UNIVERSIDAD PRIVADA SAN PEDRO

F A CU LTA D D E M E D I C I N A HU M A NA ESCUELA DE FARMACIA Y BIOQUMICA

Curso: Tecnologia Farmaceutica Tema: OPERACIONES BSICAS :

Docente: Daniel Antonio Velasquez Alumna: Torres Portocarrero Deybi Ciclo: VI

OPERACIONES BSICAS: ESTERILIZACIN INTRODUCCION: No se puede hablar de esterilizacin sin considerar el concepto de microorganismo. Un microorganismo es un agente microscpico vivo e imperceptible a los sentidos que generalmente est agrupado en colonias, aunque bien puede estar como una unidad formadora de colonias (U.F.C.), la que se desarrolla en un medio apropiado para formar colonias perceptibles. Los microorganismos pueden ser patgenos (productores de ciertas enfermedades) o banales (los habitualmente hallados en los alimentos, el aire, el polvillo ambiental, que no perjudican al hombre. El hecho de que existan distintos tipos de grmenes en el medio ambiente, crea grandes dificultades en los estudios bacteriolgicos, cuando es necesario obtener las especies microbianas en estado de pureza, ya que tanto el instrumental como los medios de cultivo son invadidos con suma facilidad por los microbios del medio ambiente. Con el fin de subsanar stos inconvenientes se practica la esterilizacin, procedimiento que consiste en destruir todos los grmenes vivos que existan sobre los objetos o sustancias que se desean libre de ellos (aspticos). Los Microorganismos pueden clasificarse en criorresistentes, que son los resistentes al fro y termorresistentes o resistentes a las altas temperaturas, aunque la clasificacin ms comn es por la temperatura a la que se reproducen. As se los puede clasificar en Crifilos (-5 a 14 C); Mesfilos (25 a 47 C) y Termfilos (50 hasta 113 C). Por ejemplo, muchos hongos se destruyen con la temperatura, pero sus esporas an son viables y cuando encuentran un medio apropiado, rico en nutrientes y humedad, se reproducen. Por tal motivo la tecnologa para su destruccin debe considerar stas variables.

LA ESTERILIZACIN Puede definirse como la ausencia de todas las formas de vida viables . en la paractica , la muerte de un microorganismo se akcanza cuando no es posible detectarlo en un medio de cultivo en el cual ha mostrado que es capaz de proliferar . El proceso de esterilizacin es un proceso dinamico que se ve infliuenciado por el grado inicial de contaminacin que puede terner el material de partida, asi como los equipos y las condiciones de trabajo que deben estar controladas adecuadamente para ser desfavorables a la introduccion o desarrollo de microorganismos.

La inactivacin de microorganismos mediante el empleo de procesos de esterilizacin implica dao irrevcersible en algunas estructuras moleculares celulares. Asi la exposicin a agentes esterilizantes puede producir deterioro del material que se va esterilizar. Esto es especialmente relevante en aquellos preparados farmacuticos en los que los procesos de esterilizacin no debe producir cambios que puedan causar efectos indeseables sobre el paciente o que reduzcan la eficiencia teraputica . Como consecuencia es necesario buscar un equilibrio adecuado entre el mximo nivel de esterlilidad aceptable y el minimo de efectos adversos producido sobre el material a esterilizarse.

TECNICAS DE ESTERILIZACION: CLASIFICACION La esterilizacin de un producto se puede conseguir mediante el empleo de distintos procesos . la eleccin de la tcnica mas apropiada depende de las condiciones de estabilida del producto que va a ser sometido a esterilizacin . En funcin del qgente empleado puede casificarse en: Esterilizacin por agentes fsicos Esterilizacin por agentes qumicos.

ESTERILIZACION POR AGENTES FSICOS: CALOR

La utilizacin de este mtodo y su eficacia depende de dos factores: el tiempo de exposicin y la temperatura. Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la accin del calor. El calor provoca desnaturalizacin de protenas, fusin y desorganizacin de las membranas y/o procesos oxidantes irreversibles en los microorganismos.

FUEGO DIRECTO: Este procedimiento consiste en exponer a la llama de un mechero de Bunsen el objeto que se desea esterilizar. Cuando ste es de metal se deja permanecer en el rea de reduccin de la llama hasta que se ponga al rojo (asas de cultivo; algunas agujas, etc) . Si es de vidrio se deja un tiempo prudencial, procurando que la llama llegue a todos lados. Antes de utilizar el objeto esterilizado es necesario dejarlo enfriar en un sitio asptico. Este procedimiento tiene limitaciones debido a que deteriora los objetos y si son de gran volumen, la esterilizacin nunca es perfecta.

