UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLN

CAMPO 1 Carrera: Ingeniera Qumica

Asignatura: Qumica Analtica III. LAB

1 Revisin de Proyecto Cuantificacin de alcoholes superiores en diversas bebidas alcohlicas mediante cromatografa de gases

INTRODUCCIN La cromatografa es un mtodo de separacin de diferentes componentes de una muestra, este mtodo logra la separacin de los mismos a travs del paso de una muestra por una fase estacionaria con la ayuda de la fase mvil, cada componente de la muestra tiene propiedades particulares que permitir su interaccin en forma diferente entre la fase estacionaria y mvil, de esta forma cada componente se retrasa en forma particular y si el caudal, las caracterstica de la fase estacionaria y mvil y la longitud de la columna son las adecuadas se lograra la separacin completa de todos los componentes de la muestra. El objetivo principal de un estudio cromatografa es lograr la separacin de todos los componentes en una muestra, para ello es necesario jugar con una serie de factores cromatograficos, es por ello que es necesario conocer como estn relacionados los diferentes factores experimentales con las ecuaciones cromatograficas.

En esta prctica se pretende disear y realizar la experimentacin necesaria que permita cuantificar el contenido de alcoholes superiores en una 4 muestras de bebidas alcohlicas, a partir de una cromatografa de gases por una curva de calibracin por estndar interno, haciendo la comparacin en base a la Norma Correspondiente para hacer la comparacin. Las Normas Oficiales Mexicanas, en las cuales se refiere a la Denominacin de cualquier bebida alcohlica y establecen las caractersticas y especificaciones que deben cumplir todos los integrantes de la cadena productiva, industrial y comercial de las bebidas alcohlicas, son las siguientes: NMX-V-004-NORMEX-2005, Bebidas alcohlicas-Determinacin de furfural-Mtodos de ensayo (prueba). Declaratoria de vigencia publicada en el Diario Oficial de la Federacin el 23 de junio de 2005. NMX-V-005-NORMEX-2005, Bebidas alcohlicas-Determinacin de aldehdos, steres, metanol y alcoholes superiores-Mtodos de ensayo (prueba). Declaratoria de vigencia publicada en el Diario Oficial de la Federacin el 23 de junio de 2005. NMX-V-013-NORMEX-2005, Bebidas alcohlicas-Determinacin del contenido alcohlico (por ciento de alcohol en volumen a 293 K) (20C) (% Alc. Vol.)-Mtodos de ensayo (prueba). Declaratoria de vigencia publicada en el Diario Oficial de la Federacin el 23 de junio de 2005. NMX-V-049-NORMEX-2004, Bebidas alcohlicas-Bebidas alcohlicas que contienen Tequila-Denominacin, etiquetado y especificaciones. Declaratoria de vigencia publicada en el Diario Oficial de la Federacin el 21 de mayo de 2004.

En este proyecto se pretende analizar las siguientes bebidas alcohlicas: Bebida Alcohlica Destilada: RON Matusalem 40% Alc. Vol. Tequila Reposado: Jos Cuervo Tradicional. 38% Alc. Vol. Mezcal: Amores. 37% Alc. Vol Don Luis Merlot. 13% Alc. Vol

OBJETIVOS Separar y cuantificar alcoholes superiores (Alcoholes de Peso Molecular superior al alcohol etlico) Alcohol Amilico; en 4 clasificaciones de bebidas alcohlicas a travs de una cromatografa de gases por medio de una curva de calibracin por estndar interno. JUSTIFICACION QUIMICA La cromatografa comprende un conjunto importante y diversos de mtodos que permite a los cientficos separar componentes estrechamente relacionados en mezclas complejas, lo que en muchas ocasiones resulta imposible por otros medios. Se pueden separar molculas en funcin de sus cargas, tamaos y masas moleculares. Tambin a travs de la polaridad de sus enlaces, sus potenciales redox, etc. La caracterstica que distingue a la cromatografa de la mayora de los mtodos fsicos y qumicos de separacin, es que se ponen en contacto dos fases mutuamente inmiscibles. Una fase es estacionaria y la otra mvil. Una muestra que se introduce en la fase mvil es transportada a lo largo de la columna (colector) que contiene una fase estacionaria distribuida. Las especies de la muestra experimentan interacciones repetidas (repartos) entre la fase mvil y la fase estacionaria. La cromatografa comprende un grupo de mtodos que permiten separar, identificar y cuantificar compuestos presentes en mezclas complejas que no podran separarse de otra manera. Las separaciones se basan en la diferencia de velocidad de migracin de los componentes a travs del sistema. Cuando la separacin involucra predominantemente un reparto simple entre dos fases lquidas inmiscibles, una estacionaria y la otra mvil, el proceso se llama cromatografa lquido-lquido (LLC). Cuando en la aptitud retentiva de la fase estacionaria intervienen principalmente fuerzas fsicas de superficie, el proceso se denomina cromatografa lquido-slido (LSC). En cromatografa de gases la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna cromatogrfica. La elucin se produce por el flujo de una fase mvil de un gas inerte. En sta la fase mvil no interacciona con las molculas del analito, su nica funcin es la de transportar al analito a travs de la columna. La cromatografa gas lquido se basa en la distribucin del analito entre una fase mvil gaseosa y una fase lquida inmovilizada sobre la superficie de un slido inerte.

