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2012

cglubulkp

Guia de Cultivo
Psilocybe Cubensis

Fonte: http://www.cogumelosmagicos.org/comunidade/

01/08/2012

Este guia consiste em um agrupamento de textos, imagens e tcnicas de autoria dos membros do Cogumelos Mgicos, Shroomery e minha.

A cada cultivo, independente de sua experincia, algo novo ser compreendido, portanto, esse apenas um guia e no uma utopia na cultura de Cubensis.

Sumrio

Apresentao Glove Box Hidratao de esporos Culturas Lquidas PF Tek Milho Esterilizao Inoculao Incubao Agulhas Crescimento X Temperatura Grain to Grain Casing Terrrio

Bulk Carimbos Carimbos em cotonetes Clonagem/Isolamento em papelo Clonagem/Isolamento em meio BDA Armazenagem de Culturas Secagem Pastilhas Contaminantes Comuns Aspectos Farmacolgicos: Dosagem Outdoor In vitro

Apresentao
Os cogumelos eram usados no Mxico, Guatemala e Amazonas em rituais religiosos e por curandeiros. Os Maias utilizavam um fungo ao qual chamavam, na lngua nahutl, teonancatl (a "carne de deus") h j 3500 anos. No seu territrio foram encontradas figuras de pedra com representaes de cogumelos datadas de 1000 a.C. e 500 d.C. As primeiras referncias ao seu consumo foram encontradas em livros (1502), nos quais era mencionado o uso de cogumelos em rituais nas festas de coroao de Moctezuma, o ltimo imperador Azteca. A redescoberta do cogumelo sagrado dos Maias - e o acesso sua consumao ritual por R. Gordon Wasson e sua esposa, a partir de 1953, na Sierra Mazateca, depois a colheita sistemtica, a cultura em laboratrio e a anlise detalhada das diferentes espcies de cogumelos lamelares do gnero Psilocybe, sob os auspcios do Prof: Roger Heim, do museu de Histria Natural de Paris, representam um acontecimento primordial para todas as pessoas interessadas numa abordagem ao domnio complexo das plantas adivinhatrias. Elas do acesso s experincias iniciticas que remontam a mais alta antiguidade e, sem dvida, at mesmo pr-histria.

O qumico suio Albert Hofmann que descobriu o LSD, foi tambm o primeiro a extrair psilocibina e psilocina dos cogumelos entre 1957 e 1958. Nos anos 70, o LSD e a psilocibina, entre outros, foram fundamentais para a Contracultura e o movimento Hippie, visando a "libertao da mente", seguindo as idias dos beats e de Timothy Leary, um psiclogo proponente dos benefcios teraputicos e espirituais do LSD e da psilocibina. Atualmente, estudos comprovam possibilidades teraputicas da psilocibina. Em um deles, pessoas que receberam a psilocibina demonstraram uma personalidade mais aberta aps a sua experincia, um efeito que persistiu por pelo menos 14 meses.
Timothy Leary e sua primeira experincia "Durante as cinco horas seguintes, encontrei-me arrastado pelo desfrutar de uma experincia que poderia tentar descrever graas s numerosas e extravagantes metforas, mas que foi, antes de tudo e sem dvida alguma, a mais profunda experincia religiosa da minha vida (...) Descobrir que o crebro humano possui uma infinidade de potencialidades e pode operar em dimenses de espao-tempo inesperadas me transfigurou por completo; convenci-me, sem qualquer sombra de dvida, que acabava de despertar de um longo sono ontolgico." Relato de Gordon Wasson

"Est escuro. Todas as luzes foram apagadas. Brasas ardem nas pedras da lareira. Madeira de Copal perfumada se consome num caco de cermica. Tudo est calmo. A cabana, a choa, fica afastada da aldeia. A voz de Maria Sabina pira na cabana(...) Tudo o que se v naquela noite se banha na claridade da origem: a paisagem, as casas, os utenslios de uso dirio, os animais, tudo calmamente irradiado pela luz primordial; dir-se-ia que as coisas apenas acabam de serem produzidas pelo criador! Esta novidade total - dir-se-ia a aurora da criao - o submerge e o envolve, o dissolve na sua beleza inexplicvel (...) Seu esprito est livre, voc vive uma eternidade numa noite, v o infinito no gro de areia. O que voc v e escuta grava-se na sua memria, gravada ali para sempre. Enfim, voc conhece o inefvel, sabe que o o xtase! (...) Uma simples planta abre as portas, libera o inefvel, traz o xtase. No a primeira vez na histria da humanidade que as formas mais humildes de vida do a luz ao divino. Por mais desconcertante que seja, a maravilha que anuncia merece ser ouvida pelos homens."

Glove box
Caixa plstica; Silicone; Luvas de ltex; Tubo de Pvc 100mm.

Desinfete a glove box inclusive suas entradas para luvas e tudo o que for para dentro dela com gua/gua sanitria, um copo de gua/uma colher de ch de gua sanitria. Sempre que precisar eliminar microorganismos indesejveis, poder usar a gua sanitria diluda, esperando certo tempo para que ela possa agir.

Hidratao de esporos
Material:
- Pote coletor. - gua destilada (farmcia) - lcool - Papel alumnio Glove box

Procedimento:

Ferva gua por dez minutos. Ainda fervendo use-a para esterilizar o pote coletor (ou copo de cachaa) e a seringa/agulha. Sugue a gua e ejete por trs vezes, deixando, na terceira vez, a gua dentro da seringa por dois minutos e tambm no copo de cachaa. Esterilize tambm um copo normal, assim voc poder cobrir o copo de cachaa com este copo maior dentro da glove, evitando contaminantes. Coloque a gua destilada no copo de cachaa.

