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COLETA E PRESERVAO DE AMOSTRAS DE GUA

Recomendaes, Cuidados e Procedimentos

Prof. Esp. Paulo Henrique Lopes Anlises de Laboratrio e Tcnicas de Amostragem FACTHUS

COLETA E PRESERVAO DE AMOSTRAS DE GUA


Recomendaes , Cuidados e Procedimentos

Coleta de amostras dgua, embora possa parecer uma tarefa relativamente simples, pode representar o sucesso de um Programa de Monitoramento. Do correto planejamento das atividades de campo depende toda uma rede de informaes que podem ser geradas.

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Recomendaes , Cuidados e Procedimentos

A necessidade de padronizao quanto aos procedimentos rotineiros de trabalho de campo essencial para o acompanhamento da qualidade da gua dos corpos hdricos por ela gerenciados, facilitando, desta forma, a anlise de sua evoluo no tempo, alm de contribuir significativamente para a obteno de resultados representativos que possam subsidiar medidas relativas operao dos audes e mitigaco de impactos negativos sobre a qualidade de suas guas.

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Recomendaes , Cuidados e Procedimentos

As recomendaes e cuidados aqui apresentados fazem parte das normatizaes de procedimentos elaboradas para implementao da Rede de Monitoramento da Qualidade da gua (RMQA) e servem como referncia no treinamento dos tcnicos diretamente envolvidos com as atividades de coleta de amostras de gua em campo.

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Da correta execuo dos procedimentos depende a confiabilidade dos resultados finais e, portanto, as aes resultantes da interpretao dos dados gerados. O simples fato de abstrair uma amostra do seu local de origem e coloc-la em contato com as paredes de recipientes e, portanto, sujeitando-a a um novo ambiente fsico, pode ser suficiente para romper esseequilbrio natural e conferir mudanas na sua composio.

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O intervalo de tempo entre a coleta das amostras e a realizao das anlises pode comprometer sobremaneira sua composio inicial, especialmente quando faz-se necessrio a avaliao da concentrao de substncias que encontram-se em quantidades traos (microquantidades), ou no caso de amostras biolgicas, quando necessita-se manter a integridade dos organismos, evitando-se lise celular ou perda de caractersticas morfolgicas.

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No existe um mtodo universal de preservao de amostras de diferentes naturezas. Na realidade, a completa e inequvoca preservao impraticvel, sendo impossvel manter a estabilidade para cada constituinte. No entanto, o emprego de tcnicas de preservao adequadas e a seleo correta de frascos de armazenamento podem retardar as alteraes qumicas e biolgicas que acontecero, inevitavelmente, aps abstrao da amostra de seu ambiente natural.

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Os principais objetivos dos mtodos de preservao de amostras so o retardamento ou reduo da: 1) 2) 3) 4) ao biolgica; hidrlise dos complexos qumicos; hidrlise dos compostos qumicos; volatilizao dos constituintes.

Tambm: a preservao de organismos, evitando alteraes morfolgicas e fisiolgicas.

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As aes biolgicas podem ocasionar mudana de valncia dos elementos, incorporao de substncias dissolvidas matria orgnica, ruptura das clulas, liberando substncias intracelulares para o meio exterior, etc. As transformaes mediadas por microrganismos podem ser perfeitamente sentidas no caso dos ciclos biogeoqumicos do nitrognio e fsforo, quando as formas inorgnicas e orgnicas dissolvidas podem ser interconvertidas de acordo com as condies ambientais.

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Mudanas nas condies fsico-qumicas da amostra podem resultar em grandes alteraes na sua composio inicial atravs da precipitao de metais dissolvidos ou formao de complexos com outros constituintes, mudana no estado de oxidao de ctions e nions, dissoluo ou volatilizao com o tempo, possibilidade de adsoro de ons pelas paredes dos frascos ou perda atravs de mecanismos de troca inica.

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TCNICAS DE PRESERVAO DE AMOSTRAS DE GUA

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ADIO QUMICA Deve-se ter em mente que este mtodo no vivel para preservar amostras destinadas a todos os tipos de anlise, esta afirmao vlida principalmente se as amostras forem destinadas a exames de natureza biolgica, por exemplo: determinao de coliformes totais e fecais.

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No entanto, amostras destinadas identificao quantificao da populao fito e zooplanctnica podem ser preservadas com soluo de formalina (formol). A adio de um reagente qumico no sentido de preservar algum constituinte especfico pode ser muito eficaz quando se pretende manter a estabilidade por longos perodos, no entanto, pode ocorrer contaminao da amostra com a introduo de substncias interferentes com os mtodos de anlise a serem empregados.

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Outro grande erro decorrente da m utilizao desta tcnica a contaminao da amostra com o mesmo constituinte que se quer analisar; por exemplo, adicionar cido ntrico quando se pretende determinar a concentrao de ons nitrato, ou adicionar cido clordrico quando se quer determinar a concentrao de ons cloreto.

