Gua de Laboratorio: Bioqumica Clnica 2012

Prof.Q.F Gisella Barrientos Seplveda gbarrientos@ucn.cl

LABORATORIO N1 INTRODUCCIN A LA BIOQUIMICA CLNICA

El anlisis de una muestra biolgica en un laboratorio clnico tiene como objetivo fundamental la valoracin cualitativa o cuantitativa de uno o varios componentes de esta muestra, pudiendo ser sta una muestra de sangre, orina, lquido cefalorraqudeo mdula sea, lquido articular, deposicin, etc. Para ello se debe disponer de un conjunto de tcnicas y procedimientos de laboratorio que nos permitan realizar la determinacin, de manera de obtener un resultado confiable, que ser til como medida de control del estado de salud de un paciente o permita la descripcin de un cuadro clnico concreto. El logro de un buen resultado depender no slo de la tcnica implementada en el laboratorio clnico, sino que parte con una adecuada toma de muestra, siendo sta una etapa fundamental de la fase preanaltica. Durante el desarrollo de estos laboratorios nuestra muestra biolgica a analizar ser aquel lquido que circula por nuestro sistema arteriovenoso y capilar, es decir la sangre. Para ello comenzaremos por definir los conceptos bsicos para una toma de muestra adecuada y en una segunda etapa estudiaremos algunas tcnicas de laboratorio que permiten la valoracin de algunos de sus componentes y la utilidad clnica de ellos.

I.-Conceptos bsicos de una correcta toma de muestra de sangre venosa. En primer lugar, debemos considerar que la toma de muestra se debe realizar mediante la aspiracin de sangre desde una vena, generalmente del brazo, utilizando una jeringa. En algunas ocasiones se puede utilizar una puncin de la yema del dedo (determinacin de grupo sanguneo) como tambin la aspiracin de sangre arterial (determinacin de gases arteriales).Por lo general la muestra debe ser tomada en condiciones de ayuno ( aprox. 12 horas ), principalmente para aquellas determinaciones de metabolitos dependientes ( Glucosa, Colesterol, Triglicridos, etc.).

La cantidad de sangre extrada vara dependiendo del nmero de exmenes a realizar y sta ser obtenida con o sin anticoagulante dependiendo si el metabolito a analizar se determina en suero, plasma o sangre total. Si se determinan parmetros bioqumicos, tales como Glucosa, Colesterol, Triglicridos, etc., la muestra a utilizar ser suero por lo tanto no se utilizar anticoagulante. Si se determinan parmetros hematolgicos la muestra se obtendr con anticoagulante y este variar de acuerdo al examen a realizar: a).- Hemograma: El anticoagulante ser EDTA b).- VHS (velocidad de eritro-sedimentacin): El anticoagulante ser CITRATO c).- Pro-trombina, Fibringeno (pruebas de coagulacin): El anticoagulante ser CITRATO

Existen algunas condiciones particulares en las cuales la muestra puede ser tomada a cualquier hora para la valoracin de un determinado metabolito, por ejemplo:
Se ha desarrollado un sistema internacional, que permite que la toma de muestra se realice con el anticoagulante adecuado, utilizando el color de la tapa del tubo como gua, es decir el color de la tapa

a).-Exmenes de urgencia: Glicemia (sospecha de hipo o hiperglicemia, en paciente diabtico) Enzimas Cardiacas: CK, CK-MB Bilirrubinemia: Bilirrubina directa y total b).-Exmenes de coagulacin c).-Exmenes hormonales (hormonas dependientes de ciclo da noche) d).-Exmenes de Nivel plasmtico de drogas ( Anti-convulsivantes principalmente ).

del tubo indica que anticoagulante contiene y para que exmenes debe utilizarse: COLOR TAPA LILA NEGRO CELESTE ROJO ANTICOAGULANTE EDTA CITRATO CITRATO S/ANTICOAGULANTE EXAMENES HEMOGRAMA VHS PRUEBAS DE COAGULACIN PRUEBAS BIOQUIMICAS

Es importante definir la diferencia entonces, entre suero y plasma. Plasma: Liquido amarillo plido que representa el 5055 % de la sangre total ,contiene el 91-93% de agua y un 7-9% de materiales slidos , de estos aproximadamente el 85% esta representado por protenas, siendo las mas importantes la Albmina, las Globulinas y el Fibringeno. Otras son las Lipo y Glicoprotenas. Suero : Parte lquida de la sangre que se obtiene despus de la coagulacin. Posee los mismos componentes del plasma excepto el Fibringeno o Factor de coagulacin que se extrae. En resumen podemos decir que la sangre esta constituida por una parte corpusculada (elementos celulares) que corresponden a los glbulos rojos y blancos, plaquetas y una parte lquida que corresponde al plasma, que contiene las sustancias orgnicas e inorgnicas, como protenas, hormonas, enzimas, anticuerpos, etc, de cuyo estudio y valoracin se puede conocer el estado de salud de un paciente o confirmar un diagnstico clnico. Por lo anterior entonces, la importancia de conocer los exmenes clnicos ms utilizados, el correcto manejo de las tcnicas mas comunes utilizadas en la qumica clnica y la buena interpretacin de los resultados obtenidos.

II . Introduccin a la Hematologa.

Uno de los anlisis de sangre mas completos es el hemograma, el cual traduce la normalidad antomo-fisiolgica de los centros hematopoyticos y el equilibrio entre la produccin y destruccin de los elementos figurados de la sangre. Consta de un anlisis cuantitativo, en el cual se determinan los niveles de hemoglobina sangunea, los recuentos absolutos de los elementos celulares; es decir la cantidad de glbulos rojos, blancos y plaquetas, como tambin el hematocrito (porcentaje de glbulos rojos en un volumen de 100ml de sangre) y se calculan las constantes hematolgicas, VCM y CHCM, Volumen corpuscular medio y Concentracin hemoglobina corpuscular media ,respectivamente. Tambin forma parte del hemograma un anlisis cualitativo de las clulas sanguneas en el cual se analizan las caractersticas morfolgicas de cada una de las tres series celulares a travs de un frotis sanguneo realizado de una muestra obtenida por puncin venosa, que es depositada sobre un portaobjetos y luego de ser extendida sobre l, se realiza un proceso de tincin y su posterior observacin al microscopio . Resumiendo podemos decir que el hemograma consta de: Los valores de las constantes hematolgicas nos permite la clasificacin de los cuadros de anemias. Primero definiremos los rangos de referencia para cada uno de los anlisis mencionados Anlisis cuntitativo: Hematocrito (%) Hemoglobina (grs/100 ml) Recuento de elementos celulares: Recuento glbulos rojos o Recuento glbulos blancos o Recuento Plaquetas Calculo de las constantes hematolgicas: VCM y CHCM HEMATOCRITO ( % ) HEMOGLOBINA(gr/dl) RECUENTOS GLOBULOS BLANCOS ( *mm3) PLAQUETAS ( *mm3 ) VCM Anlisis cualitativo: ( hematocrito/ Ng.rojos)*10 5000 -7000 150000-350000 82 92 32 36 anteriormente: MUJER 37-47 12-16 HOMBRE 40-54 14-18

CHCM ( hemoglobina/hematocrito)*100 Formula diferencial de glbulos blancos (Distribucin en porcentaje de los diferentes tipos de glbulos blancos). Caractersticas de color, forma y tamao de los glbulos rojos. Caractersticas de tamao y distribucin de las plaquetas.

En relacin a la serie roja el hemograma nos permite la diferenciacin de las anemias, siendo esta una patologa primaria secundaria de acuerdo a su origen. De acuerdo a los valores de la VCM las anemias se pueden clasificar en:

Si el n de leucocitos (glbulos blancos)

es superior a 8000 hablamos de una

leucocitosis y si este es menor de 5000 hablamos de una leucopenia. Si el n es mayor de 50000 entonces nos encontramos con una hiper-leucocitosis. La distribucin normal de los leucocitos es la siguiente:

Normoctica VCM: 82-92 Microctica VCM: < 82 Macroctica VCM: > 92 De acuerdo a los valores de la CHCM las anemias pueden clasificarse en: Normocrmica CHCM: 32-36 Hipocrmica CHCM: < 32 No existe la hipercroma puesto que en la normocroma, el glbulo rojo est saturado de hemoglobina, por lo que el valor mximo de la CHCM es de 36.0. En relacin a la serie blanca es importante conocer el recuento total de glbulos blancos. Como tambin la distribucin porcentual de los distintos tipos de clulas de la serie blanca que normalmente encontramos en la sangre.

