UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD ECBTI CEAD JOS ACEVEDO Y GOMZ PROGRAMA DE QUMICA BIOQUMICA

PREINFORMES DE LABORATORIO BIOQUMICA

ANA MARA MILLN RINCN CD. 1.014.195.821

CURSO: 201103_40

TUTORA DE CAMPUS VIRTUAL GOLDA MEYER TORRES VARGAS

TUTOR DE PRCTICA DE LABORATORIO YAMID ORTIZ ROJAS

GRUPO DE LABORATORIO N1

Santa Fe de Bogot D.C. Septiembre 25 de 2013

PREINFORME PRIMERA PRCTICA DE LABORATORIO MTODOS CUALITATIVOS PARA LA IDENTIFICACIN DE AMINOCIDOS Y PROTENAS

OBJETIVOS 1. Reconocer a los aminocidos como unidades estructurales de las protenas y su importancia en los diferentes procesos metablicos. 2. Analizar, mediante reacciones cualitativas coloreadas la presencia de aminocidos y enlaces peptdicos en las muestras. 3. Establecer relaciones entre la estructura y la funcin de las protenas y prdida de esta al variar su pH y solubilidad (precipitacin y desnaturalizacin). FUNDAMENTO TERICO Los aminocidos son como los ladrillos de una construccin a partir de los cuales se fabrican las protenas. Aunque existen ms de 300 aminocidos diferentes en la naturaleza, slo 20 hacen parte de las protenas presentes en los seres vivos. Las protenas son polmeros de aminocidos. Debido a que incluyen, por lo general muchas unidades, son compuestos de elevado peso molecular. La unin entre aminocidos ocurre a travs de la reaccin entre el OH del grupo carboxilo de uno de los aminocidos y el grupo amino de otro, con prdida de una molcula de agua. Todas las protenas contienen carbono, hidrgeno, oxgeno y nitrgeno y casi todas poseen tambin azufre. Si bien hay ligeras variaciones en diferentes protenas, el contenido de nitrgeno representa en promedio el 16% de la masa total de la molcula. Pruebas generales para aminocidos: 1. Reaccin con la ninhidrina: Los grupos amino libres de los aminocidos, de los pptidos y las protenas reaccionan con la ninhidrina a un pH entre 4 y 8, para dar un compuesto de un intenso color azul prpura. La prueba tambin es positiva con aminas primarias y amonaco pero sin desprendimiento de CO 2. Los aminocidos prolina e hidroxiprolina dan un color amarillo en lugar del color prpura con la ninhidrina. La reaccin es muy sensible y es ideal para la deteccin de aminocidos. 2. Reaccin xantoproteica: Los AA, que contienen un ncleo aromtico forman nitroderivados de color amarillo cuando se calientan con cido ntrico concentrado. Las sales de estos derivados son de color naranja intenso en medio alcalino. La fenilalanina, la tirosina y en cierto grado el triptfano, as como todas las protenas que los contienen, dan positiva la prueba. 3. Reaccin del cido glioxlico para triptfano: El grupo indlico del triptfano reacciona con cido glioxlico en presencia de cido sulfrico concentrado dando un complejo de color prpura. El cido actico glacial que ha sido expuesto a la luz contiene cido glioxlico.

