Metabolismo Microbiano

Metabolismo es la suma de reacciones bioqumicas requeridas para la generacin de energa y el uso de sta para sintetizar material celular a partir de molculas del medio ambiente. El metabolismo se divide en: Catabolismo. Reacciones de generacin de energa. Anabolismo. Reacciones de sntesis que requieren de energa. Las reacciones catablicas producen energa como ATP, el cual es utilizado en las reacciones anablicas para sintetizar el material celular a partir de nutrientes.

Metabolismo
Generacin de energa

Catabolismo
Fuente de energa

Reacciones biosintticas

Anabolismo
Nutrientes

Precursores intracelulares ATP

Intermediarios biosintticos
ADP Productos metablicos Biopolmeros

Estructuras

Enzimas

Sustrato

Productos

Enzima

Complejo Enzima-Sustrato

Enzima

Catalizadores biolgicos de naturaleza proteica. Reducen la energa de activacin de una reaccin qumica. Modifica la velocidad de la reaccin. Son altamente especficos.

Grupo prosttico. Lo constituyen molculas no proteicas ya sean orgnicas o inorgnicas, que se encuentran unidos a la protena y a diferencia de las coenzimas no se disocian despus de que se cataliza la reaccin. Ejemplo: el grupo prosttico con ncleo de Fe3+ de los citocromos. Coenzimas y cofactores. Molculas no proteicas que pueden ser orgnicas o inorgnicas, se unen a la enzima y dan afinidad al sustrato con la enzima para catalizar la reaccin.

+
Apoenzima (porcin proteica) Cofactor o coenzima Holoenzima (toda la enzima)

Cofactores
Sustrato
Cofactor

Coenzimas
Sustrato oxidado Coenzima reducida Coenzima oxidada Sustrato reducido

Enzima

Enzima

Las coenzimas tienen una unin dbil con la enzima. Algunas enzimas requieren cofactores: Alcohol deshidrogenasa -Zn2+ Ureasa -Ni2+ Nitrogenasa -Mo Purivato cinasa -K+ y Mg2+ Coenzimas de xido-reduccin: NAD, NADP, FAD, FMN. Otras coenzimas: CoA, vitaminas.

Enzimas
Clase
Oxidorreductasa

Tipo de reaccin que cataliza

xido-reduccin, donde oxgeno e hidrgeno son ganados o perdidos. Transferencia de grupos funcionales (amino, acetilo, fosfato) Hidrlisis (adicin de agua) Remocin de grupos de tomos sin hidrlisis.

Ejemplos
Citocromo oxidasa. Lactato deshidrogenasa. Acetato cinasa. Alanina desaminasa. Lipasa. Lactasa. Oxalato descarboxilasa. Isocitrato liasa.

Transferasa

Hidrolasa Liasa

Isomerasa

Rearreglo de tomos dentro de una molcula.

Unin de dos molculas (empleando energa usualmente derivada del rompimiento de ATP).

Glucosa fosfato isomerasa. Alanina racemasa.

Acetil Co A sintetasa Ligasa.

Ligasa

Modificacin de la actividad enzimtica

La actividad enzimtica es la cantidad de producto formado por unidad de tiempo. Esta actividad puede ser modificada por factores que afectan a las protenas, por ejemplo: la temperatura. El pH influye sobre las cargas elctricas de los aminocidos, esto puede alterar la estructura del centro activo y sobre la actividad enzimtica. La temperatura elevada desnaturaliza las molculas proteicas por lo que los sitios activos se ven modificados. La enzima se satura a cierta concentracin del sustrato.

Actividad de la enzima

pH

Actividad de la enzima

Temperatura

Actividad de la enzima

Concentracin del sustrato

A
Sustrato Sitio activo Enzima Sitio alostrico

Inhibidores enzimticos
A) El sustrato se une a la enzima en el sitio activo. B) Un inhibidor competitivo se une a la enzima en el sitio activo, impidiendo la entrada y unin del sustrato.

