo uma espcie de carto de visitas e deve conter uma breve apresentao do trabalho, a problemtica e os objetivos sem distino em itens, ou seja, tudo isso presente no mesmo item Introduo. Deve conter, tambm, a fundamentao terica, se esta no vier em um tpico parte. Metodologia Deve responder s seguintes perguntas: (a) Que materiais, reagentes etc. voc usou e (b) o que e como voc fez? Resultados e Discusso Voc expe os dados obtidos, os valores determinados e deve discutir esses resultados a luz dos pressupostos tericos, das previses feitas e dos objetivos. Nessas discusses buscamos responder a perguntas do tipo: Os resultados eram esperados?

Os valores tm sentido? Que informaes importantes podemos tirar? Que implicaes esses resultados podem ter? Concluses um tpico mais resumido, deve ser objetivo e trazer apenas aquilo que foi obtido. Bibliografias Relaciona todas as fontes que voc usou para fundamentar seu trabalho, buscar mtodos que foram usados etc. Deve seguir as normas ABNT. Caso no tenha sido usado nenhum livro ou outra fonte, colocar: Manual fornecido pelo professor. Da Introduo em diante, todos os itens devem vir em sequncia corrida. Isso quer dizer que voc no deve separar em pginas diferentes os diferentes itens, ou seja, terminado um item, j escrever o item seguinte, na mesma pgina se couber, com separao de dois espaos (duas vezes a tecla Enter).

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PRTICA 2: VIDRARIAS E EQUIPAMENTOS


ALMOFARIZ COM PISTILO Usado na triturao e pulverizao de slidos.

BALO VOLUMTRICO Possui volume definido e utilizado para o preparo de solues em laboratrio.

BECKER de uso geral em laboratrio. Serve para fazer reaes entre solues, dissolver substncias slidas, efetuar reaes de precipitao e aquecer lquidos. Pode ser aquecido sobre a TELA DE AMIANTO.

BALO DE FUNDO CHATO Utilizado como recipiente para conter lquidos ou solues ou mesmo fazer reaes com desprendimento de gases. Pode ser aquecido sobre o TRIP com TELA DE AMIANTO.

BURETA BALO DE FUNDO REDONDO Aparelho utilizado em anlises volumtricas. Utilizado principalmente em sistemas de refluxo e evaporao vcuo, acoplado a ROTAEVAPORADOR.

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CADINHO Pea geralmente de porcelana cuja utilidade aquecer substncias a seco e com grande intensidade, por isto pode ser levado diretamente ao BICO DE BUNSEN.

DESSECADOR Usado para guardar substncias em atmosfera com baixo ndice de umidade.

ERLENMEYER CPSULA DE PORCELANA Pea de porcelana usada para evaporar lquidos das solues. Utilizado em titulaes, aquecimento de lquidos e para dissolver substncias e proceder reaes entre solues.

FUNIL DE BUCHNER CONDENSADOR Utilizado em filtraes a vcuo. Pode ser usado com a funo de FILTRO em conjunto com o KITASSATO. Utilizado na destilao, tem como finalidade condensar vapores gerados pelo aquecimento de lquidos.

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FUNIL DE SEPARAO Utilizado na separao de lquidos no miscveis e na extrao lquido/lquido.

PIPETA GRADUADA

Utilizada para medir pequenos volumes. Mede volumes variveis. No pode ser aquecida.

FUNIL DE HASTE LONGA Usado na filtrao e para reteno de partculas slidas. No deve ser aquecido.

PIPETA VOLUMTRICA

KITASSATO Utilizado em conjunto com o FUNIL DE BUCHNER em FILTRAES a vcuo. Usada para medir e transferir volume de lquidos. No pode ser aquecida, pois possui grande preciso de medida.

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PROVETA OU CILINDRO GRADUADO Serve para medir e transferir volumes de lquidos. No pode ser aquecida.

BALANA DIGITAL

Para a medida de massa de slidos e lquidos no volteis com grande preciso.

TUBO DE ENSAIO Empregado para fazer reaes em pequena escala, principalmente em testes de reao em geral. Pode ser aquecido com movimentos circulares e com cuidado diretamente sob a chama do BICO DE BNSEN.

BICO DE BNSEN a fonte de aquecimento mais utilizada em laboratrio. Mais contemporaneamente tem sido substitudo pelas MANTAS E CHAPAS DE AQUECIMENTO.

VIDRO DE RELGIO Pea de Vidro de forma cncava usada em anlises e evaporaes. No pode ser aquecida diretamente.

ESTANTE PARA TUBO DE ENSAIO usada para suporte dos TUBOS DE ENSAIO.

GARRA DE CONDENSADOR ANEL OU ARGOLA Usado como suporte do funil na filtrao. Usada para prender o condensador haste do suporte ou outras peas como bales, erlenmeyers etc.

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PINA DE MADEIRA SUPORTE UNIVERSAL Usada para prender o TUBO DE ENSAIO durante o aquecimento. Utilizado em operaes como: Filtrao, Suporte para Condensador, Bureta, Sistemas de Destilao etc. Serve tambm para sustentar peas em geral.

