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Fundamentos de Bioqumica
Nstor G. Martnez Danes. Ciudad Universitaria de Caracas, Julio de 2009
En este documento se explican detalladamente:

1. Mecanismos de regulacin de la actividad de las enzimas. Alosterismo, modificacin covalente reversible e irreversible. El ciclo de Krebs y su regulacin. Relacin NAD/NADH y ADP/ATP. Fosforilacin oxidativa y su regulacin. Transduccin de seales. Mecanismo de accin de la adrenalina, el glucagon y la insulina. Nociones generales de la digestin y absorcin de carbohidratos, lpidos y protenas. Regulacin de la gliclisis. PFK II Regulacin coordinada de la glucogenognesis y de la glucogenolisis. Regulacin de la neoglucognesis. Piruvato carboxilasa y fructosa 1,6 bisfosfato fosfatasa. 9. 10. Metabolismo de las lipoprotenas. Catabolismo de VLDL, LDL y QM. Regulacin de la lipognesis. Papel de la insulina y el citrato en la regulacin de la acetil-CoA carboxilasa. Regulacin de la oxidacin de los cidos grasos. Papel del malonil-CoA. Regulacin de la liplisis. Lipasa sensible a hormonas. Regulacin de la sntesis de cuerpos cetnicos. Regulacin del metabolismo de los aminocidos. Integracin metablica durante la situacin post-prandial y el ayuno. Hormonas, tejidos, enzimas activas e inactivas.
2. 3. 4.
11. 12. 13. 14. 15.
5.
6. 7. 8.
1. Mecanismos de regulacin de la actividad de las enzimas. Alosterismo y modificacin covalente.

Las enzimas
Las enzimas son catalizadores protenicos que incrementan las tasas de reacciones sin experimentar cambios durante el proceso global. Todas las reacciones del cuerpo son mediadas por enzimas, estas catalizan de forma selectiva las sustancias reactivas (llamadas sustratos) por vas de utilidad, por lo que se dice que dirigen todos los sucesos metablicos. Las enzimas se caracterizan por: Sitios activos: Contienen un saco o surco especial denominado sitio activo, ste contiene cadenas laterales de 1
aminocidos que crean una superficie tridimensional complementaria con el sustrato. Eficiencia cataltica: Las reacciones catalizadas por enzimas son altamente eficientes y proceden con una rapidez mayor que las reacciones no catalizadas. Especificidad: Son altamente especficas y entran en interaccin con uno o pocos sustratos y catalizan slo un tipo de reaccin qumica Cofactores: Son molculas no protenicas necesarias para algunas enzimas para poder realizar la actividad enzimtica. Regulacin: La actividad enzimtica puede ser regulada; las enzimas se activan o se inhiben. Localizacin dentro de la clula: La mayora estn localizadas en organelos especficos dentro de la clula, lo que permite la compartimentacin con el fin de aislar al sustrato o al producto de otras reacciones competitivas. Esto ofrece un ambiente favorable para la reaccin y permita la organizacin de las enzimas dentro de la clula.
Mecanismos de regulacin enzimtica

El hecho de que algunas vas metablicas estn activas en una determinada situacin fisiolgica, se debe a que las enzimas reguladoras de ellas estn activas. De aqu se deriva la importancia de conocer los mecanismos generales de regulacin de la actividad de las enzimas. Esto se puede lograr de dos maneras: Regulando la actividad de las enzimas preexistentes: se aumenta o disminuye la actividad de enzimas presentes, en un determinado momento, en la clula. Regulando la cantidad de enzima: aumentando o disminuyendo la sntesis de la enzima.
Mecanismos de regulacin
1. Control de la actividad de las enzimas en
respuesta a metabolitos.
la
concentracin
de
Control por la concentracin del producto de una reaccin: Interaccin del producto con la enzima: Cuando la concentracin del producto es suficientemente alta puede competir por el sustrato por el sitio activo de la enzima. El producto acta como un inhibidor competitivo de la enzima disminuyendo su
Las enzimas ofrecen una va de reaccin energticamente favorable distinta a la reaccin no catalizada ya que disminuyen la energa libre de activacin de la reaccin y a la vez el sitio activo facilita la catlisis desde el punto de vista qumico.
actividad. Ejemplo: la reaccin catalizada por la hexoquinasa:

glucosa + ATP glucosa-6-fosfato + ADP
Fig.1.2. Cintica de las enzimas alostricas. 2. Control por modificacin covalente de la
enzima (reversible y no reversible). Modificacin covalente reversible: Requiere de la participacin de enzimas para la modificacin covalente (quinasa/fosfatasa). La fosforilacin/desfosforilacin es el tipo ms frecuente de modificacin (Fig. 3). La fosforilacin es catalizada por quinasas que transfieren un grupo fosfato desde el ATP hasta grupos OH de residuos de serina, treonina o tirosina de la enzima cuya actividad es modificada. La desfosforilacin es catalizada por fosfatasas que remueven grupos fosfato aadidos por las quinasas. Algunas veces la fosforilacin activa a la enzima y otras la inhibe.
La hexoquinasa es inhibida por la glucosa-6-fosfato (el producto) disminuyendo la velocidad de la reaccin.
Regulacin alostrica: Las enzimas alostricas tienen ms de una subunidad (Fig. 1.1), estas existen en dos conformaciones interconvertibles, generalmente tienen ms de un sitio activo, a la vez son reguladas por otras molculas diferentes del sustrato (efectores alostricos, los cuales pueden favorecer o no la unin del sustrato) y no siguen la cintica de MichealisMenten (Fig. 1.2)
La unin de un modulador positivo provoca un cambio conformacional que favorece la unin del sustrato
La unin de un modulador negativo provoca un cambio conformacional que no favorece la unin del sustrato
Fig.1.1. Efecto de los moduladores alostricos. Fig. Modificacin covalente reversible.

V Modulador Positivo :(A) (A): Desplazamiento a la izquierda A I Modulador Negativo negati vo:( I ): Desplazamiento a la laderecha derecha
Modificacin covalente reversible: La inhibicin irreversible es diferente de la inactivacin enzimtica reversible. Los inhibidores irreversibles son generalmente especficos para un tipo de enzima y no inactivan a todas las
[Sustrato ]
protenas. No funcionan destruyendo la estructura protenica, sino alterando especficamente la estructura tridimensional del sitio activo inhabilitndolo.
3. Compartamentalizacin.
4. Complejos multienzimticos.
Se basa en la localizacin en diferentes organelos de las enzimas pertenecientes a las vas metablicas, aumenta la concentracin local de metabolitos, favoreciendo la interaccin entre las enzimas y sus sustratos y favorece los mecanismos de control enzimtico de las vas metablicas.
Favorece la realizacin de reacciones secuenciales, al dificultar la difusin libre de los sustratos a ser modificados. Un ejemplo de ello es la sintasa de cidos grasos, una enzima que rene varias actividades y que requiere que el sustrato permanezca unido a ella por medio de la protena portadora de acilos.
5. Control de la cantidad de enzima.
Aumento o disminucin de la transcripcin del gen que codifica a la protena.
2. El ciclo de Krebs y su regulacin.

Ciclo de Krebs
Este ciclo consiste en una cadena de reacciones mediante las cuales el acetato de la acetil-CoA es oxidado a CO2, con la produccin concomitante de equivalentes reductores, los cuales pasan a lo largo de la cadena respiratoria para finalmente reducir al O2 y formar H2O. 1) Reaccin de la Piruvato deshidrogenasa: Aunque la reaccin catalizada por la piruvato deshidrogenasa no es estrictamente una de las enzimas del ciclo de Krebs, en ciertos tejidos y ciertas situaciones (que no mencionaremos aqu) es la reaccin que aporta la mayor parte del acetil-CoA que se oxida en el ciclo. Por esta razn en la mayora de los libros de texto, la descripcin del ciclo de Krebs comienza con la de la reaccin catalizada por la piruvato deshidrogenasa. La piruvato deshidrogenasa es un complejo multienzimtico, formada por un conjunto de varias protenas que coordinadamente y por pasos catalizan la descarboxilacin oxidativa del piruvato.
Fig. 2.1. Reaccin catalizada por la piruvato deshidrogenasa En la fig. 2.1 est remarcado el grupo acetato, que es la unidad de dos carbonos que va a oxidarse en el ciclo de Krebs. Note que la mayor parte del acetil-CoA est formada por la coenzima A, la cual se deriva del cido pantotnico, una vitamina.
2) Condensacin Oxaloacetato:
de
Acetil-CoA
El catalizador de la reaccin es la citrato sintasa.
3) Conversin del citrato en isocitrato: Esta reaccin es catalizada por la enzima aconitasa, la cual cataliza una deshidratacin y rehidratacin del citrato para formar isocitrato.
Oxalacetato
Citrato
Isocitrato
-Cetoglutarato
Esta es una reaccin interesante:

