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Cincia 2007 et al. 1192 Rural, Santa Maria, v.37, n.4, p.

1192-1201, jul-ago, Jacques

ISSN 0103-8478

Biorremediao de solos contaminados com hidrocarbonetos aromticos policclicos

Bioremediation of soils contaminated with polycyclic aromatic hydrocarbons

Rodrigo Josemar Seminoti JacquesI Ftima Menezes BentoII Zaida Ins AntoniolliIII Flvio Anastcio de Oliveira CamargoIV

- REVISO BIBLIOGRFICA RESUMO Os hidrocarbonetos aromticos policclicos (HAPs) so compostos mutagnicos e carcinognicos aos humanos e aos animais que so introduzidos no ambiente em grandes quantidades, devido s atividades relacionadas extrao, ao transporte, ao refino, transformao e utilizao do petrleo e de seus derivados. Apesar disso, a grande maioria dos microrganismos do solo no possui a capacidade de degrad-los, o que resulta na sua acumulao no ambiente e na conseqente contaminao dos ecossistemas. Uma estratgia para a eliminao dos HAPs do solo atravs da biorremediao, na qual os microrganismos que apresentam capacidade de metabolizar estes compostos iro transformlos em substncias inertes, CO 2 e gua. No entanto, esta biotecnologia pode ser limitada pela falta de microrganismos degradadores dos HAPs no solo, pela presena de condies ambientais desfavorveis a estes microrganismos ou pela baixa biodisponibilidade dos contaminantes microbiota degradadora. Para superar estas limitaes e promover uma eficiente remoo dos contaminantes do ambiente, vrias tcnicas de biorremediao foram desenvolvidas, como biorremediao passiva, bioaumentao, bioestimulao, fitorremediao, landfarming, compostagem e biorreatores. Esta reviso visa a discutir os metabolismos bacteriano e fngico destes compostos, os principais fatores qumicos e fsicos que influenciam a sobrevivncia e a atividade destes microrganismos degradadores no ambiente e apresentar as tcnicas de biorremediao que esto sendo atualmente utilizadas para a remoo dos HAPs no solo. Palavras-chave: contaminantes orgnicos, microrganismos, bioaumentao, bioestimulao, landfarming , biorreatores.
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ABSTRACT Polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) are mutagenic and carcinogenic compounds to the humans and animals, released through the environment by anthropogenic activities related to the extraction, transport, refine, transformation and use of the petroleum and its derivatives. Most of the soils microorganisms do not possess the capacity to degrade them, which results in its accumulation in the atmosphere and contamination of the ecosystems. A strategy for PAHs elimination from the soil is through the bioremediation, where microorganisms having capacity to metabolize these compounds will transform them in inert substances, CO2 and water. However, this biotechnology can be limited by the lack of specific HAP microbial-degraders in soil, by unfavorable environmental conditions to these microorganisms or by the low bioavailability of those contaminants to the microorganisms. To overcome these limitations and to promote an efficient removal of the pollutants to the atmosphere, several bioremediation techniques were developed as passive bioremediation, bioaugmentation, biostimulation, phytoremediation, landfarming, composting and bioreactors. This revision aims at discussing microbial metabolism of PAHs, present the main chemical and physical factors that influence the survival and the activity of these microorganisms and to show the bioremediation techniques that are being used now for the PAHs removal in soil. Key words: organic contaminants, microorganisms, bioaugmentation, biostimulation, landfarming, bioreactors.

Centro de Cincias Rurais, Universidade Federal do Pampa/Universidade Federal de Santa Maria (UFSM), So Gabriel, RS, Brasil. Departamento de Microbiologia, Instituto de Cincias Bsicas da Sade, UFRGS, Porto Alegre, RS, Brasil. Departamento de Solos, UFSM, Santa Maria, RS, Brasil. IV Departamento de Solos, Faculdade de Agronomia, UFRGS, Porto Alegre, RS, Brasil. Av. Bento Gonalves, 7712, CP 15.100, 91540-000, Porto Alegre, RS, Brasil. E-mail: fcamargo@ufrgs.br. Autor para correspondncia.
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Recebido para publicao 20.02.06 Aprovado em 27.12.06

Cincia Rural, v.37, n.4, jul-ago, 2007.

Biorremediao de solos contaminados com hidrocarbonetos aromticos policclicos.

