Você está na página 1de 24

FOTOTRANSDUO MODELO DE TRANSMISSO DO SINAL ATRAVS DE MEMBRANAS CELULARES A.

Rocha-Sousa

Integrada nas Provas de Aptido Pedaggica e Capacidade Cientfica apresentadas a 28 de junho de 2001 Faculdade de Medicina da Universidade do Porto
Correspondncia: A. Rocha-Sousa Servio de Fisiologia Faculdade de Medicina da Universidade do Porto Al. Prof. Hernni Monteiro 4200-319 Porto Portugal Email: arsousa@med.up.pt

Resumo:

A fototransduo um exemplo elucidativo do papel das protenas estruturais de membrana e dos segundos mensageiros celulares na transduo celular do sinal extracelular. Integra os mecanismos de modulao celular, pelo clcio (Ca2+) e a regulao dos nveis de GMPc por protenas reguladoras. Tais fenmenos so modificados conforme o meio est ou no iluminado (fotpico, escotpico). No presente artigo, o autor apresenta a fototransduo como um modelo de integrao do sinal extracelular, incluindo a descrio dos fenmenos que a complementam, como a hiperpolarizao do fotorreceptor e a sua regulao. Abstract:

Phototransdution is an example of the structural proteins and second messengers role in the transudation of the extracellular signal. It involves the Calcium and cGMP cellular modulation mechanisms by some regulatory proteins. Phototransdution is regulated by a conjunct of proteins involved in the signal transmission and intracellular modulation, modified as the background is illuminated or not (photopic and scotopic). The cellular transmission of the light signal is in the basis of all visual process. In this article phototransduction is presented as a model of cellular signal transduction. Also we do a review of the other different phenomena that take place in the photoreceptor as a consequence of phototransduction, its hyperpolarization and the related regulation mechanisms.

INTRODUO A fototransduo um fenmeno de transmisso do sinal foto-qumico envolvendo protenas de membrana, sistemas de 2 mensageiros e por fim uma forma diferente de transmisso do potencial elctrico celular. Ao contrrio do esquema clssico de transmisso do sinal elctrico em clulas polarizadas, estamos aqui perante uma clula permanentemente despolarizada, ou melhor com uma corrente elctrica intracelular constante ocorrendo a transmisso do sinal durante a interrupo desta mesma corrente. A presena de uma corrente elctrica conduz libertao do neurotransmissor, enquanto a sua interrupo o inibe promovendo a transmisso do sinal luminoso. A fototransduo um exemplo elucidativo do papel das protenas estruturais de membrana e dos segundos mensageiros celulares na transduo celular do sinal extracelular. So apresentados os mecanismos de modulao celular, pelo clcio (Ca2+) e a regulao dos nveis de GMPc por de protenas reguladoras, moduladas pelos mesmos. Trata-se de um conjunto de protenas reguladoras da transmisso do sinal e sua modulao intracelular, com diferentes variaes conforme o meio est ou no iluminado (fotpico, escotpico). Tentaremos efectuar a integrao destas funes celulares durante o decorrer de um fenmeno que est na base da viso, a transduo celular do sinal luminoso.

ORGANIZAO CELULAR DA RETINA O desenvolvimento da retina A retina nervosa constitui uma extenso externa do dincefalo, sendo o nervo ptico um feixe nervoso que conecta a retina com os outros centros nervosos, no apresentando caractersticas de nervo perifrico. O olho humano desenvolve-se a partir das vesculas prosenceflicas laterais geradas durante a terceira semana de desenvolvimento. Estas vesculas aumentam e progressivamente, inicialmente nas suas superfcies dorsais e laterais

formam a taccula ptica, composta de duas paredes, com orientao lateroventral. A cavidade no interior das duas paredes representa a continuao da cavidade do tubo neural, tornando-se no entanto uma cavidade virtual, aquando da obliterao desta comunicao no pedculo ptico. Este espao subretiniano mantm-se virtual durante toda a vida, excepto em situaes de descolamento de retina em que se torna real. A retina desenvolve-se a partir do neuroepitlio pseudo-estratificado, cujas clulas finas e altas percorrem toda a sua espessura, atingindo a superfcie interna e externa. Dentro das clulas deste epitlio os ncleos migram para a superfcie ventricular, dando-se as divises celulares a este nvel. Algumas destas clulas param o processo de diviso e iniciam a
MLI FNO C.G CPI CNI CPE CNE MLE SI SE EP

diferenciao originando um dos vrios tipos celulares nervosos ou gliais da retina madura. As primeiras clulas diferenciadas so as clulas vtrea. ganglionares, No que que o constituem a camada mais prxima da superfcie respeita que formao de sinapses esta inicia-se nos fotorreceptores, constatando-se desenvolvimento sinptico no se processa na sequncia do aparecimento das clulas diferenciadas. histolgica da retina continua a

Figura 1- Diviso histolgica da retina. Corte em microscopia de luz: EP- epitlio pigmentado; SE, segmento externo dos fotrreceptores; SI, segmento internos dos fotorreceptores; MLE, membrana limitante externa; CNE, camada nuclear externa; CPE, camada plexiforme externa; CNI, camada nuclear interna; CPI, camada plexiforme interna; CG camada das clulas ganglionares; FNO, camada das fibras do nervo ptco; MLI. membrana limitante interna. Adaptado de Cohen, 1992.

Progressivamente

estrutura

individualizar-se com a formao de 3 camadas de clulas com os corpos

celulares (camada nuclear interna, nuclear externa e das clulas ganglionares) e camadas intermdias que constituem as sinapses. (plexiforme interna e plexiforme externa). Histologicamente a retina fica finalmente formada por 10 camadas, que se estendem desde o epitlio pigmentado at membrana limitante interna, interface com a membrana hioloideia posterior do vtreo. (figura 1)(Cohen, 1992). Os fotorreceptores Na camada de fotorreceptores identificmos 4 tipos diferentes de clulas caracterizadas pela sua forma, distribuio espacial, caractersticas bioqumicas e capacidade de absoro de luz de diferentes comprimentos de onda. Estes tipos celulares agrupam-se em dois tipos de fotorreceptores, os cones e os bastonetes. Os bastonetes so clulas com uma sensibilidade espectral maior para a luz azul-verde com um pico de sensibilidade localizada nos 500 nm de comprimento de onda de luz. A presena de um s tipo de bastonetes no universal. H rpteis com dois tipos de bastonetes sensveis respectivamente ao azul e ao verde (Walls, 1934; Liebman e Entire, 1968). Os cones dividem-se, nos primatas, em 3 tipos celulares diferentes designados por curto, mdio e longo comprimento de onda. As sensibilidade de maior absoro de luz situam-se nos 420 nm para os cones de curto comprimento de onda (cones azuis) (De Monasterio e col., 1981; Szel e col., 1988), 531 nm para os de mdio comprimento de onda (cones verde) e 558 nm para os de longo comprimento de onda (cones vermelhos) (Marc e Sperling, 1977; Gouras, 1986) (figura 2). A existncia de 3 tipos de cones no universal no reino animal. A maioria dos
Figura 2- Absorvncia mdia dos quatro pigmentos visuais humanos. Circulos fechados-bastonetes (496 nm); quadradoscones azuis (419 nm); triangulos-cones verdes(531 nm); circulos abertos-cones vermelhos (558 nm).; linhas a cheio- curvas calculadas com o uso de um nomograma Adaptado de Dartnall HJA et col. Microspectrophotometry of human photoreceptors: in Molon Jd, Sharpe L.T. eds. Color Vision, 1983, copyright by Academic Press, Inc [London] Ltd