B
Inhibidor

Sustrato

Enzima

Inhibicin competitiva

Sustrato

Efector alostrico

Enzima

C) Un inhibidor alostrico modifica la afinidad de la enzima por el sustrato, al unirse en un sitio distinto al sitio activo (sitio alostrico).

Regulacin de vas metablicas

Regulacin de una va metablica mediante inhibicin enzimtica por producto final.

Sustrato
Enzima 1

Producto final

Intermediario 1 Enzima 2 Inhibicin por retroalimentacin

Intermediario 2 Enzima 3

Intermediario 3

Enzima 4

Producto final

Regulacin de la expresin y sntesis de las enzimas

Nivel transcripcional Procesos de induccin y represin. Atenuacin y procesamiento del ARNm. Nivel traduccional

Regulacin de la sntesis de las protenas ribosmicas. Inhibicin de la sntesis de protenas.

ATP

Compuesto de alta energa, se produce por fosforilacin a nivel de sustrato, cadena respiratoria y fotofosforilacin.

Otros compuestos con un alto potencial de transferencia del grupo fosfato

Reacciones de xido-reduccin
Energa libre de oxidacin

Oxidacin-reduccin
Pares aceptor/donador

Entre ms electronegativo, es mejor donador de electrones.

Donador de electrones H2 2e- + 2H+

Aceptor de electrones O2 + 2e- O2Formacin de agua 2H+ + O2- H2O Reaccin total H2 + O2 H2O

Microorganismos

Clasificacin
Luz Fottrofas

Fuente de energa xido-reduccin Quimitrofas Compuestos orgnicos Quimioorgantrofos Fuente de carbono Compuestos orgnicos Quimioorganohetertrofos CO2 Quimioorganoauttrofos

Fuente de carbono
Compuestos orgnicos Fotohetertrofos CO2 Fotoauttrofos

Compuestos inorgnicos Quimiolittrofos

Fuente de carbono

Compuestos Orgnicos Mixtrofos

CO2 Quimiolitoauttrofos

Quimiohetertrofos
La clula oxida molculas orgnicas para producir energa (catabolismo) y luego la usa para sintetizar el material celular de molculas orgnicas (anabolismo). Todos los hongos y los protozoarios son hetertrofos, tambin muchas bacterias, pero slo algunas arqueobacterias.

Panorama general del metabolismo

Nivel 1. Biomolculas complejas: protenas, cidos nucleicos, polisacridos, lpidos. Nivel 2. Mnomeros: aminocidos, nucletidos, carbohidratos, cidos grasos. Nivel 3. Intermendiarios metablicos: piruvato, acetil-CoA, intermediarios del ciclo del cido ctrico.

Metabolismo central

Metabolismo central
ATP Glucosa Glucosa 6P NADPH Gluconato 6P ATP Gluconato

Fructosa 6P ATP Fructosa 1,6 biP

Pentosas P
ATP

CO2, NADPH

Gluclisis
Gliceraldehdo P ATP, NADH Fosfoenolpiruvato ATP Piruvato NADPH, CO2 Acetil CoA

Pentosa

Entner Doudoroff

Las vas del metabolismo central: gluclisis (EmbdenMeyerhof-Parnas EMP), de las pentosas fosfato y EntnerDoudoroff proveen de precursores metablicos para otras vas, como las del metabolismo de carbohidratos y cidos carboxlicos.

Las tres vas convierten por diferentes rutas la glucosa en gliceraldehdo, que es oxidado por la misma reaccin para formar piruvato.

Gluclisis
La va de la gluclisis (Embden-MeyerhofParnas EMP), se encuentra en todos los eucariontes y en muchas especies de bacterias. En la primera etapa hay gasto de 2 molculas de ATP por cada molcula de glucosa. En la segunda etapa se forman 4 molculas de ATP por fosforilacin a nivel de sustrato y 2 de NADH.