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INTRODUO Os hidrocarbonetos aromticos policclicos (HAPs) so compostos qumicos constitudos unicamente de tomos de carbono e hidrognio, arranjados na forma de dois ou mais anis aromticos. Devido possibilidade da fuso de um nmero varivel de anis e das vrias posies em que estes anis podem se ligar entre si, h atualmente mais de 100 HAPs reconhecidos pela IUPAC (International Union of Pure and Applied Chemistry). Apesar disso, somente 16 HAPs so considerados em funo de sua importncia industrial, ambiental e toxicolgica. So eles: acenaftaleno,acenaftileno,antraceno, benzo(a)antraceno,benzo(a)pireno, benzo(b)fluoranteno,benzo(k)fluoranteno, benzo(g,h,i)pireleno, criseno, dibenzo(a,h)antraceno, fenantreno, fluoranteno, fluoreno, indeno(1,2,3c,d)pireno, naftaleno e pireno (POTIN et al., 2004). Os HAPs so lipossolveis na membrana celular e prontamente absorvidos no organismo dos humanos via inalao, exposio oral e dermal, com posterior acmulo no tecido adiposo (NETTO et al., 2000). O metabolismo dos HAPs gera compostos epxidos com propriedades carcinognicas e mutagnicas, tendo sido relatados inmeros casos de cncer no pulmo, intestino, fgado, pncreas e na pele, devido presena desses compostos (CHAKRADEO et al., 1993). Os HAPs so gerados naturalmente, e de forma contnua, pela combusto incompleta de substncias orgnicas, como resduos vegetais, madeira, matria orgnica, etc. Porm, a contaminao do solo um tpico efeito da atividade antropognica, devido produo industrial dos HAPs (para fabricao de corantes, de fibras sintticas, de preservantes de madeira, etc.), produo de carvo vegetal, extrao e gaseificao do carvo mineral e aos processos de extrao, transporte, refino, transformao e utilizao do petrleo e de seus derivados (BANFORTH & SINGLETON, 2005). Independentemente da atividade industrial, os centros urbanos so os locais com maior potencial de contaminao dos HAPs, devido aos postos de combustveis, que podem contaminar o ar, o solo, o subsolo e as guas subterrneas com hidrocarbonetos resultantes dos vazamentos nos tanques subterrneos de armazenamento de combustveis. Alm disso, motores veiculares, oficinas mecnicas e garagens de automveis so tambm fontes geradoras de HAPs nas cidades (LIMA et al., 1998). Assim, devido a estas atividades, o solo recebe anualmente quantidades considerveis dos HAPs que, em funo da complexidade da sua estrutura qumica,

da sua baixssima solubilidade em gua (como exemplo, a do antraceno de somente 0,073mg L-1) e da forte tendncia de soro fase slida do solo, tornam-se recalcitrantes e permanecem por longos perodos no ambiente, o que aumenta a possibilidade de exposio de humanos e animais a esses compostos. No Brasil, somente o Estado de So Paulo possui legislao que trata da contaminao do solo e das guas subterrneas pelos HAPs. Nesta legislao, o naftaleno apresenta um Valor de Referncia de 0,2mg kg-1, o que significa que, em concentraes iguais ou menores a esta, o solo pode ser considerado limpo e possvel de ser utilizado para qualquer finalidade. O Valor de Interveno indica que h riscos para a sade humana e para o ambiente, sendo que a ultrapassagem desse valor em um volume de solo de 25m3 ou em 100m3 de gua subterrnea impem a necessidade de implementao na rea avaliada de aes voltadas para a sua remediao. Para o naftaleno, o Valor de Interveno de 15mg kg-1 em solos agrcolas, de 60mg kg-1 em solos residenciais e de 90mg kg-1 em solos industriais. Na gua subterrnea, o valor de interveno para este HAP de 100g L-1 (CETESB, 2005). Em termos mundiais, a legislao ambiental existente sobre HAPs est principalmente nos Estados Unidos, sob competncia da Agncia Americana de Proteo Ambiental (USEPA), e na Unio Europia, atravs da Comisso das Comunidades Europias e da Lista Holandesa de Valores de Qualidade do Solo e da gua Subterrnea, a qual utilizada por alguns rgos ambientais brasileiros. Uma estratgia para eliminao dos HAPs dos solos contaminados atravs da biorremediao, que a utilizao de processo ou atividade biolgica para transformar os contaminantes em substncias inertes (HOLLINGER et al., 1997). Esta biotecnologia vem sendo utilizada h vrios anos em outros pases e, em certos casos, apresenta menor custo e maior eficincia na remoo dos contaminantes do que as tcnicas fsicas e qumicas (como incinerao e lavagem do solo), sendo atualmente utilizada em escala comercial no tratamento de diversos resduos e na remediao de reas contaminadas (BANFORTH & SINGLETON, 2005). Por outro lado, a degradao dos HAPs no solo pode ser limitada pela incapacidade dos microrganismos autctones em metabolizar eficientemente esses compostos, pela falta de nutrientes microbiota degradadora ou pela baixa biodisponibilidade dos HAPs aos microrganismos degradadores, devido soro fase slida mineral e orgnica do solo (JOHNSEN et al., 2005). Para superar estas limitaes e promover uma eficiente remoo dos Cincia Rural, v.37, n.4, jul-ago, 2007.