Citrato Isocitrato
4) Conversin del isocitrato en cetoglutarato: Reaccin catalizada por la isocitrato deshidrogenasa.
En primer lugar se desprende CO2 con lo cual se reduce de 6 a 5 el nmero de tomos de carbono en los intermediarios del ciclo. En segundo trmino se generan equivalentes reductores bajo la forma de NADH. Y en tercer lugar as una reaccin estimulada por el ADP. En ausencia de este procede muy lentamente.
5) Descarboxilacin del -cetoglutarato a succinil-CoA Esta reaccin es catalizada por una enzima compleja llamada -cetoglutarato deshidrogenasa. La reaccin es semejante a la descarboxilacin del piruvato para dar origen al acetil-CoA.
Succinato SuccinilCoA
Esta reaccin es un ejemplo de lo que se denomina fosforilacin a nivel de sustrato, la cual se define como la formacin de compuestos fosfatados de "alta energa" sin intervencin de la cadena respiratoria, ni del mecanismo ya descrito pare la formacin de ATP en la mitocondria.
-Cetoglutarato
SuccinilCoA
En este paso se libera CO2 con lo cual se llega a 4 tomos de carbono en el esqueleto de los intermediarios del ciclo. Adems, se produce NADH. El producto de la reaccin, succinil-CoA, es una molcula de "alta energa", debido a que como consecuencia de la oxidacin se obtiene un tioster del cido succnico, cuya hidrlisis es una reaccin fuertemente exergnica. Este compuesto, succinil-CoA, no es hidrolizado directamente, sino que primero se forma un intermediario Succinil-P, el cual transfiere el grupo fosfato primero a la enzima y luego al GDP y se forma GTP:
Regeneracin del oxaloacetato El ciclo contina con las siguientes reacciones:
6) Catalizada deshidrogenasa.
por
la
succinato
Succinato
Fumarato
Pi + succinil-CoA succinil-P + CoA Succinil-P Enzima-P + succinato Enzima-P + GDP GTP
7) Catalizada por la fumarasa.
Fumarato
Malato
8) Catalizada por la malato deshidrogenasa.
En la deshidrogenacin del succinato hay un aspecto interesante; la coenzima es el FAD+ y est unida covalentemente a la enzima. La coenzima reducida FAD+ cede sus equivalentes reductores a la cadena respiratoria en un punto ms prximo al oxgeno que el NADH, probablemente la CoQ. (Fig. 9). Esto significa que el paso de esos equivalentes por la cadena oxidativa slo causa la expulsin de 2 pares de H+ y por lo tanto slo provee energa para la sntesis de 2 ATP por la protena F1. En la fig. 2.2 se presenta un esquema todas las reacciones del ciclo de Krebs.
Malato
Oxalacetato
Fig. 2.2. Ciclo de Krebs
Regulacin
Como todas las reacciones qumicas, la velocidad de las reacciones del ciclo de Krebs, dependen, en parte, de las concentraciones relativas de reactantes y productos. Por ejemplo, si consideramos la siguiente reaccin:
Isocitrato + NA -cetoglutarato + NADH
formas de xido-reduccin del NAD, hablamos de una relacin: NAD/NADH Hay que tener en cuenta, entonces, que si decimos que hay un aumento de la relacin NAD/NADH, quiere decir que aument la concentracin de NAD (aumenta la relacin si el numerador es mayor que el denominador); y si decimos que la relacin disminuye, quiere decir que aument la concentracin de NADH. Algo parecido puede decirse de la concentracin de nucletidos de adenina. Su concentracin dentro de la mitocondria es constante, pero vara su estado de fosforilacin. En el caso de los nucletidos de adenina no se debe a que no puedan atravesar la membrana interna mitocondrial, sino a que el transporte de ellos a nivel de esta membrana es un antiportador equimolecular: solo funciona si intercambia una molcula de ATP por una de ADP. Esto hace que se mantenga constante la concentracin intramitocondrial de estos nucletidos. As, si aumenta la concentracin de ATP es porque la de ADP disminuy. Por esta razn frecuentemente tambin hablamos de la relacin ATP/ADP1 para referirnos a la concentracin de alguno de ellos. A continuacin detallaremos la regulacin de cada una de las enzimas que limitan la velocidad del CK. A continuacin se detallar la regulacin de cada una de las enzimas que limitan la velocidad del CK.
Si aumenta la concentracin de NAD+, aumentar la velocidad de conversin de isocitrato en -cetoglutarato. Esto tendr una repercusin sobre la velocidad del ciclo de Krebs, ya que el aumento de la formacin de -cetoglutarato aumenta la concentracin de uno de los sustratos de la reaccin:
-cetoglutarato + CoA + NAD
+
Succinil-CoA + CO2 + NADH
Lo cual aumentar la velocidad del ciclo. Todas las reacciones del CK donde intervienen coenzimas de xido-reduccin, dependen de la concentracin relativa de sus formas reducidas y oxidadas. La concentracin de NAD, independientemente de su estado de xido-reduccin es fija en el interior mitocondrial (y tambin en el citosol, ya que ellas no atraviesan la membrana interna mitocondrial). Esto quiere decir que si aumenta la concentracin de su forma reducida, es porque disminuy la de su forma oxidada, y viceversa. As, si decimos que hay una disminucin de NAD+, decimos implcitamente que hay un aumento de NADH + H+. Es por esta razn que al querer referirnos a la concentracin de alguna de las
Regulacin de la piruvato deshidrogenasa: El complejo de la piruvato deshidrogenasa est sujeto a formas mltiples de regulacin. Depende, como todas las deshidrogenadas que utilizan NAD como coenzima, de la relacin NAD/NADH. Adems, es reculada por modificacin covalente reversible por fosforilacin/desfosforilacin. Cuando la enzima est fosforilada es inactiva y es activa cuando est desfosforilada. Como puede notarse en la Fig. 2.3 la quinasa que fosforila e inactiva a la piruvato deshidrogenasa, es un enzima que es regulada alostricamente por varios metabolitos. Por ejemplo, el aumento del NADH y del ATP la activan, lo cual quiere decir que fosforila a la piruvato deshidrogenasa inactivndola; es decir que tanto un aumento del NADH como del ATP tienen el efecto neto de inhibir a la piruvato deshidrogenasa. La regulacin de esta enzima es muy compleja y tambin depende del efecto de algunas hormonas, pero este punto se tratar ms extensamente en el tema de Integracin y Regulacin del Metabolismo.
Regulacin de la citrato sintasa: Es inhibida alostricamente por el ATP y activada por el ADP. El NADH tambin inhibe alostricamente a la enzima. Cuando aumenta la concentracin de citrato, la se hace ms lenta la liberacin del mismo del complejo EP, por lo que la reaccin global se hace ms lenta, el efecto neto ser que el aumento de la concentracin de citrato, inhibe a la enzima porque permanece por ms tiempo unido al centro activo de ella, donde se ha formado. El succinil-CoA compite por la enzima y la inhibe, porque el succinil CoA se parece a uno de los sustratos de la enzima (acetilCoA). Todos los factores que inhiben la actividad de la enzima, disminuirn la velocidad del ciclo de Krebs. Regulacin de la isocitrato deshidrogenasa: Como todas las enzimas deshidrogenadas depende de la relacin NAD/NADH.
Isocitrato + NAD
+
cetoglutarato + NADH
El aumento de la concentracin de NADH, desplaza el equilibrio de la reaccin hacia la formacin de isocitrato, siendo el efecto neto una disminucin de la velocidad de formacin de cetoglutarato y, por supuesto una reduccin de la velocidad del CK. Lo contrario ocurrir si hay un aumento de la concentracin de NAD. Recuerde que un aumento de la concentracin de NAD implica una disminucin de NADH, por lo cual podemos decir entonces que un aumento de la relacin NAD/NADH aumenta la actividad de la enzima isocitrato deshidrogenasa y viceversa. 9
Fig. 2.3. Regulacin de la Piruvato Deshidrogenasa
La isocitrato deshidrogenasa tambin es inhibida alostricamente por el ATP y activada por el ADP
Regulacin de la -cetoglutarato deshidrogenasa: Est sujeta a la regulacin de la relacin NAD/NADH al igual que otras deshidrogenadas dependientes del NAD. Adems, su regulacin es muy parecida a la de la piruvato deshidrogenasa, aunque no es regulada por fosforilacin desfosforilacin.
Los factores que tienden a aumentar la velocidad del ciclo de Krebs, aumentarn la formacin de coenzimas reducidas que son el sustrato para la cadena de transporte electrnico, por lo que aumentar tambin la velocidad de dicho transporte y, por consecuencia, la sntesis de ATP. Podemos decir entonces que el aumento de la velocidad del ciclo de Krebs, aumenta la sntesis de ATP y el consumo de oxgeno (recuerde que al ser el oxgeno un gas, su concentracin se expresa como presin parcial), ya que siendo ste el ltimo aceptor de los electrones en la cadena respiratoria se consumir ms si aumenta la velocidad del transporte electrnico. El consumo de oxgeno, de hecho, se utiliza experimentalmente para medir la velocidad del transporte de electrones, as como para medir la tasa de sntesis de ATP, se mide la cantidad de fosfato consumido. Recuerde que el ATP se forma a partir de ADP y Pi (fosfato inorgnico). Igualmente, la velocidad de la fosforilacin oxidativa afectar la velocidad del ciclo de Krebs. Por ejemplo, una disminucin de la sntesis de ATP, aumentar la concentracin de ADP lo que traer como consecuencia que se activen las enzimas alostricas citrato sintetasa e isocitrato deshidrogenasa, lo cual aumentar la velocidad del CK, es decir que aumentar la produccin de coenzimas reducidas que aportan sustrato a la cadena de transporte electrnico, aumentando as la sntesis de ATP. Intuitivamente, podemos darnos cuenta que esta interdependencia entre ambos procesos tiende a conservar el estado homeosttico de la clula. 10
Regulacin de la malato deshidrogenasa: Como todas las enzimas deshidrogenadas depende de la relacin NAD/NADH.
Malato + NAD oxalacetato + NADH
El aumento de la concentracin de NAD, desplaza el equilibrio de la reaccin hacia la formacin de oxalacetato, o sea que aumentar la velocidad del CK. Regulacin coordinada del ciclo de Krebs y de la fosforilacin oxidativa: La regulacin de las enzimas del CK por la concentracin relativa de reaccionantes y productos est interrelacionada con la regulacin alostrica de las enzimas. Por ejemplo, un aumento de la concentracin de citrato slo aumenta la velocidad del ciclo de Krebs si concomitantemente las enzimas sujetas a regulacin alostrica estn tambin activas.
Papel anfiblico del ciclo de Krebs Hasta este punto se ha descrito el papel del ciclo de Krebs como va degradativa, en la cual como balance neto se tiene que el acetato de la acetil-CoA es convertido en 2 CO2. Esa oxidacin produce 3 NADH y 1 FADH2, alimentadores de la cadena respiratoria para la sntesis de 11 ATP. Adems, se produce un GTP (equivalente a 1 ATP) por fosforilacin a nivel del sustrato. Pero el ciclo de Krebs tambin puede aportar precursores para la sntesis de metabolitos, es decir, puede jugar un papel como ruta anablica. Por ejemplo, el citrato puede salir de la mitocondria y dar origen en el citosol a Acetil-CoA, precursora de los cidos grasos. Asimismo, el oxaloacetato puede originar fosfoenolpiruvato y a partir de este puede ser sintetizada la glucosa en el hgado.
Por ello se dice que el ciclo de Krebs es una va anfiblica: puede ser catablica o anablica segn las condiciones imperantes en la clula. Las reacciones anaplerticas son aquellas que aportan intermediarios al ciclo de Krebs. Por ejemplo la reaccin catalizada por la piruvato carboxilasa, una enzima mitocondrial que nos encontraremos nuevamente en el metabolismo de los carbohidratos, puede aportar oxalacetato al ciclo de Krebs:
Piruvato + ATP + CO2 Oxalacetato + ADP + Pi
Igualmente, la reaccin catalizada por la glutamato deshidrogenasa, puede aportar cetoglutarato al ciclo:
Glutamato + NAD -cetoglutarato + NADH
3. Fosforilacin oxidativa y su regulacin.

Fosforilacin oxidativa
La mayor parte (90%) del ATP es producida en la mitocondria por medio de la llamada fosforilaci6n oxidativa. llamada matriz mitocondrial. Adems existe el espacio intermembranoso. (Fig.3.1).
Estructura mitocondrial y cadena transportadora de electrones.

