Mdulo 5.

MEMBRANAS BIOLGICAS
Resulta difcil explicar la estructura y funcin de clulas y organelos celulares sin considerar el papel que desempea la membrana celular. Para llevar a cabo las reacciones qumicas necesarias en el mantenimiento de la vida, la clula necesita mantener un medio interno apropiado. Esto es posible porque las clulas se encuentran separadas del mundo exterior por una membrana limitante: la membrana plasmtica. Adems, la presencia de membranas internas en las clulas eucariotas proporciona compartimientos adicionales que limitan ambientes nicos en los que se llevan al cabo funciones altamente especficas, necesarias para la supervivencia celular. Sin la existencia de las membranas habra sido imposible que la vida en la tierra evolucionara hasta alcanzar su estado actual. Las membranas celulares no son paredes rgidas, sino estructuras complejas y dinmicas compuestas por molculas que poseen caractersticas especiales. Tales caractersticas hacen posible la existencia de interacciones selectivas entre los sistemas de membrana internos en la clula, y de la clula con el medio que la rodea. Entre otras funciones de la membrana celular, se destacan la regulacin del transporte de molculas hacia adentro y afuera de la clula, la transmisin de seales e informacin entre el medio y el interior de la clula , la capacidad de actuar como sistema de transferencia y almacenamiento de energa y el reconocimiento de la clula con su entorno. Con el fin de entender los mecanismos mediante los cuales las membranas celulares realizan dichas funciones, es necesario hacer una revisin de los conocimientos acerca de la estructura y composicin de las membranas en general. Aunque este tema se centra principalmente en la estructura y funcin de la membrana plasmtica, gran parte de los conceptos que se vierten tambin se aplican al sistema de membranas interno. Organizacin de las membranas biolgicas. Una de las cosas ms sorprendentes que se descubren al observar una micrografa electrnica para comparar los tamaos de las distintas estructuras celulares, es el hecho de que la membrana plasmtica parece ser excesivamente delgada. Efectivamente, la membrana plasmtica tiene un grosor no mayor de 5 nm. Mucho antes de que se inventara el microscopio electrnico ya se saba que las membranas estaban compuestas de protenas y lpidos. Ya entre 1920 y 1930 se aceptaba que la parte central de la membrana plasmtica estaba formada de lpidos, principalmente fosfolpidos. Adems, el estudio de la membrana de los eritrocitos (que slo tienen membrana plasmtica) y la comparacin del rea de superficie de membrana con el nmero total de molculas de lpidos por clula permiti a los investigadores arribar a la conclusin de que la membrana se compone de fosfolpidos, y que su grosor no es mayor que el de dos molculas de stos. Debido a que la mayor parte de las protenas tiene un dimetro mayor a 10 nm, uno de los principales problemas para comprender la estructura bsica de las membranas consista en determinar la forma en que las molculas se disponan en un espacio tan pequeo. En 1972, S.T. Singer y G.L. Nicholson propusieron un modelo de estructura de membranas que sintetizaba las propiedades conocidas de las membranas biolgicas. Segn este modelo del mosaico fluido, que ha tenido gran aceptacin, las membranas constan de una bicapa lipdica (esencialmente una doble capa de fosfolpidos) en la cual estn inmersas diversas protenas.

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Esta bicapa lipdica constituye la estructura bsica de la membrana y acta de barrera relativamente impermeable al paso de la mayora de las molculas hidrosolubles. Las molculas proteicas, que normalmente se hallan disueltas en la bicapa lipdica, actan como mediadores o facilitadores de casi todas las funciones de la membrana, ya sea transportando molculas especficas a travs de ella o catalizando reacciones asociadas a la membrana, como la sntesis de ATP. Algunas protenas actan como eslabones estructurales que relacionan la membrana plasmtica al citoesqueleto y/o con la matriz extracelular de las clulas adyacentes, mientras que otras protenas actan como receptores que reciben y transducen las seales qumicas procedentes del entorno celular. En la actualidad se sabe que los lpidos de membrana tienen propiedades especiales que les permiten formar estructuras de doble capa, y que estas estructuras permiten la integracin de membranas biolgicas. Pero, cmo es posible que los lpidos se comporten en esa forma? Bicapa lipdica Los lpidos son insolubles en agua pero se disuelven fcilmente en disolventes orgnicos. Constituyen aproximadamente el 50% de la masa de la mayora de las membranas plasmticas de las clulas animales, siendo casi todo el resto protenas. Existen 109 molculas lipdicas en la membrana plasmtica de una clula animal pequea. Las propiedades fsicas de los fosfolpidos, en particular la forma en que dichas molculas se asocian en el agua, son las que permiten la formacin de capas dobles. Ya se ha mencionado que los fosfolpidos estn formados por dos cadenas de cidos grasos unidas a dos de los tres carbonos de la molcula del glicerol. Las dos cadenas de cidos grasos de la molcula son hidrfobas (no afines al agua) y pueden tener diferente longitud (usualmente contienen de 14 a 24 tomos de carbono). Normalmente una de estas cadenas presenta uno o ms dobles enlaces cis (es decir, es insaturada) mientras que la otra normalmente no tiene dobles enlaces (es saturada). Las diferencias en longitud y grado de instauracin entre las colas hidrocarbonadas son importantes porque afectan la capacidad de las molculas de fosfolpidos para empaquetarse, modificando su fluidez (como veremos ms adelante). El tercer carbono del glicerol est unido por intermedio de un grupo fosfato a una molcula orgnica hidroflica (afn al agua), que generalmente contiene un tomo de nitrgeno o un hidrato de carbono. Las molculas de este tipo, con una regin hidrofbica y otra hidroflica, se denominan molculas anfipticas. Todas las molculas que conforman el centro de la membrana tienen caractersticas anfipticas. Debido a que las molculas del tipo de los fosfolpidos tienen un extremo que se asocia libremente con el agua y otro que no lo hace, cuando se encuentran dispersas en agua adoptan, por lo general, una conformacin de capa doble. La estructura en bicapa permite que los grupos del extremo hidroflico se asocien libremente con el medio acuoso, y que las cadenas hidrofbicas de cidos grasos permanezcan en el interior de la estructura, lejos de las molculas de agua. No todos los lpidos son capaces de formar bicapas: algunos forman micelas con las colas hidrocarbonadas hacia el interior, como es el caso de los cidos grasos libres. Los triglicridos, por ejemplo, son hidrfobos, de manera que forman gotas de aceite