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contaminantes do ambiente, podem-se utilizar tcnicas de biorremediao in situ, como atenuao natural, bioaumentao, bioestimulao, fitorremediao e landfarming, ou tcnicas de biorremediao ex situ, como compostagem e biorreatores. Esta reviso visa a discutir aspectos relacionados ao metabolismo microbiano da degradao dos HAPs, elencar os principais fatores qumicos e fsicos que influenciam a sobrevivncia e a atividade destes microrganismos no ambiente e apresentar as tcnicas de biorremediao que esto sendo atualmente utilizadas para a remoo dos HAPs no solo. Microrganismos degradadores de HAPs Para que um microrganismo utilize estes compostos como fonte de C e energia para o seu crescimento, necessrio que possua as vrias enzimas que transformam as complexas molculas dos HAPs em intermedirios comuns das suas rotas catablicas. Vrias vias metablicas de degradao dos HAPs j foram identificadas em diferentes microrganismos, porm as mais estudadas so as do metabolismo aerbico realizado pelas bactrias, pelos fungos lignolticos e pelos fungos no-lignilticos. No metabolismo bacteriano, a oxigenao inicial dos HAPs realizada por uma enzima intracelular dioxigenase, que tem a funo de reconhecer o HAP e adicionar dois tomos de oxignio, quebrando a estabilidade devido ressonncia do anel aromtico. Aps sucessivas oxidaes, o ltimo anel aromtico transformado em um dos intermedirios centrais da via de degradao dos HAPs, que pode ser o catecol, o protocatecol ou o gentisato. At aqui atuaram as enzimas denominadas de perifricas, que tm a funo de reconhecer as molculas dos HAPs e convert-las nestes intermedirios centrais. A partir de ento, atuam as denominadas enzimas de fisso, que convertero os intermedirios centrais em compostos que possam ser utilizados nas vias comuns de gerao de carbono e energia da bactria. As enzimas de fisso podem ser divididas em dois grupos, conforme o local da clivagem no intermedirio central: as enzimas intradiol abrem o anel aromtico por via orto, originando o cis-muconato, que, por passos sucessivos, ser convertido em succinato e acetil-coenzima; e as enzimas extradiol fazem a abertura do anel aromtico por via meta, originando o semialdedo 2-hidroximucnico, que, por passos sucessivos, ser transformado em cido pirvico e acetaldedo (BAMFORTH & SINGLETON, 2005). Os fungos tambm podem metabolizar os HAPs. So duas as principais vias descritas na literatura: a primeira est relacionada aos fungos nolignolticos e a segunda aos fungos lignolticos. O

metabolismo dos HAPs do Cunninghamella elegans bastante estudado entre os fungos no-lignolticos. Assim como em seres humanos, o citocromo P450 realiza a monoxigenao inicial do fenantreno em xidos arenos (epxidos), que, atravs das enzimas epxido hidrolases, so transformados em trans-diidrodiis, ou um dos anis pode ser rearranjado no-enzimaticamente a fenol e ser conjugado, originando compostos como o-glicosdeos e o-glicorondeos. Os trans-diidrodiis so transformados por desidratao em fenantris, que podem ento ser convertidos em 9-fenantril-beta-Dglicopiranosdeo, que se acredita ser um dos produtos finais da via de degradao dos fungos no-lignolticos (THE UNIVERSITY OF MINNESOTA, 2005). A lignina contm uma variedade de estruturas aromticas, sendo que os fungos lignolticos oxidam este polmero extracelularmente pela ao de lignina peroxidases, peroxidases dependentes de mangans e lacases. Estas so enzimas no-especficas, que podem oxidar HAPs (JOHNSEN et al., 2005). O Pleorotus ostreatus um fungo lignoltico que tem o metabolismo dos HAPs bem estudado. Ele oxida o fenantreno transformando-o em 9,10-fenantrenoquinona e, por clivagem deste anel, em 2,2-difenato. A partir deste metablito, pode ser formado 2,2bifenildimetanol ou CO2, este ltimo por uma via bioqumica ainda no elucidada (THE UNIVERSITY OF MINNESOTA, 2005). Devido ao grande nmero de enzimas envolvidas na degradao destes compostos, a maioria dos microrganismos do solo no possui a capacidade de degradar os HAPs, justificando a necessidade de se isolar e selecionar microrganismos degradadores, visando a sua utilizao na biorremediao de solos contaminados (ALEXANDER, 1999). Desde a dcada de 1950, vm sendo isoladas bactrias degradadoras destes compostos, pertencentes principalmente aos gneros Pseudomonas, Aeromonas, Beijerinckia, Flavobacterium , Nocardia , Corynebacterium , Sphingomonas, Mycobacterium, Stenotrophomonas, Paracoccus , Burkholderia , Microbacterium , Gordonia, entre outros (MUTNURI et al., 2005; JACQUES et al., 2005a; JACQUES et al., 2005b; JACQUES eta al., 2007) e vrios fungos dos gneros Cunnighamella, Phanerochaete, Fusarium, Candida, Penicillium , Pleorotus , Trametes , Aspergillus, Bjerkandera, Chrysosporium, etc (CERNIGLIA, 1997, JACQUES et al., 2005a). No entanto, nos ltimos anos, tem sido dada ateno obteno de consrcios microbianos, que, comparativamente s culturas puras, tm-se mostrado mais efetivos na degradao destes compostos. Estes consrcios apresentam maior capacidade de utilizao de um grande nmero de HAPs Cincia Rural, v.37, n.4, jul-ago, 2007.