La mitocondria es un organelo subcelular que mide 1,5 a 2 nm. en cuya estructura se describen una membrana externa y una membrana interna, la cual contiene la Fig. 3.1. Estructura de la mitocondria
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La membrana externa tiene aproximadamente 50% de lpidos y 50% de protenas. Entre estas se encuentra la enzima monoamino-oxidasa, la cual se utiliza como marcador de la presencia de esta membrana en preparaciones subcelulares. En el espacio intermembranoso hay tambin varias enzimas, la ms caracterstica de las cuales es la adenilatoquinasa. La matriz es una solucin gelatinosa en la cual estn la mayor parte de las enzimas del ciclo de Krebs, las de -oxidacin de los cidos grasos y otras. La membrana interna contiene aproximadamente 20% de lpidos y 80% de protenas. Entre estas se encuentran la succinato deshidrogenasa (una flavoprotena) y la carnitina aciltransferasa. Adems, la membrana interna es el sitio donde se encuentra la cadena oxidativa, cuyos componentes se describen brevemente a continuacin. La mayora de los componentes de la cadena respiratoria se encuentran asociados formando cuatro complejos. Todos ellos estn formados por varia protenas, pero slo nos referiremos aqu a las molculas que intervienen en las reacciones de oxidorreduccin del transporte electrnico. En el complejo I se encuentra la NAD deshidrogenasa o NADH-CoQ oxidorreductasa. sta contiene FMN como coenzima. En el complejo II se encuentra la succinato deshidrogenasa, que contiene FAD como coenzima. En el complejo II se encuentran los citocromos b y c1. Todos los citocromos son protenas que contienen
grupos hemo que son capaces de intervenir en reacciones de oxidorreduccin porque poseen hierro, que puede interconvertirse en sus estados frrico (Fe+3) y ferroso (Fe+2). Al complejo IV, llamado citocromo oxidasa, pertenecen los citocromos a y a3, que son los que donan finalmente los electrones al oxgeno. Adems de estos complejos, la cadena de transporte electrnico est formada por el citocromo c y la coenzima Q o ubiquinona, que es una molcula pequea y liposoluble, lo que le permite gran movilidad en la membrana interna mitocondrial. Los citocromos solo pueden aceptar o donar electrones, en cambio la coenzima Q puede aceptar electrones y protones. En la tabla 1 se encuentra un resumen de las caractersticas de los componentes de la cadena de transporte electrnico. Los componentes de la cadena de transporte electrnico se encuentran orientados vectorialmente de manera que algunos de ellos quedan en contacto slo con el espacio intermembranoso (protena FeS, citocromos b, c y cl) mientras que otros se extienden a travs de toda la membrana (NADH deshidrogenasa, citocromo oxidasa). Se considera como un quinto complejo al denominado complejo FlFO. Fl es una protena globular que se encuentra en una especie de protuberancias que se pueden observar en la membrana interna con el microscopio electrnico. Esta protena ha sido aislada y purificada y se ha demostrado que est involucrada en la sntesis de ATP. FO es una protena hidrofbica que une F1 a la membrana y que constituye un canal de protones.
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Tabla 1: Resumen de la estructura y funcin de los complejos constituyentes de la cadena de transporte electrnico.
Componente Acepta e- de: Entrega e- a: Constituyentes NADH deshidrogenasa: FMN como grupo prosttico, Protenas con Fe y S. Succinato deshidrogenasa FAD como grupo prosttico. Protenas con Fe y S. CoQ Complejos I y II Complejo III Citocromo b Citocromo c1 Protenas con Fe y S. Citocromo c Citocromo c oxidasa: ~10 protenas diferentes, citocromos a y a3.
Complejo I
NADH
CoQ
Complejo II
Succinato
CoQ
Complejo III
CoQH2
Citocromo c
Citocromo c
Complejo III
Complejo IV
Complejo IV
Citocromo c
O2
Oxgeno ATP Sintetasa Componente
Complejo IV
O2 es el aceptor final de los electrones
Acepta H+ de Espacio intermembrana.
Accin convierte ADP + Pi a ATP + H2O
Constituyentes
"Complejo V"
F1: a3b3g3de F0: (SHP)n
Oxidorreduccin Equivalentes de oxidorreduccin: En las reacciones de oxidorreduccin de las clulas a veces se transfieren electrones y otras veces tomos de hidrgeno completos
(recuerde que un tomo de hidrgeno tiene dos electrones y dos Protones), por esta razn hablaremos de equivalentes de oxidorreduccin al referirnos a la oxidacin y reduccin de molculas.
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Se recordar que en las reacciones de oxido-reduccin una sustancia reductora le cede equivalentes reductores (electrones o tomos de hidrgeno) a una sustancia oxidante. Al ceder los electrones el reductor queda oxidado y el oxidante queda reducido al recibirlos. Por ello se dice que los agentes reductores funcionan como parejas redox acopladas. Por ejemplo, un in Ferroso (Fe++) cede un electrn a un oxidante y es oxidado a in frrico (Fe+++). En este caso la pareja redox acoplada es Fe+++/Fe++.
frecuentemente NADH + H+. Observe se en la Fig. 3.2.
Fig. 3.2. Estructura del NAD
Coenzimas de oxidorreduccin Frecuentemente en la clula las reacciones de oxidorreduccin estn catalizadas por enzimas que utilizan las coenzimas NAD+, NADP+ y FAD. La coenzima NAD+ (nicotinamida-adenina dinucletido) contiene nicotinamida, que es sintetizada en el organismo a partir de la vitamina niacina. El NAD+ se une muy laxamente a las enzimas que lo utilizan como coenzima, puede disociarse fcilmente de ellas tanto en estado oxidado como en estado reducido. El anillo de nicotinamida, el cual es la parte de la molcula que cede o acepta equivalentes reductores, posee una carga positiva neta y por eso la forma oxidada se escribe NAD+. Cuando las enzimas que contienen NAD+ participan en reacciones de oxidorreduccin, se transfieren dos tomos de hidrgeno, de los cuales solo pueden unirse al NAD+ los dos electrones y uno de los protones, esta es la razn por la cual el NAD+ reducido se escribe
El FAD (flavin dinucletido) y el FMN (flavin mononucletido) se forman en el organismo a partir de la vitamina riboflavina. Se unen fuertemente a las enzimas que los utilizan como coenzimas, las cuales son enzimas que se encuentran como protenas integrales de membranas. Por ejemplo, la NAD deshidrogenasa (deshidrogena al NAD reducido), que contiene FMN forma parte del complejo I de la cadena de transporte de electrones; la succinato deshidrogenasa, que contiene FAD, una enzima del ciclo de Krebs, tambin se encuentra unida a la membrana interna mitocondrial. La parte de estas coenzimas que acepta y cede equivalentes reductores es el anillo de isoaloxazina. Los nucletidos de flavina intercambian dos protones y dos electrones cuando intervienen en reacciones de oxidorreduccin. Observe se en la Fig. 3.3.
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hacia el espacio intermembranoso. Tambin se postula que la membrana interna es impermeable a los H+ y, por lo tanto, al ser expulsados los protones se crea un gradiente de concentracin (Fig. 3.4) Se postula que la coenzima Q por ser bastante hidrofbica tiene mucha movilidad dentro de la membrana. Adems, se sabe que hay una proporcin 6:1 entre la concentracin molar de CoQ y la de cualquiera de los citocromos. Se dice que CoQ sirve de transportador de los electrones entre la protena frrica y el citocromo b y toma 2H+ de la matriz mitocondrial. Cuando el citocromo b es oxidado por el c1, salen otros dos protones al medio intermembranoso. El citocromo cl es oxidado por el cit. c y este a su vez por la citocromo oxidasa (cit. a + a3) la cual finalmente cede los electrones al O2. Cada molcula de O2 capta 4E- y 4H+ y se transforma en 2H2O. Se puede decir que los electrones fluyen por la cadena respiratoria como el agua por el cauce de un ro y cada vez que se acercan al espacio intermembrana salen H+ (Fig. 3.4). Va a encontrar diferentes versiones de lo que se acaba de describir, no tienen que aprenderse ninguna con detalle. Slo es importante que comprenda que el paso de los electrones por los diferentes componentes, genera un gradiente de protones entre el espacio intermembrana y la matriz mitocondrial. Mitchell propuso que la formacin de este gradiente es la fuerza que impulsa la sntesis de ATP por el complejo FoF1 ATP sintetasa. Es imprescindible que la membrana interna
Fig. 3.3. Estructura del FAD
Funcionamiento de la cadena oxidativa Los procesos que se realizan en la matriz mitocondrial generan equivalentes reductores al oxidar diversas sustancias. En el ciclo de Krebs se oxida Acetil-CoA y se producen CO2 y equivalentes reductores (NADH y FADH2). La beta oxidacin de los cidos grasos tambin genera NADH y FADH2. Estas coenzimas reducidas son oxidadas paso a paso por la cadena respiratoria, de manera tal que en el primer paso queda la coenzima oxidada y la deshidrogenasa reducida. En segundo paso la deshidrogenasa es a su vez oxidada al ceder electrones a una protena frrica (sin grupo hemo). En este paso los iones Fe+++ de la protena quedan reducidos a iones Fe++, pero por cada FMNH2 quedan 2H+ libres.
Actualmente se acepta que la membrana interna funciona vectorialmente, de tal manera que los protones generados salen
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mitocondrial sea impermeable a los protones
para que pueda formarse el gradiente.
Fig. 3.4. Cadena transportadora de electrones. Formacin del gradiente de protones que permite la sntesis de ATP.
ADP+ Pi ATP La fosforilacin El resultado final del transporte de un par de equivalentes reductores desde el NADH hasta el O2 es la salida de 3 pares de H+ (va a encontrar diferentes relaciones estequiomtricas en diferentes libros) con lo cual se crea un gradiente de concentracin de H+ entre el espacio intermembrana y la matriz, a travs de la membrana interna mitocondrial. Pero adems, se obtiene una diferencia de potencial entre el espacio intermembranoso (positivo) y la matriz (negativo), y una diferencia de pH. En este gradiente electroqumico se conserva una fraccin de la energa liberada por la oxidacin que es utilizable para que se realice la reaccin:
G +7,3 Kcal.
Esta reaccin es catalizada por la protena Fl de la membrana interna, componente del complejo FoF1 ATP sintetasa (Fig. 3.5). Se postula que los protones entran de nuevo a la matriz mitocondrial a travs de la protena FO y esto determinara un cambio conformacional de la protena F1, que permite la fosforilacin de F1 para formar F1P. sta cedera el fosfato al ADP para formar ATP y regresara a la conformacin original, para repetir el ciclo cuando pasa otro par de protones a travs de FO. Por lo tanto, se considera que 3 pares de H+ aportan suficiente energa para la sntesis de 3 ATP, 2 pares de H+ para 2 ATP y un par de H+ para un ATP.
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Es importante tener en mente que el proceso descrito sucede continuamente en las clulas: el transporte de electrones es muy rpido y los componentes de la cadena respiratoria son reducidos y reoxidados a gran velocidad. El gradiente de protones puede ser medido experimentalmente, pero "in vivo" probablemente sea casi imperceptible porque continuamente se utiliza para la sntesis de ATP.
Fig. 3.5: Estructura del Complejo FoF1 ATP sintetasa.
El transportador de ATP El ATP formado por F1 debe salir de la mitocondria para ser utilizado en el citosol. Se ha demostrado que existe una protena que realiza la traslocacin de ATP y ADP a travs de la membrana interna: por cada molcula de ATP que sale de la mitocondria entra una de ADP. Es interesante que esta molcula transportadora de ATP es la protena ms abundante de la membrana interna mitocondrial y representa aproximadamente el 12% de la protena total de las mitocondrias. Est constituida por dos subunidades y se ha encontrado que entre las dos conforman el sitio de unin de los sustratos. El ATP solamente se une por la cara interna de la membrana, mientras que el ATP slo lo hace por la cara externa. Se postula que esto se debe a que la protena tiene dos conformaciones diferentes: cuando se une al ATP hay un cambio conformacional que hace salir el ATP y permite la unin del ADP en la cara externa. Esto determina el
cambio a la conformacin original, el ADP es introducido a la mitocondria y nuevamente puede unirse un ATP para salir (Fig. 3.6). Este sistema de traslocacin puede ser inhibido por un producto vegetal diterpenoide llamado atractilsido. Se ha demostrado que la protena transportadora slo tiene afinidad por el atractilsido cuando hay ADP en el lado externo de la membrana; este inhibidor no se une a la protena por el lado interno, haya o no ADP en el medio.
Fig. 3.6: Transportador de ATP/ADP (translocasa)
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Produccin de equivalentes reductores para alimentar la cadena respiratoria La cadena respiratoria oxida a las coenzimas reducidas que son el producto de la oxidacin de molculas pequeas producidas por las diversas rutas metablicas. Ya se ha dicho que las macromolculas de la clula pueden ser degradadas a aminocidos, el glucgeno a glucosa 6-P, etc. Estas molculas ms pequeas todava contienen mucha energa y para aprovecharla la clula las degrada por diferentes vas metablicas a acetil-CoA (acetato activado). Este es el alimentador del Ciclo de Krebs.
La concentracin de ATP es elevada, mientras que la de ADP es baja. Fosfocreatina + ADP ATP + creatina G= -3,0 Kcal/mol. La reaccin se desplaza hacia la izquierda (en el sentido endergnico) debido al efecto de la concentracin de ATP sobre Keq. En las mitocondrias el consumo de O2 es bajo porque, entra otros factores: a. La concentracin de ADP en la matriz mitocondrial es baja y por lo tanto hay poco sustrato para la reaccin catalizada por F1: ADP + Pi ATP. b. El flujo de electrones a travs de la cadena respiratoria disminuye debido a que: i) El gradiente de H+ no es utilizado totalmente por la sntesis de ATP, lo cual hace que el bombeo de protones hacia el espacio intermembranoso disminuya. ii) La concentracin de coenzimas reducidas (NADH y FADH2) aumenta y por tanto la concentracin de coenzimas oxidadas disminuye. La baja concentracin de NAD+ disminuye la velocidad de las reacciones en que intervienen las deshidrogenasas que requieren esa coenzima. c. La isocitrato deshidrogenasa disminuye su actividad debido a que su activador (ADP) est en baja concentracin.
Regulacin
El papel del ATP en la regulacin del metabolismo. La posicin clave del ATP como eslabn entre los procesos catablicos y anablicos hace que la concentracin de ATP sea determinante en la activacin o inhibicin de las vas metablicas. En realidad, ms que la concentracin de ATP es la relacin ATP/ADP el factor importante, ya que al ser utilizado el ATP aumenta la concentracin de ADP, ya que se ha determinado que (ATP)(ADP) = K (constante) Por ejemplo, al considerar la situacin metablica del msculo en reposo se encuentra lo siguiente:
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d.
El transportador de ATP-ADP a travs de la membrana mitocondrial disminuye su actividad, ya que hay baja concentracin de ADP para ser intercambiado por el ATP intramitocondrial. La velocidad de conversin de la glucosa en piruvato y acetil-CoA disminuye porque la elevada concentracin de ATP inhibe a la enzima fosfofructoquinasa, que es la determinante de la velocidad total de la gliclisis (transformacin de glucosa en piruvato). Si el msculo pasa de la condicin de reposo a la contraccin, el consumo de O2 aumenta violentamente, debido a que los factores mencionados se encuentran ahora en la situacin inversa. En condiciones fisiolgicas la situacin es ms compleja todava porque intervienen factores hormonales (adrenalina) y otros. Sin embargo, en forma muy sucinta se puede decir que al aumentar la demanda de O2 por las mitocondrias musculares se ponen en juego mecanismos fisiolgicos para aumentar el aporte de O2 a los msculos: aumenta la velocidad y frecuencia de la respiracin, aumenta la frecuencia cardiaca, etc.
Inhibidores y desacoplantes de la fosforilacin oxidativa: El estudio experimental de los mecanismos de sntesis de ATP se ha apoyado con el uso de sustancias que pueden inhibir el proceso. Igualmente, es importante conocer cmo actan estas sustancias, ya que en la prctica clnica se encontraran pacientes afectados por algunas de ellas. Finalmente, algunas molculas que normalmente estn en el organismo, como la termogenina, ejercen su accin fisiolgica porque afectan el proceso de fosforilacin oxidativa.
e.
Inhibidores de la cadena del transporte electrnico: El cianuro, el monxido de carbono, el amital sdico, entre otros, son sustancias que se unen ireversiblemente a algunos de los componentes de los complejos que forman parte de la cadena de transporte electrnico, impidiendo su accin. Cuando esto ocurre, los electrones no pueden fluir libremente hasta el oxgeno y todos los componentes de la cadena que estn antes del complejo bloqueado, permanecen reducidos (porque no pueden soltar sus electrones) y todos los que estn despus, permanecen oxidados. Al no haber transporte de electrones (no hay consumo de oxgeno), no se forma el gradiente electroqumico de protones, por lo cual no hay paso de ellos por el complejo FoF1 ATP sintetasa y no habr sntesis de ATP. Entonces, los inhibidores de la cadena de
Todo ello hace que ms O2 sea tomado del aire y transportado por la hemoglobina desde los pulmones a los msculos, o ms propiamente a las mitocondrias musculares.
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transporte electrnico inhiben la sntesis de ATP y el consumo de oxgeno.
magnitud del gradiente que se ha formado. Esto trae como consecuencia que tambin se inhiba el transporte electrnico y, en consecuencia, el consumo de oxgeno. Muchos de los estudios experimentales que se hacen sobre el funcionamiento de la cadena de transporte de electrones, se realizan en lo que se llama preparaciones mitocondriales, que no son otra cosa, grosso modo, que el resultado de romper clulas en un buffer adecuado y someterlas a un proceso de centrifugacin que permite obtener diferentes fracciones que contienen, tambin, diferentes organelos. Por ejemplo, se puede medir el consumo de oxgeno de una preparacin mitocondrial, como resultado de varias manipulaciones experimentales. Recuerde que el consumo de oxgeno es una medida del funcionamiento de la cadena de transporte de electrones. La medicin del consumo de O2 se puede realizar con un electrodo de hidrgeno, que detecta la diferencia de potencial que se genera en las reacciones de oxidorreduccin. En la Fig. 3.7 se observa el grfico que puede obtenerse si se mide el consumo de oxgeno de una preparacin mitocondrial a la cual se aade ADP. El ADP, adems de ser un activador alostrico de varias enzimas del ciclo de Krebs, es uno de los sustratos para la sntesis del ATP, por lo que aumentar el consumo de oxgeno. Se puede ver en el grfico que desde una presin parcial de oxgeno mayor, se pasa a una menor a medida que transcurre el tiempo, ya que parte del oxgeno se consumi para formar agua en la cadena del transporte electrnico.
Desacoplantes: stas son sustancias que pueden transportar protones a travs de la membrana interna mitocondrial a favor de su gradiente de concentracin. El ejemplo clsico, el 2,4 dinitrofenol, es una molcula liposoluble que al instalarse en la membrana interna mitocondrial, puede unirse reversiblemente a protones, pasndolos desde el espacio intermembrana hacia la matriz mitocondrial. El efecto neto de esto es parecido a que se abriera un hueco en la membrana que deja escapar a los protones. Como no est interrumpido el flujo de electrones, ste continua por lo que se sigue consumiendo oxgeno; pero como no puede formarse el gradiente de protones, porque los que son bombeados al espacio intermembrana son retornados a la matriz por el 2,4 dinitrofenol y no pasan por el complejo FoF1 ATP sintetasa, no habr sntesis de ATP. Inhibidores de la FoF1 ATP sintetasa: La oligomicina puede unirse al componente Fo (de hecho de aqu toma su nombre, ya que es o y no cero) inhibiendo su accin. Esto impide que los protones pasen a travs de l y no se puede sintetizar ATP. Los protones se acumulan en el espacio intermembrana, lo que hace que la energa de oxidacin de los componentes de la cadena respiratoria, que es la utilizada para el bombeo de protones, llegue un momento en que ser insuficiente debido a la
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Fig. 3.7. Aumento del consumo de oxgeno en presencia de ADP en una preparacin mitocondrial.
4. Transduccin de seales. Mecanismo de accin de la adrenalina, el glucagon y la insulina.

