Aula Prtica 3: Teste da eficcia da ao de agentes qumicos.

Exame microscpico dos microrganismos

Mtodos Qumicos
Antissptico uso tpico em tecidos vivos para inibio do crescimento Desinfetante inibe o crescimento de microrganismos (formas vegetativas) em material inanimado Nveis: Baixo,
intermedirio e alto

Antimicrobianos utilizados para o tratamento de doenas infecciosas

Agentes Alquilantes
Agentes qumicos: Glutaraldedo e formaldedo (desinfetante e esterilizante) e xido de etileno (esterilizante) Nvel alto Mecanismo de ao: Alquilam grupos COOH, -OH, -SH e NH2

Formaldedo

Glutaraldedo

Fenis
Agentes qumicos: Fenol e cresol (desinfetantes) Nvel baixo e intermedirio Mecanismo de ao: Desnaturam protenas

Fenol

o-Cresol

Biguanida
Agentes qumicos: Clorexidina(antissptico) Mecanismo de ao: Danificam membrana citoplasmtica

Halognios
Agentes qumicos: Cloro (Cl2) e Hipoclorito de sdio(NaClO) (desinfetantes) + H2O cido hipocloroso (HClO)- Fcil difuso na clula Iodo(I2) (antissptico) Nvel intermedirio
Mecanismo de ao: Oxidam grupos SH, -NH2 de protenas, complexando-as e inativando-as

Quaternrio de Amnio
So detergentes inicos surfactantes, derivados da amnia Agente qumico: Cloreto de benzalcnio (desinfetante) Nvel baixo Mecanismo de ao: Danos na membrana citoplasmtica

Peroxignios
Agente qumico: Perxido de Hidrognio (H202) (desinfetante, esterilizante e antissptico), cido peractico e oznio (O3) (desinfetantes) Nvel alto Mecanismo de ao: DNA e componentes celulares

Perxido de Hidrognio

lcool
Agente qumico: lcool etlico e isoproplico (desinfetante e antissptico) Nvel intermedirio Mecanismo de ao: Desorganiza lipdeos de membrana

lcool isoproplico lcool etlico

Exame microscpico dos microrganismos

Exame microscpico dos microrganismos

A fresco: Suspenso celular aplicada diretamente sobre a superfcie da lmina e coberta imediatamente com uma lamnula Retira-se parte de uma colnia e coloca-se diretamente na lmina, em seguida acrescenta-se soluo salina e cobre-se com uma lamnula . Corante pode ser adicionado ou no Fixadas e coradas: Preparo do esfregao pelo espalhamento de uma gota de suspenso de microrganismos na superfcie de uma lmina e deixar secar naturalmente, ou pelo calor, ou pelo emprego de agentes qumicos. A coagulao das protenas adere a clula a superfcie da lmina impedindo que a preparao seja carreada pelas lavagens durante a colorao

Teste da eficcia da ao de agentes qumicos

1. Em placa de Petri contendo meio de cultura, delimitar trs regies e marcar regies 1, 2 e 3. 2. Sobre a superfcie do meio, comprimir ligeiramente o polegar na regio 1, com cuidado para no ferir o gar 3. Umedecer o polegar no papel de filtro embebido com cultura de Serratia e comprim-lo ligeiramente na regio 2 4. Lavar o polegar com o agente antissptico escolhido 5. Secar ao ar e comprim-lo na regio 3 6. Anotar o composto utilizado, identificar a placa, embrulhar e incubar a temperatura ambiente (28C, 24-72h)

Observao de lminas prontas Esporos de Bacillus megaterium (corados por Schaeffer-Fulton) Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus e Escherichia coli Adicionar uma gota de leo de imerso e examinar ao microscpio ptico com a objetiva de imerso
Objetiva de Imerso(100X): Deve ser utilizado o leo de imerso para que o ndice de refrao seja igual para a lmina de vidro e o leo. Isto faz com que os raios luminosos no se dispersem ao atravessarem o conjunto lmina-leo, permitindo a entrada de um grande cone de luz na objetiva. E assim permite uma melhor resoluo.

Interpretao dos Resultados (Prtica 3)

1. Teste da eficcia da ao de agentes qumicos Na regio 1 deve crescer microrganismos presentes na flora normal do dedo. Na regio 2 o crescimento deve ser de Serratia marcescens, mas poder ocorrer o crescimento de bactrias da flora normal do dedo. Na regio 3, se o antissptico utilizado for 100% eficaz, no deve crescer nenhum microrganismo.

Interpretao dos Resultados (Prtica 3)

2. Exame microscpico dos microrganismos Lminas de Bacillus megaterium. Distinguir os esporos (corados em verde) das clulas vegetativas (coradas em vermelho) Bactrias coradas pelo Gram: Distinguir o tamanho, forma e a reao ao Gram: Gram+ (roxas) Gram (vermelhas)