AO DE LA INTERGRACION NACIONAL

UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLAREAL

ESCUELA DE MEDICINA

CURSO: DO C E N T E : ALUMNOS:

BIOQUMICA DR. MARTNES

Ascorra Ibarra, Jorge Alcides Avelino Villn, Nadia Janet Ayarquispe Ortiz, Jackelin Ins Aybar Cachay, Juan Antonio Aylas Montero, Yenny Sandra Azaa Saldaa, Cynthia Baquerizo Contreras, Gisel Romina Bazn Ruiz, Pamela Rosala AO: SEGUNDO

2013

Fundamento del procedimiento: I. Determinacin del colesterol

El colesterol es el principal esterol del organismo humano y precursor de todos los dems esteroides corporales. Se encuentra formando parte de membranas celulares, lipoprotenas, cidos biliares y hormonas esteroideas. El colesterol es un importante constituyente de los clculos biliares, pero su principal funcin patolgica, lo constituye la produccin de aterosclerosis de arterias vitales, causando enfermedad coronaria, cerebro vascular y vascular perifrica. El origen del colesterol en el organismo tiene dos fuentes, la externa y el que produce el propio organismo. Debido a que el organismo puede producir su propio colesterol, existe la posibilidad que personas que no consuman colesterol, tengan niveles sanguneos elevados por tener algn desorden gentico-metablico que conlleva a dicha elevacin. Estos desordenes son ms comn de lo que se cree y son la principal causa de ateroma y de enfermedades vasculares, entre ellas el infarto agudo al miocardio. Por esto la importancia de determinar en forma precoz los niveles elevados de colesterol en los pacientes. Los alimentos derivados de animales son ricos en colesterol especialmente huevos, lcteos y las carnes. La mayora de este est en forma esterificada. El organismo absorbe aproximadamente la mitad del colesterol contenido en la dieta. Los esteroles vegetales son escasamente absorbidos por el organismo. El hgado es el principal rgano productor (10 % del total), siendo otros rganos importantes en la produccin el intestino, corteza suprarrenal, testes y ovario. La sntesis del colesterol se halla regulada sobre todo por la ingesta de colesterol en la dieta. El aumento del LDL-colesterol a nivel sanguneo lleva a un conjunto de proceso que desembocan en la formacin de placas inestables en las paredes de los vasos sanguneos, conocidos como ateromas. Estas placas reducen la luz de las arterias y venas, y si una de estas placas se desprende puede producir ya sea un infarto agudo al miocardio o en el cerebro un derrame

II.

Determinacin del HDL Las lipoprotenas son macromolculas que estructuralmente estn formadas por una parte lipdica y una proteica, cuya funcin es empaquetar los lpidos insolubles en el plasma proveniente de los alimentos (exgeno) y los sintetizados por nuestro organismo (endgenos), que son transportarlos desde el intestino y el hgado a los tejidos perifricos y viceversa; devolviendo el colesterol al hgado para su eliminacin del organismo en forma de cidos biliares. En la actualidad, las lipoprotenas se clasifican segn su densidad en: Quilomicrones VLDL, lipoprotenas de muy baja densidad IDL; lipoprotenas de densidad intermedia LDL; lipoprotenas de baja densidad HDL, lipoprotenas de alta densidad.

Caractersticas: Las lipoprotenas son partculas esfricas, de un tamao menor que los hemates y solo son visibles al microscopio electrnico. Estn formadas por una parte lipdica, y una proteica. Dentro de la lipdica encontramos colesterol esterificado y no esterificado, triglicridos y fosfolipidos y en la parte proteica a las apolipoproteinas. El colesterol en su forma esterificada se va a encontrar en el centro o core de la lipoproteina, y el colesterol no esterificado lo vamos a encontrar en una capa ms superficial junto a los fosfolpidos .El colesterol es una molcula derivada de los esteroides, y es esencial para nuestro organismo, esta presente en todas las clulas formando parte de las membranas celulares, en pequea cantidad en el sistema nervioso central, recubriendo las vainas de mielina. Es precursor de hormonas esteroides (progesterona, estrgeno, testosterona y cortico esteroides. En la piel y