PINA METLICA Usada para manipular objetos aquecidos. TELA DE AMIANTO Suporte para as peas a serem aquecidas. A funo do amianto distribuir uniformemente o calor recebido pelo BICO DE BUNSEN.

PISSETA OU FRASCO LAVADOR

TRIP Usada para lavagens de materiais ou recipientes atravs de jatos de gua, lcool ou outros solventes.

Sustentculo para efetuar aquecimentos de solues em vidrarias diversas de laboratrio. utilizado em conjunto com a TELA DE AMIANTO.

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PRTICA 3: BICO DE BNSEN Introduo

a) Zona externa: Violeta plida, quase invisvel, onde os gases fracamente expostos ao ar sofrem combusto

completa, resultando em CO2 e H2O. Esta zona chamada de zona oxidante (Temperaturas de 1560-1540C).

utilizado no laboratrio como fonte de calor para diversas finalidades, como: Aquecimento de solues, estiramento e preparo de peas de vidro entre outros. Possui como combustvel normalmente G.L.P (butano e propano) e como comburente oxignio do ar atmosfrico que em proporo otimizada permite obter uma chama de alto poder energtico.

b)

Zona

intermediaria:

Luminosa,

caracterizada

por

combusto incompleta, por deficincia do suprimento de O2. carbono forma CO, o qual se decompe pelo calor, resultando diminutas partculas de C (carbono) que, incandescentes, do luminosidade chama. Esta zona chamada de zona redutora (Temperaturas abaixo de1540C). c) Zona interna: Limitada por uma casca azulada contendo os gases que ainda no sofreram combusto mistura carburante (Temperaturas em torno de 300C). FENMENO DE EMISSO Acontecem a nvel atmico ou molecular pela excitao de um ou mais eltrons que absorvem energia trmica no presente caso, passando a um estado excitado obedecendo sempre os limites de transio permitidos dentro da eletrosfera em seu sub-nvel. A desexcitao desse eltron ou

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eltrons

acontece

de

maneira

muito

rpida

com

d) Caso a chama se apague ou haja combusto no interior do tubo, feche a entrada do gs e reinicie as operaes anteriores. O gs combustvel geralmente o gs de rua ou o G.L.P. (gs liquefeito de petrleo). O comburente, via de

conseqente emisso de ftons com comprimento de onda especfico para o tomo em questo.

Objetivos - Aprender a utilizar o bico de Bunsen. - Aprender a aquecer tubos de ensaio e bquer em laboratrio. MATERIAL UTILIZADO: Bico de Bunsen; Cpsula de porcelana; Trip de ferro; Fio de cobre; Tela de amianto; Fio de alumnio; Suporte universal; Tubo de ensaio; Anel de ferro; Pina de madeira; Mufa; Pina metlica; Bequer de 300 mL; Termmetro. Para acender o bico do gs, proceda da seguinte maneira: a) Feche completamente a entrada de ar no bico; b) Abra lentamente a vlvula do gs e aproxime a chama de um fsforo lateralmente, obtendo uma chama grande e luminosa, de cor amarela. c) Abra vagarosamente a entrada de ar de modo que a chama fique completamente azul;

regra, o ar atmosfrico. Aquecimento de tubos de ensaio Os tubos de ensaio com lquidos podem ser aquecidos diretamente na chama do bico de Bunsen. A chama deve ser mdia e o tubo deve estar seco por fora, para evitar que se quebre ao ser aquecido. O tubo deve ficar virado para a parede ou numa direo em que no se encontre ningum, pois comum, aos operadores sem prtica, deixar que repentinamente o lquido quente salte fora do tubo, o que pode ocasionar queimaduras. O tubo seguro prximo de sua boca, pela pina de madeira e agita-se brandamente, para evitar superaquecimento do lquido.

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fechada; qual ajuste das partes regulveis do bico produz uma chama no luminosa e qual produz chama luminosa? Mantenha, segurando com as prprias mos, por alguns segundos, uma cpsula de porcelana contendo um pouco de gua fria, na chama luminosa por 2-3 segundos. No que consiste o depsito preto formado na cpsula? Por que se coloca gua na cpsula? B. Regies da chama: Ajuste o bico e a velocidade de fluxo de gs de forma que a chama seja no luminosa. Note que ela forma um cone bem definido e faa um esquema da chama Procedimento Experimental 1. Uso do bico de Bunsen A. Luminosidade da chama Note o que acontece chama quando cada uma das partes ajustveis do bico movimentada, indicando as 3 regies bem definidas. C. Temperatura da chama: Para ter uma ideia das temperaturas relativas em diferentes regies de uma chama no luminosa proceda da seguinte forma:

particularmente quando a vlvula de ar aberta e

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Mantenha horizontalmente por 30 seg. um fio de cobre e um de alumnio nas seguintes posies da chama: a. no topo da chama; b. no topo do cone inferior; c. na base do cone inferior.

