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Universidade do Estado do Rio de Janeiro Centro de Tecnologia e Cincias Instituto de Qumica

Daniele Avilez Du

AVALIAO DA REMOO DE MICRO-ORGANISMOS E SUAS TOXINAS DE GUAS EUTROFIZADAS UTILIZANDO PROCESSOS DE SEPARAO COM MEMBRANAS

Rio de Janeiro 2013

Daniele Avilez Du

AVALIAO DA REMOO DE MICRO-ORGANISMOS E SUAS TOXINAS DE GUAS EUTROFIZADAS UTILIZANDO PROCESSOS DE SEPARAO COM MEMBRANAS

Exame de Qualificao da Tese apresentado, como requisito parcial para o Curso de Doutorado em Qumica, ao Programa de Ps-graduao em Qumica, da Universidade do Estado do Rio de Janeiro (rea de Concentrao: Qumica Ambiental).

Orientador: Prof. Dr. Fbio Meron

Rio de Janeiro 2013

LISTA DE TABELAS

Tabela 1. Registros de floraes de algas nocivas caracterizadas na cidade do Rio de Janeiro, RJ. ........................................................................................ 08

Tabela 2. Processos de filtrao por membranas comerciais .................................. 21

Tabela 3. Meio de Cultura ASM-1 para cultivo de cianobactrias ............................ 39 Tabela 4. Caractersticas das Membranas utilizadas no estudo .............................. 45

Tabela 5. Preparo das solues-teste para o ensaio de toxicidade aguda. ............. 49

Tabela 6. Dados dos valores mdio da vazo do permeado, desvio padro e coeficiente de variao (CV) entre as presses estudadas, nas diferentes concentraes de alimentao. ............................................................... 56

Tabela 7. Dados dos valores mdios da rejeio, desvio padro e coeficiente de variao (CV) entre as presses estudadas, nas diferentes concentraes de alimentao. ....................................................................................... 59

Tabela 8. Dados comparativos com resultados de estudos de vrios autores. ....... 60

Tabela 9. Dados de contagem do nmero de clulas e inibio do crescimento. ... 64

LISTA DE FIGURAS

Figura 1. Estrutura qumica da microcistina-LR. ...................................................... 14 Figura 2. Estgios do declnio de fluxo do permeado .............................................. 29 Figura 3. Decaimento do fluxo de permeado da suspenso levedura (200 mg.L-1) com o tempo ............................................................................................ 30 Figura 4. Esquema ilustrativo de uma cmara de Neubauer ................................... 41 Figura 5. Kit Beacon Analytical Systems .................................................................. 43 Figura 6. Fluxograma do sistema de separao por membrana .............................. 45 Figura 7. Curva de crescimento da Microcystis aeruginosa. .................................... 51 Figura 8. Curva de calibrao de microcistina produzida com o kit ELISA. ............. 52 Figura 9. Teste de permeabilidade hidrulica para os dois tipos de membrana (NF e OI) em solvente puro (gua). ................................................................... 54 Figura 10. Valores mdios da vazo do permeado em relao concentrao de alimentao (g.L-1), nas diferentes presses testadas no sistema de osmose inversa. ...................................................................................... 55 Figura 11. Valores mdios de concentrao de permeado (g.L-1) em cada presso estudada no sistema de osmose inversa (5, 10, 15 bar). ....................... 57 Figura 12. Valores mdios de rejeio (%) em cada presso estudada no sistema de osmose inversa (5, 10, 15 bar). .............................................................. 58 Figura 13. Ensaio para definio do melhor volume do floculante. .......................... 61 Figura 14. Decaimento do fluxo do permeado em sistema de microfiltrao utilizando soluo contendo clulas de Microcystis aeruginosa. ............................ 62

SUMRIO INTRODUO ......................................................................................................... 07

1.

REVISO BIBLIOGRFICA ......................................................................... 10 1.1. Cianobactrias e Microcistinas .................................................................. 10 1.2. Padres de Qualidade da gua OMS e Portaria MS 518/2004 .............. 16 1.3. Ensaios de Ecotoxicidade ........................................................................... 17 1.4. Estudos para Remoo de Cianobactrias e Microcistinas de guas ... 18 1.4.1 Pr-tratamentos .................................................................................. 18 1.4.2 Outras formas de tratamento .............................................................. 19 1.5 Processo de Separao com Membranas ............................................... 20 1.5.1 Microfiltrao ....................................................................................... 21 1.5.2 Nanofiltrao ....................................................................................... 22 1.5.3 Osmose Inversa .................................................................................... 23 1.5.4 Ultrafiltrao .......................................................................................... 24 1.6 Variveis do Sistema de Separao por Membrana ................................. 25 1.6.1 Fluxo do permeado ............................................................................ 25 1.6.2 Coeficiente de Rejeio ...................................................................... 26 1.7 Formao de Incrustaes ........................................................................ 26 1.8 Cobrimento de superfcies: imerso em solues ................................... 31 1.9 A Prata como biocida .................................................................................. 32

2.

JUSTIFICATIVA ............................................................................................ 35

3.

OBJETIVO GERAL ...................................................................................... 37 3.1 Objetivos Especficos ................................................................................. 37

4.

MATERIAL E MTODOS .............................................................................. 38 4.1 Cultivo e Manuteno das Cianobactrias ................................................ 38 4.2 Determinao da Taxa de Crescimento das Cianobactrias ................... 40 4.3 Anlise de microcistina utilizando mtodo ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) ............................................................................... 42 4.4 Ensaios Utilizando Sistema de Separao por Membranas .................... 43 5

4.4.1 Membranas utilizadas ........................................................................... 43 4.5 Pr-Tratamento utilizado antes da microfiltrao .................................... 45 4.6 Ensaios de microfiltrao Incrustao ................................................... 46 4.7 Ensaio para remoo das clulas Microcystis aeruginosa e da toxina microcistina .................................................................................................. 47 4.8 Analise da Adeso das Clulas de Microcystis aeruginosa na Membrana de Fibra Oca ................................................................................................. 48 4.9 Ensaios de Toxicidade Aguda da Prata Utilizando Microcystis

aeruginosa..................................................................................................... 48

RESULTADOS PRELIMINARES .................................................................. 51 5.1 Curva de Crescimento ................................................................................. 51 5.2 Curva de Calibrao .................................................................................... 52 5.3 Caracterizao das membranas ................................................................. 53 5.4 Experimento Utilizando Membranas Planas ............................................. 54 5.4.1 Sistema de separao por membranas de osmose inversa ............... 54 5.4.1.1 Vazo do permeado ................................................................. 54 5.4.1.2 Concentrao do permeado ..................................................... 56 5.4.1.3 Rejeio .................................................................................... 58 5.5 Ensaio de pr-tratamento Floculao e Filtrao .................................. 61 5.6 Incrustao por deposio Microfiltrao .............................................. 61 5.7 Ensaio para Remoo das Clulas Microcystis aeruginosa .................. 62 5.8 Analise da adeso das clulas de Microcystis aeruginosa na membrana de fibra oca ................................................................................................... 63 5.9 Ensaios preliminares de toxicidade aguda da prata utilizando Microcystis aeruginosa .................................................................................................... 63

PRXIMAS ETAPAS ................................................................................... 66

CRONOGRAMA ............................................................................................ 67

BIBLIOGRAFIA ............................................................................................. 68

INTRODUO

A constante degradao ambiental em bacias hidrogrficas de intensa ocupao antrpica tem alterado significativamente a qualidade dos corpos dgua predominantemente utilizados para abastecimento pblico, irrigao e recreao. Paerl e Huisman (2008) relatam que o processo de aquecimento global poder intensificar a formao de floraes em razo do aumento da temperatura mdia da gua em ecossistemas aquticos, principalmente nos de pases de clima temperado, o que promover, tambm, a estratificao trmica por perodos mais longos, condies propcias para a dominncia de cianobactrias. A contaminao bacteriolgica das guas de consumo sempre foi e continua sendo um assunto relevante na rea de sade pblica e epidemiolgica. A presena de algas na gua bruta e/ou tratada pode trazer uma srie de problemas tais como: rpida obstruo das camadas superiores dos sistemas de filtrao, levando ao aumento dos custos de manuteno e reduo da capacidade de produo da gua tratada; sabor e odor; formao de compostos qumicos; corroso do sistema de abastecimento e liberao de toxinas. Em ambientes lnticos, como lagos e reservatrios de regies temperadas e tropicais, densas populaes de cianobactrias, denominadas floraes, podem ser encontradas, afetando a colorao, o odor e o sabor da gua (DI BERNARDO, 1995). Tendo este como um problema mundial de contaminao, vrios autores realizam estudos relativos remoo das toxinas liberadas pelas cianobactrias, principalmente a microcistina. Existem estudos utilizando tratamentos com carvo ativado, ozonizao, resinas polimricas, processo de separao por membranas, entre outros. Segundo Vieira et al. (2005) pesquisas tm demonstrado a ocorrncia de floraes algais, potencialmente txicas, em diferentes regies do pas como Rio Grande do Sul, Distrito Federal, Pernambuco, Alagoas, Par e no Rio de Janeiro. Concentraes de microcistinas entre 0,5 e 1 g.L-1 foram detectadas em reservatrios de gua destinados ao consumo pblico no Estado de So Paulo e entre 0,5 e 1,11 g.L-1, no Estado de Minas Gerais.

No Rio de Janeiro, no Complexo Lagunar de Jacarepagu o impacto antropognico evidenciado pela ocupao urbana desordenada, que resulta no aporte de efluentes sem nenhum tipo de tratamento, alm dos assoreamentos e aterros acelerados das lagoas, causando o estrangulamento dos canais de ligao com o mar (SILVA, 2006). Tal fato tem modificado a composio de suas guas, aumentando excessivamente a proporo de gua doce em relao gua do mar. Na Tabela 1 apresentada uma lista de casos de florao de algas registrados no estado do Rio de Janeiro: Tabela 1. Registros de floraes de algas nocivas caracterizadas na cidade do Rio de Janeiro, RJ.
Localidade Ano (ms) 1946 (8) 1948 (4) Observaes Microalga Glenodinium trochoideum Problema Ambiental Mortandade de peixes Mortandade de peixes Mortandade de peixes. Dermatose de Baa de Sepetiba 1998 (2) Mancha esverdeada Epfita em algas bentnicas Quosciente N/P baixo, pH alto, transparncia baixa Oxignio normal, alta concentrao de matria orgnica Chattonella sp. contato primrio Prorocentrum sp. Mortandade de ourios Mortandade de peixes

Baa de Guanabara

Manchas avermelhadas, amareladas ou alaranjadas Quosciente N/P baixo, pH alto

Lagoas costeiras

1966-1971

Gymnodinium sp.

Lagoa da Barra

1990 (1)

Synechocystis aquatilis

Arraial do Cabo

1998 (10)

Lagoa Rodrigo de Freitas

2000 (3)

Synechocystis aquatilis

Lagoa Rodrigo de Freitas

2010 (2)

Mortandade de peixes

Uma forma de controle das floraes a induo mecnica de misturas verticais na coluna dgua, aplicao de algicidas e controle biolgico (lagos e lagoas de pequena extenso), atravs de biomanipulao com zooplncton, peixes, bactrias e vrus, com precisas avaliaes prvias nos ecossistemas em questo (FERNANDES et al, 2009). 8

A maioria dos casos de contaminao de seres humanos por microcistina ocorre aps a ruptura das clulas de floraes de cianobactrias txicas em reservatrios de gua. Esta ruptura pode ocorrer pelo envelhecimento natural da populao ou pelo tratamento incorreto da gua com agentes qumicos, que pode levar lise das clulas e liberao da toxina (FALCONER et al., 1983; KUIPERGOODMAN et al., 1999). O Conselho Nacional do Meio Ambiente (CONAMA, 1996) fixa valores para a classificao das guas doces por meio da resoluo 357/05, e define seus usos. A classificao baseia-se na avaliao da qualidade das guas usando parmetros especficos que permite separar os usos preponderantes de cada classe. A portaria 518/2004-MS estabelece o padro de qualidade da gua para consumo humano, ou seja, da gua potvel, a qual define de forma clara e precisa os Valores Mximos Permissveis (VMP) de numerosos parmetros para a gua de beber. A legislao estabelece que em nenhuma situao as pessoas devem consumir gua contaminada, sendo imprescindvel a adoo de mtodos de tratamento e desinfeco. Nesse contexto, a aplicao de tecnologias inovadoras, simples, sustentveis e de baixo custo pode ser soluo alternativa para o tratamento das guas destinadas ao consumo humano, na reduo ou eliminao da contaminao por cianobactrias e cianotoxinas. Apesar do processo de separao por membranas apresentar resultados satisfatrios, obtendo normalmente grande rejeio das microcistinas, ele possui uma grande desvantagem que o alto ndice de acumulao de material celular ou extracelular na superfcie das membranas, ocasionando o decaimento do fluxo de permeado e danificao do material da membrana. Diante desses fatos, fica evidente a importncia da realizao de um estudo que envolva a remoo de cianobactrias e microcistinas de corpos dgua presentes em regies urbanas, considerando o aparecimento de bioincrustao e o tratamento para que isso no ocorra.

