MTODOS ESPECTROSCPICOS DE ANLISIS Se basan en la medicin de la radiacin electromagntica emitida o absorbida por la materia.

Emisin: utilizan la radiacin emitida por una sustancia que ha sido excitada por una energa trmica, elctrica o electromagntica, al pasar al estado fundamental. Esta radiacin es caracterstica del material o compuesto emisor. Absorcin: se basan en la disminucin de potencia de una radiacin electromagntica que ha interaccionado con la materia. Miden la relacin entre intensidad final inicial mediante un parmetro denominado Transmitancia. Ambos trnsitos se realizan entre niveles que estn cuantizados. Para pasar de un nivel a otro tiene que haber una variacin de energa cuatizada. Para que haya interaccin entre la radiacin electromagntica y la materia es necesario: que la energa asociada a esa radiacin electromagntica satisfaga a la necesidad de energa de ese salto. tiene que existir una probabilidad de transmisin entre niveles. Son dos condiciones necesarias para darse un mtodo espectroscpico. PROPIEDADES DE LA RADIACIN ELECTROMAGNTICA La radiacin electromagntica es una forma de energa que se transmite en el espacio (v = 3108 m/s) sin necesidad de medio ni apoyo para transmitirse, y no va acompaada de materia. La naturaleza de la radiacin electromagntica es dual, por una parte tiene naturaleza ondulatoria y por otro lado tiene naturaleza corpuscular. NATURALEZA ONDULATORIA Nos dice que la radiacin electromagntica es un campo elctrico que se propaga por el espacio en forma de tren de ondas al que va asociado otro campo magntico con la misma longitud de onda, perpendiculares entre s y perpendicular a la direccin de propagacin. Los parmetros que caracterizan a esta onda son: Longitud de onda () Frecuencia ( ) Amplitud (A) Velocidad (C)

 Longitud de onda (); es la distancia que hay entre dos puntos mximos o mnimos consecutivos, depende del medio en el que se propaga, se suele medir en nm. Frecuencia ( ); es el nmero de oscilaciones del campo por segundo (sg1) Amplitud (A); es la longitud del vector elctrico en el mximo o mnimo de onda. Velocidad; longitud que recorre la onda en unidad de tiempo. Se representa por la letra C.

T es el periodo que tarda la onda en recorre una longitud de onda.

TEORA CORPUSCULAR La radiacin electromagntica es un flujo de partculas discretas a las que est asociada una energa en forma de paquetes denominados cuantos o fotones de energa cuantificada.

(h = 6,231034 Julios sg)

La interaccin de las ondas electromagnticas con la materia requiere que sea considerada como cuantos de energa. COMPONENTES DE LOS INSTRUMENTOS EMPLEADOS EN ESPECTROSCOPA PTICA Fuente estable de energa radiante. 2

Selector de longitud de onda que asla una regin limitada del espectro para hacer la medicin. Uno o ms recipientes para las muestras Detector de radiacin (o transductor) que convierte la energa radiante en una seal medible. Sistema que procesa la seal y la visualiza en una escala de medida. FUENTE Hay dos tipos: Fuente Continua, emiten de forma continua una regin del espectro. La intensidad de esa radiacin vara de forma gradual con la longitud de onda. Fuente de Lneas, emiten un nmero restringido de bandas de radiacin con un intervalo muy reducido de longitud de onda. Caractersticas Emitir una radiacin reproducible y regulada para proporcionar estabilidad. La radiacin tiene que ser intensa, con una potencia suficiente para facilitar su deteccin. Tiene que ser accesible y fcil de mantener. Para la regin ultravioleta se utilizan lmparas de de hidrgeno o deuterio para obtener radiacin de entre 380nm y 160nm. Para la regin ultravioleta visible e infrarrojo cercano utilizamos una lmpara de wolframio y yodo. Para la zona infrarrojo se utilizan lmparas Globar o Nernst. La fuente Globar es una varilla de carburo de slice a temperatura de 1500C para dar radiacin de una longitud de onda de 1 40m. La de Nernst son xidos de circonio y de itrio a temperaturas elevadas, que dan una radiacin de entre 0,4 20m. SELECTORES Restringen la radiacin a una onda estrecha para que sea absorbida o emitida por la muestra, dan una mayor sensibilidad y selectividad del instrumento. Pueden ser de dos tipos: Filtros de Absorcin, vidrios coloreados, ms simples y ms resitentes. Monocromadores de red Prisma Ambos dispersan la radiacin en longitudes de onda individuales (concretas). RECIPIENTES