mamferos que

possuem 5

dois tipos

tipos

de

cones de

(dicromatas), havendo no entanto alguns peixes possuem diferentes

fotopigmentos (Bowmaker e col., 1991; Hisatomi e col. 1997). A sensibilidade espectral est directamente correlacionada com o fotopigmento presente no segmento externo do fotorreceptor. Trata-se da rodopsina nos bastonetes e das opsinas dos cones. O quinto pigmento de comprimento de onda intermdio mdio-curto (MS) tem um espectro de absoro de 452 nm e encontra-se distribudo em clulas com forma de bastonete (Hisatomi e col., 1998). Os vrios fotopigmentos tm uma origem comum, derivam duma molcula ancestral que originou dois grupos de pigmentos, um de curto e outro de longo comprimento de onda e estes posteriormente originaram as molculas existentes ao longo da filogenia (Takanuga e col., 1999). Subdiviso celular dos fotorreceptores Os fotorreceptores dividem-se em 4 pores subcelulares. O segmento externo, o segmento interno, o corpo e o pedculo celular (Cohen, 1972). O segmento externo constitudo por um conjunto de discos derivados da membrana celular impregnados de fotopigmentos responsveis pela fototransduo. Nos meados do sculo passado Schultze dividiu os fotorreceptores em cones e bastonetes conforme a forma do segmento externo, sendo semelhante a um basto nos bastonetes e cnica nos cones. Apesar destas caractersticas, existem espcies em que esta distino no fcil, podendo mesmo, em algumas tornar-se impossvel. Os segmentos externos so compostos por um conjunto de discos membranares resultantes do pregueamento da membrana celular em sucessivas camadas. Este processa-se mantendo a comunicao entre os espaos membranares e o espao extracelular.

Segmento externo Discos livres Membrana plasmtica Membrana pregueada

H
Segmento externo

diferenas

entre

estrutura dos discos membra-nares dos bastonetes e dos cones (figura 3). No bastonete os discos membranares esto rodeados por

Clio

Clio

uma membrana celular contnua que se interrompe na base. O permetro incisuras dos que ao bastonetes penetram centro do em disco interrompido por uma ou mais

Segmento Interno

BASTONETE

Terminao sinptica

CONE

direco

Figura 3- Constituio e diferenas entre a estrutura do cone e do bastonete. Compostos por segmento externo, interno e terminao sinptica. O segmento externo envolvido por uma membrana interrompida na base no bastonete, enquanto do cone esta membrana mantm a comunicao com o exterior. Adaptado de Berne e Levi. Ed. Physiology ,2000.

membranar. As ansas membranares esto unidas na sua poro lateral por uma estrutura designada por anel membranar (rim), existindo

elementos fibrosos externos que unem os anis membranares membrana celular adjacente (Roof e Henser, 1982;Usukura e Yamada,1981; Fetter e Corless, 1987). As membranas dos discos intercalares encontram-se impregnadas de fotopigmento iniciando-se a o processo de fototransduo. Os fotopigmentos so protenas estruturais que para serem extrados das membranas celulares requerem o uso de detergentes. Esses constituem mais de 50% das protenas estruturais destas membranas celulares (Papermaster e Dreyer, 1974). O segmento interno separa-se do externo por um estrangulamento. Imediatamente abaixo e numa posio excntrica situa-se o corpo basal do qual se origina o pedculo ciliar, composto por 9 pares de microtbulos. Este continua-se excentricamente no segmento externo. Mais internamente o segmento interno possui uma acumulao basal de organelos celulares, com grande abundncia em mitocndrias (Cohen, 1992). O segmento interno continua-se com o corpo celular (que aloja o ncleo celular) e a terminao sinptica. O primeiro situa-se na camada nuclear externa da retina, enquanto o segundo constituinte da camada plexiforme externa. A terminao sinptica especializada na sua forma conforme

consideramos os cones ou os bastonetes (Dowling, 1966; Kolb, 1970). Nos cones a terminao sinptica designa-se por pedculo, grande, cnica, com uma poro terminal achatada de 8-10 m, dispondo-se paralelamente na camada plexiforme externa. Em contraste, nos bastonetes, designam-se por esfrulas e so pequenas pores alargadas da terminao dos axnios com cerca de 5 m de dimetro. As esfrulas encontram-se agrupadas entre e acima dos pedculos dos cones (Alnelt e col., 1990). Em ambos as terminaes esto preenchidas com pequenas vesculas sinpticas. Na retina os fotorreceptores estabelecem sinapses com as clulas bipolares e horizontais, e as primeiras, por sua vez, com as clulas ganglionares, cujos axnios formam o nervo ptico. A forma como essa sinapse efectuada varia conforme nos referimos aos cones ou aos bastonetes (Dowling, 1970).