Apagar o bico de Bunsen e deixar o bequer esfriando no mesmo local. E. Aquecimento de lquidos em tubo de ensaio Coloque cerca de 4ml de gua em um tubo de ensaio; Com pina de madeira, segurar o tubo, prximo a boca, conforme Figura 1b; Aquecer a gua, na chama mdia do bico de bunsen (torneira de gs aberta pela metade e janelas abertas pela metade), com o tubo voltado para a parede, com

Observao: O cobre funde a 10830C e o Alumnio a 6600C.

D. Aquecimento de lquidos em bquer Colocar cerca de 100 mL de gua em um bquer de 250mL; acrescente gua, algumas prolas de ebulio; Colocar o bquer sobre a tela de amianto, suportada pelo anel ou pelo trip de ferro; Aquecer o bquer com a chama forte do bico de Bunsen (janelas abertas e torneira de gs totalmente aberta). Observar a ebulio da gua e anotar sua temperatura de ebulio. T = ---------C.

inclinao de cerca de 45 e com pequena agitao, at a ebulio da gua. Retirar o tubo do fogo e deix-lo esfriar na estante para tubos de ensaio. PRTICA 4: pH E TAMPES
Introduo Soluo tampo ou soluo tamponada aquela que, ao adicionarmos uma pequena quantidade de cido ou base, mesmo que fortes, mantm o seu pH praticamente invarivel.

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provvel

que

observao

destes

fatos

leve

ao

seguinte

ons OH resultantes da dissociao da base, e, desta forma, a acidez no aumenta e o pH no muda. H + OH H2O Perceba que no iro faltar ons OH para reagir com o H do cido, pois a base BOH fraca, e o estoque de frmulas BOH que continuar se dissociando e fornecendo OH muito grande. Desta forma, conseguimos compreender que a soluo tampo s resistir s variaes de pH at que toda base BOH ou todo sal BA sejam consumidos. A resistncia que uma soluo tampo oferece s variaes
+ + -

questionamento: Como as solues tampo conseguem manter o seu pH praticamente constante? Vamos imaginar uma soluo tampo constituda por uma base fraca (BOH) e um sal (BA) derivado desta base. Nesta soluo, ocorrem os seguintes fenmenos: -Pequena dissociao da base (Conceito de Bronsted):

(Na soluo predominam frmulas da base BOH) -Dissociao total do sal: BA B + A (Na soluo predominam ons B e A ) Observao: Note que o on B comum base e ao sal. Ao juntarmos a esta soluo uma base forte, esta ir liberar ons OH , que sero consumidos pelo equilbrio:
+ + + -

de pH recebe o nome de efeito tampo. Caso a soluo tampo fosse constituda por um cido fraco e um sal derivado deste cido, a explicao para o comportamento desta soluo seria semelhante anterior. Conclumos, ento, que uma soluo tampo usada sempre que se necessita de um meio com pH praticamente constante e preparada dissolvendo-se em gua: um cido fraco e um sal derivado deste cido; uma base fraca e um sal derivado desta base.

Como consequncia, este equilbrio desloca-se para a esquerda, e com isso a basicidade da soluo no aumenta e o pH no sofre variao. Perceba que no ir faltar o on B para que o equilbrio acima se desloque para a esquerda, uma vez que a dissociao do sal BA B + A fornece uma boa reserva deste on. Se juntarmos soluo tampo um cido qualquer, este ir se ionizar colocando ons H em soluo. Estes ons H sero consumidos pelos
+ + + +

CLCULO DO pH DE UMA SOLUO TAMPO Vamos supor uma soluo tampo constituda por um cido fraco (HA) e um sal (BA) derivado deste cido. Neste caso, teremos:

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Deduzindo a expresso da constante do equilbrio para o cido fraco, temos: Para determinar o pH de uma soluo com indicadores de pH, adicionamComo o cido fraco, a sua concentrao praticamente no varia durante a ionizao, e a quantidade de on A produzida muito pequena. Por outro lado, o sal se dissocia totalmente, produzindo quase todo on A , presente na soluo. [HA] [CIDO] e [A ] [SAL] Portanto, a expresso da constante de equilbrio ficar:
-

se algumas gotas de soluo de um ou dois indicadores e compara-se a cor desenvolvida com a cor de uma srie de solues-tampo de pH conhecido e contendo a mesma quantidade de indicador. Os indicares universais so misturas de vrios indicadores, cujos pK in se sobrepem, o que permite abranger um intervalo de pH. Os papis indicadores so papis impregnados de um indicador ou de indicadores usados para determinao aproximada do pH. Veja a tabela abaixo: INDICADOR Azul de timol pKa 1,7 3,3 3,5 4,0 4,7 5,0 6,0 6,2 pKa 7,1 7,8 8,3 8,9 9,4 INTERVALO DE PH E COR 1,2 Vermelho 2,8 Amarelo 2,9 Vermelho 4,0 Amarelo 3,1 Vermelho 4,4 Laranja 3,8 Amarelo 5,4 Azul 3,8 Amarelo 5,4 Azul 4,2 Vermelho 6,3 Amarelo 5,1 Amarelo 6,7 Vermelho 5,2 Amarelo 6,8 Roxo INTERVALO DE PH E COR 6,1 Amarelo 7,7 Azul 7,0 Amarelo 8,6 Vermelho 7,4 Amarelo 9,0 Vermelho 8,0 Amarelo 9,6 Azul 8,3 Incolor 10,0 Vermelho 3,0-Vermelho; 4,0Alaranjado; 5,0-Laranja; 6,0-Amarelo; 7,0-Verde;