Son celdas o cubetas fabricadas con material que permite el paso de la radiacin en la regin espectral que nos interesa. Para la zona de infrarrojo cercano, visible y ultravioleta son de cuarzo o slice fundido. Para la regin visible e infrarrojo cercano tambin de vidrio. Para visible se puede utilizar de plstico (ms barato y resistente). Para infrarrojo se utilizan cubetas de cloruro sdico (frecuente). En la utilizacin donde las cubetas hay que tener en cuenta que las huellas dactilares, manchas de grasa o polvo en las paredes de la misma alteran las caractersticas de transmisin de la radiacin. Como precaucin no se deben desecar en estufa ni con papeles gruesos. Se limpian con papeles muy finos. DETECTORES Son dispositivos que indican la existencia de algn fenmeno fsico como puede ser temperatura, fase tienen que responder rpidamente a niveles bajos de energa en una amplia regin del espectro (cuanto ms amplio ms fiable). Pueden ser detectores de fotones y trmicos. Detectores de Fotones, se basan en la interaccin de la radiacin con la superficie reactiva para producir electrones. Se utilizan para la radiacin de ultravioleta visible e infrarrojo cercano. Detectores Trmicos, miden un aumento de temperatura de un material ennegrecido, situado en el recorrido del rayo, se utilizan para infrarrojo ESPECTROSCOPA DE ABSORCIN MOLECULAR Toda radiacin que se hace pasar a travs de una sustancia es absorbida a ciertas longitudes de onda caractersticas. La energa de la radiacin es transferida temporalmente a la molcula que esta en estado fundamental pasando esta a estado excitado, y como consecuencia disminuye la intensidad de la radiacin y obtenemos una radiacin atenuada. Los parmetros que se utilizan en espectroscopia de absorcin son: Transmitancia (T), relacin entre P0 y PF.

Mide la relacin entre potencias, la transmitancia es la fraccin de la radiacin incidente transmitida por la disolucin (normalmente las muestras estn en disolucin), se suele dar en tanto por ciento. Absorbancia (A), esta relacionada con la transmitancia mediante las frmulas:

La absorbancia tambin se relaciona con la concentracin, lo hace por la ley de Lambert Beer.

Donde: Absortividad (), Concentracin (C),

Camino ptico que recorre la radiacin o longitud de la cubeta (b), viene dado en cm. es caracterstica de cada sustancia para una determinada longitud de onda. Si es grande aumenta la sensibilidad (con igual concentracin de analito aumenta la absorbancia) Los mtodos espectroscpicos son mtodos comparativos y esto significa que antes de dar un resultado debemos hacer la recta de calibrado (con distintas concentraciones del analito, perfectamente conocidas), que relaciona la concentracin con la absorbancia. La pendiente de la recta de calibrado es cuando la concentracin es molar (mollit1). La recta de calibrado es una lnea que pasa por el origen (0,0). Para mezclas la absorbancia viene dada como las sumas de todas las absorbancias de los distintos analitos.

Es decir, las absorbancias son aditivas.

El requisito para poder hacer un espectroscopio para mezclas es que las curvas de absorcin de los analitos individuales no se acerquen demasiado y coincidan. Se puede permitir algo de superposicin parcial, pero cuanta mayor superposicin existan en las curvas, menos preciso ser el mtodo. Cuando hay mezcla se utilizan las longitudes de onda mximas de cada sustancia. Para longitud de onda (I)

Para longitud de onda (II)

Cuando hay una mezcla, la recta de calibrado se hace a dos longitudes de onda, para tener dos reacciones.