TRANSDUO MEMBRANAR DO SINAL LUMINOSO Para explanao dos mecanismos relacionados com a transduo do sinal luminoso ao longo da membrana citoplasmtica passaremos a descrevla nos bastonetes. A razo para esta opo tem a ver com o grande conhecimento do processo neste fotorreceptor, o conhecimento da estrutura da rodopsina, fotopigmento visual, e com a identificao de grande homologia entre este e o desenvolvido nos cones. H, de facto homologia entre as vias metablicas da fototransduo dos cones e dos bastonetes (Takunaga e col., 1999). Anteriormente referimo-nos estrutura histolgica dos bastonetes, descrevendo-os como compostos pelo segmento externo, pelo interno, corpo celular e terminao sinptica. A sua funo essencial a transduo do sinal visual (luminoso) em sinal elctrico que se faz especificamente no segmento externo e interno do fotorreceptor. Potencial de repouso do fotorreceptor

Na maior parte dos neurnios em repouso h a gerao de um potencial de membrana hiperpolarizador e consequente inibio da libertao de
ESCURO Segmento externo Segmento interno

neurotransmissor mecanismo

na

fenda de

sinptica. O bastonete tem um diferente transmisso do sinal nervoso ao na sinapse. Na verdade, o fotorreceptor uma clula que est constantemente despolar-

LUZ

izada, ou melhor, que constantemente tiva, atravessada da por uma corrente elctrica posiresultante abertura constante dos canais de sdio (Na+) no segmento externo, da existncia de uma bomba de Na+ no segmento interno e da existncia de uma bomba de

Figura 4. Fenmenos associados fototransduo no fotorreceptor. No escuro os canais de Na+ dependentes do GMPc localizados no segmento externo esto abertos, dando-se a extruso de Na+ e Ca2+ pelas bombas de Na+/K+ do segmento interno e pelas bombas de Na+/K+,Ca2+ do segmento externo. Durante a estimulao luminosa d-se o encerramento dos canais de Na+ por diminuio do GMPc intracelular conduzindo h hiperpolarizao do bastonete. Adaptado de Cohen 1992.

Na /K ,Ca

2+

no segmento externo do fotorreceptor. Todas estes estruturas

membranares esto situadas ao nvel da menbrana celular. A clula est constantemente despolarizada com um potencial de membrana que se aproxima de - 40 mV. Na membrana celuar d segmento interno os canais de K+ voltagem dependentes permitem a sada de K+ com consequente contributo para o estabelecimento da corrente de cargas positivas intracelulares. A bomba de Na+ aqui existente est a excretar Na+ do interior da clula. Durante a estimulao luminosa d-se a interrupo desta corrente com descida do potencial do fotorreceptor, que se aproxima do potencial de equilbrio do K+ (75 mV), com consequente inibio da libertao de glutamato e transmisso do sinal clula bipolar (Copenhagen e Jahr,1989) (figura 4). Para que esta transmisso se efectue fundamental o encerramento dos canais de Na+ que se encontram normalmente abertos no segmento externo do fotorreceptor. Estes no se tratam de canais simples de Na+, mas sim de canais de Na+ ou Ca2+, io importante na regulao do processo de fototransduo.

Os canais de Na+ do segmento externo do fotorreceptor so dependentes do GMPc (Yau e Baylor, 1989; Yau, 1994). A sua diminuio conduz ao encerramento desses canais. Para a compreenso do processo de que resulta a diminuio do GMPc vamos analisar a processo pelo qual a energia luminosa convertida numa via metablica conducente diminuio dos nveis de GMPc. Fotoqumica da transduo do sinal luminoso Inicialmente cada foto atravessa todas as camadas celulares da retina at atingir o segmento externo do fotorreceptor. Este est em intima ligao com o epitlio pigmentado da retina, com funes nutritivas e reguladoras metablicas. A transduo do sinal est dependente desta ligao e da existncia de rodopsina nos discos membranosos do bastonetes. A rodopsina resulta da juno de uma protena estrutural dos discos membranares, a opsina, que se dispe assimetricamente na bicamada fosfolipdica, e de um cromforo, o retinaldedo, envolvido no interior da membrana pela estrutura secundria da mesma protena. A sua estrutura secundria consiste em 7 segmentos helicoidais com trs ansas citoplasmticas e trs ansas dispostas nos discos intramembranares. (figura 5).

CITOPLASMA CITOPLASMA
CITOPLASMA

MEMBRANA

Lumen do disco

INTERIOR DO DISCO

Figura 5- A-Orientao linear da sequncia da opsina em relao ao disco membranar. Observam-se-se 7 regies em hlice , que atravessam a membrana citoplasmtica, resultando 3 ansas citoplasmticas e 3 ansas no lumen do disco membranoso. B-Disposio da rodopsina em relao membrana celular. As ansas helicoidais esto a rodear o cromoforo, o 11-cis-retinaldedo. Adaptado de Dratz EA, Hargrave PA: Trends Biochem. Sci. 8:128, 1983.

As suas ansas citoplasmticas podem ligar-se transducina (Blasynski e Ostroy, 1984). A opsina formada a partir da sntese proteica no ribossmico, sendo glicosilada no aparelho de Golgi com adio de 2 cadeias de oligossacardeos. Posteriormente algumas serinas e treoninas so fosforiladas pelas cnases da rodopsina, conferindo-lhe afinidade para a arrestina, protena importante na interrupo do processo de fototransduo (Cohen, 1992). Nos cones os fotopigmentos so menos abundantes e estveis pelo que a sua identificao se tornou mais difcil. Trata-se de 3 cadeias proteicas com grande homologia, entre si e com a rodopsina, e com picos de absoro das radiaes correspondentes ao verde, ao vermelho e ao azul. As molculas com maiores semelhanas estruturais so as opsinas verdes e vermelhas. Estas s diferem em 4% dos amino-cidos na sua estrutura primria (Nathans e col., 1986). O estudo dos fenmenos retinianos desencadeados pela estimulao luminosa iniciou-se no sculo XIX, com a verificao da perda da cor da retina aquando da sua estimulao (Kuhne, 1879). A rodopsina, responsvel pela converso da energia luminosa em energia qumica, activada por um foto, o que conduz sua isomerizao cistrans (Alpern, 1971). Ao atingir a cis-rodopsina o foto conduz sua fotoisomerizao e formao metablica do primeiro da via designado componente
SE cilio SI
Memb. S. E.

rodopsina

de batorrodopsina. Todos os produtos das


11-cis retinal

Corrente escura

Luz

cromoforo

Luz

reaces

seguintes

encontram-se na for-ma
N

trans e a estimu-lao luminosa deixa de ser


11-trans retinal

Bastonete

necessria a partir deste primeiro passo, j que a converso da batrodo-

Figura 6-A-Na ausncia de estimulao luminosa os canais de Na+/K+ do segmento externo encontram-se abertos estabelecendo-se uma corrente de Na+ e Ca2+ entre o segmento externo e o interno. B- Durante a estimulao luminosa verifica-se activao da rodopsina com formao da metarrodopsina II (R*). C- Nesta fase d-se a isomerizao do 11-cisretinal em 11 trans-retinal.. Adaptado de Palczeweski et. Col; Bioessay2000;:22. 337-350.