por accin de los rayos solares se transforma en vitamina D. El ser humano dispone de colesterol gracias a dos vas: la exgena directamente a travs de los alimentos y la endgena que sintetiza el hgado (la mayor parte).La determinacin de colesterol total incluye la medicin de las formas libres y esterificadas del esteroide. En el suero o en el plasma 2/3 del colesterol total se encuentran como ster y el resto en forma libre. Esto tiene cierta importancia analtica ya que en algunas reacciones qumicas, el ster del colesterol desarrolla un color ms intenso que el colesterol libre, lo cual puede provocar un sesgo positivo. Por esta razn es de suma importancia el conocimiento de la qumica de los diversos mtodos para colesterol y el reconocimiento de sus limitaciones en la eleccin del mtodo que se empleara en el laboratorio.

III.

Determinacin de triglicridos Los triglicridos son steres de glicerol y cidos grasos que provienen de la dieta o son sintetizados principalmente en el hgado. Los triglicridos se transportan en el plasma en las lipoprotenas y son utilizados por el tejido adiposo, msculo y otros. Su principal funcin es suministrar energa a la clula. El mayor contenido de los triglicridos se encuentra en quilomicrones y VLDL. Las concentraciones elevadas de triglicridos en suero pueden ser debidas a alteraciones hepatobiliares, diabetes mellitus, nefrosis, hipotiroidismo, alcoholismo, hiperlipoproteinemia familiar tipo IV (elevacin de VLDL) y tipo V (elevacin de VLDL y quilomicrones), rara vez son tipo I (elevacin exclusiva de quilomicrones). El diagnstico clnico no debe realizarse teniendo en cuenta el resultado de un nico ensayo, sino que debe integrar los datos clnicos y de laboratorio. No es tan clara la relacin entre la enfermedad cardiaca coronaria (CHD) y la hipertrigliceridemia como con los niveles de colesterol LDL. Sin embargo, por estudios de metanlisis se consideran los triglicridos un predictor independiente al colesterol de CHD. Para las pruebas de perfil lipdico el paciente debe estar en ayuno total excepto agua, durante un lapso de 12 a 24 horas antes de la prueba. No debe haber realizado ejercicio vigoroso y bajo la dieta corriente el da anterior de la prueba.

RESULTADOS: EXPERIMENTO 1: Determinacin de colesterol Al leer las muestras a 505 nm se obtuvieron los siguientes resultados: Blanco (B) 0 Estndar (S) Desconocido (D) 0.690 0.669

calculo de resultados: Formula: Colesterol = D x Fc

Dnde: Colesterol (g/L) D = desconocido o muestra problema F.c = 2g/L S Reemplazando los datos: Colesterol = 0.669 x 2 = 1.93914 g/L 0.690 Interpretacin de resultados:

Debido a que el resultado est dentro del rango esperado (menor de 2.00 g/L) su nivel de colesterol es normal.

EXPERIMENTO 2: HLD Al leer las muestras a 505 nm se obtuvieron los siguientes resultados: Blanco (B) 0 Estndar (S) Desconocido (D) 0.255 0.187

calculo de resultados: Formula: HDL = D x Fc

Dnde: D = desconocido o muestra problema F.c = 0.457g/L S Reemplazando los datos: Colesterol = 0.187 x 0.457 0.255 = 0.33514 g/L

Interpretacin de resultados: Debido a que el resultado est en el lmite de lo esperado (para varones debe ser mayor de 0.40 g/L), su HDL est ligeramente bajo.

EXPERIMENTO 3: Determinacin de triglicridos Al leer las muestras a 505 nm se obtuvieron los siguientes resultados, se debe llevar a cero con el agua destilada y correguir las muestra con el blanco:

Estndar (S)

0.367

Desconocido (D)

0.478

calculo de resultados: Formula: TG = D x Fc

Dnde: D = desconocido o muestra problema F.c = 2.00 g/L S Reemplazando los datos: TG = 0.478 x 2.00 = 2.6049 g/L 0.367 Interpretacin de resultados: Debido a que el resultado no est dentro del rango esperado (menor de 1.50 g/L) su nivel de trigliceridos es anormal.