% Eosinfilos Basfilos Neutrofilos: Baciliformes Segmentados Linfocitos Monocitos 1-3 01 04 60-70 20- 30 46

El cuadro

denominado Desviacin a la izquierda , es el aumento en el n de

baciliformes por sobre el 4%, y destacan por ser clulas con ncleo en forma de bastn de bordes paralelos o ligeramente estrechados, sin lobulaciones que pueden adoptar la forma de : U, V, W, N,M,S.

Cuestionario 1. Como se denomina la patologia en la cual, existe una dismucin en el numero de plaquetas? 2. Puede existir una hipercromia? 3. Qu significa el termino Desviacin a la izquierda? 4. De acuerdo a la VCM cmo se clasifican las anemias? 5. Qu significa el termino VHS? Notas:

LABORATORIO N2 Anlisis hematolgicos cuantitativos: 1.- Hematocrito 2.- Hemoglobina 3.-Preparacin de frotis sanguneo

El hemograma es un examen que analiza las variaciones cuantitativas y morfolgicas de los elementos celulares de la sangre, y aporta datos clnicos que permiten formular o confirmar un diagnstico mdico. Los glbulos rojos, eritrocitos o hemates constituyen la serie roja y su anlisis cuantitativo permite la observacin de los cuadros denominados anemias.

Actividad 1 : Determinacin de Hematocrito El hematocrito mide el porcentaje de eritrocitos en un volumen de 100ml de sangre. Como condiciones, este examen no requiere ayuno y el tubo a tomar la muestra es el de tapa lila. Dicho examen se utiliza para control generalmente de la patologa crnica llamada anemia. Esta incluido en el hemograma adems del recuento de reticulocitos que es otro examen que se utilizada para ver si responde la medula a la produccin de hemates ante una anemia por sangramiento. Tambien es un control para las anemias. Un indice alto o bajo de hematocrito depender de diferentes circunstancia, o del momento que este pasando el paciente. Valores normales de hematocrito: Recin nacido 44 a 56 % Entre los 3 y 5 aos 36 a 43 % De los 5 a los 15 aos 37 a 45 % Hombre adulto 40 a 54 % Mujer adulta 37 a 47 % Los resultados anormales de hematocrito nos indican: Un ndice bajo de Hematocrito puede deberse a: Anemia Fallos en la mdula sea (Radiaciones, toxinas, fibrosis, tumores, etc...) Embarazo Hemorragias Hipertirodismo Hemolsis (destruccin de glbulos rojos), por una transfusin Leucemia Problemas de alimentacin Artritis reumatoide Un ndice alto de Hematocrito puede deberse a: Cardiopatas Deshidratacin Eclampsia (en el embarazo) Enfermedades pulmonares crnicas Exceso de formacin de hemates (Eritrocitosis) Policitemia vera

I.-MATERIALES : 1.- Capilares de micro-hematocrito 2.- Plasticina para sellar 3.-Tabla de lectura EQUIPO: 1.- Micro-centrfuga II.- METODOLOGIA: Utilizando los guantes de trabajo proceda a homogeneizar el tubo de muestra. Luego llene el capilar con la muestra de sangre inclinando el capilar hacia abajo colocado en el borde del tubo. Selle con plasticina el extremo inferior del capilar mantenindolo cerrado en el borde superior con el dedo ndice. Centrifugue por 2min. y luego lea en la tabla de lectura ,fijando para ello los dos extremos del capilar en cada uno de los extremos de la misma.

MICROCENTRFUGA

Notas:

Actividad 2: Cuantificacin de Hemoglobina La hemoglobina es una protena que contiene hierro y que le otorga el color rojo a la sangre. Se encuentra en los glbulos rojos y es la encargada del transporte de oxgeno por la sangre desde los pulmones a los tejidos. La hemoglobina tambin transporta el dixido de carbono, que es el producto de desecho del proceso de produccin de energa, lo lleva a los pulmones desde donde es exhalado al aire. Este anlisis mide la cantidad de hemoglobina en gr/dl que existe en un volumen determinado de sangre. Como condiciones, este examen no requiere ayuno y el tubo a tomar la muestra es el de tapa lila. Valores normales de hemoglobina: Recin nacido Entre los 3 y 5 aos De los 5 a los 15 aos Hombre adulto Mujer adulta 13,5 a 19,5 gr/dl 12 a 14 gr/dl 11,5 a 15 gr/dl 13 a 16 gr/dl 11,5 a 14,5 gr/dl

I.-REACTIVOS: 1.- Reactivo de ciano-hemoglobina 2.- Gradilla con 3 tubos 3.- Pipeta de 5 ml 4.- Micropipeta de 20/200 ul 5.- Puntas desechables para micropipeta INSTRUMENTOS DE LECTURA: 1.- Fotmetro Clnico II.-PROTOCOLO Llenar ambos tubos con reactivo de Hemoglobina En el Tubo N1 es el blanco, es decir 5ml de reactivo solamente En el Tubo N2 es la muestra, es decir 5ml de reactivo + 20 uL de muestra Dejar ambos tubos a T ambiente por 5 minutos Luego leer en el fotmetro clnico a =546 nm. El manejo del equipo se explicar en el trabajo prctico.

Los resultados anormales de hemoglobina nos indican: Anemias primarias Cncer Embarazo Enfermedades renales Enfermedades autoinmunes Hemorragias Linfomas Problemas de alimentacin Notas:

Fotmetro
1 2

Actividad 3 Realizacin de un frotis sanguneo ( extensin y tincin ) Es un examen de sangre que brinda informacin acerca del nmero y forma de las clulas sanguneas. Como condiciones, este examen no requiere ayuno y el tubo a tomar la muestra es el de tapa lila. Se pueden distinguir las siguientes formas: Glbulos rojos depranocticos Glbulos rojos en forma de lagrima Glbulos rojos normales Glbulos rojos con eliptocitosis Glbulos rojos con esferocitosis Glbulos rojos depranocticos mltiples Glbulos rojos falciformes y cuerpos de Pappenheimer

MATERIALES.: Portaobjeto limpio y seco Cubreobjeto Lanceta aguja pequea Algodn y alcohol TECNICA : Extensin de la muestra sobre el portaobjetos. 1.- Limpiar el dedo ndice con un algodn ligeramente mojado con alcohol y hacer una puncin con lanceta a fin de obtener una gota de sangre sin presionar el dedo sino dejando que escurra cada gota. 2.- Colocar la segunda gota sobre un portaobjeto limpio y seco, en uno de sus extremos. 3.- Con un cubreobjeto otro portaobjeto haga la extensin de la gota llevndola hacia el otro extremo , pasando slo una vez. 4.- Dejar secar al aire , no soplar ni aplicar calor para no deformar las clulas.

Frotis

Tincin de la muestra (tcnica Maygrunwald-Giemsa). MATERIALES: Solucin Maygrunwald Solucin Giemsa Cronmetro Agua destilada Pipetas

Secar

TECNICA: 1. Colocar el frotis sobre una cmara de tincin en posicin horizontal. 2. Agregar solucin Maygrunwald con una pipeta , cubriendo completamente el frotis (aproximadamente 1.5 ml ), dejarlo por 4 min. 3. Agregar 1.0 ml de agua destilada y esperar 1 min. , soplando con la pipeta Para homogeneizar. 4. Transcurrido este tiempo descartar la solucin que cubre el frotis . 5. Agregar Solucin Giemsa diluda ( 6 gotas por 3 ml de agua destilada ) y dejar por 15 min. 6. Lavar con agua destilada agregndola suavemente sobre el borde del frotis. 7.- Dejar secar en posicin vertical al aire.