psina em luminorrodopsina e metarrodopsina I,II,II puramente trmica. As diferenas entre estas molculas prenem-se com a sua estrutura secundria e terciria (Strier, 1986, 1991; Pugh e Lamb, 1993; Liebman, 1987). A durao destas reaces da ordem dos picosegundos. Cerca de 60% da energia do foto estimulante foi absorvida na mudana de configurao cis-trans (Cooper, 1979; Schick e col., 1987) (figura 6). Nesta altura a rodopsina est decomposta em opsina e trans-retinaldedo (Schoenlein e col., 1991). Seguidamente o trans-retinaldeido ser isomerizado em cis-retinaldeido, no epitlio pigmentado, e integrar novamente a molcula de rodopsina para nova fotoisomerizao. A este processo designa-se ciclo visual (Kuhne, 1879; Alpern, 1971). Aps a fotoisomerizao, a metarrodopsina II (R*) vai activar a transducina, uma protena G com capacidades enzimticas. Esta situa-se na face interna da membrana do fotorreceptor e composta por trs unidades diferentes ,,. sub-unidade est ligada uma molcula de GDP. A presena da fraco inibe a actividade da transducina. Ao ser activada pela metarrodopsina II (R*) a transducina desliga-se do GDP e liga-se a uma molcula de GTP, resultando uma alterao conformacional com desprendimento da poro das fraces , (Dzeja e col., 1999). Nesta altura, a R* desliga-se da poro da transducina (TC) ficando esta livre para nova activao ou para ser inactivada pela sua fosforilao mediada pela rodopsina-cnase. Agora a poro da transducina, ligada ao GTP, vai activar uma segunda protena, a fosfodiestrase (PDE) (He e col., 1998; Makino e col., 1999; Gaudet e col., 1999). Esta constituda por 4 sub-unidades, uma , uma e duas , e possui o stio activo nas suas pores permanentemente inibido pelas pores (Baher e col., 1979; Deterre e col., 1988). Aps a sua activao pela transducina a fraco separa-se da fraco , conduzindo estimulao da mesma enzima (Deterre e col., 1988). Esta separao e consequente ligao molcula do GTP no est inequivocamente demonstrada. Para a plena activao da fosfodiastrase necessria a ligao de 2 molculas de transducinaGTP. Em concluso, a via metablica iniciada pela activao da rodopsina conduz ento activao da fosfodiestrase (Funk e col., 1990; Wensel e Stryer, 1990; Yamazaki, 1990).

Seguidamente, a fosfodiastrase activada vai actuar sobre o substracto GMPc e convert-lo em 5-GMP, conduzindo a uma diminuio dos seus nveis intracelulares e ao encerramento dos canais de Na+ da membrana do segmento externo do fotorreceptor. Face aos nveis intracelulares de GMPc s uma pequena fraco de canais de Na+ se encontram abertos durante a fase escura, encerrando-se com a estimulao luminosa (Fesenko e Kolesnikov, 1985)(figura 7). Apesar de hoje o GMPc ser universalmente aceite como o 2

Escuro

Membrana do disco

Memb. Plasmtica

Canal inico insensvel luz Canal CNG

Caties

Canais CNG fechados Caties

LUZ
Sup. do disco Citoplasma IPM

Figura 7. Esquema elucidativo da fototransduo no segmento externo do fotorrecetpor. Esta figura subdivide-se em 2 pores ilustrando respectivamente os fenmenos da fototransduo na ausncia e presena de luz. Adaptado de Palczeweski et. Col; Bioessay 2000;:22. 337-350.

mensageiro nesta via metablica, este papel foi muitas vezes posto em causa pela verificao de que os seus nveis intracelulares, durante a fase escura e aps com o estabelecimento da corrente de Na+ na fase luminosa, no serem os esperados para o efeito mediador (Fesenko e Kolesnikov, 1985). A sua justificao est no facto do GMPc estar em dois compartimentos diferentes no interior da clula. Para alm do GMPc livre no citoplasma, a clula possui um segundo pool de GMPc ligado a stios no catalticos da molcula da fosfodiestrase. A libertao deste pool resulta num grande aumento (cerca de 6 vezes) da sua concentrao e consequente verificao da grande diferena entre a fase escura e a fase luminosa da via metablica. Tambm na concentrao do io Ca2+ se verificam oscilaes importantes entre a fase escura e luminosa do fenmeno, pelo que lhe foi atribudo o papel

de 2 mensageiro. Sabe-se hoje que o seu papel de regulao do fenmeno e no de mensageiro do mesmo. Nos cones a fototransduo, apesar de no estar completamente caracterizada, parece ser conduzida por uma via metablica semelhante dos bastonetes (Li e col., 1990). As opsinas dos cones mantm regies com capacidade de fosforilao, existem isoenzimas da transducina e da fosfodiestrase (Takunaga e col., 1999) e foram identificadas respostas de abertura e encerramento de canais membranares com a variao dos nveis de GMPc (Hackos e col., 1997). Hiperpolarizao do bastonete e informao visual A transduo do sinal luminoso iniciou-se assim pela estimulao luminosa do fotopigmento, seguida dos fenmenos fototrmicos de transmisso do sinal na membrana, diminuio da concentrao de GMPc encerramento dos canais de Na+ na membrana do segmento externo dos fotorreceptores, interrupo da corrente positiva de Na+ intracelular e diminuio do potencial de membrana com consequente hiperpolarizao. Todos estes fenmenos conduzem inibio da libertao de glutamato na fenda sinptica e estimulao da clula bipolar. O glutamato um neurotransmissor com capacidades excitatrias existindo receptores para o mesmo ao nvel das clulas bipolares, horizontais e mesmo das clulas ganglionares (Schoenlein e col., 1991). Na retina existem alguns subtipos de receptores para o glutamato (Miller e Slaughter, 1985), com regulao da sinapse conforme os cofactores presentes (como a glicina) e do tipo celular em causa (Ehinger, 1972). De qualquer das formas, o pedculo do fotorreceptor no tem s uma sinapse qumica com a clula bipolar, tambm as membranas celulares esto especializadas para a transmisso do sinal elctrico (Raviola e Gilula, 1975; Nelson, 1985). Em termos histolgicos h diferenas significativas entre a morfologia das terminaes sinpticas dos cones e dos bastonetes. O cone organiza-se em tradas, com o pedculo a unir-se a uma clula bipolar e duas clulas horizontais (Missotten, 1965; Dowling, 1966; Kolb, 1970; Lasansky, 1971). Em contrapartida os bastonetes organizam-se de forma a que a duas esfrulas esto associados dois elementos sinpticos laterais que