Abra o carimbo e raspe (com algo esterilizado) parte () dos esporos no pote coletor. Sugue a mistura com a seringa, injete de volta e sugue novamente, coloque a proteo da agulha e embrulhe em um papel alumnio desinfetado com lcool. Guardar na gaveta da geladeira prxima ao congelador (hidratao). Deixe por, no mnimo, um dia antes de usar. (Carimbos velhos precisam de uma hidratao mais efetiva 7 dias a um ms). Vire de lado, de vez em quando, para os esporos no ficarem grudados na lateral da seringa.

Cultura Lquida

Material Glucose de milho (lojas de confeitaria/artigos p festa) conhecida tambm como dextrose gua mineral Frascos para CL:

Procedimento Medidas: No utilize mais do que 4% de acar nas Culturas Lquidas. Uma medida de 2% funcionou bem. = ( 0,03) = ( ) 0,03 Se tiveres uma balana de preciso, prefira usar a glucose de milho, pois os fungos se do melhor com seu acar do que com a glicose de farmcias. Misture bem e preencha os copos. Importante: Preencha somente 1/3 dos copos com o lquido, pois necessrio bastante oxignio dentro dos copos para um crescimento saudvel do miclio. Voc pode colocar algum objeto dentro do pote para ajudar a cortar o miclio quando estiver bem desenvolvido. Panela de presso neles por 30 minutos. No fiz furos nas tampas de alumnio, apenas apertei com as mos. Agora espere esfriar completamente dentro da panela. Agite violentamente os copos, por 1 minuto. Isso ir trazer oxignio de volta gua. A panela

de presso tira a maior parte do oxignio da gua. por isso que deixado o espao dentro do copo, para ter oxignio suficiente para o bom desenvolvimento da cultura. Deixe em temperatura de colonizao. Uma vez por dia, se quiser acelerar o crescimento do miclio, agite cuidadosamente e devagar as culturas (formando um redemoinho). Deve observar o crescimento entre 3 a 7 dias. Comea com "pequenas nuvens de algodo". dificil dizer com certeza se uma cultura lquida est ou no contaminada. Mas d pra se basear em teorias. Por exemplo: Essa cultura tem 99% de chances de ser saudvel: O miclio vigoroso e unido, o restante da gua transparente. O certo somente usar CL com uma tima aparncia. Cores diferentes dentro do copo, e gua esbranquiada contaminante. Quando for usar as CLs, deixe-as fora da geladeira por 2 dias antes de inocular.

Observao:
Uma CL pronta, j com miclio bem desenvolvido (2 semanas) pode ser guardado em geladeira (baixar temperatura para estagnar o crescimento do miclio, nunca no freezer) por no mximo 7 meses. O ideal 3 meses.

PF TEK
Ingredientes: -Vermiculita -Alpiste ou arroz integral (de preferncia com casca) -Copos largos com boca larga -Papel Alumnio -Desinfetante (lcool)

Procedimento: Umedea um pouco a vermiculita e esterilize no microondas em potncia mxima por 3 minutos. Bata o arroz no liquidificador, at que muitos gros sejam quebrados. No deixe que vire uma farinha fina, o ideal do substrato que fique bem aerado. Utilize a proporo de 2/1 de vermiculita/alpiste e umedea com gua mineral: expremendo o substrato, algumas gotas devem cair.

Coloque uma fina camada de vermiculita seca no fundo do copo, preencha-o com substrato at mais ou menos um dedo (precisamente ser do tamanho tal qual a agulha da seringa que for usar) da boca. IMPORTANTE: Limpe as bordas de dentro e de fora do copo com um papel toalha e um bom desinfetante, agora preencha o que falta com vermiculita esterilizada. Faa tampas de papel alumnio e esterilize em pp por uma hora.

Fure cuidadosamente o papel alumnio rente a parede do pote e empurre a agulha at ultrapassar 1 cm o selo de vermiculita e injete uma quantidade do contedo da seringa. Faa 4 furos equidistantes, isso acelera o processo de colonizao. Dunk and Roll: Antes de tirar o bolo colonizado do pote injete 100 ml de gua mineral. Use seringa como na inoculao. Cubra os furos com durex coloque o pote dentro de um saco e deixe 24 horas dentro da geladeira. Nesse perodo o bolo vai absorver toda gua injetada e o frio para o crescimento do miclio. Depois do dunk, role o bolo sobre vermiculita esterilizada e seca ( melhor usar seco porque prende mais fcil no bolo). Logo aps use nvoa (umidificador ou borrifador) para umedecer a vermiculita. Esse mtodo permite que o bolo frutifique de todos os lados mais facilmente. Double casing: Tcnica para umidificar bolos que consiste em colocar duas camadas de vermiculita mida, uma em cima e outra em baixo do bolo. A umidade da vermiculita hidrata pouco a pouco o bolo. Depois de cada flush, relimpe o bolo e coloque vermiculita nova. O que isso faz prevenir contaminantes de crescer. Os bolos permanecem incontaminados e frutferos por uns bons dois ou trs meses. Depois que o bolo foi relimpo, posicione-o em uma camada inferior umidecida de vermiculita (em um prato ou em uma tampa). Ento, vermiculita seca colocada no topo do bolo e suavizada para uma camada de cerca de 3mm. Uma camada fina o melhor caminho porque os cogumelos podem crescer facilmente sem precisar atravessar uma camada espessa de vermiculita. Borrife a camada do topo algumas vezes. Faa isso uma ou duas vezes por dia, quando voc aera o bolo. Isso vai alimentar os bolos com gua gradualmente. Os bolos iro se tornar brancos novamente. Logo que voc visualiza as primrdias surgindo na camada de casing, deixe de borrifar a camada diretamente e permita que as primrdias cresam. por causa disso que importante no usar uma camada fina no topo do bolo. Assim que as primrdias comeam a aparecer, molhar as mesmas pode mat-las.

