Obtenci on del espectro de absorci on de una sustancia

D az Juan,
Programa de Qu mica, Facultad de Ciencias B asicas e Ingenier as, are a de Qu mica anal tica Universidad de C ordoba

Resumen La espectrofotometr a UVvisible es una t ecnica anal tica que permite determinar la concentraci on de un compuesto en soluci on. Se basa en que las mol eculas absorben las radiaciones electromagn eticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida depende de forma lineal de la concentraci on. Para hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofot ometro, en el que se puede seleccionar la longitud de onda de la luz que pasa por una soluci on y medir la cantidad de luz absorbida por la misma. En esta pr actica se dar an a conocer las caracter sticas generales y conceptos relacionados con la espectrofotometr a y a su vez esto sera obserbado con los espectros de absorci on del KM nO4 y el K2 Cr2 O7 . Palabras claves: Absorbancia, transmitancia, colorimetr a; crom oforo, espectro.

1.

Introducci on

El estudio a nivel qu mico de cualquier analito requiere la utilizaci on de t ecnicas anal ticas que permitan su determinaci on cualitativa y cuantitativa, as como su caracterizaci on f sicoqu mica. Uno de los m etodos m as sencillos, accesibles, u tiles y utilizados es la espectroscop a, en general, y la espectroscop a UVvisible, en particular. Se pueden identicar y cuanticar analitos en soluci on y en muestras de diferentes tipos, con el empleo de reactivos espec cos que reaccionan con el analito a analizar y forman un producto coloreado que permite detectarlo en muestras complejas. El fundamento de la espectroscop a se debe a la capacidad de las mol eculas o atomos para absorber radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del espectro UVvisible. Las longitudes de onda (x ) de las radiaciones que una mol ecula puede absorber y la eciencia con la que se absorben dependen de la estructura at omica y de las condiciones del medio (pH , temperatura, fuerza i onica, constante diel ectrica), por lo que dicha t ecnica constituye un valioso instrumento para la determinaci on y caracterizaci on de 1

analitos. Cuando la luz (considerada como energ a) es absorbida por una mol ecula se origina un salto desde un estado energ etico basal o fundamental, E1 , a un estado de mayor energ a (estado excitado), E2 . Y s olo se absorber a la energ a que permita el salto al estado excitado. Cada mol ecula tiene una serie de estados excitados (o bandas) que la distingue del resto de mol eculas. Como consecuencia, la absorci on que a distintas longitudes de onda presenta una mol ecula, esto es, su espectro de absorci on el cual constituye una se na de identidad de la misma.

Figura 1: Diagrama de niveles de energ a en una mol ecula. La absorci on de energ a luminosa hace que la mol ecula pase desde un estado fundamental (E1 ) a otro excitado (E2 ). Posteriormente la mol ecula relaja su energ a mediante distintos mecanismos (vibraci on, rotaci on, etc.)

Figura 2: Espectro electromagn etico.

En espectroscop a el t ermino luz no s olo se aplica a la forma visible de radiaci on electromagn etica, sino tambi en a las formas UV e IR, que son invisibles. En espectofotometr a de absorbancia se utilizan las regiones del ultravioleta (UV cercano, de 195400 nm) y el visible (400780 nm).

que absorbe es el complementario del color que transmite. Por tanto, para realizar mediciones de absorci on es necesario utilizar la longitud de onda en la que absorbe luz la soluci on coloreada. La fuente de radiaci on visible suele ser una l ampara de tungsteno y no proporciona suciente energ a por debajo de 320 nm.

1.1.
1.1.1.