Tincin
Notas:

Cuestionario 1. 2. 3. 4. 5. En qu condiciones se toma la muestra para el examen de hemoglobina? Un ndice bajo de hematocrito puede deberse a diferentes patologas. Enumere al menos 3 Qu nos refleja el frotis sanguneo? Defina Hemograma Cules son los valores de Hemoglobina en Mujer adulta y hombre adulto?

LABORATORIO N3
1.-Observacin de frotis sanguneo ( realizar formula leucocitaria ) 2.-Recuento de glbulos blancos ( leucocitos) 3.- Determinacin de grupo sanguneo y factor Rh de una muestra hematolgica. Actividad 1 : Recuento de leucocitos glbulos blancos. Los leucocitos o glbulos blancos son clulas que estn principalmente en la sangre y circulan por ella con la funcin de combatir las infecciones o cuerpos extraos; pero en ocasiones pueden atacar los tejidos normales del propio cuerpo. Es una parte de las defensas inmunitarias del cuerpo humano. Se llaman glbulos blancos ya que ste color es el de su aspecto al microscopio. Hay diferentes grupos de glbulos blancos: los llamados polimorfonucleares (neutrfilos, eosinfilos y los basfilos) y los mononucleares (los linfocitos y los monocitos). El origen de todas las formas de leucocitos es a partir de clulas madres de la mdula sea. La modificacin de la cantidad de leucocitos puede orientar al diagnstico de enfermedades infecciosas, inflamatorias, cncer y leucemias, y otros procesos. Por ello el recuento es muy orientativo en diferentes enfermedades. Adems el porcentaje de cada grupo de leucocitos nos ofrecer una mayor informacin para precisar un diagnstico. Cuando en la medicin de leucocitos se ven clulas jvenes aparecen los neutrfilos en forma de ncleo en forma de bastn (cayados), y un aumento del porcentaje de los glbulos blancos polimorfonucleares, esto se denomina como desviacin "a la izquierda". Este trmino sugiere infecciones bacterianas agudas. Valores normales de leucocitos: Recin nacido Entre los 3 y 5 aos De los 5 a los 15 aos Hombre adulto Mujer adulta 10 a 26 mil/mm3 10 a 14 mil/mm3 5,5 a 12 mil/mm3 4,5 a 10 mil/mm3 4,5 a 10 mil/mm3 MATERIALES: 1.- Reactivo lizante HayemB 2.- Pipetas de recuento de Glbulos blancos con boquilla 3.- Cmara de recuento de Glbulos blancos c/ cubrecmara EQUIPO: 1.-Microscopio METODOLOGIA
Homogenice la muestra y utilizando la pipeta de recuento con boquilla, llene la pipeta hasta la marca de 1.0 con la muestra.
Luego introduzca la pipeta en el reactivo HayemB y complete volumen hasta la marca superior.
Retire la boquilla de la pipeta y homogenice la muestra por 10 min. Luego cargue la cmara de recuento, habiendo colocado previamente el cubre cmara en ella.
Elimine las tres primeras gotas de la pipeta y utilice la siguiente para llenar la cmara.
Coloque la cmara bajo el microscopio y utilizando el lente objetivo 10X, cuente las clulas presentes en las cuatro esquinas de la grilla presente en la cmara. Calcule el recuento de glbulos blancos de la muestra. Actividad 2 : Observacin de frotis sanguneo. Con el frotis realizado en el laboratorio anterior ud. podr observar en el microscopio los distintos elementos celulares sanguneos, identificando :
Glbulos rojos eritrocitos.
Glbulos blancos leucocitos y sus diferentes formas celulares : o Segmentados o Linfocitos o Monocitos, o Eosinfilos o Baciliformes .
Plaquetas. Empleando una pelcula delgada de aceite de inmersin sobre el frotis ya seco , con lente de 40x Ud. deber identificar los distintos elementos celulares y con una gota de aceite sobre el mismo , deber observar con lente de 100x las caractersticas de forma , color y tamao de las clulas sanguneas.

Un numero disminuido de leucocitos (leucopenia) nos indican:

Fallo de la mdula sea (por tumores, fibrosis, intoxicacin, etc...) Enfermedades autoinmunes (Lupus, etc...) Enfermedades del hgado o rin Exposicin a radiaciones Presencia de sustancias citotxicas

Un numero aumentado de leucocitos (leucocitosis) nos indican:

Dao de tejidos en quemaduras Enfermedades infecciosas Enfermedades inflamatorias (por autoinmunidad-reumticas por alergia) Estrs Leucemia

Actividad 3: Determinacin del grupo sanguneo. Tcnica que permite diferenciar los glbulos rojos de los individuos entre s y se basa en la interaccin entre las glucoprotenas que forman parte de la membrana externa de esta clula y el reactivo, un antisuero anti protenas de la membrana del glbulo rojo, que se agrega para la realizacin del test. Estas glucoproteinas pueden ser de tipo A B y pueden estar presentes o no , estar slo una de ellas ambas y de esta manera nos permiten clasificarlos en cuatro grandes grupos:

MATERIALES : Suero anti A Suero anti B Suero anti AB Suero anti D ( Rh ) Portaobjetos Lancetas/ algodn / alcohol TECNICA: Despus de limpiar el pulpejo del dedo con algodn previamente humedecido con alcohol, con una lanceta o aguja realice una puncin de su dedo y coloque 2 gotas de sangre una a cada extremo de un portaobjeto y otras 2 gotas sobre otro portaobjeto, de la misma manera. Aplique al lado de cada una de las gotas de sangre, una gota de suero (Anti A, B, AB, D ) respectivamente y con una varilla u otro portaobjetos homogenice y observe la coagulacin resultante en cada una. La coagulacin se observa como la aparicin de aglutinados sobre el portaobjetos. INTERPRETACION: 1. Una coagulacin positiva indica que el glbulo rojo posee el antgeno para el anticuerpo utilizado. 2. Si por el contrario no hay coagulacin , quiere decir que el rojo no posee el antgeno correspondiente al anticuerpo usado.

GRUPO SANGUINEO A (II) B ( III ) AB ( I ) O ( IV )

ANTGENO ( glucoproteina ) A B AyB Ninguno

ANTICUERPO (circulante en plasma) Anti B Anti A Ninguno Anti A y B

De la misma forma podemos clasificarlos en Rh positivo Rh negativo dependiendo si est presente o no la protena del Rh, sta tiene como propiedad ser de carcter dominante, es decir que para ser Rh negativo debemos ser homocigoto (recesivo).

GRUPO SANGUINEO UTILIZACIN EN LAS TRANSFUSIONES DE SANGRE Puede recibir sangre de Tipo de sangre O-** O+ BB+ AA+ AB SI SI SI SI SI SI ABSI SI SI A+ AB+ BO+ OSI SI SI SI SI SI SI SI Cuestionario 1.SI SI SI SI SI SI

COAGULACION Suero anti A Suero antiB + + + + -

Suero anti AB + + + -

ABSI

AB+ SI SI

AB ( I ) A ( II ) B ( III ) O ( IV )

SI Cuestionario 1.Qu tipo de suero se utiliza para el Rh? 2.- Qu podemos observar en el frotis? 3.- Si un individuo es de sangre A+. De cuales otros tipos puede recibir? 4.- Cules son los valores de referencia de leucocitos en mujeres adultas? 5.- Enumere al menos tres patologas que nos indican una leucopenia Notas:

[**El grupo 0- que se consideraba donante universal, actualmente no se considera como tal ya que otros factores pueden influir en esta compatibilidad.]

LABORATORIO N4
Metabolismo de glcidos: Glicemia, Glucosuria, Hemoglobina glicosilada.