LIMITACIONES DE LA LEY DE LAMBERT BEER

DEBIDO A CAUSAS REALES Desviacin del comportamiento lineal, para disoluciones muy concentradas, ms de 102M la recta tendra una curvatura. Por tanto esta ley se lleva a cabo para concentraciones entre 106M y 102M, son disoluciones diluidas y por esto se dice que es una ley Lmite. EL INCUMPLIMIENTO DE LAS PREMISAS DE LA LEY. a. Las interacciones entre soluto y radiacin producidas por mecanismos distintos a la absorcin (dispersin de la luz, fluorescencia y emisin por resonancia). Producen una disminucin en la intensidad de la luz que se puede confundir en la medicin pudiendo considerarse como absorcin. b. Falta de monocromatismo, esta limitacin no es considerada siempre, si la radiacin utilizada no absorbe una regin del espectro en la que el absorbente (analito) presente grandes variaciones de absorbancia en funcin de la longitud de onda. En la regin si hay problema puesto que para esa longitud de onda la absorcin del analito es muy variable. En la regin no hay problema puesto que para esa longitud de onda la absorcin del analito no es muy variable Generalmente en las proximidades de la mxima absorbancia del analito no hay problema. Las mediciones de absorbancia se hacen las longitudes de onda que corresponden a los mximos de absorbancia, siempre que sea un pico ancho para que no haya variacin de absorbancia en ese intervalo. c. Interacciones entre los solutos absorbentes. Si tenemos una concentracin ms grande de lo habitual (permitida por la ley) de forma que entre los solutos hay choques, hace que cambien las condiciones energticas, por lo que la longitud de onda caracterstica vara para la absorcin. En disoluciones diluidas las interacciones entre los solutos no se dan, por eso la ley dice que se trabaje con disoluciones diluidas (hay casos en los que con disoluciones diluidas tambin se dan interacciones). d. Seccin no uniforme, la ley de Lambert Beer supone que todos los rayos atraviesan el mismo nmero de centros absorbentes.

En el caso del cuerpo rectangular todos atraviesan el mismo nmero, en el del cilindro en A atraviesan ms que en B. Por esta razn las cubetas suelen ser rectangulares o cuadradas, las circulares dan un cumplimento aproximado de la ley. ERRORES AL APLICAR LA LEY a. Errores Instrumentales, dentro de estos tenemos varios. Radiacin Parsita (o Directa), toda radiacin extraa que llega al detector sin pasar por la muestra, son el resultado de la dispersin y reflexin de las superficies pticas del instrumento, debido a imperfecciones por ralladuras o roturas. Reflexiones en la Cubeta, para evitarlas hay que limpiarlas con papel suave, y se debe trabajar con cubetas idnticas. Las desviaciones instrumentales son todas negativas, nos dan todas una absorcin menor de la real. b. Errores Qumicos Alteraciones del equilibrio de las reacciones que provocan una alteracin de la concentracin del absorbente (analito), pueden ser debidas al cambio de temperatura, fuerza inica Existencia de otros equilibrios qumicos, reacciones cido base, reacciones de precipitacin, reacciones de formacin de complejos Modifican la absorbancia del absorbente. Las reacciones de formacin de complejos pueden producir dispersin de la radiacin, tambin pueden modificar el color del absorbente. Debido a los efectos del disolvente, se trata de llevar a cabo las reacciones sin cambiar ni la composicin ni la concentracin de los componentes que forman parte del disolvente. Tambin hay que tener en cuenta las impurezas que se pueden introducir al analizar trazas. Impurezas de reactivos, se comprueban con un anlisis en blanco. c. Errores Personales Se dan en la utilizacin y cuidado de las cubetas, deben de estar correctamente limpias, sin huellas y sin ralladuras. Deben evitarse los cidos concentrados que puedan atacarlas, y se debe comprobar antes y despus de la medida que no tengan burbujas ni partculas no disueltas que pueden producir dispersin de la luz. Otro error puede producirse en el control de la temperatura y tiempo. La temperatura influye dependiendo de que reaccin sea. El tiempo se debe de controlar cuando tenemos reacciones que tardan un tiempo en producirse y al cabo de un tiempo decaen. Tambin hay que tener en cuenta el orden de adicin de los reactivos, porque puede influir en la obtencin de la absorbancia. ESPECTROFOTOMETRA MOLECULAR ULTRAVIOLETA VISIBLE

Vemos transiciones moleculares utilizando ultravioleta visible. El rango espectral para ultravioleta va de 200 400nm, y para el visible va de 400 700 nm. El rango de energa que abarca es de 6 eV (electrn voltio). ENERGA DE VIBRACIN ATMICA Y ENERGA ROTACIONAL.

