TECNOLGICO DE ESTUDIOS SUPERIORES DE ECATEPEC

INGENIERA BIOQUMICA

BIOLOGA

PROFESORA M. EN C. GABRELA ZAFRA JIMENEZ

3201

EQUIPO: GUTIERREZ VALVERDE JOSE MANUEL JOHNSTON ORTIZ LIPSSIE MICHELLE MENDOZA JUREZ RODRIGO ROMERO VELZQUEZ MIRIAM

14-SEPTIEMBRE-2012

INTRODUCCIN El trmino Fungi (latn, literalmente "hongos") designa a un grupo de organismos eucariotas entre los que se encuentran los mohos, las levaduras y las setas. En la mayora de los casos, sus representantes son poco conspicuos debido a su pequeo tamao; suelen vivir asociados a suelos y material en descomposicin y como simbiontes de plantas, animales u otros hongos. Como otros eucariotas, los hongos poseen clulas delimitadas por una membrana plasmtica rica en esteroles y que contienen un ncleo que alberga el material gentico en forma de cromosomas. Este material gentico contiene genes y otros elementos codificantes as como elementos no codificantes, como los intrones. Poseen orgnulos celulares, como las mitocondrias y los ribosomas. Como compuestos de reserva y glcidos solubles poseen polialcoholes, disacridos y polisacridos Los hongos carecen de cloroplastos, como los animales. Esto se debe a su carcter heterotrfico, que exige que obtengan como fuente de carbono, energa y poder reductor compuestos orgnicos. A semejanza de las plantas, los hongos poseen pared celular y vacuolas. Se reproducen de forma sexual y asexual, y, como los helechos y musgos, producen esporas. Debido a su ciclo vital, poseen ncleos haploides habitualmente, al igual que los musgos y las algas. Los hongos guardan parecido con euglenoides y bacterias. Todos ellos producen el aminocido L-lisina mediante la va de biosntesis del cido alfa-aminoadpico. Las clulas de los hongos suelen poseer un aspecto filamentoso, siendo tubulares y alargadas. En su interior, es comn que se encuentren varios ncleos; en sus extremos, zonas de crecimiento, se da una agregacin de vesculas que contienen protenas, lpidos y molculas orgnicas. Los hongos tienen distintos hbitos de vida. Los hongos saprfitos, es decir descomponedores de materia orgnica, cumplen una funcin ecolgica de la mayor relevancia pues garantizan el reciclaje de la materia muerta y, por lo tanto, la recirculacin de sustancias nutritivas en los ecosistemas. Los hongos parsitos, que viven sobre o dentro de otros seres vivos, obtienen su alimento de stos y llegan a producir enfermedad en su hospedero. Los hongos simbiontes que se

asocian de manera mutualista con otros organismos constituyen alianzas vivas de beneficio mutuo como por ejemplo los lquenes (asociacin de hongo y alga) y las micorrizas (asociacin de hongo y raz de una planta), simbiosis estas de gran importancia en la naturaleza en procesos de colonizacin de hbitats y de circulacin de nutrientes. Desde la perspectiva econmica, los hongos ofrecen mltiples servicios, pues se utilizan como alimentos, levaduras de la masa de pan, fermentadores en la produccin de vino y cerveza, en la maduracin de quesos y en el control biolgico de plagas agrcolas. Adems, como fuentes de sustancias que por su actividad biolgica pueden ser de enorme utilidad en medicina y en la bioindustria y como agentes para estimular el desarrollo de las plantas (hongos formadores de micorriza). Sin embargo, tambin son dainos cuando actan como parsitos de plantas y animales o cuando estropean estructuras de madera, alimentos almacenados, libros y hasta obras de arte, amn de ser peligrosos si, por desconocimiento, se consumen aquellos que tienen principios txicos o alucingenos. (Smallwood y Green, 1970)

OBJETIVOS
Objetivo general Reconocer a nivel microscpico ptico las diferencias entre clulas procariotas y clulas eucariotas.

Objetivos especficos Identificar las partes mecnicas y pticas del microscopio compuesto y del microscopio estereoscpico, y de esta manera aprender el uso correcto del microscopio. Realizar preparaciones sencillas para observar distintas estructuras biolgicas de tejidos tanto animales como vegetales, as como tambin diversas muestras de moho y observar su morfologa. Observar la morfologa bacteriana y distinguir los diferentes tipos de agrupaciones que existen, mediante el uso de una tcnica de tincin simple y diferencial.