Actividad 1.- Determinacin de la glicemia y glucosuria.: La glucosa es un azcar que es utilizado por los tejidos como forma de energa al combinarlo con el oxgeno de la respiracin. Cuando comemos el azcar en la sangre se eleva, lo que se consume desaparece de la sangre, para ello hay una hormona reguladora que es la insulina producida por el pncreas (islotes pancreticos). Esta hormona hace que la glucosa de la sangre entre en los tejidos y sea utilizada en forma de glucgeno, aminocidos, y cidos grasos. Cuando la glucosa en sangre est muy baja, en condiciones normales por el ayuno, se secreta otra hormona llamada glucagn que hace lo contrario y mantiene los niveles de glucosa en sangre. El tejido ms sensible a los cambios de la glucemia es el cerebro, en concentraciones muy bajas o muy altas aparecen sntomas de confusin mental e inconsciencia. El examen de glicemia mide la concentracin de azucar en la sangre. Este anlisis se realiza para estudiar la posible presencia de una diabetes mellitus. Como es una enfermedad muy compleja y con grandes repercusiones de salud es un anlisis muy discriminativo y til que se realiza de forma bastante rutinaria. Para realizar este anlisis se precisa estar en ayunas al menos las 6 horas previas. Pueden modificar los valores de glucemia y no ser por una diabetes ciertas situaciones: 1. Estrs por enfermedades agudas (infarto cerebral, cardiaco, anestesia general) 2. Los tratamientos con sueros en vena, ya que contienen dextrosa (azcar) 3. Embarazo 4. Medicamentos(antidepresivos, antihipertensivos, hormonas femeninas, etc...) 5. El alcohol y analgsicos pueden disminuirla. Puede aparecer la glucemia aumentada (hiperglucemia) en:
Diabetes mellitus
Enfermedades renales
Feocromocitoma
Hipertiroidismo
Glucagonoma
Pancreatitis aguda
Sndrome de Cushing
Tumores de pncreas
Otras situaciones antes explicadas (estrs, sueros, embarazo, medicamentos) Puede aparecer la glucemia disminuida (hipoglucemia) en:
Dietas excesivas
Enfermedades hepticas
Enfermedad de Addison
Exceso de insulina en diabticos
Hipopitituarismo
Hipotiroidismo
Insulinoma

Metodologa: Se utilizar el mtodo GOD-PAP, un test enzimtico colorimtrico que se basa en el poder reductor de la glucosa y cuyo producto de reaccin se puede medir a una longitud de onda dentro del espectro visible ( 546 nm) y por lo tanto la intensidad del color ser proporcional a la cantidad de glucosa de la muestra. GOD Glucosa + O2+ H2O ------- Acido Glucnico +H2O2 H2O2 + 4-aminoantipirina + ac. 4 Hidroxibenzoico------ N-(4-antipiribenzoquinona ) POD Protocolo de trabajo Tubo : N 1: Blanco : 1.0 ml de reactivo 2: Estandar ( 100mg/dl): 10 ul de estandar + 1.0 ml de reactivo 3 Control : 10ul de control + 1.0ml de reactivo 4 Muestra: 10ul de muestra + 1.0ml de reactivo Incubar por 10 min. a 37 C y luego leer en el fotmetro clnico.

R. Ref. 70-110

Resultados: 1: 2: 3: 4: Notas:

Actividad 2.- Hemoglobina Glicosilada : La formacin de la glicohemoglobina ocurre irreversible y progresivamente en los eritrocitos a travs de los 120 das de vida normal de estas clulas sanguneas. Dado que la concentracin de glicohemoglobina en el eritrocito refleja el nivel promedio de glucosa en la sangre de las 4 a 6 semanas anteriores y es estable por el tiempo de vida de estas clulas, la medicin de la glicohemoglobina proporciona una prueba de gran utilidad clnica para la evaluacin y control de los pacientes diabticos. Uno tiene ms hemoglobina glicosilada si ha tenido niveles altos de glucosa en la sangre. En general, cuanto ms alto sea el nivel de HbA1c, mayor ser el riesgo de desarrollar problemas como: * Enfermedad ocular * Cardiopata * Enfermedad renal * Dao neurolgico * Accidente cerebrovascular Su determinacin se basa en un mtodo fcil y rpido de separacin de la hemoglobina no glicosilada por una resina de intercambio inico.

Resultados:

Notas:

Protocolo de trabajo : a.- Hemlisis : En una copa de muestra agregar : 500 ul de lisante 100 ul sangre (obtenida c/ EDTA) Mezclar por 5 min. a T ambiente . b.- Separacin(HbA1) : Pipetear 100 ul del hemolizado obtenido anteriormente al tubo que contiene la resina. Colocar el mbolo de goma hasta aproximadamente 1 cm. del nivel de la resina. Mezclar por 5 min. Empujar el mbolo hasta el fondo. Verter el sobrenadante en una cubeta de lectura y leer su absorvanciaa 405 nm.

c.- Hemoglobina total: Pipetear 20 ul del hemolizado en un tubo que contiene 5 ml de agua destilada. ( Hbtotal ) Mezclar por 5 min. Leer su absorvancia a 405 nm . d.- Calculo del % de Hemoglobina glicosilada( HbA1 % ) : Cuestionario 1.- Cmo se llama el mtodo para la determinacin de glicemia? 2.- Mientras mas alto el nivel de hemoglobina glicosilada Qu patologas se pueden desarrollar? 3.- Cul es el valor de regencia para la glicemia? 4.- La hemoglobina glicosilada es parmetro de control para que tipos de pacientes? 5.- Enumere al menos 3 patologas que pueden haber cuando se detecta una hiperglicemia

HbA1 = Abs. HbA1 muestra * F ( 7,95 % ) Abs. total de la muestra R.Referencia : Pacientes normales y diabticos estables : 4,5 7,0 % Pacientes diabticos mal controlados : Mayor de 8,5 %

LABORATORIO N5
Metabolismo de lpidos : Colesterol total, Colesterol HDL, Colesterol LDL, Triglicridos

Actividad 1.- Determinacin de Colesterol total y HDL Colesterol. El colesterol es una sustancia suave y serosa que se encuentra en todas partes del cuerpo. El cuerpo necesita un poco de colesterol para funcionar adecuadamente; pero demasiado colesterol puede obstruir las arterias y llevar a cardiopata. Para obtener resultados precisos, no se debe comer ni beber nada durante 9 a 12 horas antes del examen. La persona puede tomar agua, pero debe evitar otras bebidas como caf, t o gaseosa. El mdico le puede solicitar a la persona que deje de tomar medicamentos que puedan afectar el examen. Los medicamentos que pueden incrementar las mediciones de colesterol total abarcan: Esteroides anablicos, Frmacos bloqueadores betaadrenrgicos, Corticosteroides, Epinefrina, ACO, Fenitona, Sulfonamidas, Diurticos tiazdicos, Vitamina D. Los niveles altos de colesterol total pueden ser causados por:





Cirrosis biliar Hiperlipidemias familiares Dieta alta en grasa Hipotiroidismo Sndrome nefrtico Diabetes no controlada

Metodologa: Se utilizar el mtodo enzimtico colorimtrico CHOD-PAP ,donde el Colesterol y sus steres son liberados desde las lipoprotenas por la accin de detergentes y luego estos son hidrolizados por la Enzima Colesterol esterasa y una posterior oxidacin enzimatica del Colesterol por la enzima Colesterol oxidasa , forma el H2O2 que sigue la misma va de reaccin que en la determinacin de glicemia ,produciendo una quinona coloreada que se puede medir dentro del espectro visible y por lo tanto se puede cuantificar la intensidad del color generado a 546 nm. Tubos: 1 Blanco: 1.0ml de reactivo 2 Estandar: 1.0ml de reactivo + 10ul de solucion estandar 3 Control: 1.0ml de reactivo + 10ul de solucion control 4 Muestra: 1.0ml de reactivo + 10ul de muestra Incubar por 10 min. a 37C y luego leer en el fotmetro clnico Para el HDL: EL HDL colesterol debe obtenerse por precipitacin de acuerdo al siguiente protocolo: Muestra (suero) Reactivo precipitante 200ul 500ul

Los niveles bajos de colesterol puede ser causados por:

Hipertiroidismo Enfermedad heptica Malabsorcin (absorcin inadecuada de nutrientes desde el tracto intestinal) Desnutricin Anemia perniciosa Sepsis

Dejar por 10min. a tambiente y luego centrifugar por 15 min. a 4000rpm Luego pipetiar 10ul del sobrenadante y agregar a 1.0ml de reactivo. Leer en fotometro

R Ref. Hasta 200 mg/dl Colesterol Total R.Ref. 35 55 mg/dl Colesterol HDL

A lo que se refiere al colesterol HDL, ste es una lipoprotena de alta densidad, una forma de colesterol "bueno". Las lipoprotenas estn hechas de grasa y protena. Ellas transportan el colesterol, los triglicridos y otras grasas, llamadas lpidos, a diversas partes del cuerpo. La principal funcin del HDL es ayudar a absorber el exceso de colesterol de las paredes de los vasos sanguneos y llevarlo al hgado, donde es descompuesto y eliminado del cuerpo a travs de la bilis. Necesita las mismas condiciones que el colesterol para la toma de muestra.

