Revista Brasileira de Ensino de F sica, v. 32, n. 1, 1506 (2010) www.sbsica.org.

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(A low-cost spectrophotometer for teaching labs: applications in teaching of electronic absorption and uorescence emission)

Um espectrofot ometro de baixo custo para laborat orios de ensino: aplica c oes no ensino da absor ca o eletr onica e emiss ao de uoresc encia
Everton L udke1
Departamento de F sica, Universidade Federal de Santa Maria, Santa Maria, RS, Brasil Recebido em 26/4/2009; Revisado em 11/11/2009; Aceito em 23/11/2009; Publicado em 14/5/2010 Neste artigo, apresento detalhes da constru ca o de um ensaio espectrofotm etrico em comprimentos de onda no visual e ultravioleta, a um custo muito baixo. O equipamento se destina ao uso de alunos de cursos da ci encias da sa ude em n vel universit ario durante atividades pr aticas de m etodos de an alise qu mica anal tica, f sico-qu mica ou biof sica. O aprendizado experimental de t ecnicas fundamentais espectrom etricas e a comprova ca o quantitativa da lei de Lambert-Beer, que n ao pode ser feita integralmente com espectrofot ometros ultravioleta comerciais, e obtida facilmente com o aparato desenvolvido. Exemplos de experimentos em laborat orio did atico de biof sica s ao brevemente discutidos. Palavras-chave: recurso experimental, ensino, lei de Lambert-Beer, biof sica, ci encias da sa ude. In this paper, I present construction details of a spectrophotometric assay operating in visual and ultraviolet wavelengths at a very low cost. The equipment is intended to be used by rst or second-year undergraduate students in health sciences during practical activities of methods in analytical chemistry, physical chemistry or biophysics. The experimental learning of fundamental spectrophotometric techniques and the quantitative determination of the Lambert-Beer law, which cannot be done with commercial UV spectrophotometers, is easily attained with the apparatus. Experimental examples in biophysics teaching labs are briey discussed. Keywords: experimental resources, teaching, Lambert-Beer law, biophysics, health sciences.

1. Introdu c ao
M etodos experimentais de espectroscopia tal como apresentados por livros-texto padr ao em f sico-qu mica [1] e qu mica anal tica [2,3] carecem de experimentos laboratoriais devido ao custo elevado tanto dos equipamentos, quanto das amostras-padr ao que normalmente s ao usadas para demonstra c oes aos alunos. Esse fato implica em que tais assuntos s ao restritos a aulas te oricas onde o aluno deve imaginar a aplica c ao de tais t ecnicas sem adquirir experi encia no manuseio dos equipamentos e nos m etodos de an alise de dados. O objetivo desse artigo e propor um experimento simples para a determina c ao dos princ pios fundamentais de espectroscopia por absor c ao de radia c ao em fase l quida, tal como empregados em cromatograa l quida (HPLC) ou espectrofotometria por absor c ao no ultravioleta, que s ao fundamentais em pesquisa em bioqu mica e biof sica.

2.

O aparato experimental

A Fig. 1 mostra o aparato experimental onde foram empregados um tubo de vidro de 10 mm de di ametro e
1 E-mail:

20 cm de altura onde foi axado o LED transmissor na parte inferior e um tubo m ovel com 5mm de di ametro onde foi axado o fototrans stor que e introduzido dentro do primeiro. O LED emissor de luz foi conectado ` a mesma fonte de +12 V que alimenta o circuito atrav es de um resistor de 820 para evitar curto-circuito. Uma c amara escura de papel ao foi constru da para minimizar a luz ambiente sobre o aparato, o que poderia gerar medidas incorretas da intensidade da luz. A xa c ao dos dispositivos optoeletr onicos aos tubos de vidro foi feita com cola de silicone para evitar vazamentos e inltra c oes. colocada a solu c ao. Suportes de tubos de ensaio foram usados para xar os tubos ap os variar a dist ancia x entre os sensores, usando intervalos de 5 mm. A dist ancia da lente do fototrans stor ao LED pode ser medida com uma r egua de 15 cm de escala e os sensores foram afastados entre si. Para a troca de amostras, ambos os tubos s ao lavados com alcool comum e as lentes do fototrans stor s ao cuidadosamente limpas a cada medida. Os os que conectam o fototrans stor ao circuito surgem por dentro do tubo m ovel que submerge o fototrans stor na solu c ao contida pelo tubo de 10 mm,

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sendo posteriormente conectados aos pontos A e B do circuito da Fig. 1 para as medi c oes. A leitura em volts

e feita por um mult metro anal ogico port atil SUNWA YX-360TR ou equivalente.