CALOR SECO El calor seco produce desecacin de la clula, esto es txico por niveles elevados de electrolitos y fusin de membranas, residuos que quedan adheridos al objeto estril. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que estn en contacto con stos. An as se sigue utilizando el calor seco en todos los laboratorios para la esterilizacin de diferentes sustancias y materiales La accin destructiva del calor sobre protenas y lpidos componentes o nutrientes de los microorganismos, requiere mayor temperatura cuando el material est seco o la actividad de agua del medio es baja.

ESTUFAS DE CALOR SECO Para esterilizar por intermedio del aire caliente es necesario colocar los objetos en aparatos especiales llamados ESTUFAS. Y llevar el aire interior a una temperatura entre 150 y 190 C. Uno de los primeros aparatos utilizados para este fin fu el horno de Pasteur, que luego se sustituy por estufas de aire caliente. Estas constan de una doble cmara, el aire caliente generado por una resistencia elctrica circula por la cavidad principal y por el espacio entre ambas cmaras, a temperaturas vatriables, siendo la ms aconsejadas 170 C para el instrumental metlico y a 140 C para el contenido de los tambores. Se mantiene una temperatura estable mediante termostatos de metal denominados de par bimetlico, consistente en dos metales de distinto coeficiente de dilatacin. Cuando uno se dilata, el otro no lo hace y se arquea. Uno de los extremos de ste dispositivo se halla en contacto con un interruptor que corta la alimentacin de la resistencia calefactora. Un proceso esterilizacin en estufa consta de las siguientes fases: Fase de secado: en esta fase se produce la entrada del aire del exterior a travs de unos filtros especiales y es calentado y posteriormente impulsado al interior de la cmara donde capta la humedad del material favoreciendo de esta manera su secado. Fase de calentamiento: el aire es calentado a trafws de kas resistencias y se hacer recircular a travs de los filtros. Fase de esterilizacin: una vez alcanzado la temperatura requerida se mantiene la recirculacin del aire en el interior durante el tiempo que dura el proceso. Fase de enfriamiento: en esta fase se produce una reduccion de la temperatura gasta alcanzar una que permita la manipulacin de los productos esterilizados.

MODERNIZACIN EN EL DISPOSITIVO DE CONTROL DE TEMPERATURA: Se ha logrado controlar la temperatura mediante un circuito electrnico que utiliza el microprocesador 555, utilizando como sensor una termorresistencia. Esta baja la resistencia a la corriente al aumentar la temperatura y la seal es enviada al procesador, el que corta un rel que alimenta la corriente de la resistencia de calefaccin. Tanto ste como otros dispositivos electrnicos ofrecen extrema sensibilidad de control, ya apto mas para estufas de cultivo que para esterilizacin. Ventajas del calor seco:

No es corrosivo para metales e instrumentos. Permite la esterilizacin de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias viscosas no voltiles.

Desventajas: *Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo, debido a la baja penetracin del calor.

CALOR HMEDO

El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas. Estos efectos se deben principalmente a dos razones: *El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas estructuras biolgicas son producidas por reacciones que eliminan agua. *El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho ms elevado que el aire.

Antecedentes: El primer antecedente fue la marmita de Papin en 1681, semejante a una olla a presin que permita mantener el agua por encima de los 100 C. En 1830 William Henry, mdico de Manchester; trataba ropa y otros utensilios provenientes de personas infectadas exponindolos en una vasija a vapor recalentado y aire caliente obteniendo el material libre de infeccin. Pasteur en 1876, Koch y Wolffhugel en 1881 dan los fundamentos de la esterilizacin por calor seco y calor hmedo: 30 minutos a 110 - 120 C de exposicin al vapor eran equivalentes a una hora de calor seco a 130 - 150 C. En 1884 aparece en Pars con el nombre de Chamberland un equipo para usar en laboratorio, el que luego se masificara en todos los laboratorios biolgicos.

AUTOCLAVE

Se realiza la esterilizacin por el vapor de agua a presin. El modelo ms usado es el de Chamberland. Esteriliza a 120 a una atmsfera de presin (estas condiciones pueden variar) y se deja el material Equipo: Consta de una caldera de cobre, sostenida por una camisa externa metlica, que en la parte inferior recibe calor por combustin de gas o por una resistencia elctrica. La caldera se cierra en la parte superior por una tapa de bronce sujetada por bulones, mariposas o charnelas. Esta tapa posee tres orificios, uno para el manmetro, otro para el escape de vapor en forma de robinete (tambin llamado espita) funciona por contrapeso o a resorte. y el tercero, para una vlvula de seguridad que durante 20 a 30 minutos.