METODOLOGA
1. Tinciones simples: Se deja un alimento envejecer en un lugar hmedo. Observar las muestras en el microscopio estereoscpico. 2. Preparacin sencilla en fresco de mohos: Ubicar los esporangios. Tomar una muestra con una aguja de diseccin. Extender el material en un portaobjetos sobre una gota de azul de metileno. Colocar el cubreobjetos. Secar exceso de colorante. Observar en el microscopio ptico y estereoscpico. 3. Preparacin en fresco de mohos: Colocar una gota de azul de metileno sobre dos portaobjetos. Tomar el material a observar y colocarlo sobre la gota de uno de los portaobjetos. Transportar el material con asa a la gota del segundo portaobjetos. Se distribuye el material en la gota con ayuda del asa. Colocar el cubre objetos. Secar el exceso de colorante. Observar en el microscopio. 4. Preparacin en fresco con cinta adhesiva: Colocar una gota de colorante sobre un portaobjetos. Cortar un trozo de cinta adhesiva y tocar la muestra enmohecida con el lado adherente. Pegar la cinta sobre la gota del portaobjetos. Eliminar exceso de colorante. Colocar portaobjetos y observar al microscopio. 5. Preparacin fija de mohos: Ubicar los esporangios y tomar una muestra muy pequea con ayuda de una aguja de diseccin. Extender el material en el portaobjetos con una gota de agua previamente colocada. Fijar con calor al fortis. Cubrir el fortis con azul de metileno, dejar actuar por un minuto y enjuagar con agua destilada. Eliminar el exceso de agua, colocar el portaobjetos y observar en un microscopio compuesto. 6. Realizacin de frotis bacteriano: Colocar una gota de agua sobre el portaobjetos. Flamear el asa hasta rojo vivo, tomar una pequea muestra bacteriana y transferir a la gota de agua. Esperar hasta que el lquido se evapore, se puede acelerar con la llama del mechero. Teir el fortis aplicando tincin de Gram. Eliminar exceso de agua, colocar el cubreobjetos y observar al microscopio compuesto.

7. Frotis de muestras lquidas: R. Colocar la muestra en el portaobjetos y pasar por el mechero, dejando enfriar entre los pases. Si es muestra grasa se fijar con metanol; se colocan unas gotas de metanol a la superficie seca de la muestra grasa y se remueve el excedente. Se tie el fortis aplicando una tincin de Gram. Eliminar el exceso de hmedo. Colocar el cubreobjetos y observar en un microscopio compuesto.

8. Tincin de Gram: R. Cubrir el frotis con solucin cristal violeta. Lavar con agua destilada y cubrir el frotis con lugol. Lavar nuevamente con agua destilada. Lavar con el decolorante hasta que ste salga claro y lavar con agua nuevamente. Aplicar al frotis solucin safranina, lavar con agua y dejar secar la preparacin al aire. Hacer la iluminacin de Koeler con el objetivo de 10X y observar al microscopio.

9. Clulas epiteliales humanas (tincin simple): Raspar la parte interna de la mejilla con un hisopo estril y colocar la muestra en un portaobjetos. Limpiar con alcohol y flamear en porta objetos. Repetir el primer paso con un segundo portaobjetos. Aplicar tincin simple con azul de metileno y observar al microscopio ptico de 40X.

RESULTADOS Y ANLISI DE RESULTADOS

Rhizopus nigricans (Moho del Pan). El Rhizopus nigricans o Moho del pan son hongos, generalmente saprfitos, pertenecientes a la Familia de los Mucoraceae. Presentan el aspecto de una suave pelusa griscea o verdosa que se desarrolla en la superficie de la materia orgnica en descomposicin sobre la que viven. Vistos al microscopio presentan un micelio formado por abundante cantidad de hifas blanquecinas y sin tabiques. En el extremo de algunas hifas se desarrollan los esporangios de forma y nmero variado segn las especies. Las esporas contenidas en los esporangios son generalmente negras o verdosas. Cuando quedan libres dan origen a la formacin de nuevos micelios. Sus micelios son largas clulas en forma de tubos llenos de protoplasma con abundantes ncleos. Algunas hifas se introducen en la sustancia sobre la que se desarrolla el moho (pan) y son las encargadas de nutrirlo y su extremidad se hace globulosa para adaptarse a la reproduccin. En el extremo de algunas hifas se desarrollan los esporangios, que tienen forma de Cabecitas, dentro del cual se encuentran las esporas, que al salir son diseminadas por el viento, generalmente blancas. En la reproduccin, los esporangios se separan del resto de la hifa por un tabique (asexual). En la sexual se observa que las hifas emiten un brote y al tocarse los brotes, se reabsorbe la membrana de sus extremidades y se mezclan con sus contenidos formando un cigoto, llamado cigospora, que es llevada por el viento y cuando germina da una hifa. Se los encuentra en el suelo, degradando frutos y vegetales, heces animales, y residuos. (Gmez-Pompa et al, 1968) Clasificacin cientfica: Reino Fungi Divisin Clase Orden Familia Gnero Especie R. nigricans

Zygomycota Zygomycetes Mucorales

Mucoraceae Rhizopus

(Moho de pan bajo el microscopio)

CONCLUSIN
Los distintos tipos de microscopios son de gran importancia para la observacin y anlisis de los tipos de microrganismos que existen en nuestro entorno, por ello, se deben de tener cuidados especficos para mantener en ptimas condiciones estos instrumentos. Cada tipo de microrganismo debe preparar de manera distinta para su observacin el en microscopio ya que tienen estructuras celulares diferentes. Tambin pudimos observar que hay dos tipos generales para la preparacin de las muestras para su observacin; preparaciones en fresco y preparaciones fijas.