Transduccin de seales
Las clulas se comunican entre s mediante la transmisin de seales, qumicas o elctricas, intercambiando informacin con el medio que las rodea, con las clulas adyacentes o con clulas que se hallan distantes. La sealizacin celular se refiere a cmo las clulas se comunican entre s y a los mecanismos mediante los cuales stas perciben diversas seales provenientes del medio externo y actan en funcin de ellas, generando una respuesta celular especfica. As, en los organismos multicelulares, la supervivencia depende de una elaborada red de comunicacin intercelular que coordina el crecimiento, la diferenciacin y el metabolismo de las clulas que constituyen los diversos tejidos y rganos. En ciertos casos, la seal puede viajar directamente de una clula a la siguiente, debido a que las clulas vecinas estn conectadas por uniones intercelulares comunicantes: adaptaciones especializadas de sus superficies colindantes que constituyen diminutos canales acuosos que conectan las clulas adyacentes. Estas uniones permiten que los iones inorgnicos, y pequeas molculas hidrosolubles, pasen directamente desde el citoplasma de una clula hasta el citoplasma de la otra, acoplando a las clulas elctrica y metablicamente.
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Sin embargo, en la mayor parte de los casos, las clulas se transmiten seales entre s liberando productos qumicos al medio extracelular. En estos casos, la sealizacin celular se puede dividir en tres categoras generales (Fig. 4.1):
Autocrina Paracrina Endocrina Por contacto clula-clula (molculas de adhesin)
Fig. 4.1. Tipos de sealizacin celular.
En la sealizacin autocrina, las clulas responden a seales que ellas mismas han segregado; en la sealizacin paracrina las clulas segregan molculas que difunden a las proximidades y slo afectan a clulas diana cercanas a ellas; y finalmente, en la sealizacin endocrina los mensajeros qumicos, denominadas hormonas, entran al torrente sanguneo y actan sobre clulas blanco que se encuentran alejadas de su
lugar de sntesis. Algunas de las molculas que actan como seales extracelulares pueden difundir libremente a travs de la membrana (liposolubles), mientras que el paso de otras molculas es restringido debido a su tamao, carga qumica o de solubilidad de la seal, (hidrosolubles). la las naturaleza molculas Independientemente
transmisoras interaccionan con las clulas
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diana mediante protenas especializadas denominadas receptores, que son especficos para una molcula concreta. Es decir, para que una clula diana responda a un mensajero qumico, debe poseer receptores especficos para esa molcula, estos receptores, dependiendo de si la molcula seal puede atravesar o no la membrana plasmtica de la clula, pueden encontrarse en la superficie externa de la membrana plasmtica o en el interior celular, bien sea en el citoplasma o en el ncleo. Atendiendo a estas caractersticas se pueden clasificar los receptores como: Los receptores superficiales son protenas integrales de membrana cuya unin con el ligando La responde a se tres criterios: por la especificidad, reversibilidad y alta afinidad. especificidad consigue entre complementariedad molecular
molcula seal y el receptor, en la que intervienen el mismo tipo de fuerzas dbiles (no covalentes) que tienen lugar en las interacciones enzima-sustrato y antgenoanticuerpo. Una vez que interaccionan con su ligando especfico, (cambio los receptores sufren que una alteracin en su estructura tridimensional conformacional) ocasiona cambios en la concentracin de ciertas molculas en el interior de las clulas (segundos mensajeros) que median la respuesta final a las modificaciones en el medio ambiente, detectadas a travs de los receptores.
a) Intracelulares: citoplasmticos y nucleares
b) Superficiales
Se distinguen cinco clases principales de receptores superficiales, cada uno de las cuales transduce las seales extracelulares de manera distinta (Fig. 4.2):
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a) Receptores protenas G
acoplados
actividad enzimtica d) Receptores que se asocian directamente a enzimas e) Receptores de adhesin
b) Receptores asociados a canales inicos c) Receptores que presentan
Fig. 4.2. Tipos de receptores superficiales.
La unin de las hormonas a estos receptores desencadena una cascada de eventos intracelulares, bien directamente, como en el caso de los receptores asociados a canales inicos o enzimas, o bien sea a travs de la activacin de segundos mensajeros. De estos subtipos de receptores, los ms comunes son aquellos acoplados a protenas G, los cuales poseen estructuras similares, presentndose presenta siete como una glicoprotena helicoidales formada por una sola cadena peptdica que regiones
transmembrana, en forma de serpentina. Este rasgo es comn a los ms de mil receptores que han sido identificados y que se acoplan a protenas G. Las regiones extracelulares median el reconocimiento entre el ligando y el receptor, mientras que las regiones intracelulares son responsables de la transduccin de los efectos hormonales. A pesar de que las seales biolgicas son muy diversas, las clulas poseen slo unos pocos mecanismos, muy conservados evolutivamente, para detectar las seales
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extracelulares y transducirlas a cambios intracelulares. cclico Entre los los ejemplos derivados de del segundos mensajeros se encuentran el AMP (AMPc), fosfatidilinositol bisfosfato: diacilglicerol
+2
entre las cuales cabe mencionar a la protena G, que activa a la adenilato ciclasa estimulando la sntesis de AMPc y a la protena Gi, que inhibe a la adenilato ciclasa y por lo tanto provoca un descenso de las concentraciones de AMPc. Las subunidades de ambos tipos de protenas G parecen ser idnticas, mientras que la subunidad es diferente. Entre las hormonas que estimulan
(DAG) e inositol trisfosfato (IP3), el GMP cclico (GMPc), y los iones calcio (Ca ).
Mecanismo de accin de la adrenalina y el glucagon

El AMPc (cido 35-adenlico) es un nucletido que se forma a partir del ATP por la accin cataltica de la adenilato ciclasa, una protena intrnseca de la membrana plasmtica, como respuesta a la interaccin hormona-receptor. La interaccin entre el receptor y la adenilato ciclasa es mediada por una protena G. Las protenas G son protenas heterotrimricas, que intercambian nucletidos de guanina y que estn compuestas por tres subunidades: alfa, beta y gamma. En su estado inactivo ests protenas enlazan GDP, pero cuando este nucletido es intercambiado por una molcula de GTP, la protena pasa a su estado activo. La subunidad une los nucletidos de guanina, posee actividad GTPasa y cuando la protena se activa -al enlazarse el GTP- se disocia del dmero . Las subunidades forman un complejo que ancla a la protena G a la membrana a travs de grupos prenilatados. Se han caracterizado diversas protenas G,
la sntesis del AMPc, se encuentran el glucagon y la adrenalina (esta ltima, a travs de los receptores -adrenrgicos). El glucagon es una hormona polipeptdica secretada por las clulas alfa de los islotes de Langerhans, en el pncreas, en respuesta a una disminucin de las concentraciones plasmticas de insulina. Esta hormona es secretada en la forma de un precursor, proglucagon, de mayor peso molecular. Una vez liberada al plasma, la hormona tiene una vida media relativamente corta y es degradada por el hgado rpidamente. Otras sustancias tales como aminocidos, cidos grasos y cuerpos cetnicos, adems de hormonas gastrointestinales y neurotransmisores, regulan su secrecin. Los efectos fisiolgicos del glucagon son en general opuestos a los de la insulina, promoviendo la movilizacin de fuentes potenciales de energa en forma de glucosa estimulando el proceso de glucogenlisis, y en forma de cidos grasos estimulando la liplisis. El glucagon es una poderosa hormona neoglucognica y cetognica. Esta hormona al unirse a sus receptores celulares
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en el hgado, su tejido efector ms importante, activa a la adenilato ciclasa. Como consecuencia de la unin de la hormona y del cambio conformacional resultante, el receptor interacciona con una protena G cercana. Al unirse la G al receptor, el GDP se disocia y se sustituye por GTP, separndose la subunidad del complejo . La subunidad s activada interacciona con la adenilato ciclasa y la estimula. La adenilato ciclasa cataliza entonces la sntesis de AMPc y PPi a partir de Mg -ATP, y las molculas de AMPc formadas difunden al citoplasma, donde se unen a una protena quinasa dependiente de AMPc (Protena quinasa A) y la activan. La protena quinasa A (PKA) es un tetrmero constituido por dos subunidades reguladoras y dos subunidades catalticas; al unirse el AMPc a las subunidades reguladoras, stas se separan de las subunidades catalticas dejando expuesto el sitio activo de las mismas. La protena quinasa A activa, fosforila protenas en residuos de serina y treonina y, de esta forma, altera la actividad cataltica de enzimas reguladoras clave. Ver (Fig. 4.3) La adenilato ciclasa permanece activa mientras que interacciona con s-GTP, pero una vez hidrolizado el GTP a GDP + Pi (por medio de la actividad GTPasa intrnseca de la
+2
subunidad ) s-GDP se separa de la adenilato ciclasa y se vuelve a asociar con el dmero . Por su parte, el AMPc es rpidamente hidrolizado a AMP lineal (5AMP), por la fosfodiesterasa, requerimiento seal debe cumplindose crtico de un as un segundo
mensajero; es decir, una vez generada, la terminarse rpidamente. Adems, las protenas fosforiladas por la actividad quinasa de la Protena quinasa A, son desfosforiladas por accin de protenas fosfatasas. Las identidad de las protenas diana afectadas por la cascada de sealizacin del AMPc depende del tejido blanco y por ende, del tipo celular. Adems, diversas hormonas pueden activar a la misma protena G, con lo cual, diferentes hormonas pueden producir el mismo efecto. Algunas hormonas inhiben la
actividad de la adenilato ciclasa. Estas molculas disminuyen la sntesis de AMPc debido a que sus receptores interaccionan con la protena Gi. Cuando Gi se activa, su subunidad i se disocia del complejo e impide la activacin de la adenilato ciclasa. Por ejemplo, la adrenalina puede activar a Gi actuando a travs de los receptores 2adrenrgicos.
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GLUCAGN ADRENALINA
SUBUNIDAD DE LA PROTENA G ACTIVA
GTP
RECEPTOR
ADENILATO CICLASA
PROTENA G INACTIVA
ATP
AMPc + PPi
P
PROTENA
R C C R R C
R C
PROTENA QUINASA A
Fig. 4.3. Cascada del AMPc
Mecanismo de accin de la insulina

El aumento de la concentracin de glucosa en la sangre, como consecuencia de la ingestin de alimentos, estimula la secrecin de insulina desde las clulas del pncreas, hormona que va a provocar una serie de cambios metablicos que caracterizan al estado postprandial. La glucosa penetra a la clula del pncreas por medio de receptores GLUT2, es fosforilada por la hexoquinasa IV (glucoquinasa), esto aumenta la velocidad de la gliclisis, del ciclo de Krebs y de la fosforilacin oxidativa. En conjunto estos cambios provocan un aumento de la concentracin del ATP. Este aumento del ATP, en este tipo celular, bloquea los canales de K+, lo cual reduce la salida del mismo de la clula y la despolarizacin de la membrana,
provocando la entrada de calcio que desencadena la liberacin de la insulina desde los grnulos que la contienen (Fig. 4.4). Una vez que la insulina sale de la clula pancretica, llega a la circulacin general, y en sus clulas blanco interacta con su receptor.
Fig. 4.4. Representacin del receptor de la insulina
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El receptor de la insulina est situado en la membrana plasmtica y est compuesto por dos subunidades alfa y dos beta unidas por enlaces disulfuro (Fig. 4.4). Este receptor posee actividad tirosina quinasa. El receptor activado es capaz de fosforilar a al menos 4 IRS (Insulin Receptor Substrate): IRS 1, IRS 2, IRS 3 e IRS 4. Estas protenas median los efectos de la insulina, pero el mecanismo detallado no se conoce bien. El IRS fosforilado se une a la subunidad reguladora de la PI3Q. Cuando sta se activa, fosforila al 4,5 fosfatidilinositol en la posicin 3, formndose el 3,4,5 fosfatidilinositol (Fig. 4.5), compuesto que puede ser reconocido por un dominio de la PDK (quinasa dependiente del PI 3,4,5, trifosfato). La PKD se activa al unirse al PI 3,4,5, trifosfato y entonces fosforila a la
protena quinasa B (PKB=Akt). La PKB fosforila a varias protenas, entre ellas a algunas fosfatasas, activndolas. Por un mecanismo desconocido, la activacin de la PKB provoca la translocacin del GLUT 4 a la membrana celular (Fig. 4.5). En ausencia de insulina, el transportador GLUT 4 se encuentra unido a pequeas vesculas en el citoplasma. La insulina provoca la fusin de estas vesculas con la membrana plasmtica. Este transportador permite la entrada de glucosa a algunos tejidos. Los tejidos que no dependen de la insulina poseen transportadores de glucosa diferentes a GLUT 4 y no dependen de un aporte de insulina para el transporte de glucosa. Muchos de los efectos de la insulina se deben a su capacidad de activar a la enzima fosfodiesterasa, la cual hidroliza el AMPc a AMP, disminuyendo as la concentracin intracelular de AMPc.
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Insulina
Glucosa
PIP2
PIP3
P IRS P SH2 PI3Q
PDK
PKB P ?
Otras protenas GLUT4
Fig. 4.5. Representacin esquemtica del mecanismo de accin de la insulina. Adems de la activacin de la PKB, la cual aparentemente media muchos de los efectos inmediatos de la insulina sobre el metabolismo, tambin activa una enorme cantidad de quinasas que afectan, entre otros procesos, la expresin gentica de la clula blanco.
5. Nociones generales de la digestin y absorcin de carbohidratos, lpidos y protenas.