FUNCIONAMIENTO Y MTODO PARA ESTERILIZAR ADECUADAMENTE EN AUTOCLAVE

Se coloca agua en la caldera, procurando que su nivel no alcance a los objetos que se disponen sobre una rejilla o canasta de metal. Se cierra asegurando la tapa, ajustando los bulones y se da calor, dejando abierta la vlvula de escape hasta que todo el aire se desaloje y comience la salida de vapor en forma de chorro continuo y abundante. Se cierra la espita de vapor y se espera hasta que llegue a la temperatura adecuada. A partir de all se cuenta el tiempo de esterilizacin, luego del cual se debe esperar al descenso de la temperatura para abrir la espita de purga y la tapa del autoclave nuevamente. Este proceso de esterilizacin es el que mejor resultados d en microbiologa. El vapor de agua a fuerte presin acta a mayores temperaturas: Tiempos de esterilizacin en autoclave: Del tiempo, temperatura y presin usados en la esterilizacin depende el xito alcanzado. Generalmente los datos presin y temperatura son fijados, y el nico factor que se vara es el tiempo. Los materiales necesitan diferentes tiempos de esterilizacin dependiendo de su textura, porosidad, y otras caractersticas propias de cada material. Algunos materiales como el hule,

necesitan poco tiempo, mientras otros como el metal quirrgico necesitan ms. Los siguientes datos han sido tomados para una temperatura de esterilizacin de 250F (121C) a 15-20 PSI. Guantes de Caucho (Hule) 15 minutos Sondas (base tejida) 15 minutos Sondas (ltex) 15 minutos Frascos de Vidrio, Cristalera en General 20 minutos Agua en frascos 20 minutos Jeringas de Vidrio 20 minutos Bandeja 30 minutos Equipo de transfusin 30 minutos Paquetes de maternidad 30 minutos Ropa 30 minutos Torundas 30 minutos Paquete quirrgico 45 minutos Instrumental de acero inoxidable 45 minutos *Cuando se esteriliza se deben hacer paquetes bien cerrados y bien ordenados, para que haya buena penetracin de vapor en el material. No incluir dentro del mismo paquete material con diferentes tiempos de esterilizacin. Ej. : Lencera y Vidrio. El mtodo utilizado para envolver los paquetes deber garantizar el mantenimiento de las condiciones de esterilidad de los materiales durante su almacenamiento. Como Cargar el Autoclave a) Se deben acomodar los bultos o paquetes de tal forma que haya una libre circulacin de vapor entre ellos (no tratar de llenar el autoclave hasta sobrecargarlo). b) Colocar de lado las botellas, frascos y cualquier clase de recipiente no poroso de material seco. Esto permite un pronto desplazamiento del aire y un rpido contacto del vapor con las superficies de las vasijas y su contenido. Tambin facilita el secado. c) Esterilizar los lquidos separndolos de otros materiales. d) Cuando se esterilizan lquidos, debe hacerse con los recipientes destapados. e) La cristalera deber esterilizarse colocando los recipientes boca abajo u horizontales (nunca con la boca hacia arriba).

TYNDALIZACIN:

Esterilizacin por accin discontinua del vapor de agua, se basa en el principio de Tyndall Las bacterias que resisten una sesin de calefaccin, hecha en determinadas condiciones, pueden ser destruidas cuando la misma operacin se repite con intervalos separados y en varias sesiones. Se efecta por medio del autoclave de Chamberland, dejando abierta la vlvula de escape, o sea funcionando a la presin normal. Puede tambin realizarse a temperaturas ms bajas, 56 u 80 para evitar la descomposicin de las sustancias a esterilizar, por las temperaturas elevadas. Ventajas del calor hmedo:

Rpido calentamiento y penetracin Destruccin de bacterias y esporas en corto tiempo No deja residuos txicos Hay un bajo deterioro del material expuesto Econmico

Desventajas:

No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metlicos.

EBULLICIN Durante mucho tiempo se hirvieron los utensilios y materiales quirrgicos o jeringas hipodrmicas para esterilizarlas. El agua a 100 C no garantiza una adecuada esterilizacin, no obstante posee la propiedad de desprender las colonias o los microorganismos y destruir aquellos que son susceptibles a sta temperatura. Un claro ejemplo de ello fue el sistema utilizado hasta hace pocos aos para esterilizar jeringas de vidrio y agujas hipodrmicas de nquel con embocadura de bronce en el mejor de los casos, platino, hirvindolos en agua.