Aplicando logaritmo aos dois membros da equao, teremos:

Amarelo de Metila Alaranjado de Metila Azul de bromofenol Verde de Bromocresol Vermelho de Metila Vermelho de clorofenol Prpura de Bromocresol INDICADOR Azul de Bromotimol Vermelho de fenol Vermelho de cresol Azul de timol Fenolftalena Indicador Universal (Laranja de metila+Vermelho de metila+Azul de bromotimol+Fenolftalena)

Para uma soluo tampo de base fraca e um sal derivado desta base, podemos demonstrar que: Como pH + pOH = 14, neste caso ficamos com: pH = 14 - pOH Com isso teremos:

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Papel de tornassol Papel vermelho de congo Papel Indicador Universal ACIDOSE E ALCALOSE

8,0-Verde azulado; 9,0Azul; 10,0-Violeta; 11ou + prpura. 4,5-Vermelho-8,3-Azul 3,0-Azul-4,5-Vermelho

resultar de desidratao severa ou de diabetes mellitus no tratada. Alcalose metablica, ou alta concentrao de HCO3 , pode resultar de vmito ou overdose de anticidos. A tabela seguinte resume as mudanas que ocorrem em cada uma destas quatro condies: CONDIO Acidose respiratria Alcalose respiratria Acidose metablica Alcalose metablica DISTRBIO P(CO2) sobe P(CO2) cai
HCO3 diminui HCO3 aumenta -

pH diminui aumenta diminui aumenta

O pH dos fludos corporais deve permanecer dentro de limites prximos. A morte pode resultar de aumentos ou diminuies relativamente pequenos de pH. A razo para nossa sensibilidade ao pH depende das enzimas que catalisam as reaes qumicas do corpo. Sua atividade cai rapidamente quando o pH muda. Uma vez que as enzimas desempenham papel to crucial, sua inativao pode ser fatal. Os tampes do plasma sanguneo so as primeiras defesas do corpo contra as mudanas do pH interno. Seu papel manter o pH sanguneo dentro dos limites 7,35 a 7,45. Se o pH do sangue de uma pessoa cai abaixo de 7,35, diz que ela est com acidose, ou baixo pH sanguneo. A acidose causa desorientao, coma e finalmente morte. Se o pH sobe alm de 7,45, diz-se que ela est com alcalose, ou baixo pH sanguneo. A alcalose pode causar respirao fraca e irregular, cibras musculares e convulses. A acidose e a alcalose podem ser "respiratria", resultando de mudanas na concentrao de H2CO3 ou "metablicas", resultando de mudanas na concentrao de HCO3 . A acidose e a alcalose podem resultar de mudanas na concentrao de HCO3 . Acidose metablica, ou baixa concentrao de HCO 3 , pode
-

Para diagnosticar a condio cido-base de um paciente, uma amostra de sangue arterial retirada. Medidas de pH, P (CO 2) e CO2(H2CO3) total so ento realizadas. Resumindo temos: SOLUO TAMPO Tampo H2CO3/HCO3
-

- Responsvel pela manuteno do pH do sangue.

Objetivos - Determinar o pH de solues utilizando os mtodos colorimtricos (indicadores de pH);

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- Relacionar os conhecimentos adquiridos ao funcionamento dos tampes de importncia biolgica

Determinar quantas gotas de HCl devem ser adicionadas at que se obtenha a mesma colorao de tubo 3.

Procedimento a) Experimento 1 Preparar uma bateria de 4 tubos de ensaio TUBO 1: 5 gotas de indicador universal + 10mL de gua destilada TUBO 2: 5 gotas de indicador universal + 1mL do tampo fosfato + 9mL de gua destilada TUBO 3: 5 gotas de indicador universal + 10mL de gua destilada TUBO 4: 5 gotas de indicador universal + 1mL do tampo fosfato + 9mL de gua destilada Determinar o pH de cada soluo e anotar o resultado.

pH Antes TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 N de gotas______ para obter pH=3 Depois

b) Experimento 2 TUBO 1: adicionar 1 gota de NaOH 0,1 mol/L. TUBO 2: adicionar 1 gota de NaOH 0,1 mol/L. Observar a mudana de cor, determinar o pH e anotar o resultado na tabela. TUBO 3: adicionar 2 gotas de HCl 0,1 mol/L. TUBO 4: adicionar 2 gotas de HCl 0,1 mol/L. Observar a mudana de cor, determinar o pH e anotar o resultado na tabela. Continuar a adio de HCl ao tubo 4, gota a gota, at a cor 3.