Digestin y absorcin de Carbohidratos
La absorcin de los carbohidratos slo puede llevarse a cabo cuando stos se encuentran en forma de monosacridos, por lo cual, su digestin consiste, exclusivamente, en la degradacin de los oligo y polisacridos a sus monmeros constituyentes. El proceso se realiza de forma secuencial en el tracto intestinal, gracias a la accin de enzimas hidrolticas denominadas glucosidasas. Existen dos tipos de glucosidasas: -amilasas y oligosacaridasas. Las -amilasas se encuentran en la saliva y en la secrecin derivada del pncreas exocrino. Hidrolizan especficamente, enlaces glucosdicos (14), a excepcin de aquellos que se encuentren prximos a la terminacin de una cadena o cercanos a una ramificacin.
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Como resultado de la actividad de estas enzimas, el polisacrido se transforma en una mezcla de oligosacridos lineales, maltosa y maltotriosa; y ramificados, dextrinas (5-9 residuos de Glucosa cercanos a una ramificacin) En el borde de cepillo de las clulas de la mucosa intestinal se encuentran diversas oligosacaridasas, hidrolasas que actan sobre los oligosacridos. Una de dicha enzimas es la -glucosidasa, la cual cataliza la hidrlisis del enlace (14) de oligosacridos lineales, liberando molculas de Glucosa. Las dextrinas, por otra parte, son degradadas por la accin de la dextrinasa, una oligosacaridasa que hidroliza los enlaces (14) y (16) presentes en estas molculas. As, por la accin combinada de las -amilasas y de estas dos oligosacaridasas, -glucosidasa y dextrinasa, se lleva a cabo la completa degradacin del almidn a Glucosa. Adems de las oligosacaridasas nombradas, sobre el borde en cepillo de las clulas intestinales, existen otras que actan sobre otros oligosacridos. Entre estas enzimas estn la lactasa y la sacarasa, las cuales hidrolizan la lactosa y sacarosa, respectivamente. Como consecuencia de la accin de estas enzimas los disacridos son degradados a sus monosacridos constituyentes: Glucosa y galactosa para el caso de la lactosa y, Glucosa y fructosa para el caso de la sacarosa. Una vez que todos los oligo y polisacridos de la dieta son degradados por accin de las diversas glucosidasas, se obtiene una mezcla constituida, casi exclusivamente, por Glucosa, fructosa y galactosa.
Una vez degradados los carbohidratos, se lleva a cabo su absorcin proceso que involucra, el transporte del monosacrido a travs de la membrana luminal de la clula epitelial hasta el citoplasma y, posteriormente, su traslado a travs de la membrana basal o basolateral hacia el espacio intracelular y finalmente, a los capilares sanguneos. En este proceso participan al menos tres mecanismos distintos, los cuales sern descritos a continuacin. Producto de la hidrlisis de los oligo y polisacridos se genera en lumen del intestino una concentracin muy elevada de Glucosa. Dicha concentracin supera con creces la concentracin intracelular, lo cual favorece la difusin pasiva de Glucosa, hacia el citoplasma celular a travs de un transportador especfico. La fructosa y la manosa tambin son absorbidas por un sistema de difusin facilitada. A medida que avanza el proceso de absorcin, la diferencia de concentraciones entre el citoplasma y el lumen del intestino desaparece, por lo cual, el transporte de Glucosa debe ocurrir a travs de un sistema activo. Este sistema consiste de un cotransporte del tipo simporte de Glucosa y Na+. La fuerza impulsora del proceso es el gradiente de [Na+] a travs de la membrana de la clula epitelial. Dicho gradiente se mantiene como consecuencia de la actividad de la Na+-K+ ATPasa, que se encuentra funcionando en la membrana basal. Por este mismo mecanismo son absorbidas la galactosa y la fructosa. Sin importar cul sea el mecanismo de transporte de los monosacridos al
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citoplasma del enterocito, la concentracin intracelular de cada uno de ellos incrementa, llegando a ser superior que la concentracin en el espacio intracelular del lado vascular. La formacin de este gradiente, favorece el transporte de los monosacridos a la circulacin sangunea por transporte pasivo. Al entrar en la sangre, los monosacridos derivados de la digestin de los carbohidratos son transportados directamente al hgado a travs del sistema portal. De todos los carbohidratos ingeridos en la dieta, la Glucosa tiene un papel central en el metabolismo humano. Este monosacrido tiene un elevado potencial energtico liberando grandes cantidades de energa cuando es completamente oxidado a CO2 y H2O. Por otra parte, puede ser almacenada en forma de glucgeno, molcula osmticamente inactiva, a partir de la cual, puede liberarse rpidamente la Glucosa, cuando aumentan los requerimientos energticos del organismo. Adicionalmente, es un precursor verstil, capaz de suministrar una gran cantidad de intermediarios para reacciones biosintticas.
tubo digestivo, esta funcin emulsificadora de las sales biliares es muy importante para la digestin y absorcin de los lpidos. La emulsificacin de los lpidos es facilitada por los movimientos peristlticos del intestino. Los lpidos son dispersados en primer lugar en el estmago. Aunque se ha descrito una lipasa gstrica, su actividad es cuantitativamente importante solo en lactantes. La llegada de los lpidos al intestino provoca la liberacin de las hormonas secretina y colecistoquinina-pancreozimina por las clulas intestinales; estas hormonas, conducidas por la sangre, estimulan la liberacin del jugo pancretico desde el pncreas y de la bilis desde la vescula biliar. El jugo pancretico, adems de las enzimas que intervienen en la digestin de los carbohidratos, protenas y cidos nucleicos, el jugo pancretico contiene tres enzimas que catalizan la hidrlisis de los lpidos y una coenzima, la colipasa. Las enzimas lipolticas son: Lipasa pancretica Colesterol Esterasa Fosfolipasas
Digestin y absorcin de lpidos

La digestin de los lpidos ocurre principalmente en el intestino delgado, gracias a las enzimas lipolticas liberadas por el pncreas exocrino y a la accin emulsificadora de las sales biliares. Dado que las grasas son poco solubles en un medio acuoso como lo es el contenido de la luz del
Lipasa pancretica Es una enzima relativamente poco especfica que cataliza la hidrlisis de los TAG para formar cidos grasos libres y 2monoacilgliceroles. Esta enzima es la principal enzima digestiva de los TAG y solo hidroliza enlaces ster entre el glicerol y los cidos grasos en posicin alfa, de manera que libera cidos grasos libres (AGL) y 2-
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monoacilgliceroles. Adems, ataca solamente a los TAG que se encuentran en la superficie de una gota de grasa, es decir en la interfase agua-grasa, de manera que la velocidad de la reaccin es una funcin de la superficie ofrecida a la enzima para su accin, por lo que la emulsificacin de las grasas por los componentes de la bilis, es esencial para garantizar una velocidad de reaccin adecuada. La lipasa pancretica tiene un pH ptimo entre 8 y 9. Requiere tambin de la presencia de la colipasa, la cual es una protena que facilita el anclaje de la lipasa a la partcula de grasa que va a ser digerida y por lo tanto activa a la lipasa.
Colesterol Esterasa Tiene un pH ptimo de 6,6 a 8,5 y cataliza la hidrlisis de los steres de colesterol. Hidroliza el enlace formado entre un AG y el colesterol dando como productos AG y colesterol libre.
forma gracias a la dispersin de las grasas provocada por los movimientos peristlticos del intestino. Se forman estructuras llamadas micelas, en las cuales el centro est formado por los TAG, los steres de colesterol, as como la porcin hidrofbica de las sales biliares, los fosfolpidos y el colesterol. En la superficie de las micelas se ubican las partes hidroflicas de las molculas constitutivas de ellas. La superficie polar de la micela (que posee los grupos polares) queda hacia fuera facilitando la unin de la lipasa pancretica. La formacin de micelas favorece la accin de las enzimas lipolticas pancreticas. Las micelas formadas por los componentes de la bilis y los lpidos aun sin digerir, las llamaremos primarias. Absorcin de los lpidos La accin combinada de las enzimas lipolticas sobre las micelas primarias conduce a la formacin de colesterol libre, AGL, 2-monoacilgliceroles y glicerol. Este ltimo es libremente absorbido por la mucosa intestinal y pasa al hgado gracias a la circulacin portal. Los dems productos de la accin lipoltica no son absorbidos fcilmente debido a la presencia de una capa de agua relativamente inmvil adyacente a la mucosa intestinal. (Esto ocurre en todas las situaciones en las cuales soluciones acuosas circulan por un tubo, las capas de agua ms cercanas a la pared del tubo circulan mas lentamente). La presencia de esta capa de agua relativamente inmvil, de muy pocas molculas de espesor, constituye una barrera que limita la absorcin de los lpidos debido a las caractersticas apolares de stos, que dificultan su interaccin con el agua.
Fosfolipasas Existen dos tipos de fosfolipasas en el jugo pancretico: la fosfolipasa A1, que hidroliza el enlace entre el AG esterificado al carbono 1 del glicerol (en los glicerofosfolpidos) y la fosfolipasa A2, la cual hidroliza el enlace ster en la posicin 2 del glicerol liberando otro AG. Emulsificacin La bilis contiene, adems de los pigmentos biliares (bilirrubina), sales biliares, fosfolpidos y colesterol. Estos ltimos compuestos estabilizan la emulsin que se
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El obstculo de la capa inmvil de agua puede ser superado porque los productos de la digestin de los lpidos, a medida que se forman, quedan incorporados en las micelas de las que formaban parte. Este es un proceso al que hay que prestarle atencin. A medida que se van formando los 2monoacilgliceroles, los cidos grasos y los dems productos de la digestin de los lpidos (excepto el glicerol), van quedando incorporados a las micelas porque ellos tambin tienen carcter anfiptico, de manera que la micela original, que habamos llamado primaria, poco a poco va enriquecindose en productos de la digestin y por eso ahora la llamamos secundaria o mixta (Fig. 4). Lo que est pasando es que una micela originalmente formada solo por lpidos sin digerir, poco a poco se va transformando en una micela que contiene tambin gran parte de los productos de la accin de las enzimas sobre ella. La formacin de estas micelas mixtas tiene el efecto de impedir que los productos de la digestin de los lpidos se dispersen, quedando concentrados en una zona muy cercana a la mucosa, por lo cual se crea un gradiente de concentracin entre esta llamada fase micelar y el interior de las clulas, a travs de la capa de agua relativamente inmvil que ya se mencion y la membrana plasmtica de la porcin apical de las clulas intestinales. Este gradiente es mantenido adems, porque al entrar a la clula intestinal los AGL y los 2monoacilgliceroles se reesterifican para formar TAG. Parte del colesterol tambin es reesterificado, por lo que la concentracin de
AGL, colesterol y 2-monoacilgliceroles, como tales, es muy baja dentro de la clula. Como puede notarse las sales biliares no solo favorecen la digestin de las grasas sino que tambin incrementan la velocidad de absorcin. Todos los componentes de la micela mixta son absorbidos a nivel del duodeno y yeyuno, a excepcin de las sales biliares, las cuales se absorben en un 90% a nivel del leo terminal y vuelven al hgado, pudiendo ser reutilizadas (circulacin entero heptica de las sales biliares). El 10% restante no es reabsorbido y se excreta con las heces. Esta prdida representa una de las formas mas importante de eliminacin de colesterol del organismo. Los cidos grasos de cadena corta, por ser mucho ms solubles que los de cadena larga y mediana, pueden ser absorbidos libremente y no se incorporan a las micelas. La deficiencia o ausencia de sales biliares en el intestino, independientemente de la razn de ello, altera la digestin y la absorcin de los lpidos, los cuales al no ser digeridos se excretan en las heces y se produce esteatorrea. Como adems est alterada la absorcin de las vitaminas liposolubles (A, D, K, y E), pueden observarse signos clnicos de la deficiencia de estas vitaminas. Una vez que los productos de la digestin de los lpidos se encuentran en el interior de la clula intestinal, ocurre una serie de eventos que facilitarn su paso a la sangre. Estos eventos incluyen: la resntesis de los TAG (reesterificacin) y de los fosfolpidos y el ensamblaje de los lpidos absorbidos en complejos macromoleculares llamados 33
quilomicrones, los cuales constituyen la forma en la cual los lpidos de la dieta son transportados a los diferentes tejidos. A continuacin se describen ambos procesos.
excretadas de las clulas que las sintetizan en forma de zimgenos inactivos. Los factores que los activan son variables y no se explicarn aqu con detalle, pero en cada caso depende de ciertos eventos fisiolgicos o patolgicos bien conocidos. Proteasas intracelulares: hay varios tipos de proteasas intracelulares: Calpanas: son proteasas de elevado peso molecular y que son activadas por el Ca+2. Catepsinas: son las proteasas lisosomales, donde se encuentran con otros tipos de enzimas hidrolticas (lipasas, nucleasas, etc.). Estn involucradas en la digestin de partculas fagocitadas por las clulas, la destruccin de organelos celulares envejecidos y la autolisis celular. Proteasomas: son grandes proteasas cuya actividad depende del ATP.
Digestin y absorcin de protenas