1.

REVISO BIBLIOGRFICA

1.1

Cianobactrias e Microcistinas

A crescente eutrofizao dos ambientes aquticos tem sido produzida principalmente por atividades humanas, causando um enriquecimento artificial desses ecossistemas. As principais fontes desse enriquecimento geralmente so identificadas como as descargas de esgotos domsticos e industriais dos centros urbanos e a poluio difusa originada nas regies agricultveis. A eutrofizao produz mudanas na qualidade da gua incluindo a reduo de oxignio dissolvido, a perda da qualidade da gua, morte extensiva de peixes e o aumento da incidncia de floraes de microalgas (algas unicelulares) e cianobactrias (organismos procariticos fotossintetizantes). Estas floraes ou blooms se caracterizam pelo intenso crescimento desses micro-organismos na superfcie da gua, formando uma densa camada de clulas com vrios centmetros de profundidade, com conseqncias relacionadas sade pblica. Sob a denominao microalgas esto includos organismos com dois tipos de estrutura celular: estrutura procaritica, com representantes nas divises

Cyanophyta (cianobactrias) e Prochlorophyta; estrutura celular eucaritica, com representantes nas divises Chlorophyta, Euglenophyta, Rhodophyta, Haptophyta (Prymnesiophyta), Heterokontophyta (Bacillariophyceae, Chrysophyceae,

Xantophyceae etc.), Cryptophyta e Dinophyta (HOEK et al., 1995). A longa histria evolutiva dos organismos que formam florao promoveu maior adaptabilidade s mudanas ambientais em curto prazo (diria, sazonal, em dcadas) e longo prazo (geolgico), tornando estes procariticos fotossintetizantes um grupo que pode aparecer e ter floraes em todas as estaes o ano (PAERL 2008). A florao destas cianobactrias pode causar alterao na colorao da gua, no odor e no sabor da gua, envenenamento e mortandade de animais, irritaes na pele e at a morte de seres humanos (DI BERNARDO, 1995). A capacidade de crescimento nos mais diferentes meios uma das caractersticas marcantes das cianobactrias. Entretanto, ambientes de gua doce so os mais favorveis para seu 10

crescimento, visto que a maioria das espcies apresenta um melhor crescimento em guas neutro-alcalinas (pH 6-9), temperatura entre 15 a 30 C e alta concentrao de nutrientes, principalmente nitrognio e fsforo (FUNASA, 2003). A fotossntese o principal modo de obteno de energia para o metabolismo das cianobactrias. Sua organizao celular procarionte muito semelhante na bioqumica e na estrutura s bactrias (BLACK, 2002). Suas clulas contm diferentes tipos de pigmentos fotossintticos, tais como clorofila a e

bacterioclorofcios, que confere colorao verde; a ficocianina, pigmento azul e a ficoeritrina, pigmento vermelho, que conferem cor verde-azul escuro. As algas azuis, algas cianofceas ou cianobactrias, no podem ser consideradas nem como algas e nem como bactrias comuns. So microorganismos com caractersticas celulares procariontes (bactrias sem membrana nuclear), porm com um sistema fotossintetizante semelhante ao das algas (vegetais eucariontes), ou seja, so bactrias fotossintetizantes (CARNEIRO, 2008). Vrios gneros e espcies de cianobactrias que formam floraes produzem toxinas. Essas toxinas so conhecidas como cianotoxinas e constituem uma grande fonte de produtos naturais txicos produzidos por esses micro-organismos e, embora ainda no estejam devidamente esclarecidas s causas da produo dessas toxinas, tm-se assumido que esses compostos tenham funo protetora (CARMICHAEL, 1992). Cianobactrias podem apresentar taxa de crescimento alta quando

comparada com outros organismos fitoplanctnicos, principalmente quando a intensidade luminosa baixa. Nesse caso, existe uma vantagem competitiva destas em relao a outros micro-organismos fotoutotrficos, como as algas, por exemplo. Taxas de crescimento mximas so observadas para a maioria das cianobactrias em temperaturas acima de 25C (CHORUS e BARTRAM, 1999). Johnk et al. (2008) compararam a taxa de crescimento de populaes do gnero Microcystis, algas verdes (organismos fotossintetizantes micro ou

macroscpicos) e diatomceas (organismo unicelular, pertencente ao grupo protista) e observaram que, em baixas temperaturas (abaixo de 23 C), o grupo do gnero Microcystis apresentou taxa de crescimento menor que as demais algas. Entretanto, a sua taxa de crescimento mostrou relao direta com a temperatura, ou seja, maior crescimento com aumento da temperatura, e temperatura tima (acima de 23 C) maior que de algas verdes e de diatomceas. Estes resultados mostram que as 11

Microcystis so fortes competidoras em temperaturas elevadas, assim como as demais cianobactrias. Em ambientes eutrficos e hipertrficos, as cianobactrias frequentemente dominam o fitoplncton nos meses de vero. Normalmente, nas regies tropicais, diferenas sazonais nos fatores ambientais no so suficientes para induzir a substituio de cianobactrias por outras espcies planctnicas. De acordo com Azevedo (2002) foi registrada a ocorrncia de pelo menos 20 espcies de cianobactrias potencialmente txicas, includas em 14 gneros, em diferentes ambientes aquticos brasileiros. De acordo com essas autoras, a espcie Microcystis aeruginosa apresenta distribuio mais ampla no Brasil. Trabalhos listam a existncia de mais de 100 espcies de cianobactrias, capazes de produzir substncias txicas, sendo varias dessas espcies capazes de produzir floraes. Entretanto, nem todas as espcies so toxicognicas e nem todas as floraes tendem a ser txica (JAYATISSA et al. 2006). A produo de compostos inibidores do crescimento de outras algas (alelopticos) tambm tem sido mencionada como caracterstica que confere vantagem competitiva as cianobactrias com relao aos demais grupos do fitoplncton quanto a espao, nutrientes e luz, levando sua dominncia em diferentes ecossistemas aquticos (PAERL 2008, LEFLAIVE & TEN-HAGE 2007). Algumas espcies de cianobactrias que sintetizam cianotoxinas podem causar um grande impacto ambiental e na sade pblica como as hepatotoxinas (microcistina e nodularina), as neurotoxinas (anatoxina-a, homoanatoxina-a e saxitoxina) e a dermatoxina (lingbiatoxina) (CODD et al., 2005). De acordo com a sua estrutura qumica, as cianotoxinas podem ser includas em trs grandes grupos: os alcalides, os lipopolissacardeos e os peptdeos cclicos. Entretanto, por sua ao farmacolgica, as duas principais classes de cianotoxinas at agora caracterizadas so: neurotoxinas e hepatotoxinas.

(MINISTRIO DA SADE, 2003). As hepatotoxinas que so peptdeos cclicos so produtos naturais produzidos pelas cianobactrias, com massa molecular entre 800 e 1.100 g.mol-1, relativamente pequena quando comparada com outros polimeros celulares, como por exemplo, uma protena, que tem massa molecular acima de 10.000 g.mol-1.

12

As nodularinas so constitudas por cinco aminocidos enquanto que a microcistina composta por sete aminocidos, com dois aminocidos terminais lineares formando o composto cclico (SIVONEN E JONES, 1999). Para produzir, ento, o seu efeito txico, as toxinas so transportadas ativamente pelo mecanismo de transporte do cido biliar e, por conseguinte, atacam preferencialmente o epitlio do intestino fino e os hepatcitos (clulas do fgado) (FALCONER, 1983). As hepatotoxinas produzidas pelas cianobactrias agem de forma semelhante quando ingeridas, sendo responsveis por mal estar, vmitos, cefalia e gastroenterite. Essas toxinas atingem os hepatcitos, o que leva contrao das clulas. A circulao de sangue no fgado comprometida, resultando em hemorragias (SIVONEN, 1998). Alm do efeito agudo das cianotoxinas, efeitos crnicos tambm so observados. Experimentos em laboratrio mostram que a microcistina pode ser um promotor de tumor, aumentando a proliferao de clulas do fgado e do clon com alteraes genticas (FUJIKI et al., 1996). Devido sua estrutura peptdica cclica, as microcistinas so muito estveis e resistentes hidrlise qumica e oxidao em pH prximo da neutralidade. Alm disso, as microcistinas mantm sua toxicidade mesmo aps a fervura. Em condies naturais, no escuro, as microcistinas podem persistir por meses ou anos. Em temperatura elevada (40 oC) e condies de pH alto ou baixo, foram observadas hidrlises lentas, sendo necessrio aproximadamente 10 semanas em pH 1 e mais de 12 semanas em pH 9 para a degradao de cerca de 90% da concentrao total das microcistinas (HARADA et al., 1996). Por outro lado, foi observada uma lenta degradao fotoqumica das microcistinas expostas luz solar. A taxa desta reao aumentada pela presena de pigmentos fotossintticos hidrossolveis,

provavelmente ficobiliprotenas (TSUJI et al., 1993). Na presena desses pigmentos, a degradao fotoqumica de 90% da concentrao total das microcistinas pode variar de duas a seis semanas, dependendo da concentrao de pigmentos e toxinas. A nomenclatura das microcistinas foi proposta por Carmichael et al. (1994). Inicialmente apenas as variaes qualitativas observadas em seus dois Laminocidos foram usadas para designar as diferentes microcistinas, por exemplo, microcistina-LR (leucina-arginina) (Figura 1); microcistina-RR (arginina-arginina); 13

microcistina-YA (tirosina-alanina), microcistina-YR (tirosina-arginina) e microcistinaLA (leucina-alanina) (DAHLMANN e LUCKAS, 2005).

Figura 1. Estrutura qumica da microcistina-LR. Fonte: LEE E WALKER (2008)

A Organizao Mundial de Sade (OMS), baseada em estudos de toxicidade oral em nveis subcrnicos realizados com camundongos (FAWELL et al, 1994) e com porcos, aponta para a microcistina-LR uma dose de assimilao diria tolervel de 0,04 g por Kg de peso corpreo por dia para humanos (CHORUS et al. 1999). Baseado nesses valores, a Organizao Mundial da Sade (OMS) estabeleceu um limite mximo aceitvel de 1 g.L-1 de microcistina-LR, considerando a exposio atravs da gua de consumo humano. Segundo a Organizao Mundial da Sade OMS (WHO, 1998), no h dados suficientes que possibilitassem a definio de valores de referncia para qualquer outra cianotoxina, alm da microcistina-LR. A legislao brasileira de qualidade de guas de consumo humano - Portaria do Ministrio da Sade n 518, 25 de maro de 2004 (BRASIL, 2004), estabelece a obrigatoriedade do monitoramento de microcistinas na gua potvel, com o valor mximo permitido de 1,0 g.L-1. Alm das incidncias nas regies costeiras, as floraes podem ocorrer nos reservatrios de abastecimento de gua, trazendo problemas de contaminao da gua destinada ao consumo da populao. Na cidade de Caruaru (Pernambuco) em 1996, 123 pacientes renais crnicos, aps terem sido submetidos s sesses de hemodilise em uma clnica, passaram a apresentar um quadro clnico compatvel 14

com grave hepatotoxicose. Cinqenta e quatro pacientes morreram devido presena de toxinas de cianobactrias na gua de hemodilise. Esse evento passou a ser o primeiro caso de morte associada toxina de cianobactria (AZEVEDO, 2002). No complexo lagunar Jacarepagu-Camorim-Tijuca, no Rio de Janeiro, floraes frequentes de cianobactrias vm sendo registradas desde a dcada de 90 (FERNANDES, 1993), inclusive sendo registradas a ocorrncia de cepas produtoras de cianotoxinas e o acmulo dessas toxinas pelo zooplncton e pelo pescado (FERRO-FILHO et al. 2002). Problemas para a sade humana tm sido divulgados aps o contato da populao com gua contendo cianobactrias, seja por contato direto em atividades recreacionais ou pelo consumo da gua de reservatrios contaminados. Alm de Caruaru, outras regies do Brasil tm apresentado floraes de cianobactrias com produo de diferentes tipos de cianotoxinas tais como, a Lagoa dos Patos, RS (MATTHIENSEN et al., 1999), Lagoa de Jacarepagu, RJ e Baa de Sepetiba, RJ (MAGALHAES et al., 2001), Reservatrio de Americana, SP (FERREIRA et al., 2005), Reservatrio de Tapacur, PE (MOLICA et al., 2005), Reservatrio de Duas Bocas, ES e o Reservatrio do Funil, RJ (KOTAKA et al., 2007). Chaves (2009) realizou um estudo nas guas do rio dos Sinos (RS) e constatou que durante o perodo monitorado, o nmero de cianobactrias totais presentes no local variou de 0 a 87.009 clulas.mL-1 em 6 amostragens. As maiores concentraes celulares ocorreram nos meses de fevereiro e maro/2005; janeiro, junho e agosto/2006; maio/2007 e janeiro/2008, com os maiores picos no vero de 2005 e no inverno de 2006. No Brasil, a densidade mxima de cianobactrias permitida em ambientes aquticos destinados ao abastecimento humano aps tratamento convencional, pela Resoluo do Conselho Nacional do Meio Ambiente (CONAMA), de 50.000 clulas.mL-1 (Resoluo no357). A maioria dos casos de contaminao de seres humanos por microcistina ocorre aps a ruptura das clulas de floraes de cianobactrias txicas em reservatrios de gua. Esta ruptura pode ocorrer pela senescncia natural da populao ou pelo tratamento incorreto da gua com agentes qumicos, que pode levar lise das clulas e liberao da toxina (KUIPER-GOODMAN et al., 1999).