La distancia donde la energa es menor es ms fcil el enlace. Las transiciones que se hacen en la absorcin molecular ultravioleta son transiciones de los electrones entre los diferentes orbitales moleculares a los que corresponde diferente energa. . Para cada estado de energa electrnica hay varios estados de vibracin y para cada estado vibratorio existen varios estados rotatorios. Por tanto el nmero posible de niveles de energa en la transicin es amplio. Hay varias longitudes de onda que dan la energa necesaria para dar la transicin. La absorcin se produce por un trnsito de E0 a E* debido a una radiacin. E0 representa la energa electrnica de la molcula en estado fundamental. E*, E*2 son la energa de los estados electrnicos excitados. E*1, E*21 corresponden a los niveles de energa vibratoria para cada uno de los estados electrnicos. La radiacin visible provoca trnsitos de un electrn desde el estado fundamental hacia cualquiera de los niveles vibratorios del estado electrnico E*. La radiacin ultravioleta provoca trnsitos de un electrn desde E0 hacia los distintos niveles vibratorios de E*2. Debido a la existencia de los distintos niveles vibratorios posibles dentro de un estado electrnico, los espectros electrnicos de ultravioleta visible dan bandas anchas de absorcin (se superponen tambin las vibraciones rotacionales). Debido a que son bandas anchas la utilizacin de los espectros de absorcin es para anlisis cuantitativos, porque para anlisis cualitativos no son muy precisos por tener bandas anchas. Las colisiones con los disolventes tambin hacen ms difusas las energas de los estados cunticos originando tambin bandas anchas. En los espectros de absorcin influye el estado fsico del absorbente (analito) y el tipo de disolvente empleado. Los compuestos que absorben en ultravioleta visible se denominan Cromforos, dentro hay inorgnicos, orgnicos y complejos de transferencia de carga. ORGNICOS Los que tienen enlaces insaturados (dobles y triples enlaces) porque los electrones no estn tan fuertemente unidos con en los enlaces sencillos.

Los compuestos orgnicos con oxgeno, azufre, nitrgeno o halgenos presentan absorcin en ultravioleta porque los electrones no compartidos no estn tan fuertemente unidos, y son lo que provocan la transicin. INORGNICOS Tienen transicin en ultravioleta visible, los complejos formados con compuestos de las primeras series de transicin van a dar transicin en al menos algn estado de oxidacin. COMPLEJOS DE TRANSFERENCIA DE CARGA Son los grupos donadores de electrones enlazados, los donan a un compuesto receptor de electrones con orbitales vacos, cuando este compuesto donador absorbe la energa uno de estos electrones se transfiere al orbital vaco del receptor y se produce un estado de oxidacin reduccin interno, estos compuestos tienen absortividades molares altsima, por lo que permiten un elevada sensibilidad, la mayora implican un in metlico, pueden ser tanto compuestos inorgnicos como orgnicos. Por ejemplo; 1,10 fenantrolina con hierro (II), o el tiocianato con hierro (III). APLICACIONES DE LA ESPECTROSCOPIA MOLECULAR DE ABSORCIN DE ULTRAVIOLETA VISIBLE Se utiliza para la identificacin y deteccin de una variedad de especies inorgnicas, orgnicas y bioqumicas. ANLISIS CUANTITATIVO Este es uno de los mtodos ms utilizados en laboratorios qumicos y clnicos, y se caracteriza por la amplia aplicacin a compuestos orgnicos e inorgnicos. Tiene una sensibilidad (lmite de Deteccin) de entre 104M y 107M. Posee una selectividad moderada alta. Es rpido y de fcil automatizacin. Tiene una exactitud y precisin razonables, con un error de entre el 1 3%. Muchos de los compuestos no absorbentes orgnicos e inorgnicos se pueden analizar (determinar) hacindolos reaccionar con reactivos cromforos que absorben fuertemente en la regin ultravioleta visible. Para que esto de buen resultado es necesario que la reaccin sea forzada hasta que se complete. Los reactivos inorgnicos ms comunes seran: Tiocianato (SCN), para hierro, cobalto y molibdeno. Agua Oxigenada (H2O2), para titanio, vanadio y cromo. Ion Yoduro (I), para bismuto y paladio. Los reactivos orgnicos ms comunes son: Dietilditiocarbamato [(C2H5)2NS2Na], para el cobre 1,10 Fenantrolina, para el hierro. 9