Degradacin de las protenas endgenas Las protenas del cuerpo estn siendo degradadas y resintetizadas constantemente. Sin embargo algunas protenas tienen vida media larga y otras, mas corta (la vida media es el tiempo que tarda en degradarse la mitad de la cantidad total de una protena). En un hombre de 70 Kg., aproximadamente 400 gr. de protenas son degradadas y reemplazadas cada da. Las protenas son degradadas por enzimas proteolticas. Casi todas las enzimas proteolticas son producidas en estados inactivos, se encuentran confinadas en compartimientos separados (lisosomas) dentro de las clulas o requieren de la interaccin con iones o metabolitos para ser activadas. Este hecho representa una ventaja evidente para la supervivencia celular, si se toma en cuenta que todas las funciones celulares dependen de las protenas enzimticas que las catalizan. Proteasas extracelulares: las enzimas proteolticas digestivas y las enzimas que participan en los procesos de coagulacin de la sangre y la respuesta inflamatoria son ejemplos de proteasas extracelulares. Ellas comparten una caracterstica comn: son
La duracin de la vida de las protenas en el organismo es muy variable. Por ejemplo muchas de las protenas que son excretadas de las clulas (enzimas digestivas, hormonas polipeptdicas, etc) tienen una vida media corta. Por el contrario las protenas estructurales (colgeno y otras del tejido conectivo) tienen una vida media larga. Dentro de la clula tambin hay protenas de vida media muy corta y otras de vida media mas larga. Qu determina la vida media de una protena? Es una pregunta cuya respuesta hasta ahora es incompleta. Se conoce muy poco de los factores que regulan este intercambio de aa dentro de la clula,
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pero se sabe que la insulina estimula la utilizacin de los aa para la sntesis de protenas en algunos tejidos durante el periodo postprandial; as como durante el ayuno, la disminucin de la insulinemia parece ser el factor que determina el aumento de la proteolisis en algunos tejidos, entre los cuales se encuentra el msculo. Algunas de las seales que provocan que una protena sea degradada son: Ubiquitinacin: La unin de la ubiquitina, un pequeo polipptido de 76 aminocidos, a las protenas celulares constituye una seal para su destruccin la mayor parte de las veces, aunque la ubiquitinacin de algunas protenas tambin puede representar una seal para que sean transportadas a otros compartimientos celulares. En la figura 3 se representa simplificadamente el proceso de ubiquitinacin. Los factores que determinan que una protena sea ubiquitinada se conocen poco. Oxidacin de residuos de aa: Los ms sensibles a esta oxidacin son los residuos de lisina, arginina y prolina. Secuencias PEST: Son secuencias ricas en prolina (P), glutamato (E), serina (S) y treonina (T). Estas secuencias estn presentes en las protenas de vida media corta. Residuos N-terminales especficos: Se ha encontrado que la presencia de ciertos aminocidos en los extremos amino terminales de las protenas est asociado a una vida media corta.
Digestin de protenas Las protenas deben ser hidrolizadas a sus aa constituyentes para que estos puedan ser absorbidos, ya que en los adultos normales la mucosa intestinal es impermeable a ellas. La digestin de las protenas se lleva a cabo en el estmago y en el intestino, por accin de las enzimas proteolticas (peptidasas o proteasas). Estas son capaces de provocar la ruptura hidroltica de un enlace peptdico y se pueden clasificar en endopeptidasas y exopeptidasas. Las endopeptidasas hidrolizan enlaces peptdicos lejos de los extremos amino y carboxilo terminales. Las exopeptidasas hidrolizan el enlace peptdico mas cercano al extremo amino terminal (aminopeptidasas) o al extremo carboxilo terminal (carboxipeptidasas). La mayora de las enzimas proteolticas se secretan en una forma inactiva llamada zimgeno y su activacin se logra, extracelularmente, por la adquisicin de un nuevo estado conformacional como consecuencia de la hidrlisis parcial del zimgeno, es decir que las enzimas activas tienen un peso molecular menor que sus formas inactivas.
Digestin de las protenas en el estomago El pH del estomago es aproximadamente 2, debido a su contenido de HCl. Este bajo pH provoca la desnaturalizacin de las protenas cuando stas llegan al estomago, porque se pierde la estructura terciaria de ellas al
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romperse los puentes de hidrogeno que la mantiene. Esto hace que los pptidos se hagan ms sensibles a la accin de las enzimas proteolticas. La mucosa gstrica produce y secreta una peptidasa, la pepsina, la cual sale de la clula en forma inactiva, llamada pepsingeno, y es solo en la luz del estmago donde adquiere la capacidad de hidrolizar enlaces peptdicos. La gran concentracin de H+ en el estmago activa al pepsingeno porque provoca la separacin de un polipptido de 41 aa del zimgeno lo que ocasiona un cambio conformacional tal, que hace activa a la enzima. La pepsina formada puede, a su vez, actuar sobre otras molculas de pepsingeno, activndolas (autocatlisis). La pepsina es una endopeptidasa que hidroliza enlaces peptdicos donde el grupo amino es aportado por aa aromticos o di carboxlicos. El producto de la accin combinada del HCl y la pepsina en el estmago sobre las protenas de la dieta es la formacin de proteosas y peptonas, nombres dados a polipptidos de gran tamao, los cuales pasan al intestino donde se completa la digestin.
llegan al estmago.
intestino,
procedentes
del
Las clulas de la mucosa intestinal secretan enteroquinasa o enteropeptidasa, una enzima capaz de producir la hidrlisis parcial del tripsingeno para convertirlo es su forma activa, la tripsina. Cuando se forma la tripsina, esta puede catalizar la activacin de los otros zimgenos para formar quimiotripsina y carboxipeptidasa. Por otra parte la tripsina tambin puede activar autocatalticamente al tripsingeno. La tripsina y la quimiotripsina son endopeptidasas. La tripsina es especifica para enlaces peptdicos donde el grupo carboxilo es aportado por aa bsicos y la quimiotripsina acta cuando el aa que aporta el grupo carboxilo al enlace peptdico es aromtico. La carboxipeptidasa hidroliza los enlaces peptdicos mas cercanos al extremo carboxilo terminal y es, por lo tanto, una exopeptidasa. Otras peptidasas, que tambin intervienen en la digestin de las protenas, son las aminopeptidasas, las cuales son exopeptidasas que atacan a los polipptidos por el extremo amino terminal y las dipeptidasas que hidrolizan dipptidos. Las aminopeptidasas y las dipeptidasas son secretadas por la mucosa intestinal. La accin combinada de las proteasas libera aa que son absorbidos por la mucosa intestinal.
Digestin intestinal de las protenas A la luz del intestino llegan, junto con el jugo pancretico, los precursores inactivos de varias enzimas proteolticas: tripsingeno, quimiotripsingeno, y procarboxipeptidasa que al activarse, catalizan la degradacin de los productos de la accin de la pepsina que
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Absorcin de los AA El transporte de aa desde la luz del intestino hasta el interior de la clula de la mucosa, a travs de la membrana plasmtica, es mediado por cotransportadores que tambin unen Na+. Existen transportadores con especificidad para aa neutros, bsicos, cidos, iminocidos y un tipo que une -alanina y taurina. Es un sistema de transporte muy parecido al de la glucosa en estas mismas clulas. Desde la clula intestinal, los aa pasan a los capilares portales por difusin.
Por medio de la circulacin portal llegan al hgado y luego a la circulacin general a travs de las venas suprahepticas. El aumento de la concentracin sangunea de aa durante el periodo postprandial, al igual que un aumento de la glicemia, estimula la secrecin de insulina. Esta hormona estimula la incorporacin de aa al tejido adiposo, al msculo y a otros tejidos. Al llegar los aa a las clulas, ingresan al llamado pool de aa, que es la cantidad de aa libres que se encuentran en una clula en un momento determinado.
6. Regulacin de la gliclisis. PFK II

En situacin post-prandial la insulina es liberada por las clulas beta del pncreas, esta provoca mediante una cascada de eventos la fosforilacin y activacin de las enzimas fosfatasas las cuales desfosforilan y activan a las enzimas fosfofructoquinasa I y II. La fosfofructoquinasa II al estar activa, cataliza la formacin de fructosa 2,6 difosfato, activando alostricamente a la fosfofructoquinasa I, e inhibiendo a la fructosa 1,6 difosfatasa. La fosfofructoquinasa I es inhibida por las altas concentraciones de ATP, pero es activada por las altas concentraciones de AMP. La insulina provoca la translocacin de los transportadores GLUT 4 desde las vesculas intracelulares a la membrana plasmtica ocasionando la entrada de glucosa al msculo y al tejido adiposo. El glucagon, secretado durante el ayuno por las clulas alfa del pncreas provoca una serie de eventos intracelulares que conducen a la fosforilacin de las enzimas glucoliticas, inactivndolas.
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7. Regulacin coordinada de la glucogenognesis y de la glucogenolisis.
La glucogenognesis se estimula cuando se eleva la disponibilidad de sustrato (glucosa/glucosa-6-fosfato) y energa. La glucogenlisis se incrementa cuando las reservas disponibles de energa glucosa son bajas. Durante la contraccin muscular se promueve la descarga de Ca++ que se une a la calmodulina y activa a la fosforilasa quinasa, la cual fosforila y activa a la glucgeno fosforilasa, promoviendo la glucogenlisis, las altas concentraciones de AMP tambin activan a la glucgeno fosforilasa.
El glucagon/adrenalina promueven una cascada de eventos que conducen a la fosforilacin de la glucgeno fosforilasa activndola, y fosforilando e inhibiendo a la glucgeno sintasa, disminuyendo as la tasa de glucogenognesis. La insulina mediante una cascada de eventos promueve la desfosforilacin de la glucgeno fosforilasa inactivndola, y la de la glucgeno sintasa activndola y promoviendo la va de la glucogenognesis.
8. Regulacin de la neoglucognesis. Piruvato carboxilasa y fructosa 1,6 bisfosfato fosfatasa.

Durante el ayuno disminuye la concentracin de fructosa 2,6 difosfato lo que ocasiona la activacin de la fructosa 1,6 difosfatasa e inhibicin de la fosfofructoquinasa I. Se inhibe la piruvato quinasa por fosforilacin, disminuyendo la conversin de fosfoenolpiruvato en piruvato, canalizando la reaccin hacia la sntesis de glucosa. El glucagon aumenta la transcripcin del gen que codifica a la fosfoenolpiruvato carboxicinasa lo que aumenta la actividad de esta enzima, la disponibilidad de precursores neoglucognicos como el oxalacetato, y
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otros intermediarios neoglucognica.
favorecen
la
va
La neoglucognesis es promovida por la activacin alostrica de la piruvato carboxilasa debido a la disponibilidad de
Acetil-Coa proveniente de la liplisis y la Beta-oxidacin de cidos grasos. As mismo las altas concentraciones de AMP activan a la fosfofructoquinasa I e inhiben a la fructosa 1,6 difosfatasa, sucede lo contrario cuando las concentraciones de ATP son elevadas.
9. Metabolismo de las lipoprotenas. Catabolismo de VLDL, LDL y QM.