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como fonte de C e, principalmente, podem mineralizar completamente estes compostos, devido complementaridade metablica entre os membros do consrcio, em que os HAPs seriam transformados em CO 2 e gua atravs da ao de mais de um microrganismo. RICHARD & VOGEL (1999), estudando um consrcio bacteriano degradador de leo diesel no solo, verificaram que, dos sete membros deste consrcio, quatro no utilizavam diretamente o leo como fonte de carbono e energia; no entanto, a presena destes aumentava a produo de CO2 pelo consumo de intermedirios produzidos pelos demais membros. Fatores ambientais que influenciam a biorremediao de HAPs no solo A biorremediao tambm pode ser limitada se as condies do solo no forem favorveis sobrevivncia e atividade dos microrganismos degradadores. A umidade do solo considerada por HAIDER (1999) o fator ambiental mais crtico na biodegradao, pois uma alta atividade microbiana somente ocorrer se houver adequada disponibilidade de gua aos microrganismos. Alm disso, o teor de gua no solo tem relao inversa com a disponibilidade de oxignio e, conseqentemente, com a atividade dos microrganismos aerbios, que so os principais responsveis pela degradao dos HAPs. A temperatura afeta a atividade metablica, o consumo de substrato pelos microrganismos e, por conseqncia, a biodegradao dos HAPs. Apesar de a biodegradao ocorrer numa ampla faixa de temperatura, as maiores taxas ocorrem entre 25 e 35C, sendo que, em temperaturas acima ou abaixo destas, h prejuzos para este processo (HAIDER, 1999). O pH do solo afeta diretamente a atividade dos microrganismos atravs dos efeitos dos ons H+ na permeabilidade celular e na atividade enzimtica, assim como, indiretamente, pela influncia na disponibilidade de macro e micronutrientes e na solubilidade do alumnio e demais metais pesados, que podem ser txicos aos microrganismos. Em ambientes naturais, o nutriente que normalmente limita o crescimento microbiano o C, sendo que os nutrientes inorgnicos esto presentes em quantidades que normalmente excedem as demandas das comunidades microbianas (ALEXANDER, 1999). No entanto, a presena de elevadas concentraes de HAPs no solo com potencial para serem utilizados como substrato para o crescimento dos microrganismos pode fazer com que outros nutrientes, que no o C, tornemse limitantes. A relao C:N:P de 100:10:1 no solo a ser biorremediado tem sido normalmente recomendada (CHENG & MULLA, 1999). Entretanto, as pesquisas

que avaliaram os efeitos da adio de N e P ao solo demonstraram resultados muito conflitantes, o que provavelmente se deve s especificidades de cada ambiente, no que se refere a teores de nutrientes no solo, tipo de contaminante e populao microbiana envolvida (LEYS et al., 2005). Outros nutrientes que poderiam influenciar a degradao dos HAPs no solo so o ferro e o enxofre, porque desempenham funes celulares que esto intimamente relacionadas ao metabolismo dos HAPs, como a participao na estrutura das enzimas que realizam a degradao destes compostos nas clulas microbianas. Aps reviso sobre os efeitos destes fatores ambientais na biodegradao dos HAPs (JACQUES et al. 2005a), pode-se constatar que a grande maioria dos pesquisadores recomenda que a adio de nutrientes deve ser realizada somente aps criteriosa avaliao, de forma a evitarem-se adies desnecessrias, que resultam em aumentos dos custos e em prejuzos ao processo de biorremediao. Em vista da baixa solubilidade em gua e da forte tendncia de soro dos HAPs fase slida do solo, a degradao desses compostos pode ser limitada devido a sua baixa biodisponibilidade aos microrganismos degradadores (JOHNSEN et al., 2005). O termo soro definido como o processo em que compostos qumicos tornam-se associados fase slida. No solo, este processo ocorre porque os HAPs so apolares e sua permanncia na fase lquida demanda que as molculas de gua rompam as pontes de H que esto estabelecidas com outras molculas de gua. Como esta reorganizao tem um custo energtico muito elevado, o composto apolar forado a deslocarse na direo dos locais de maior hidrofobicidade, representados no solo pela matria orgnica (MO) e pela superfcie dos minerais (SCHWARZENBACH et al., 1993). A MO a principal matriz hidrofbica do solo, porque constituda principalmente de tomos de C e de H, fazendo com que as pontes de H estejam limitadas a determinados locais de sua estrutura. Alm disso, por se encontrarem em um meio hidroflico, que o solo, as molculas de MO tendem a expor suas superfcies com carga para o exterior e formar espaos hidrofbicos em seu interior, nos quais os compostos apolares podem penetrar (SCHWARZENBACH et al., 1993). O contedo de MO a caracterstica do solo que mais influencia a soro dos HAPs, sendo que vrios autores demonstraram relaes lineares positivas entre o contedo de C orgnico do solo e a capacidade de soro de HAPs (CARMICHAEL & PFAENDER, 1997; NAM et al., 1998; LUEKING et al., 2000). Cincia Rural, v.37, n.4, jul-ago, 2007.