Fosforilacin a nivel de sustrato

Acarreador electrnico

Compuesto orgnico (reducido)

Intermediario A NAD+ NADH Intermediario B P Pi

Es una reaccin en donde un compuesto con un grupo fosfato de alta energa transfiere este grupo al ADP, que se transforma en ATP.

Intermediario C ADP

ATP Intermediario D (oxidado) NADH NAD+ Producto final (reducido)

Va Entner-Doudoroff
Muchos bacterias no poseen la enzima fosfofructocinasa y no pueden convertir la glucosa-6P a fructosa 1,6-bifosfato. Una va alterna es EntnerDuodoroff, en la cual la glucosa 6P es convertida a piruvato y gliceraldehdo-3-fosfato por la deshidratacin del 6-fosfogluconato para formar 2-ceto-3-desoxi-6-fosfogluconato (KDPG). Ejemplos son: Rhizobium, Agrobacterium y Pseudomonas.

Ciclo de las pentosas fosfato

Importancia:
Produce los precursores de los azcares ribosa y desoxirribosa para la posterior sntesis de cidos nucleicos. Provee de eritrosa fosfato como precursor de aminocidos aromticos y de ribulosa 1, 5-difosfato que funciona como aceptor de CO2 en la fotosntesis. En est va se genera NADPH, la mayor fuente de electrones de la biosntesis y varias de sus reacciones las comparte con el ciclo de Calvin.

Fermentacin
Se realiza en condiciones anaerobias. Emplea como aceptor de electrones a una molcula orgnica. Utiliza el NADH producido en la gluclisis. Se conserva la energa de la fosforilacin a nivel de sustrato (FNS).

Acido lctico Streptococcus Lactobacillus Staphylococcus

+2H ATP

cido pirvico

+ cido pirvico -CO2 H2

Acido a-acetolctico -CO2 Acetoina +2H 2,3-butanediol

ADP

+CO2
Acido oxaloactico +2H Acido mlico -H2O +2H Acido succinico CO2 H2 Shigella cido frmico

CO2

Acetil-S-CoA -CoA-SH Acido Actico Clostridium Acetoacetil-S-CoA

Klebsiella Enterobacter Bacillus

+4H -CoA-SH Etanol

-CO2
Acido propionico Bifidobacterium Propionibacterium

E. coli Salmonella Proteus

+Acetil S-CoA -CoA-SH

Acetona +2H Isopropanol

-CO2 -CoA-SH

+4H

Butiril-S-CoA

-CoA-SH
cido Butirico

+4H
Butanol

Etanol
Malta Ceveza (Saccharomyces cerevisiae) Frutas Vino (Saccharomyces ellipsoideus) Desechos de la agricultura combustible (S. cerevisiae)

Fermentaciones tradicionales indgenas de Mxico

Las fermentaciones tradicionales indgenas de Mxico ms conocidas son: pozol, tesgino, tejuino, tepache, tibicos, pulque, tuba, colonche, entre otras.

Tibicos Tepache Tuba

Palma de coco Piloncillo

Tejuino Pulque Pozol

Masa de maz y piloncillo

Colonche

Acido actico
Etanol Acido actico (Acetobacter aceti)

Madre de vinagre: consorcio formado por una levadura y una bacteria.

Acido lctico
Leche Yogurt y queso (Lactobacillus, Streptococcus) Granos Pan de centeno (Lactobacillus bulgaricus) Col Chucrut o Sauerkraut (Lactobacillus plantarum) Carne Salchichas (Pediococcus)

Otras fermentaciones
cido propinico y CO2. Leche Queso suizo (Propionibacterium freudenreichii) Acetona y butanol (Clostridium acetobutylicum) Glicerol (Saccharomyces cerevisiae)

cido ctrico melazas (Aspergillus niger)

Metano cido actico (Methanosarcina) cido ascrbico Sorbitol (Acetobacter)

Piruvato deshidrogenasa cinasa

Ciclo del cido ctrico

Ciclo de los cidos tricarboxlicos (TCA) Ciclo de Krebs (CK).