Catabolismo de los quilomicrones y de las VLDL
El catabolismo de los QM y las VLDL tiene muchas caractersticas similares. Ni los QM ni las VLDL contienen apoprotenas del tipo C y E cuando estn en forma de "partculas nacientes", es decir molculas recin sintetizadas, pero una vez que ingresan a la circulacin general, captan estas apoprotenas desde las HDL y se convierten en partculas "maduras". menciona juntos el catabolismo de los QM y VLDL. Esto es as porque ambas lipoprotenas, aunque se forman en tejidos y como respuesta a condiciones bioqumicas diferentes, son catabolizadas de una forma similar.
Tanto los QM como las VLDL son degradados por la accin combinada de las enzimas LPL y L-CAT; ambas actan simultneamente sobre ellas. Sin embargo la descripcin de la accin de estas enzimas sobre estas lipoprotenas se describir por separado y luego se dar una visin integrada. La LPL acta sobre los TAG y la LCAT sobre el colesterol. Igualmente se notar en el texto que frecuentemente se
El paso inicial del catabolismo de los QM y VLDL es la transferencia de apoprotenas de tipo apoCII desde las HDL, cuando ellas eventualmente chocan entre s en el ambiente de la luz de un vaso sanguneo. Esta transferencia hace que los QM y las VLDL puedan ser sustrato de la LPL ubicada en el endotelio capilar producindose as la hidrlisis de los TAG. A medida que disminuye el contenido de TAG en los QM y las VLDL por accin de la LPL, aumenta relativamente su contenido en colesterol que puede ser esterificado por accin de la LCAT. Parte de los steres de colesterol formados por la accin de la LCAT son transferidos a los QM y VLDL que estn siendo catabolizadas y, parte puede permanecer en las HDL.
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Esta accin progresiva y coordinada de la LPL y la LCAT sobre los QM y las VLDL da origen a los remanentes de Quilomicrn y a las IDL (o lipoprotenas de densidad intermedia, tambin llamadas remanentes de VLDL), respectivamente. El trmino "remanente" se aplica a aquellas partculas de lipoprotena cuyos lpidos han sido parcialmente degradados, solo bajo esta forma pueden ser reconocidas por receptores especficos. A medida que progresa la degradacin de los QM y VLDL, regresan las apoCII desde stas a las HDL. Aparentemente esto es causado porque las apoCII tienen mucha afinidad por las lipoprotenas ricas en TAG, por lo que a medida que progresa la liplisis catalizada por la LPL, y cambia la composicin de lpidos en esas lipoprotenas, la apoCII regresa a las HDL. La apoB no es intercambiable y permanece como un componente estructural obligatorio de las lipoprotenas ricas en TAG durante su catabolismo.
Las VLDL son degradadas en forma similar a los QM por medio de la LPL y la LCAT y su catabolismo da lugar a las IDL que son lipoprotenas de vida media ms corta y cuya formacin da lugar a las LDL. Las IDL van progresivamente enriquecindose en steres de colesterol aportados por la HDL y van perdiendo todas las apoprotenas menos la apoB y la apoE. Parte de las IDL se convierten en LDL que son lipoprotenas muy ricas en colesterol. Se ha establecido que en los humanos, una porcin de las IDL es directamente captada por el hgado a travs de receptores especficos para remanentes llamados.
La apoE, al parecer permanece unida a las partculas remanentes y es el ligando clave para el catabolismo de los remanentes de QM y las IDL. Los remanentes de QM son captados por las clulas hepticas a travs de receptores especficos que reconocen la apoB y la apoE llamados LSR (del ingls: lipolisis stimulated receptor). Los componentes de los remanentes son endocitados por las clulas hepticas y completamente degradados. En el hgado estos lpidos pueden tener varios destinos. Aproximadamente, luego de unas tres horas despus de una comida con grasas, no quedan QM circulando en la sangre.
La hidrlisis de los TAG restantes en las IDL es efectuada a travs de la lipasa heptica, presente en el endotelio sinusoidal en el espacio de Disse y que est asociada a glicosaminoglicanos. Esta lipasa, a diferencia de la LPL, hidroliza TAG y fosfolpidos de la IDL (y, como veremos luego, tambin a lpidos asociados a la HDL), liberando los cidos grasos de los lpidos que an permanecen unidos a los remanentes. Las LDL son finalmente captadas por el hgado y otros tejidos a travs de un receptor especfico para la LDL.
Catabolismo de las LDL y su relacin con el Metabolismo del colesterol

Las LDL derivan del catabolismo de las VLDL como se ha descrito anteriormente. Los
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fibroblastos, gnadas, clulas musculares, hepatocitos y otros tejidos poseen receptores para las LDL que reconocen a las apoprotenas apoB-100 y apoE, pero no reconocen a la apoB-48. Los receptores son glicoprotenas que atraviesan la membrana y tiene varios dominios. La Fig 14 representa la captacin de las LDL a travs de su receptor. La protena receptora se ubica en la cara citoslica de las membranas en invaginaciones u hoyos recubiertos por la protena clatrina. Una vez que la LDL se enlaza con su receptor, el complejo es endocitado en vesculas. Estas vesculas llamadas endosomas se fusionan con los lisosomas, y las enzimas lisosomales hidrolizan las apoprotenas a sus aminocidos constituyentes, los TAG a glicerol y AG y los steres de colesterol se transforman en colesterol libre, sin embargo, los receptores no son degradados sino que se reciclan y reaparecen en la superficie celular.
Fig. 9.1. Metabolismo de las lipoprotenas
Las clulas regulan en forma estricta su contenido de colesterol a travs de varios mecanismos dirigidos a controlar su sntesis, su captacin a travs de la LDL, su esterificacin y la utilizacin del colesterol para procesos de sntesis. El colesterol que llega a las clulas regula su metabolismo porque produce los siguientes efectos:
El colesterol que por esta va ingresa a las clulas puede ser reesterificado por accin de la enzima ACAT (Nota: la Acil colesterol acil transferasa o ACAT no debe ser confundida con la LCAT. La ACAT es una enzima intracelular y no plasmtica, que utiliza acil-CoA para esterificar al colesterol en vez de la lecitina). La accin de la ACAT produce steres de colesterol que se acumulan en las clulas.
1.- Inhibe alostricamente la actividad de la enzima hidroximetil glutaril-CoA reductasa (HMG-CoA reductasa), la principal enzima reguladora de la colesterognesis. Si el contenido celular de colesterol se eleva debido a un mayor aporte dietario, la enzima es inhibida. Si por el contrario, el aporte dietario es bajo, la enzima se activa y el colesterol es sintetizado endgenamente. Por lo tanto, la tasa de sntesis de colesterol est relacionada en forma inversa con la cantidad de colesterol presente en la dieta. 2.- La captacin de la LDL por el hgado y otros tipos de tejido, es regulada por la actividad del receptor para LDL. Si la
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concentracin celular de colesterol es alta, se inhibe la expresin del gene que codifica para el receptor, mientras que si la concentracin de colesterol es baja, se estimula la sntesis del receptor y esto estimula la captacin de LDL. 3.- El colesterol estimula la actividad de la enzima ACAT, por lo cual el que no sea utilizado por las clulas para la sntesis de hormonas esteroides (gnadas), cidos biliares, lipoprotenas (hgado) y en general en todas las clulas para la formacin de membranas, puede ser almacenado en forma de steres.
Los pasos del transporte inverso del colesterol son los siguientes: a) Interaccin de las HDL con un receptor para apoA1, lo cual estimula (por un mecanismo an desconocido) la transferencia de colesterol libre intracelular a la membrana plasmtica, donde es captado por la HDL. b) Captacin de colesterol por las HDL, lo cual hace que se hidrolicen los steres de colesterol para formar mas colesterol libre en la clula, lo que produce el efecto de una disminucin del contenido total de colesterol, tanto libre como esterificado. c) Esterificacin del colesterol recin incorporado a las HDL por la CLAT. d) Transferencia de los steres de colesterol formados a las lipoprotenas que poseen apoB (VLDL, IDL y LDL), por medio de la protena transportadora de steres de colesterol: CETP (del ingls: cholesteryl ester transfer protein). Los steres de colesterol son intercambiados por TAG lo que ocasiona que las HDL se enriquezcan en stos ltimos. e) Captacin por el hgado o por tejidos esteroidognicos de las LDL.
Las HDL y el transporte inverso del colesterol

El transporte inverso del colesterol (en algunos libros aparece como transporte reverso del colesterol) es el proceso que consiste en la captacin de colesterol en los tejidos perifricos por las HDL y su transporte al hgado y a tejidos esteroidognicos. La importancia de este transporte radica en que contribuye a disminuir la cantidad de colesterol en tejidos donde puede contribuir a la formacin de placas de ateroma. El efecto beneficioso de la participacin de las HDL en este transporte inverso de colesterol es el origen de la expresin colesterol bueno, que sera el unido a ellas, en contraste con el colesterol malo, que sera el unido a las LDL.
Esta captacin de colesterol, como parte de su transporte reverso, contribuye a que las HDL discoidales, nacientes se conviertan en HDL maduras. El transporte reverso de colesterol es muy activo de modo que, en pocas horas, los steres de colesterol asociados a las HDL son rpidamente reemplazados por molculas nuevas.
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Cuando las clulas que transfieren colesterol a las HDL, en este proceso inverso, son los macrfagos que se encuentran en una lesin pre-arterosclertica, contribuyen a evitar que se transformen en clulas espumosas. De all el efecto protector contra la arterosclerosis de las HDL.
Catabolismo de las HDL

Como se ha descrito las HDL participan en el catabolismo de las lipoprotenas ricas en TAG, proceso en el cual ellas mismas son sometidas a una serie de transformaciones que tienen como resultado su enriquecimiento en steres de colesterol y TAG. Actualmente se cree que la HDL-ricas en TAG son degradadas en el hgado. No se
conoce bien como ocurre este proceso, pero se ha sugerido la participacin de un receptor especfico (que an no se ha encontrado) o a travs de la lipasa heptica, la cual hidroliza los fosfolpidos y TAG asociados a la HDL. Se ha demostrado la existencia de otras protenas asociadas a la HDL que catalizan procesos de intercambio de fosfolpidos y TAG entre las lipoprotenas y posiblemente entre las lipoprotenas y las membranas celulares. En todos los casos conocidos, la protena transferidora se encuentra asociada con la HDL. El lpido a ser transferido se une a la protena, la cual se disocia de la HDL. Luego este complejo interacta con la lipoprotena receptora intercambiando los lpidos cuando se ponen en contacto ambas protenas en la circulacin.
10. Regulacin de la lipognesis y reesterificacin. Papel de la insulina y el citrato en la regulacin de la acetil-CoA carboxilasa.
Los TAG formados en el tejido adiposo son almacenados es ese tejido a medida que se sintetizan, mientras que los TAG sintetizados en el hgado abandonan este tejido unidos a los dems componentes de las VLDL. Estas lipoprotenas pueden aportar AG al tejido adiposo, al msculo, etc. (Nota: recuerde que esto depende de la actividad de la lipoprotena lipasa que tambin puede ser regulada por la insulina). La insulina tiene un efecto estimulador de la lipognesis tanto en el hgado como en le tejido adiposo. En este ltimo, la Insulina estimula el transporte de glucosa a la clula a travs de los transportadores GLUT 4, lo que promueve la gliclisis y por lo tanto aumenta la disponibilidad de glicerol-P para la reesterificacin. En el hgado la insulina aumenta la actividad de la piruvato deshidrogenasa y de la acetil-CoA carboxilasa, lo cual aumenta la
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disponibilidad de precursores para la sntesis de AG. La piruvato deshidrogenasa existe en 2 formas interconvertibles por fosforilacindesfosforilacin. La desfosforilacin de la enzima la hace ms activa, efecto que es provocado por la insulina. El aumento de la actividad de esta enzima incrementa el nivel de acetil-CoA intramitocondrial, que es utilizado, en el periodo absortivo para la sntesis de cidos grasos. La acetil-CoA carboxilasa tambin es activada por la insulina por un mecanismo de desfosforilacin, lo cual la hace ms sensible al efecto activador del citrato. La activacin de esta enzima produce un aumento del malonil-CoA, que es un inhibidor alostrico de la carnitin-acil transferasa, enzima limitante de la oxidacin de los cidos grasos. Es decir que la insulina al estimular a la acetil-CoA carboxilasa, provocando un aumento del malonil-CoA, indirectamente, impide que loa cidos grasos que se estn sintetizando sean degradados y, en cambio puedan ser usados para formar TAG. La acetil-CoA carboxilasa puede existir como un protmero, formado por 2 subunidades, el cual tiene una actividad muy baja en comparacin con el polmero, de mayor actividad. El citrato aumenta la actividad de la enzima porque causa su polimerizacin, mientras que los acil-CoA de cadena larga favorecen la disociacin del polmero, disminuyendo su actividad. De
esta manera al aumentar el nivel de citrato en el citoplasma, se estimula la sntesis de AG. El aumento de la sntesis de AG en el hgado y, concomitantemente, la de TAG, provoca que stos sean exportados desde este tejido en forma de VLDL. Adicionalmente existen mecanismos que operan a largo plazo (ms de tres das) que aumentan la cantidad de enzimas tales como: la piruvato deshidrogenasa, acetil-CoA carboxilasa, sintetasa de cidos grasos y otras enzimas relacionadas con el proceso lipognico, lo cual permite aumentar ms la tasa de transformacin de los carbohidratos en grasa. Estudios recientes parecen apoyar la nocin de que la lipognesis es un proceso cuantitativamente poco importante en humanos. La mayor parte de la grasa que almacenamos proviene de la dieta, siendo el proceso regulador ms importante del almacenamiento de grasa la reesterificacin intracelular de AG. La ingestin de carbohidratos favorecera el almacenamiento de grasa, porque provee una fuente de energa que provocara un ahorro de los lpidos endgenos y, por otra parte, proveera el precursor del glicerol-P para la reesterificacin de los cidos grasos en el tejido adiposo. Solo en situaciones de muy alta ingesta de carbohidratos la lipognesis tendra alguna importancia cuantitativa.
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Fig. 11.1. Visin general de las reacciones que generan intermediarios metablicos para la lipognesis
11. Regulacin de la oxidacin de los cidos grasos. Papel del malonil-CoA.

La velocidad de la beta-oxidacin en el hgado depende, por una parte, de la cantidad de AG que llegue a ste, proveniente del tejido adiposo y, por otra parte, de la cantidad de esos AG que penetre a la mitocondria. La enzima acil-carnitina transferasa I es ms activa cuando la concentracin de malonil-CoA dentro de la clula es baja, lo
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cual es una condicin que se presenta en el ayuno. La formacin de malonil-CoA es catalizada por la acetil-CoA carboxilasa, cuya actividad es inhibida por el glucagon. De manera que el glucagon, durante el ayuno, favorece la beta-oxidacin al promover la disminucin del nivel intracelular de malonil-CoA. (Fig. 12.1)
Fig. 12.1. Papel de la carnitina en la transferencia de cidos grasos al interior de las mitocondrias.
12. Regulacin de la liplisis. Lipasa sensible a hormonas.