Milho
1 morte aos micros Ferva o milho por 10 minutos, desligue o fogo e deixe 24 horas de repouso, panela fechada.

2 morte aos micros que eclodiram dos esporos Aquea at ferver, desligue o fogo e deixe 24 horas de repouso.

3 morte aos remanescentes. Aquea at ferver, desligue o fogo e espere esfriar. Passe para o escorredor e cubra com um prato, deixando-o na geladeira frost (no no freezer) por 24 horas. A geladeira serve para secar o gro.

4 esterilizao ( morte a todos micros presentes) Distribua em copos e esterilize por 2 horas em panela de presso.

Colocando gua at cobrir o milho e sempre usando fogo baixo, no precisa adicionar gua no decorrer do processo. So muitas etapas de aquecimento, ento, no deixe por tempo excessivo, o milho pode amolecer demais e virar uma papa.

Esterilizando o Substrato:
Para fazer a tampa, costumamos cortar trs cubos de papel alumnio, 2 folhas para a tampa que ser permanente e 1 para ser retirada no momento da inoculao e recolocada rapidamente logo aps o ato ser consumado, junto com o esparadrapo. Faz-se um pequeno furo nas duas tampas de alumnio, para que o vapor possa sair. A terceira tampa fica semiaberta. Pode-se usar as prprias tampas metlicas dos frascos furadas ao meio, com um filtro tyvek por baixo delas como mostra a foto no final do texto. Esse material encontrado facilmente em lojas de materiais de segurana a baixo custo (toucas de tyvek, etc). A vantagem que o tyvek permite trocas gasosas entre o substrato e o meio, acelerando a colonizao, alm de aderir melhor ao esparadrapo por sobre o furo de inoculao.

Arrume os potes na panela de presso. Coloque gua at comear a flutuar, adicione um pouco mais. necessrio um cuidado para que a gua que cai nos copos no entre nele. Um desses cuidados no fazer o furo no centro da tampa de alumnio pois, por ficar mais baixo que as bordas, acaba deixando a gua entrar, o que prejudica e atrasa a colonizao. Feche a panela sem a vlvula. Quando comear sair vapor, continuamente pelo pico, coloque a vlvula. O tempo vai depender do substrato; milho: 2 horas, Bolo pf: 1 hora e CLs: 30 minutos. recomendvel que voc os deixe esfriar na prpria panela de presso, de um dia para o outro (7 12hrs).

Inoculao:
Limpe a panela, externamente, com soluo de gua sanitria diluda e pano fino. Abra a panela retire o pote, limpe-o com lcool e passe para a glove box. Retire a primeira tampa de papel alumnio do pote e reserve. Aps retirar a seringa com esporos do papel alumnio, passe lcool em toda ela e faa furos no papel alumnio do pote, injetando cerca de 0,5 ml da soluo. Em bolos PF, faa quatro furos nas laterais do pote para uma rpida colonizao Cubra os potes com a tampa de papel alumnio retirada e passe fita adesiva em volta. muito difcil entrar contaminantes pelos furos de inoculao. Guarde os potes em caixa de isopor a cerca de 25C (calor de menos retarda o processo, mas em demasia, mata os fungos ). Use um termostato. Sacudir logo depois de inocular um erro, nunca faa isso. Se voc fizer isso, o miclio ser felpudo no incio, como algodo fino. Eu sugiro inocular e no sacudir pelo menos por 1 semana. Sacudindo, voc espalha os esporos pelo pote forando o miclio monocaritico buscar por um par. Se voc deixar os esporos germinarem prximos uns aos outros, eles se uniro e formaro miclio dicaritico nos primeiros dias, se tornando denso e rizomrfico nos prximos dias. Somente leve um bolo para o terrrio quando ele estiver 100% colonizado. Caso contrrio ele vai contaminar e espalhar a contaminao em todo terrrio. Se a colonizao paralisar, provavelmente ser por falta de O2. Troque, dentro da glove, a tampa de papelalumnio por um papel coador de caf.

Utilize somente agulhas de calibre grosso ao trabalhar com CLs:

Incubao
a condio ideal para que o fungo colonize o substrato, seja gros, bolos pfs, bulk ou mesmo o casing. A incubao se d no escuro, a uma temperatura de 26C (j que o miclio produz calor ao crescer, elevando ainda mais a temperatura). Pode ocorrer de o miclio paralisar seu crescimento. Isso frequentemente se deve falta de O2, quando ocorrer, podes trocar, dentro da glove, a tampa de alumnio por uma de filtro de papel para coar caf.

Crescimento X Temperatura
Crescimento em mm Temperatura (C) 40 35 31 30 28 28 25 23 20 15 11 9 3,8 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 5 0 10 17 16 25 31,6

Observao:
A temperatura dentro dos potes normalmente est 3 a 4C acima da temperatura exterior, por vezes mais. Portanto, mantenha a incubadora a 26C. Temperaturas muito altas favorecem contaminantes.