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Em 2001, o Rio de Janeiro presenciou um incidente de contaminao de pacientes renais atravs de hemodilise. Felizmente, no houve sintomas ou morte associada baixa dose de microcistinas a qual estes pacientes foram expostos (SOARES et al. 2007). O efeito txico causado pela microcistina foi observado em organismos aquticos, como microcrustceos e camares (MONTAGNOLLI et al., 2004; KANKAANPAA et al., 2005; CHEN et al., 2005), larvas de Misguruns mizolepis e carpa (LIU et al., 2002). Magalhes et al. (2001) demonstraram que mesmo no perodo de declnio da florao de cianobactrias, onde a microcistina no pde ser detectada nas amostras coletadas na Lagoa de Jacarepagu (RJ), esta toxina continuou a ser detectada no msculo e fgado dos peixes coletados nesta regio.

1.2

Padres de Qualidade da gua OMS e Portaria MS 518/2004

A Organizao Mundial da Sade, com base no valor da TDI (Tolerable Daily Intake ou Ingesto Diria Tolervel), adotou o limite mximo aceitvel para gua potvel de 1 g.L-1 de microcistina, o qual foi incorporado no adendo do Guideline for Drinking Water Quality (Normas para Qualidade da gua Tratada) WHO (1998), e includo na sua terceira edio, WHO (2004). No Brasil, a legislao que regula a densidade mxima de cianobactrias no ambiente aqutico para a utilizao da gua a Resoluo CONAMA 357/05 e a Portaria do Ministrio da Sade n 518/04 contempla como parmetro de controle de qualidade da gua potvel, as anlises de cianobactrias e cianotoxinas na gua. Esta portaria tambm define que, quando a densidade de cianobactrias exceder 20.000 clulas/mL-1, fica vedado o uso de algicidas para o controle de seu crescimento ou qualquer interveno nos mananciais que provoque a lise das

clulas, sob pena de comprometimento da avaliao de riscos sade associados s cianotoxinas. Os processos de tratamento mais comumente utilizados no Brasil, na sua vasta maioria, baseados em sequencias de tratamentos envolvendo a coagulao qumica, com particular predominncia do tratamento convencional, no so 16

eficientes na remoo de cianotoxinas e para serem eficientes na remoo das clulas viveis de cianobactrias necessitam de bom controle operacional (BRASIL, 2003).

1.3

Ensaios de Ecotoxicidade

Ensaios ecotoxicolgicos (conhecidos como bioensaios) so importantes, devido necessidade de conhecermos os efeitos que produtos qumicos, ou seus subprodutos, lanados no ambiente pode ter sobre indivduos, sobre populaes e comunidade de organismos, alm de fornecer informaes que faam possvel conhecer como o homem pode ser afetado (CHAPMAN, 2002). Os testes ecotoxicolgicos podem ser utilizados como instrumento de predio (ESPNDOLA et al., 2003), antecipao e diagnstico de possveis impactos ecolgicos causados pelos compostos txicos (CALOW, 1993), bem como para classificao, regulao e mapeamento da contaminao (CAIRNS et al., 1998). A finalidade dos testes de ecotoxicidade aguda avaliar a letalidade ou a imobilidade dos organismos submetidos a um curto perodo de tempo de exposio substncia txica e estabelecer um intervalo de concentrao dentro da qual se estima o valor da CL50 (concentrao letal inicial 50% de exposio). A CL50 definida como a concentrao letal que causa mortalidade em 50% do organismoteste (HELFRICH et al., 1996). O uso dos bioensaios, complementados com tcnicas qualitativas e quantitativas diversas disponveis na atualidade, possibilitam a aquisio de importantes informaes sobre a toxicidade de uma amostra, permitindo um maior entendimento do seu impacto no ambiente natural destinado ou no ao abastecimento de gua, alm dos mecanismos de ao nos organismos.

17

1.4

Estudos para Remoo de Cianobactrias e Microcistinas de guas

1.4.1 Pr-tratamentos

Ferreira (2004), Bueno (2005) e Silva (2006) mostraram que o tratamento convencional (coagulao, floculao, sedimentao e filtrao) foi capaz de remover a parcela extracelular de microcistina presente na gua de estudo. Este fato mostra a necessidade de associar outras tcnicas para que sejam eficazes na eliminao de tais compostos. O processo de flotao por ar dissolvido tem sido aplicado em estudos para o tratamento de guas com elevada concentrao de algas, resultando em uma alternativa promissora quando comparada com os processos convencionais de tratamento (coagulao, floculao, sedimentao e separao) (TEIXEIRA E ROSA, 2005). Silva (2006) associou unidade de adsoro por carvo ativado em p e flotao por ar dissolvido, e verificou que somente a flotao no foi capaz de reduzir a concentrao de microcistina a nveis estabelecidos. Ao adicionar o carvo concluiu que com concentrao igual a 50 mg.L-1 de carvo aplicado 1,5 h antes da coagulao (coagulante cloreto frrico 45 mg.L-1), foi possvel produzir amostras com concentraes abaixo do limite. Apesar de apresentarem resultados satisfatrios de remoo da microcistina, o uso do carvo ativado nem sempre a opo mais econmica e utilizada, pois ainda necessrio mais investimento para a desinfeco do carvo ativo e descarte de forma correta. Dentre os procedimentos de tratamento de gua a clorao,

micro/ultrafiltrao e ozonio so considerados eficientes na remoo de cianobactrias e remoo de microcistinas, mas podem ser insuficientes durante florescimentos ou quando uma elevada carga orgnica est presente, e, os teores de toxinas devem ser monitorados (HITZFELD et al., 2000). A coagulao e floculao envolvem a agregao de partculas menores em partculas maiores usando produtos qumicos, como cloreto frrico ou sulfato de alumnio. Coagulao pode ser um mtodo eficiente para eliminar as clulas de cianobactrias em gua, enquanto cianotoxinas solveis no so eficientemente removidas (ROSITANO e NICHOLSON, 1994). A coagulao pode causar 18

problemas adicionais como a lise de clulas das cianobactrias e liberao de toxinas. Grandes esforos foram direcionados para a deteco, controle e remoo de cianobactrias e de suas toxinas nos cursos de gua (PEARSON e NEILAN, 2008). A escolha inadequada de tecnologia pode causar graves prejuzos qualidade da gua produzida, o que torna indispensvel o desenvolvimento e domnio de tecnologias alternativas de tratamento, ou combinaes destas, apropriadas s condies tcnicas e econmicas locais. Campinas et al., (2010) afirma que um projeto de tratamento de gua que busque remoo de cianobactrias e cianotoxinas necessita de investimento inicial em conhecimentos, que incluem a identificao, anlise e quantificao das cianotoxinas, no entanto ainda h poucos artigos referentes sua remoo por processos de tratamento em escala real, e a maioria dos existentes so bastante recentes.

1.4.2 Outras formas de tratamento

A eliminao de microcistinas dos corpos dgua um desafio j que procedimentos tradicionais de tratamento de gua, como o uso de sulfato de cobre(II) (CuSO4.5H2O), que usado como algicida, podem levar a lise celular, liberando cianotoxinas para a gua e exigindo uma etapa posterior para remoo destas substncias. A utilizao de algicidas em mananciais onde feita a captao de gua para o tratamento uma pratica relativamente comum, mas indesejada, j que afeta a vida aqutica e exige aplicaes freqentes. De acordo com Falconer et al. (1989); Donati et al. (1994) e Drikas et al. (2001), a adsoro em carvo ativado considerada efetiva na remoo de cianotoxinas. Diferentes autores concordam que para atingir eficincias de remoo elevadas, so necessrias doses de carvo ativado em p superiores a 20 mg.L-1 e tempos de contato de cerca de 30 minutos (HRUDEY et al., 1999). Mouchet e Bonnlye (1998) afirmam que as doses de carvo ativado devem ser ainda mais altas: de 50 a 100 mg.L-1.

19

Bueno

(2005)

avaliou

a
-1

oxidao

da

microcistina

concluiu

que

concentraes entre 3 e 4 mg.L de hipoclorito de sdio foram capazes de oxidar ambas as toxinas intra e extracelular, resultando em residuais abaixo de 1 g.L-1. Apesar de o cloro ser o oxidante mais utilizado, seu uso deve ser controlado, pois ele leva a formao de organoclorados (trialometanos) indesejveis e carcinognicos.

1.5 Processo de Separao com Membranas

Os processos de separao por membranas tm sido aplicados no fracionamento e misturas, solues e suspenses envolvendo espcies de tamanho e natureza qumica diferente. Por esse motivo, estas aplicaes requerem a utilizao de membranas com caractersticas diferentes. O conhecimento da estrutura da membrana e sua relao com as propriedade de transporte importante para uma melhor compreenso dos fenmenos envolvidos nos problemas de separao e fornece informaes que permitem selecionar melhor a estrutura para uma dada separao (SCOTT, 1997). As principais vantagens do uso da separao por membranas comparado com os tratamentos convencionais (aerao, floculao, tratamentos qumicos e biolgicos) so: a produo de gua com qualidade superior; adio de quantidade bem menor de produtos qumicos (floculante e cloro); requer menor energia para operao e manuteno; e proporciona construo de sistemas bem compactos e fceis de serem implantados. Em funo do mecanismo de transporte e da fora-motriz, tm-se diferentes processos de separao por membranas, dentre eles destacam-se microfiltrao, ultrafiltrao, osmose inversa, eletrodilise, pervaporao e separao de gases, como pode ser observado na Tabela 2 alguns exemplos desses processos e suas respectivas caractersticas. Desde as ultimas dcadas, os processos de separao por membranas (PSM) vm sendo utilizados em diferentes reas industriais oferecendo vantagens como baixo consumo energtico, no requerem aditivos qumicos e serem sistemas compactos, de apresentarem a possibilidade de

20

emprego em sistemas contnuos e combinao com outros processos de separao (RODRIGUES et al.,2003).

Tabela 2. Processos de filtrao por membranas comerciais Processos


Microfiltrao

Fora motriz
P (0,5 a 2 atm)

Material retido
Material em suspenso, bactrias, massa molar > 500.000 g/mol-1 Colides,

Material que permeia


gua e slidos dissolvidos gua e sais solveis de baixa massa molar gua, sais e moleculas de baixa massa molar Agua (solvente)
-1

Ultrafiltrao

P (1 a 7 atm)

macromolculas, massa molar > 5000 g/mol

Molculas de massa molar Nanofiltrao P (5 a 25 atm) mdia, 500< massa molar < 2000 g/mol-1 Todo o material solvel ou em suspenso

Osmose inversa

P (15 a 80 atm)

Fonte. HABERT et al. (1997)

1.5.1 Microfiltrao

A microfiltrao o processo de separao com membranas mais prximo da filtrao clssica. Utiliza membranas porosas com poros na faixa entre 0,1 e 10 m, sendo, portanto indicado para a reteno de materiais em suspenso e emulso (TRINDADE, 2010). Como as membranas de microfiltrao so relativamente abertas, as presses empregadas como fora motriz para o transporte so pequenas, dificilmente ultrapassando 3 bar. Na microfiltrao o solvente e todo o material solvel permeia a membrana (TRINDADE, 2010). De acordo com Benhardt et al. (1991) a remoo de bactrias e microalgas por coagulao, floculao e filtrao , governada pelos mesmos princpios que a remoo de partculas coloidais e em suspenso, independentemente da natureza orgnica ou inorgnica de cada um desses grupos. 21

Hart et al. (1997) afirmam que os processos de coagulao, floculao, sedimentao e microfiltrao tambm podem ser efetivos na remoo de toxinas quando estas esto contidas nas clulas, indicando, portanto, que o tratamento convencional pode contribuir com a reduo de toxinas e clulas desde que no ocorra a lise celular.