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dentro de la clula. Las caractersticas ms importantes de los lpidos que forman bicapas son, entonces: a) ser claramente dipolares, exhibiendo un polo hidrofbico y otro hidroflico, lo que hace que sus molculas sean fuertemente anfipticas, y b) su forma les permite asociarse con el agua en forma de una estructura de doble capa. Estas bicapas lipdicas tienden a cerrarse sobre si mismas formando compartimientos hermticos, eliminando as los bordes libres en los que las colas hidrofbicas podran estar en contacto con el agua. Por esta misma razn los compartimientos formados por bicapas lipdicas tienden a cerrarse de nuevo despus de haber sido rotos, propiedades denominadas de autoensamblaje y autosellado. Adems una bicapa lipdica tiene otras caractersticas que hacen de ella una estructura ideal para constituir membranas celulares, de las cuales una de las ms importantes es su fluidez, crucial para muchas funciones. La bicapa lipdica como un lquido bidimensional Una caracterstica importante de las bicapas de fosfolpidos es que en determinadas condiciones se comportan como cristales lquidos. Las bicapas tienen propiedades semejantes a los cristales, pero tambin tienen propiedades semejantes a los lquidos, porque a pesar de la ordenada disposicin de sus molculas los grupos hidrocarbonados estn en movimiento constante. Por lo tanto, una molcula se desplaza rpidamente de un punto al otro en un mismo lado de la estructura. Este movimiento confiere a la bicapa la propiedad de un fluido bidimensional'. En condiciones normales, esto significa que una molcula de fosfolpido puede atravesar la superficie de una clula eucariota en pocos segundos. Las propiedades de lquido de la bicapa lipdica tambin permiten el desplazamiento de las molculas que se encuentran insertas en ella sobre el plano de la membrana (siempre que no estn ancladas mediante algn otro mecanismo, como en algunas conexiones intercelulares). La fluidez de las membranas celulares es biolgicamente importante. Algunos procesos de transporte y actividades enzimticas pueden detenerse cuando la viscosidad de la membrana (parmetro inversamente relacionado con la fluidez) se incrementa mas all de un nivel crtico umbral. La fluidez de la bicapa depende tanto de su composicin como de la temperatura. Una menor longitud de las cadenas reduce la tendencia de las colas a interaccionar entre s y los dobles enlaces cis producen pliegues en las cadenas hidrocarbonadas que dificultan su empaquetamiento, de forma que las membranas permanecen fluidas a temperaturas ms bajas. La mayor parte de las membranas biolgicas se encuentran en un estado cristalino lquido; sin embargo, a temperaturas bajas, las fuerzas de van der Waals 1 entre las cadenas de hidrocarburos dispuestas una cerca de otra convierten las bicapas de fosfolpidos en un gel slido. Bacterias, levaduras y otros organismos cuyas temperaturas varan con la de su entorno controlan la composicin de cidos grasos de sus lpidos de membrana para mantener una fluidez relativamente constante. Si la temperatura disminuye sintetizan cidos grasos insaturados, de manera de evitar la prdida de fluidez de sus membranas por efecto de la disminucin de la temperatura. Los principales fosfolpidos que se encuentran en las membranas son la fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina y esfingomielina. La razn por la cual hay tal variedad de fosfolpidos quizs se deba a que seran necesarios para los distintos tipos de protenas que se hallan asociadas a la membrana, que nicamente podran funcionar en presencia de grupos polares especficos, como los que brinda la cabeza polar de los distintos tipos de fosfolpidos. Algunos fosfolpidos como el fosfatidilinositol, son funcionalmente importantes pero se hallan en cantidades relativamente pequeas A menudo las membranas plasmticas bacterianas estn compuestas por un nico tipo de fosfolpido y no contienen colesterol. Contrariamente, la composicin de la membrana celular de la mayora de las clulas eucariticas es ms variada conteniendo adems algn esterol (colesterol en las clulas animales) y glicolpidos. Las membranas plasmticas de algunas clulas animales contienen cantidades especialmente elevadas de colesterol, hasta una proporcin de ms de una molcula de colesterol por
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Ocurren entre dipolos inducidos no permanentes de enlaces covalentes poco polares, como C H. Cuando los orbitales moleculares de dos enlaces apolares se ponen en contacto, las nubes de electrones se rechazan mutuamente y se inducen dipolos, lo que establece una fuerza de atraccin dbil. Conforme los tomos se alejan, los dipolos desaparecen y se pierde la fuerza de van der Waals

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cada molcula de fosfolpido. Las molculas de colesterol se acomodan entre los fosfolpidos y actan como "amortiguadores de fluidez". A bajas temperaturas las molculas de colesterol se interponen entre las cadenas de hidrocarburos, con lo cual evitan que se acerquen y formen interacciones de van der Waals, los cuales provocaran la cristalizacin de la membrana. Por otro lado, a temperaturas elevadas, las molculas de colesterol restringen el movimiento excesivo de las cadenas de cidos grasos disminuyendo la fluidez de la membrana. Las bicapas lipdicas, sobre todo las que se encuentran en estado de cristal lquido, tienen tambin otras propiedades biolgicas importantes. Las bicapas tienden a resistir la formacin de extremos libres: como resultado tienden a autosellarse y casi en cualquier circunstancia forman vesculas cerradas espontneamente. Por ltimo, en condiciones apropiadas, las bicapas son capaces de fusionarse con otras. La fusin de membranas es un fenmeno celular muy importante y que requiere de membranas en estado fluido para producirse. Cuando una vescula se fusiona con otra membrana, ambas bicapas y sus compartimientos forman una continuidad. Esto permite tanto la transferencia de material de un compartimiento a otro, o el movimiento de una vescula secretora hacia afuera de la clula, mediante un proceso Ilamado exocitosis. De modo similar, aunque inverso, la endocitosis permite la incorporacin de grandes molculas del exterior mediante la formacin de vesculas en alguna porcin de la membrana. Otro aspecto importante es que la bicapa lipdica es asimtrica, hecho que tiene una obvia relacin funcional y se refiere a la diferente composicin lipdica de cada una de sus monocapas. En los glbulos rojos, la mayora de las molculas lipdicas que tienen colina en su grupo cabeza (fosfatidilcolina y esfingomielina) se encuentran en la mitad exterior de la bicapa, mientras que la mayora de las molculas de fosfolpido que contienen un grupo amino (fosfatidiletanolamina y fosfatidilserina) se hallan en la mitad interior. Algunos fosfolpidos, como el fosfatidilinositol, actan como intermediarios en el proceso de sealizacin celular: ante estmulos extracelulares, el fosfatidilinositol ubicado en el interior de la membrana es primero fosforilado en dos oportunidades y luego hidrolizado en trifosfato de inositol y diacilglicerol. Ambos fragmentos de la molcula actan dentro de la clula como mensajeros solubles que permiten la difusin de la seal hacia el interior de la clula. Como ya se ha mencionado, la sntesis de fosfolpidos ocurre en el Retculo Endoplsmico Liso y es all donde se genera la asimetra por traslocadores que trasladan especficamente molculas de fosfolpidos de una capa a la otra. Los fosfolpidos son sintetizados en la cara externa (citoslica). Si bien se sintetizan tanto fosfatidilcolina como el resto de los fosfolpidos, slo la fosfatidilcolina pasa a la cara interna de la membrana del retculo gracias a un traslocador fosfolipdico espec fico (una flipasa). La prdida de la asimetra de la membrana es una seal de muerte celular, ya que la exposicin de fosfatidilserina en la monocapa externa es un ndice de apoptosis o muerte celular programada que favorece la fagocitosis de estas clulas por macrfagos. Tambin existen glicolpidos en la membrana. Se presentan probablemente en las membranas plasmticas de todas las clulas animales, constituyendo el 5% de las molculas de lpido de la monocapa externa y son las molculas que presentan una asimetra mas marcada en cuanto a su distribucin en las membranas celulares. Estas molculas se encuentran exclusivamente en la mitad no citoplasmtica de la membrana plasmtica. En la membrana plasmtica, los grupos azcares quedan al descubierto en la superficie de la clula, lo que sugiere que deben desempear una funcin en las interacciones de la clula con su entorno. Debido a que los azcares se aaden en la cara luminal del aparato de Golgi, al formarse la vescula de transporte el residuo glicosdico queda hacia el interior de la misma, pero cuando sta se fusiona con la membrana plasmtica, la porcin glicosilada, que es hidrfila, queda hacia el exterior de la