La liplisis en el tejido adiposo es inhibida por la insulina y activada por las catecolaminas (adrenalina y noradrenalina), la hormona del crecimiento, los glucocorticoides y la tiroxina, entre otros. Durante el ayuno, el ejercicio o el stress, la adrenalina y la noradrenalina ejercen su efecto a travs de receptores adrenrgicos en el tejido adiposo, incrementando la liplisis a travs de la activacin de la lipasa sensible a hormonas (LSH). Las catecolaminas (adrenalina y noradrenalina) interactan con receptores en la superficie del adipocito y provocan la activacin de la adenilciclasa que se encuentra en la membrana. Esta enzima cataliza la formacin de AMPc a partir de ATP. El AMPc activa a una proteinquinasa A (PKA) que a su vez cataliza la fosforilacin de la LSH, hacindola activa. Igualmente, la PKA fosforila a las perilipinas, unas protenas que se encuentran rodeando las gotas de grasa en los adipocitos, que es la forma en la cual se encuentran los TAG en este tejido. La fosforilacin de las perilipinas permite que la LSH pueda anclarse en la gota de grasa y catalizar la hidrlisis de los TAG. Cuando cesa el ayuno, se produce la insulina, que disminuye la concentracin intracelular de AMPc y produce la desfosforilacin de la LSH, la cual se hace 46
inactiva. En resumen las catecolaminas estimulan la liplisis durante el ayuno y la insulina la inhibe durante la situacin postprandial. Ver Fig. 13.1.
Figura 13.1. Activacin de la liplisis en el tejido adiposo durante el ayuno.
13. Regulacin de la sntesis de cuerpos cetnicos.

El acetil-CoA intramitocondrial puede entrar al ciclo de Krebs, combinndose con oxalacetato; usarse para la sntesis de cuerpos cetnicos o para la sntesis de colesterol. Durante el ayuno gran parte de este acetil-CoA se deriva hacia la formacin de cuerpos cetnicos. Algunos autores sostienen que el aumento de la utilizacin de oxalacetato para la neoglucognesis es el hecho que condiciona el aumento de la cetognesis, puesto que la baja disponibilidad de oxalacetato no permitir la entrada del acetil-CoA al ciclo de Krebs. Pero dado que el oxalacetato solo se necesita a una concentracin muy baja (cataltica) para hacer funcionar al ciclo de Krebs y que, durante el ayuno, esta activada la piruvato carboxilasa, que cataliza la formacin de oxalacetato a partir de piruvato dentro de la mitocondria, es difcil hablar de dficit de un metabolito cuya sntesis est incrementada. Parece ms razonable aceptar que lo que est disminuida es la utilizacin del oxalacetato para formar citrato. Efectivamente, la citrato sintetasa, que cataliza la formacin de citrato a partir de oxalacetato y acetilCoA, se inhibe en el hgado por el ATP,
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cuya concentracin aumenta en la mitocondria porque la elevacin del nivel intramitocondrial de acetil-CoA inhibe el transportador ATP/ADP. Por otra parte un aumento de la concentracin intramitocondrial de + NADH + H , producto de la betaoxidacin, podr desplazar la reaccin hacia la formacin de malato, el cual podr entonces ser transportado hacia el exterior de la mitocondria para ser utilizado en el citosol (neoglucognesis).
oxalacetato + NADH + H
NAD + malato
Probablemente es la accin combinada de ambos factores lo que provoque en definitiva la disminucin de la utilizacin del acetil-CoA en el ciclo de Krebs y su derivacin hacia la formacin de cuerpos cetnicos.
14. Regulacin del metabolismo de los aminocidos. Ciclo de la Urea.

La mayor parte del nitrgeno amnico que no es utilizado en el organismo es excretado por la orina en forma de urea. El resto se excreta, tambin por la orina, pero en forma de sales de amonio. El fumarato que se forma en el ciclo de la urea puede dar origen a oxalacetato, que, dependiendo de la situacin fisiolgica, puede servir de sustrato para la neoglucognesis, entrar al ciclo de Krebs o regenerar aspartato para la sntesis de urea. Ver Fig. 15.1. La velocidad de la sntesis de urea depende de la disponibilidad de NH4+ y aspartato, as como de la actividad de la carbamilfosfato sintetasa, enzima que se considera como la principal reguladora del ciclo. Esta enzima es activada alostricarnente por el N acetil-glutamato que se forma a partir de glutamato y acetilCoA:
Acetil-CoA + glutamato
N-acetil-glutamato
N-acetil-glutamatosintetasa
Cuando aumenta la llegada de aa al hgado, ya sea que provengan de la dieta durante el periodo postprandial, o de la degradacin de protenas endgenas durante el ayuno, se activa la N-acetilglutamato sintetasa y aumenta la sntesis de N-acetil-glutamato y, por lo tanto la actividad de la carbamil-fosfato sintetasa, aumentando la velocidad del ciclo.
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Fig.13.1. Ciclo de la urea
49
15. Integracin metablica durante la situacin postprandial y el ayuno. Hormonas, tejidos, enzimas activas e inactivas.
La insulina es una hormona liberada por las clulas Beta del pncreas, su secrecin es estimulada por el aumento de la concentracin de glucosa durante el periodo postprandial, una vez liberada es captada por receptores especficos ubicados en las membranas de las clulas, dicha hormona provoca una serie de eventos intracelulares que provocan finalmente: la fosforilacin y activacin de las enzimas fosfatasas, y la translocacin de los transportadores GLUT 4 de las vesculas intracelulares a la superficie de la membrana plasmtica. Las enzimas fosfatasas activadas provocan la desfosforilacin de una serie de enzimas involucradas en las vas metablicas principales, sta desfosforilacin puede activar o desactivar las enzimas involucradas segn sea el caso, provocando el aumento de la velocidad de la va involucrada o la inhibicin o el descenso de la actividad metablica. La translocacin de los transportadores GLUT 4 provoca la entrada de glucosa a las clulas adiposas y musculares, aumentando la tasa de glucolisis, es por esto que defectos en la secrecin de insulina, o resistencia a la hormona, provocan alteraciones metablicas como la hiperglucemia constante dando origen a padecimientos como la diabetes. El glucagon es una hormona liberada por las clulas alfa del pncreas, su secrecin es estimulada durante el ayuno, una vez liberada es captada por receptores especficos, posteriormente genera una cascada de eventos intracelulares que conducen a la produccin de AMPc el cual se fija a las unidades reguladoras de la enzima PKA, provocando la liberacin de sus dos subunidades reguladoras y de sus dos subunidades catalticas, activando la actividad de la enzima PKA. Una vez activada la PKA, se encarga de la fosforilacin de otras enzimas involucradas en vas metablicas importantes, provocando o la activacin o la inhibicin de dichas enzimas segn sea el caso, aumentando o disminuyendo la velocidad de la va metablica involucrada; el glucagon por producir el efecto contrario a la insulina, se considera un antagonista de la misma y viceversa. A continuacin, los efectos que producen dichas hormonas en los diferentes tejidos:
En el Tejido Adiposo
Insulina:
1. Promueve la gluclisis, por desfosforilacin de las enzimas glucoliticas. 2. Debido a la actividad glucoltica, aumenta la disponibilidad de Glicerol-P para la reesterificacin de TAG. 3. Estimula el transporte de glucosa a la clula a travs de los transportadores GLUT 4 promoviendo la gluclisis.
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Glucagon:
1. Estimula la liplisis, ya que por accin de la enzima PKA activada se fosforila la lipasa sensible a hormonas (LSH) En el Tejido Muscular
Insulina:
1. Promueve la gluclisis, por desfosforilacin de las enzimas glucoliticas. 2. Estimula la glucogenognesis por desfosforilacin y activacin de la enzima glucgeno sintasa. 3. Activa la actividad de las enzimas piruvato deshidrogenasa y Acetil-CoA carboxilasa aumentando la disponibilidad de precursores para la lipognesis.
Glucagon:
1. Promueve la gluclisis, por desfosforilacin de las enzimas glucoliticas. 2. Estimula el transporte de glucosa a la clula a travs de los transportadores GLUT 4 promoviendo la gluclisis. 3. Estimula la glucogenognesis por desfosforilacin y activacin de la enzima glucgeno sintasa.
Glucagon:
1. Estimula la glucogenlisis, por fosforilacin y activacin de la enzima glucgeno fosforilasa. En el Tejido Heptico
Insulina:
1. Estimula la glucogenlisis, por fosforilacin y activacin de la enzima glucgeno fosforilasa 2. Estimula la neoglucognesis por desfosforilacin y activacin de enzimas neoglucognicas y por inhibicin de las enzimas regulables de la gluclisis. 3. Inhibe la actividad de las enzimas piruvato deshidrogenasa y Acetil-CoA carboxilasa disminuyendo la disponibilidad de precursores para la lipognesis. 4. La baja concentracin de Malonil-CoA, producto del ayuno y la inhibicin de las enzimas neolipognicas, estimula la actividad de la enzima acil-carnitina transferasa I promoviendo la BetaOxidacin de cidos grasos.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. Voet, D; Voet, J. Y Pratt, C. (2007) Fundamentos de Bioqumica. Editorial Mdica Panamericana 2. Champe, P., Harvey, R. y Ferrier, D. (2005) Bioqumica. Tercera Edicin. Mxico: Editorial Mc Graw Hill. 3. Snchez, Mara Del Rosario; Gonzlez Carlos. (2006) Fosforilacin oxidativa y ciclo de Krebs. 4. Snchez, Mara Del Rosario. (2006) Introduccin al Metabolismo. 5. Daz Keybell. (2006) Transduccin de Seales.
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Fundamentos de Bioqumica

En este documento se explican detalladamente:

11. 12. 13. 14. 15.

1. Mecanismos de regulacin de la actividad de las enzimas. Alosterismo y modificacin covalente.

Mecanismos de regulacin enzimtica

actividad. Ejemplo: la reaccin catalizada por la hexoquinasa:

Fig.1.2. Cintica de las enzimas alostricas. 2. Control por modificacin covalente de la

La hexoquinasa es inhibida por la glucosa-6-fosfato (el producto) disminuyendo la velocidad de la reaccin.

Fig.1.1. Efecto de los moduladores alostricos. Fig. Modificacin covalente reversible.

Aumento o disminucin de la transcripcin del gen que codifica a la protena.

2. El ciclo de Krebs y su regulacin.

El catalizador de la reaccin es la citrato sintasa.

Esta es una reaccin interesante:

4) Conversin del isocitrato en cetoglutarato: Reaccin catalizada por la isocitrato deshidrogenasa.

Regeneracin del oxaloacetato El ciclo contina con las siguientes reacciones:

Pi + succinil-CoA succinil-P + CoA Succinil-P Enzima-P + succinato Enzima-P + GDP GTP

7) Catalizada por la fumarasa.

8) Catalizada por la malato deshidrogenasa.

Fig. 2.2. Ciclo de Krebs

Succinil-CoA + CO2 + NADH

Fig. 2.3. Regulacin de la Piruvato Deshidrogenasa

3. Fosforilacin oxidativa y su regulacin.

Estructura mitocondrial y cadena transportadora de electrones.

Oxgeno ATP Sintetasa Componente

O2 es el aceptor final de los electrones

Acepta H+ de Espacio intermembrana.

Accin convierte ADP + Pi a ATP + H2O

F1: a3b3g3de F0: (SHP)n

frecuentemente NADH + H+. Observe se en la Fig. 3.2.

Fig. 3.2. Estructura del NAD

Fig. 3.3. Estructura del FAD

mitocondrial sea impermeable a los protones

para que pueda formarse el gradiente.

Fig. 3.6: Transportador de ATP/ADP (translocasa)

transporte electrnico inhiben la sntesis de ATP y el consumo de oxgeno.

4. Transduccin de seales. Mecanismo de accin de la adrenalina, el glucagon y la insulina.

Autocrina Paracrina Endocrina Por contacto clula-clula (molculas de adhesin)

Fig. 4.1. Tipos de sealizacin celular.

transmisoras interaccionan con las clulas

a) Intracelulares: citoplasmticos y nucleares

actividad enzimtica d) Receptores que se asocian directamente a enzimas e) Receptores de adhesin

b) Receptores asociados a canales inicos c) Receptores que presentan

Fig. 4.2. Tipos de receptores superficiales.

Mecanismo de accin de la adrenalina y el glucagon

SUBUNIDAD DE LA PROTENA G ACTIVA

Fig. 4.3. Cascada del AMPc

Mecanismo de accin de la insulina

Fig. 4.4. Representacin del receptor de la insulina

P IRS P SH2 PI3Q

Otras protenas GLUT4

5. Nociones generales de la digestin y absorcin de carbohidratos, lpidos y protenas.

Digestin y absorcin de lpidos

Digestin y absorcin de protenas

6. Regulacin de la gliclisis. PFK II

7. Regulacin coordinada de la glucogenognesis y de la glucogenolisis.

8. Regulacin de la neoglucognesis. Piruvato carboxilasa y fructosa 1,6 bisfosfato fosfatasa.

otros intermediarios neoglucognica.

La neoglucognesis es promovida por la activacin alostrica de la piruvato carboxilasa debido a la disponibilidad de

9. Metabolismo de las lipoprotenas. Catabolismo de VLDL, LDL y QM.

Catabolismo de las LDL y su relacin con el Metabolismo del colesterol

Fig. 9.1. Metabolismo de las lipoprotenas

Las HDL y el transporte inverso del colesterol

Catabolismo de las HDL