` direita, a geometria dos tubos para medidas fotom Figura 1 - A etricas em fun c ao da dist ancia x, onde ambos os LEDs est ao imersos na ` direita, o circuito eletr solu c ao a ser medida. A onico do medidor de intensidade da luz para o espectrofot ometro de absor c ao.

Como fonte de f otons de alta energia, pode ser empregado mm led comercial UV (luz negra) de 10 mm de di ametro opera com uma voltagem entre 3.0 e 3.8 V, consumindo uma corrente de 100 mA e produz um feixe de radia c ao ultravioleta UVA em um angulo de abertura de 40 graus e com uma banda espectral e emiss ao relativamente estreita (10 nm) centrada em 400 nm e com uma pot encia luminosa de 2 Cd. Outros autores [4,5] empregaram com sucesso esse componente eletr onico comercial para ensaios em ensino de qu mica em cursos de qu mica em n vel m edio. Como sensor de luz, foi empregado o fototrans stor BPW36 ou equivalentes L14G1 ou TIL81 que podem ser empregados como sensores de luz para diversas aplica c oes an alise qu mica [6]. A partir das especica c oes do fabricante para o BPW36, temos o fator de convers ao para fotometria onde a voltagem nos terminais do diodo (V0 ) e diretamente proporcional ` a intensidade da luz que incide sobre a janela transparente. Como o fototrans stor de sil cio e hermeticamente fechado, pode ser mergulhado na amostra sem danic alo. Para medidas de absor c ao em comprimentos de onda no visual, para ns de determina c ao da lei de Lambert-Beer em outros comprimentos de onda, podese substituir o LED UV por leds de 5 mm de alto brilho entre 2 e 15 Cd dispon veis no mercado para efeitos automotivos nas cores azul (465 nm), amarelo (595 nm), verde-esmeralda (520 nm) ou vermelho (648 nm), bastando substitui-lo no circuito da Fig. 1. Com o fototrans stor em polariza c ao reversa e com um resistor de 10 k entre o anodo e o terra, temos a rela c ao I (lux) = 1330 V0 . Para aumentar a precis ao

de leitura na voltagem, coloca-se um amplicador de vari avel entre 1 e 10 vezes para expandir a escala das medidas, usando um amplicador operacional TL081 em modo de amplicador D.C. A medida da a sua tens ao de sa da em volts com um mult metro digital e diretamente proporcional ` a intensidade da luz captada pelo fototrans stor e pode ser expressa em mW cm2 se necess ario. Assim, a medida do mult metro indicar a a intensidade do sinal de uma forma linear.

3.

Descri c ao de atividade em sala de aula

Em salas de aula pr atica de biof sica, os alunos realizam a determina c ao do coeciente de extin c ao molar para a absor c ao eletr onica de diversos corantes org anicos industriais, com o objetivo de entender os princ pios f sicos envolvidos em t ecnicas de an alise bioqu micas por absor c ao eletr onica se LEDs de comprimento de onda no visual forem empregados. A calibra c ao da intensidade da radia c ao I (x) captada por transmiss ao ou espalhamento Rayleigh ao longo da linha de visada em unidades de W cm2 necessita de fot ometros precisos mas sem um ganho did atico-pedag ogico signicativo. Assim, as medidas de valores relativos de atenua c ao da luz captada pelo detector expressa em dB e m fun c ao da concentra c ao molar do corante ou da dist ancia ao longo do eixo de profundidade optica e um indicador mais apropriado dos efeitos sob estudo. Assim, se I0 for a intensidade m axima da luz em x = 0, dene-se a intensidade relativa em dB em fun c ao de x pela f ormula

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IdB = 10 log (I (x)/I0 ). Quando medidas de absor c ao de um feixe luminoso monocrom atico de comprimento de onda ao longo da linha de visada s ao feitas, a quantidade IdB e denominada atenua c ao intr nseca da amostra. Os alunos anotam a voltagem medida pelo mult metro em fun ca o da posi c ao e tomam I0 quando x = 1 cm como refer encia inicial das dist ancias e anotam os valores de I (x) vs. x, fazendo o gr aco de IdB vs. x, para obter , onde e o comprimento de onda que dene a cor do diodo. Mantendo a dist ancia xa de 5 ou 10 cm, eles tamb em podem vericar o efeito de mudan ca da concentra c ao molar da solu c ao na lei de Lambert-Beer.