Las regiones UV y visible del es- 1.2. pectro electromagn etico

La regi on UV

Medidas para la luz absorbida o transmitida

Se dene como el rango de longitudes de onda de 195 a 400 nm. Es una regi on de energ a muy alta. Provoca da no al ojo humano as como quemadura com un. Los compuestos con dobles enlaces aislados, triples enlaces, enlaces pept dicos, sistemas arom aticos, grupos carbonilos y otros hetero atomos tienen su m axima absorbancia en la regi on UV, por lo que esta es muy importante para la determinaci on cualitativa y cuantitativa de compuestos org anicos. Diversos factores como pH , concentraci on de sal y el disolvente que alteran la carga de las mol eculas, provocan desplazamientos de los espectros UV. La fuente de radiaci on ultravioleta es una l ampara de deuterio. 1.1.2. La regi on regi on visible

Cuando un rayo de luz de una determinada longitud de onda de intensidad 0 incide perpendicularmente sobre una disoluci on de un compuesto qu mico que absorbe luz o crom oforo, el compuesto absorber a una parte de la radiaci on incidente (a ) y dejar a pasar el resto (t ), de forma que se cumple (ver Figura 3): 0 = a + t (1)

En ella apreciamos el color visible de una soluci on y que corresponde a las longitudes de onda de luz que transmite, no que absorbe. El color

Figura 3: Paso de la luz a trav es de un analito o sustancia la cual absorve cierta cantidad de energia y deja pasar el resto.

Tabla 1: Relaci on entre los colores de la luz absorbida y la luz transmitida a su respectiva longitud de onda (). (nm) aproximada 390 - 435 435 - 490 490 - 580 580 - 595 595 - 650 650 - 780 Color de luz absorbido Violeta Azul Verde Amarillo Naranja Rojo Color de luz reejado Amarillo verdoso Amarillo Rojo Azul Azul verdoso Verde azulado

1.2.1.

Transmitancia ( %T)

1.3.

Espectrofot ometro UV-visible

La transmitancia ( %T) de una sustancia en soluci on es la relaci on entre la cantidad de luz transmitida que llega al detector una vez que ha atravesado la muestra, It, y la cantidad de luz que incidi o sobre ella, Io, y se representa normalmente en tanto por ciento: %T = t 100 % o (2)

La medici on de absorbancia de la luz por las mol eculas se realiza en unos aparatos llamados espectrofot ometros. Aunque pueden variar en dise no, en especial con la incorporaci on de ordenadores para el an alisis de datos, todos los espectrofot ometros constan, seg un se indica en la gura, de: 1. Una fuente de energ a radiante: l ampara de deuterio y tungsteno. 2. Un monocromador para la selecci on de radiaciones de una determinada longitud de onda: ltros, prismas, redes de difracci on. 3. Un compartimento donde se aloja un recipiente transparente (cubetas o tubos) que contenga la muestra Pueden ser de vidrio, cuarzo o pl astico transparente. Para medir en UV se deben usar las de cuarzo o s lice fundido, porque el vidrio no transmite la radiaci on UV. 4. Un detector de luz y un amplicador convertidor de las se nales luminosas en se nales el ectricas. 5. Un registrador o sistema de lectura de datos. Desde el punto de vista operativo, el primer paso es seleccionar la fuente de luz y longitud de onda a la que se va a realizar la medida. Hay espectrofot ometros de un solo haz (con una sola celdilla para alojar la cubeta con la muestra)

La transmitancia nos da una medida f sica de la relaci on de intensidad incidente y transmitida al pasar por la muestra. La relaci on entre %T y la concentraci on no es lineal, pero asume una relaci on logar tmica inversa. 1.2.2. Absorbancia (A)

Es un concepto m as relacionado con la muestra puesto que nos indica la cantidad de luz absorbida por la misma, y se dene como: A = log (T ) Como consecuencia: A = log (T ) = log t o (4) (3)

Cuando la intensidad incidente y transmitida son iguales (t = o ), la transmitancia es del 100 % e indica que la muestra no absorbe a una determinada longitud de onda, y entonces A vale log (1) = 0.