4. Reaccin para el triptfano: Este aminocido se condensa fcilmente con varios aldehdos en presencia de cidos fuertes para dar compuestos coloreados. En la reaccin se utiliza el reactivo de Ehrlich (p-dimetilaminobenzaldehdo al 10% en HCl concentrado) que reacciona con un buen nmero de compuestos orgnicos tales como aminas aromticas y compuestos ureicos para dar complejos coloreados. 5. Reacciones para cistena y cistina: Cuando los AA y las protenas que contienen grupos tilicos se calientan en medio fuertemente alcalino, el azufre presente reacciona para formar sulfuros. Este sulfuro puede detectarse por la formacin de un precipitado negro de sulfuro de plomo por adicin de acetato de plomo. Los grupos tioles tambin reaccionan con el nitroprusiato de sodio en presencia de un exceso de amonaco para dar un complejo de color rojo. 6. Prueba para arginina: El AA arginina contiene un grupo guanidino en la cadena lateral, este grupo reacciona con el reactivo de Sakaguchi (a-naftol/agua de bromo) en medio alcalino para dar un compuesto de color rojo. Pruebas generales para protenas: 1. Prueba de Biureth: Los compuestos que tienen dos grupos carbamidos (-CONH-), ya sea unidos directamente o a travs de un tomo de carbono o nitrgeno, dan un color violeta con el sulfato de cobre alcalino (reactivo de Biureth). Los tripptidos son las molculas ms pequeas capaces de dar una prueba de Biureth positiva, mientras que esto no ocurre con los aminocidos. La prueba de Biureth es una buena prueba general para las protenas y la intensidad del color violeta es una medida del nmero de enlaces peptdicos. Algunas sustancias como la oxamida pueden dar falsos resultados positivos en ensayos cualitativos de protenas. 2. Desnaturalizacin por calor y ph extremos: La desnaturalizacin es cualquier proceso por el cual el arreglo espacial de una protena cambia de la estructura ordenada de la molcula nativa a una forma tridimensional desordenada. Durante la desnaturalizacin se pierden las estructuras de orden superior de las protenas, con prdida de la actividad biolgica. Las enzimas por ejemplo, que realizan trabajos catalticos en las clulas, tienen una temperatura y un pH ptimo en el cual presentan un mximo de actividad, pero la actividad disminuye significativamente hacia valores extremos de pH y a bajas o elevadas temperaturas. 3. Precipitacin con cationes y aniones pesados y sales concentradas: Los cationes de metales pesados y los aniones de elevado peso molecular son muy usados en la separacin de protenas y en la preparacin de filtrados libres de protenas. A pH neutro por lo general las protenas tienen carga neta negativa y se combinan fcilmente con iones de metales pesados que, al neutralizar la carga producen la precipitacin. A pH por debajo del punto isoelctrico en cambio, se combinan con aniones porque presentan carga neta positiva. Soluciones concentradas de sales, de sulfato de amonio, por ejemplo, reducen en gran medida la solubilidad de las protenas, porque compiten por las molculas de agua disponibles para la solvatacin y las interacciones protena-protena se hacen ms importantes.

MATERIALES Material de vidrio Tubos de ensayo. Gradilla. Esptulas. Pipetas de 1, 5 y 10 mL. Mallas de asbesto. Papel filtro. Embudos. Agitador de vidrio. Erlenmeyers de 100 y 250 mL. Vasos de precipitado de 250 y 500 mL. Probeta de 100 mL. Pinzas para tubo de madera. Vidrios de reloj. Mortero con mango. Soporte para embudos. Pinzas para tubos de ensayo metlicas. Material biolgico y otros Equipo de seguridad (Anteojos de policarbonato; protector facial de cara completa; guantes de neopreno; bata de algodn). Alimento de origen vegetal o animal: Concentrados, protena crnica, hgado, huevo. Reactivos Reactivo de milln. Agua destilada. Solucin de CuSO4 1%. Solucin NaOH 30% y 40%. Solucin saturada de NaCl. HNO3 concentrado, cristales de sacarosa. HCl concentrado. cido triclorcetico 10%. Solucin cido pcrico saturado. Etanol 95%. Solucin (NH4SO4) al 50%. Acetona. Solucin de acetato de plomo 0,5%. Reactivo de Sakaguchi, cido actico glacial. HSO4 concentrado, cido actico 30%. Aminocidos: Glicina, tirosina, triptfano, aminocidos azufrados, leucina. Ninhidrina (2 g/L) preparado en fresco. Hidrxido de amonio. cido sulfanilico (10 g/L en solucin de HCl 1 mol/L). Nitrito de sodio. Carbonato de sodio. Acetato de plomo. Nitrato de mercurio. Nitro prusiato de sodio (20 g/L) preparado en fresco. Alfa naftol. Agua de bromo. Equipos Estufas. pH metro. Centrifugadora. Balanza analtica. Termmetros. Mecheros

TALLER 1. Conteste: a. Defina aminocido. Los aminocidos constituyen una clase de compuestos orgnicos que contienen simultneamente los grupos funcionales amino (NH2) y carboxilo (COOH). Aquellos que forman parte de las protenas en los seres vivos poseen los grupos COOH y NH2 unidos al carbono (e l carbono adyacente al carbono carbonilo), por lo que se conoce como -aminocido. La estructura general de un -aminocido es:

La identidad del grupo R diferencia un aminocido de otro. Por ejemplo, en la glicina R es un tomo de hidrgeno, mientras que en la alanina es un radical CH3.