estabelecem ligao com as clulas horizontais e elementos centrais que sinaptizam com as clulas bipolares (Missotten, 1965; Dowling, 1966; Kolb, 1970). Entre os fotorreceptores existem gap-junctions com caractersticas de sinapse elctrica, tendo sido demonstradas correntes electrognicas entre estes dois tipos celulares (Nelson e col., 1977). Assim os pedculos dos cones tem telodedros que sinaptizam lateralmente com outros cones ou bastonetes. REGULAO DA FOTOTRANSDUO Quando nos referimos regulao da fototransduo teremos que localizar dois processos de regulao opostos embora complementares. O primeiro de amplificao do fenmeno e o segundo de auto-limitao (feedback-negativo) do mesmo. Amplificao A amplificao o fenmeno pelo qual uma molcula de um fotorreceptor conduz activao de vrias molculas de fosfodiestrase com consequente diminuio acentuada dos nveis de GMPc. Uma molcula de rodopsina capaz de activar cerca de 500 molculas de transducina at perder o seu poder cataltico (Fung e col., 1981). A rodopsina parece ser uma enzima responsvel pela regulao da actividade elctrica do fotorreceptor. Por sua vez a transducina activada vai exercer a sua aco metablica sobre 800 molculas diferentes de fosfodiestrase (Baher e col., 1979; Yee e Liebmann, 1978). Assim o efeito de um s foto amplificado resultando numa grande diminuio das molculas de GMPc, na ordem das 105 vezes. Auto-limitao Por outro lado, este fenmeno tem tambm uma segunda via metablica conducente reposio dos nveis de GMPc e limitao da
Figura 8- Papel do Clcio na fototransduo. Activao da rodopsina cnase (RK), com consequente fosforilao da rodopsina (Rho). Activao das protenas activadoras da guanidilcclase (GCAP) e recuperao dos nveis de + GMP. Regulao do canal inico de Na /Ca2+. Adaptado de Philipov 2000.

transduo do sinal. Aqui o Ca2+ tem um papel extremamente importante. Como anteriormente referenciamos o Ca2+ entra na clula a partir dos canais de Na+ do segmento externo. Esta entrada cerca de 15% do total de ies entrados, verificando-se concentraes durante a adaptao ao escuro de 700 nM, enquanto durante a fase luminosa de 30 nM (Koutalos e Yau, 1996). Com o encerramento dos canais de Ca2+, os seus nveis intracelulares baixam, face ao contnuo bombeamento de Ca2+ pela bomba de Na+/K+, Ca2+ da membrana do segmento externo (Cook e col., 1988). Nesta fase, a guanil-cclase condiciona a transformao GTP-GMPc com
+

reposio

dos

nveis

intracelulares de GMPc e reabertura dos canais de Na , logo que a estimulao luminosa cesse. Com nveis de Ca2+ demasiado baixos a bomba Na+/K+, Ca2+, deixa de actuar, sendo esta provavelmente regulada por protenas cnase (Schne-tkamp e col., 1995). A regulao da guanil-cclase pelo Ca2+ no uma regulao directa. Acontece por intermdio das protenas activadoras da guanil-cclase (GCAP), de 23 KD, com 3 isoformas ( Palczewski e col., 1994; Dizhoor e col., 1995; Gorczyca e col., 1995), estimuladoras da guanidilcclase e dependente do Ca2+. A localizao no fotorreceptor no est completamente definida. (Philipov, 2000). A diminuio dos nveis de Ca2+ citoplasmtico, conduz a uma activao da guanil-cclase (figura 8). A activao da guanidilcclase potencia a sua aco 5 a 10 vezes. O Ca2+ tambm importante na regulao da adaptao dos fotorreceptores a ambientes de muita e pouca luminosidade (figura 9). Os seus nveis intracelulares variam conforme o bastonete esteja adaptado luz ou no. No escuro o Ca 2+i tem concentraes mais
Figura 9- Efeito do ambiente luminoso no limiar de estimulao do bastonete. Em ambientes com escotpicos o limiar mais baixo devido aos nveis altos de Ca2+intracelulares (circulos). O Limiar aumenta em ambiente fotpico.(linha a cheio) Adaptado de Palczeweski et. Col; Bioessay2000;:22. 337-350. 2+

altas do que adaptado luz, modulando-se assim o limiar de estimulao luminosa. Esta modulao feita pela activao pelo Ca2+ da recoverina/modulina-S. No uma activao maior da escuro verifica-se modulina-S por

aumento dos nveis de Ca , com inibio da rodopsina-cnase e manuteno

da rodopsina activada. Durante a adaptao luz o fenmeno contrrio (Kawamura, 1994). Por fim a baixa dos nveis de clcio sensibilizam os canais inicos do segmento externo para o GMPc, podendo esta sensibilizao aumentar 6 vezes a sua permeabilidade (Hsu e Molday, 1993; Weitz e col., 1998). A transducina tem capacidade GTPsica e auto-limita a sua actividade, convertendo o GTP em GDP e ligando-se novamente sub-unidade e . A libertao das sub-unidades da transducina conduz a nova agregao da fosfodiestrase (Yee e Liebmann, 1978; Pober e Bitensky, 1979). Em relao rodopsina activada esta ter de ser inactivada para evitar a perpetuao de toda a via metablica. Ela fosforilada, na dependncia do ATP, pela rodopsina-cnase (Thomson e Findley, 1984), na poro C terminal. Este fenmeno confere-lhe afinidade para uma outra protena, a arrestina (Hisatomi e col., 1997b), cuja ligao inactivar a rodopsina, libertando a opsina e o trans-retinaldedo (Bennet e Sytaramaya, 1988). Nos cones e nos bastonetes as molculas de arrestina so denominadas de S e X arrestina sendo diferente em termos de composio molecular (Hisatomi e col., 1997b). A variao dos nveis de Ca2+ afecta concomitantemente a concentrao de R*. Estes nveis esto correlacionados com a presena ou ausncia de luz. A fosforilao da R* com consequente inibio modulada pela modulina-S. Esta protena inibe a fosforilao da R* e prolonga a sua semi-vida o que implica nveis elevados de clcio intracelular. Em ambiente escotpico (escuro) os nveis de Ca2+ intracelular so mais altos conduzindo a uma activao da modulina-S e inibio da fosforilao da R*. Nesta circunstncia a semi-vida da R* est aumentada. O aumento da semi-vida da R* conduz uma maior hidrlise do GMPc e o nvel de resposta ao estmulo luminoso aumenta. Por um mecanismo contrrio, a semi-vida da R* est diminuda em ambiente fotpico com consequente diminuio da amplitude de resposta ao estmulo luminoso (Kawamura, 1993, 1994; Chen e col., 1995).