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clula. Hay variados tipos de glicolpidos: los ms complejos contienen oligosacridos con uno o ms residuos de cido silico que les proporciona carga negativa. Estos lpidos son ms abundantes en la membrana plasmtica de clulas nerviosas. La funcin de los glicolpidos puede ser variada: en las clulas epiteliales tapizan la cara que da al epitelio, donde las condiciones son extremas (bajos o altos valores de pH, enzimas degradativas), protegeran la integridad de las propias protenas de membrana; tambin cumplen funciones aislantes, como ocurre en la membrana que rodea el axn de las clulas nerviosas, tapizada totalmente por glicolpidos en la cara externa. La presencia de carga elctrica negativa en su molcula es responsable tambin de la concentracin de iones, especialmente Ca +2 en la superficie externa. Adems desempean una importante funcin en procesos de reconocimiento celular, ayudando a su vez a las clulas a unirse a la matriz extracelular y a otras clulas. Protenas de membrana Aunque la estructura bsica de las membranas biolgicas es provista por los fosfolpidos, la mayora de las funciones especficas de la membrana son llevadas a cabo por protenas. De acuerdo con ello, las cantidades y tipos de protenas de membrana son muy variables: en la membrana mielnica, que sirve de aislacin elctrica al axn de la neurona, menos del 25% son protenas, en tanto que en las membranas donde hay transduccin energtica (mitocondrias y cloroplastos) el porcentaje alcanza al 75%. En promedio, hay un 50% de lpidos y otro tanto de protenas, pero como las protenas son mucho ms grandes, la relacin numrica es de alrededor de 50 molculas de fosfolpidos por cada molcula de protena. Al principio, los investigadores encontraban difcil pensar que las protenas se asociaran en otro sitio que no fuese la superficie exterior de las membranas. Sin embargo en estudios fisicoqumicos de las protenas de membrana se mostr que gran parte de stas son del tipo globular; esto significa que son demasiado voluminosas como para asociarse slo a la superficie de las membranas. Por ltimo, se obtuvieron pruebas por las cuales puede afirmarse que algunas protenas se asocian con las membranas de tal manera que una regin (o dominio) de ellas se encuentra de un lado de la membrana y otra en el lado opuesto. Por lo tanto, el modelo de la estructura de membrana ms razonable es aqul en el que se forma un mosaico de protenas, en el cual gran parte de stas son mviles y se extienden dentro o a ambos lados de la bicapa lipdica. Hoy se sabe que existen dos tipos de protenas de membrana: protenas integrales y protenas perifricas. Las protenas integrales de membrana poseen algunas regiones insertadas en las regiones hidrfobas de la bicapa lipdica. Algunas atraviesan toda la membrana, de manera que gran parte de ellas se encuentra en alguno de los lados de la membrana; estas protenas integrales se llaman tambin protenas transmembrana. Algunas otras protenas integrales poseen solo una pequea porcin dentro de la bicapa que sirve como ancla y el resto de la molcula en el citoplasma o hacia la superficie celular. Otras estn casi por completo insertas en la regin hidrfoba y poseen cadenas polipeptdicas que atraviesan una y otra vez (incluso hasta doce veces) la bicapa lipdica. Las protenas integrales de membrana son capaces de insertarse en la bicapa lipdica debido a que las porciones que lo hacen son hidrfobas y, por tanto, son compatibles con el interior de la membrana. Cuando alguna protena de membrana contiene una porcin hidroflica, sta generalmente se encuentra en protrusin por fuera de la superficie de la membrana, en contacto con el medio acuoso 2. Tambin las protenas transmembrnicas pueden estar unidas por una cadena de cido graso a la cara interna de la membrana, pasar una sola vez a travs de la misma (1) o muchas veces (2), estar solubles en el citosol pero ancladas a la cara interna por un resto acilo o prenilo (3), o haber sido

La diferencia entre protenas solubles y protenas ligadas a membranas no consiste en que una contenga aminocidos hidrfobos y la otra no, sino en que en aqullas los aminocidos hidrfobos se encuentran en el interior de la molcula, lejos del medio acuoso, en tanto que en stas las porciones hidrfobas de los aminocidos se presentan en la superficie de la molcula, en contacto con las cadenas de cidos grasos de la bicapa lipdica

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sintetizadas como protenas transmembrana en el retculo endoplsmico rugoso y unidas a un resto de glicosilfosfatidilinositol, que las ancla a la cara externa de la membrana (4).

En las protenas integrales, la parte que se halla dentro de la membrana usualmente adopta una estructura en -hlice, con predominio de aminocidos hidrofbicos. Adems este enrollamiento asegura que todas las uniones peptdicas (que son polares) estn disminuidas en su polaridad debido a la formacin de puentes de hidrgeno. Slo hacen falta 20-30 aminocidos para atravesar la membrana en forma de -hlice y slo unos diez para hacerlo en forma de hoja -plegada. La mayora de las protenas integrales atraviesan la membrana en forma de hlices , pero algunas (como las porinas de bacterias y de mitocondrias) formas lminas que se disponen en forma de barril (-barrel). Las protenas integrale de membrana pueden ser solubilizadas por medio de detergentes, que en agua forman micelas. El otro tipo de protenas de membrana, las protenas perifricas, pueden eliminarse de sta sin alterar la estructura de la doble capa. Por lo general se unen a regiones expuestas de protenas integrales. Las protenas perifricas estn usualmente asociadas por interacciones no covalentes a otras protenas transmembrnicas y se pueden ubicar hacia adentro (5) o hacia fuera (6) de la membrana. Si bien las protenas pueden migrar dentro de la membrana, existen distintos dispositivos por los cuales las clulas pueden confinar a las protenas dentro de determinados dominios membranosos. En las clulas epiteliales que tapizan el intestino y los tbulos renales, las protenas que miran hacia la luz del tubo no pueden pasar hacia las paredes laterales o hacia la cara opuesta de la clula debido a la existencia de uniones estrechas (se vern ms adelante) que les impiden el paso. Sin embargo no es el nico medio, aunque en algunos casos no se conoce el mecanismo que impide la migracin libre: en espermatozoides de mamferos las protenas del pice, del resto de la cabeza y de la cola forman tres dominios perfectamente individualizables con anticuerpos fluorescentes, pero se desconoce cul es la funcin de dichas protenas y las fuerzas que impiden su migracin. Otros ejemplos de confinamiento de protenas en determinadas zonas de la membrana estn dadas por asociacin de protenas con el citoesqueleto (glbulos rojos), o con la matriz extracelular, o con ambos, o puede haber interacciones entre protenas de dos clulas distintas en zonas de membrana contiguas. Asimetra de protenas de las membranas Una de las pruebas ms evidentes de que las protenas se insertan en la bicapa lipdica proviene del estudio con microscopa electrnica por el mtodo de criofractura, el cual prcticamente permite a los investigadores observar las membranas de "adentro hacia afuera". Al comparar, con el mtodo descrito, las dos superficies de una membrana, se muestra que en una de estas superficies hay gran cantidad de partculas, en tanto que en la otra superficie se observan muy pocas. Estas partculas son protenas embebidas en la doble capa de lpidos. De aqu se deduce que las protenas presentes en una membrana biolgica estn distribuidas de manera asimtrica. Cada lado de la membrana tiene caractersticas

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diferentes debido a que cada protena de membrana se orienta en la bicapa en un solo sentido. Esta asimetra est dada por la forma tan especfica en que se forman e intercambian las membranas de una parte de la clula a otra. Los hidratos de carbono se encuentran unidos a las porciones de las protenas expuestas en la superficie celular, y no a las que se internan al citoplasma. Esta distribucin asimtrica de los hidratos de carbono se debe a la forma en que las glucoprotenas se insertan en las membranas al ser sintetizadas. Como se dijo, las protenas de la membrana plasmtica son producidas por ribosomas del retculo endoplsmico rugoso (RER) y se insertan en la membrana de ste durante su sntesis. Los hidratos de carbono se aaden a las protenas en el lumen del RER. Si se sigue de cerca la gemacin y fusin de membrana que forman parte del proceso de transporte se podr observar que la porcin proteica en protrusin hacia el compartimiento interno (cisterna) del RER tambin estar expuesta al interior del complejo de Golgi, donde se encuentran las enzimas que modifican los hidratos de carbono de las protenas. La porcin proteica permanecer en el compartimiento interior al separarse del complejo de Golgi para ser empaquetada en una vescula secretora. Cuando la vescula secretora se fusiona con la membrana plasmtica, la porcin de la protena que contiene el hidrato de carbono, orientado hacia el interior de la vescula, se convertir en parte de la protena de membrana expuesta en la superficie celular. Funciones de las protenas de membrana Por qu motivo la membrana plasmtica requiere de tantas protenas distintas? La diversidad de protenas en una membrana refleja el nmero de funciones que se llevan a cabo en ella. Habitualmente la manera en que una protena se asocia a la bicapa lipdica es un indicativo de la funcin de la protena. As, slo las protenas transmembrana pueden actuar a ambos lados de la bicapa o transportar molculas a travs de ellas. Las protenas de la membrana plasmtica pueden ser clasificadas en diferentes grupos, de acuerdo a la funcin que desempean: a) protenas de adhesin celular, que unen firmemente las membranas de clulas adyacentes y actan como puntos de anclaje con componentes del citoesqueleto; b) canales proteicos entre dos clulas (uniones de hendidura, permiten el paso de molculas pequeas entre dos clulas vecinas; c) protenas de transporte que permiten el transporte selectivo de molculas esenciales, ya sea en forma pasiva o en forma activa, mediante procesos que requieren de energa; d) protenas transductoras receptoras de seales, que se unen a molculas portadoras de seales externas y que luego transfieren el mensaje al interior de la clula; e) bombas dependientes de ATP, que transportan activamente iones de un compartimiento a otro, constituyendo as un mecanismo de almacenamiento de energa (se vern en mitocondrias y cloroplastos); f) algunas protenas intrnsecas de la membrana actan como enzimas, con sitios activos localizados en la superficie de la membrana o en el interior de ella. PASO DE LOS MATERIALES A TRAVS DE LAS MEMBRANAS Debido a su interior hidrofbico, la bicapa lipdica de una clula constituye una barrera altamente impermeable a la mayora de las molculas polares. Esta funcin de barrera es de especial importancia, ya que permite a una clula mantener en su citosol ciertos solutos a concentraciones diferentes a las que estn en el fluido extracelular y en cada uno de los compartimientos intracelulares. Sin embargo, para poder utilizar esta barrera las clulas han tenido que desarrollar sistemas para transportar especficamente molculas hidrosolubles a travs de la membrana y as poder ingerir nutrientes esenciales, excretar los productos de deshecho del metabolismo y regular las concentraciones intracelulares de iones. El transporte de iones inorgnicos y de pequeas molculas orgnicas hidrosolubles a travs de la bicapa lipdica se consigue mediante protenas transmembrana especializadas, cada una de las cuales es responsable de la transferencia de una molcula o un ion especfico o de un grupo de molculas afines.