Resultados:

2..- Determinacin de triglicridos: Los triglicridos forman parte de las grasa del cuerpo humano. Las grasas del cuerpo humano son las grasas neutras, los lpidos conjugados, y los esteroles. Las grasas neutras estn formadas por cidos grasos, linoleico, esterico, araquidnico, y palmtico. La unin de tres cidos grasos de estos mediante una esterificacin produce el triglicrido. Una vez unidos se almacenan en el tejido adiposo (grasa) del cuerpo, para su posterior utilizacin, siendo un almacn de grasas rpidamente utilizables. Se utilizan para producir energa. Los cidos grasos penetran por la dieta y se mantienen en la sangre hasta su depsito. Si esta ingesta - absorcin - depsito se ve alterada aparecen en la sangre en exceso y favorecen el depsito de placas en las venas y arterias. Por ello el anlisis de los triglicridos es una parte de una evaluacin de factores de riesgo coronario. Los triglicridos son una forma de almacenar energa en forma de depsitos en los msculos y en tejido adiposo. Cuando se realizan esfuerzos sin suficiente aporte se movilizan entre las comidas, de acuerdo con la energa que necesite el organismo. Para realizar este anlisis se precisa estar en ayunas al menos las 6 horas previas. Los resultados pueden estar alterados por el embarazo, y por la toma de medicamentos (colestiramina, hormonas femeninas).

Metodologa: Al igual que las determinaciones anteriores , se utilizar una tcnica enzimtica colorimtrica utilizando la formacin de H2O2 que se utilizar para la produccin de una quinona coloreada que se puede medir fotometricamente a 546 nm y la intensidad del color ser directamente proporcional a la concentracin de triglicridos en la muestra , de acuerdo a la siguiente reaccin: GK Glicerol + ATP -------- L-glicerol-3-fosfato + ADP GPO L-glicerol-3-Fosfato + O2 ------- Dihidroxiacetonafosfato + H2O2 POD H2O2 + 2-Clorofenol + 4 Aminoantipirina ----4-Benzoquinona-fenazona + H2O + HCl

Los triglicridos son hidrolizados enzimaticamente a glicerol y acidos grasos libres por la accin de una lipasa especfica. Tubos: 1 Blanco: 1.0ml de reactivo 2 Estandar: 1.0ml de reactivo + 10ul de solucion estandar 3 Control: 1.0ml de reactivo + 10ul de solucion control 4 Muestra: 1.0ml de reactivo + 10ul de muestra Incubar por 10 min. A 37C y luego leer en fotmetro clnico. 3- LDL Colesterol: Para ello se utiliza la siguiente formula: Calculo de LDL Colesterol= Colesterol total - (triglicridos + HDL-colesterol) 5 R .Ref . Menor de 155 mg/dl R Ref. Hasta 150 mg/dl

Los triglicridos aumentados pueden reflejar:

Cirrosis heptica. Diabetes mal controlada. Hiperlipoproteinemia familiar. Hipotiroidismo. Ingesta pobre de protenas en la dieta y alta en carbohidratos. Pancreatitis. Sndrome nefrtico.

Los triglicridos disminuidos pueden reflejar:

Desnutricin Dieta pobre en grasas Hipertiroidismo Sndrome de malabsorcin.

Cuestionario 1.- Defina Triglicridos 2.- Qu tipo de mtodo enzimtico se utiliz para la medicin del colesterol total? 3.- Cules son los valores de referencia del colesterol total, colesterol HDL y colesterol LDL? 4.- Si un paciente obtiene los siguientes resultados: Colesterol total 250mg/dl, Colesterol HDL 25mg/dl y Triglicridos 200 mg/dl. Cul es su colesterol LDL? 5.- Nombre al menos tres patologas que se pueden producir por los niveles altos de colesterol

Resultados:

LABORATORIO N6
Metabolismo de protenas: 1.Protenas totales, 2.Albmina, 3. Acido rico

Las protenas son un constituyente muy importante de las clulas y los tejidos del cuerpo humano. Se componen de aminocidos. Hay diferentes tipos de protenas con diferentes funciones, son as protenas los enzimas, algunas hormonas, la hemoglobina, el LDL (transportadora de colesterol), el fibringeno, el colgeno, las inmunoglobulinas, etc . Las protenas totales del suero se pueden separar en dos grandes grupos la Albmina y las globulinas. La albmina es la protena de ms concentracin en la sangre. La albmina transporta muchas molculas pequeas (bilirrubina, progesterona, y medicamentos), y tiene tambin la funcin de mantener la presin sangunea ya que favorece la presin osmtica coloidal para mantener lquidos en el torrente sanguneo y que no pasen a los tejidos, manteniendo un equilibrio. Las globulinas se pueden dividir en alfa-1, alfa-2, beta y gamma globulinas. Por ello es importante que se realice la determinacin de ambos parmetros en conjunto y no de manera aislada , de tal manera de conocer , no solo la albmina sino tambin las globulinas y el ndice albmina /globulina. La albmina representa aproximadamente el 60% de las protenas circulantes y son importantes transportadores de otras molculas tales como : bilirrubina, progesterona, medicamentos, etc, adems de contribuir a la mantencin de la presin arterial a travs de la presin osmtica coloidal .Es sintetizada en el hgado , por lo tanto un dao de las clulas hepticas bajar los niveles sricos. Una mala funcin renal , har que se pierda albmina por la orina , la que se detectar tempranamente midiendo la microalbuminuria en orina de 24 horas, y esto es principalmente importante en pacientes portadores de diabetes que desarrollan la denominada nefropata diabtica. Sus valores tambin disminuirn en estados de malnutricin, los que pueden tener diversas causas dependiendo de la edad del paciente y otras causas a investigar por el mdico tratante. Actividad 1: Determinacin de protenas en suero La determinacin de protenas totales se realiza para evaluar la posible presencia de enfermedades nutricionales, estado nutricional tras intervenciones de ciruga, enfermedades del rin o del hgado, o bien que el cuerpo no absorba bien suficientes protenas. Si el valor de las protenas totales est alterado se debe realizar un estudio pormenorizado de cada grupo, albmina y alfa-1, alfa-2, beta y gamma globulinas, para saber cul es el desequilibrio existente. En algunos casos la albmina est baja y el resto de protenas est normal, debido a que la albmina es ms pequea y al aumentar la capilaridad puede perderse del espacio sanguneo a los tejidos y no hacerlo as las globulinas. Por ejemplo ocurre as en las enfermedades reumticas o colagenosis. En las enfermedades del hgado puede encontrarse lo mismo (albmina baja con protenas totales normales), en este caso es porque las globulinas se sintetizan en el retculo endotelial y la albmina en el hgado. Para este examen el paciente no requiere de ayuno. Puede aparecer baja la concentracin de protenas en suero en:









Agammaglobulinemia, Ascitis, Hemorragias, Enfermedades renales (glomerulonefritis, sndrome nefrtico), Enfermedades del hgado(hepatitis, cirrosis, etc...), Enfermedades intestinales con malabsorcin (Enfermedad de Crohn, enfermedad de Whipple), Enfermedades por deficiencit de inmunoglobulinas, Enteropatas con prdida de protenas, Quemaduras, Malnutricin. Resultados: Rango referencia : Nios menores de 3 aos : 5.4 - 8.7 g/dl Adultos y nios desde 3aos: 6.7 8.7 g/dl Recin nacidos : 5.2 9.1 g/dl Metodologa: La determinacin de protenas en suero se realizar por una tcnica fotocolorimtrica , denominada BIURET, basada en la formacin de un complejo de color violeta , entre las protenas y el in cobre , en una solucin alcalina. Una reaccin sencilla y ampliamente utilizada para la determinacin de protenas. Tubos: 1 Blanco: 1.0ml de reactivo 2 Estandar: 1.0ml de reactivo + 10ul de solucion estandar 3 Control: 1.0ml de reactivo + 10ul de solucion control 4 Muestra: 1.0ml de reactivo + 10ul de muestra Incubar por 15 min. a 37 C y luego leer en fotmetro clnico.