Grain to Grain
Significa Transferncia de Gro para Gro. Uma vez que se tenha aprendido a preparar Spawn esterilizado de sementes de pssaros, arroz ou gros e coloniz-lo totalmente com Miclio, pode-se facilmente propagar um nico frasco de 250ml colonizado em mais 20 via transferncia Grain to grain. Propores de Spawn alcanando de 1:10 a 1:40 esto sendo usadas, com 1:40 estando "na margem de ser mal sucedido" [Stamets, GGMM 2000]. Frascos propagados via Grain to grain geralmente colonizam 100% em condies timas em cerca de 10 a 14 dias. Dado isto, Esporos no tem que Germinar, j que o que transferido para os frascos novos Miclio ativo colonizado em gros ou sementes. O mtodo preparar frascos novos, como se voc fosse inocular via Seringa. A diferena que se transfere os gros de um frasco colonizado para os frascos no-colonizados. O procedimento simples e requer somente bom senso, preparao mnima e o mximo de assepsia possvel. Agite cada frasco novo para espalhar o material colonizado. Transferncia G2G e a agitao do frasco machuca o miclio, por isso levar cerca de 3 dias para ele se recuperar do choque. No h necessidade de agitar os frascos mais de uma vez. Fazer isso s atrasar a colonizao, ao invs de agiliz-la.

Casing
Material:
O material utilizado na camada o mais diverso: Fibra de coco, p de casca de coco, p de pinus, turfa, vermiculita, terra vegetal organica, fibra de bananeira, borra de caf, calcreo, bicarbonato de clcio, p de casca de ovo, p de concha, p de ostra, leite de magnsia, etc. Sendo que o mais usado : Vermiculita P de coco (coquim) ou Turfa Duas cascas de ovo modas (sem pele)

Procedimento:
Encha a vasilha com gua e gua sanitria, deixando por uma hora. Geralmente usada a receita de de vermiculita e de p de coco e duas cascas de ovo modas (para uma pequena quantidade de casing). Umedea um pouco a vermiculita e esterilize no microondas em potncia mxima por 2 minutos. Misture os ingredientes em uma vasilha de sorvete e adicione gua at atingir a umidade ideal. Leve a vasilha, com o material mido, ao microondas, aquea em potncia no muito alta e misture o material de vez em quando, at totalizarem 10 minutos de aquecimento. Coloque uma camada fina e mais seca no fundo da vasilha, o spawn colonizado e despedaado no meio e mais uma camada em cima (bem mida e aerada). Deixe em condies de colonizao at que o miclio comece a surgir na superfcie. Use um borrifador para manter a mistura mida (use gua mineral e no encharque os fungos!). O casing pode ser feito tambm no bulk, aps o spawn o ter colonizado.

Quando frutificar o casing?


Uma vez que o miclio surja nos vales da camada de casing e seus fios comecem a atravessar a mesma, porm a superfcie no esteja colonizada, deve-se iniciar o pinning. Se o miclio comear a surgir de forma muito irregular, espere colonizar totalmente a superfcie e coloque uma camada extremamente fina de casing por cima; dessa forma voc ter um casing nas condies ideais para frutificar.

Umedecer o casing pode causar abortos? No, umedecer o casing suavemente no causa abortos. A regra nunca molhar muito o casing, mas umedecer de tempo em tempo fazendo com que ele permanea mido por todo o tempo. Molhar demais pode prejudicar os pins e tornar a superfcie do casing pouco favorvel formao de cogumelos. Mas umedecer est ok e necessrio. Tente no molhar diretamente os cogumelos maiores, pois podem estragar. Nesse estgio tente umedecer a superfcie entre eles, entretanto algumas gotas diretamente nos cogumelos no faro mal algum.

Terrrio:
O ideal para a frutificao uma temperatura 22-28 e uma umidade muito alta.

Material:
Vasilha grande e larga Argila Expandida (lojas de jardinagem) gua Sanitria Borrifador

Procedimento:

Lave a argila, coloque em uma panela e ferva por 20 minutos. Coloque a argila no terrrio, com gua da torneira adicionando uma gota de gua sanitria. Fazer dois furos logo acima do nvel de argila para circulao de ar e colocar l acrlica. A argila deve ficar com 3 cm de altura no fundo da vasilha. A gua adicionada deve ficar um pouco abaixo da argila. O uso de argila expandida ou perlita coloca a umidade do terrrio na faixa 95% - 98%, que o ideal. No use vasilhas trasnparentes para fazer casings, os cogumelos so fototrpicos. O terrrio deve ser bem fechado. No deixar a vasilha no cho ( a que se encontram a maior parte das bactrias contaminantes). Troca de ar

um dos parmetros mais importantes a ser controlado. Enquanto o substrato est colonizando o ar no interior do pote deve ser rico em CO2 (gs carbnico). Quando o bolo ou casing colocado no terrrio o ar deve ser rico em O2 (oxignio). O ar no interior do terrrio deve ser renovado para manter a quantidade de O2 superior a de CO2. Para manter o ar rico em O2 no interior do terrrio necessrio intervir: A cada 8 horas a tampa do terrrio aberta e abanando algumas vezes, o ar renovado.

Temperatura Dentro do terrrio o casing deve ser mantido a 26C. Luz A luz, como a temperatura e oxigenao (renovao de ar) um alerta ao miclio que hora de produzir o corpo reprodutivo (cogumelo). 1 - A luz pode entrar no terrrio, naturalmente, pela tampa (plstico) do terrrio.

Segurana

Segurana nada mais do que manter o terrrio fechado a invasores. Os invasores podem ser microorganismos ou insetos. Todas as aberturas devem ser protegidas com filtro. O filtro comumente usado l acrlica. O filtro feito cortando pedaos da l, colocando 2, 3, ou mais pedaos sobrepostos. Depois o filtro preso a abertura.