Determinacin de VLDV Formula: VLDL = Triglicridos 5 Reemplazando los datos: VLDL = 2.6049 =0.52098 g/L 5

Determinacin de LDL Formula: Colesterol Total = HDL + VLDL + LDL

Reemplazando los datos: 1.93914 = 0.33514 + 0.52098 + LDL LDL = 1.08302 g/L

CONCLUSIONES: Para obtener estos resultados se realizaron en esta prctica se realizaron 3 procedimientos, donde se determin el Colesterol total, HDL y la cantidad de Triglicridos. Como podemos ver para determinar la LDL es necesario conformar un perfil lipdico con los valores de colesterol total, colesterol de HDL y triglicridos. En la experiencia de la determinacin del colesterol el resultado fue 1.79 g/l que se encuentra dentro del rango normal (<2.00 g/l). Un aumento del colesterol puede causar enfermedades cardiovasculares. Cuando se determino el HDL; el resultado fue 0.40 g/l, siendo lo normal en el hombre >0,40 g/l. Debido a que las HDL son lipoprotenas que transportan el colesterol desde las arterias hasta el hgado, su baja concentracin suponen un riesgo a presentarse enfermedades cardiovasculares. En el tercer experimento la cantidad de triglicridos fue o.53 g/l que est dentro de lo deseable. La determinacin de los niveles de triglicridos nos ayuda a conocer el riesgo aterognico. Es importante la correcta realizacin de estos parmetros ya que ayuda en el diagnstico oportuno de la formacin de ateromas, tambin nos da una idea de la progresin de la arterioesclerosis.

Cuestionario 1. Cul es la importancia de la medicin de la concentracin de lpidos en la sangre? Porque teniendo los niveles de concentracin de los lpidos podemos relacionarlos con enfermedades y patologas. Es decir es importante porque podemos hacer un diagnstico y seguimiento de enfermedades metablicas, primarias o secundarias. Por ejemplo. Es conocida la relacin existente entre elevados niveles de triacilglicridos y colesterol en sangre y el desarrollo de arteriosclerosis y enfermedades coronarias. La importancia de dicha relacin ha hecho prudente la recomendacin de que se reduzca la ingesta de grasas. 2. cules son los fundamentos para la determinacin de los lpidos (colesterol, LDL, HDL, TG) en la sangre?

DETERMINACIN DE COLESTEROL TOTAL Para la determinacin de colesterol total se utilizan reactivos comerciales que incluyen las enzimas y sustratos necesarios para la cuantificacin de todas las formas de colesterol presentes en el suero .Las reacciones que tienen lugar son: CHE Esteres de colesterol + Colesterol + Ac. Grasos CHOD Colesterol + O2 + POD + Fenol + 4-AP Quinona + H2O. Colestenona + H2O2

1. Una colesterol estearasa (CHE) hidroliza los steres de colesterol a colesterol mas cidos grasos libre. (Hidrlisis de los steres de colesterol mediante la colesterol esterasa (CE). 2. A continuacin una colesterol oxidasa (CHOD) oxida todo el colesterol a colestenona y perxido de hidrgeno. 3. El perxido de hidrgeno es sustrato de una peroxidasa (POD) que junto con 4-amino fenazona (4-AP) da lugar a la formacin de una Quinona roja. La quinona formada es proporcional a la concentracin de colesterol en la muestra. Con respecto a las enzimas que actan en estas reacciones, se puede decir que: La colesterol esterasa (CE) se encuentra presente en el jugo pancretico y en el intestino, transforma los esteres del colesterol en colesterol y cido graso libre, y es precisamente en esta forma libre como es absorbido el colesterol por el intestino. La colesterol oxidasa (CO) se encuentra en la vescula biliar y el intestino y produce la oxidacin del colesterol libre debido a que el organismo es incapaz de oxidar colesterol hasta dixido de carbono por lo que solo puede excretarlo en la bilis donde parte del colesterol libre se convierte en cidos biliares.