Figura 4: Espectrofot ometro (Colorimetro) Milton Roy; Spectronic 20. a)Tablero digital donde se muestra la ajustada, el dato de la medida y el tipo de medida efectuada; b) portamuestras; c) ajuste del 0 % en transmitancia; d) ltro seleccionador del rango de ; e)botones seleccionadores de medidas y otros datos; f) ajuste de la lambda deseada para la medida; g) ajuste del 100 % en transmitancia

Figura 5: Trayectoria del paso de la luz dentro del Espectrofot ometro. Se puede ver como esta pasa por una rendija encontrandose luego con un prisma, el cual cumple la funcion de descomponer la luz en los colores que la conforman a sus respectivas . Una de estas pasa a trav es del analito el cual absorve la cantidad de a necesaria y la t es detectada por un detector, el cual nos muestra este valor en la pantalla del espectrofot ometro.

y de doble haz (con dos celdillas para dos cubetas); en nuestro caso se trabajar a con los de un solo haz. Se mide primero la absorbancia del disolvente (conocido como blanco) y al que se le asigna el valor de cero mediante el ajuste del mando, de forma que la intensidad incidente y transmitida sean iguales (t = o ), y por tanto la absorbancia es cero. A continuaci on se pone en la celdilla la cubeta con la muestra y se lee la absorbancia de esta. 4

1.4.

Obtenci on de un espectro de absorci on

El espectro de absorci on es una representaci on gr aca que indica cantidad de luz absorbida () a diferentes valores de . A partir de una soluci on diluida de un compuesto, cuya absorbancia m axima entra dentro del rango de medida del espectrofot ometro, se

Figura 6: Espectros de absorci on de tres pigmentos fotosint eticos cloroplast dicos. Observese que un compuesto puede tener m as de un pico de absorci on (max ).

ver a el valor de absorbancia a diferentes longitudes de onda frente a un blanco que contenga el disolvente de la soluci on de la muestra a caracterizar. A partir del espectro de absorci on se obtendr a el valor de al que el compuesto presenta la mayor absorbancia (max ). Dicho se utilizar a a la hora de hacer determinaciones cualitativas y cuantitativas del compuesto. El espectro de absorci on de un crom oforo depende, fundamentalmente, de la estructura qu mica de la mol ecula. No obstante, hay una gran cantidad de factores que originan varia-

ciones en los valores de max y M , entre los que se incluye el pH , la polaridad del solvente o mol eculas vecinas y la orientaci on de los crom oforos vecinos; y cada uno afecta de forma particular. Por ejemplo, variaciones originadas por cambios de pH son debidas al efecto de este sobre la ionizaci on del compuesto. A continuaci on se muestran como ejemplo los espectros de absorci on de HN T S (un reactivo empleado para la determinaci on de especies oxidantes) y comprob andose que por espectrotometr a se puede seguir el efecto que ejercen el pH y los oxidantes.

Figura 7: Espectros de absorci on del HN T S a diferentes condiciones de solventes. a) Efecto del pH en la absorci on de HNTS. espectros 1 y 2 en medio acido (m aximo de absorci on a 370 nm); espectros 3 y 4 en medio b asico (m aximo a 410 nm); b)Desplazamiento del m aximo de absorci on y descenso de absorbancia cuando el HNTS se incuba con H2 O2 a distintos tiempos (0, 5, 10 y 15 minutos).

2.
2.1.

Secci on experimental
Materiales y Reactivos
Materiales

10. Lectura del dato sea %T . Los datos del %T fuer on leidos desde los 350 nm hasta los 600 mn con una variaci on entre lecturas de 10 nm

2.1.1.

Espectrofot ometro (Milton Roy; Spectronic 20.) Tubos de ensayo Gradilla para tubos Balones aforados a 100ml Pipetas de 5ml y 10ml Frasco lavador Espatula 2.1.2. Reactivos

3.
3.1.

Resultados y an alisis
Tablas de registro de datos
Lecturas del KM nO4 %T 34,4 35,4 36,4 40,6 42,2 52,2 61,6 62,6 66,6 103,8 52,0 44,0 39,0 A 0,46 0,45 0,44 0,39 0,37 0,28 0,21 0,20 0,18 -0,02 0,29 0,36 0,41 (nm) 480 490 500 510 520 530 540 550 560 570 580 590 600 %T 33,0 28,4 26,8 25,4 22,6 21,6 19,4 18,8 21,8 28,6 41,0 54,6 62,2 A 0,48 0,55 0,57 0,56 0,65 0,67 0,71 0,73 0,66 0,54 0,39 0,26 0,21

3.1.1. (nm) 350 360 370 380 390 400 410 420 430 440 450 460 470

Permanganato de potasio (KM nO4 ) Dicromato de potasio (K2 Cr2 O7 )

2.2.