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El hecho de que una membrana permita el paso de ciertas sustancias depende de la estructura de aqulla y del tamao y carga elctrica de las molculas. Se dice que una membrana es permeable para alguna sustancia si permite que sta la cruce y que es impermeable si no permite el paso de dicha sustancia. Una membrana selectivamente permeable permite el paso de algunas sustancias pero no el de otras. Todas las membranas biolgicas (aquellas que rodean a las clulas, ncleos, vacuolas, mitocondrias, cloroplastos y otros organelos celulares) son selectivamente permeables. Al reaccionar a las condiciones ambientales cambiantes o a las diversas necesidades de la clula, la membrana puede constituir una barrera al paso de un compuesto determinado en cierto momento, mientras promueve activamente su paso en otro momento. Mediante la regulacin del trfico qumico de esa manera, la clula controla su propia composicin interna de iones y molculas que puede ser muy diferente a la del exterior. En el mundo abitico, los materiales se mueven pasivamente por procesos fsicos como la difusin. En los seres biticos, los materiales tambin se mueven activamente por procesos fisiolgicos como transporte activo, exocitosis y endocitosis. Esos procesos fisiolgicos activos demandan un gasto de energa por parte de la clula. Difusin Algunas sustancias se desplazan hacia adentro y afuera de las clulas, y se mueven dentro de stas por medio de un proceso llamado difusin simple, el cual se basa en el desplazamiento al azar. Cuando se deja caer un terrn de azcar en un vaso de precipitado lleno con agua, las molculas de aqul se disuelven y luego comienzan a difundirse hacia toda el agua del recipiente, como consecuencia de que las molculas de azcar individuales se desplazan al azar en todas direcciones. En ltima instancia, la difusin ocasiona una distribucin uniforme de las molculas de azcar en toda el agua del vaso. Por lo tanto, puede decirse que la difusin implica el movimiento neto de partculas en favor de un gradiente de concentracin (diferencia de concentracin de una sustancia de un punto a otro). La velocidad de difusin est en funcin del tamao y forma de las molculas, de sus cargas elctricas y de la temperatura. Al aumentar la temperatura, las molculas se mueven con mayor rapidez y aumenta la proporcin de difusin. Este movimiento de las partculas pequeas (llamado movimiento browniano) constituye un modelo que explica el mecanismo de difusin de las molculas. Dilisis La difusin de un soluto (una sustancia disuelta) a travs de una membrana diferencialmente permeable se llama dilisis. Para demostrar la dilisis se utiliza una bolsa de celofn, llena con una solucin de azcar, que luego se sumerge en un matraz que contiene agua pura. Si la membrana de celofn es permeable a azcar y al agua, las molculas de azcar pasarn a travs de ella hasta que la concentracin de azcar en el agua de los dos lados de la membrana sea exactamente igual. A partir de ese momento, las molculas de soluto (as como tambin las molculas de agua) seguirn pasando a travs de la membrana, pero ya no habr ningn cambio neto en las concentraciones, ya que la velocidad de movimiento ser igual en ambos sentido. La dilisis renal es una aplicacin prctica de este proceso; los productos de desecho, que se difunden a travs de las membranas artificiales del aparato, pueden

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retirarse del organismo, pero los eritrocitos, protenas sanguneas y otras molculas grandes, no se difunden a travs de la membrana y por tanto se retendrn en el organismo. El celofn con frecuencia se utiliza como "membrana artificial" Est compuesto por molculas de polisacridos y puede formar una lmina delgada que permite el paso de molculas de agua. Estas membranas se fabrican con permeabilidad variable para diferentes solutos. Con suficiente tiempo, prcticamente cualquier molcula acabar difundiendo a travs de la bicapa lipdica. Sin embargo la velocidad a la que se produce esta difusin vara enormemente dependiendo en parte del tamao de la molcula y principalmente de su solubilidad relativa. En general cuanto menor y menos soluble en agua sea una molcula (es decir, cuanto ms hidrofbica o no polar) ms rpidamente difunde a travs de la bicapa. Las molculas pequeas no polares (O 2, CO2) se disuelven fcilmente en la bicapa lipdica y por lo tanto difunden con rapidez. Las molculas polares no cargadas tambin difunden rpidamente a travs de la bicapa lipdica si su tamao es reducido: por ejemplo agua, etanol y urea atraviesan rpidamente una bicapa, el glicerol lo hace con menor rapidez y la glucosa prcticamente no la atraviesa. Las molculas de agua, por ejemplo, pueden desplazarse fcilmente a travs de una bicapa lipdica fluida, pasando a travs de brechas que se forman cuando una cadena de cido graso se mueve momentneamente. Por el contrario, las bicapas lipdicas son altamente impermeables a todas las molculas cargadas (iones) por muy pequeas que sean; la carga y el grado de hidratacin les impide penetrar la fase hidrocarbonada de la bicapa. Permeabilidad de la bicapa lipdica a diferentes sustancias Tipo de molcula Hidrfoba Polar pequea Polar grande Iones y molculas con carga Ejemplo N2, O2 hidrocarburos H20, CO2, glicerol, urea Glucosa y otros monosacridos y disacridos sin carga Aminocidos, H+, HCO-3, Ca+, Cl-; Mg+ Permeabilidad Permeabilidad libre Permeabilidad libre No permeable No permeable

smosis La smosis es una variedad especial de difusin que implica el movimiento de molculas solventes (en este caso, el agua) a travs de una membrana de permeabilidad selectiva. Las molculas de agua pasan libremente en cualquier direccin, pero al igual que en todos los procesos de difusin, el movimiento neto ocurre a partir de la regin de mayor concentracin a la de menor. Los principios que intervienen en el proceso de smosis se ilustran mediante la utilizacin de un aparato llamado tubo en U. El tubo en U se divide en dos secciones por una membrana de permeabilidad selectiva que impide el paso de las molculas de soluto (glucosa, sal y otras) En una parte del tubo se coloca una solucin de agua y solutos; en la otra se coloca agua pura. La solucin de agua y solutos contiene una concentracin de agua menor a la del agua pura, porque las molculas de soluto han "diluido" las molculas de agua. Por tanto, hay un movimiento neto de molculas de agua del lado del agua pura (con mayor concentracin de molculas de agua) hacia el lado del agua con soluto (que tiene menor concentracin de molculas de agua), como resultado de esto el nivel de lquido del lado del agua pura disminuye, mientras que se eleva el del lado del agua con soluto. Sin embargo, an existe una diferencia en la concentracin de las molculas de agua entre ambos lados, debido a que las molculas de soluto no pueden moverse a travs de la membrana. El movimiento neto de agua continuar, y el nivel de lquido del lado del agua con soluto seguir aumentando. En condiciones no sujetas a la gravedad, este proceso continuara indefinidamente, pero en la tierra, el peso de la columna de lquido en aumento finalmente ejercer una presin suficiente para detener el cambio en los niveles de lquido, aunque las molculas de agua continuarn pasando a travs de la membrana en ambas direcciones.