El acetil-CoA se forma a partir del piruvato por la piruvato deshidrogenasa y es oxidado a CO2 en el Ciclo de Krebs.
Por cada acetil-CoA se forman 2 molculas de NADH, una de NADPH y una de FADH2, adems de un ATP por FNS.

Ciclo del cido ctrico

Importancia: Los intermediarios en el ciclo proveen precursores para muchas rutas biosintticas como:

Sntesis Sntesis Sntesis El

de cidos grasos a partir del citrato. de aminocidos por transaminacin del acetoglutarato.

de purinas y pirimidinas a partir del acetoglutarato y oxaloacetato. oxaloacetato puede convertirse en glucosa por la gluconeognesis.

Fosforilacin oxidativa
NADH

e-

H+ H+

Respiracin aerobia O2 H2O

e-

Respiracin anaerobia NO3NO2ADP + Pi H+

Respiracin es la obtencin de energa por oxidacin de sustratos reducidos DH2 (orgnicos en quimiorgantrofas, e inorgnicos en quimiolittrofas), pero las coenzimas reducidas, como el NADH, transfieren los electrones a un aceptor final oxidado, no directamente sino a travs de una cadena transportadora de electrones al final de la cual existe un aceptor exgeno oxidado, que se reduce. Respiracin aerobia: el aceptor final es el O2. Respiracin anaerobia: el aceptor final es distinto del O2 (nitrato, sulfato, etc.).

ATP

Transporte de electrones
La transferencia de electrones se da en la direccin de mayor potencial redox positivo, con la liberacin de energa libre. La energa libre se va a traducir en un potencial electroqumico de protones, cuya disipacin a travs de ATP sintasas de membrana origina ATP, conocindose este proceso como fosforilacin oxidativa.

Transportadores de electrones
Protenas
NADH deshidrogenasas. Transfieren los e- y los H+. Flavoprotenas. Transfieren los ey los H+. Protenas de hierro y azufre. Acarreador de electrones. Citocromos. Acarreador de electrones.

No protenas
Quinonas. Transfieren los e- y los H+.

ATPasa
La ATP sintasa es una protena con una de sus fracciones embebida en la membrana y la otra en la cara citoplasmtica: Complejo cataltico F1 (subunidades a3b3ged), responsable de la interconversin de ADP+ Pi y ATP. Complejo F0 (subunidades ab2c12), responsable de la transferencia de protones a travs de la membrana.

Formacin de ATP

El movimiento de protones a travs de F0 dirige la rotacin de las protenas c, la energa es transmitida a F1 por la rotacin de las subunidades ge, esto causa una cambio conformacional en b que permite la formacin de ATP en cada subunidad. De igual modo la ATPasa es reversible generando fuerza protn motriz.

Respiracin aerobia

Fuera 2 H+ 2eFe-S Fp

Citoplasma NADH + H+

Q 2 H+ 2eCyt b556 Cyt b562

2 H+

3 H+ + O2 Cyt o

2 H+

H2O
ADP + Pi

H+

ATPasa

H+

ATP

Respiracin anaerobia

Fuera
2 H+ 2eFe-S Fp

Citoplasma
NADH + H+

Q 2 H+ 2eCyt b556

2 H+

NO3- + 2 H+ Nitrato reductasa NO2- + H2O ADP + Pi H+ ATPasa H+ ATP

Respiracin anaerobia
Algunos aceptores de electrones utilizados en la respiracin
Desulfovibrio Desulfuromonas

Thermoproteus

Wolinella

Geobacter

Pseudomonas

Respiracin aerobia: rendimiento energtico

Va metablica
Gluclisis

Productos
2 ATP (FNS) 2 NADH

ATP
8

Piruvato Deshidrogenasa cinasa

2 NADH

Ciclo de cidos tricarboxlicos

2 GTP (FNS) 6 NADH 2 FADH2

24

Total: 38 ATP

Quimiolittrofos
Microorganismos que usan compuestos inorgnicos como fuente de energa, la mayora son aerobios y producen la energa removiendo los electrones de un sustrato y produciendo ATP por fosforilacin oxidativa, algunos son littrofos facultativos y pueden emplear los compuestos orgnicos como fuente de energa. Muchos de los littrofos son auttrofos (litoauttrofos), algunos utilizan el CO2 como nica fuente de carbono, como las bacterias metanognicas, las nitrificantes y algunas otras.