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PRTICA 5: DETERMINAO DA CONCENTRAO DAS PROTENAS


Introduo Os mtodos espectroscpicos baseiam-se na absoro e/ou emisso de radiao eletromagntica por muitas molculas, quando os seus eltrons se movimentam entre nveis energticos. A espectrofotometria baseia-se na absoro da radiao nos comprimentos de onda entre o ultravioleta e o infravermelho (Fig. 1).

Figura 1. Espectro eletromagntico. A espectrofotometria utiliza a radiao compreendida entre o ultravioleta (ultraviolet) e o infravermelho (infrared). A chamada radiao luminosa corresponde a uma gama de comprimentos de onda que vai desde o ultravioleta ao infravermelho no espectro da radiao eletromagntica (Fig. 2).

O espectro do visvel est contido essencialmente na zona entre 400 e 800 nm (Tabela 1). Tabela 1: Comprimentos de onda da luz visvel.

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Fig. 3. Espectrofotmetro. A luz dividida em feixes de diferentes comprimentos de onda por meio de um prisma ptico e passa atravs da amostra, contida numa cubeta ou clula de espectrofotmetro.

1. Espectros de absoro Um espectrofotmetro um aparelho que faz passar um feixe de luz monocromtica atravs de uma soluo, e mede a quantidade de luz que foi absorvida por essa soluo (Fig. 3). Usando um prisma o aparelho separa a luz em feixes com diferentes comprimentos de onda (tal como acontece no arco-ris com a separao das cores da luz branca). Pode-se assim fazer passar atravs da amostra um feixe de luz monocromtica (de um nico comprimento de onda, ou quase). O espectrofotmetro permite-nos saber que quantidade de luz absorvida a cada comprimento de onda. O conjunto das absorbncias aos vrios comprimentos de onda para um composto chamasse espectro de absoro e varia de substncia para substncia. Se uma substncia verde, por exemplo, ento deixa passar ou reflete a cor nesse comprimento de onda, absorvendo mais a luz na regio do vermelho. A seguir podem ver-se espectros de vrias substncias diferentes (Fig. 4).

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Essas diferenas de espectro podem ser utilizadas laboratorialmente para seguir o percurso de reaes que se esteja a estudar, por exemplo, reaes metablicas que envolvam a oxidao do NADH ou a reduo do NAD+.

Fig. 4. Espectros de absoro de absoro de diferentes substncias (1: bacterioclorofila; 2: clorofila a; 3: clorofila b; 4: ficoeritrobilina; 5: betacaroteno). A substncia 1, por exemplo, absorve pouco na regio do visvel, logo deve ser praticamente incolor para os nossos olhos. Uma vez que diferentes substncias tm diferentes padres de absoro, a espectrofotometria permite-nos, por exemplo, identificar substncias com base no seu espectro. Permite tambm quantific-las, uma vez que a quantidade de luz absorvida est relacionada com a concentrao da substncia, como vamos ver adiante. s vezes uma substncia, quando alterada quimicamente, pode passar a apresentar um espectro de absoro diferente. Quando isto acontece, temos uma maneira de detectar essas mesmas alteraes. Por exemplo, o NADH reduzido absorve a 340 nm, enquanto que a forma oxidada no tem absorbncia significativa a esse comprimento de onda (Fig. 5). 3.2. Espectrofotometria e quantificao 3.2.1. Princpios de absoro da luz: 1. A absoro da luz tanto maior quanto mais concentrada for a soluo por ela atravessada: Fig. 5. Espectros de absoro do NAD+ e do NADH.

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2. A absoro da luz tanto maior quanto maior for a distncia percorrida pelo feixe luminoso atravs das amostras:

Normalmente usam-se cubetas com 1 cm de comprimento, de modo que a equao fica:

Ou seja, a absorbncia da luz a cada comprimento de onda l diretamente proporcional concentrao da soluo contida na cubeta. Esta linearidade deixa de ocorrer a concentraes muito elevadas da Juntando (1) e (2), temos a lei de Beer-Lambert: substncia, podendo nesses casos diluir previamente a amostra a medir. 3.2.2. Mtodos colorimtricos