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Como exemplo de adio qumica temos: 1) Aplicao de lugol para preservar por at 24 horas amostras de gua que ser feita a contagem e identificao de fitoplncton; 2) Aplicao dos reagentes de Winkler (sulfato manganoso e azida) para a fixao de oxignio em amostras de gua, a serem analisadas a concentrao de oxignio dissolvido em laboratrio.

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REFRIGERAO
Constitui-se na tcnica mais empregada em trabalhos de campo. Embora no mantenha completa a integridade de todos os parmetros, interfere de modo insignificante na maioria das determinaes de laboratrio. uma tcnica muito utilizada na preservao de amostras para determinaes microbiolgicas e algumas determinaes qumicas e biolgicas, alm de agregar um custo muito baixo.

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CONGELAMENTO Um procedimento aceitvel para algumas anlises, mas no deve ser vista como tcnica de preservao universal. Por exemplo, esta tcnica inadequada para algumas determinaes biolgicas e microbiolgicas, podendo ocasionar ruptura das clulas com perda de funcionalidade e caracteres morfolgicos.

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Componentes dos resduos slidos, filtrveis e nofiltrveis podem sofrer alteraes com o congelamento e posterior retorno temperatura ambiente. Normalmente esta tcnica de preservao utilizada quando a amostra chega ao laboratrio e no possvel iniciar as anlises. No podendo ser aplicada s amostras destinadas a anlise de clorofila-a, DBO e anlises bacteriolgicas e biolgicas.

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PRESERVAO DE AMOSTRAS ANLISES MICROBIOLGICAS

PARA

Quando a coleta de amostras dgua destinada a determinaes microbiolgicas importante, para uma melhor preservao, a implementao de tcnicas asspticas, devendo ter os seguintes cuidados:

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A anlise microbiolgica deve ser a primeira a ser realizada; Frasco ou garrafa deve ser mantido fechado at o momento da coleta; No e necessrio a lavagem do frasco com a gua do corpo hdrico no ponto de amostragem antes da coleta;

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Anlises microbiolgicas devem ser realizadas o mais rpido possvel. No caso de no ser possvel, as amostras devem ser acondicionadas sob refrigerao, entre 4 e 10C, at a chegada ao laboratrio, num prazo mximo de at 24 horas aps a coleta; No se deve lanar mo de nenhum preservante qumico para com o objetivo de conservar a amostra at a ocasio da anlise.

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Na coleta de campo, aps a retirada da tampa (embaixo dgua), segura-se o frasco pela base, mergulhando-o at uma profundidade de aproximadamente 30 cm da superfcie livre dgua. O frasco deve ser dirigido de modo que a boca fique no sentido contrrio ao fluxo da gua, conforme mostrado na Figura 1.

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Posio relativa do frasco para coletas de amostras de gua superficiais.

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Aps a coleta, deve-se deixar um espao vazio, desprezando-se uma pequena poro da amostra. Este vazio ir permitir a homogeneizao da amostra, bem como a vida dos seres aerbios durante vrias horas.

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ARMAZENAMENTO Os tipos de frascos mais utilizados no armazenamento de amostras so os de plstico, vidro borossilicato e do tipo descartvel; sendo estes ltimos empregados quando o custo da limpeza torna-se muito oneroso. O tipo de frasco a ser utilizado depende da natureza da amostra a ser coletada e dos parmetros a serem investigados.

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No existe uma soluo universal, havendo a necessidade de escolher o material de acordo com sua estabilidade, facilidade de transporte, custo, resistncia esterilizao, etc. A escolha dos frascos geralmente feita de acordo com o conjunto de determinaes a serem realizadas na amostra coletada, por exemplo, frascos para coleta de amostras destinadas anlise biolgica, microbiolgica, fsico-qumica, etc.

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Desta forma, existem normas que discriminam o tipo de frasco a ser utilizado de acordo com o parmetro a ser analisado. No entanto, estas normas, exceto para alguns parmetros, no devem ser encaradas com tanta rigidez, fazendo-se valer, acima de tudo, o bom senso e a experincia do pessoal responsvel pela amostragem.

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ANLISES E TCNICAS DE AMOSTRAGEM: EXAMES MICROBIOLGICOS, FSICO-QUMICOS, OXIGNIO DISSOLVIDO E PESTICIDAS

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EXAMES MICROBIOLGICOS Os tipos de frascos mais utilizados para o armazenamento das amostras destinadas a este tipo de anlise so os de material resistente s condies de autoclavagem (121C, 1atm), e que atendam outras condies como:

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No liberar substncias txicas, como bactericidas e bacteriostticos, nem substncias nutritivas durante o processo de esterilizao. Os frascos de plsticos apresentam a vantagem de serem leves, podendo ser usados, preferencialmente os de polietileno, prolipropileno ou policarbonato.