Volumen de ruptura: Es el volumen de aire contaminado que puede pasarse a travs de la primera seccin del tubo de muestreo, antes de que la concentracin de contaminante en el aire eluyente alcance el 5% de la concentracin de entrada Sesgo: Es la desviacin o diferencia de los resultados obtenidos aplicando un procedimiento de medida con respecto al valor aceptado como referencia Precisin: Es el grado de concordancia entre los resultados obtenidos aplicando el mtodo repetidas veces bajo condiciones determinadas.

Para lograr un anlisis cuantitativo de los componentes separados de una muestra se realizara con el siguiente mtodo: Mtodo del estndar interno

Este mtodo es conocido como calibracin relativa o indirecta. Para ello, relacin de masas conocidas de un patrn de la muestra y de un estndar deber ser preparadas e inyectadas al cromatgrafo para luego determinar las relaciones de rea. Estas relaciones de reas son graficadas en funcin de la relaciones de masa, como se muestra en la figura:

De esta curva se obtiene la ecuacin lineal y = mx. Entonces se adiciona una masa conocida del estndar interno a una masa conocida de muestra y esta mezcla se inyecta al cromatgrafo. Del cromatgrama se obtienen las reas de analito y del estndar y luego con la ecuacin de calibracin y conociendo la masa del estndar se puede obtener la masa del analito en la muestra.

A partir de esta masa se puede calcular el % de este componente en la muestra cmo sigue:

La ventaja de este mtodo es que es independiente del volumen de inyeccin de muestra lo que es sumamente importante para aquellas tcnicas cromatografas que utilizan un mtodo de introduccin de muestra no automatizado como por ejemplo el uso de jeringas de inyeccin en cromatografa gaseosa. Requerimientos para un buen estndar interno: Debe ser resuelto de los otros picos Debe eluir cercano al pico de inters Debe usarse una concentracin similar al pico de pico de inters. Debe ser de las mismas caractersticas estructurales.

MATERIAL, REACTIVOS Y SOLUCIONES MATERIAL 2 matraces aforados 250mL Pipeta volumtrica de 1, 2, 3, 4 y 5 mL 1 piseta con agua destilada 1 micro-pipeta 1 Propipeta 1 Probeta EQUIPO Cromatgrafo de gases Soluciones n-Butanol n-Amilico n-Hexanol

A partir de lo proporcionado en la etiqueta para cada bebida alcohlica tenemos que hay un porcentaje expresado en Alcohol Volumen, esto quiere decir alcoholes de bajo peso molecular como Metanol y Etanol; como se analizara alcoholes superiores (esto quiere decir alcoholes de Peso molecular superiores al alcohol etlico) Como alcohol Amlico; el resto del porcentaje se tomara como referencia para alcohol superior. 1ra Muestra: - RON Matusalem 40% Alc. Vol 60% Alcohol amlico Por lo tanto tenemos: RON Matusalem 100 mL Alcohol amilico 60.0 mL

Preparacin de soluciones: Solucin problema: Se tomara 60.0 mL de la muestra problema del RON Matusalem sin hacer ninguna dilucin. Por lo tanto el % V/V es de 60%V/V. A partir de este dato se prepararan los sistemas, de tal modo que la concentracin de mi problema quede dentro de mi curva de calibracin. Las concentraciones esperadas de mis soluciones std son las siguientes que va ir de un rango de 35 75%V/V, que se tomaran los mililitros directamente de nuestro reactivo analtico:

Tabla 1. Preparacin de los sistemas para la cuantificacin de Alcoholes Superiores (Alcohol Amilico) por el mtodo de curva de calibracin Alcohol n-butanol C4H8O std (mL) 35.0 45.0 55.0 65.0 75.0 ___________ Alcohol n-amilico C5H8O Std (mL) 35.0 45 55 65 75 ___________ Alcohol nHexanol C6H8O std (mL) 10 10 10 10 10 ___________ Problema (ml) Aforo (H2O) (ml)