FILTRACIN: Este procedimiento es aplicable a la esterilizacin de lquidos y gases, especialmente los primeros. Cuando el lquido a filtrar no puede resistir, sin descomponerse , la accin del calor, se aplica la tcnica de filtracin, la que puede efectuarse mediante presin o aspiracin. Se basa en el pasaje de lquidos a travs de sustancias porosas que detienen a los microbios. Los antiguos filtros se fabricaban en forma de bujas que son cilindros huecos abiertos por una extremidad y cerrados por otra, de paredes de espesor variable.

La filtracin se reconoci como tcnica de esterilizacin a partir de las observaciones de Koch en 1893, con la epidemia de clera y la presencia del vibrin en el agua. En la actualidad se usan membranas filtrantes con poros de un tamao determinado. El tamao del poro depender del uso al que se va a someter la muestra. Los filtros que se utilizan no retienen virus ni micoplasmas, estos ltimos estn en el lmite de separacin segn el dimetro de poro que se utilice. La filtracin se utiliza para emulsiones oleosas o soluciones termolbiles. Su usa para esterilizar aceites, algunos tipos de pomadas, soluciones oftlmicas, soluciones intravenosas, drogas diagnsticas, radiofrmacos, medios para cultivos celulares, y soluciones de antibiticos y vitaminas. Existen tres tipos bsicos de filtros:

a- Filtros profundos o Filtros de profundidad: Consisten de un material fibroso o granular prensado, plegado, activado, o pegado dentro de los canales de flujo. En este tipo de filtros la retencin de las partculas se produce por una combinacin de absorcin y de retencin mecnica en la matriz. b- Membranas filtrantes: Tienen una estructura continua, y la retencin se debe principalmente al tamao de la partcula. Partculas ms pequeas al tamao del poro quedan retenidas en la matriza del filtro debido a efectos electrostticos.

papel siliconado para su proteccin debido a la fragilidad de la misma, la ue debe ser monada en un soporte estril y que permita el ingreso del lquido a esterilizar a presin. c- Filtros de huella de nucleacin (Nucleoporo): Son pelculas muy delgadas de policarbonato que son perforadas por un tratamiento conjunto con radiacin y sustancias qumicas. Son filtros con orificios muy regulares que atraviesan la membrana verticalmente. Funcionan como tamices, evitando el paso de toda partcula con un tamao mayor al del poro.

APLICACIONES La filtracin esterilizante en la industria farmacutica se utiliza fundamentalmente en dos situaciones: Para la esterilizacin de productos en estado liquido que contienen sustancias termolbiles (que no resisten la esterilizacin por calor) .este caso es de los productos que contienen protenas , como sueros , plasmas o soluciones de anticuerpos y de disoluciones de frmacos lbiles al calor.

 Para filtar aire en zonas de procesamiento aseptico (zonas limpias y cabinas de flujo laminar) RADIACIN: Su accin depende de:

El tipo de radiacin El tiempo de exposicin La dosis Producen iones

Radiaciones Ionizantes:

y radicales libres que alteran las bases de los cidos nucleicos, estructuras proteicas y lipdicas, y componentes esenciales para la viabilidad de los microorganismos.

Tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales termolbiles (termosensibles) como jeringas descartables, sondas, etc. Tambien se usa para esterilizar medicamentos en estado solido lbiles al calor. Asi la radiacin ionizante se usa para la estelilizacion de vitaminas , antibiticos, esteroides, hormonas,etc. Se utilizan a escala industrial por sus costos. Ventajas: Se produce solo un ligero incremento de la stemperatura en el producto esterilizado El proceso de esterilizacin es fcil de controlar. Se puede utilizar para esterilizar productos en un proceso continuo . Rayos Ultravioleta: Afectan a las molculas de DNA de los microorganismos. Son escasamente penetrantes y se utilizan para superficies, se utilizan para la esterilizacin en quirfanos. Aplicaciones : Las radiaciones UV se utilizan principalmente para reducir la contaminacin del aire, del agua, y de superficies de las zonas de procesamiento de los productos farmacuticos.