IMPLICAES FISIOPATOLGICAS A desregulao dos mecanismos de fototransduo est na base de numerosas patologias retinianas de etiologia hereditria. Assim, e percorrendo as vrias etapas da fototransduo, as alteraes moleculares subjacentes s doenas heredodegenerativas da retina estendem-se desde a rodopsina at guanilcclase e s protenas reguladoras dependentes pelo Ca2+. A rodopsina pode ser afectada por um elevado nmero de mutaes, as quais esto na base de vrias patologia como a retinopatia pigmentada autossmica dominante (RPAD) (Dryja TP et col, 1990; Berson EL, 1993) e recessiva (RPAR) (Rosenfeld, et col. 1992) e a cegueira nocturna congnita estacionria (CNCE).(Dryja e col, 1993; Sieving e col, 1995). As alteraes na molcula de transducina condicionam CNCE (Dryja e col, 1996), enquanto as da fosfodiestrase originaram a RPAD (McLaughlin e col, 1993; Huang e col, 1995) e CNCE (Gal e col, 1996). Durante a fase de inactivao da rodopsina fundamental a actuao da rodopsina cnase e da arrestina. Ambas, quando alteradas, originam variantes da CNCE (173, 174). No final destes fenmenos os nveis de GMPc encontram-se reduzidos e condicionam o encerramento dos canais de Ca2+/Na+ da membrana celular do fotorreceptor. As anomalias moleculares destes canais condicionam o desenvolvimento de RPAR. Os nveis de GMPc sero posteriormente restabelecidos pela activao da guanil-cclase, regulada por protenas dependentes do Ca2+. As alteraes moleculares destas protenas condicionam respectivamente distrofia conebastonete e distrofia cone. Por fim, a doena de Stargart, a RPAD e a DCB podem estar relacionadas com alteraes no gene da protena ABCR/Rim, uma protena estrutural que mantm a conformao dos discos membranares do fotorreceptor. Enquanto a distrofia macular e a RPAD podem estar relacionadas com alteraes no gene da periferina RDS, outra protena estrutural na membrana dos discos dos fotorreceptores. Destes pargrafos podemos inferir que a relao entre o quadro fisiopatolgico e as manifestaes clnicas nem sempre pode ser estabelecida.

A fisiopatologia destas alteraes condicionam uma ausncia de transmisso do sinal luminoso, no caso da rodopsina, transducina e fosfodiestrase, com consequente ausncia da estimulao do fotorreceptor. Consequentemente, a nictalopia um dos primeiros sintomas apresentados por estes pacientes. Nos fenmenos que condicionam uma manuteno da estimulao da rodopsina, por ausncia da sua inactivao, a leso celular estabelece-se por consumo das reservas celulares e manuteno constante do estado de hiperpolarizao celular. Outro tipo de patologias condicionam leso celular no fotorreceptor. Na retinopatia associada a carcinoma este secreta recoverina, uma protena de ligao ao Ca2+ reguladora da fototransduo. A recoverina desperta, por seu turno, uma resposta imunolgica pois no reconhecida como prpria. Assim, secundariamente os linfcitos condicionaro a destruio do fotorreceptor. O papel da imunidade celular e humoral neste processo desconhecido, observando-se nos fenmenos que condicionam a apoptose a presena de anti-corpos anti-recoverina. As distrofias cone esto associadas a uma mutao no gene da protena activadora da guanil-cclase. Esta mutao condiciona uma diminuio da sua sensibilidade ao Ca2+ com consequente manuteno da activao da guanil-cclase e aumento da concentrao de GMPc. Estes limitam a inactivao da guanil-cclase na ausncia de estimulao luminosa. As mutaes ao nvel da fosfodiestrase condicionam tambm um aumento da quantidade citoslica de GMPc. Os nveis elevados deste 2 mensageiro mantm abertos os canais de Ca2+ do segmento externo do fotorreceptor, elevando a concentrao citoslica deste io. Quando os nveis de Ca2+ so mantidos constantemente acima dos 200 mM desencadeia-se a falncia dos mecanismos de regulao pelas mitocdrias e pelos sistemas de membrana importantes para a manuteno da sua homeostasia. Tais nveis condicionam o desenvolvimento de fenmenos apoptticos. No segmento externo do fotorreceptor, apesar desses nveis de Ca2+ serem ultrapassados, no se estabelecem fenmenos apoptticos devido ao isolamento do citoplasma do segmento externo. Convm, no entanto, sublinhar que, apesar destas particularidades fisiolgicas, a manuteno, em condies patolgicas,

de nveis elevados de Ca2+ no segmento externo podem desencadear os tais fenmenos apoptticos que conduzem morte celular.

CONCLUSO

A fototransduo um processo desenvolvido nos discos membranares do segmento externo dos fotorreceptores e que transforma o sinal luminoso em impulso nervoso conduzido pela via ptica ao crtex visual. O processo pelo qual o sinal luminoso transformado em sinal qumico resulta de uma srie de reaces qumicas que envolvem o cromforo do fotorreceptor (a rodopsina), o sistema celular de protenas G (a transducina) e por fim a transmisso do sinal intracelular, a qual condiciona uma reduo dos nveis de GMPc e o encerramento do canais de Na+ do segmento externo do fotorreceptor. Ao contrrio do que ocorre nas outras clulas nervosas, no fotorreceptor a hiperpolarizao conduz conduo nervosa do sinal luminoso com inibio da libertao de glutamato na fenda sinptica e excitao das clulas bipolares. Na fototransduo, tal como noutros processos celulares de transduo do sinal atravs das membranas biolgicas, h fenmenos de regulao dos mesmos. Esta auto-regulao condiciona mecanismos de amplificao, um foto capaz de amplificar a sua resposta na via metablica numa razo logartmica de 5 vezes, e mecanismos de auto-limitao do sinal. A autolimitao processa-se anulando a actividade das molculas activadas, como a rodopsina, a transducina e a fosfodiastrase. Em alguns casos, processa-se sem interveno de qualquer via metablica, sendo esta necessria noutros

como no caso da rodopsina. Por fim, para o processo cessar necessrio eliminar os sistemas de segundo mensageiro gerado, neste caso o GMPc. Este fenmeno bem como o mecanismo de adaptao celular ao escuro ou a ambientes iluminados regulado pelo io Ca2+, importante aqui tal qual noutros fenmenos de regulao da homeostasia celular.