Garrafa de gelo para diminuio de temperatura

Bulk

Bulk consiste em usar um spawn (milho colonizado) para colonizar um substrato de volume ainda maior. Nessa tcnica, o spawn misturado com o substrato bulk (esterco) e colocado em uma bacia ou outro recipiente que sirva de terrrio (mantenha a umidade), com tampa. de extrema importncia que o substrato bulk seja bem aerado (espaamento entre as suas estruturas) para que o miclio possa se propagar e coloniz-lo rapidamente, antes dos contaminantes. Essa tcnica fornece, geralmente, uma produo maior que as outras, pois nela se tem uma massa muito maior de miclio. Bom lembrar tambm que o esterco bovino o substrato predileto dos cubensis.
No se deve esterilizar um substrato bulk, pois a contaminao ser certa. Quando voc pasteuriza substratos a 60-70C, alguns microorganismos benficos, principalmente bactrias, permanecem vivos e habitam o substrato, "protegendo-o" de outros microorganismos mais agressivos. Esta a razo pela qual voc pode inocular substratos bulk com spawn em lugares abertos, sem se preocupar com cuidados especiais de esterilizao e tambm manter o cultivo dessa forma.

Material: Esterco bovino ( um pouco seco e duro) Palha (aerao do substrato) Vermiculita
Trs cascas inteiras de ovo SEM PELE e trituradas pra cada dois copos de estrume (correo de ph). Pode ser usado o carbonato de clcio.

Procedimento:
(...) Um experimento bem simples cavar um buraco raso prximo as razes de uma planta, colocar o seu bolo e depois cobrir com a terra removida. Pode ser um vaso que tenha uma planta com razes bem desenvolvidas. Se voc fizer com bolo aniversariando, exaurido de flushs ou contaminado, com certeza retirar alguns cogumelos, a quantidade depender das condies e do tamanho do bolo. Isso provar que ali, ao redor das razes, existe um equilbrio de nutrientes e microorganismos que ajudam a revigorar o miclio, mesmo ele estando combalido por contaminaes. Existem microorganismos ao redor das razes que controlam a proliferao de outros microorganismos nocivos, que poderiam matar a planta, mas permitem outros que ajudam seu desenvolvimento. A pasteurizao transporta essa tek da natureza para dentro de casa, uma

pasteurizao bem realizada, permite render bastantes frutos num bulk ou casing, assegurando sua integridade por um longo perodo (...).

Apresento dois mtodos de pasteurizao de substrato: Primeiro: Ponha a palha, vermiculita, estrume e a casca de ovo num pote de sorvete, hidrate-os e coloque em banho maria. Mantenha 67 C por 1 hora (usar duas resistncias de chuveiro em srie). Repita essa mesma operao por mais 2 dias, totalizando 3 aquecimentos. Entre cada aquecimento, intervalo de 24 horas e bacia fechada hermeticamente. Monitore a temperatura com termmetro culinrio para no exceder 70 C. Voc deve mexer de quando em quando para homogeneizar. Cheque a
umidade do bulk: espremendo-o um pouco, apenas algumas gotas devem cair. No demore mais que um dia para inocular o spawn. Segundo: Proceda como no primeiro mtodo, mas pasteurize por duas horas temperatura entre 76C e 80C, somente uma vez. Espere esfriar e inocule o Spawn. Encha o monotub com gua e meio copo de gua sanitria para desinfetar, deixando por uma hora. necessrio tapar a lateral e o fundo para evitar que o monotub receba luz (cogumelos so fototrpicos). Coloque o substrato bulk no monotub e o inocule com o Spawn (misture o spawn e o bulk com uma colher desinfetada. Uma proporo de 1/4 o suficiente). Misture com cuidado para que a recuperao do miclio seja rpida. No deixar no cho ( a que se encontram a maior parte das bactrias contaminantes).

Deixe em condies de colonizao: Temperatura: 26C Luz: Nenhuma Ar: Deve ser permitido ao bulk a troca de ar, atravs de furos no tub, tapados com l acrlica.

Bulk 100% colonizado, aguarde mais uma semana para que a rede micelial se torne vigorosa e: Induzir a frutificao ou Fazer o casing por sobre ele. Espere o miclio surgir por sobre o casing e induza a frutificao: Temperatura: 23-25C.

Luz: Fluorescente ou do dia, 12 hrs com luz e 12 horas no escuro. Ar: Rico em O2. Umidade: 95% e 98%

Caso o bulk esteja seco, borrife um pouco de gua mineral na tampa e nas paredes do mesmo (por dentro). O miclio precisa de um alto ndice de O2 para frutificar; Os furos no monotub devem ser feitos bem rente ao substrato e alguns em um nvel mais acima: O CO2 mais denso que o ar atmosfrico, depositando-se no fundo do monotub e causando problemas frutificao. Assim, o gs carbnico sai pelos furos mais baixos e o oxignio entra pelos furos superiores.

Obs: 1- normal o aparecimento de gotas amareladas em cima do miclio. So metablitos excretados pelo cubensis, devido ao estresse causado pela competio com bactrias ou outros fungos.

2- Evitar oscilaes na temperatura importante durante todo o cultivo. Na fase de colonizao essas oscilaes podem causar uma demora no processo porque o miclio tem que se adaptar s mudanas ao invs de crescer. Na frutificao ocorre o mesmo, podendo mudar bastante a morfologia dos frutos. 3- Caso haja uma falta de umidade dentro do monotub injete gua mineral abaixo da superfcie do miclio, com uma seringa.