A excepcin de la glicina, el carbono de cualquier otra aminocido es quiral o asimtrico. Por lo tanto, los aminocidos son pticamente activos y poseen enantimeros D y L, de los cuales slo los -L-aminocidos estn presentes en los seres vivos1.

b. Qu grupos funcionales estn presentes en los aminocidos? Los grupos funcionales presentes en los aminocidos son el amino (NH2) y el carboxilo (COOH)1.
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Qumica orgnica Santillana. Edicin para el Docente. Unidad 6: Compuestos de Inters Bioqumico I. Tema 2: Aminocidos y protenas. Pgs. 164-165.

c. Cmo ellos estn relacionados con las propiedades cido bsicas? Lo que caracteriza a los diferentes aminocidos es el grupo R unido al carbono . En este sentido, existen aminocidos neutros, cidos y bsicos. En los neutros el grupo R carece de carga y las cargas de los grupos NH 2 y COOH disociados, se equilibran. En este caso, R puede ser aliftico o aromtico. En los cidos, R presenta un grupo COOH adicional, por lo que a pH neutro (cerca de 7,3 en el interior de las clulas) estos aminocidos se encuentran disociados, como iones carboxilato. Por ltimo, los bsicos poseen un grupo R capaz de protonarse, por ejemplo, un grupo amino, el cual al pH celular se encuentra en forma de ion amonio 2.

2. Algunos autores clasifican los aminocidos de varias formas, por ejemplo, en esenciales y no esenciales, en alifticos y aromticos, o quiz la ms acertada; de acuerdo a la polaridad, presencia de cargas y composicin qumica de la cadena lateral R de los aminocidos. De un argumento vlido de sta ltima clasificacin en dnde se explique el porqu de esta. Las propiedades de cada aminocido dependen de su cadena lateral R. Es por esto que su clasificacin ms importante debe basarse en la estructura qumica de las cadenas laterales que son los grupos funcionales que determinan la estructura y la funcin de los aminocidos, as como la carga elctrica de la molcula 2. 3. Qu implicaciones tiene la Cadena lateral de los aminocidos en sus propiedades qumicas y en los mtodos de identificacin en el laboratorio? Para comprender los mtodos de anlisis, purificacin e identificacin de las aminocidos es importante conocer las propiedades de las cadenas laterales R. Los aminocidos con cadena lateral con carga polar o hidroflica normalmente se encuentran expuestos en la superficie de las protenas. Los residuos hidrofbicos no polares normalmente se encuentran enterrados en el interior hidrofbico o ncleo de
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Qumica orgnica Santillana. Edicin para el Docente. Unidad 6: Compuestos de Inters Bioqumico I. Tema 2: Aminocidos y protenas. Pgs. 164-165.

una protena y estn fuera de contacto con el agua. Los 20 aminocidos en las protenas codificadas por el ADN se clasifican segn el grupo funcional de su cadena lateral3. 4. En este laboratorio, Usted va a identificar algunos aminocidos que estn dentro de la composicin de un tejido biolgico. Explique brevemente, que pruebas usara para identificar los siguientes aminocidos y porque: a. Tirosina. La caracterizacin del aminocido tirosina se puede realizar mediante la reaccin del milln. Los compuestos mercricos en medio fuertemente ntrico (Reactivo de milln) se condensan con el grupo fenlico del aminocido tirosina, formando complejos de color rojizo.