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Com alguma frequncia necessrio quantificar substncias em misturas complexas, ou que no absorvem significativamente a luz a nenhum comprimento de onda. Nestes casos utilizam-se os chamados mtodos colorimtricos - o composto a quantificar posto em contacto com um reagente especfico, de modo a desenvolver uma cor cuja intensidade diretamente proporcional concentrao da substncia na mistura original. Por exemplo, para quantificar protenas numa soluo pura pode medir-se a absorbncia a 280 nm, sendo esta proporcional concentrao de protena. Mas se quisermos saber a concentrao de protena num extrato impuro, este mtodo j no pode ser utilizado, porque outras substncias, como por exemplo, os cidos nuclicos, tambm absorvem a este comprimento de onda. Neste caso podemos utilizar, por exemplo, o reagente de Biureto, que reage de modo quantitativo com as protenas, originando um complexo violeta, que absorve fortemente a radiao a 540 nm. Para quantificar espectrofotometricamente uma substncia necessria, obviamente, saber o valor de e. Para isso necessrio preparar uma srie de solues do composto a quantificar, de concentrao conhecida, fazlas contactar com o reagente e medir as absorbncias ao comprimento de onda adequado (Fig. 8). No exemplo da Fig. 8, h uma relao linear perfeita entre a concentrao da substncia (expressa em molaridade, M) e a absorbncia ao comprimento de onda l de medida. Podemos assim obter uma reta do tipo Al= el.c (ou Al= el.c + b, caso a reta no passe na origem) em que Al a absorbncia ao comprimento de onda l de medida, c a concentrao em M e el a constante de proporcionalidade. Sabendo esta relao, podemos fazer corresponder uma absorbncia medida, a uma concentrao de substncia na soluo a analisar. Fig. 8. Calibrao de um mtodo colorimtrico. A absorbncia ao comprimento de onda escolhido diretamente proporcional

concentrao do composto na soluo.

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Muitas vezes o mtodo s linear at certa concentrao da substncia. Nesse caso, utiliza-se a zona em que a relao linear, diluindo a soluo a medir, sempre que necessrio, de modo a que a absorbncia resultante esteja contida no intervalo da reta de calibrao.

Adicionar 300 ml de soluo de NaOH a 10% (p/v) (114,9 g/litro de NaOH) sob constante agitao e completar para 1 litro com gua destilada. Soluo de casena a 5 % em gua; gua destilada.

Objetivos Elaborar curvas de calibrao e trabalhar o conceito de sensibilidade de um mtodo fotocolorimtrico; Relacionar os mtodos vistos s aplicaes prticas; Resolver problemas de clculo de diluies e de concentraes.

Procedimento: CURVA DE CALIBRAO - Numerar 6 tubos de ensaio de 1 a 6; - Adicionar os reagentes conforme a Tabela 1: Reagentes (mL) Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5 Tubo 6

Materiais, Equipamentos e Reagentes 7 Tubos de ensaio; 6 Bqueres de 100 Pipetas de 1, 2 e 5 ml (prximas aos reagentes); 7 Pipetas de 2 5 ml; 1 Estante p/ tubos de ensaio; 1 Proveta de 100 ml; Fotocolormetro (com cubetas). Reativo do Biureto: Sulfato de cobre cristalizado (pentahidratado) - 1,5g; Tartarato duplo de sdio e potssio - 6,0g; gua destilada - 500 ml;

Soluo Padro de Protena (5mg/mL) gua destilada Reagente Biureto 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 1,0 0,8 0,6 0,4 0,2 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0

- Agitar e deixar em repouso por 10 minutos. - Utilizar o tubo 1 para calibrar o espectrofotmetro: 100% de transmitncia em 540 nm (ou o fotocolormetro com filtro verde. - Determinar a absorbncia das solues dos tubos 2 a 6.

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- Calcular a curva padro construindo o grfico: Concentrao final de protena (mg/mL) na ordenada e Absorbncia (A) nas abscissas.

Amostra Soro ou plasma (heparinizados). O analito e estvel por 8 dias entre 2-8C.

DETERMINAO

DA

CONCENTRAO

DE

PROTENAS

NA

AMOSTRA PROBLEMA - Separar dois tubos de ensaio e identific-los. - Adicionar os reagentes conforme tabela abaixo: Tabela 1 Distribuio de reagentes em diferentes propores Reagentes (mL) Amostra gua destilada Reagente do Biureto TUBO 1 1,0 5,0 TUBO 2 0,5 0,5 5,0

Procedimento Pipetar em tubos de ensaio identificados: Tubos gua destilada Amostra Padro Biureto Branco 20 L 1000 L Teste 20 L 1000 L Padro 20 L 1000 L

PROTEINAS TOTAIS - PP
Agitar bem e deixar os tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente. Ler absorbncia do padro e do teste, zerando o aparelho com o branco em 545 nm. Calculo

Fundamento As ligaes peptdicas das protenas (-HN-CO-) reagem com ons cpricos em meio alcalino (reagente do biureto), formando um complexo de colorao violeta, cuja absorbncia medida em 545 nm e diretamente proporcional a concentrao de protena na amostra.

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O calculo pode ser efetuado atravs do Fator de Calibrao. Cp Fc = ------Ap Ct = Fc x At, onde: Cp = concentrao do padro Ct = concentrao do teste Ap = absorbncia do padro At = absorbncia do teste Valores de referencia Protenas totais Soro Plasma 6,0 a 8,0 g/dL 6,8 a 8,3 g/dL

PRTICA 6:

CARACTERIZAO DE PROTENAS

I INTRODUO
As protenas, que so macromolculas de peso molecular definido, so eletrlitos cujo comportamento se ajusta aos mesmos princpios fsicos de eletrlitos de massa molecular menor. A natureza qumica dos radicais R (cadeias laterais) dos aminocidos que compe a estrutura primria das protenas determina a sua estrutura secundria e/ou terciria. O comportamento fsico-qumico das protenas est relacionado a vrios fatores. A solubilidade por exemplo, depende pH, fora inica do meio, constante dieltrica do solvente e temperatura. Em geral as protenas so menos solveis no ponto isoeltrico. Neste pH as protenas no apresentam carga efetiva (as cargas positivas so iguais s negativas) e portanto no atuam como foras eletrostticas entre as outras molculas presentes no meio. De ambos os lados do pH isoeltrico todas as molculas tero carga efetiva positiva ou negativa. Nestes casos,pelo fato das molculas de protenas se repelirem, haver menor tendncia para agregao e precipitao.