Carimbo de esporos
Utenslios recomendados: Folha de alumnio Desinfetante para rea de trabalho Luvas de ltex Recipiente ou potes de plstico Bolsas de zip-lock para lacrar os carimbos Glove box Procedimento geral:

recomendvel trabalhar limpo para que os esporos no entrem em contato com nenhuma contaminao durante o processo de produo de carimbo! Borrife bem a folha de alumnio ou papel (material para depositar esporos) com lcool. Deixe secar completamente. Use corpos frutferos diretamente apos a colheita! Corte o caule aonde comea o chapu. Trabalhe cuidadosamente e no danifique nenhuma lamina ou poro.
Agora voc pode por os chapeis no material para depositar esporos, dentro de um recipiente plstico estril. Os esporos precisam de 8-12 horas at eles carem. Para evitar contaminaes, no toque os esporos com suas mos e deixe-os na glove. Acrescente slica gel para secar bem o material antes de lacrar os prints. Lacrados hermeticamente em plstico filme, os esporos so germinveis por aproximadamente 1 ano. recomendvel armazenar os esporos em um lugar escuro, limpo a temperatura ambiente e com um pouco de slica. A slica serve para retirar a umidade e impedir que os esporos germinem antes da hora.

Carimbo em cotonetes
A idia esterilizar cotonetes e esfreg-los nos esporos de cogumelos que so mais difceis em depositar esporos em carimbos convencionais. Esta tcnica pode tambm se mostrar mais eficiente na hora de inocular esporos em culturas lquidas ou BDA, ou mesmo em seringas de esporos. Procedimento: Coloque os cotonetes em embalagens de papel alumnio, leve-os para dentro de um copo seco e com uma tampa que deixe-o bem vedado (para no entrar gua no processo de esterilizao).

Tampe bem o pote e esterilize na panela de presso por 30 minutos. Todo procedimento a seguir deve ser executado em uma glove Box. Escolha o cogumelo, passe um pouco de lcool para desinfet-lo e leve para a glove, cortandoo como se v nas fotos. Use luvas, passando lcool nelas para desinfet-las, assegurando a boa qualidade dos carimbos.

Depois de esfregar cuidadosamente o cotonete nas lamelas do cogumelo seccionado, volte com ele para dentro da sua embalagem de alumnio, deixe por uma hora o papel alumnio meio aberto em um pote limpo, tampado e com slica para secar bem o cotonete.

Depois de secos, feche bem o papel alumnio e envolva-os em plstico filme para proteg-los de contaminates. Na hora de confeccionar seringas de esporos, culturas lquidas ou BDA, basta agitar a ponta do cotonete no meio a ser utilizado.

Tcnica de clonagem/isolamento em papelo

O mtodo permite a clonagem sem o uso de gar. O papelo celulose pura, favorvel para cubensis e desfavorvel para o crescimento dos contaminantes, que buscam nutrientes. Isso no impede que os contaminantes fiquem escondidos no papelo, por isso a necessidade de esterilizar. Funciona para muitas espcies, em especial para os que se proliferam melhor em madeira morta. Aqui foi usado P. cubensis. Corte um quadrado 3cmx3cm de papelo, desses ondulados sem tinta ou muita cola, retire os lados lisos e use somente a parte ondulada. Remova os resduos de cola.

Dentro de um copo coloque 1/4 de gua e o pedao de papelo. Pode ser usado perlon (polyfill) para fazer um filtro no copo, mscaras descartveis ou camadas de filtro de caf. Leve ao microondas em potncia mxima at comear a ferver, ento desligue e coloque em uma potencia bem mais baixa s para manter a temperatura at totalizar 5 minutos. Lave-o em gua corrente, salpique um pouco de vermiculita e repita o procedimento mais uma vez. Isso vai hidratar o papelo e tambm diluir a cola em gua. Limpe um pote plstico com tampa ou outro recipiente com lcool (aqui foi usado pedra petri), retire o papelo do copo, coloque no recipiente limpo e deixe tampado por enquanto. Em um local previamente limpo, pegue o cogumelo escolhido. Aps um corte transversal remova um pequeno pedao do centro prximo a base e deixe submerso em uma soluo de gua oxigenada 3% e gua destilada, 1ml/9ml durante alguns segundos e passe rapidamente para o centro do papelo, feche novamente o pote, vedado, e guarde em local escuro em temperatura de incubao. Voc pode umedecer o papelo com meio de cultura lquida se quiser. Faa mais dois ou trs isolamentos, at que o miclio resultante seja extremamente rizomrfico. Esse miclio coloniza mais rapidamente, mais resistente a contaminantes, frutifica mais e de forma estvel. Os frutos so agrupamentos de hifas, que originam primrdias e o corpo do cogumelo. Se a rede de hifas no robusta poucos frutos so gerados. Voc pode transferir diretamente para CLs, gros ou armazenar o miclio em gua estril. Um detalhe importante que essa tcnica pode ser usada para clonar cogumelos secos h tempos, desde que estes tenham sido bem armazenados e em temperatura abaixo de 35C.