Puede aparecer alta la concentracin de protenas en suero en:

Enfermedades inflamatorias crnicas, Enfermedades infecciosas crnicas, Enfermedad de Waldenstrom, Mieloma mltiple.

Actividad 2: Examen de albmina La determinacin de albmina se realiza para evaluar la posible presencia de enfermedades del rin o del hgado, o bien que el cuerpo no absorba bien suficientes protenas. El hgado es la principal fuente de sntesis de albmina, si las clulas hepticas estn daadas la albmina en el suero disminuir. Si el rin funciona mal se perder albmina por la orina , apareciendo baja la concentracin de la misma en el suero. En estados carenciales por dietas exageradas o por malnutricin tambin se puede encontrar baja la albmina en el suero. Hay medicamentos que pueden alterar la determinacin de la albmina en el suero, y puede aparecer ms elevada si se estn tomando esteroides anabolizantes, andrgenos, hormona del crecimiento y la insulina. La realizacin del examen de albuminmia se basa en el cambio de coloracin del indicador verde de bromocresol a pH cido , el cual en presencia de albmina cambia de color amarillo limn a verde .La intensidad del color entonces formado es proporcional a la concentracin de albmina en la muestra. Para este examen no se requiere ayuno. Puede aparecer baja la albmina en suero en:





Ascitis Enfermedades renales (glomerulonefritis, sndrome nefrtico) Enfermedades del hgado (hepatitis, cirrosis,etc ...) Enfermedades intestinales con malabsorcin (Enfermedad de Crohn, enfermedad de Whipple) Quemaduras Malnutricin Metodologa: R.Referencia : 3.5 5.0 g/dl.

Tubos: 1 Blanco: 1.0ml de reactivo 2 Estandar: 1.0ml de reactivo + 10ul de solucion estandar 3 Control: 1.0ml de reactivo + 10ul de solucion control 4 Muestra: 1.0ml de reactivo + 10ul de muestra Dejar a temperatura ambiente por 10 min . y leer en fotmetro clnico a 620 nm.

Actividad 3: Medicin de acido rico El acido rico es el resultado del metabolismo de las purinas ( restos de DNA y RNA) y se excreta principalmente por el rin . Sus niveles plasmticos entonces pueden elevarse por un aumento en la destruccin celular , como ocurre en algunos tipos de cancer , en una falla de tipo renal , pero la causa mas comn es la denominada artritis gotosa gota , proveniente del consumo elevado de carnes rojas y/o mariscos. El paciente necesita al menos 6 horas de ayuno para el examen. Pueden modificar los valores de cido rico y no ser por una gota ciertas situaciones:
Estrs en general puede elevar los niveles de cido rico.
La utilizacin de contrastes radiolgicos tambin
Ciertos productos y medicamentos pueden aumentar el cido rico, la cafena, el alcohol, las teofilinas, etc...
Pueden disminuir los valores de cido rico, la aspirina, el alopurinol, los corticoides, las hormonas femeninas. Puede aparecer el cido rico elevado en sangre (hiperuricemia) en:
Acidosis metablica
Alcoholismo
Diabetes mellitus
Dieta rica en purinas (carnes rojas, vsceras de animales, embutidos, mariscos, frutos secos)
Eclampsia en el embarazo
Exceso de ejercicio
Fallo renal
Gota
Hipoparatiroidismo
Lesiones graves en los tejidos (quemaduras, traumatismos)
Leucemia
Litiasis renal Puede aparecer el cido rico disminuido (hipouricemia) en:
Policitemia vera
Dietas baja en purinas (protenas)
Quimioterapia del cncer
Sndrome de Fanconi
Enfermedad de Wilson

Metodologa: Su determinacin en el laboratorio se basa en un test enzimtico-colorimtrico , de acuerdo a la siguiente reaccin:

uricasa Acido rico + 2H20 ---------------- Alantoina +CO2 + H2O2 peroxidasa 2H2O2 +Acido3,5 dicloro-2-hidroxibenzeno sulfnico+ 4 aminofenazona ------------------- N-(4 antipiril)-3-cloro-5-sulfonato-p-benzoquinina Metodologa: Cuestionario 1.-Cmo se llama la tcnica por la cual se determinan las protenas totales en suero? 2.-Nombre al menos 3 patologas las cuales tienen relacin con la elevacin de acido rico en sangre 3.-El examen de albmina necesita ayuno el paciente? 4.- Qu medicamentos pueden alterar la concentracin de albmina?

R.Referencia : : Hombres: 3.4 7.0 mg/dl Mujeres : 2.4 5.7 mg/dl

Tubos: 1 Blanco: 1.0ml de reactivo 2 Estndar: 1.0ml de reactivo + 20ul de solucion estandar 3 Control: 1.0ml de reactivo + 20ul de solucion control 4 Muestra: 1.0ml de reactivo + 20ul de muestra Dejar a temperatura ambiente por 10 min . y leer en fotmetro clnico a 620 nm.

Notas:

LABORATORIO N7
Funcin renal 1.Creatininemia, 2.Creatininuria, 3.Clearance de creatinina, 4. Fosfemia

Actividad 1. Realizacin del clearance de creatinina La creatinemia: La creatinina es el resultado de la degradacin de la creatina, que es un componente de los msculos. La creatinina puede ser transformada en ATP que una fuente de alta energa para las clulas. La produccin de creatinina depende de la modificacin de la masa muscular, y ello vara poco y los niveles suelen ser muy estables. Es un parmetro que nos indica funcin renal. La creatinemia es la concentracin de creatinina en sangre. Para ello el paciente necesita un ayuno de al menos 6 hrs. Puede aparecer la creatinemia elevada en sangre en:
Acromegalia
Deshidratacin
Distrofia muscular
Eclampsia
Glomerulonefritis
Nefropata diabtica
Obstrucciones renales (piedras, tumores)
Pielonefritis
Problemas cardiacos Puede aparecer la creatinemia disminuida en:
Distrofia muscular avanzada
Miastenia gravis La creatinuria: La creatinina es eliminada por completo del cuerpo por medio de los riones. Se puede utilizar una muestra de orina aleatoria o una muestra de orina de 24 horas. Los resultados anormales de la creatinina en orina y de la depuracin de creatinina a menudo son inespecficos, pero pueden deberse a cualquiera de las siguientes afecciones:
Glomerulonefritis
Dieta rica en carne
Insuficiencia renal
Distrofia muscular (etapa tarda)
Miastenia grave
Azotemia prerrenal
Pielonefritis
Flujo sanguneo renal reducido (como en shock o insuficiencia cardaca congestiva)
Rabdomilisis
Obstruccin de las vas urinarias

Clearence de Creatinina: El clearence de creatinina, es til para medir funcin renal. Para ello se necesitan los valores de creatinemia y creatinuria. Las tasas a las que distintos metabolitos son depurados del plasma constituyen un mtodo til para determinar cuantitativamente la eficacia con que los riones excretan diversas sustancias. EL aclaramiento clearance renal de una sustancia es el volumen del plasma que es completamente depurado de esa sustancia por los riones en la unidad de tiempo. En el caso de la creatinina, por ser un producto de desecho metablico no se reabsorbe, por lo que su tasa de excrecin es igual a su tasa de filtracin: Tasa excrecin= tasa filtracin = TFG * concentracin plasmtica En condiciones de equilibrio , la tasa de excrecin se iguala a la tasa de produccin de creatinina aunque la TFG disminuya, entonces la tasa normal de excrecin de creatinina se mantiene a expensas de una elevacin de la concentracin plasmtica de creatinina . De esta manera el clearance de creatinina es utilizado para evaluar la funcin renal y para ello debemos medir la concentracin de creatinina plasmtica y la concentracin de creatinina en una muestra de orina recolectada por el paciente durante 24 hrs., midiendo el volumen de orina recolectado en ese tiempo, calculando el clearance con la siguiente frmula:

Cl. creatinina =concentracin creatinina orina( mg/dl) Concentracin creatinina sangre (mg/dl)

* volumen orina 24 hrs. 1440

En el laboratorio utilizaremos la tcnica de Jaff sin desproteinizacin para medir los niveles plasmticos y urinarios de creatinina, utilizando una muestra de suero y orina (diluida 1/100) respectivamente. Esta es una tcnica enzimtica de punto final que utiliza la formacin de un compuesto de color amarillo anaranjado entre la creatinina y el cido pcrico en un medio alcalino, siendo un mtodo altamente especfico sin reacciones secundarias que causen interferencias.