b. Fenilalanina. Se utiliza la reaccin xantoproteica, en la que se produce la nitracin del anillo bencnico presente en la fenilalanina, obtenindose nitrocompuestos de color amarillo, que su vuelven anaranjados en medio fuertemente alcalino (Formacin del cido picrmico o trinitrofenol). c. Aminocidos aromticos. Para la caracterizacin de los aminocidos aromticos se utiliza la reaccin xantoproteica, en la que se produce la nitracin del anillo bencnico presente en los aminocidos tirosina, fenilalanina y triptofano, obtenindose nitrocompuestos de color amarillo, que su vuelven anaranjados en medio fuertemente alcalino (Formacin del cido picrmico o trinitrofenol). d. Triptfano. La caracterizacin del aminocido triptfano se puede lograr mediante la reaccin de Hopkins - Cole, en la que el grupo indol del aminocido triptfano se condensa con el cido glioxlico del reactivo, formando compuestos coloreados. El agregado de una pequea cantidad de cido sulfrico concentrado puro, aumenta la sensibilidad de la reaccin. e. Metionina y cistena. En la caracterizacin de aminocidos azufrados se utiliza la reaccin de tiogrupos, que dar positiva con aquellos aminocidos que presentan azufre en su estructura, como lo son la cistina, la cistena y la metionina. La reaccin consiste en someter la muestra a una hidrlisis alcalina con hidrxido de sodio, segn la siguiente ecuacin: De esta manera el sulfuro de sodio se encuentra libre para reaccionar con el acetato de plomo del reactivo de Courtone: f. Grupos aminos libres. 5. Qu es el enlace peptdico? Represntelo. Qu prueba usa en el laboratorio para identificarlos? En qu se fundamenta? En las protenas, el grupo carboxilo de un aminocido se une al grupo amino del aminocido del aminocido siguiente, formando un puente amida (pptido), en la reaccin se elimina agua. Las unidades de aminocidos de una cadena de pptidos se denominan residuos de aminocidos. Una cadena peptdica consistente en tres

residuos de aminocidos se denomina tripptido. Por convencin, el amino terminal (N-terminal) se considera el primer residuo y la secuencia de aminocidos se escribe de izquierda a derecha. Cuando se escribe la secuencia de pptidos, se utilizan las abreviaciones de los aminocidos de tres letras o de una letra. Las protenas contienen entre 50 y 2.000 residuos de aminocidos. La masa molecular media de un residuo aminocido es de alrededor de 110 unidades Dalton (Da). Por tanto, la masa molecular de la mayora de protenas est entre 5.500 y 220.000 Da 3. 6. Qu es una protena? Las protenas son filamentos largos de aminocidos unidos en una secuencia especfica. Son creadas por los ribosomas que "leen" codones de los genes y ensamblan la combinacin requerida de aminocidos por la instruccin gentica. Las protenas recin creadas experimentan una modificacin en la que se agregan tomos o molculas adicionales, como el cobre, zinc y hierro. Una vez que finaliza este proceso, la protena comienza a plegarse sin alterar su secuencia (espontneamente, o a veces con asistencia de enzimas) de forma tal que los residuos hidrfobos de la protena quedan encerrados dentro de su estructura y los elementos hidrfilos quedan expuestos al exterior. La forma final de la protena determina su manera de interaccionar con el entorno4. 7. Complete el siguiente cuadro, relacionada con protenas: Niveles de estructuracin que puede Clasificacin de las protenas segn su tener una protena solubilidad
La mayora de las propiedades biolgicas, fsicas y qumicas de las protenas, dependen de la forma tridimensional de las molculas. Los diferentes rasgos de esta forma son la estructura de una protena: Estructura primaria: Describe la sucesin de aminocidos que forman la cadena poli peptdica, sin tener en cuenta las interacciones internas entre diferentes aminocidos de dicha cadena, que puedan ocasionar su plegamiento. Estructura secundaria: En este nivel de estructura se describe la interaccin entre diferentes secciones polares de la cadena peptdica. Generalmente, estas interacciones se dan entre los grupos amino (especficamente residuos NH) y carboxilo (residuos C=O) de diferentes aminocidos, dando como resultado la formacin de puentes de hidrgeno. En algunas protenas, como las queratinas, los puentes de hidrgeno ocurren con una periodicidad tal que se forma una hlice regular, en la cual cada vuelta consta de 3,6 aminocidos. Esta conformacin espacial se conoce como hlice . Existe adems otra conformacin, conocida como lmina , en la cual varias cadenas peptdicas, se encuentran acopladas paralelamente, a travs de puentes de hidrgeno entre los grupos C=O y NH de diferentes cadenas. Estructura terciaria: Describe el plegamiento de estructuras secundarias como hlices y lminas, sobre s mismas. Las fuerzas causantes de doblar estas estructuras son: puentes disulfuro,
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La composicin de los aminocidos de una cadena peptdica tiene un profundo efecto en sus propiedades fsicas y qumicas. Las protenas ricas en grupos amino alifticos o aromticos son relativamente insolubles en agua y se encuentran probablemente en las membranas celulares. Las protenas ricas en aminocidos polares son ms solubles en agua. Las amidas son componentes neutros ya que el esqueleto amida de una protena, que incluye los grupos -amino y -carboxilo que lo forman, no contribuye a la carga de la protena. En cambio, la carga de la protena depende de los grupos funcionales de la cadena lateral de los aminocidos. Los grupos de aminocidos con cadena lateral cida (Glu, Asp) o bsica (Lys, His, Arg) conferirn una carga y una capacidad de amortiguacin a la protena. El equilibrio entre cadenas laterales cidas o bsicas en una protena determina su punto isoelctrico (pI) y la carga neta en la disolucin. Las protenas ricas en lisina y arginina son bsicas en disolucin y tienen carga positiva a pH neutro, mientras que las protenas cidas, ricas en aspartato y glutamato, son cidas y tienen carga negativa. Debido a los grupos funcionales de su cadena lateral, todas las protenas estn ms cargadas positivamente a pH cido y ms cargadas negativamente en pH bsico. Las protenas son una parte importante de la capacidad de tamponamiento de las clulas sanguneas y de los lquidos biolgicos. De acuerdo con su morfologa y solubilidad las protenas se clasifican en6: Protenas fibrosas: Son insolubles en agua, presentan formas moleculares alargadas, con un