1.5.2 Nanofiltrao

A nanofiltrao um processo de separao por membranas em que a fora motriz a presso que se situa entre a ultrafiltrao e a osmose inversa. A nanofiltrao utilizada quando se pretende remover solutos de baixo peso molecular, com poros menores de 2 nm, portanto retm molculas orgnicas de baixo peso molecular (> 200 g.mol-1) (MULDER, 1997). Mody (2004) em seu trabalho testou o desempenho de quatro membranas de nanofiltrao comerciais (Filmtec, modelo NF90 e NF270, e Hydranautics, modelos LFC1 e NTR7450), para remoo de cianobactrias e suas toxinas. A agua coletada no Lago Manatee (Flrida), foi contaminada com concentraes de 9,5 a 12 g.L-1 de microcistina. A presso de trabalho foi de aproximadamente 7 bar, mantendo uma temperatura de 20C. O autor pode concluir que as membranas testadas foram eficientes na remoo da microcistina, obtendo uma alta rejeio (acima de 90%) de microcistina na gua testada. Teixeira et al. (2005) estudaram a remoo de microcistina extracelular utilizando pr-tratamentos e nanofiltrao. Foram utilizados solues de KCl e CaCl2, diferentes valores de pH (5 8,5) e vrios composies de matria orgnica para avaliar a influncia dessas variantes na remoo do composto em questo. Os resultados indicaram que houve uma grande incrustao da membrana para solues de 150 g.L-1 de microcistina, sendo essa uma concentrao superior s concentraes encontradas normalmente no ambiente. Essa grande incrustao foi associada devido queda de 20% no fluxo. Estes autores descrevem que mesmo em concentraes baixas, houve incrustao da membrana, podendo dificultar o processo. Fora isso, todas as combinaes das variveis (tratamentos, pH e quantidade de matria orgnica) foram eficientes na remoo da microcistina da 22

gua, tendo mais de 90% de rejeio, ficando abaixo do limite permitido pelo Ministrio da Sade. A remoo de Microcystis aeruginosa e microcistinas associadas foi investigada por Teixeira (2005). Foram realizados testes com flotao com dois tipos de gases diferentes (ar dissolvido e CO2/ar) em seguida a nanofiltrao. Foi utilizada uma membrana de poli (sulfona), modelo NFT50 Alfa Laval. Os ensaios foram conduzidos com uma presso de 10 bar na nanofiltrao e a flotao com 2 e 3 L/min. Os autores apresentaram resultados muito bons em termo de fluxo, eficincia e remoo da microcistina, obtendo uma boa qualidade de gua no final do processo. No foi verificada nenhuma vantagem na mistura dos gases, portanto, sugerido que se utilize a flotao por ar dissolvido sem diluio. Dixon et al (2011) realizaram ensaios para avaliar a eficincia de remoo de metablitos de cianobactrias utilizando membranas de nanofiltrao. Foram testadas quatro membranas (duas de poli(amida) produzida pela empresa Dow Filmtec e duas de poli(ter sulfona), produzida pela empresa Hydranautics com pesos moleculares de corte diferentes e quatro metabolitos diferentes

(cilindrospermopsina, microcistina, metilisoborneol e geosmina) na concentrao de 16 ug.L-1. A presso variou entre 4 e 8 bar. Todos os metabolitos foram eficazmente removidos, acima de 90%, apresentando uma pequena variao entre as membranas, devido sua hidrofobicidade).

1.5.3 Osmose Inversa

A osmose inversa um processo de separao de membranas empregado quando se deseja reter solutos de baixa massa molar, tais como sais inorgnicos dissolvidos e pequenas molculas orgnicas (glicose, por exemplo). O nome osmose inversa se deve ao fato de que neste tipo de processo o fluxo permeado ocorre no sentido contrrio ao sentido do fluxo osmtico normal (CARVALHO et al., 2001). A osmose inversa provocada quando se aplica na soluo com maior concentrao de solutos uma presso de valor maior que o de sua presso osmtica. Neste caso, para se restabelecer o equilbrio, o solvente difunde no 23

sentido da soluo mais concentrada para a menos concentrada. Inverte-se assim o sentido do escoamento do solvente que ocorreria na osmose, da a denominao de Osmose Inversa (HABERT et al., 2005). Em um sistema de OI comum observar uma queda contnua no fluxo de permeado, indicando que outros fenmenos alm da polarizao de concentrao, devem estar presentes. Em alguns casos, o fluxo de permeado fica to reduzido que inviabiliza a operao. A variao continuada do fluxo permeado com o tempo atribuda a possveis alteraes na membrana, provocada pelas espcies presentes na soluo processada. Essas alteraes, em geral, so relacionadas formao de incrustaes na superfcie da membrana (MULDER, 1987).

1.5.4 Ultrafiltrao

O sistema de ultrafiltrao utiliza membranas com dimetros de poros que variam entre 1 e 500 nm. Estas membranas so adequadas para purificar solues contendo macromolculas, sendo permeveis a solutos de baixo peso molecular (MORAES, 2010). Campinas (2010) avaliou a remoo de microcistina por adsoro em carvo ativado seguido de ultrafiltrao. Esses ensaios foram satisfatrios na remoo da toxina quando a concentrao inicial era de 20 g.L-1 de microcistina, obtendo at 98% de remoo, utilizando 10 mg.L-1 de carvo ativo. Neste mesmo experimento foi estudada a influncia da quantidade de matria orgnica presente na gua contaminada. O autor conclui que esse processo de adsoro e separao eficiente quando se tem uma concentrao inicial de microcistina de 5 g.L-1 e 2,5 mg.L-1 de matria orgnica, enquanto que foi ineficiente para a gua contendo 20 g.L-1 de microcistina e 5 mg.L-1 de matria orgnica. Lee e Walker (2008) investigaram a aplicao de ultrafiltrao para a remoo de microcistina e determinaram os mecanismos de remoo dominantes. Foram investigados: caractersticas da membrana (uma de acetato de celulose, uma de poli(ter sulfona), trs de poli(imida), uma poli(sulfona) e uma de poli(vinilideno)), concentrao de alimentao (50 g.L-1) e presso do sistema (50 bar). Os pesquisadores puderam concluir que a porosidade e a rugosidade da membrana 24

podem interferir no controle da rejeio das toxinas, sendo que o principal mecanismo de rejeio a adsoro, devido s interaes hidrofbicas ou ligaes de hidrognio. Para as membranas fabricadas com porosidade para reter substncias com massa molar semelhante ao da microcistina, foi dominante o mecanismo de rejeio por tamanho, uma vez atingido o equilbrio de adsoro. O maior fluxo de permeado resultou em uma boa qualidade da agua, utilizando a menor concentrao e a maior presso de trabalho.

1.6

Variveis do Sistema de Separao por Membrana

1.6.1 Fluxo do permeado

O fluxo do permeado (J) ou vazo do permeado a quantidade obtida de permeado por rea de membrana por tempo de filtrao, sendo usualmente expresso em L/h.m2 calculado com base na Equao 1:

J=
Onde, J o fluxo de permeado (L/h.m2)

Vp A.t

( 1)

Vp o volume de permeado coletada durante o tempo (L) A a rea superficial da membrana (m2) t o tempo na qual foi registrada a massa (h)

1.6.2 Coeficiente de Rejeio

A seletividade de membranas geralmente medida pelo coeficiente de rejeio (R), ou seja, pela eficincia de reteno dos compostos presentes na 25

soluo de alimentao. Neste trabalho, o coeficiente de rejeio indica a capacidade de reteno dos aglomerados de microalgas pela membrana e/ou a reteno da toxina sob determinadas condies operacionais. O coeficiente de Rejeio (R), em porcentagem, obtido segundo a Equao 2.

Cp R = 1 * 100 Ca

( 2)

Onde Cp a concentrao do permeado e Ca a concentrao no inicio da alimentao (TARDIEU et al., 1998).

1.7

Formao de Incrustaes

Os principais problemas operacionais dos processos de separao por membranas so causados por vrios tipos de incrustaes, que incluem: incrustaes por deposio, incrustaes por precipitao e bioacumulao. A incrustao por deposio se d quando h deposio de slidos suspensos, como colides, materiais orgnicos, materiais particulados finos, algas e produtos de corroso. Esses materiais podem causar entupimentos do canal de alimentao dos mdulos de membranas (HABERT et al., 2005). A incrustao por precipitao decorre da precipitao de compostos solveis presentes na alimentao, quando estes atingem o limite de solubilidade. Como o permeado consiste de gua com baixa concentrao de sal, a concentrao de ons na alimentao aumenta. Devido polarizao de concentrao, este efeito se intensifica prximo superfcie da membrana, podendo atingir o limite de solubilidade dos sais e ocorrer a precipitao. Os sais mais comuns de precipitar, em ordem de importncia so: carbonato de clcio, sulfato de clcio, complexos de slica, sulfato de brio, sulfato de estrncio e fosfato de clcio (VROUWENVELDER et al., 2008). J na bioincrustao, algumas bactrias, como Pseudomonas, Enterobacter, Flavobacterium, Alcaligenes, Staphylococcus e Bacillus, possuem uma forte 26

tendncia a formarem biofilmes. As bactrias crescem e se reproduzem ao longo da superfcie, formando o biofilme. Conforme o biofilme vai crescendo, as bactrias vo morrendo e servindo de alimento para outras bactrias (BYRNE, 2002). No

mecanismo mais aceito, a formao do biofilme iniciada pela adeso de microorganismos superfcie da membrana, que passa a ser uma superfcie condicionada. Terminado o processo de adeso, as clulas comeam a crescer pela converso de matria orgnica e outros nutrientes em materiais extracelulares, denominados substncias polimricas extracelulares, gerando, por fim, o biofilme. A estrutura formada das bioacumulaes depende de alguns fatores, como: composio e rugosidade da membrana; composio e concentrao do substrato; mudanas no ambiente (luminosidade, temperatura, pH e concentrao de oxignio) e condies hidrodinmicas (MATTILA-SANDHOLM e WIRTANEN, 1992). A formao das incrustaes aumenta os custos operacionais, pois gera uma maior demanda de energia (pelo aumento da presso de operao), diminui os intervalos entre as limpezas qumicas e reduz significativamente o tempo de vida til das membranas (SEIDEL e ELIMELECH, 2002). Estima-se que, apenas nos EUA, as bioincrustaes custem mais de dez milhes de dlares anualmente, devido perda de produtividade, necessidade do uso de um pr-tratamento, ao aumento de custos com manuteno, ao aumento do consumo de energia e diminuio do tempo de vida til da membrana (BYRNE, 2002). Em alguns casos, a rugosidade da superfcie da membrana aumenta a taxa de fixao de micro-organismos, aumentando assim a incrustao, portanto, membranas com superfcie rugosa tem mais tendncia contaminao do que membranas com superfcie lisa (SCHAFER et al, 2007). Os resultados combinados dos vrios tipos de incrustantes contribuem para reduzir o tempo de vida til das membranas e aumentar os gastos com procedimentos de operao e manuteno da planta, pois podero ser necessrios pr-tratamentos com custos mais elevados (por exemplo, aplicaes peridicas de biocida, ozonizao, filtrao, etc.) e limpezas qumicas mais frequentes, para combater mais efetivamente a formao das incrustaes e recuperar as caractersticas nominais da membrana.

27

Alm destes problemas mencionados, tem-se a possibilidade de que a fixao destes organismos ou molculas orgnicas cause alteraes qumicas superficiais ou biodeteriorao, em virtude de seus processos metablicos (VIDELA, 2003). Existem algumas tcnicas de caracterizao das membranas utilizadas para a investigao da formao de bioincrustaes, as principais so: microscopia eletrnica de varredura (MEV), microscopia com emisso de eltrons por campo e espectroscopia de infravermelho (FTIR), que permite verificar a integridade morfolgica e a extenso da formao do biofilme. As propriedades superficiais normalmente so investigadas por espectroscopia de infravermelho (FTIR), permitindo observar as mudanas nos principais grupos funcionais e na distribuio de cargas superficiais, correlacionando-as s propriedades de transporte das membranas. A preveno e o controle da formao de bioincrustaes podem ser feitos atravs da reduo da concentrao de micro-organismos presentes na corrente de alimentao e/ou reduo da concentrao dos seus nutrientes, por meio do prtratamento, ou ainda atravs de um programa de limpeza das membranas. Para tanto, os diagnsticos que comprovam a presena do biofilme podem ser obtidos atravs da abertura e verificao dos mdulos (FLEMMING, 2002). A maior limitao em relao ao processo de separao por membrana devido ao fato que a maioria dos sistemas que envolvem micro-organismos ou suspenses esto sujeitas a diminuio na taxa de permeao causadas pela incrustao (bloqueio de poros de componentes da alimentao) (VAILLANT et al., 1999). No entanto, por melhor que seja o pr-tratamento, ao longo da operao haver um decaimento no fluxo de permeado fazendo-se necessria a realizao de limpezas qumicas para a recuperao do fluxo de permeado. A formao da bioincrustao ou fouling produz uma alterao das propriedades de separao da membrana durante o seu funcionamento, devido deposio de materiais tanto na superfcie da membrana como dentro de seus poros. De acordo com Marshall e Daufin (1995), o declnio no fluxo de permeado durante o processo de filtrao ocorre em trs etapas, como indicado na Figura 2. Nos primeiros minutos ocorre uma rpida diminuio no fluxo devido polarizao de concentrao (estgio I). Em seguida, ocorre uma etapa intermediria (estgio II) 28

que conhecida como fouling e posteriormente tem-se uma terceira etapa (estgio III), que apresenta um lento declnio do fluxo, determinado pela consolidao do fouling.

