Laboratorio de Parasitologa Molecular.

El laboratorio se estableci en el IIB-INTECH en el ao 2002. Bsicamente realizamos estudios de biologa molecular y celular de Toxoplasma gondii y Neospora caninum. Ambos son parsitos intracelulares obligados, muy cercanos evolutivamente, pertenecientes al phylum Apicomplexa. Toxoplasma es el agente causal de la toxoplasmosis, una infeccin animal y humana ampliamente distribuida, con porcentajes de infeccin que varan desde el 25 al 90% segn la regin y costumbres. Este protozoo se replica en una enorme variedad de clulas y rganos, causando encefalitis, neumona, micoarditis, problemas oculares y defectos en los recin nacidos con infeccin congnita. En individuos inmunocompetentes con infeccin adquirida la infeccin es generalmente asintomtica, y el parsito permanece en forma crnica, enquistado en los tejidos, de por vida. Sin embargo, en individuos inmunodeprimidos, tales como portadores de HIV o pacientes con leucemia congnita, la infeccin puede reactivarse a su forma activa, produciendo encefalitis y cuadros pulmonares, muchas veces letales. La toxoplasmosis es tambin causa de abortos en ovejas y cabras, con su consecuente prdidas econmicas en la actividad ganadera. Neospora caninum es el agente causal de la neosporosis. Este presenta un ciclo de vida que incluye a los canidos como el hospedador definitivo, y a otros mamferos, entre ellos los bovinos, como hospedadores intermediarios. La neosporosis presenta un importante impacto en la produccin de carne y leche bovina, dado que los animales infectados se ven afectados por los consecuentes abortos, reposicin de vientres por eliminacin de seropositivos y el intervalo parto-concepcin.

Integrantes
Directores: Sergio O. Angel Investigador CONICET Prof. UNSAM sangel () intech.gov.ar Maria M. Corvi Investigadora CONICET Prof. UNSAM mcorvi () intech.gov.ar Miembros actuales: Carolina Dalmasso, Becaria CONICET Vernica Coceres, Becaria CONICET Maria J. Figueras, Becaria CONICET Lis Alomar, Becaria ANPCyT Maximiliano de Napoli, Becario CONICET Alvaro Nieto, Tesinista de Licenciatura, Becario CIC Silvina Bogado, Tesinista de Licenciatura Gustavo Ortiz, Tesinista de Licenciatura Agustina Ganuza, Tec. Univ. Quim.

Lneas de investigacin
Identificacin de protenas relevantes en la diferenciacin de estos parsitos.
Un aspecto importante en la patognesis de la toxoplasmosis es la transicin de la forma de taquizoito a la forma de divisin lenta (o nula) de bradizoito. Si bien se han definido claramente los aspectos morfolgicos para ambos estados, se sabe muy poco de los mecanismos y seales que disparan dicha conversin. In vitro, la diferenciacin de taquizoito a bradizoito puede ser inducida por exposicin de los parsitos a estrs, incluyendo el bloqueo de la cadena respiratoria. Nosotros demostramos que la protena Hsp90 trasloca al ncleo durante la diferenciacin a bradizoito y que un inhibidor de la misma, bloquea la diferenciacin. Tambin observamos que una chaperona de la familia de las "small heat shock" denominada Hsp28, tiene localizacin mitocondrial y solo se expresa en el estadio de taquizoito. Nuestros objetivos es determinar el rol biolgico de estas protenas durante la diferenciacin.