SISTEMA

1 2 3 4 5 Problema Alcohol Amlico

0 0 0 0 0 60.0

100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0

Inyectar cada uno de los sistemas bajo las condiciones de corrida del apartado C nmero 3 (gradiente del horno). Tabla 2. Resultados obtenidos de los cromatogramas de la determinacin alcoholamilicopor el mtodo de curva de calibracin SISTEMA 1 Conc. Alcohol AREA de Conc. Alcohol AREA de Butanol Alcohol Butanol Amilico Alcohol Amilico STD (mg/mL) STD (mg/mL)

1 2 3 4 5 AREA de Conc. Alcohol AREA de Conc. Alcohol

Alcohol Butanol Butanol Prob (mg/mL) Prob. Alcohol Butanol Prob. Alcohol Amilico

Alcohol AmilicoProb

Amilico (mg/mL)

2da Muestra: Tequila Reposado: Jos Cuervo Tradicional. 38% Alc. Vol. 62% Alcohol amlico Por lo tanto tenemos: Tequila Reposado Jose Cuervo 100 mL Alcohol amilico 62.0 mL

Preparacin de soluciones: Solucin problema: Se tomara 62.0 mL de la muestra problema del Tequila Reposado Jose Cuervo sin hacer ninguna dilucin. Por lo tanto el % V/V es de 62 %V/V. A partir de este dato se prepararan los sistemas, de tal modo que la concentracin de mi problema quede dentro de mi curva de calibracin. Las concentraciones esperadas de mis soluciones std son las siguientes que va ir de un rango de 35 75 %V/V, que se tomaran los mililitros directamente de nuestro reactivo analtico:

Tabla 3. Preparacin de los sistemas para la cuantificacin de Alcoholes Superiores (Alcohol Amilico) por el mtodo de curva de calibracin Alcohol n-butanol C4H8O std (mL) 35.0 45.0 55.0 65.0 75.0 ___________ Alcohol n-amilico C5H8O Std (mL) 35.0 45 55 65 75 ___________ Alcohol nHexanol C6H8O std (mL) 10 10 10 10 10 ___________ Problema (ml) Aforo (H2O) (ml)

SISTEMA

1 2 3 4 5 Problema Alcohol Amlico

0 0 0 0 0 62.0

100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0

Inyectar cada uno de los sistemas bajo las condiciones de corrida del apartado C nmero 3 (gradiente del horno). Tabla 4. Resultados obtenidos de los cromatogramas de la determinacin alcohol amilico por el mtodo de curva de calibracin SISTEMA 1 Conc. Alcohol AREA de Conc. Alcohol AREA de Butanol Alcohol Butanol Amilico Alcohol Amilico STD (mg/mL) STD (mg/mL)

1 2 3 4 5 AREA de Conc. Alcohol AREA de Conc. Alcohol Alcohol Butanol Butanol Alcohol Amilico Prob (mg/mL) AmilicoProb (mg/mL) Prob. Alcohol Butanol Prob. Alcohol Amilico 3er Muestra: Mezcal: Amores. 37% Alc. Vol

63% Alcohol amlico Por lo tanto tenemos: Mezcal Amores 100 mL Alcohol amilico 63.0 mL

Preparacin de soluciones: Solucin problema: Se tomara 63.0 mL de la muestra problema del Mezcal Amores sin hacer ninguna dilucin. Por lo tanto el % V/V es de 63 %V/V. A partir de este dato se prepararan los sistemas, de tal modo que la concentracin de mi problema quede dentro de mi curva de calibracin. Las concentraciones esperadas de mis soluciones std son las siguientes que va ir de un rango de 35 75 %V/V, que se tomaran los mililitros directamente de nuestro reactivo analtico:

Tabla 5. Preparacin de los sistemas para la cuantificacin de Alcoholes Superiores (Alcohol Amilico) por el mtodo de curva de calibracin Alcohol n-butanol C4H8O std Alcohol n-amilico C5H8O Std Alcohol nHexanol C6H8O Problema (ml) Aforo (H2O) (ml)

SISTEMA

(mL) 1 2 3 4 5 Problema Alcohol Amlico 35.0 45.0 55.0 65.0 75.0 ___________

(mL) 35.0 45 55 65 75 ___________

std (mL) 10 10 10 10 10 ___________

0 0 0 0 0 63.0

100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0

Inyectar cada uno de los sistemas bajo las condiciones de corrida del apartado C nmero 3 (gradiente del horno). Tabla 6. Resultados obtenidos de los cromatogramas de la determinacin alcohol amilico por el mtodo de curva de calibracin SISTEMA 1 Conc. Alcohol AREA de Conc. Alcohol AREA de Butanol Alcohol Butanol Amilico Alcohol Amilico STD (mg/mL) STD (mg/mL)