Clonagem/Isolamento em BDA

Meio de cultura BDA um meio mais profissional e eficiente do que o papelo. O meio BDA (batata, Dextrose, Agar) um dos meios mais utilizados para cultura de cogumelos em Placa de Petri, tubos ou potes. A batata usada como fonte dos nutrientes, e a Dextrose como fonte de acar simples. O Agar serve para solidificar o meio. Uma formulao comum, abaixo, suficiente para se produzir 500 ml de meio de cultura :

Batatas cruas 100 g Glucose de milho 10 g gar 10 g gua mineral 500 ml Glucose e Agar Se encontra em lojas de confeitaria e/ou materiais para festas. Para outros volumes menores ou maiores, preparar os ingredientes proporcionalmente. Assim como em outros meios de cultura podem ser acrescentados outros ingredientes, como levedura e gentamicina (Antibitico, para controlar Bactrias). Procedimento: Lavar e escovar bem as batatas, retirando todos os resduos de terra. Cortar em fatias finas sem retirar as cascas e ferver em 250 ml de gua mineral at que fique bem macia. Filtrar o lquido reservando-o e descartar as batatas cozidas. Adicionar ao filtrado a glucose de milho e o Agar-Agar. Acertar o volume final para 500 ml com gua mineral. Obs: Caso queira usar uma menor quantidade, coza 50 g de batatas em 200 ml de gua mineral e acerte o volume final para 250 ml. Retire o tanto que for usar dos 250 ml e acrescente o Agar e a dextrose PROPORCIONALMENTE. Exemplo: 50 g de batatas foram cozidas, volume final de 250 ml. Irei utilizar somente 50 ml, ento: 10 g 500 ml X g 50 ml Devo usar, ento, 1 g de dextrose e 1 g de Agar.

Misturar manualmente em banho-maria at dissolver bem o gar. No usar batedeira ou liquidificador, pois ser formada muita espuma que no permitir que o meio seja utilizado. Em banho Maria para evitar que o acar fique caramelizado, o que impedir o crescimento do Miclio. Distribuir nos recipientes que sero usados e esterilizar por 30 minutos. No resfriamento aps a esterilizao o meio se solidifica. Placas petri so difceis de encontrar, utilize tampas de vidros ou cinzeiros. Faa dois a trs repiques do miclio ou para novas placas, at obter um bom isolamento: miclio rizomrfico. Outra vantagem deste meio, e que se surgirem contaminates, certamente voc os reconhecer. Voc pode germinar os esporos previamente em placas petri tambm, permitindo-se assim selecionar o que resultar mais rizomrfico.

Armazenagem da cultura em gua destilada estril


Coloque um pouco de gua destilada em um tubo de ensaio com tampa de borracha, obviamente estreis. Faa ento uma transferncia assptica de pedaos de miclio sem material nutritivo para o tubo. Esses tubos sero ento armazenados em temperatura ambiente dentro de caixas de isopor. Esse mtodo, segundo dados da literatura, pode ser usado para armazenar culturas temperatura ambiente por at dois anos sem necessidade de repiques. A falta de nutrientes paralisar o crescimento do fungo.

Secagem
Procedimento: Deixe os cogumelos no tnel de vento por 24 horas para perder a umidade excessiva (no deix-los ao alcance da luz nem cort-los). Coloque a slica em um pote de sorvete bem seco e limpo, cubra com papel toalha e em seguida coloque os cogumelos, tampando bem a vasilha: deixar por 24 horas. Depois de ficarem cracker dry, armazene-os em pote HERMETICAMENTE fechado: Coloque um pouco de slica no fundo do pote, filtro de caf por cima, os cogumelos dentro de um saco plstico com a boca aberta e voltada para cima, para evitar o contato com a slica. Guardar em temperatura ambiente. A slica pode ser reutilizada, deixando-a no forno a temperatura mnima por 30 minutos (at que recupere a colorao normal).

Pastilhas de cogumelos
Pegue os cogumelos secos e triture no liquidificador ate virarem p e reserve em uma pote. Esse p devera ser prensado:

Use um cano de metal, moedas de 25 centavos (que tampem a extremidade do cano) e algum basto para que possas prensar o cogumelo triturado. Uma balana de preciso para medir a dosagem. Deixe por 1 minuto na prensa antes de retirar as pastilhas. Armazene as pastilhas em um vidro juntamente com slica (evitar o contato), mantenha salvo de luz e umidade. No observei nuseas e desconfortos estomacais com esse mtodo de ingesto.

Contaminantes Comuns
Bolor de teia de aranha (Cobweb) ou Dactylium Mildew (Hypomyces sp.) Um miclio algodoado cresce sobre o casing. Quando entra em contato com um cogumelo, o miclio em pouco tempo cobre o cogumelo com bolor e causa um leve apodrecimento. tambm um parasita de cogumelos selvagens. O Cobweb mais escuro que miclio... quase cinza comparado ao branco. A diferena na cor s vezes difcil de perceber para quem no os viu lado a lado. O Cobweb tem outros vrios indicadores: um que d uma freada na velocidade de crescimento. Uma pequena mancha do tamanho de uma moeda de um centavo se espalhar para cobrir um casing inteiro em apenas um dia ou dois. Possui tranas muito, muito finas, enquanto o

miclio tende a ser mais grosso. Cobweb favorecido por umidade alta. As estratgias de controle incluem baixar a umidade e/ou aumentar a circulao de ar. Duende Verde (Green Mold) - Trichoderma harzianum, T. viride, T. koningii O Duende Verde causado pelo Trichoderma harzianum caracterizado por um miclio branco agressivo que cresce sobre o casing e dentro de cogumelos causando uma leve decadncia dos mesmos. Suas massas de esporos eventualmente formam um verdeesmeralda. Essas espcies de Trichoderma tambm esporulam na superfcie do casing e devem esporular nos cogumelos infectados. Esse fungo indica que carboidratos esto disponveis, possivelmente devido suplementao de nitrognio inadequada durante a fase 1 ou na compostagem. T. viride produz toxinas que destroem as paredes celulares dos cogumelos. Um composto mido demais, com pouca amnia anterior pasteurizao, moscas, pouca higiene, anaerobiose e outros fatores influenciam a presena do duende verde. So comuns em palhas e freqentemente ocorrem nas produes de especialidades de cogumelos. Trichoderma muitas vezes confundido com bolor de Penicillium ou Aspergillus e vice-versa, sendo que todos trs so muito similares e no fcil distinguir sem o auxlio de um microscpio. Bolor azul-esverdeado (Blue-green Molds) - Penicillium spp. Esporos abundantes de cor azul-esverdeada so produzidos na superfcie do substrato. similar ao Aspergillus. Penicillium spp. utiliza carboidratos, celulose, amido, gordura e lignina. Esses fungos so muito comum em especialidades de cogumelos e so uma das principais preocupaes no agar e cultura em gros. Os esporos esto no ar e em todo os lugares.