BIBLIOGRAFIA:
Alnelt P.K., Kerinsuficincia cardaca., Kolb H. Identification of pedicles of putative blue sensitive cones in human and primate retina. J. Comp. Neurol. 1990; 255:18-34. Alpern M. Rhodopsin kinetics in the human eye. J. Physiol. 1971;217:447-471. Baehr W. Devlin M.J., Applebury M.L. Isolation and characterization of cGMP phosphodiasterase from bovine rod outer segments. J. Biol.Chem. 1979; 254: 11669-11677. Bennett N., Sytaramaya A . Biochemistry 1988; 27: 1710-1715. Berson EL. Retinitis pigmentosa. The Friedenwald Lecture. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1993; 34: 1659-1676. Blasynski IC. Ostroy S.E. Pathways in hydrolysis of vertebrate rhodopsin. Vision Res. 1984; 24: 459. Bowmaker J.K., Thorpe A. Douglas R.H. Ultraviolet-sensitive cones in the goldfish. Vision. Res. 1991; 31: 349-352. Chen J., Makino C.L., e. Col. Mechanism of rhodopsin inactivation in vivo as revealed by a COOH-terminal truncation mutant. Science 1995; 267: 374-377. Cohen A.I. Rods and cones, in Fuortes M.G.F., Ed Handbook of sensory physiology, vol 7/2, Berlin, Springer- Verlag, 1972. Cohen A.I. The retina in: William M. Hart Jr. Ed Adlers Physiology of the eye. Mosby Year Book 1992. Cook N.J., Kaupp B. J. Biol. Chem. 1988; 263: 11382-11388. Cooper A . Energy uptake in the first step of visual excitation. Nature 1979; 282: 531. Copenhagen D. R., Jahr C. E. Release of endogenous excitatory aminoacids form turtle photoreceptors. Nature. 1989; 341: 536-539. DeMonasterio, F. M., Schein S. J., McCrane E. P. Stainning of blue sensitive cone of the Macaque retina by fluorescent dye. Science 1981; 213, 1278-1281. Deterre P., Bigay J. M., Robert M., Chabre M. cGMP phosphodiasterase of retinal rods is regulated by two inhibitory subunits. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1988; 85: 2424-2428. Dizhoor A .M., Olshevskaya E. V., Henzel W. J. e col. Cloning, sequencing, and expression of a 24-KD Ca2+-binding protein activating photoreceptor guanydyl cyclase. J. Biol. Chem. 1995; 270: 25200-25206. Dowling J. E., Boycott B. B. Organization of the primate retina: electron microscopy. Proc. R. Soc. B (Lond) 1966; 166: 80-111. Dowling J. E., Organization of vertebrate retina. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.1970; 9: 655. Dryja TP, McGee TL, Reichel E e col. A point mutation of the rhodopsin gene in one form of retinitis pigmentosa. Nature 1990; 343: 364-366. Dryja TP, Berson EL, Rao VR, e col. Heterozygous missence mutation in the rhodopsin gene as a cause of congenital stationary night blindness. Nat. Genet. 1993; 4: 280-283. Dzeja C., Hagen V., Kaupp U. B., Frings S. Ca 2+ permeation in cyclic nucleotide-gated channels. E.M.B.O. J. 1999; 18:131-144. Ehinger B. Celular location of the uptake of some aminoacids into the rabbit retina. Brain Res. 1972; 46: 293. Fetter R. D., Corless J. D., Morphologic components associated with frog outer segments disk margins. Inv. Ophthalmol. Vis. Sci. 1987; 28: 646-657. Fesenko E. E., Kolesnikov S. S. , Lyubarsky. Nature (London) 1985; 367:273-277. Fung B. K., Hurley J. B., Stryer L. Flow of information in the light-triggered cyclic nucleotide cascade of vision. Proc. Natl. Acad. Sci.1981; 78: 152. Funk B. K.-K, Young J. H., Yamane H. K. Suunit stoichiometry of retinal rod cGMP phosphodiasterase. 1990; 29: 2657. Gal A, Orth U, Baehr W, e col. Heterozygous missence in the rod cGMP phosphodiesterase b-subunit in autossomal dominant stationary nightblidness. Nat. Genet. 1994; 7: 64-68. Gaudet R., Savage J. R., McLaughlin J. N., Willardson B. M., Singler P. B. A molecular mechanism for the phosphorylation-dependent regulation of heterotrrimeric G-proteins by phosducin. Mol. Cell. 1999; 3: 649-660.

Gorczyca W. A, Polans A .S. Surgucheva I. e. col. Guanydyl cyclase activating protein: a calcium sensitive regulator of phototransduction. J. Biol. Chem. 1995; 270: 22029-22036. Gouras P. Color Vision. Prog. Ret. Res. 1986; 3: 227-261. Hackos D. H., Korenbrot J. I. J. Genet. Physiol. 1997; 110: 515-528. He W., Cowan C. W., Wensel T. G. RGS9, a GTPase accelarator for phototransduction. Neuron 1988; 20: 95-102. Hisatomi O., Satoh T., Tokunaga F. The primary structure and distribution of killifish visual pigments. Vision Res. 1997; 37: 3089-3096. Hisatomi O., Imanishi Y., Satol T., Tokunaga F. Arrestins expressed in killifish photoreceptors cells. F.E.B.S. Lett. 1997b; 411: 12-18. Hisatomi O., Kayada S., Taniguchi Y. e col. Primary structure and characterization of a bullfrog visual pigment contained in small single cones. Comp. Biochem. Physiol. B. Biochem. Mol. Biol. 1988; 119: 585-591. Hsu Y-T., Molday R. S. Modulation of the cGMP-gated channel of rod photoreceptor cells by calmodulin. Nature 1993; 361: 76-79. Huang SH, PittlerSj, Huang X, e col. Autossomal recessive retinitis pigmentosa caused by mutaution in subunit of cGMP phosphodiesterase. Nat. Genet. 1995; 11: 468-471. Kachi S., Dizhoor A., Nishisawa Y., e. col. The 8th International Conf on retinal proteins. Abstracts; Awaji Island, Japan 1998: 101. Kawamura S. Rhodopsin phosphorylation as a mechanism of cyclic GMP phosphodiasterase regulation by S-modulin. Nature 1993; 362: 855-857. Kawamura S. Photoreceptor light adaptation mediated by S-modulin, a member of a possible regulatory protein family of protein phosphorilation in signal transduction. Neurosci. Res. 1994; 20: 293-298. Kolb H. Organization of the outer plexiform layer of the primate retina: electron microscopy of Golgi impregnated cell. Phil. Trans. R. Soc. B (Lond.) 1970; 258: 261-283. Koutalos Y., Yau K. W. Regulation of sensitivity in vertebrate rod photoreceptors by calcium. Trends Neurosci. 1996; 19: 73-81. Kuhne W. Chemische vorgange in der netzhaut. In: Hermann L., ed. Handbuch der Physiologie. Leipzi, Vogel; 1879: 235-342. English translation taken from Vision Res 1977; 17: 1269-1316. Lasansky A. Synaptic organization of the cone cells in the turtle retina. Phil. Trans. R. Soc. B. 1971; 262: 365-381. Li T., Volpp K., Appelbury M. L. Bovine cone photoreceptor cGMP phosphodiasterase structure deduced from cDNA clone. Proc. Natl. Acad. Sci. USA.1990; 87:293-297. Liebman P.A.,Entire G. visual pigments from frog and tadpole (Rana pipiens). Vision Res. 1968; 8: 761-775. Liebman P. A., Parker K. R., Dratz E. A, The molecular mechanism of visual excitation and its relation to the structure and composition of the rod outer segment. Annu. Rev. Physiol. 1987; 49: 765-791. McLaughlin ME, Sandberg MA, Berson EL, e col. Recessive mutations in the gene enconding the subunit of the rod phosphodiesterase in patients with retinitis pigmentosa. Nat. Genet. 1993; 4: 130-134. Makino E. R., Handy J.W., Li T., Arshavsky V. Y. The GTPase activating factor for transducin in rod photoreceptors in the complex between RGS9 and type 5 G protein beta subunit. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999; 96: 1947-1952. Marc R. E., Sperling H. G. Cromatic organization of the primates cones. Science 1977; 196, 454-456 Miller R. F., Slaugthter M. M. Excitatory aminoacid receptors in the vertebrate retina, in Morgam W.W. ed.: Retinal transmitors and modulators: models for the brain. Vol II, Boca Raton, CRC Press. 1985: 124. Missotten L. The ultrastructure of the human retina. Arscia Uitgaven N.V., Brussels 1965. Nathans J., Thomas D., and Hogness D. S. Molecular genetics of human color vision: the genes encoding blue, green and red pigments. Science 1986; 232:193. Nelson R. Cat cones have rod inputs: a comparison of the response properties of cones and horizontal cells bodies in the retina of the cat. J. Comp. Neurol. 1977; 172: 109-136. Nelson R., Lynn T., Dickinson-Nelson A. Kolb H. Spectral mechanism in cat horizontal cells. In Neurocircuitry of the Retina: a Cajal Memorial Gallego A. and Gouras P Ed. 1985: 109-121.