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La presin osmtica de una solucin est relacionada con la tendencia que presenta el agua de moverse hacia dicha solucin mediante smosis. En el ejemplo del tubo en U se podra medir la presin osmtica insertando un pistn del lado del agua con soluto y midiendo la presin necesaria que debe ejercer el pistn para evitar el aumento en el nivel del lquido de dicho lado del tubo. Una solucin con una alta concentracin de soluto tendr una baja concentracin de agua y una elevada presin osmtica; en cambio, una solucin con una baja concentracin de soluto tendr una elevada concentracin de agua y una baja presin osmtica. Soluciones isotnicas, hipertnicas e hipotnicas Con frecuencia deseamos comparar las presiones osmticas de dos soluciones. En todo compartimiento de una clula viva se encuentran disueltas sales, azcares y otras sustancias que le confieren a dicho lquido una determinada presin osmtica. Cuando una clula se coloca en una solucin cuya presin osmtica es igual a la suya, no hay movimiento neto de molculas de agua, ni hacia afuera ni hacia adentro de ella; por tanto, la clula no se hincha ni se encoge. Se dice que el lquido en el cual se coloc la clula es un lquido isotnico (es decir que tiene presin osmtica igual) con respecto al lquido del interior de la clula. Normalmente, el plasma de la sangre (componente lquido de ella) y los dems lquidos corporales son isotnicos con respecto al lquido intracelular; es decir, contienen una concentracin de agua igual a la del lquido intracelular. Una solucin de cloruro de sodio al 0,9% ( llamada solucin salina fisiolgica) es isotnica respecto a las clulas humanas y a las clulas de otros mamferos. Los eritrocitos humanos colocados en una solucin de cloruro de sodio al 0,9% no se encogen ni se hinchan.
Concentracin de solutos Concentracin de en la Solucin A solutos en la Solucin B Mayor Menor Mayor Igual Mayor Igual Tonicidad A es hipertnica respecto a B; B es hipotnica respecto a A B es hipertnica respecto a A. A es hipotnica respecto a B Isotnica Direccin de movimiento del agua B hacia A A hacia B No hay movimiento neto

Si el lquido circundante tiene una concentracin de solutos mayor que la del lquido intracelular y, por tanto, una presin osmtica mayor que la de ste se dice que es una solucin hipertnica; una clula colocada en una solucin hipertnica pierde agua y por tanto, se encoge. As, los eritrocitos humanos colocados en una solucin de cloruro de sodio al 1,3% pierden agua y se encogen. Cuando una clula con pared celular se coloca en un medio hipertnico pierde agua, y entonces su contenido disminuye dentro de la pared celular; este proceso se llama plasmlisis. Dicho fenmeno se observa en las plantas cuando se depositan grandes cantidades de sales o fertilizantes en la tierra o agua que las rodea. Si el lquido circundante posee una concentracin de solutos menor que la del lquido intracelular, y por lo tanto tiene una presin osmtica menor que la de ste, se denomina solucin hipotnica; en estas circunstancias, el lquido se desplazar hacia el interior de la clula, provocando que sta se hinche. En una solucin de cloruro de sodio al 0,6%, el agua entra hacia el interior de los eritrocitos, provocando el hinchamiento de stos y eventualmente su ruptura o lisis (visualizado por la disolucin de la hemoglobina en el lquido hipotnico, que lo colorea de rojo). Presin de turgencia Las paredes celulares rgidas de clulas vegetales, algas, bacterias y hongos hacen posible que esos organismos vivan sin reventar en un medio externo muy diluido, que contenga una concentracin muy baja de solutos. Debido a las sustancias disueltas en el citoplasma, las clulas son hipertnicas respecto al medio externo (el medio circundante es hipotnico respecto al citoplasma.). El agua tiende a difundir hacia el interior de las clulas por smosis, llenando sus vacuolas centrales y distendindolas. La clula se hincha, acumulando presin, llamada presin de turgencia, contra las paredes celulares rgidas

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de celulosa. La pared celular puede estirarse muy poco, y se alcanza un estado de equilibrio cuando su resistencia impide que la clula se hinche ms. Al llegar a ese punto ya no hay movimiento neto de molculas de agua hacia el interior de la clula (aunque desde luego, las molculas continan movindose hacia dentro y hacia fuera de la membrana con igual velocidad). La presin de turgencia es un factor importante en el sostn del cuerpo de las plantas herbceas. Por este motivo, una flor se marchita cuando la presin de turgencia de sus clulas disminuye (las clulas han sufrido plasmlisis) por falta de agua. Transporte mediado de molculas pequeas La membrana celular es relativamente impermeable a casi todas las grandes molculas polares. Esto constituye una ventaja biolgica para la clula, ya que casi todos los compuestos metabolizados en su interior son polares y la impermeabilidad de la membrana impide su prdida por difusin. Para transportar nutrientes polares, como glucosa y aminocidos, a travs de la membrana lipdica hacia el interior de la clula, han aparecido a lo largo de la evolucin sistemas de protenas transportadoras que se unen a esas molculas y facilitan su pasaje a travs de la membrana. El paso de solutos a travs de la membrana celular por el sistema de transporte se llama transporte mediado. Transporte Pasivo (Difusin facilitada) En los casos ms simples, la clula utiliza la energa almacenada por el gradiente de concentracin de una sustancia cuya concentracin es mayor en el lquido extracelular que en el intracelular. En estas circunstancias, mientras la membrana sea permeable a dicha sustancia, sta se desplazar hacia el interior de la clula. Es el caso de iones, azcares, aminocidos, nucletidos y muchos metabolitos. Para que esto suceda se necesita de la presencia de protenas especiales de membrana. Este tipo de transporte se llama transporte pasivo o difusin facilitada.

Comparacin entre un transporte pasivo a favor del gradiente electroqumico y el transporte activo en contra del gradiente electroqumico La difusin facilitada depende de la existencia de protenas transportadoras, las cuales se combinan temporalmente con la molcula de soluto para acelerar el paso de sta a travs de la membrana celular. Cada protena est destinada al transporte de un tipo particular de molcula y con frecuencia de una cierta especie molecular, por lo que presentan especificidad. La protena transportadora no se