II OBJETIVOS ESPECFICOS

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No final deste trabalho prtico o aluno estar familiarizado com as propriedades fsico-qumicas das protenas, bem como as tcnicas e reaes de identificao das mesmas.

3.2 Procedimento Montar uma bateria com: Tubo s 1 2 3 4 5 Amostra gua, 2 mL Clara de ovo(a), 2 mL Gema de ovo(b), 2 mL Leite(c), 2 mL Extrato de Soja(d), 2 mL CuSO4 a 0,5% mL 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 NaOH a 10% mL 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5

III REAO DO BIURETO


3.1 Fundamento
A reao do biureto ocorre com substncias que contenham grupos e grupos nitrogenados. Sendo assim, essa reao positiva

para todas as protenas e peptdeos graas s suas ligaes peptdicas. Estas molculas, quando tratadas com uma soluo diluda de sulfato de cobre, em meio alcalino, do colorao prpura caracterstica, devido formao do complexo de coordenao entre o tomo de cobre e 4 tomos de nitrognio.

Solues preparadas por: a) homogeneizao de 1 clara de ovo com 50 mL de gua; b) homogeneizao de 1 gema de ovo com 50 mL de gua; c) homogeneizao de 50 g (5 colheres mdias) de leite em p com 100 mL de gua; d) homogeneizao de 10 g de farinha de soja de semente de soja em 100 mL de gua destilada.

HN CH HN

O C

Cu

NH HC NH
NH

Observar que em alguns tubos haver formao de uma colorao violeta, caracterstica de reao positiva, enquanto que no tubo contendo apenas gua e os reagentes verificar-se- uma cor azul escura caracterstica do cobre em meio alcalino (formao de Cu (OH)2 e de xidos de Cu). entre

C O
C O

Biureto

(complexo

de

coordenao

peptdeos e cobre II, de cor prpura)

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IV REAES DE PRECIPITAO DE PROTENAS


4.1 Reaes de Precipitao de Protenas com Desnaturao 4.1.1 Termocoagulao Coagulao pelo calor
As protenas so termolbeis, quando submetidas ao do calor desnaturam irreversivelmente.

Procedimento Experimental
***OBSERVAO: Para que se garanta a segurana, o experimento
a seguir dever ser efetuado na capela, pelo professor, de maneira demonstrativa. Colocar um tubo de ensaio: 2 mL de soluo protica Juntar cuidadosamente e vagarosamente, pelas paredes do tubo, 2 mL de HNO3 concentrado, sem misturar. Observar no limite de separao das duas camadas um anel branco (protena e metaprotena).

Procedimento
Colocar em tubos de ensaio solues contendo protenas (ovo, soro, etc); Aquecer, e observar a coagulao.

4.1.3 Precipitao com Sais de Metais Pesados


Alguns sais de metais pesados precipitam as protenas, por exemplo: HgCl2, AgNO3 CuSO4, FeCl3, (CH2COO)2Pb (acetato de chumbo), etc. Outros somente precipitam protenas em meio cidos. Por exemplo: Na2WO4 (tungstato de sdio).

4.1.2 Coagulao com cidos minerais Reao de Heller

Fundamento
Os cidos minerais fortes desnaturam as protenas, transformando-as em metaprotenas, insolveis. A reao de Heller (reao de protenas com HNO3 concentrado) freqentemente utilizada para a pesquisa de albumina na urina e permite a dosagem semiquantitativa. Esta reao sensvel a concentrao da ordem 1:30.000.

Procedimento A
Tub o 1 2 3 4 Soluo Protica - mL 2 2 2 2 CuSO4 0,5% *gotas *gotas *gotas FeCl3 1% (CH2COO)2 Pb 1%

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* Adicionar gotas das solues de metais pesados soluo protica, at observar a formao de precipitado. PRTICA 7:

1 mL de H2O2 3% (10 volumes) agitar

b. Note a formao de espuma abundante. Procure uma explicao para o fato. Esquematize a reao ocorrida.
2.