Este mtodo es bueno, tiene un error aceptable para valores de absorbancia entre 0,1 1,2. Fuera de este intervalo, los valores obtenidos de absorbancia no son muy de fiar. El procedimiento para el anlisis cuantitativo conlleva determinar las condiciones que permitan una relacin reproducible entre absorbancia concentracin del compuesto (ha de ser lineal), para ellos hay que seguir una serie de pasos: a. Seleccin de la Longitud de Onda: para obtener una mayor sensibilidad se eligen longitudes de onda que corresponda con el pico de mxima absorcin, y que tengan un intervalo de variacin de longitud de onda en el que la absortividad sea constante. Para seleccionar longitudes de onda hay que tener en cuenta el espectro de los reactivos correspondientes y de la muestra para que no interfieran en esa longitud de onda elegida. El mximo de absorbancia siempre que tengamos en esa zona una curva plana y que los reactivos no interfieran en el espectro. b. Determinacin de Variables que puedan influir en la absorbancia: pH Temperatura Presencia de sustancias interferentes (que absorban a la misma longitud de onda que el analito) Concentracin de los reactivos. c. Determinacin de la Relacin entre Absorbancia Concentracin. Ha de calcularse la recta de calibrado. Si la relacin es ideal, tenemos que:

Para hacer la recta patrn las concentraciones del analito utilizadas deben tener una composicin aproximadamente igual a la de la muestra. d. Comprobacin del Mtodo; aplicndolo a una muestra patrn cuya concentracin sea conocida y comparando ambos resultados. ESTUDIOS CINTICOS Controlando la velocidad de reaccin en la que intervienen reactivos de concentraciones muy bajas. DETERMINACIN DE PESOS MOLECULARES Mediante la relacin de la absortividad molar con otra absortividad que estn en otras concentraciones.

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VALORACIONES FOTOMTRICAS Son tiles para localizar el punto de equivalencia de las valoraciones cuando uno o ms de los reactivos (o productos) absorbe la radiacin o estn en presencia de indicadores que absorben. Es vlida para disoluciones muy diluidas. Podemos tener distintos tipos de curvas dependiendo de quien sea el que absorbe, se mide la relacin absorbancia volumen. Cuando el que absorbe es el Indicador (agente titulante): Cuando el que absorbe es el producto: Cuando el que absorbe es el reactivo: INSTRUMENTACIN PARA ESPECTROSCOPA DE ULTRAVIOLETA VISIBLE Generalmente se usan Fotmetros y Espectrofotmetros. FOTMETRO Cualquier dispositivo que mide la intensidad de una radiacin, son instrumentos sencillos que seleccionan una zona estrecha de longitudes de onda mediante filtros y utilizan como detector un Fototubo de vaco para medir la intensidad de la luz. ESPECTROFOTMETRO Instrumento ms sofisticado que utilizan un monocromador para seleccionar la longitud de onda. Como detector utilizan un Fotomultiplicador que son ms sensibles que los fototubos del fotmetro. COLORMETRO Son instrumentos muy sensibles que comparan, usando el ojo humano como detector, el color de la sustancia a analizar con el de la disolucin patrn. Comparado con el espectrofotmetro es menos sensible. Se obtiene menos sensibilidad, y como lastre tiene que influye la fatiga ocular en la medida Una desventaja es que hay que usar continuamente las disoluciones patrn. ESPECTROSCOPIO Instrumento ptico que permite que el ojo detecte las lneas de espectrales, es til para el anlisis cuantitativo de elementos que emiten radiacin en la regin visible. ESPECTRGRAFO 11