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As superfcies do tipo metal-OH presentes nos minerais sem cargas no formam pontes de H com a gua e so hidrofbicas, sendo que nelas pode ocorrer a soro de compostos apolares (LAIRD & SAWHNEY, 2002). SAADA et al. (1995) demonstraram que 75% da superfcie da caulinita hidrofbica, o que resultou em soro de hidrocarbonetos duas vezes maior que a ilita, que apresenta 60% da sua superfcie hidrofbica. Este tipo de soro assume maior importncia nos solos com contedos de MO iguais ou menores a 4g kg-1, onde as superfcies hidrofbicas esto pouco ou nada cobertas pela MO (SCHWARZENBACH et al., 1993). Em vista de que a composio da fase slida do solo determina a sua capacidade de soro de HAPs, de se esperar que solos com diferentes contedos de MO e composies mineralgicas apresentem diferentes capacidades de soro e de biodisponibilidade desses compostos aos microrganismos degradadores do solo. Neste contexto, NAM et al. (1998) avaliaram a mineralizao do antraceno em seis solos com diferentes contedos de C orgnico, demonstrando que houve maior soro deste HAP nos solos com contedo de carbono orgnico maior que 20g kg-1 e, conseqentemente, menor mineralizao. CARMICHAEL & PFAENDER (1997) observaram que, no solo com maior contedo de C orgnico, a dessoro do fenantreno foi menor, o que resultou em menor taxa de mineralizao deste composto. Estes resultados indicam que a soro dos HAPs no solo influencia a biodisponibilidade destes compostos microbiota degradadora e, conseqentemente, a eficincia da biorremediao. Biorremediao dos hidrocarbonetos aromticos policclicos no solo As estratgias usadas para a biorremediao dos HAPs podem ser divididas entre as tcnicas in situ, em que no h necessidade de remoo do solo, sendo a biorremediao realizada no prprio local contaminado, e as tcnicas ex situ , em que h necessidade de remoo do solo, sendo a biorremediao realizada em outro local (BOOPATHY, 2000). A remoo pode ser necessria quando h possibilidade de os poluentes contaminarem pessoas e o ambiente prximo do solo a ser biorremediado, ou quando a presena de altas concentraes de contaminantes demanda a utilizao de tcnicas como compostagem, biorreatores, etc. Uma das tcnicas in situ a biorremediao passiva ou intrnseca, tambm denominada atenuao natural, na qual o contaminante permanece no local e, atravs de processos naturais como biodegradao,

volatilizao, diluio e soro, ocorre a descontaminao do ambiente (MULLIGAN & YONG, 2004). Por depender exclusivamente destes processos naturais, a biorremediao passiva pode ser muito lenta, exigindo o uso conjunto de outras tcnicas e obrigatoriamente, o monitoramento do local por longos perodos de tempo, visando proteo da sade do homem e do ambiente. BENTO et al. (2005) conduziram um experimento por 84 dias, no qual a biorremediao passiva reduziu em 47% a concentrao de hidrocarbonetos no solo (12.250g kg -1 ). J a contaminao de querosene tem sido rapidamente eliminada pela biorremediao passiva devido alta volatilidade deste combustvel (DROR et al., 2001). A baixa taxa de degradao de um contaminante no solo pode ser resultado do nmero reduzido ou inexistente de microrganismos com habilidade de degradao do composto (HUESEMANN et al., 2002). Isto particularmente importante quando o solo recebe um xenobitico e no h populaes microbianas capazes de degradar eficientemente este composto. Nestes casos, a bioaumentao, que a inoculao de um local contaminado com microrganismos com alto potencial de degradao dos contaminantes, torna-se uma prtica recomendada (EDGEHILL et al., 1999). Embora o sucesso desta tcnica dependa de certas condies j discutidas nesta reviso, a inoculao de um consrcio microbiano composto por seis bactrias e um fungo no solo contaminado com antraceno, fenantreno e pireno resultou em um aumento de aproximadamente 10 vezes na mineralizao destes HAPs em relao microbiota nativa do solo (JACQUES et al., 2005a). Outra tcnica in situ que pode ser utilizada a bioestimulao, em que nutrientes orgnicos e inorgnicos podem ser adicionados ao solo visando a estimular a atividade dos microrganismos degradadores. A adio de 1% de glicose ao solo, contaminado com 8.800mg kg-1 de C orgnico originado de um resduo petroqumico, no resultou em aumento da mineralizao, aps 272 dias de incubao (MIELNICZUK, 1991). ATAGANA et al. (2003) observaram durante 6 semanas que a degradao de hidrocarbonetos foi muito baixa na relao C:N natural do solo de 130:0,08. Nas relaes C:N de 25:1, 20:1, 15:1, 10:1 e 5:1, e C:N:P de 10:1:2, as porcentagens de degradaes foram prximas, com valor mdio de 55%. MILLS & FRANKENBERGER (1994) obtiveram aumentos de aproximadamente 50% na mineralizao do leo diesel com a adio de 100 a 500mg kg-1 de fsforo no solo. Porm, BENTO et al. (2005) no observaram diferenas entre a biorremediao passiva e a bioestimulao com N e P na remoo de Cincia Rural, v.37, n.4, jul-ago, 2007.