Procedimiento experimental

Se preparar on soluciones diluidas de KM nO4 y K2 Cr2 O7 para luego ser medidos los %T de cada una de las soluciones preparadas, esta secci on se llevo a cabo a trav es de los siguientes 3.1.2. pasos: 1. Identicaci on del espectrofot ometro a utilizar (Espectrofot ometro Milton Roy; Spectronic 20, como lo indica la gura 4). 2. Encendido del espectrofot ometro (se deja en reposo por aproximados 15 minutos). 3. Ajuste de la posici on del ltro 4. Seleccion de a la cual se realizara la lectura. 5. Ajuste del 0 %T 6. Selencci on del modo de lectura ( %T ). 7. Inserci on del blanco dentro del portamuestras. 8. Ajuste del 100 %T . 9. Inserci on de la muestra en el portamuestras. 6

Lecturas del K2 Cr2 O7 %T 27,6 24,4 18,0 12,4 6,9 6,8 6,0 6,0 7,2 14,8 11,4 14,8 18,4 A 0,56 0,61 0,74 0,91 1,16 1,17 1,22 1,22 1,14 0,83 0,94 0,83 0,74 (nm) 480 490 500 510 520 530 540 550 560 570 580 590 600 %T 22,2 25,2 27,2 38,0 49,6 67,4 83,0 90,6 98,2 98,8 99,0 99,2 100,8 A 0,65 0,60 0,57 0,42 0,30 0,17 0,08 0,04 0,007 0,005 0,004 0,003 -0,003

(nm) 350 360 370 380 390 400 410 420 430 440 450 460 470

Los datos de las absorbancias (A), fueron hallados con la ecuaci on A = 2 log ( %T ) (5)

on de (nm) Gr aca 1: Espectro de absorci on del KM nO4 . %T en funci

Graca 2: Espectro de absorci on del KM nO4 . A en funci on de (nm)

Graca 3: Espectro de absorci on del K2 Cr2 O7 . %T en funci on de (nm)

Graca 4: Espectro de absorci on del K2 Cr2 O7 .A en funci on de (nm)

3.2.

An alisis de gracos

3.2.2.

Para el K2 Cr2 O7

3.2.1.

Para el KM nO4

El K2 Cr2 O7 presenta un m nimo en su %T a los 410 nm y 420 nm donde este valor se repite as como lo muestra la graca 3. La graca 3 muestra intervalos de %T con una continuidad corta, entre estos intervalos se observa un descenso del %T entre los 350 y los 390 nm, desde esta ultima hasta los 500 nm el %T comienza a aumentar casi proporcionalmente en forma curvil nea con la salvedad que a los 440 nm esta curva es interrumpida, ya que a esta se escapa nuevamente un punto el cual hace variar la forma de la curva. Desde los 500 nm hasta los 560 nm se observa una curva bastante pronunciada, los cual nos dice que en este intervalo el K2 Cr2 O7 transmite proporcionalmente a este aumento en la . Desde los 560 nm hasta los 590 nm el comportamiento del %T es muy parecido, la variaci on de este se encuentra en el rango de 0, 2 %.

La graca 1 muestra como el KM nO4 presenta un m aximo de %T a los 430 nm, antes de esta , el %T comienza a aumentar relativamente, mas no linealmente. Desde los 430 nm hasta los 550 nm el %T desciende no linealmente y desde esta misma hasta los 600 nm el %T aumenta muy proporcionalmente, en este intervalo se puede observar una curva semipronunciada con relaci on a los otros intervalos en donde esta curva no se pronuncio de esta manera como lo indica la graca 1.