Quimiolittrofos
Grupo Bacterias del hidrgeno Bacterias del nitrgeno* Fuente de energa (reducido) Producto final (oxidado) Organismo Alcaligenes, Pseudomonas Nitrosomonas Nitrobacter Thiobacillus, Sulfolobus

H2
NH3 NO2H2S o S Fe 2+

H2O
NO2NO3SO42Fe3+

Bacterias del nitrgeno*

Bacterias del azufre

Bacterias del hierro

Gallionella, Thiobacillus

*El proceso de nitrificacin requiere de un consorcio de bacterias para convertir el NH3 a NO3-.

Quimiolittrofos
REACCIN H2 + O2 H2O 2Fe2+ + 2H+ +1 O2 2Fe3+ + H2O S + 1 O 2 + H2 O H2SO4 S2O32- + 2O2 + H2O 2SO42- + 2 H+ Glucosa CO2
NAD+ NADH Flavoprotena NO2Citocromos cita1 cita3 O2 H2O ADP + Pi ATP ADP + Pi ATP

G(kcal/mol) -17.4 -11.2 -118.5 -223.7 -686.0

NO3-

Flujo inverso de electrones

Quimiolittrofos

Mixotrofa: el caso de la bacteria del hidrgeno Ralstonia eutropha

Quimiolittrofos

Sistemas de oxidacin del azufre. En dos sistemas los sustratos H2S, S0 y S2O32- se oxidan primero a SO32-, posteriormente el SO32- se oxida a SO42- la sulfito oxidasa o utilizando la inversin de la actividad de la enzima adenosina fosfosulfato reductasa.

Sistema Sox (sulfur oxidation). En este sistema no se forma el SO32- , parece estar formado por un sistema de citocromos.

Quimiolittrofos

Thiobacillus

Quimiolittrofos

Auttrofos
Organismos que utilizan el CO2 como fuente de carbono. El CO2 puede ser incorporado por diversas vas:
Ciclo de Krebs reverso. Bacterias verdes del azufre (Chlorobium) Va del Hidroxipropionato. Bacterias verdes (Chloroflexus) Va Acetil CoA reductiva. Bacterias acetognicas (Clostridium thermoaceticum, Acetobacterium woodii), metanognicas (Methanobacterium thermoautotrophicum) y auttrofas sulfato reductoras (Desulfobacterium autotrophicum) Ciclo de Calvin. Bacterias prpura, cianobacterias, algas, plantas verdes, muchas bacterias quimiolittrofas y algunas arqueobacterias halfilas e hipertermfilas. La fijacin es realizada por la enzima Ribulosa bifosfato carboxilasa (RubisCO) que forma acmulos llamado carboxisomas.

Carboxisomas en Prochlorococcus marinus

Ciclo de Calvin-Benson
Consta de tres fases:

Fijacin por la enzima Rubisco.

Reduccin a Gliceraldehdo 3fosfato (formacin de compuestos orgnicos). Regeneracin de Ribulosa bifosfato, sustrato para la fijacin.