Instrumentos que detectan la radiacin registrndola sobre placa fotogrfica. Se utilizan para emisin atmica. ESPECTRMETROS Instrumentos que poseen sistemas de deteccin elctricos y se usan para todo el rango del espectro electromagntico. Dentro de estos estn: Espectrofotmetros, detectan fotones. Espectrmetro de Masas, detectan partculas de masa finita. FOTOTUBO DE VACO Son dispositivos provistos de un ctodo sensible a la luz en forma de medio cilindro metlico recubierto interiormente de una capa sensible a la luz y, de un alambre que acta como nodo. Cuando la radiacin llega al ctodo emite electrones que son atrados hacia el nodo y devueltos de nuevo al ctodo por un circuito externo que atraviesa una resistencia, la corriente fotovoltaica produce una cada de potencial a lo largo de esa resistencia que es proporcional a la corriente:

La sensibilidad del tubo depende de la sustancia que recubre el ctodo, que suele ser una mezcla de metal alcalino, un xido de este metal, plata y oxido de plata. TUBO FOTOMULTIPLICADOR Son un tipo de fototubo de vaco de respuesta rpida y sensibilidad muy elevada. Dentro del tubo por emisin de electrones secundarios se consiguen amplificaciones de hasta 1 milln de veces. La radiacin que llega al fototubo provoca una emisin de electrones primarios que son acelerados hacia una segunda superficie sensible que al chocar con ella cada electrn primario es capaz de producir la emisin de 4 5 electrones secundarios que son a su vez acelerados hacia otra superficie sensible de modo que el nmero de electrones emitidos vuelve a multiplicarse. Este proceso se puede repetir tantas veces como se quiera, normalmente se utilizan 10 ctodos (se multiplica por 10). El factor de amplificacin depende del potencial aplicado y requiere una fuente de alta tensin y de gran estabilidad. Son capaces de medir intensidades 200 veces ms dbiles que un fototubo normal, y deben estar protegidos de la luz parsita. TIPOS DE DISEO DE INSTRUMENTAL PARA UV VISIBLE De Haz Simple La radiacin slo pasa a travs de una disolucin, y por lo tanto necesitamos realizar 3 pasos para medir la absorbancia: 1. Ajustar a 0 el medidor de transmitancia (cuando el obturador esta cerrado) cuando no llega radiacin al medidor.

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2. Colocar el blanco a medir y ajustar a 100% de transmitancia o de absorbancia. 3. Colocar la muestra y leer la absorbancia o transmitancia. Se deben de repetir cada vez que vayamos a medir con una longitud de onda determinada, en este tipo de instrumento tanto la fuente como el detector deben de ser muy estables, la sensibilidad del detector y la potencia de la fuente deben permanecer constantes durante todo el proceso. Son adecuados para anlisis cuantitativo de mezclas sencillas. No son adecuados para anlisis cuantitativos de mezclas de sustancias con curvas de absorcin complejas. De Doble Haz Tienen un haz que pasa a travs de la disolucin con la mezcla y al mismo tiempo el otro haz pasa a travs de un blanco que nos da la seal de referencia, luego se comparan, slo necesito dos pasos. 1. Se colocan el blanco en las dos cubetas y se ajusta a 0 la absorbancia. 2. Con el blanco en la cubeta de referencia y con el obturador cerrado se ajusta a 0 de transmitancia. Una vez calibrado el aparato se pueden realizar medidas a distintas longitudes de onda sin tener que calibrarlo, debido a que la seal del haz que pasa por la muestra se compara continuamente con el haz que pasa a travs del blanco (referencia, la disolucin si el analito). Las dos seales de salida se amplifican, se determina el cociente:

Esta medida es independiente de la variacin de la fuente o del detector con la longitud de onda. Con este instrumento de doble haz se minimizan los errores debidos a las fluctuaciones de intensidad en la fuente y debidas a fluctuaciones en la respuesta del detector. E M0 M* Energa

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IF PF IF P0

AT A2 A1 II I

Cuerpo 1 Cuerpo 2

C A

C A 14

A 2 1 B A Detector IF I0 1012 1011 1010 109 108 107 106 103 104 105 102 101

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10 Radio Microondas Infrarrojo Visible UV Rayos X Rayos Gamma d (m) E E0 E* Niveles de Energa

Ultravioleta Luz Visible Infrarrojo

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C A

Punto de Equivalencia V A

Punto de Equivalencia V A

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Punto de Equivalencia V A

CTODO NODO e C1 e Radiacin C2 C3 C10 nodo

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