Bolor Preto (tambm Bolor Amarelo e outros) - Aspergillus sp. Muito comum nas culturas de agar e gros e na preparao de compostos. Encontrado na maioria de substratos orgnicos, Aspergillus prefere um pH prximo ao neutro a levemente bsico. Bandejas e estantes feitas de madeira para manter composto so habitats freqentes deste contaminante. As cores das espcies variam do amarelo, verde ao preto, porm mais freqente serem esverdeadas, similares ao Penicillium. Essas manchas, como muitas outras, mudam sua cor e aparncia de acordo com o meio onde elas ocorrem. Vrias espcies so termoflicas. Algumas espcies de Aspergillus so txicas. Aspergillus flavus, uma espcie amarela/amarelaesverdeada, produz as mortais aflatoxins. A. flavus ataca sementes ricas em leo que foram armazenadas em locais quentes e midos. De todas as toxinas, asaflatoxins so o mais potente causador de cncer de fgado j encontrado. A toxicidade dessas espcies era largamente desconhecida at que em 1960 100.000 de perus morreram

misteriosamente aps a exploso desta doena na Gr-Bretanha. Visto que A. flavus cresce praticamente em todos os tipos de gros, essa espcie causa srias preocupaes nos cultivadores. O tratamento cuidadoso de qualquer mancha, particularmente do Aspergillus, deve ser uma responsabilidade primria de todos que trabalham em cultivos de cogumelos. A. fumigatus e A. niger, que se reproduzem e crescem melhor na escala de temperatura 10 a 50C, so tambm patognicos para humanos em quantidades concentradas.

Aspectos farmacolgicos
Psilocibina (orthophosphoryl-4-hydroxy-n-dimethyltryptamine). Aps o consumo, os alcalides dos cogumelos bloqueiam os efeitos da serotonina no crebro, por terem estruturas qumicas similares. De um modo geral os efeitos iniciam-se 30-60 minutos aps a ingesto, por vezes mais, consoante a dose ingerida. 1 grama de cubensis secos contm cerca de 10 mg de psilocibina. Dose leve: 1 grama secos ou 10 gramas frescos; Dose moderada: 1 a 3 gramas secos, ou 10 a 30 gramas frescos; Dose alta: 3 a 5 gramas secos ou 30 a 50 gramas frescos; Doses hericas mencionadas por vezes ultrapassam as 20 gramas secos.

A Psilocibina convertida em Psilocina pelo organismo humano, sendo excretada sem transformao na urina. Como muitas outras substncias psicoactivas, os efeitos so subjectivos, imprevisveis e fortemente dependentes das expectativas e dos contextos do consumo. No ocasionam dependncia fsica ou psquica.

Psilocibina

Frutificao Outdoor
Todos os cogumelos nascem na natureza... Ento, quando se decide comear um projeto outdoor, a questo no "Qual strain boa para outdoor". Pense nas condies climticas onde voc tentar realizar seu outdoor.

Cultivo realizado fora de um terrrio, caixa protetora ou balde. Pode ser em canteiros, vasos, etc. bom lembrar-se das condies ideais para fruticao dos cubensis: Altas temperaturas (26C). Umidade elevada do ar. No deixar o miclio secar, muito menos encharcado. No deixar os cogumelos no sol, apenas luz indireta e fraca (no so plantas).

PH levemente bsico ( elevador de ph: casca de ovo moda - CaCO3)

Solos e condimentos geralmente tm ph cido (4 6), por isso, deve se adicionar cal hidratada (uma base) para elevar o ph para a condio ideal no cultivo de cogumelos (6,5 8). O mtodo mais utilizado consiste em colonizar gros e, depois de 100% colonizados e fortes, enterrar em um vaso, preparado com solo, hmus ou outros condimentos encontrados em lojas de jardinagem. Faa apenas uma fina camada de vermiculita sobre o miclio. Borrife gua quando sentir o solo muito seco. Esta tcnica costuma no render muito no primeiro flush. Aps o primeiro flush, retire todos os pins e certifique-se de que o miclio est bem mido. O cultivo outdoor dura, teoricamente, para sempre, embora no se tenha flushes regulares. Uma desvantagem que no se pode carimbar seus cogumelos, pela provvel presena de contaminantes. Voc pode colonizar milho ou outro substrato e num vaso fazer uma cama de terra, por o substrato e cobrir. Eu tenho vasos com plantas e quando quero fazer um outdoor pego parte dessa terra e transfiro para outro vaso. Essa terra tem uma atividade microobiologica equilibrada que protege o miclio de contaminantes.

Cultivo in vitro

Consite na montagem de um casing dentro do vidro. Somente cerca de 60% ou menos do recipiente deve ser ocupado pelo substrato. Coloca-se uma fina camada de casing sobre o milho colonizado. Deve ser promovida oxigenao (8 em 8 horas), luz indireta e umidade (borrifador).

Bibliografia: https://cogumelosmagicos.org/comunidade/ http://www.shroomery.org/