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hidrocarbonetos leves e pesados do solo. JACQUES et al. (2005a) adicionaram doses crescentes de nitrognio, fsforo, enxofre e ferro a um solo arenoso com fertilidade natural muito baixa e contaminado com 500mg kg-1 de antraceno, no observando aumentos da mineralizao deste HAP, havendo inclusive a reduo da mineralizao quando da adio ao solo de doses de nitrognio superiores a 50kg ha-1. Estes resultados indicam que a bioestimulao deve ser precedida de criteriosa avaliao, visando a determinar os nutrientes e as doses que necessitam ser adicionados ao solo. A compostagem uma tcnica ex situ que pode ser utilizada para o tratamento do solo contaminado com HAPs, sendo este normalmente removido do local de origem e colocado na forma de pilhas, num local que permita o controle da lixiviao e do escoamento superficial dos lquidos originados dessas pilhas. Neste solo, ser desencadeado um processo em que os microrganismos aerbios iro degradar os contaminantes orgnicos, transformandoos em material orgnico estabilizado, CO2 e gua. A eficincia da compostagem para biorremediao de solos contaminados com HAPs foi demonstrada por AHTIAINEN et al. (2002), que avaliaram em um experimento de larga escala a remoo de 10.960mg kg-1 de uma complexa mistura de HAPs num solo de uma rea de tratamento de madeira. Para isso, pilhas com 100m de solo foram revolvidas mecanicamente durante 5 meses, sendo de 96% a remoo dos HAPs com 2 e 3 anis, de 55% a remoo dos HAPs de 4 anis e de 58% a remoo dos HAPs de 5 e 6 anis aromticos. A biorremediao de solos contaminados com altas concentraes de HAPs pode ser realizada por uma tcnica ex situ que se utiliza de biorreatores. Existe uma infinidade de tipos e configuraes de biorreatores que ilustrativamente podem ser comparados a tanques areos fechados. O solo contaminado misturado com gua, de modo a formar uma suspenso com 10 a 40% de slidos, que mecanicamente aerada atravs de rotaes. A formao desta suspenso no interior do biorreator possibilita o aumento da disponibilidade dos contaminantes aos microrganismos degradadores e a eliminao da heterogeneidade da distribuio dos contaminantes no solo, duas grandes limitaes da biorremediao in situ (MACLEOD & DAUGULIS, 2005). Alm disto, no interior do biorreator, as condies ambientais de pH, a disponibilidade de nutrientes, a aerao e a temperatura so otimizadas para o mximo crescimento microbiano, sendo possvel tambm a inoculao de microrganismos comprovadamente degradadores dos contaminantes. Aps a concentrao dos

contaminantes ter sido reduzida aos nveis desejados, a suspenso desidratada e a gua pode ser reutilizada no biorreator. Em geral, as taxas e a extenso da biodegradao nesta tcnica so muito altas, em vista do controle sobre fatores abiticos, e at biticos, no interior do biorreator, o que resulta no tratamento do solo num curto perodo de tempo. Concomitantemente a isso, algumas desvantagens esto relacionadas a est tcnica, como a limitao da quantidade de solo tratado devido ao tamanho dos biorreatores e a necessidade, em alguns casos, de pr-tratamento do solo para a remoo de compostos txicos aos microrganismos (como metais pesados) e para a reduo do tamanho dos agregados do solo. Porm, o fator que normalmente limita a utilizao desta tcnica o elevado custo de remediao do solo, em vista da alta tecnologia utilizada nos biorreatores. Assim, o uso dessa tcnica restringese aos casos em que o solo est contaminado com altas concentraes do poluente e h necessidade de se realizar a biorremediao em curto perodo de tempo. Sob essas exigncias, a utilizao de outras tcnicas de biorremediao provavelmente no traria resultados satisfatrios (DOELMAN & BREEDVELK, 1999). A biorremediao de um solo contaminado com uma concentrao de 1.700mg kg-1 de uma complexa mistura de HAPs, resultante de atividade industrial entre os anos de 1908 e 1959, era dificultada pela baixa biodisponibilidade destes contaminantes aos microrganismos degradadores, em vista do longo perodo de tempo em que os HAPs permaneceram no solo. Para superar esta limitao, SAPONARO et al. (2002) utilizaram um biorreator, onde adicionaram somente nutrientes inorgnicos suspenso formada por 10% de solo contaminado e 90% de gua. Aps 34 dias de operao do biorreator, com aerao constante, a concentrao de HAPs no solo foi reduzida em 75%, em mdia, sendo que a maioria desta reduo ocorreu nos primeiros 10 dias, demonstrando que a utilizao de biorreatores uma ferramenta estratgica para obteno de resultados satisfatrios, quando h condies ambientais limitantes utilizao da demais tcnicas de biorremediao. A fitorremediao uma tcnica emergente, que utiliza plantas para remediar o solo contaminado por metais pesados, compostos orgnicos e radionucldeos. A maioria das pesquisas em fitorremediao estuda a utilizao de plantas hiperacumuladoras, que tm a capacidade de estocar grandes quantidades de metais pesados sem um uso aparente em seu metabolismo (WEIS & WEIS, 2004). Porm, a observao de que os solos vegetados mostraram maiores taxas de desaparecimento de Cincia Rural, v.37, n.4, jul-ago, 2007.