REFERENCIAS (lvarez-Uria, M; Anadn, R; Fraile, B; Nistal, M; Paniagua, R; Sez, FJ; Sesma, P; Biologa Celular, Mc Graw Hill, 3ra edicin, China, 389p.) (Barrera, A; Gmez-Pompa, A; Gutirrez- Vzquez, JM; Halffter, G, Biologa: unidad, diversidad y continuidad de los seres vivos, Editorial C.E.C.S.A, 2da edicin, Mxico, D.F, 1980, 942p) (Cole, LC; Dethier, VG; Greulach, VA; Hayashi, T; Mayr, E; Mendelsohn, E, Biologa, Publicaciones Cultural, 1ra edicin, Espaa, 1970, 751p.) (Ingraham, JL; Painte, PR; Stainer, RY; Wheelis, ML, Microbiologa, Editorial Reverte, 2da edicin)

CUESTIONARIO
1. Qu importancia tiene el uso del microscopio para los estudios biolgicos? R. Para la observacin y anlisis de los microrganismo celulares, tanto unicelulares como pluricelulares, clasificando de acuerdo a las caractersticas que se pueden observar mediante sistemas microscpicos.

2. Por qu es necesario manejar con cuidado el microscopio y qu cuidados se deben tener al usar un microscopio? R. Para poder tener una mejor apreciacin del espcimen celular sin tener ningn tipo de modificacin sistemtica as como tambin mantener su punto de calibracin lo ms estable posible. El microscopio es un instrumento de visin muy delicado, as que para su uso se deben de seguir las siguientes normas: 1. Para transportar el microscopio deben utilizarse siempre las dos manos, sujetndolo por el brazo con una mano y por el pie con la palma de la otra. 2. Una vez colocado el microscopio en su sitio, no debe moverse hasta que finalice la prctica. Cuando se vaya a cambiar de observador se debe mover l y no el microscopio. 3. Mover siempre suave y lentamente cualquier elemento del microscopio. 4. Nunca poner los dedos en las lentes del ocular ni del objetivo. Si se ensucian dichas lentes se limpiarn con un pao suave de algodn, sin utilizar ningn disolvente. 5. No sacar de su sitio el ocular ni los objetivos, a no ser que vayan a ser sustituidos, en cuyo caso la operacin debe realizarse lo ms rpidamente posible, para evitar la entrada de polvo.

6. Asegurarse de que el portaobjetos est bien seco cuando va a ser colocado sobre la platina. 7. Al enfocar, sobre todo con los objetivos de mayor aumento, hay que evitar que el extremo del objetivo choque con la preparacin. Para ello acercaremos el objetivo a la preparacin mirando lateralmente y luego, mirando ya a travs del ocular, enfocamos alejando el objetivo. 3. Menciona el fundamento de los distintos tipos de microscopios, menciona en qu tipos de preparaciones los utilizaras?
R. Microscopio Simple:

El objeto se coloca entre la lente y el foco, de modo que la imagen es virtual y est a una distancia que es la distancia mnima de visn ntida, alrededor de 25 cm. Consta de una base, en la que se sita la platina, y de la que emerge una columna que soporta las lentes y el mando de enfoque. Slo sirve para exmenes superficiales (diseccin de animales, observacin de colonias, deteccin de quistes de parsitos, etc.).Se consigue un nmero de aumentos entre 4 y 60. Microscopio compuesto: Es un microscopio ptico que tiene ms de un lente. Los microscopios compuestos se utilizan especialmente para examinar objetos transparentes, o cortados en lminas tan finas que se transparentan. Se emplea para aumentar o ampliar las imgenes de objetos y organismos no visibles a simple vista. El microscopio ptico comn est conformado por tres sistemas: El sistema mecnico est constituido por una serie de piezas en las que van instaladas las lentes, que permiten el movimiento para el enfoque. El sistema ptico comprende un conjunto de lentes, dispuestas de tal manera que producen el aumento de las imgenes que se observan a travs de ellas.

El sistema de iluminacin comprende las partes del microscopio que reflejan, transmiten y regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la observacin a travs del microscopio.