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modifica por esta accin; despus de transportar la molcula de soluto, queda libre para unirse a una nueva molcula. Todas las protenas de transporte estudiadas son protenas transmembrana. El transporte de las molculas de glucosa en los eritrocitos es un buen ejemplo de difusin facilitada por transportador. Las molculas que transportan glucosa son glucoprotenas; stas comprenden un 2% de las protenas totales de la membrana. Las clulas mantienen una baja concentracin interna de glucosa mediante la adicin inmediata de un fosfato a las molculas de glucosa que entran en ellas: de esta manera convierten dichas molculas en fosfatos de glucosa con elevada carga elctrica y, as, no pueden regresar al otro lado de la membrana. El mecanismo de transporte de glucosa no se comprende a fondo. Parece que la protena transportadora no forma un hoyo en la membrana para que la glucosa pase a travs de l; si tal fuera el caso, otras molculas similares a la glucosa y algunas molculas ms pequeas que sta tambin podran pasar a travs del "hoyo". Al parecer, lo que ocurre es que la glucosa se une de modo especfico a una porcin de protena expuesta en la superficie celular externa, y con esto, modifica la conformacin de la protena, de manera que se abre un canal dentro de la protena misma (o entre varias subunidades de la misma cadena polipeptdica), que permite el paso de la molcula de glucosa para liberarla en el interior de la clula. Segn este modelo, una vez que la glucosa se libera en el interior de la clula, la protena recupera su conformacin original y est lista para unirse nuevamente a una molcula de glucosa en la superficie celular. Otra clase de protenas transportadoras son las formadoras de canal; estas no se unen al soluto sino que forman poros hidroflicos que atraviesan la bicapa lipdica, que al estar abiertos permiten que determinados solutos (habitualmente iones inorgnicos de tamao y carga apropiados) puedan pasar a su travs y por lo tanto atravesar la membrana). Transporte activo Algunas molculas se transportan a travs de la clula mediante el proceso de difusin; a otras las requiere la clula en concentraciones mayores a su concentracin extracelular. Estas molculas se incorporan mediante mecanismos de transporte activo. Este mecanismo exige una fuente de energa debido a que el transporte activo implica el "bombeo" de una molcula en contra de su gradiente de concentracin (de una zona de baja concentracin hacia una de concentracin elevada). Por tanto, los sistemas de transporte activo utilizan energa generada por el metabolismo celular en forma de trifosfato de adenosina (ATP) o bien utilizan algn otro tipo de energa almacenada, derivada de la hidrlisis del ATP. Uno de los ejemplos ms sorprendentes de los mecanismos de transporte activo es la bomba de sodio y potasio que se observa en todas las clulas animales. Esta bomba consta de una protena especfica, localizada en la membrana plasmtica, que utiliza ATP para intercambiar iones de sodio del interior de la clula por iones de potasio de su exterior. Esto provoca un desequilibrio en la concentracin de iones de sodio y potasio en los lados opuestos de la membrana, de manera que en condiciones normales, la concentracin de potasio sea de 10 a 15 veces mayor en el interior que en el exterior de la clula y a la inversa para el sodio. Las clulas son capaces de utilizar estos enormes gradientes de concentracin para generar un potencial elctrico (separacin de cargas elctricas) a travs de la membrana, el cual constituye la base para la transmisin de los impulsos elctricos necesarios para la transmisin de los impulsos nerviosos. Estos gradientes de concentracin tambin almacenan energa, la cual puede utilizarse para la conduccin de otros mecanismos de transporte activo. El gradiente electroqumico producido por estas bombas es tan importante que de hecho algunas clulas (p. ej., las clulas nerviosas) utilizan el 70% de su energa en el funcionamiento de este sistema de transporte. El uso de los potenciales electroqumicos con tales propsitos no es exclusivo de la membrana plasmtica de las clulas animales. Las clulas de plantas y hongos tambin utilizan bombas impulsadas por ATP con las cuales "bombean" protones del citoplasma hacia el exterior de la clula. La salida de protones (con carga positiva) del interior de la clula provoca una enorme diferencia en la concentracin de ellos, de manera que el exterior tiene carga positiva y el interior negativa. Como se ver ms adelante, estas bombas de protones que utilizan ATP, usadas en sentido inverso para producir ATP en bacterias,

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mitocondrias y cloroplastos, constituyen el principal transductor de energa en todas las clulas, desde las bacterias hasta las clulas de plantas y animales complejos. La hiptesis aceptada en la actualidad sostiene que la bomba de sodio y potasio (y otras bombas que requieren ATP) est formada por protenas transmembrana que se extienden a travs ella. La protena tiene centros de unin para el Na+ y el ATP en su superficie citoplasmtica y para K+ en su superficie externa. Despus de una serie de cambios en su conformacin son capaces de intercambiar sodio por potasio a travs de la membrana celular. A diferencia de la difusin facilitada, parte de los cambios de conformacin de la protena durante el ciclo de bombeo requieren de la energa liberada por el ATP. Parece que la energa se transfiere del ATP a la bomba mediante la formacin de un enlace covalente entre uno de los fosfatos del ATP y la protena, seguido por la retirada del mismo en etapas ms avanzadas del ciclo de bombeo.

Debido al bombeo de 3 iones Na+ positivamente cargados hacia el exterior de la clula cada dos que bombea hacia el interior, se dice que la bomba es electrognica, es decir dirige una corriente neta a travs de la membrana tendiendo a crear un potencial elctrico, con el interior negativo con relacin al exterior. Por otra parte la bomba tiene un papel directo regulando el volumen celular a travs de sus efectos osmticos, que pueden hacer que la clula se hinche o se retraiga. Por ltimo, tambin se utiliza para dirigir el transporte de azcares y aminocidos hacia el interior de la clula, como se ver a continuacin. Sistemas de cotransporte Algunas protenas de transporte actan como transportadores acoplados, en los que la transferencia de un soluto depende de la transferencia simultnea o secuencial de un segundo soluto, ya sea en la misma direccin (transporte unidireccional) o en direccin opuesta (bidireccional). Transporte activo secundario Muchos sistemas de transporte activo no son impulsados directamente por la hidrlisis del ATP sino por la energa almacenada por los gradientes inicos. El gradiente electroqumico generado por la bomba de sodio y potasio proporciona suficiente energa para propiciar el transporte activo de otras molculas esenciales. En estas reacciones, el gradiente de concentracin de Na + cotransporta las molculas requeridas, junto con los iones de Na+ La energa libre liberada durante el desplazamiento de

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un ion a favor de su gradiente electroqumico se utiliza como fuerza impulsora para bombear otros solutos en contra de su gradiente. As, las protenas transportadoras actan como transportadores acoplados. El Na+ que entra en la clula durante este transporte es bombeado hacia el exterior mediante la ATPasa Na+K+ . Sistemas de transporte mltiple integrado

La distribucin asimtrica de las protenas transportadoras en la membrana plasmtica de una clula epitelial intestinal da lugar al transporte transcelular de glucosa a travs del epitelio intestinal En algunas clulas se observa el funcionamiento de ms de un sistema de transporte para una sustancia determinada. Por ejemplo, el transporte de la glucosa del intestino hacia el torrente circulatorio se lleva a cabo a travs de una delgada capa de clulas epiteliales que recubren la luz del intestino y que poseen regiones especializadas, o dominios, en su membrana plasmtica. La superficie de estas clulas, expuesta en el intestino, posee una gran cantidad de microvellosidades o protrusiones digitiformes que incrementan con eficacia la superficie de membrana disponible para absorcin. El transporte de glucosa en esta zona de la superficie celular es parte de un sistema de transporte activo que se efecta en cotransporte con el sodio. La concentracin intracelular de sodio se mantiene baja por funcin de una bomba de sodio y potasio en la superficie opuesta de la clula, que bombea el sodio hacia el torrente circulatorio. Gracias a su elevada concentracin dentro de la clula, la glucosa puede ser transportada hacia el torrente circulatorio mediante difusin facilitada. La localizacin de dos protenas diferentes que participan en el transporte de glucosa en dos regiones distintas de una misma membrana plasmtica se produce gracias a la presencia de uniones

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especializadas en la clula (uniones estrechas, se ver en el mdulo 6). Si una clula careciera de un mecanismo especfico para determinar este proceso, entonces las protenas estaran distribuidas al azar en ambas superficies de la clula; luego, no habra transporte neto de glucosa. Transporte de grandes molculas a travs de las membranas En la difusin simple, en la difusin facilitada y en el transporte activo las molculas individuales y los iones pasan a travs de la membrana celular. Sin embargo, en ocasiones tambin es necesario el desplazamiento de cantidades ms grandes de material o de partculas de alimento o incluso de clulas completas, hacia afuera o adentro de una clula. Esto implica un gasto de energa por parte de la clula y en ocasiones conlleva tambin la fusin de membranas. En la endocitosis, la clula incorpora materiales hacia su interior. En los sistemas biolgicos operan varios mecanismos endocitticos. Por ejemplo, en la fagocitosis (literalmente "ingesta de clulas"), la clula ingiere partculas slidas como bacterias o nutrientes. La fagocitosis es el mecanismo utilizado por protozoarios y leucocitos para ingerir partculas, incluso algunas tan grandes como una bacteria completa. Durante la ingestin, los pliegues de la membrana celular engloban a la partcula, que se ha unido a la superficie celular, y forman una vacuola alrededor de ella. Una vez que la membrana ha encerrado a la partcula en cuestin, se fusiona en el punto de contacto e ingresa en el citoplasma. Posteriormente la vacuola se fusiona con los lisosomas (que contienen enzimas hidrolticas), donde el material es ingerido y degradado. A veces tambin se degradan por este mecanismo organelas con fallas (una mitocondria, en el ejemplo), envolviendo la organela en una vescula formada con membranas del retculo endoplsmico; a este proceso se lo denomina autofagocitosis.