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compostos orgnicos que os solos no-vegetados resultou no incremento das pesquisas visando biorremediao de solos contaminados com agrotxicos, HAPs, solventes orgnicos, combustveis, etc. (ALKORTA & GARBISU, 2001). A fitorremediao pode ser dividida em 5 tipos principais, que so: a) rizofiltrao, que uma tcnica de tratamento de gua em que os contaminantes so removidos e retidos no tecido vegetal; b) fitoextrao, em que os contaminantes so removidos do solo e retidos no tecido vegetal; c) fitotransformao, uma tcnica que pode ser aplicada ao tratamento da gua e do solo, na qual ocorre a degradao dos contaminantes atravs do metabolismo da planta; d) fitoestimulao, em que ocorre a estimulao da atividade dos microrganismos degradadores dos contaminantes pela rizosfera da planta; e e) fitoestabilizao, quando as plantas so utilizadas para reduzir a migrao dos contaminantes no solo (PILON-SMITS, 2005). Apesar da possibilidade das enzimas das plantas degradarem HAPs e outros poluentes orgnicos (NEWMAN & REYNOLDS, 2004), a comprovao da fitotransformao nos experimentos dificultada pela forte interao solo-plantamicrorganismo, sendo que, at o momento, a fitoestimulao tem apresentado o maior nmero de pesquisas que comprovam sua eficincia na biorremediao de solos contaminados com estes compostos. JOHNSON et al. (2005) avaliaram o efeito da mistura de Trifolium repens + Lolium multiflorum na biorremediao de um solo contaminado com 1.017mg kg-1 de uma mistura de 16 HAPs. Aps 180 dias, o solo vegetado apresentou uma concentrao destes poluentes 19% menor e uma populao de microrganismos degradadores 24 vezes maior que o solo no-vegetado. No solo estril (sem a presena de microrganismos), as plantas no degradaram os HAPs, indicando que o aumento da degradao destes contaminantes no solo vegetado se deveu aos microrganismos, sendo sua populao grandemente estimulada pela presena das plantas. O landfarming uma tcnica de biorremediao muita utilizada para o tratamento de solos contaminados com hidrocarbonetos. Os microrganismos heterotrficos da camada superficial do solo so estimulados a degradar os contaminantes ali presentes, transformando-os em substncias inertes como o material orgnico estabilizado, gua e CO2. Esta estimulao ocorre atravs do revolvimento do solo por operaes de arao e gradagem (visando a aerar e homogeneizar as camadas com diferentes concentraes de contaminantes), alm da adio de corretivos, fertilizantes e, se necessrio, de gua atravs

da irrigao. Pode-se ainda bioaumentar o solo com microrganismos de reconhecida capacidade de degradao desses contaminantes e adicionar surfactantes, visando a aumentar a biodisponibilidade dos contaminantes. Esta tcnica pode ser realizada in situ e visa a descontaminar o solo no local onde este foi contaminado, ou pode ser realizada ex situ, se o solo contaminado foi removido para outro local onde o lanfarming ser operado (DOELMAN & BREEDVELK, 1999). O landfarming pode ser considerado tambm um sistema de tratamento de resduos. Nesse caso, uma rea destinada exclusivamente para este fim. Os resduos com alta concentrao de carbono orgnico so aplicados periodicamente no solo, visando degradao de seus constituintes. Quando o monitoramento indicar a reduo da concentrao dos constituintes do resduo no solo, deve ser feita nova adio de resduo (WARD et al., 2003). Se os resduos tratados apresentarem componentes txicos, a operao do landfarming dever ser licenciada pelas agncias de proteo ambiental. Alm disso, para evitar a contaminao do ambiente, a rea deve ser impermeabilizada com uma camada de argila compactada a uma profundidade de 0,6 a 1,0m abaixo da superfcie, assim como deve-se conter o escoamento superficial. As refinarias e indstrias petroqumicas de vrios de pases, inclusive do Brasil, utilizam o landfarming para o tratamento dos seus resduos slidos. A escolha deste sistema deveu-se simplicidade de operao e alta taxa de aplicao dos resduos ao solo, que varia de 83 a 252m ha-1 ano-1, reduzindo dessa forma o custo por unidade de volume de resduo tratado (SIMS & SIMS, 1999). No entanto, erros na operao do landfarming e condies ambientais desfavorveis atividade microbiana durante alguns perodos do ano podem reduzir as taxas de degradao. Alm disso, sua utilizao in situ limitada aos casos de contaminao superficial do solo, sendo que, nos casos de contaminao subsuperficial, faz-se necessrio a remoo e o tratamento ex situ. A tabela 1 resume, comparativamente, as tcnicas de biorremediao discutidas nesta reviso. Salienta-se que todos os relatos so de trabalhos realizados a campo, visando ao tratamento de grandes quantidades de resduos ou de grandes volumes de solo. Apesar de as particularidades de cada local dificultarem as comparaes, percebe-se que h diferenas significativas na concentrao inicial, no tempo e na porcentagem de remoo dos contaminantes. O conhecimento dessas variveis, assim como do custo econmico, da dependncia de condies ambientais, da aceitao pblica e dos Cincia Rural, v.37, n.4, jul-ago, 2007.