En la graca 2 se puede observar que la mayor absorbancia para el KM nO4 se encuentra en los 550 nm, antes de esta se presenta un m nimo de Absorbancia en los 430 nm. Al igual que los valores m nimos del %T , los valores m aximos de la absorbancia para Desde los 350 nm, la graca muestra descenso el K2 Cr2 O7 se encuentran en los 410 nm y sin patr on, es decir, no lineal ni curva pronun- 420 nm como se puede apreciar en la graca ciada en la Absorbancia, esto hasta los 430 nm, 4. Tambi en muestra valores m nimos de Ab a la cual comienza a aumentar nuevamente la sorbancia entre los 560 nm y los 590 nm, inAbsorbancia del KM nO4 mostrando una curva tervalo en el cual estos valores var an entre un semipronunciada hasta los 510 nm, punto en margen de 0,001, valores peque nos para esta donde pierde la secuencia semipronunciada la medida. curva, aqu se observa un descenso m nimo en la Absorbancia y aumenta proporcionalmente La prolongaci on de las curvas en la graca desde los 510 nm hasta los 550 nm, interva- 4 seria en tres intervalos con la excepci on de lo donde aumenta nuevamente la Absorbancia ciertos puntos que se escapan y hacen variar la pero sin seguir un patr on de continuidad, des- curva de Absorbancia, estos intervalos se ven de esta hasta los 600 nm la Absorbancia del de la siguiente manera: Entre los 350 nm y los KM nO4 comienza a disminuir, pero a difer- 390 nm, intervalo donde se muestra la curva de encia de los dem as intervalos en este se puede absorci on bien prolongada. A los 390 nm y los observar una curva con una mayor secuencia 400 nm la Absorbancia disminuye con un valor de los puntos, as como lo muestra la graca 2 m nimo, el cual se varia en una Absorbancia de 0,01, a los 410 nm y los 420 nm la AbsorbanDentro de las gracas 1 y 2 fue eliminada cia se iguala a las dos . Desde los 420 nm a de 440 nm debido a que se sali o del margen de los 560 nm la curva seria bien pronunciada a tolerancia para las medidas, estos datos se en- no ser por las Absorbancias a los 440 nm, los contraron en el %T = 103, 8 y su Absorbancia 490 nm y los 550 nm, lamba a las cuales las fue de 0, 02, datos que est an alejados de la Absorbancias se salen de la prolongaci on de la realidad de la muestra. curva. Desde los 560 nm hasta los 590 nm se 9

muestra una recta parecida casi paralela al eje La absorbancia del KM nO4 es creciente con de de la . pendiente positiva desde aproximadamente los 430 nm hasta los 500 nm en donde se puede Al igual que las gracas 1 y 2, en las gra- observar una variaci on en la Absorbancia, y cas 3 y 4 tambi en se elimino una lambda, en decreciente con pendiente negativa desde los estas gracas fue a 600 nm en donde el %T 550 nm hasta los 590 nm. En estos intervalos fue de 100, 8 % y la Absorbancia de 0, 003; se observa un comportamiento casi lineal en la valores que se alejan del margen de tolerancia. Absorbancia de este compuesto.

4.

Conclusiones

El K2 Cr2 O7 presenta mayor Absorbancia que el KM nO4 , esto se debe a que la estructura de la mol ecula presenta mayores interacciones con la energ a, ya sea por su estructura o por su polaridad. El K2 Cr2 O7 absorbe mas energ a a menores longitudes de onda que el KM nO4 como lo muestra las gracas 2 y 4. La Absorbancia del K2 Cr2 O7 muestra tendencia lineal a la funci on id entica f (x) = c donde c es una constante, a los 410 nm y los 420 nm y parecida a esta misma funci on a desde los 560 nm hasta los 590 nm.

Las eliminadas en los espectros de Absorbancia como de %T para ambos compuestos, pudieron presentar esas anomal as debido a errores de calibraci on del Espectrofot ometro o a impurezas en los reactivos, como tambi en pudo ser por imprecisi on en los materiales de laboratorio o errores humanos.