Figura 2. Estgios do declnio de fluxo do permeado (Fonte: Marshall & Daufin, 1995)

De acordo com Habert (2005) os efeitos do fouling podem ser reduzidos pelo pr-tratamento da alimentao, comumente utilizado para remoo das partculas que podem causar obstruo dos poros da membrana. Segundo Baker e Dudley (1998), as bioincrustaes ocorrem devido ao acmulo de material orgnico na superfcie da membrana, incluindo fragmentos celulares, substncias polimricas extracelulares e micro-organismos, que resultam na formao de biofilmes. No caso dos processos de osmose inversa e nanofiltrao, a formao de biofilme aumenta a resistncia ao transporte, reduzindo o fluxo permeado ou levando a necessidade de maior consumo de energia pelo aumento da presso de operao. Biofilmes so sistemas muito complexos que consistem de clulas microbianas e colnias introduzidas em um gel de um polissacardeo cuja estrutura e composio so funo da idade do biofilme e das condies ambientais (CAMMAROTA, 1998). O procedimento para reduo de bioincrustaes consiste na adio de biocidas ou aplicaes intermitentes de biocidas em pequenas quantidades. Um dos mtodos que eficaz e de baixo custo para remoo de micro-organismos a 29

clorao. Como a maioria das membranas polimricas de osmose inversa tem baixa resistncia ao cloro, seu excesso precisa ser removido, por meio de absoro em carvo ativado ou pela adio do bissulfito de sdio, ou seja, essa etapa torna esse processo mais caro (MEYER, 2003). Oliveira (2007) realizou um estudo para investigar a formao de incrustaes na superfcie da membrana de osmose inversa e utilizou quatro tipos de incrustantes como modelo: bentonita, slica, levedura e sulfato de clcio. A bentonita e a slica representam incrustantes que esto presentes em suspenso (incrustao por deposio), levedura (bioincrustao) e o sulfato de clcio (incrustao por precipitao). Estes incrustantes foram estudados separadamente e em conjunto. No procedimento, a presso variou de 10 a 30 bar. No grfico da Figura 3 pode-se concluir que a presena de material biolgico em suspenso leva a um decrscimo rpido do fluxo permeado nos primeiro instantes do teste, assim como acontece com os outros tipos de incrustantes.

Figura 3. Decaimento do fluxo de permeado da suspenso levedura (200 mg.L-1) com o tempo (OLIVEIRA, 2007).

Jenkins e Tanner (1998) realizaram um estudo, onde foram comparados dois tipos de membranas de osmose inversa com compostos qumicos diferentes. Uma de poli (imida)e outra de poli(imida uria). Esta ultima provou ser superior em relao rejeio de espcies dissolvidas e incrustaes. Esses resultados sugerem que a presena do grupamento uria reduz a adeso microbiana. Os autores sugerem

30

ento, que podemos diminuir essa incrustao, se controlarmos a superfcie qumica das membranas, incluindo os grupos uria. Dentre 70 plantas de osmose inversa instaladas nos EUA, 58 apresentaram problemas de bioincrustaes. Apenas no Sudoeste da sia e no norte da frica, cerca de 70% das plantas de OI para dessalinizao de gua sofrem com problemas de incrustaes (VROUWENVELDER et al., 2008).

1.8

Cobrimento de superfcies: imerso em solues

Na literatura, so encontrados trabalhos de modificao de superfcies atravs de reaes qumicas, tratamento com plasma, ou ainda tcnicas que propem a modificao das membranas atravs do cobrimento utilizando-se a tcnica de imerso em solues que possuem atividade biocida. Nos ltimos anos, o dixido de titnio (TiO2), por exemplo, tem sido alvo de estudos, pois tem a capacidade de decompor matria orgnica e de possuir uma atividade biocida (KIM et al, 2003). Segundo Kim et al (2003), a incorporao do dixido de titnio na superfcie de membranas pode ser utilizada como uma tentativa de diminuir os efeitos das bioincrustaes nas membranas. As membranas incorporadas com o dixido de titnio foram colocadas em contato com uma suspenso contendo clulas de E. coli e a atividade biocida do TiO2 foi analisada mediante medidas de rejeio e queda no fluxo permeado. Os experimentos demonstraram a preveno das membranas modificadas contra as incrustaes causadas por microrganismos. Outras membranas resistentes a incrustaes, chamadas FR (fouling resistant), so desenvolvidas pela DOW Liquid Separations. Essas membranas foram submetidas a testes de permeao com alimentao rica em microrganismos, cuja contagem excedia a 2x106 UFC/mL. Aps aproximadamente 100 horas de operao, os resultados mostraram que a queda do fluxo foi menor para as membranas FR e que a recuperao do fluxo permeado aps o ciclo de limpeza chegou a 80%, o que considerado excelente em termos operacionais e econmicos (SEHN, 2007). 31

Em seu trabalho, Li et al. (2012), utilizou a tcnica de imerso de uma membrana reticulada de poliestireno em uma soluo de sulfato de prata (Ag2SO4) por 24h temperatura ambiente para que houvesse a adsoro dos ons de prata na membrana. Aps esse procedimento, a membrana passou por um processo de secagem em estufa a 60 C por um perodo de 24 horas. O autor pode confirmar atravs de analises por microscopia eletrnica de varredura (MEV) e infravermelho (FTIR) que houve mais de 90% de adsoro da prata na membrana de poliestireno.

1.9

A Prata como biocida

As propriedades biocidas de alguns metais so conhecidas desde a antiguidade. Civilizaes da Prsia e Mxico usavam jarros de prata e cobre para armazenar gua, pois estes mantinham a gua limpa e fresca por mais tempo (DAVIES e ETRIS, 1997). Ao longo do tempo, materiais biocidas vm sendo empregados como desinfetantes, esterilizantes, antisspticos e preservativos. Diferentemente dos antibiticos, que tm stio de ao especfico e so empregados em concentraes prximas inibitria mnima, os biocidas apresentam espectro de ao mais amplo, apresentando vrios alvos na clula microbiana. Atualmente, destacam-se algumas aplicaes da prata: tratamento de gua, produtos odontolgicos, fibras e tecidos, revestimento, tratamento de pele como queimaduras e acne. As propriedades biocidas da prata contam com o benefcio da alta estabilidade trmica e baixa volatilidade e toxicidade para as clulas humanas e outros micro-organismos (DURAN et al., 2007). A toxicidade da prata em humanos foi verificada apenas quando ingerida em altas concentraes causando sobrecarregamento dos rins, indigesto, cefalia e Argyria, doena que causa o azulamento da pele (FUNG e BOWEN, 1996). ons de prata e compostos de prata so usados como agentes biocidas devido sua alta toxicidade para micro-organismos. Na rea de sade, uma grande gama de produtos contm prata, especialmente devido sua atividade antimicrobiana e baixa toxicidade para as clulas humanas (RUSSELL & HUGO, 1994). 32

Dentre vrios estudos envolvendo a interao da prata com micro-organismos destacam-se os realizados contra Escherichia coli (SONDI e SONDI, 2004), Pseudomonas mendocina (ZODROW et al., 2009), Bacillus subtilis (YOON et al., 2007) e Trichophyton mentagrophytes (KIM et al., 2008). O potencial biocida da prata pode ser verificado nas formas de nanopartculas (Ag0), prata coloidal como AgCl e tambm na forma de ons Ag+. Devido a grande superfcie de contato verificada nas nanopartculas, a interao entre microorganismo e o metal ocorre em maior extenso, apresentando maior poder bactericida (RAI et al., 2009). A prata apresenta boa cintica antimicrobiana e bom espectro de atividade em comparao com outros desinfetantes existentes. Portanto, polmeros antimicrobianos base de prata tm sido empregados com xito, liberando ons Ag+ para o sistema onde se encontram micro-organismos patognicos (RUSSELL & HUGO, 1994). Pesquisas realizadas por Choi et al. (2008) apontam a eficcia da prata em forma de coloide AgCl como sendo to significante quanto os ons Ag+. Entretanto, difcil realizar uma comparao generalizada j que o potencial biocida no esta somente relacionado a forma de apresentao da prata mas tambm a parmetros como tamanho e concentrao. Segundo Kumar & Mnstedt (2005), a atividade antimicrobiana do on Ag+ ocorre atravs de fortes ligaes com grupos doadores de eltrons existentes nas molculas de micro-organismos que contm enxofre, oxignio e nitrognio (protenas). O on prata atua sobre os aminocidos das protenas e/ou sobre os grupos sulfidrila, amina, fosfato e carboxila da membrana lipoprotica de micro-organismos, ocasionando desnaturao proteica (RUSSELL & HUGO, 1994). Os resultados de Choi et al. (2008) surpreendentemente mostraram os percentuais de inibio de crescimento de E. coli como sendo 55 %, 100 % e 66 % para nanopartculas de prata, ons Ag+ (na forma de AgNO3) e colides de AgCl. Colle (2008), em seu trabalho realizou uma impregnao qumica via soluo de prata para formao de filmes finos em tubos microporosos e membranas tubulares. O desempenho desta tcnica foi analisado no processo de microfiltrao de emulses (leo vegetal/gua) e de suspenses de bactrias (Escherichia coli) do soro residual do processamento de queijo. Os tubos microporosos (tamanho nominal 33

0,5 m) foram impregnados com soluo precursora de zircnia (e calcinados a 600 e 900 C) a fim de influenciar na melhora do processo de desemulsificao e as membranas cermicas (tamanho nominal entre 0,8 m e 1,2 m) foram impregnadas com precursor (e calcinadas a 600 C) para formao de prata metlica, para agir como bactericida na suspenso residuria de bactrias da indstria de queijo, obtendo resultados satisfatrios. Para a modificao de superfcies de membranas, a maioria dos trabalhos encontrados na literatura citam tcnicas que variam desde uma simples adsoro fsica (WILBERT et al., 1998, HACHISUKA et al, 2001; LOUIE et al., 2006) at a formao de ligaes qumicas (FREGER et al., 2002; COMBELLAS et al., 2004; TU et al., 2005; HUANG et al.; 2006, CHEN et al, 2006).

34

JUSTIFICATIVA

O crescente nmero de ocorrncias de cianotoxinas no Brasil, em especial no Rio de Janeiro, indica a necessidade de no apenas monitorar sua presena nos corpos dgua brasileiros, mas tambm identificar os compostos presentes e estudar formas de remoo sem grandes prejuzos para a qualidade da gua. Os sistemas lagunares so ambientes tipicamente de deposio e sedimentao e geralmente submetidos a forte estresse, em funo das diversas atividades humanas concentradas nas reas costeiras. Dentre as principais atividades que geram impacto negativo, verifica-se o lanamento de despejos de origem domstica, que vem acelerando o processo de eutrofizao desses corpos dgua. Como as cianobactrias podem estar presentes em corpos dgua usados para o abastecimento de gua para a populao e para recreao e como os estudos de degradao e remoo destas toxinas pelos mtodos convencionais de tratamento, no se mostraram suficientemente eficientes, podendo at levar ao aumento das toxinas presentes pela lise da membrana celular, importante que sejam estudados mtodos alternativos que possam ser aplicados para este fim (DRIKAS et al, 2001). Devem-se considerar, tambm, as contribuies advindas do

desenvolvimento deste projeto para as Instituies de ensino nele envolvidas. Em primeiro lugar, a rea de Qumica Ambiental do Programa de Ps-Graduao do Instituto de Qumica da UERJ (PPGQ/UERJ) ganha em diversificao, ao ter uma doutoranda desenvolvendo sua tese na anlise de guas de corpos hdricos. Essa linha de pesquisa sugerida pela candidata est inserida no Projeto Capes/Nanobiotec, onde foi criada uma rede Institucional com parcerias entre a UERJ, UNIRIO e a UFRJ. Esse projeto composto por vrios subprojetos e a tese proposta est inserida no subprojeto intitulado Nanopartculas inseridas na matriz polimrica com atividade bacteriosttica para tratamento e biossegurana da gua potvel, sendo coordenado pelo Prof. Fbio Meron, do Instituto de Qumica UERJ.