Rayos Gamma: Su empleo esta basado en los conocimientos sobre la energia atomica. Este tipo de esterilizacin se aplica a productos o materiales termolbiles y de gran importancia en el campo industrial. Puede esterilizar antibiticos, vacunas, alimentos, etc. Control de calidad: La correcta esterilizacin se puede controlar mediante dos mtodos, siendo el segundo el ms seguro. Indicadores: Cintas comerciales que se colocan en el paquete o caja a esterilizar, que viran de color, cuando se alcanzan las temperaturas adecuadas para la esterilizacin. Pruebas de cultivo: Tambin pueden colocarse grmenes vivos, especialmente esporulados y los que presentan mayor resistencia como el bacilus subtilis o el b. Mesentericus de la papa (tambin responsable de la filamentacin en el pan), esterilizndose conjuntamente con el material para luego sembrar una suspensin de los grmenes para observarse en agar nutritivo a las 24 Hs. Si existe o n desarrollo de colonias. ESTERILIZACION POR AGENTES QUMICOS:

Estos mtodos provocan la perdida de viabilidad de los microorganismos. En comparacin con los procedimientos fsicos, stos mtodos tienen una importancia secundaria. Los antispticos son considerados venenos protoplasmticos que, al actuar sobre los grmenes, los destruyen. Algunos de ellos ejercen su accin nociva sobre todas las clulas, por lo cual se les considera venenos generales, por el contrario otros actan sobre algunas especies bacterianas, mostrndose como venenos especficos. Este mtodo es ptimo para la antisepsia de las manos del operador, de locales, de mesas de trabajo, de jaulas de animales, y para destruir grmenes que puedan caer en lugares de trabajo.

AGENTES QUMICOS

La Iodopovidona (pervinox), el Cloruro de Benzalconio (sal de amonio cuaternario o Cloruro de Zefirano) son ejemplos de antispticos tiles para desinfectar manos y superficies. Cuando la superficie es resistente, el mejor agente biocida es el Hipoclorito de Sodio (agua lavandina).

ESTUFAS DE ESTERILIZACION POR OXIDO DE ETILENO

Destruye

todos

los

organismos

microorganismos conocidos, incluso esporas y virus. Esteriliza sin deterioro artculos de goma, plstico, metal, madera, lana, piel, papel, productos farmacuticos (materiales mdicos quirrgicos, agujas, jeringas, etc. ).

Esterilizacin con embalajes: a este gas son permeables sustancias como polietileno, nylon, celofn, etc.

El tiempo de esterilizacin que requiere el material depende de mltiples variables, el vaco que se produce, la humedad, la concentracin del gas expresado en gs./l y la temperatura, es decir que reduciendo la temperatura aumenta el tiempo de exposicin requerido.

El gas se adquiere en botellas metlicas o cartuchos que se vaporizan, cambian de lquido a gas a 10 Todos los artculos debern airearse por 6 hs. despus de una C. esterilizacin.

El Oxido de etileno es un agente alquilante que se une a compuestos con hidrgenos lbiles como los que tienen grupos carboxilos, amino, sulfhidrilos, hidroxilos, etc.

Es utilizado en la esterilizacin gaseosa, generalmente en la industria farmacutica. Destruye todos los microorganismos incluso virus. Sirve para esterilizar material termosensibles como el descartable (goma, plastico, papel, etc.), equipos electrnicos, bombas cardiorrespiratorias, metal, etc. Es muy peligroso por ser altamente inflamable y explosivo, y adems cancerigeno.

ALDEHDOS

Son agentes alquilantes que actan sobre las protenas, provocando una modificacin irreversible en enzimas e inhiben la actividad enzimtica. Estos compuestos destruyen las esporas.

Glutaraldehdo: Consiste en preparar una solucin alcalina al 2% y sumergir el material a esterilizar de 20 a 30 minutos, y luego un enjuague de 10 minutos.

Este mtodo tiene la ventaja de ser rpido y ser el nico esterilizante efectivo fro. Puede esterilizar plstico, goma, vidrio, metal, etc. FORMALDEHDO:

Se utilizan las pastillas de paraformaldehido, las cuales pueden disponerse en el fondo de una caja envueltas en gasa o algodn, que despus pueden ser expuesta al calor para un rpida esterilizacin (accin del gas formaldehdo). Tambin pueden ser usadas en Estufas de Formol, llamadas tambin de formalina, que son cajas de doble fondo, en cuya base se colocan las pastillas y se calienta hasta los 60 C y pueden esterilizar materiales de ltex, goma, plsticos, etc.

Las pastillas de formalina a temperatura ambiente esterilizan en 36 hs.

Bibliografa: 1-Carlos M. Barzizza Microbiologa Tomo 1 y 2 Librera Hachette, Bs. As, 2000. 2-Microbiologa de ZINSSER. Revisada por Smith y Martn. UTHEA 2005. 6- A manual of Bacteriology H. Williams- Blakistons son & Co, 2009.7- Catlogo Cat-Lab. Editorial Elefantre, 2003-2005.