Tres rutas de degradacin en los lisosomas En otro tipo de endocitosis, llamada pinocitosis ("bebido de clulas"), la clula incorpora materiales disueltos. Algunos pliegues de la membrana plasmtica engloban gotas de lquido, las cuales emergen en el citoplasma celular en forma de pequeas vesculas. El contenido lquido de estas vesculas se libera lentamente en el citoplasma celular y las vesculas van disminuyendo poco a poco de tamao, hasta el punto en que parecen desvanecerse.

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En un tercer tipo de endocitosis, llamado endocitosis mediada por receptor, algunas protenas especficas de determinadas partculas se unen a protenas receptoras, localizadas en la membrana plasmtica de la clula. Luego, las molculas ligadas al receptor emigran hacia las depresiones revestidas, que son regiones de la superficie citoplsmica de la membrana recubiertas con estructuras en forma de cepillo (protenas denominadas clatrinas). Estas regiones forman vesculas recubiertas mediante un proceso de endocitosis; su cubierta consta de protenas que momentneamente forman una estructura en forma de cesto alrededor de ellas. Algunos segundos despus, las vesculas son liberadas dentro del citoplasma; sin embargo, el recubrimiento se separa de ellas, dejando a las vesculas libres en l. En seguida, las vesculas se fusionan con otras vesculas semejantes y forman endosomas, vesculas ms grandes que transportan materiales libres, que no estn unidos a los receptores de membrana. Los endosomas forman dos tipos de vesculas: unas contienen receptores que pueden regresar a la membrana; otras, que contienen las partculas ingeridas, se fusionan con los lisosomas y despus son procesadas por la clula.

Endocitosis mediada por receptores La endocitosis mediada por receptores es un proceso importante: por su medio, las clulas animales incorporan hacia su interior el colesterol del torrente circulatorio. Gran parte del mecanismo de esta variedad de endocitosis fue detallada en estudios del receptor de lipoprotenas de baja densidad (LDL, low density lipoproteins). El LDL est constituido por protena flanqueada por molculas de fosfolpidos y colesterol; en el centro hay un acmulo de molculas de colesterol esterificado con cidos grasos de cadena larga. Las partculas de protena de baja densidad (LDL) se unen a protenas receptoras especficas en la membrana plasmtica. Los complejos receptores de LDL se mueven a lo largo de la superficie y se agrupan en la regin de placas recubiertas con clatrina de la membrana plasmtica. La endocitosis de tales placas recubiertas da por resultado la formacin de vesculas recubiertas en el citoplasma celular. Algunos segundos despus el recubrimiento de clatrina se elimina y las vesculas se fusionan con otras similares hasta formarse grandes vesculas (endosomas jvenes early endosomes). En estas estructuras, los receptores y las partculas de LDL se disocian, separan y dirigen hacia diferentes

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regiones de la vescula. A partir de los endosomas se forman nuevas vesculas. Las vesculas que contienen los receptores se desplazan hacia la superficie y se fusionan con la membrana plasmtica, en la cual los receptores son reciclados. Las vesculas que contienen partculas de LDL se fusionan con los lisosomas. Finalmente el colesterol se libera por medio de diversas enzimas hidrolticas: slo entonces puede utilizarlo la clula. Las personas con incapacidad hereditaria para la produccin de receptores de membrana para el LDL (puede faltar el gen o fabricar un receptor defectuoso, incapaz de unirse a la cubierta de clatrinas) son propensas a arterioesclerosis prematura y a sufrir ataques cardacos. El reciclaje del receptor de LDL a la membrana plasmtica a travs de la formacin de vesculas ilustra un problema comn a todas las clulas que emplean los mecanismos de endocitosis y exocitosis. En las clulas que secretan sustancias en forma continua, una porcin equivalente de membrana debe incorporarse al interior de la clula por cada vescula que se fusiona con la membrana plasmtica; de no ocurrir as, la superficie de la clula estara en expansin constante, aunque el crecimiento de la clula est limitado. Existe una situacin similar para las clulas que realizan endocitosis. Los macrfagos, por ejemplo, incorporan en forma de vesculas el equivalente del total de su volumen en cerca de 30 minutos, y requieren un reciclamiento similar para que las clulas mantengan su rea de superficie y su volumen.

Transporte vesicular selectivo y no selectivo en clulas no polarizadas

En la exocitosis una clula expulsa productos de desecho o productos especficos de secrecin (como hormonas), mediante la fusin de una vescula con la membrana plasmtica de la clula. La exocitosis consiste en la fusin de la membrana de la vescula secretora con la membrana plasmtica. Este es tambin un mecanismo primario de crecimiento de la membrana plasmtica. La secrecin puede ser constitutiva, como cierto tipo de protenas que son regularmente secretadas por la clula, o ser una secrecin regulada, cuando es necesario que una sustancia externa (una seal, como una hormona o un neurotranmisor) desencadene un proceso (transduccin de seal) que finaliza con la secrecin de una sustancia producida por la clula que es requerida en el medio extracelular. BIBLIOGRAFIA

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PARTE EXPERIMENTAL
OBJETIVOS GENERALES 1) Observar, relacionar y sacar conclusiones de los fenmenos relacionados con las membranas biolgicas. 2) Apreciar la aplicacin del uso de distintos modelos experimentales que se utilizan en el laboratorio para explicar los fenmenos naturales. PROTOCOLO EXPERIMENTAL Se utilizar una membrana biolgica obtenida de huevos de gallina. Lavar los huevos con cepillo y agua destilada. Colocarlos con cscara en cido actico al 4% durante 1 da. Lavarlos con agua destilada hasta que no queden restos calcreos. Perforar la membrana externa con un alfiler y descartar el interior. Volver a lavar con agua destilada. I. DIALISIS Objetivos Especficos 1) Analizar las razones por las cuales algunos solutos puedan atravesar las membranas y otros no. Relacionar estos conceptos con los mecanismos que se suceden en los seres vivos. 2) Averiguar qu aplicaciones tienen estos fenmenos en el campo de la salud. Desarrollo de la experiencia a) Efectuar la reaccin de identificacin de cloruros y la reaccin de Biuret en plasma sanguneo y agua destilada (reacciones de control correspondientes a tiempo = 0 min). b) Colocar en el dializador 5 ml de plasma sanguneo y sumergirlo en un vaso de precipitado con agua destilada, igualar los niveles de ambos recipientes y dejar media hora. c) Pasado ese tiempo comprobar qu compuestos han difundido, efectuando las reacciones de identificacin de cloruros y reaccin de Biuret en el agua del vaso de precipitado (tiempo = 30 min). Analizar los resultados y completar el siguiente cuadro.
Vaso de precipitado Cloruros Biuret Tiempo 0 min Tiempo 30 min Dializador Cloruros Biuret

Identificacin de cloruros: a 1 ml de muestra se agregan 3 gotas de HNO3 concentrado y 3 gotas de AgNO3 al 10%. La aparicin de un precipitado blanco de cloruro de plata indica reaccin positiva. Reaccin del biuret: a 0,5 ml de muestra agregar 0,5 ml de NaOH al 10% y gotas de solucin de CuSO4 al 1%. Una coloracin azul violcea indica la presencia de al menos tres uniones peptdicas formndose un complejo de coordinacin entre el Cu++ y los electrones libres de los tomos de nitrgeno de las uniones peptdicas. Esto seala reaccin positiva

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Esquema del dializador

membrana de permeabilidad selectiva plasma sanguneo agua destilada

II. OSMOSIS. Objetivos Especficos 1) Observar el cambio de volumen que se verifica en los modelos empleados para las experiencias en el estado inicial con respecto al estado final de las mismas. 2) Determinar la direccin del movimiento de las molculas de solvente de un compartimiento a otro y los factores que contribuyen a ello. 3) Relacionar estos conceptos con ejemplos de organismos vivos en sus correspondientes hbitats.

Esquema del Osmmetro Manmetro

Solucin saturada de sacarosa

Agua destilada

Membrana de permeabilidad selectiva

Desarrollo de la Experiencia I.

a) Colocar en el osmmetro 5 mililitros de solucin saturada de sacarosa, y en el vaso de precipitado, agua destilada. b) Adaptar el manmetro, al que previamente se le introduce en su tubo capilar una gota de solucin acuosa al 1% de rojo neutro (u otro colorante) en la parte superior del osmmetro. c) Introducir el osmmetro en el vaso e igualar los niveles interno y externo de lquido. d) Tapar la tubuladura lateral y dejar una hora, para luego observar y analizar los resultados.