Atividade da Peroxidase

ENZIMAS I

A peroxidase uma enzima encontrada em todas as plantas superiores, sendo rara em tecidos animais. As excees so leuccitos, hemcias, fgado e rins. a. Colocar em dois tubos de ensaio: Tubo Reativo Kastles Meyer 1 2 1,0 1,0 gua mL 5,0 Sangue diludo - mL 5,0 H2O2 3% gotas 3 3

Objetivos Especficos
Ao final deste trabalho prtico o estudante dever saber: Manipular experimentalmente solues de enzimas; Identificar experimentalmente as propriedades termolabilidade e especificidade; Manipular reaes catalisadas por enzimas com finalidade de determinar semiquantitativamente influncia da concentrao de enzima, temperatura e pH na atividade enzimtica. Procedimento Experimental
1.

de a a do

b. Note o aparecimento imediato de cor rosa, que se intensifica, lentamente, no tubo que contm sangue. OBS.: O reativo de Kastle-Meuer uma soluo alcalina de fenolftalena reduza (AH2), que oxida diidroxifenis na presena de H2O2, formando a quinona correspondente. No sendo oxidada pelo perxido de hidrognio (H2O2), nem pelo oxignio molecular (O2). O sangue contm peroxidase, que transfere dois tomos de hidrognio do substrato (AH2) para H2O2, que convertido em H2O, oxidando assim a fenolftalena, que adquire colorao rsea, em meio alcalino.

Atividade da Catalase Enzima presente em quase todas as clulas animais.

a. Em um tubo de ensaio colocar: 10 gotas de sangue 5 mL de gua destilada homogeneizar

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AH2

H2O2

2H2O

A+

Fenolftalena reduzida oxidada

Fenolftalena

PRTICA 8:

EXTRAO E CARACTERIZAO DE LIPDEOS

1- gua 2- HCl a 4% 3- Na2CO3 a 2% 4- NaOH a 10% 5- Etanol 6- ter Sulfrico 7- Clorofrmio 8- Benzeno 9- Acetona Agitar vigorosamente e verificar:

I. Extrao de lipdeos de semente se soja Procedimento experimental


a.

Extrao Em copo de 100 mL pesar 10 g de soja moda e seca Adicionar 25 mL de lcool Agitar por 5 minutos Filtrar atravs de papel de filtro, para um bquer Lavar o resduo com 10 mL de lcool por duas vezes Evaporar o filtrado em banho de areia, com agitao constante at diminuio total do lcool Observar o resduo amarelo e oleoso. Esse leo ser utilizado como material para as provas seguintes.

Insolubilidade no 1 e 2 tubos Emulso estvel n 3 e 4 Solubilidade parcial no tubo n 5 que se torna total pelo aquecimento d) Solubilidade total no demais tubos.
a) b) c)

Juntar mais 20 gotas de leo nos tubos contendo:


Caracterizao 1. Solubilidade
b.
Em uma bateria de 9 tubos de ensaio numerados, colocar 3 gotas de leo vegetal em cada um e adicionar 3 mL de:

ter Clorofrmio Benzeno Acetona Observar a grande solubilidade do leo nesses solventes.

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BIBLIOGRAFIA ALFENAS, A. C. Eletroforese de isoenzimas e protenas afins: fundamentos e aplicaes em plantas e microorganismos. Viosa: U.F.V., 1998, 574p. ALFENAS, A. C.; PETERS, I.; BRUNE, W.; PASSADOR, G. C. Eletroforese de protenas e lisozimas de fungos e essncias florestais. Viosa: U.F.V., 1991. 242p. GORDON, D. B. 1995. Spectroscopic Techniques. pp. 324-344 in Principles and Techniques in Practical Biochemistry. K. Wilson & J. Walker Eds., Cambridge University Press, Cambridge LAEMMILI, U. K. Cleavage of strutural proteins during assembly of the head of bacteriophag T4. Nature, London, v.227, p.680-685, 1970. LEHNINGER, A. L.; NELSON, D. L. e COX, M. M. Principles of Biochemistry. New York, Worth Publishers, 1993. 1136p. REED, R., HOLMES, D., WEYERS, J. & JONES, A. J. 1998. Practical Stills in Biomolecular Sciences. Ed. Prentice Hall SAMBROOK, J.; FRITSCH & MANIATIS, E. F. T. Molecular Cloning. Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989. UNIVERSIDADE FEDERAL DE MINAS GERAIS, Apostila da Disciplina Bioqumica Celular (s.n.t). UNIVERSIDADE FEDERAL DE VIOSA (MG). Roteiros de Aulas Prticas de Bioqumica. Departamento de qumica, (s.n.t). UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARAN. Bioqumica: aulas prticas, 2 Ed. Scientia et

Labor, Curitiba, 1988. 116p. VILLELA, G. G.; BACILA, M. e TASTALDI, H. Tcnicas e Experimentos de Bioqumica. Rio de janeiro, Guanabara Koogan, 1973. 503p.

Web sites recomendados Sociedade brasileira de bioqumica e biologia molecular http://www.sbbq.org.br/

Faculdade Maurcio de Nassau Manual de Aulas Prticas Disciplina: BIOQUMICA DA NUTRIO Curso de NUTRIO Bloco II Colaborador: Jos Roberto da Cunha Lima Professor de Bioqumica da Nutrio do curso de Nutrio.

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