35

Por fim, o doutorado ser importante na formao continuada desta candidata, sendo tambm um forte incentivo ao desenvolvimento da cincia e tecnologia nesta instituio de ensino.

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OBJETIVO GERAL

Este trabalho tem como objetivo geral estudar a remoo de cianobactrias e microcistinas em corpos dgua impactados pela ao antrpica e aplicar os processos de separao com membranas de microfiltrao, nanofiltrao e osmose inversa e desenvolver tcnicas de remoo de cianotoxinas e de membranas com atividade biocida que possam ser utilizados em ambientes impactados ou em um determinado ponto do processo de tratamento de gua para distribuio para a populao.

3.1

Objetivos Especficos

Determinar o melhor processo de pr-tratamento para ser utilizado juntamente com o processo de separao com membranas; Avaliar a eficincia de remoo das clulas de Microcystis aeruginosa utilizando o processo de separao com membranas de microfiltrao; Avaliar a eficincia de remoo de microcistina utilizando o processo de separao com membranas de nanofiltrao e osmose inversa; Realizar estudos de formao de incrustaes na membrana e seus efeitos; Avaliar a toxicidade da prata atravs de ensaios toxicolgicos; Estudar como a prata pode evitar a incrustao nas membranas.

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MATERIAL E MTODOS

4.1

Cultivo e Manuteno das Cianobactrias

Os materiais utilizados para iniciar o cultivo e realizar a manuteno das culturas de cianobactrias em laboratrio so: incubadora com fotoperodo BOD, modelo 411D - Nova tica; cmara de fluxo laminar; mesa agitadora com controlador de temperatura, marca Tecnal, modelo TE420, autoclave e reagentes que compe o meio de cultura ASM-1, composto por 4 solues contendo diversos reagentes apresentadas na Tabela 3. O crescimento foi mantido em cmara de germinao BOD, em ciclo claroescuro de 12-12 h e temperatura constante de 24,5 C. A manuteno das culturas de micro-organismos foi feita atravs de subculturas, necessrias para fornecer nutrientes frescos e espao suficiente para o contnuo crescimento das clulas.

38

Tabela 3. Meio de Cultura ASM-1 para cultivo de cianobactrias (Gorham et al. 1964). Massa (g) Soluo estoque A NaNO3 MgCl2.6H2O MgSO4.7H2O CaCl2.2H2O Soluo estoque B K2HPO4 ou K2HPO4.3H2O Na2HPO4.12H2O ou Na2HPO4.7H2O Soluo estoque C H3BO3 MnCl2.4H2O FeCl3.6H2O ZnCl2 CoCl2.6H2O CuCl2 Soluo estoque D EDTA.Na2 1,86 Completar para 100 mL 2,48 1,39 1,08 0,335 0,019 0,0014 Completar para 100 mL 0,87 1,14 1,78 1,33 Completar para 100 mL 1,70 0,41 0,49 0,29 Completar para 200mL Observaes

Para o preparo de 1L de soluo de cultivo de ASM-1, utilizado 20 mL da soluo A, 2 mL da soluo B, 0,1 mL da soluo C e 0,4 mL da soluo D, completando o volume com gua destilada para 1L. Para iniciar o cultivo das culturas de Microcystis aeruginosa, no Laboratrio de Bioprocessos, do Instituto de Qumica da Universidade do Estado do Rio de Janeiro, foi doado pelo Laboratrio de Algas, do Instituto de Biologia Roberto Alcntara Gomes - Universidade Estadual do Rio de Janeiro UERJ, tendo como 39

responsvel o Prof. Marcelo Manzi Marinho, uma alquota de 10 mL de meio de cultivo contendo a cianobactria Microcystis aeruginosa. A partir desta alquota, foi realizado um repique sob condies asspticas em cmara de fluxo laminar e o inicio do cultivo da cianobactria. Nesta primeira etapa, a alquota de 10 mL foi dividida em dois erlenmeyers contendo 50 mL de meio de cultivo ASM-1. As culturas foram vedadas com tampo de algodo para permitir trocas gasosas. Por um perodo de 15 dias, tais erlenmeyers ficaram em um sistema de 8 horas sob agitao de 100 rpm em mesa agitadora, com iluminao, na temperatura de 24,5 C e 16 horas na incubadora com fotoperodo, completando o ciclo de 12h de luz/escuro. Essa agitao foi necessria para promover um crescimento mais acelerado do cultivo, pois permitia uma melhor oxigenao da soluo e uma constante homogeneizao dos nutrientes ali contidos. Aps a primeira etapa, de crescimento acelerado, os repiques so feitos a cada 14 dias, inoculando-se um volume equivalente a 10% do volume total do meio de cultivo ASM-1, com pH 8, preparado com gua destilada e previamente esterilizado em autoclave com temperatura de 121 C e presso de 1 atm. As solues j inoculadas so mantidas em sistema esttico na incubadora com fotoperodo, nas mesmas condies mencionadas acima.

4.2

Determinao da Taxa de Crescimento das Cianobactrias

Durante o perodo de crescimento das colnias de cianobactrias no meio de cultura, chamado fase exponencial, foram coletadas amostras de 2 mL de soluo fixadas com lugol para contagem de clulas, podendo assim diagnosticar qual a taxa de crescimento celular. As amostras coletadas foram armazenadas em geladeira a uma temperatura aproximada de 4 C. O preparo da soluo de lugol foi baseado em Loureno (2006), onde foi preparado duas solues, uma contendo 100 mg de iodeto de potssio em 100 mL de gua destilada e outra contendo 10 mg de iodo cristalino em 100 mL de cido actico glacial. Aps esse preparo, as solues foram acondicionadas juntamente em um frasco escuro e mantido em temperatura ambiente. 40

Aps os 14 dias iniciais, perodo em que a taxa de crescimento celular diminui, as cianobactrias atingem a fase estacionaria, quando necessrio fazer um novo repique para fornecer nutrientes novamente para as clulas continuarem a crescer. A colorao dos cultivos, quando as clulas esto nas diferentes fases, exponencial ou estacionaria, bem visvel, tendo uma colorao mais esverdeada escura durante o crescimento tornando-se amarelada quando se encontra na fase estacionria. O crescimento populacional da cianobactria Microcystis aeruginosa foi medido atravs da contagem direta. Trata-se da contagem do numero de clulas em uma alquota utilizando-se uma cmara de Neubauer, mostrada na Figura 4, em conjunto com um microscpio tico, utilizando-se um aumento de 400x.

1 3

Figura 4. Esquema ilustrativo de uma cmara de Neubauer

A contagem das clulas so feitas em 5 dos 25 quadrados existentes na cmara, que possuem dimenses exatas e conhecidas. Cada um desses cinco quadrados dividido em 16 quadrados menores. A partir destas informaes e com a contagem do numero de clulas existentes nos 5 quadrados sugeridos, foi aplicada uma equao (Equao 3) para se obter o numero total de clulas contida nessa alquota, apresentada abaixo:

R (clulas/cm3) =

clulas 1 x 25x x fator de diluio 5 Vcmara (cm 3 )

(3)

Quando a soma do nmero de clulas nos 5 quadrados determinados para a contagem ultrapassava 300 clulas, foi realizada uma diluio da soluo para se obter um valor de maior confiabilidade na contagem. 41

4.3

Anlise de microcistina utilizando mtodo ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay)

Para as anlises das concentraes de microcistina contida nas amostras dos ensaios realizados, foi utilizado o mtodo ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay). Esse ensaio consiste na imobilizao de um dos reagentes em uma fase slida, enquanto outro reagente est ligado uma enzima. O kit utilizado foi da marca Beacon Analytical Systems. Para essa etapa do trabalho, foram utilizados alm dos kits de anlise citado, pipetas automticas de volumes variveis e leitora de microplaca, Analtica, modelo Expert Plus. O mtodo utilizado na anlise de microcistinas o chamado ELISA competitivo direto. O seu princpio bsico se constitui na identificao de um antgeno (a microcistina) atravs de um anticorpo especfico, contido no kit para anlise, fixo uma fase slida (geralmente uma placa de material inerte). Este tipo de ensaio utilizado para a deteco quantitativa de microcistinas, no sendo capaz de distinguir as suas variantes, porm detecta sua presena em diferentes nveis, inclusive em baixas concentraes. Para a determinao das concentraes de microcistina nas amostras contidas na placa do mtodo ELISA foi utilizada um equipamento de espectrometria UV-Vis (Leitora de placa ELISA), que efetua as leituras de absorvncia em um comprimento de onda de 450nm. O procedimento de preparao das amostras para analise seguiu as informaes fornecidas pela empresa fabricante do kit Beacon Analytical Systems que consiste na construo de uma curva analtica contendo 5 concentraes que variam de 0,05 a 2 g.L-1 e preparo das solues adicionando o anticorpo e seguindo a metodologia de preparo da placa (Figura 5). Ao final do preparo das amostras na placa de leitura, as solues adquiriram uma colorao azulada.

42

Figura 5. Kit Beacon Analytical Systems

4.4

Ensaios Utilizando Sistema de Separao por Membranas

4.4.1 Membranas utilizadas

Para a remoo da toxina microcistina foi aplicado o processo de remoo por membranas. Os ensaios de remoo sero desenvolvidos em duas membranas distintas, abrangendo os processos de nanofiltrao e osmose inversa. A primeira membrana de osmose inversa utilizada foi a membrana comercial X201 fabricada pela Trisep Corporation. A membrana que ser utilizada no processo de remoo por nanofiltrao foi fabricada pela empresa Dow Chemical Company. As caractersticas principais das membranas esto descritas na Tabela 4. A rea de membrana utilizada no sistema de 77,2 cm2.

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Tabela 4. Caractersticas das Membranas utilizadas no estudo Processo Membrana utilizada Tipo Composio Presso mdia de trabalho (bar) Temperatura de trabalho (C) Faixa de pH Rejeio Mdia (%) Fluxo do Permeado (L/h.m2)
a b

Osmose Inversa (1) X 201 Densa Poliamida 20 2 a 45 2 a 11 99,5a 5,01a

Nanofiltrao (2) NF90 Densa Poliamida 5 2 a 45 2 a 11 97,0b 4,01b

Fonte: TRISEP CORPORATION(1) e DOW CHEMICAL COMPANY(2).


Desempenho baseado em teste nas seguintes condies: 2.000 mg L NaCl, 15,5 bar e em 25C. Desempenho baseado em teste nas seguintes condies: 2.000 mg L MgSO4, 4,8 bar e em 25C.
-1 -1

Para a realizao dos ensaios de filtrao sero utilizados dois sistemas de separao por membranas, um de nanofiltrao e outro de osmose inversa PAM Membranas Seletivas, membrana comercial plana de poliamida-uria, modelo 4040X201-TSA, Trisep Corporation e membrana de nanofiltrao, modelo NF90-2540, Dow Chemical Company. Foi utilizada uma soluo de microcistina na concentrao de 5470 g.L-1 e, a partir desta, foram feitas quatro diluies (10, 20, 30 e 40 g.L-1) que foram testadas inicialmente no sistema de osmose inversa. A microcistina utilizada foi cedida pelo Prof. Edwin Gonzalo Azero Rojas, da Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro (UNIRIO), em uma soluo concentrada de 5470 g.L-1. Nesta primeira etapa do estudo foi avaliada a variao na presso, utilizando o sistema de osmose inversa, nas presses de 5, 10 e 15 bar de operao. A vazo da alimentao do sistema foi mantida em 1L/min. Durante os experimentos, que em mdia, duraram 2 horas cada, alguns parmetros de operao do mdulo foram constantes, como o fluxo de alimentao em 1 mL/min, temperatura aproximada de 35 C e intervalo de limpeza entre os

44

experimentos de 2 horas, utilizando apenas gua destilada. Em cada amostragem efetuada durante os experimentos foi medida a vazo do permeado. O sistema de osmose inversa contem um mdulo de filtrao tangencial, tanques de alimentao, reguladores de fluxo e presso e coletores de permeado, conforme mostra a Figura 6. As amostras para anlise utilizando o mtodo Elisa foram coletas nos tempos de 0, 60, 90 e 120 minutos. Aps a coleta das amostras, estas foram armazenadas em freezer at o momento da anlise, no ultrapassando 15 dias de armazenamento.

Figura 6. Fluxograma do sistema de separao por membrana (COSTA, 2011).