DETERMINACIN DE HDL-COLESTEROL Para la determinacin del colesterol presente en las principales lipoprotenas que lo contienen como HDL (lipoprotenas de alta densidad) y LDL (lipoprotenas de baja densidad), es necesario:

Primero, la separacin selectiva de la lipoprotena correspondiente con agentes precipitantes. Segundo, la cuantificacin del colesterol presente en dicha lipoprotena como se indic anteriormente. Entre estos reactivos precipitantes estn el cido fosfotungstico y magnesio que precipitan a las LDL y VLDL (lipoprotenas de muy baja densidad) mientras que las HDL permanecen en solucin. DETERMINACIN DE TRIGLICRIDOS Para la determinacin de triglicridos en suero se utilizan reactivos comerciales que incluyen las enzimas y sustratos necesarios para la cuantificacin por espectrofotometra visible. Las reacciones que tienen lugar son:

Lipasa Triglicridos + H2O Glicerol + Ac. Grasos

GK Glicerol + ATP Glicerol-3-P + ADP

GPOD Glicerol-3-P + O2 Dihidroxiacetona + H2O2

POD H2O2 + p-clorofenol + 4-AP Quinona + H2O

Una lipasa hidroliza los triglicridos dando glicerol ms cidos grasos libre. El glicerol formado es sustrato de una glicerol quinasa que en presencia de ATP lo fosforila a glicerol 3P. El glicerol 3P es oxidado a dihidroxiacetona por una glicerol fosfato oxidasa dando tambin perxido de hidrgeno. El perxido de hidrgeno junto con los cromgenos p-clorofenol y 4-AP son sustrato de una peroxidasa para formar una quinona roja cuantificable a 505 nm. La quinona formada es proporcional a la concentracin de triglicridos presente en la muestra.

3. Explique que son las dislipidemias y su relacin con las enfermedades cardiovasculares. Dislipidemias: LAS DISLIPIDEMIAS son un conjunto de enfermedades asintomticas que tienen la caracterstica comn de tener concentraciones anormales de las lipoprotenas sanguneas El trmino dislipidemia se considera hoy ms exacto, porque significa algo ms que altos niveles de lpidos en la sangre. Dislipidemia quiere decir una anomala en el equilibrio de lpidos en la sangre o sea una falta de equilibrio entre los lpidos y las substancias qu los transportan a las diferentes partes del cuerpo, a travs de la circulacin sangunea. Pueden ser causadas por defectos genticos (dislipidemias primarias), o ser consecuencia de patologas o de factores ambientales (dislipidemias secundarias). En muchas ocasiones, los defectos genticos requieren de la presencia de factores secundarios para expresarse clnicamente (dislipidemias de etiologa mixta). 1) Defectos genticos: Las principales dislipidemias de causa gentica son la Hipercolesterolemia Familiar, la Dislipidemia Familiar Combinada, Hipercolesterolemia Polignica, la Disbetalipoproteinemia, las Hipertrigliceridemias Familiares y el dficit de HDL. Su prevalencia a nivel poblacional es alrededor del 4 %, lo que sube a 30-40% en poblacin portadora de cardiopata coronaria. 2) Patologas causantes de dislipidemias: Las principales son la obesidad, la Diabetes Mellitus, el hipotiroidismo, la colestasia, la insuficiencia renal y el sndrome nefrsico. 3) Factores ambientales. CLASIFICACION DE LAS DISLIPIDEMIAS Se utiliza una clasificacin clnica de estas patologas metablicas: 1) Hipercolesterolemia aislada 2) Hipertrigliceridemia aislada 3) Hiperlipidemia mixta 4) Dficit de HDL aislado Dislipidemias y su relacin con las enfermedades cardiovasculares

Estudios epidemiolgicos han mostrado que niveles elevados de Colesterol, particularmente los de LDL Continan siendo el factor de riesgo mejor establecido para el desarrollo de la enfermedad cardiovascular. Las fracciones de colesterol unidas a lipoprotenas cumplen funciones distintas, en un caso generando los procesos que dan origen a la ateroesclerosis en los endotelios (LDL) y, en otro, removiendo partculas aterognicas desde esos tejidos (HDL).

WEBGRAFA
http://www.minsal.gob.cl/portal/url/item/75fefc3f8128c9dde04001011f0178d6.pdf http://www.alergoderma.com.mx/drhernandez/images/stories/Libro/12.pdf http://ssmo.redsalud.gob.cl/wrdprss_minsal/wpcontent/uploads/2012/02/PROTOCOLO_R_Y_CR_SSMO_DISLIPIDEMIA_2009.pdf