Papermaster D. S. Dreye W. J., Rhodopsin content in the outer segment membrane of bovine and frog retinal rods. Biochemistry, 1974; 13: 2438-2444. Palczewski K., Subbaraya I., Gorczyca W. A. e col. Molecular cloning and characterization of retinal photoreceptor guanidilcclase activating protein (GCAP). Neuron 1994; 13: 395-404. Pugh E. N., Lamb T. D. Amplification and kinetics of the activation steps in phototransduction. Biochim. Biophys. Acta 1993; 1141: 111-149. Pober J. S., Bitensky M. W. Light-regulated enzymes of vertebrate retinal rods, in Greengard P, Robinson G.A., eds: Advances in cyclic nucleoside research, vol 11, New York, Raven Press, 1979: 265. Raviola, E., Gilula N. B. Intramembrane organization of specialized contacts in the outer plexiforme layer of the retina. A freezen-fracture study in monkeys and rabbits. J. Cell Biol. 1975; 65: 192-222. Roof D. J., Heuser J. E. Surface of photoreceptor disk membrane components. J. Cell Biol. 1982; 95: 487-500. Rosenfeld PJ, Cowley GS, McGee TL, e col. A null mutation in the rhodopsin gene causes rod photoreceptor dysfunction and autossomal recessive retinitis pigmentosa. Nat. Genet. 1992; 1: 209-213. Schick G. A., Cooper T. M. Holloway R. A., e col. Energy storage in the primary photochemical events of rhodopsin and isorhodopsin. Biochemestry 1987; 26: 2556. Schnetkamp P. P. M., Tucker J. M., Szerencsei R.T. Ca2+ influx into bovine retinal rod outer segments mediated by + + + Na /Ca2 /K exchange. Am. J. Physiol. 1995; 269: C1153-C1159. Schoenlein R. W., Peteanu L.. A., Mathies R. A., Shank C. V. The first step in vision: fentosecond isomerization of rhodopsin. Science. 1991; 254: 412-415. Sieving PA, Richards JE, Naarendor E, e col. Model for nightblidness from human rhodopsin Gly90Asp mutation. Proc. Natl. Acad. Sci. 1995; 92: 880-884. Strier L. Cyclic GMP cascade of vision. Annu. Ver. Neurosci. 1986; 9: 87-119. Strier L.Visual excitation and recovery. J. Biol. Chem. 1991; 216: 10711-10714. Szel A., Diamanstein T., Rohlich P. Identification of blue-sensitive cones in the mammalian retina by antivisual pigment antibody. J. Comp. Neurol. 1988; 273, 593-602. Thompson P., Findley J. B. C. Phospholilation of ovine rhodopsin: identification of the phodphorilation sites. Biochem. J. 1984; 220:773-780. Tokunaga F., Hisatomi O., Satoh T. e col. Evolution of visual pigments and related molecules. Novartis foundation Symposium 1999; 224, 44-53. Usukura J. Yamada E. Molecular organization of the rod outer segment. A deep etching study with rapid freezing using unfixed frog retina. Biomed. Res.1981; 2:77-193. Yamasaki A., Hayashi F., Tatsumi M., e. Col. Interactions between the subunits of transducin and cyclic GMP phosphodiasterase in Rana catesbiana rod photoreceptors. J. Biol. Chem. 1990; 265: 11539. Yau K-W., Baylor D. A. Cyclic nucleotide-activated conductance of retinal photoreceptor cells. Annu. Ver. Neurosci. 1989; 12: 289-327. Yau K-W, Phototransduction mechanism in retinal rods and cones. The Friedenwald Lecture. Invest Ophthalmol. Vis. Sci. 1994; 35: 995-1002. Yee R., Liebman P. A. Light-activated phosphodiasterease of the rod outer segment, kinetics and parameters of activation and deactivation. J. Biol. Chem. 1978; 253: 8902. Walls G. L. The reptilian retina. Am. J. Ophthalmol. 1934; 17: 892-915. Weitz D., Zoche M., Muller F., e. col. Calmodulin controls the rod photoreceptor CNG channel trough an unconventional binding site in the N-terminus of beta-subunit. E.M.B.O . J. 1998; 17: 2273-2284. Wesel T. G., Stryer L. Activation mechanism of retinal rod cyclic GMP phosphodiasterase probed by fluorescein-labeled inhibitory subunit. Biochemistry 1990; 29: 2155.