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Devido sua menor resistncia, os frascos de polietileno devem ser preteridos. Vale ressaltar, que o material das tampas deve ser o mesmo dos frascos de armazenamento. A capacidade de armazenamento destes deve variar em funo do volume da amostra necessrio para as anlises a serem efetuadas. Deve-se deixar sempre um espao livre para posterior homogeneizao da amostra.

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Recomendaes , Cuidados e Procedimentos

Os frascos e as tampas devem ser lavados e descontaminados antes de serem levados ao autoclave. Cuidados especiais devem ser tomados se as amostras a serem coletadas tiverem cloro residual ou metais pesados. Se as amostras contiverem cloro residual deve-se adicionar uma quantidade de soluo de tiossulfato de sdio, no caso de metais pesados pode-se adicionar soluo de EDTA.

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ANLISES FSICO-QUMICAS Os frascos destinados s anlises fsicoqumicas podem ser preparados de diversas maneiras, existindo para isso vrios mtodos de descontaminao que utilizam solues cidas ou uma combinao destas com agentes oxidantes, proporcionando limpeza eficiente da superfcie interna do recipiente de vidro ou plstico.

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Alguns procedimentos devem ser evitados como a lavagem dos frascos com detergentes comuns que contenham apreciveis quantidades de sais de fsforo utilizados como sequestrantes, descontaminar utilizando soluo de cido ntrico quando se deseja analisar ons nitrato, etc. Outros casos podem ser citados como fonte potencial de contaminao e, consequentemente, fonte de erro.

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No caso de uso de frascos de vidro, quando a superfcie interna encontra-se fortemente incrustada por matria orgnica, deve-se fazer primeiramente uma limpeza mecnica e, em seguida, retirar o restante do material com ajuda de uma soluo cida-oxidante (Ex: soluo sulfocrmica).

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No caso de requerer-se anlise de macronutrientes, como os sais dissolvidos de nitrognio e fsforo, a descontaminao dos frascos de coleta com uma soluo de cido clordrico a 5% pode ser suficiente.

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ANLISE DE OXIGNIO DISSOLVIDO As coletas de amostra para oxignio dissolvido (OD) o frasco deve ser dirigido de modo que a boca fique no sentido a favor da correnteza para evitar a formao de bolhas (Figura 1). Essas bolhas interferem no resultado das anlises, j que as mesmas incorporam oxignio da atmosfera e no somente da amostra em estudo. O frasco utilizado para esse tipo de coleta o frasco com tampa de vidro esmerilhado pois sua vedao mais eficiente do que a de frascos comuns e evita mais eficazmente a entrada de ar.

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Aps o enchimento do frasco, tira-se o excesso de amostra fechando-se o frasco com a tampa esmerilhada, e retirando a para a colocao das solues fixadoras do oxignio. As tampas esmerilhadas nunca podem ser colocadas em cima de pranchetas, isopor ou qualquer outra superfcie para no haver contaminao da amostra.

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Sempre antes de colocar as solues fixadoras deve-se observar a inexistncia de bolhas. Os reagentes fixadores utilizados so o sulfato manganoso e a soluo alcali-iodetoazida na quantidade de 2 mL cada, no podendo ser quantidade inferior para garantir que seja fixado todo o oxignio da amostra.

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A adio destes nas amostras deve seguir uma ordem, primeiramente o sulfato manganoso e posteriormente a soluo alcali-iodeto-azida. Isto porque, dependendo da amostra, ao se colocar primeiramente a azida outros xidos podem precipitar, interferir na precipitao do hidrxido manganoso e este pode no estar em quantidade suficiente para reagir com todo o oxignio da amostra. A validade desses reagentes de seis meses.

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As lavagens de pipetas utilizadas para transferncia dos fixadores devero ser lavadas com soluo de cido clordrico de 5 a 10%. Recomenda-se a utilizao de gotejador/conta-gotas necessitando apenas que seja previamente calibrado, pois dependendo do seu dimetro tm-se diferentes tamanhos de gotas. Na calibrao utilize uma proveta, goteje (com o gotejador que ser utilizado em campo) e conte quantas gotas so utilizadas at chegar a 2 mL. Escreva nos frascos dos reagentes a quantidade de gotas necessrias para 2mL.

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ANLISE DE PESTICIDAS O caso de anlises de pesticidas, deve-se usar, preferencialmente, frascos de vidro de cor mbar, aps lav-los com soluo extran 5% ou detergente neutro, seguido de enxge abundante com gua destilada e posterior lavagem com hexano (solvente apolar)/ter de petrleo e acetona (solvente polar) de grau pesticida. Os frascos devem ser secos em estufa a 100C.

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Nas coletas de amostra para pesticidas, os fracos devem ter suas bocas envolvidos com papel alumnio antes de tampar aps a coleta. A Tabela 1 apresenta algumas recomendaes relativas preservao e armazenamento de amostras dgua de acordo com o tipo de anlise que vem sendo feito nas campanhas de monitoramento da qualidade de gua.

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