Mecanismos epigenticos (histonas y el cdigo de histona) y regulacin de la expresin gnica de estos parsitos.
Un aspecto a destacar durante la diferenciacin de T. gondii es que un nmero grande de genes estn sometidos a regulacin gnica. Del anlisis in silico del genoma de T. gondii se pudo comprobar en forma general la existencia de factores de transcripcin asociados al complejo transcripcional de pre-inicio. Sin embargo, resulto sorpresivo la falta de factores de transcripcin especficas en estos parsitos Resulta paradjico que dado el complejo ciclo de vida de estos organismos, no se encuentren evidencias de factores de transcripcin para una regulacin fina de la expresin diferencial de genes. Si bien esto podra estar indicando la presencia de factores de transcripcin irreconocibles debido a una alta divergencia en su secuencia primaria respecto a los ya conocidos en otras especies, un aspecto importante en la regulacin de la transcripcin de genes asociados a desarrollo puede estar dado por mecanismos epigeneticos. En T. gondii existen todas las familias de histonas y enzimas intervinientes en el remodelado de la cromatina conocidas en eucariotas superiores. De hecho se observa una patrn de modificaciones postraduccionales de las histonas H4 y H3 de los genes de T. gondii diferencial segn el estadio (Saksouk y col., 2005). Nosotros pudimos comprobar que tambin existe una asociacin del tipo de variante de histonas H2As y H2B y la cromatina activa. Nuestro objetivo es determinar la composicin del nucleosoma en ambos estadios, elrol de las H2A y H2B variantes en la regulacin de la expresin gnica e identificacin de protenas asociadas a estas variantes.

Estudio de protenas relacionadas a la invasin de la clula hospedadora y movimiento de deslizamiento.

Los parsitos Apicomplexas emplean un sistema inusual de movimiento denominado deslizamiento. Este incluye una batera de protenas de membrana plasmtica, actina, miosinas, protenas localizadas en un sistema de membranas interno (IMC), este ltimo localizado a lo largo del parsito, y microtubulos subpeliculares, las cuales se ensamblan para generar el movimiento y la invasin a la clula hospedera. Entre ellas identificamos a la protena de la familia de la small heat shock denominada Hsp20 que se localiza en el IMC. Nuestro objetivo es el de determinar el rol biolgico de esta chaperona.

Importancia de la palmitoilacin proteica en el parasito Toxoplasma gondii.

La palmitoilacin proteica es la adicin post-traduccional del cido graso de 16 carbonos, palmitato, generalmente (aunque no exclusivamente) a un residuo de cistena mediante una enlace lbil tioester. La palmitoilacin aumenta la hidrofobicidad de la protena modificada, modificando su distribucin subcelular o actividad. Dada la importancia de la palmitoilacin proteica en otros sistemas celulares y la escasa informacin de esta modificacin post-traduccional en T. gondii, es que proponemos que la palmitoilacin proteica jugara un papel importante en la biologa de este parasito. En este proyecto, nuestro objetivo general es el de establecer el papel de la palmitoilacin proteica en T. gondii e identificar las protenas afectadas por esta modificacin post-traduccional.

Rol de palmitoil acil-transferasas especficas de T.gondii.

Distinto a lo que ocurre con otras formas de lipidacin como son la miristoilacin y la prenilacin, la palmitoilacin es una modificacin reversible que permite regular ya sea la localizacin o la actividad de la protena modificada. Esta modificacin post-traduccional se lleva a cabo mediante una familia de enzimas conocidas como palmitoil aciltransferasas. Dado que recientemente hemos detectado en nuestro laboratorio que la palmitoilacin proteica es una modificacin operante en T. gondii y debido a la poca informacin sobre las enzimas que la llevan a cabo esta modificacin post-traduccional, es que proponemos investigar el papel que juegan estas protenas en la biologa de T. gondii.

A. Taquizoitos de Toxoplasma gondii en movimiento, seguidos por su rastro circular mediante epifluorescencia. B. La incubacin con anticuerpos contra protenas del IMC bloquean su movimiento.

Hsp20-YFP

mCherryFP--TubA1

Merge

Estudio de co-localizacin de las protenas Hsp20 y tubulina de Toxoplasma gondii en parsitos intracelulares genticamente modificados para expresarlas asociadas a protena fluorescente verde (Hsp20-YFP) y a protena roja (mCherryFP--tubulina).