4.5

Pr-Tratamento utilizado antes da microfiltrao

Antes da realizao dos ensaios no sistema de microfiltrao, foi realizado um pr-tratamento de floculao das solues contendo Microcystis aeruginosa. Para a etapa de pr-tratamento, foi utilizado sulfato de alumnio P.A. Al2(SO4)3, marca VETEC, funil de buchner, bomba a vcuo e papel de filtro.

45

Para se obter o melhor volume de soluo de sulfato de alumnio em que h a melhor formao dos aglomerados de clulas, promovendo uma soluo mais lmpida e assim, facilitando o processo de filtrao, foi realizado um ensaio em que foram testados os volumes de 10, 20, 30 e 40 mL de uma soluo de sulfato de alumnio a 1% m/v adicionando-os em frascos contendo 200 mL de soluo de Microcystis aeruginosa cada. Aps a adio do floculante, a soluo foi agitada por 20 segundos e deixada em repouso por 20 minutos para que grande parte das clulas formasse um aglomerado, decantando. Depois de decantado, o meio floculado passou por um processo de filtrao com papel de filtro com dimetro de 18,5 cm e porosidade de 14 m, utilizando a bomba a vcuo e funil de buchner. Definindo qual o melhor volume a ser utilizado, todas as solues de Microcystis aeruginosa passaram por esse processo de floculao com a soluo de sulfato de alumnio e posterior filtrao com papel de filtro para os ensaios de microfiltrao. Foram realizadas filtraes duplas, ou seja, a soluo foi filtrada duas vezes, utilizando papel de filtro novo em cada procedimento para que se obtivesse uma melhor filtrao e conseqentemente, uma soluo mais lmpida, com menor concentrao de clulas de Microcystis aeruginosa.

4.6

Ensaios de microfiltrao - Incrustao

Nos ensaios de microfiltrao foi utilizado um processo de separao por membranas de microfiltrao PAM Membranas Seletivas e membrana de fibra oca de poli (ter imida), cedida pela Profa. Maria Eugnia Ribeiro de Sena, do Instituto Alberto Luiz Coimbra COPPE Universidade Federal do Rio de Janeiro. Para esta etapa do trabalho, foi utilizada uma membrana de fibra oca de poli (ter imida), com tamanhos de poro de 0,4 m, permeabilidade hidrulica, segundo fabricante igual a 283,5 L/h.m2.bar e com uma rea de membrana no mdulo de 0,027 m2.

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Aps a realizao do processo de floculao e filtrao em papel de filtro, a soluo foi submetida ao sistema de microfiltrao. Os ensaios foram realizados sob as condies de presso de 1,5 bar e vazo de alimentao de 1 L/min, por um perodo de 2 horas. Durante a realizao do ensaio, aps o inicio do experimento, a cada 5 minutos a vazo do permeado foi verificada. Antes do inicio do ensaio com a soluo teste, foi realizada uma verificao da vazo do permeado com gua destilada para que esse valor seja padronizado como valor padro de fluxo inicial, podendo assim verificar a formao de incrustao ou polaridade por concentrao. Entre cada ensaio, foi realizado um processo de limpeza do sistema e da membrana com gua destilada at que fosse atingida a vazo inicial, antes do uso das solues contendo clulas de Microcystis aeruginosa. Este tempo variou entre os ensaios, demorando de 2 a 5 horas de limpeza com gua destilada.

4.7

Ensaio para remoo das clulas Microcystis aeruginosa e da toxina microcistina

Foi realizado um ensaio, com 2L de soluo contendo clulas de Microcystis aeruginosa onde um pr-tratamento de floculao foi aplicado, nas condies j mencionadas anteriormente, no item 4.5. Aps o processo de floculao e filtrao, a soluo foi submetida a um processo de separao por membranas de microfiltrao e posteriormente a um sistema de separao por membranas de osmose inversa. Este ensaio foi realizado com os mesmos padres j descrito nos itens anteriores e foi necessria para a verificao da remoo das clulas e da toxina no sistema de osmose inversa. No final de cada etapa do ensaio, foi retirada uma alquota da soluo para anlise. Tais amostras sero submetidas a anlises quantitativas de microcistina utilizando o kit ELISA e a uma contagem das clulas presente na soluo.

47

4.8

Analise da Adeso das Clulas de Microcystis aeruginosa na Membrana de Fibra Oca

Um ensaio foi realizado para verificar a possvel adeso das clulas de Microcystis aeruginosa na membrana de fibra oca de poli (ter imida). Para tal ensaio, foram utilizados membranas de fibra oca de poli (ter-imida), bqueres, agitador de tubos, tipo vortex, da marca Prolab e incubadora com fotoperodo. Um volume de 150 mL da soluo contendo as clulas de Microcystis aeruginosa foi acondicionada em bqueres contendo 3 filamentos de 5 cm cada da membrana de fibra oca e mantido em incubadora com fotoperodo por 5 dias. Aps o tempo determinado, as membranas foram removidas da soluo e efetuou-se uma lavagem superficial com gua destilada para remoo das clulas que no estavam aderidas na membrana. Esses filamentos foram colocados em um tubo de ensaio, contendo 10 mL de soluo salina (NaCl) a 0,85% e agitados em um agitador de tubos, tipo vortex. Aps esse procedimento, os filamentos e a soluo salina em que se encontravam foram submetidos a anlises em microscpio tico, com aumento de 100x e 400x.

4.9

Ensaios de Toxicidade Aguda da Prata Utilizando Microcystis aeruginosa

Para a realizao dos ensaios de toxicidade da prata utilizando a cianobactria Microcystis aeruginosa, foi necessrio o uso de bqueres, pipetas automticas e uma soluo de nitrato de prata (AgNO3). Para efeitos de normalizao so adotadas as seguintes definies, conforme a CETESB (1986): CL50 - concentrao efetiva inicial mdia nominal do agente txico, no incio do teste, que causa inibio do crescimento de 50 % da biomassa algcea em relao ao controle, em 96 horas de exposio;

48

Organismo-teste - organismo cuja alterao no crescimento, sobrevivncia, morfologia e/ou fisiologia eventualmente decorrentes de exposio a substnciateste sero testadas em ensaios biolgicos e/ou toxicolgicos; Substncia-teste - substncia testada quanto ao possvel efeito em um organismo-teste; Soluo-estoque - qualquer soluo de meio ou substncia-teste em concentraes superiores quelas usadas no teste; Soluo-teste - soluo da substncia-teste nas concentraes testadas. O mtodo utilizado foi segundo a norma ABNT NBR 12648, que consiste na exposio de uma cultura de cianobactrias a vrias concentraes do agente txico, por um perodo de exposio de 96 horas, por meio das quais possvel determinar a CL50 do agente txico. A partir da soluo-estoque de concentrao de 1000 mg.L-1 de nitrato de prata foi realizado uma nova diluio para compor a soluo-me, na concentrao de 10 mg.L-1 e a partir desta, foram realizadas vrias diluies diretamente nos bqueres que continham soluo de Microcystis aeruginosa para que se obtivesse a concentrao ideal das solues-teste conforme apresentado na Tabela 5.

Tabela 5. Preparo das solues-teste para o ensaio de toxicidade aguda.


Amostra Conc. (AgNO3) (mg.L-1) Vol. soluo-me (mL) Vol. soluo cianobactria (mL) Vol. Final (mL)

1 2 3 4 5

0 0,001 0,010 0,100 0,500

0 0,01 0,1 1 5

100 99,99 99,90 99,00 95,00

100 100 100 100 100

Os frascos-teste (bqueres) foram mantidos a 24,5 C na incubadora com fotoperodo de 12h claro/escuro. Os testes decorreram pelo perodo de 96 horas, sendo que diariamente os frascos sofreram rodzio aleatrio em relao iluminao.

49

Aps o trmino do ensaio, foi coletado uma alquota de 2 mL e armazenado em geladeira com lugol para avaliao e contagem do numero de clulas presentes nas amostras.

50

5 RESULTADOS PRELIMINARES

5.1

Curva de Crescimento

O crescimento da microalga foi realizado primeiramente em erlenmeyers de 50 mL e posteriormente em frascos maiores, chegando ser mantido em erlenmeyer de 5L com 3L de soluo. As solues que foram utilizadas para a contagem das clulas e construo da curva de crescimento foi realizada em erlenmeyer de 250 mL. Os resultados esto apresentados na Figura 7:

Figura 7. Curva de crescimento da Microcystis aeruginosa.

No presente estudo os valores de densidade celular mdia para Microcystis aeruginosa na fase estacionria foram de 1,4 x 107 clulas/mL-1 aproximadamente no dcimo quarto dia aps a inoculao. Para se iniciar um cultivo contnuo de microalgas geralmente inclui-se um cultivo preliminar estacionrio (batch) para a obteno de uma densidade celular inicial adequada. Bougaran et al., (2003) comparando o regime contnuo de cultivo e o estacionrio, utilizando a microalga Isochrysis galbana a concentrao celular mdia alcanada variou de 7,7 a 9,0 x 106 clulas/mL-1.

51

Os resultados aqui apresentados corroboram com os resultados descritos por Santos (2009), onde o valor mdio da densidade celular na curva de crescimento foi de aproximadamente 1,5 x 107 clulas/mL-1. Com o resultado apresentado, pode-se observar claramente a fase exponencial (aproximadamente 14 dias) e a fase estacionria onde no h mais um crescimento abundante das clulas, necessitando assim de um novo fornecimento de nutrientes e oxigenao da soluo.

5.2

Curva de Calibrao

A Figura 8 apresenta a curva de calibrao realizada com as solues padres contidos no kit ELISA e utilizada para a quantificao das amostras de microcistina durantes os ensaios. As concentraes utilizadas variaram de 0,05 a 2 g.L-1.

Figura 8. Curva de calibrao de microcistina produzida com o kit ELISA.

O limite de deteco apresentado pelo fabricante do kit de ensaio imunolgico ELISA de 0,01 g.L-1, dado este que ser investigado futuramente, bem como o limite de quantificao, linearidade e exatido.

52

Nota-se a linearidade de preciso do grfico a partir do coeficiente de determinao R2, prximo a 1, que representa a qualidade da regresso linear. Na tcnica ELISA, a preciso determinada por estes coeficientes dependente de fatores como erros no procedimento analtico, preparo de reagentes, natureza e qualidade do material amostrado e controle de parmetros, como a temperatura e o tempo de incubao. Em suma, a curva de calibrao apresentada sinalizou a possibilidade da utilizao do mtodo analtico, podendo gerar resultados confiveis e satisfatrios.

5.3

Caracterizao das membranas

Para caracterizao das membranas foi realizado o teste de permeabilidade hidrulica. Segundo Habert et. al (2005), a vazo do permeado apresenta uma dependncia linear com a presso e assim, o coeficiente angular da reta a permeabilidade hidrulica da membrana para o solvente em questo, apresentando valores tpicos de fluxo permeado de solvente puro (gua) em funo da presso. No grfico da figura 9 so apresentados os resultados de permeabilidade hidrulica para as membranas testadas. A permeabilidade hidrulica (LP) verificada na membrana de nanofiltrao de aproximadamente 7,05 L/h.m2.bar, enquanto na membrana de osmose inversa verificou-se a permeabilidade de 1,32 L/h.m2.bar.

53

Figura 9. Teste de permeabilidade hidrulica para os dois tipos de membrana (NF e OI) em solvente puro (gua).

A figura 9 traa um comparativo entre os dois processos, confirmando a linearidade e a influncia da presso na vazo do permeado, conforme j apontado na literatura por Habert et al (2005).

5.4

Experimento Utilizando Membranas Planas

5.4.1 Sistema de separao por membranas de osmose inversa

5.4.1.1

Vazo do permeado

De acordo com os dados obtidos, verifica-se na Figura 10 que o aumento da presso afetou diretamente a vazo do permeado, onde na maior presso, a vazo do permeado maior, como j era esperado, pois a fora motriz exercida no sistema faz com que a velocidade que permeada seja maior.

54

Figura 10. Valores mdios da vazo do permeado em relao concentrao de alimentao (g.L-1), nas diferentes presses testadas no sistema de osmose inversa.

Analisando a Tabela 6, que apresenta os dados mdios dos valores de vazo de permeado do sistema de filtrao (5, 10 e 15 bar), o desvio padro e o coeficiente de variao entre as presses, pode-se notar que h uma variao significativa entre as presses utilizadas no sistema, ou seja, acima de 20% (WOOD, 1999), confirmando que a vazo do permeado na presso de 15 bar, na concentrao de alimentao mais baixa superior e consequentemente, melhor do que nas presses de 5 e 10 bar.