1 2 3 4 5 AREA de Conc. Alcohol AREA de Conc. Alcohol Alcohol Butanol Butanol Alcohol Amilico Prob (mg/mL) AmilicoProb (mg/mL) Prob. Alcohol Butanol Prob. Alcohol Amilico 4er Muestra: Vino: Don Luis Merlot. 13% Alc. Vol

87% Alcohol amlico Por lo tanto tenemos: Vino Don Luis Merlot 100 mL Alcohol amilico 87.0 mL

Preparacin de soluciones:

Solucin problema: Se tomara 87.0 mL de la muestra problema del Mezcal Amores sin hacer ninguna dilucin. Por lo tanto el % V/V es de 87 %V/V. A partir de este dato se prepararan los sistemas, de tal modo que la concentracin de mi problema quede dentro de mi curva de calibracin. Las concentraciones esperadas de mis soluciones std son las siguientes que va ir de un rango de 50 90 %V/V, que se tomaran los mililitros directamente de nuestro reactivo analtico:

Tabla 7. Preparacin de los sistemas para la cuantificacin de Alcoholes Superiores (Alcohol Amilico) por el mtodo de curva de calibracin Alcohol n-butanol C4H8O std (mL) 35.0 45.0 55.0 65.0 75.0 ___________ Alcohol n-amilico C5H8O Std (mL) 35.0 45 55 65 75 ___________ Alcohol nHexanol C6H8O std (mL) 10 10 10 10 10 ___________ Problema (ml) Aforo (H2O) (ml)

SISTEMA

1 2 3 4 5 Problema Alcohol Amlico

0 0 0 0 0 63.0

100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0

Inyectar cada uno de los sistemas bajo las condiciones de corrida del apartado C nmero 3 (gradiente del horno). Tabla 8. Resultados obtenidos de los cromatogramas de la determinacin alcohol amilico por el mtodo de curva de calibracin SISTEMA 1 Conc. Alcohol AREA de Conc. Alcohol AREA de Butanol Alcohol Butanol Amilico Alcohol Amilico STD (mg/mL) STD (mg/mL)

1 2 3 4 5 AREA de Conc. Alcohol AREA de Conc. Alcohol Alcohol Butanol Butanol Alcohol Amilico Prob (mg/mL) AmilicoProb (mg/mL) Prob. Alcohol Butanol Prob. Alcohol Amilico

METODOLOGIA CONDICIONES DEL EQUIPO Y DEL SOFTWARE El equipo a utilizar es CG 3800. Abrir los gases del equipo (llave del tanque) y ajustar la presin a 40 psi para H2, 60 psi para Aire y 80 psi para N2. Abrir los gases de las vlvulas de la parte frontal del equipo. Encender la computadora y seleccionar el icono STAR (aparecer la ventana del programa). Entrar en la opcin de System Control. Subir la palanca del interruptor de la caja gris (colocado en la parte inferior de la mesa). Encender el interruptor de la parte superior trasera del equipo. En el software del equipo el icono al centro deber cambiar a azul. Entonces se puede seleccionar el mtodo 8 en el panel frontal del equipo, seleccionando mtodo y activar el nmero 8. En el software ir a Instrumenty seleccionar CG 3800. Aparecern 4 pantallas, en caso de que NO aparezcan ir a Instrumenty seleccionar show modules.

 Ir a File, seleccionar methody entrar a la opcin activate, seleccionar el mtodo isot100 (c:\AnaV\isot100). Esperar a que los indicadores de cada parmetro pasen de rojo a verde. Del panel frontal del equipo ir a GC control y seleccionar detector y apretar encender (vera usted que ya tiene cambio en la seal del detector). Del men principal seleccione inject, apriete OK y ponga el nombre de la muestra, el subdirectorio donde estar, el nombre del archivo como se salvaran los datos y en browsebusque el archivo isot100. El mtodo tomar medio minuto en estabilizarse.

CONDICIONES DE LA CORRIDA Temperatura del horno de la columna isotrmico 60C; primero lo haremos a esta temperatura que es la mnima temperatura que registra el cromatografo, despus de acuerdo a los picos del cromatograma se impondr una rampa de temperaturas. Temperatura del inyector 200C Temperatura del detector 230C

REFERENCIAS Anlisis Qumico Cuantitativo. Daniel C. Harris. Editorial Revert S.A. 2001, 2 edicin. www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/cromatografia_de_gases.pdf www.redalyc.org/articulo.oa?id=47547312