R.Referencia : Creatininemia : F : 0,60 1,10 mg/dl M : 0,70 1,30 mg/dl Creatininuria : 0,90 1,50 grs/ 24 hrs. Clearance creatinina : 95 160 ml/min.

Metodologa: Tubos: 1 Blanco: 200ul de reactivo n1 + 800ul de reactivo n2 2 Estndar: 200ul de reactivo n1 + 800ul de reactivo n2 + 50ul solucin estndar 3 Control: 200ul de reactivo n1 + 800ul de reactivo n2 + 50ul solucin control 4 Muestra: 200ul de reactivo n1 + 800ul de reactivo n2 + 50ul de muestra

Resultados:

Llevar a bao a 37C y agregar a cada tubo 50 ul de: estndar, control muestra (suero u orina diluida 1/100) segn corresponda y medir individualmente en el fotmetro; es decir una vez que agregue el volumen de estndar al tubo debe medir su cintica en el fotmetro, una vez que ste le ha entregado el resultado correspondiente , agregar entonces el volumen de control al tubo que corresponde y medir su cintica , finalizado este realizar el mismo proceso con la muestra, ya sea esta suero u orina. De esta forma obtendr los valores de creatininemia y creatininuria necesarios para calcular el Clearance de creatinina.

Actividad 2: Fosfemia El fsforo es un mineral esencial para la formacin de los huesos , aproximadamente el 85 % del fsforo del cuerpo humano se encuentra en los huesos y dientes , sin embargo se requiere , no slo para estos tejidos , sino que cada clula de nuestro organismo necesita de este mineral para su funcionamiento por su rol en el equilibrio Acido-Base . Su control depende de la hormona PTH y de los mecanismos de filtracin y reabsorcin renal. Los bajos niveles de fsforo en suero estn asociados principalmente a un hiper-paratiroidismo primario o exceso de vitamina D. Los altos niveles de este mineral en el suero estn aso-ciados a dao renal, ingesta de alcohol, metstasis sea por la dieta. Por lo anteriormente sealado la determinacin de fsforo en el suero no es por s slo un buen indicador de alguna patologa en particular sino que debe estar integrado en un conjunto de exmenes de laboratorio, con el fin de entregar un diagnstico clnico. Su valoracin en suero es importante como indicador de tratamiento y evolucin de cualquiera de las patologas anteriormente mencionadas. Los niveles por encima de lo normal pueden indicar:
Metstasis sea
Hipocalciemia
Hipoparatiroidismo
Aumento de la ingesta de fosfato en la dieta o por va IV
Enfermedad heptica
Insuficiencia renal
Sarcoidosis Los niveles por debajo de lo normal pueden indicar:
Cetoacidosis diabtica
Hipercalciemia
Hiperinsulinismo
Hiperparatiroidismo
Muy poca ingesta de fosfato o vitamina D en la dieta, ocasionando raquitismo (niez) u osteomalacia (adultez) Lo siguiente puede afectar los niveles de fsforo:
Anticidos
Enemas que contengan fosfato de sodio
Suplementos de vitamina D en exceso
Administracin de glucosa a travs de una vena (intravenosa)
Laxantes que contengan fosfato de sodio
Meticilina

Mtodo : Un mtodo directo para la determinacin de fosfato inorgnico, se basa en la reaccin de ste con el Molibdato de amonio en medio cido, formando un complejo de color amarillo, con un mximo de absorvancia a 340 nm. Molibdato de Amonio +Ac.Sulfrico+ Fosfato Complejo Fosfomollibdato

Tubos: 1 Blanco: 1.0ml de reactivo 2 Estndar: 1.0ml de reactivo + 10ul de solucion estandar 3 Control: 1.0ml de reactivo + 10ul de solucion control 4 Muestra: 1.0ml de reactivo + 10ul de muestra Mezclar e incubar por 10 min. a T ambiente y medir en el fotmetro clnico a 340 nm Cuestionario 1.- Qu es la creatinina? 2.- En que tipos de pacientes es de gran utilidad realizarle el clearence de creatinina? 3.- Mencione los valores de referencia de creatinemia, creatinuria y clearence. 4.- Para la fosfemia, el mtodo a utilizar es directo o indirecto? 5.- Los niveles por debajo de lo normal, en el caso del fsforo qu patologas nos indican? (Mencione 5)

R.Referencia : Nios ( Menor de 15 aos) : 4,5 - 5,5 mg/dl Adultos : 2,7 - 4,5 mg/dl Resultados:

Notas:

LABORATORIO N8
Funcin heptica : 1. Bilirrubina directa, 2.Bilirrubina total, 3.Transaminasas oxlica(TGO), 4.Transaminasas pirvica (TGP)

El hgado es el rgano metablico mas importante, en el se desarrollan las rutas metablicas ms importantes como lo son la gliclisis y gluconeognesis, -oxidacin de cidos grasos y la sntesis de los mismos, como tambin la sntesis de protenas entre otras. Por ello, un dao agudo o crnico en este rgano deber ser evaluado en el tiempo a fin de conocer cul ser su efecto en las mltiples funciones que este desarrolla. Para ello se ha diseado un conjunto de exmenes denominado Pruebas hepticas, estas se dividen en: a.- Marcadores de la funcin heptica: 1.- Albuminemia. 2.- Protrombinemia( Tiempo de protrombina) 1.- ASAT( GOT) Aspartato aminotransferasa 2.- ALAT ( GPT) Alanino aminotransferasa 3.- Fosfatasa Alcalina 4.-GGTP Gama glutamil transpeptidasa 5.-Bilirrubina total y directa 1.- Serologa viral 2.- Test autoinmunes

b.- Marcadores de enfermedad: heptica via biliar

c.- Pruebas especficas:

De los marcadores de enfermedad heptica ASAT y ALAT , ambas son enzimas marcadoras de la destruccin celular , es decir cuando hay dao de la clula heptica estas enzimas salen hacia la circulacin sangunea ,siendo ALAT de mayor especificidad, ya que ASAT puede alterarse tambin cuando hay dao en el corazn msculo. Cuando el dao heptico es severo (Hepatitis viral aguda) los valores de estas enzimas pueden estar, entre las centenas hasta miles U/L, siendo que sus valores de referencia son de 10 a 35 U/L aproximadamente dependiendo del sexo del paciente. Sin embargo en una cirrosis heptica alcanzan elevaciones leves moderadas de sus valores (2 3 veces su valor normal hasta 300 U/L ), por lo que son utilizadas principalmente para evaluar el avance de una hepatitis aguda crnica y evaluar el tratamiento con corticoides. En relacin a la Fosfatasa alcalina y GGTP estas son enzimas que se alteran cuando se interrumpe el drenaje de la bilis, ya sea por un tumor o bien por una enfermedad heptica causada por alcohol o drogas, donde se bloquean los conductos pequeos dentro del hgado. Como la fosfatasa alcalina no es slo heptica (hueso,intestino, placenta), debe realizarse la determinacin enzimtica de ambas, para corroborar la anomala de naturaleza heptica. Si encontramos un valor elevado de GGTP con niveles de Fosfatasa Alcalina normales se deber principalmente a cambios enzimticos inducidos por el abuso de alcohol y/o medicamentos y no por un dao en la clula heptica. La bilirrubina es el principal pigmento de la bilis en el hombre y su elevacin produce la denominada ictericia (bili >3.0mg/dl) dado que la bilirrubina proviene del grupoHEME sus niveles plasmticos se elevan cuando hay una enfermedad heptica una destruccin mayor de lo normal de los glbulos rojos. Los niveles de bilirrubina en sangre son considerados como una prueba heptica real del funcionamiento de este rgano al evaluar la capacidad de ste para recoger, producir y segregar la bilis a la secrecin biliar. En cuanto a la Albumina y la protrombina, ambas son protenas sintetizadas en el hgado, la primera de ella es una protena pricipalmente de transporte, mientras que la segunda juega un rol importante en la coagulacin sangunea, por lo tanto ambas determinaciones bioqumicas se encontraran bajo los niveles de referencia cuando nos encontremos en un dao heptico agudo crnico. Notas:

Actividad 1: Determinacin de Bilirrubina Para este examen el paciente necesita a lo menos 4 hrs de ayuno. Los niveles aumentados de bilirrubina total e indirecta no conjugada pueden indicar:






Anemia hemoltica Eritroblastosis fetal Enfermedad de Gilbert Ictericia fisiolgica del recin nacido Otras anemias Problemas en las transfusiones de sangre Resolucin de un gran hematoma Los niveles aumentados de bilirrubina directa conjugada pueden indicar:





Cirrosis Hepatitis Obstruccin de va biliar (colangitis, colelitiasis) Tumores de vas biliares Sndrome de Dubin-Jhonson Sndrome de Rotor

La bilirrubina es convertida en azobilirrubina por el cido sulfanlico diazotado , esta azolirrubina es coloreada y por lo tanto se puede medir espectrofotometricamente a 546 nm. La intensidad del color formado es proporcional a la concentracin de bilirrubina presente en la muestra. En el suero existen dos formas de bilirrubina: a.-Bilirrubina-glucoromida (bilirrubina directa)que reacciona directamente en solucin acuosa. b.-Bilirrubina libre (bilirrubina indirecta) que requiere la solubilizacin con DMSO (Dimetilsulfxido) . A) Determinacin de bilirrubina total: Reactivos ( R1): Dimetilsulfxido, DMSO Acido sulfanlico Acido clorhdrico ( R2) : Nitrito de Sdio R.Referencia : 0.5 1.5 mg/dl Tubos: 1 Blanco: 1,5ml de reactivo 1 2 Estndar: 1.5ml de reactivo 1 + 50ul de reactivo 2 + 100ul de solucin estndar 3 Control: 1.5ml de reactivo 1 + 50ul de reactivo 2 + 100ul solucion control 4 Muestra: 1.5ml de reactivo 1 + 50ul de reactivo 2 + 100ul de muestra Mezclar e incubar a temperatura ambiente por 5 min. Leer en fotmetro clnico. Clculo de la concentracin : Abs. muestra - Abs. blanco * f ( 19,1 ) Resultados:

B) Determinacin de Bilirrubina directa: Reactivos (R1) : Acido sulfanlico Acido clorhdrico (R2) : Nitito de Sodio

R.Referencia :0.01 0.20 mg/ Tubos: 1 Blanco: 1,5ml de reactivo 1 2 Estndar: 1.5ml de reactivo 1 + 50ul de reactivo 2 + 100ul de solucin estndar 3 Control: 1.5ml de reactivo 1 + 50ul de reactivo 2 + 100ul solucion control 4 Muestra: 1.5ml de reactivo 1 + 50ul de reactivo 2 + 100ul de muestra Mezclar e incubar a temperatura ambiente y exactamente a los 5 min. de agregado R2 leer en fotmetro clnico. Calculo de la concentracin : Abs. muestra Abs. blanco * f ( 14.0) Notas:

Actividad 2: Determinacin de Transaminasas TGO y TGP A) Determinacin de ASAT ( TGO ) : Para este examen el paciente necesita a lo menos 4 hrs de ayuno. Los niveles aumentados de TGO pueden indicar:















Alcoholismo Anemia hemoltica Colestasis (obstruccin de va biliar) Cirrosis Distrofias musculares Enfermedades muculares Hepatitis Infecciones vricas (mononucleosis, ...) Infarto de miocardio Intervenciones de ciruga cardiaca Isquemia heptica Medicamentos txicos del hgado Necrosis heptica Pancreatitis aguda Traumatismos musculares Tumor heptico

Tubos: 1 Blanco: 800ul de reactivo 1 2 Estndar: 800ul de reactivo 1 + 200ul de reactivo 2 + 100ul de solucin estndar 3 Control: 800ul de reactivo 1 + 200ul de reactivo 2 + 100ul solucion control 4 Muestra: 800ul de reactivo 1 + 200ul de reactivo 2 + 100ul de muestra Una vez agregada la muestra se activa el cronmetro y se lee la absorvancia cada 1 min. por un perodo de 3 min. Calculo de la actividad enzimtica ( U/L) Promedio de: ( A3 A2) ( A2- A1) El promedio de las diferencias de absorvancias a 340 nm se multiplica por un factor dependiente de la temperatura de medicin : F ( 952) a 25C. R.Referencia : Hombre : 5 17 U/L Mujer 5 15 U/L

Resultados:

Los niveles disminuidos de TGO pueden indicar:

Beri-Beri Cetoacidosis diabtica Embarazo Enfermedades renales

Notas:

La reaccin por la cual se lleva la obtencin de la concentracin de ASAT es la siguiente: TGO 2 oxoglutarato + L-Aspartato MDH Oxalacetato + NADH + H+ Malato + NAD+ Glutamato + Oxalacetato

La desaparicin de NADH es medido espectrofotometricamente a 340 nm y directamente proporcional a la actividad de ASAT ( TGO) presente en la muestra. Es por tanto una tcnica enzimtica en la cual se mide la disminucin de la absorvancia de NADH a 340nm a intervalos de tiempos regulares (cada 1 min durante 3 min).

Resultados: A) Determinacin de ALAT ( TGP): Para este examen el paciente no necesita ayuno previo. Los niveles aumentados de TGP pueden indicar:
















Alcoholismo Anemia hemoltica Cncer de hgado Cirrosis Distrofia muscular Enfermedades renales agudas Enfermedades musculares primarias. Enfermedad de Wilson Hepatitis Infecciones vricas (mononucleosis, ...) Infarto de miocardio Intervenciones de ciruga cardiaca Isquemia heptica Medicamentos txicos del hgado Necrosis heptica Pancreatitis aguda Traumatismos musculares R.Referencia : Hombre : 5 23 U/L Mujer : 5 19 U/L

Notas:

La reaccin por la cual se lleva la obtencin de la concentracin de ALAT es la siguiente: TGP 2- Oxoglutarato + L-Alanina ------------- Glutamato + Piruvato LDH Piruvato + NADH + H+ -------------- Lactato + NAD+ La desaparicin de NADH es medida espectrofotometricamente a 340 nm y es directamente proporcional a la actividad de TGP en la muestra.Es por tanto una tcnica enzimtica que mide la disminucin de Absorvancia a intervalos regulares de tiempo. Metodologia: Tubos: 1 Blanco: 800ul de reactivo 1 2 Estndar: 800ul de reactivo 1 + 200ul de reactivo 2 + 100ul de solucin estndar 3 Control: 800ul de reactivo 1 + 200ul de reactivo 2 + 100ul solucion control 4 Muestra: 800ul de reactivo 1 + 200ul de reactivo 2 + 100ul de muestra Una vez agregada la muestra se enciende el cronmetro y se mide la absorvancia cada 1 min. durante 3 min. y se obtiene el promedio de las diferencias de Absorvancia ( A3-A2) y ( A2-A1).El clculo de la actividad se realiza de la misma forma que TGO. Los rangos de referencia dependen de la temperatura a la cual se mida la actividad enzimtica.

Cuestionario 1.- Nombre los marcadores de enfermedad hepatica o biliar. 2.-En que condiciones se alteran la fosfatasa alcalina y GGTP? 3.- Qu es la ictericia? 4.-Nombre al menos 5 patologias correspondiente al aumento en la concentracin de TGO 5.- Nombre los rangos de referencia de TGO, TGP, Bilirrubina total y directa.