Ciclo de Calvin-Benson

Fottrofos
Los organismos fottrofos convierten la energa luminosa en energa qumica para formar ATP.
Fotosntesis oxignica. Cianobacterias, algas y plantas Fotosntesis anoxignica. Bacterias prpura, verdes y heliobacterias. Fotofosforilacin no fotosntetica (mediada por el pigmento bacteriorrodopsina). Halobacterias (arquea haloflica)

Chloroflexus (bacteria verde no del azufre, Chloroflexaceae), Rhodospirillum (bacteria prpura, Rhodospirillaceae), Chlorobium (bacteria verde del azufre, Chlorobiaceae), Heliobacterium (Gram-positiva, Heliobacteriaceae), y Nostoc (cianobacteria, Nostocaceae).

Fotosntesis
Es la conversin de energa luminosa en energa qumica que puede ser usada para la formacin de material celular a partir de CO2. Es un metabolismo separado en dos componentes metablicos:

Catablico (fase luminosa), la energa solar es transformada en energa qumica. Anablico (fase oscura), involucra la fijacin de CO2 como fuente de carbono para el crecimiento celular.

Pigmentos de la fotosntesis
Clorofila (fotosntesis oxignica). Clorofilas a(430, 680 nm) y b(660 nm) Bacterioclorofila (fotosntesis anoxignica)

Pigmentos de la fotosntesis
Las ficobiliprotenas son tetrapirroles de cadena abierta acoplados a protenas cuya agregacin forma ficobilisomas. La ficoeritrobilina y la ficocianobilina son los principales pigmentos de captacin de luz (antena) en los microorganismos. Los pigmentos de ficobilina son ficoeritrina (PE, 550 nm), ficocianina (PC, 620 nm) y aloficocianina (AP, 650 nm). La energa de los fotones absorbidos por PE o PC es transmitida por AP a la clorofila a del centro de reaccin mediante un proceso conocido como transferencia de excitones.

Ficocianina

Pigmentos de la fotosntesis
Pigmentos accesorios. Carotenoides: carotenos y xantofilas.

Fotofosforilacin

En los fottrofos oxignicos, el transporte de electrones asemeja una Z.

Fotofosforilacin acclica

Ocurre en la fotosntesis oxignica. El donador de electrones es el agua y el aceptor final es una coenzima oxidada. Hay produccin de oxgeno.

Fotofosforilacin cclica

Ocurre en la fotosntesis anoxignica. Los donadores de electrones son principalmente: H2S, S, S2O32-. Los electrones son devueltos a la clorofila por medio de transportadores (cadena reversa).

El clorosoma

Chlorobium (bacteria verde del azufre)

Otro tipo de membranas fotosintticas

Invaginacin de la membrana (Bacterias prpuras)

Membranas tilacoidales (Cianobacterias)

Fotofosforilacin no fotosntetica
La bacteriorrodospsina tiene conjugada una molcula de retinal (Ret). Despus de absorber un fotn de luz, Ret todo-trans (RetT) se excita y pasa a configuracin cis (RetC). Esta transformacin est acoplada a la translocacin de un H+ a travs de la membrana citoplsmica. Conforme el retinal toma otro H+ del citoplasma, regresa a su estado basal RetT y comienza el ciclo nuevamente.

La bacteriorrodopsina tiene siete hlices que comprenden toda la seccin de la membrana. El cromforo retinal todo-trans (prpura) esta unido covalentemente mediante una base de Schiff al grupo amino de una Lys. Una serie de residuos Asp y Glu, y molculas de agua asociadas aportan la va transmembranal para los protones (flechas rojas).

Reacciones biosintticas
Los intermediarios de las vas del metabolismo central son tambin intermediarios de las vas de degradacin y biosntesis de protenas y lpidos.

Hidrlisis del Almidn

El almidn es producido principalmente por plantas superiores, est compuesto de amilosa y amilopectina. Diversas enzimas amilolticas hidrolizan almidn y sus productos.

Prueba negativa

Prueba positiva

Agar Almidn Sustrato: Almidn (polmero de glucosa). Enzima: Amilasa (exoenzima). Producto: Glucosa. Revelador: Lugol. Fundamento: El lugol con el almidn forman un complejo color caf-prpura que desaparece cuando el almidn ha sido degradado.