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a) b) c) d)

Desarrollo de la experiencia II.

Cortar una remolacha en fetas de 4 cm de largo, 2 cm de ancho y 4 mm de espesor, aproximadamente. Tomar una feta entre el ndice y el pulgar, e intentar doblarla Qu ocurre?. Medir el largo y el ancho de la feta y anotar en un papel. Colocar la feta en una solucin de ClNa al 15% durante 15 min. Retirarla, medir nuevamente sus dimensiones y tratar de doblarla. Se observa algn cambio en las mismas con respecto al punto b) y c)?. Extraiga conclusiones. e) Colocar en agua destilada, durante 15 min, la feta de remolacha tratada con solucin salina. Retirarla, medir sus dimensiones y tratar de doblarla. Se observa algn cambio en las mismas con respecto al punto d)?. Justificar lo observado. f) Hervir en agua otras dos fetas de remolacha durante 5 min. Concluido el tiempo, retirarlas y tratar de doblarlas. Qu ocurre? g) Poner en agua destilada una de las fetas hervidas y la otra en la solucin salina, durante 15 min. Registrar lo observado y sacar conclusiones. III. TRANSPORTE ACTIVO: Exclusin de azul Tripn Objetivos Especficos 1) 2) a) b) c) d) Describir a qu se deben las diferencias de tincin que se observa en el preparado microscpico y relacionar la importancia de este tipo de transporte en los sistemas vivos. Relacionar esta experiencia con el TP del mdulo 4. Desarrollo de la experiencia Tomar un portaobjetos y desinfectarlo con alcohol. Raspar suavemente la mucosa bucal . Extender la muestra con la ayuda de otro portaobjetos. Colocar un cubreobjetos sobre la muestra y agregar por capilaridad una gota de solucin de azul Tripn al 0.4%. Observar , esquematizar y extraer conclusiones.

Aumento:

IV. COMPORTAMIENTO DE CELULAS ANIMALES Y VEGETALES FRENTE A SOLUCIONES DE DISTINTA TONICIDAD Objetivos Especficos 1) 2) Visualizar los cambios de tamao y forma producidos en clulas sometidas a soluciones de distinta tonicidad. Relacionar estas observaciones con el fenmeno fsico que provoca estas modificaciones.

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Desarrollo de las experiencias IV. A. Comportamiento de una suspensin de glbulos rojos en medios de igual o menor tonicidad Para el organismo humano y en general para los mamferos, la presin osmtica de sus clulas es equivalente a la de una solucin de NaCl 0,9%. Esta es por lo tanto una solucin isotnica para las clulas humanas. Experiencia con soluciones hipotnicas: Una solucin de NaCl hipotnica para las clulas humanas es aquella con una concentracin inferior al 0,9%. Para la experiencia rotular 3 tubos de centrfuga: uno para la solucin 0,9% de NaCl, otro para la solucin 0,45% y otro para la solucin 0,22% de NaCl. a) Solucin isotnica: colocar en el primer tubo 8 ml de NaCl 0,9%. b) Solucin hipotnica 0,45%: colocar en el segundo tubo 4 ml de NaCl 0,9% ms 4 ml de agua destilada. c) Solucin hipotnica 0,22%: colocar en el tercer tubo 2 ml de NaCl 0,9% ms 6 ml de agua destilada. d) Agregar a cada tubo una gota de sangre oxalatada (o preferiblemente glbulos rojos lavados). Dejar en reposo una hora. e) Centrifugar 10 min a 5000 rpm. f) Observar , esquematizar y analizar los resultados. IV.B. Comportamiento de clulas vegetales frente a soluciones hipertnicas: plasmlisis a) Con un bistur se efecta una incisin en el pecolo de la hoja de remolacha (Beta vulgaris), se extrae un trozo muy delgado de epidermis y, con pinza, se lo deposita sobre un portaobjetos y se coloca un cubreobjetos. b) Observar al microscopio. Esquematizar la observacin. c) Por capilaridad agregar una gota de una solucin hipertnica para esas clulas: ClNa al 6% o NO3K al 10%. d) Observar al microscopio. Esquematizar la observacin. Comparar ambas observaciones e interpretar el fenmeno producido.

Aumento:

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CUESTIONARIO
1) 2) 3) Establezca una relacin entre las propiedades anfipticas de los fosfolpidos y el surgimiento de las primeras membranas celulares en pocas tempranas de la evolucin. Indique qu tipo de interaccin mantiene unidas a las molculas de los fosfolpidos en las membranas. Marque las dos nicas opciones correctas: a) Las membranas biolgicas estn compuestas por lpidos anfipticos y protenas , organizadas en una bicapa. b) Los fosfolpidos que constituyen las membranas estn compuestos siempre por cidos grasos no saturados. c) Los fosfolpidos de membrana estn orientados de forma tal que sus cabezas polares se encuentran en el interior de la bicapa. d) Las membranas poseen poseen estructura de bicapa lipdica, con protenas includas en sta, lo cual le confiere rigidez absoluta a la membrana. e) El colesterol es el esterol mayoritario en membranas plasmnticas de clulas animales; en membranas plasmticas de otras clulas eucariotas (como vegetales u hongos), en cambio, se encuentran otros esteroles. f) La composicin lipdica de todas las membranas biolgicas es la misma. g) La composicin proteica de todas las membranas biolgicas es la misma. h) La composicin proteica y lipdica de todas las membranas biolgicas es la misma. i) Los cidos grasos constituyentes de los fosfolpidos de membrana son siempre saturados El estudio de las membranas se ha efectuado en gran parte utilizando como sistema de estudio los eritrocitos (glbulos rojos). Por qu razn cree usted que se ha elegido este sistema biolgico para estudio de membranas, y no por ejemplo: - procariotes - clulas hepticas - clulas vegetales - virus? Explique: a) Qu funciones cumplen las protenas de membrana plasmtica?. b) Cmo se diferencia una protena integral de una perifrica?. c) Todas las protenas integrales son transmembranares?. d) Los residuos hidrofficos en las protenas transmembrana se encontrarn hacia el exterior o el interior de la protena?. Responda si los siguientes enunciados son Verdaderos o Falsos. a) La difusin es el mecanismo por el cual las molculas de solvente se trasladan desde donde se encuentran en mayor concentracin hacia donde estn en menor concentracin. b) La difusin de solutos a travs de una membrana se denomina smosis. c) En la difusin simple las molculas de soluto se desplazan a favor de su gradiente de concentracin. d) El agua atraviesa las membranas por el mecanismo de smosis y se desplaza en contra del gradiente de concentracin de solutos. e) La smosis es un caso particular de difusin.

4)

5)

6)

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7)

a) Defina dilisis y osmsis. b) Defina presin osmtica, y explique de qu depende. c) Se coloca una membrana separando dos compartimientos A y B. Esta membrana permite el paso de sales y de agua, pero no de macromolculas. Explique qu fenmenos ocurrirn si en cada compartimiento se agrega. Compartimiento A H2O + ClNa H2O + Protenas H2O + ClNa + Protenas Comportamiento B H2O H2O H2O Fenmenos

8) 9)

Explique por qu el O2 atraviesa fcilmente una membrana biolgica, y en cambio los H + no, pese a que los protones son ms pequeos que el O2. De dnde proviene la energa para transportar glucosa al interior de la clula en contra de su gradiente de concentracin, en el caso del cotransporte con el Na + ?.

10) a)- Cul es la diferencia entre transporte pasivo y activo?. b)- Indique cul de los dos esquemas siguientes representa un fenmeno de transporte activo

OXOX OXOX OXOX OXOX OXOX OXOX

XO XO XO O XO

OX XO OX XO OX XO

OX XO OX XO OX XO

OXOX OXOX OXOX OXOX OXOX OXOX

XO XO X O X O

OXOX XOX OXOXX O OXO OXOXX OXO OXOXX OX