da emiss ao por uoresc encia induzida pela excita c ao por radia c ao ultravioleta [1,8]. Para tanto, devese empregar um LED emissor ultravioleta e um ltro monocrom atico constitu do por um disco de cor amarela, vermelha ou azul for posicionado na janela do fototrans stor e uma solu c ao de tinta uorescente for feita colocando-se uma carga de caneta de marcar texto em 300 ml de alcool de limpeza e colocando o fototrans stor detector de luz em incid encia perpendicular a dire ` c ao da luz do LED emissor.

4.

Conclus oes

No presente artigo, foi descrito um aparato experimental de muito baixo custo para possibilitar estudos qualitativos e quantitativos de diversos aspectos experimentais relacionados ` as t ecnicas de espectrofotometria, principalmente a comprova c ao experimental da lei de Lambert-Beer, que e dif cil de ser medida diretamente com espectrofot ometros comerciais que operam em ultravioleta. A alta repetitividade e reprodutibilidade desse experimento justica a sua ado c ao na pr atica de ensino de biof sica para ci encias da sa ude e interdisciplinares, onde as limita c oes de tempo e or camento s ao agravantes na qualidade do ensino de f sica em ambientes interdisciplinares. Outras possibilidades de abordagem consistem em investigar a sensibilidade espectral de pigmentos naturais como a clorola, que pode ser obtido por extrato alc oolico de folhas verdes como da arvore da laranjeira ou caroten oides a partir de extrato de piment oes ou cascas de laranja, usando LEDs verdes e vermelhos, o que e um excelente projeto de ensino de biologia e f sica para o ensino m edio para exemplicar diversas aplica c oes.

Figura 2 - Dados experimentais para a espectroscopia da Murexida em diferentes concentra c oes molares em = 520 nm empregando um LED emissor verde.

Refer encias
[1] P.W. Atkins and J. De Paula, Physical Chemistry (Oxford University Press, Oxford, 2006), 8th ed., p. 431508. [2] D.C. Harris, An alise Qu mica Quantitativa (Editora LTC, Rio de Janeiro, 2008), 7a ed., p. 467-498. [3] F.J. Holler, D.A. Skoog and S.R. Crouch, Princ pios de An alise Instrumental (Artmed-Bookman, Porto Alegre, 2009), 6a ed., p. 178-225. [4] A.L. Galo e M.F. Colombo, Quim. Nova 32, 488 (2009). [5] P.H.S. Sartori e E.L.S. Loreto, Quim. Nova na Esc. 31, 1 (2009). [6] W.A. De Oliveira, F.A.A. Matias and E. Moschim, IEEE Trans. Instrum. Measur. 45, 326 (1996). [7] M. Ficher, W. Knoche, B.H. Robinson and J.H.M. Wedderburn, J. Chem. Soc., Faraday Trans. I, 75, 119 (1979). [8] N.J. Turro, V. Ramamurthy and J.C. Scaiano, Principles of Molecular Photochemistry: An Introduction (University Science Books, New York, 2009).

A murexida (purpurato de am onio) e um corante industrial muito usado em ensaios experimentais para avalia c ao da composi c ao qu mica de c admio, cobalto, n quel, cobre, t orio e metais terras-raras. o gr aco IdB vs. C (M ) fornece o coeciente de extin c ao molar da amostra. Usando um LED automotivo verde, podemos conrmar o resultado experimental da lei de Lambert-Beer para a absor c ao optica da murexida e os dados com ajuste de uma rela c ao linear com o m etodo de ajuste experimental pelos m nimos quadrados (Fig. 2). Usando a lei de Lambert-Beer A = 0, 1 IdB = Cl, pode-se determinar o coeciente de extin c ao molar do corante murexida como sendo 1 M1 , para concentra c oes 520 nm = 14600 600 cm molares C entre 0,5 e 2,5 M e cubetas de l = 10 cm de comprimento, que concorda com medidas pr evias para esse corante [4,7]. Com pequenas modica c oes, esse equipamento ainda pode ser usado para demonstra c ao qualitativa