Degradacin de la casena
Agar Leche Descremada Sustrato: Casena (protena). Enzima: Caseinasa (Proteasa, exoenzima). Producto: Aminocidos. Revelador: No requiere.

Prueba negativa

Prueba positiva

Fundamento: Las proteasas son excretadas al medio para la degradacin de protenas, la casena es la protena de la leche que le confiere el color blanco, cuando la casena es hidrolizada desaparece el color blanco alrededor del crecimiento microbiano.

Licuefaccin de la gelatina
Gelatina Nutritiva Sustrato: Gelatina (protena). Enzima: Gelatinasa (Proteasa, exoenzima). Producto: Aminocidos. Revelador: No requiere o puede emplearse el carbn activado en polvo.
Prueba negativa Prueba positiva

La gelatina es una protena que tiene la capacidad de gelificar, cuando es hidrolizada por la gelatinasa en los aminocidos que la componen pierde su caracterstica de gelificar. Se pueden emplear varios medios que permiten la visualizacin macroscpica como la gelatina adherida a carbn activado.

Fermentacin de carbohidratos
Medio base rojo de fenol ms carbohidrato o polialcohol, con campana de fermentacin (Durham). Sustrato: Carbohidrato o polialcohol. Va: Fermentativa. Producto: cidos orgnicos. Indicador: Cualquier indicador de pH.
Negativo/Positivo(A)/Positivo(AG)

Los compuestos de carbono (carbohidratos o polialcoholes) deben ser incorporados, algunos deben ser degradados en monmeros y transportados a la clula para ser metabolizados en condiciones anaerobias por va fermentativa. La fermentacin (degradacin) de un compuesto orgnico se observa por la acidez en el medio de cultivo y la formacin de gas capturado en la campana de fermentacin.

Rojo de Metilo/Voges Proskauer

Caldo RM/VP Sustrato: Glucosa. Vas: Fermentacin cida o neutra. Producto: Acido orgnicos o acetona. Reveladores: Solucin de Rojo de Metilo, Alfa Naftol y KOH 40%.

Fermentacin cido mixta: Los productos finales son cidos orgnicos que provocan un descenso brusco del pH inicial del medio (viraje del indicador de amarillo pH por encima de 5,1) y rojo (pH por debajo de 4,4). Estos microorganismos por cada 4 molculas de piruvato formadas, reducen dos a cido lctico y dos las metabolizan para formar cido actico y frmico; parte del acetato pasa a etanol y parte del frmico a CO2 e H2 en cantidades iguales.

Rojo de Metilo/Voges Proskauer

Fermentacin butilengliclica: en sta, parte del piruvato se metaboliza produciendo cantidades menores de cido lctico, frmico y actico, la mayor parte del piruvato se condensa formando acetilmetilcarbinol, que es reducido a 2,3-butilenglicol, productos que son neutros.

Para determinar la presencia de los productos neutros (prueba de Voges-Proskauer): Se agrega un poco de a-naftol al 5% en etanol (medio adquiere aspecto lechoso), luego se le aade (KOH 40%) que desaparece el aspecto lechoso, se agita fuertemente. (Prueba positiva color rosado - violceo en la parte superior del tubo; Prueba negativa no tiene coloracin).

Oxidasa
Cultivo de medio nutritivo Sustrato: Compuesto reducido (incoloro). Enzima: Oxidasa. Producto: Compuesto oxidado (violeta). Revelador: Reactivo de Kovacs, diclorhidrato de tetrametil-pfenilendiamina (TPD) al 1%, solucin incolora. Se basa en la produccin bacteriana de una enzima oxidasa intracelular. Esta reaccin se debe a un sistema de citocromo oxidasa que activa la oxidacin del citocromo reducido por el oxgeno molecular, el que a su vez acta como un aceptor de electrones en la fase terminal del sistema de transferencia de electrones. La prueba positiva se observa por la reduccin del reactivo incoloro en pocos segundos formndose un producto colorido.