Microscopio de Campo oscuro: De fondo oscuro sobre el que se ven los objetos intensamente iluminados. Consta de un condensador especial que debe estar muy cercano a la preparacin y que lanza sobre la muestra un cono hueco de luz. Con esto se logra que, solamente los rayos que chocan con las estructuras sometidas a estudio y son reflejados hacia arriba, puedan ser visualizados a travs del objetivo. Permite ver el contorno de las bacterias y su movilidad Permite ver los microrganismos sin teir Permite ver el Treponema pallidum, bacteria espiroqueta de la sfilis.

Microscopio de Contraste de fases: Produce variaciones de luminosidad de forma que sean visibles las distintas partes de una muestra. Para ver parsitos y bacterias en cortes histolgicos, y para objetos transparentes y no coloreados. Consta de un dispositivo, situado dentro o debajo del condensador, que produce diferencias de longitud de onda en los distintos rayos. Microscopio de Fluorescencia: La lente, que habitualmente es de vidrio es sustituida por lentes de cuarzo y la iluminacin se produce por unas lmparas de mercurio. La variedad de fluorescencia, si usa filtros, y la observacin es directa. Consta de una fuente de luz muy potente y un filtro de excitacin que slo deja pasar la radiacin UV deseada. sta, tras interaccionar con la muestra, es de nuevo filtrada, dejando pasar solamente la luz fluorescente hacia los oculares. La principal aplicacin es en inmunofluorescencia, es decir, reacciones de antgenos con anticuerpos. Fuente de luz: la L va desde la luz ultravioleta hasta los infrarrojos. Filtro de excitacin: delimita la banda de excitacin, generalmente ultravioleta.

Muestra: fluorescente por s misma (microscopia primaria) o marcada con fluorocromos

(Microscopia secundaria). Filtro de barrera: deja pasar slo la fluorescencia.

Microscopios electrnicos: Utilizan electrones en lugar de luz visible (fotones) para formar imgenes de objetos pequeos. Estos tipo de microscopios aumentan la velocidad de los electrones para obtener una longitud de onda ms corta y conseguir una resolucin mayor (los electrones poseen una longitud de onda bastante inferior que la luz visible, y por tanto pueden disgregar estructuras muy pequeas) consiguiendo con ello una capacidad de aumente de hasta 500.000 aumentos. Las imgenes originales obtenidas son en blanco y negro pues se usan electrones en vez de luz. El haz electrnico se produce mediante un ctodo de Wolframio.

4. Explica algunas diferencias entre el microscopio compuesto y el microscopio estereoscpico y mencione, qu ventajas tiene el microscopio estereoscpico frente al microscopio compuesto y viceversa? R. El llamado comnmente microscopio te permite aumentos hasta 100X (al menos los mas comunes) y te permite contemplar bacterias. El estereoscopio (llamado microscopio estereoscpico) te permite aumentos hasta de 45X (al menos los mas modernos), pero no puedes apreciar bacterias por su factor de resolucin lumnica, adems otra diferencia es que los estereoscopios utilizan una visin a travs de dos lentes (vista en estreo), por eso se le dice as.

5. Qu tipo de objetos pueden observarse un el microscopio estereoscpico? R. Se utiliza para visualizar en detalle objetos pequeos de aproximadamente 200 micras. Para objetos mas pequeos se requiere utilizar algn otro tipo de microscopio.

6. Cul es la amplificacin que proporciona le ocular del microscopio compuesto? R. 200 nm con luz visible de la longitud de onda ms corta. (Painte et al, 2010)

7. Qu es el poder de resolucin y cul es la diferencia entre aumento y poder de resolucin? R. Poder de resolucin se define como la capacidad de distinguir como imgenes diferentes dos puntos cercanos. La resolucin es la claridad y contraste de la imagen y amplificacin es el aumento de tamao de una imagen.

8. Calcule la resolucin que puede obtenerse con un microscopio de luz utilizando ultravioleta con una longitud de onda de 260 n. Por qu normalmente es imprctico utilizar luz ultravioleta en un microscopio ptico? R. LR=0.61*260/(1*0.93)=170.5/1.4=122nm (Paniagua et al, 2007)

9. Qu mtodo o mtodos deberan utilizarse para controlar la intensidad luminosa con un microscopio de luz? R. El sistema de lentes debe de ser de cuarzo y debe de utilizarse una cmara fotogrfica para registrar la imagen. Tambin el vidrio debe de ser opaco a la luz ultravioleta de longitudes de ondas cortas. (Painte et al, 2010)

10. Qu espesor debe de tener un corte para realizar una observacin al microscopio ptico compuesto? R. Los rganos y tejidos, incluso una pequea parte de ellos son demasiado gruesos para que sean traspasados por la luz; es por eso que es necesario cortarlos en finas lminas. Para esto se utiliza un micrtomo que realiza los contes de apenas unos nanmetros de espesor. (Paniagua et al, 2007)