55

Tabela 6. Dados dos valores mdio da vazo do permeado, desvio padro e coeficiente de variao (CV) entre as presses estudadas, nas diferentes concentraes de alimentao. Ca (g.L-1) 6,8 10,7 54,5 102,0 Mdia (5, 10 e 15 bar) (L/h.m2) 0,19 0,21 0,17 0,23
-1

Desvio Padro 0,091 0,087 0,067 0,070

CV (%) 46,9 41,5 39,9 30,4

Ca: Concentrao de alimentao (g.L ), Mdia: mdia dos valores obtidos de 2 vazo do permeado para as trs presses estudadas (L/h.m ), CV: Coeficiente de variao (%).

No se observou variao significativa da vazo de permeado em funo da concentrao de alimentao. Este resultado um indicativo de que nas condies estudadas no foram observados efeitos de incrustao.

5.4.1.2

Concentrao do permeado

Na Figura 11, pode-se verificar que em todas as presses testadas do sistema de filtrao (5, 10 e 15 bar), a concentrao de microcistina no permeado menor do que o valor de referncia da OMS Organizao Mundial da Sade (WHO) para gua potvel, que de 1 g.L-1.

56

Figura 11. Valores mdios de concentrao de permeado (g.L-1) em cada presso estudada no sistema de osmose inversa (5, 10, 15 bar).

Nota-se nos resultados que por se tratar de valores muito prximos, no h uma diferena significativa entre as concentraes de permeado encontradas, exceto no ponto de maior concentrao de alimentao quando usada a presso de 15 bar. Esse ponto pode ser considerado um erro experimental e que dever ser repetido nas prximas etapas para melhor investigao desse resultado.

5.4.1.3

Rejeio

Analisando os resultados apresentados na Figura 12 e os dados contidos na Tabela 7, possivel comparar a eficincia de remoo entre as trs presses utilizadas e verificar que no houve diferenas significativas podendo ento sugerir que com o uso da menor presso, tem-se a mesma rejeio com um custo de energia menor.

57

Figura 12. Valores mdios de rejeio (%) em cada presso estudada no sistema de osmose inversa (5, 10 e 15 bar).

Tabela 7. Dados dos valores mdios da rejeio, desvio padro e coeficiente de variao (CV) entre as presses estudadas, nas diferentes concentraes de alimentao. Ca (g.L-1) 6,8 10,7 54,5 102,0 Mdia (5, 10 e 15 bar) (%) 95,0 98,9 99,8 99,7
-1

Desvio Padro 3,91 0,63 0,00 0,26

CV (%) 4,1 0,6 0,0 0,3

Ca: Concentrao de alimentao (g.L ), Mdia: mdia dos valores obtidos de rejeio para as trs pressoes estudadas (%), CV: Coeficiente de variao (%).

Apesar de no haver diferena de rejeio entre as presses estudadas, a vazo do permeado afetada quando se varia a presso, como mostra a Figura 10. Esse fator muito importante quando uma empresa ou uma estao de tratamento precisa definir quais os parametros de operao que melhor se adequa ao sistema e qual a melhor opo observando-se o melhor custo/beneficio.

58

Na Tabela 8, esto apresentados alguns dados de pesquisadores que avaliaram a remoo de microcistina utilizando processo de separao por membranas.

Tabela 8. Dados comparativos com resultados de estudos de vrios autores.


Autor Tipo de filtrao Marca/modelo membranas Conc. Inicial MYC -1 (g.L ) Conc. Final MYC -1 (g.L ) % Remoo

Mody (2004)

Nano 7 bar

Filmtec (NF90 e NF270) Hydranautics (LFC1 e NTR7450)

9,5 a 12

0,9

90

Teixeira (2005) Lee e Walker (2008)

Nano 10 bar

Alfa Laval (NFT50) acetato de celulose poli(ter sulfona) poli(imida) poli(sulfona) poli(vinilideno) poliamida-ureia, modelo 4040X201-TSA, Trisep Corporation

150

4,5

97

Ultra

50

4 (poli(sulfona)

90 (poli(sulfona)

Dixon (2011) Du (resultados preliminaries)

Nano 4 a 8 bar OI 5 a 15 bar

16

1,6

90

6 a 100

0,1

92

MYC = microcistina

Pode-se notar que mesmo utilizando uma membrana de osmose inversa, os resultados apresentados aqui corroboram com os dados obtidos pelos demais autores apresentados na tabela acima, tendo rejeies acima de 90 % quando utilizado um sistema de baixa presso, valores estes que so apresentados tambm pelos autores que utilizaram nanofiltrao e ultrafiltrao. Teixeira (2005) apresenta em seu trabalho realizado com uma membrana de nanofiltrao e concentrao de microcistina (150 g.L-1), que apesar de obter um bom valor de rejeio (97%), o valor obtido no permeado acima dos limites permitidos, enquanto que de acordo com os dados apresentados neste trabalho, os valores obtidos esto abaixo do valor de 1 g.L-1, quando utilizado uma membrana de osmose inversa com presso de 5 bar, comprovando seu melhor rendimento e eficiencia. 59

5.5

Ensaio de pr-tratamento Floculao e Filtrao

Nesta etapa, acrescentaram-se volumes diferentes de uma soluo de sulfato de alumnio a 1% (m/v) ao meio e verificou-se que a melhor concentrao de floculante foi de 30 mL desta soluo em um volume de 200 mL de meio de cultivo de Microcystis aeruginosa, ou seja, uma proporo de 15% do volume utilizado. Apesar da soluo de 40 mL aparentemente ficar mais lmpida, a formao dos flocos no so ordenados e so menores em relao aos flocos formados na soluo de 30 mL. Com esta concentrao observou-se a maior formao de precipitado, os flocos formados ficaram bem visveis e ordenados, como pode ser observado na Figura 13.

Figura 13. Ensaio para definio do melhor volume do floculante.

5.6

Incrustao por deposio - Microfiltrao

Neste item so apresentados os resultados de microfiltrao do sobrenadante do processo de floculao, obtidos aps filtrao do meio floculado visando confirmar a presena de incrustao na membrana. Antes do inicio dos ensaios, o fluxo do permeado da gua destilada, utilizando 1,5 bar de presso e vazo de 1 mL/min foi de 44,6 L/h.m2. Os valores mdios de decaimento gradativo do fluxo do permeado esto apresentados na Figura 14.

60

Figura 14. Decaimento do fluxo do permeado em sistema de microfiltrao utilizando soluo contendo clulas de Microcystis aeruginosa.

Esses resultados indicam que, mesmo com os processos de separao aplicados previamente ainda tem clulas nesse meio suficiente para que ocorra incrustao por deposio. possvel notar que o fluxo do permeado sofre uma queda de 18,4% medida que a soluo permeada, indicando, mais uma vez, a formao de uma incrustao na membrana. Pode-se sugerir e isso ser verificado nas prximas etapas do trabalho que essa incrustao torna-se cada vez mais adsorvida na membrana, dificultando a limpeza e o retorno do fluxo ao ponto inicial de 44,6 L/h.m2. Observa-se que na Figura 14 para as condies apresentadas, a vazo do permeado tende a um valor constante medida que se aumenta o tempo de permeao. O processo de floculao como um agente de pr-tratamento demonstrou ser eficaz no processo de separao de cianobactrias, porm mostrou que mesmo aplicando um processo eficiente na remoo de grande parte das clulas, ainda assim, as clulas residuais podem provocar incrustao, criando um decaimento gradativo da vazo do permeado, prejudicando o sistema.

61

5.7

Ensaio para Remoo das Clulas Microcystis aeruginosa

A tcnica de microfiltrao mostrou ser uma tcnica adequada para separao e concentrao de biomassa, possibilitando uma remoo acima de 99% de clulas, impossibilitando assim a contagem de clulas possivelmente presentes no permeado. Nas amostras que foram coletadas aps os ensaios de microfiltrao, no foram consideradas vlidas as clulas que foram encontradas, por se tratar de um nmero muito abaixo do limite considerado vlido de 30 clulas. Nesta etapa buscou-se apenas avaliar a remoo de clulas. Em uma prxima etapa sero realizadas as analises para determinao de microcistina em soluo. Esse um processo que pode ser ampliado gradativamente em funo das necessidades, demonstrando ser um processo bastante promissor.

5.8

Analise da adeso das clulas de Microcystis aeruginosa na membrana de fibra oca

Este ensaio foi realizado para verificar a possvel adeso das clulas da cianobactria nos filamentos da membrana de fibra oca visualizando uma maior dificuldade para limpeza do sistema. Como no ocorreu a adeso das clulas na membrana, este ser um assunto que voltar a ser estudado, realizando ensaios diferentes, promovendo um maior tempo de exposio ou modificando a forma de execuo dos ensaios.

62

5.9

Ensaios preliminares de toxicidade aguda da prata utilizando Microcystis aeruginosa

As concentraes das substncias-teste, os crescimentos obtidos, bem como seus valores de porcentagem de efeitos em relao aos tratamentos controles esto relacionadas na Tabela 9.

Tabela 9. Dados de contagem do nmero de clulas e inibio do crescimento.


Conc. (AgNO3) (mg.L-1) Contagem do n de clulas % Inibio

0 0,001 0,010 0,100 0,500

245 230 180 145 0

6,2 26,5 40,8 100

De acordo com os dados apresentados do ensaio preliminar realizado, obtemos um valor de CL50 equivalente a 0,1483 mg.L-1, com limites superiores e inferiores, 0,1684 e 0,1283 mg.L-1, respectivamente. Calculou-se o parmetro CL50 e intervalos de confiana pelo mtodo da regresso linear, sendo utilizado para este propsito o programa estatstico Spearman-Karber (HAMILTON et al. 1978). O mtodo consiste no clculo ou representao grfica dos dados obtidos nos testes de toxicidade aguda para determinar a CL50 de um agente txico. Utiliza-se uma modificao da equao da reta e o mtodo dos mnimos quadrados, para obter as estimativas dos parmetros A e B da equao Y= A + B log-to (x), Onde: A= coeficiente linear B= coeficiente angular Y= varivel dependente x= varivel independente Nesta anlise, Y representa a porcentagem de organismos afetados nos testes de toxicidade e x (transformado em logaritmo) indica a concentrao do agente txico estudado. 63

Este ensaio foi realizado visando obter uma concentrao estimada da soluo de prata que seja txica para as clulas de Microcystis aeruginosa, podendo assim, evitar o acumulo e o crescimento das clulas, impregnando a membrana com a prata. A inibio do crescimento causada pela lise das clulas, causando o inconveniente da liberao da toxina intracelular, que ser removida na prxima etapa de desinfeco da gua, ou seja, quando a soluo passar pelo sistema de separao de nanofiltrao ou osmose inversa.

64

6 PRXIMAS ETAPAS

Para que a tese possa ser concluda, os prximos passos para que possa ser aprofundado o estudo e a realizao dos ensaios sero: Estudo e ensaios definitivos de toxicidade aguda da prata utilizando Microcystis aeruginosa; Estudo da incrustao por deposio no sistema de microfiltrao utilizando membranas de fibra oca; Estudo da deposio de prata por imerso e capilaridade nas membranas de fibra oca; Avaliao da atividade biocida de membranas de PEI + prata; Quantificao da concentrao de microcistina no permeado aps o prtratamento, microfiltrao e nanofiltrao/osmose inversa; Repetio dos ensaios de osmose inversa com membrana plana; Ensaios utilizando membranas de nanofiltrao; Por fim e ao longo da tese, revises bibliogrficas atualizadas, confeco de artigos e envio de resumos para congresso e, finalmente a redao final da tese.

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CRONOGRAMA 2010 2 X X X X X X X X X X X 2011 1 2 2012 1 2 2013 1 2 2014 1

Atividade Disciplinas do curso Reviso Bibliogrfica Estudos preliminares de deteco da microcistina Estudos de impregnao com prata da membrana Ensaios de toxicidade aguda Estudo de bioincrustao e biocida Finalizao e repetio dos ensaios de osmose inversa e nanofiltrao Envio de trabalhos (congressos e publicaes) Redao da tese

X X X X X X

X X

X X

Pode-se ressaltar que esto sendo co-orientadas neste projeto trs alunas (Jssica Rodrigues Pires da Silva, Karina Marinho e Ana Gabriela) de Iniciao Cientfica do IQ-UERJ, que atuam no projeto e participam de treinamentos e execuo dos ensaios. Foi apresentado um resumo relacionado ao trabalho desenvolvido nesta tese no XIII Encontro Regional da Sociedade Brasileira de Qumica, organizado pelo Instituto Militar de Engenharia (IME-RJ), no perodo de 04 a 07 de julho de 2011. Este trabalho foi fruto deste projeto apoiado pela Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior, oferecendo auxilio financeiro para os gastos com o projeto, inclusive a bolsa de auxilio da doutoranda. Por fim, a defesa da tese est prevista para ocorrer at a primeira semana do ms de agosto de 2014, prazo final para que ela possa acontecer.

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