Referencias
[1] [2] [3] [4]

10

Cuestionario
1. Delimitar las zonas donde la sustancia mostro una tendencia de absorci on de pendiente positiva y negativa. Por qu e ocurre este fen omeno? Soluci on

Graca 5: Espectro de absorci on del KM nO4 . A en funci on de (nm). Las curvas rojas representan la pendiente negativa y las azules la pendiente positiva.

Graca 6: Espectro de absorci on del K2 Cr2 O7 .A en funci on de (nm). Las curvas rojas representan la pendiente negativa y las azules la pendiente positiva. 11

El cambio de pendiente es fenomeno de la absorci on necesaria para que puedan existir las tensiones entre los enlaces de la mol ecula, a una cierta , estos enlaces absorben cierta catidad de esta energ a, cuando se mide a diferentes se observa que cada mol ecula absorbera la cantidad de energ a que necesite para que haya interacci on especica con el enlace o grupo que este relacionado con cierta .

2. Justique matem aticamente la relaci on entre %T y la A Soluci on La Transmitancia se dene como la cantidad de energ a que es transmitida (t ) por la muestra con relacion a la energ a incidente (0 )se tiene entonces T = El %T se dene como la T por el 100 % %T = t 100 % 0 t 0

La Absorbancia (A) se dene como el negativo del logaritmo de la T A = log (T ) Ahora, reemplazando el valor de T en la formula anterior A = log Multiplicando por 1 dentro del logaritmo A = log Reemplazando el valor del %T A = log Aplicandole la propiedad de los logaritmos log Entonces se tiene A = [log ( %T ) log (100)] Rompiendo el corchete A = log [100] log [ %T ] Resolviendo el logaritmo A = 2 log [ %T ] a = log [a] log [b] b %T 100 100 t 0 100 t 0

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3. Sobre uno de los espectros de absorci on trazar a mano alzada el espectro que se obtendr a si se hubiera analizado soluciones de mayor y menor concentraci on que la que se trabajo en la practica. Soluci on

K M

n O
4 4 4

> [ < [ ]

1 ,6 1 ,4 1 ,2

K M K M

n O n O

A b s o rb a n c ia

1 ,0 0 ,8 0 ,6 0 ,4 0 ,2 0 ,0 3 0 0 4 0 0

( n m

5 0 0

6 0 0

Graca 7: Posible espectro de absorci on del KM nO4 con la A en funci on de (nm), trazado a tres concentraciones diferentes. Condentraci on del doble (roja), concentraci on normal (negra) y de 1/2 de la concentraci on trabajada (azul).

Se puede observar que la variaci on de las posibles gracas trazadas a una concentraci on del doble y la mitad de la concentraci on trabajada durante la experiencia, esta variaci on es mas prolongada cuando se trabaja con el doble de la concentraci on, si la graca obtenida es la acertada.

4. Comparar los espectros obtenidos de las dos especies. Qu micamente a que se debe la diferencia? Soluci on

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K M

n O
4 4 4

> [ < [ ]

1 ,6 1 ,4 1 ,2

K M K M

n O n O

A b s o rb a n c ia

1 ,0 0 ,8 0 ,6 0 ,4 0 ,2 0 ,0 3 0 0 4 0 0

( n m

5 0 0

6 0 0

Graca 8: Comparaci on de los espectros de absorci on del K2 Cr2 O7 y el KM nO4 con la A en funci on de (nm)

Comprando se observa que el espectro del K2 Cr2 O7 presenta mayor y menor Absorbancia, qu micamente esto se debe a varios factores, los cuales intervienen en la obtenci on de un espectro. Entre estos factores se encuentra: La polaridad del Compuesto La interacci on con el solvente. La estructura del compuesto (en este caso como el K2 Cr2 O7 presenta una estructura mas compleja y donde se encuentra una mayor cantidad de enlaces, la energia que absorbera sera mayor para que as pueda interactuar con estos enlaces) El pH .

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