Publicaciones recientes
1. de Miguel N, Braun N, Bepperling A, Kriehuber T, Kastenmller A, Weinkauf S, Buchner J, Angel SO and Haslbeck M. Structural and Functional Diversity in the Family of Small Heat Shock Proteins from the Parasite Toxoplasma gondii. BBA-Mol Cell Res, en prensa 2. Dalmasso MC, Onyango DO, Naguleswaran A, Sullivan Jr. WJ; Angel SO. Toxoplasma H2A Variants Reveal Novel Insights into Nucleosome Composition and Functions for this Histone Family. J Mol Biol, 392:33-47, 2009 3. de Miguel N, Lebrun M, Heaslip A, Hu K, Beckers CJ, Matrajt M, Dubremetz JF, Angel SO. Toxoplasma gondii Hsp20 is a stripe-arranged chaperone like protein associated with the outer leaflet of the inner membrane complex. Biol Cell,100:479-489, 2008. 4. Kostiuk MA, Corvi MM, Keller BO, Plummer G, Prescher JA, Hangauer MJ, Bertozzi CR, Rajaiah G, Falck JR and Berthiaume LG. Identification of palmitoylated mitochondrial proteins using a bio-orthogonal azidopalmitate analogue. FASEB J,22: 721-732, 2008. 5. Sullivan WJ, Naguleswaran A, Angel SO. Histones and histone modifications in protozoan parasites. Cell Microbiol 8 : 1850-1861, 2006. 6. Dalmasso MC, Echeverria PC, Zappia MP, Hellman U, Dubremetz JF Angel SO. Toxoplasma gondii has two lineages of histones 2b (H2B) with different expression profiles. Mol Biochem Parasitol 148:103-107, 2006. 7. Vilas GL, Corvi MM, Plummer GA, Seime A, Lambkin G and Berthiaume LG. Post-translational myristoylation of caspase-activated p21-activated proteinkinase 2 (PAK2) potentiates late apoptotic events. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 103: 6542-6547, 2006. 8. de Miguel N, Echeverria PC, Angel SO. Differential Subcellular Localization of Members from Toxoplasma gondii Small Heat Shock Protein (sHsp) Family.Eukaryotic cell 4:1990-1997, 2005. 9. Echeverria, PC, Matrajt M, Harb OS, Zappia MP, Costas MA, Roos DS, Dubremetz JF and Angel SO. Toxoplasma gondii Hsp90 is a potential drug target whose expression and subcellular localization are developmentally regulated. J Mol Biol350: 723-734, 2005. 10. Hu K, Roos DS, Angel SO and Murray JM. Variability and heritability of cell division pathways in Toxoplasma gondii. J Cell Sci 117: 5697-5705, 2004. 11. Bruno S, Duschak VG, Ledesma B, Ferella M, Andersson B, Guarnera EA, Angel SO. Identification and characterization of serine proteinase inhibitors fromNeospora caninum. Mol Biochem Parasitol136:101-107, 2004. 12. Navarro-Lerida I, Corvi MM, Alvarez Barrientos A, Gavilanes F, Berthiaume LG and Rodriguez-Crespo I. Palmitoylation of inducible NOS at Cys3 is required for proper intracellular traffic and nitric oxide synthesis. J.Biol.Chem. 279: 55682-55689, 2004. 13. Clemente M, de Miguel N, Lia V, Matrajt M and Angel SO. Structure analysis of two Toxoplasma gondii and Neospora caninum satellite DNA families and evolution of their common monomeric sequence. J Mol Evol 58:557-567. 14. Corvi MM, Soltys C-L and Berthiaume LG. Regulation of mitochondrial carbamoyl-phosphate synthetase 1 activity by active site fatty acylation. J.Biol.Chem. 276:45704-45712, 2001.

Subsidios
1. 2. 3. 4. 5. 6. 2009 NIAID, 1R01AI083162-01, por 4 aos, U$S 461176 2009 ANPCyT, PICT 07-00691, por 3 aos, $ 228.936 2009 AM, SC08/006, por 2 aos, $18000 2009 AM, SC08/046, por 2 aos, $18000 2008 ANPCyT, PICT 06-069, por 2 aos, $ 25.000 2007ANPCyT, PICT 05-34415, por 3 aos. $ 280.000.

Link: http://www.iib.unsam.edu.ar/web/parasitologia2.php