Biorremediao de solos contaminados com hidrocarbonetos aromticos policclicos.

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Tabela 1 - Aplicaes das tcnicas de biorremediao para a remoo de hidrocarbonetos no solo, em condies de campo. Concentrao inicial (mg kg-1) 18.000 69.700 69.700 10.960 50.000 488,7 46.000 Tempo (dias) 480 360 360 150 12
1

Tcnica Biorremediao passiva Bioaumentao Bioestimulao Compostagem Biorreator Fitorremediao Landfarming

Contaminante Petrleo Resduo petroqumico Resduo petroqumico HAPs Resduo petroqumico Pireno Hidrocarbonetos

Remoo (%) 56 92 90 70 99 36,13 (85,02) 55

Referncia CHAINEAU et al. (2003) MISHRA et al. (2001) MISHRA et al.(2001) AHTIAINEN et al. (2002) WARD et al. (2003) LING & GAO (2004) MARIN et al. (2005)

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Remoo dos contaminantes ao final do perodo de avaliao em relao ao tratamento sem plantas. Entre parnteses, a remoo dos contaminantes em relao ao incio do perodo de avaliao.

impactos ambientais das tcnicas fundamental na escolha e aplicao do processo de biorremediao. Por outro lado, esses dados demonstram que a biorremediao est sendo utilizada em larga escala em outros pases, com resultados satisfatrios. Esta biotecnologia apresenta grandes possibilidades de desenvolvimento no Brasil, uma vez que o pas apresenta condies climticas mais favorveis biodegradao que os pases do hemisfrio norte, podendo tornar a biorremediao uma alternativa eficiente para a remoo dos contaminantes do ambiente. CONCLUSES Em vista da ampla distribuio dos HAPs no ambiente, da possibilidade de ocasionarem problemas sade de humanos e animais, e dos limites impostos pela legislao ambiental, sua eliminao do ambiente deve ser buscada, visando reduo da exposio e da absoro pelo organismo dos mamferos. A biorremediao uma alternativa para a remoo dos HAPs do solo, na qual os microrganismos degradadores iro transform-los em substncias inertes, CO 2 e gua. Em vista de a maioria dos microrganismos do solo no possurem a capacidade de degradar estes compostos, h necessidade de se isolar e selecionar os microrganismos degradadores. Nesta seleo, alm da capacidade de degradao in vitro, deve ser considerada a capacidade de colonizar e degradar o contaminante no solo. Fatores ambientais

como disponibilidade de gua e oxignio, temperatura, pH e disponibilidade de nutrientes inorgnicos influenciam a sobrevivncia e a atividade dos microrganismos degradadores, sendo necessrio manej-los de forma a possibilitar condies adequadas para a manuteno da populao inoculada ao solo. A baixa biodisponibilidade de HAPs aos microrganismos degradadores, devido soro fase slida orgnica ou mineral do solo, tambm pode limitar a biorremediao. Visando a superar todas estas limitaes biticas e abiticas que influenciam a biorremediao dos solos contaminados com HAPs, foram desenvolvidas vrias tcnicas de biorremediao, entre elas a biorremediao passiva, a bioaumentao, a bioestimulao, a fitorremediao, o landfarming, a compostagem e o uso de biorreatores. Para a obteno de resultados satisfatrios, de fundamental importncia o conhecimento dos princpios e das aplicaes dessas tcnicas, de forma a possibilitar a seleo e a utilizao correta, de acordo com as condies especficas de cada local e de cada contaminante presente. Alm disso, variveis como investimento inicial e de operao, volume de solo tratado, tempo de remediao, dependncia de condies ambientais, aceitao pblica e impacto ambiental, entre outros, tambm devem ser consideradas para que o processo de biorremediao seja eficiente, de baixo impacto ambiental e economicamente vivel. Esta biotecnologia j teve sua eficincia comprovada em outros pases e apresenta grandes possibilidades de desenvolvimento no Brasil. Cincia Rural, v.37, n.4, jul-ago, 2007.

1200 REFERNCIAS

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