Baynes, J. Dominiczak, M (2011). Bioqumica Mdica. Tercera Edicin. Barcelona, Espaa: Elsevier, Mosby. http://pendientedemigracion.ucm.es/info/analitic/Asociencia/DesnatProteinas.pdf 6 http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/2000024/lecciones/cap01/01_01_12.htm

formados entre aminocidos como cistena y metionina y, fuerzas de repulsin y atraccin entre aminocidos hidrfobos e hidrfilos con respecto al medio acuoso circundante. De esta forma, los aminocidos hidrfobos tienden a ubicarse en el interior de las protenas, lo ms alejados posible del agua del medio, mientras que los hidrfilos se ubican en la periferia. El resultado es una estructura tridimensional plegada y enrollada sobre s misma en patrones complejos. Las protenas globulares son ejemplos de este tipo de conformacin. Estructura cuaternaria: Se refiere a la forma en que se agrupan varias protenas (con una estructura terciaria definida) para formar grandes agregados, multimricos. Las diferentes protenas se unen a travs de enlaces dbiles, no covalentes como puentes de hidrgeno y uniones 5 electrostticas .

nmero variado de cadenas polipeptdicas que constituyen fibras resistentes, con cierto grado de elasticidad, fragilidad o ductilidad. Funcionan como protenas estructurales o de soporte. Las ms comunes son: Elastina, Colgeno, Queratina, Fibrina, etc. Protenas Globulares: Tienden a ser ms solubles en agua, debido a que su superficie es polar. Sin embargo, pueden presentar mayor solubilidad en otros solventes como soluciones salinas, cidos o bases diluidas o alcohol. Su estructura es compacta con formas casi esfricas. La mayora de las protenas conocidas son globulares, dentro de las que se consideran todas las enzimas, las protenas del plasma y las presentes en las membranas celulares. A su vez las protenas globulares se pueden clasificar de acuerdo con su solubilidad: o Albminas: Protenas fcilmente solubles en agua, que coagulan con el calor y precipitan con las soluciones salinas saturadas. Por ejemplo la Lactoalbmina, albmina del suero, la ovoalbmina (presente en la clara del huevo). o Globulinas: Escasamente solubles en agua pura, pero solubles en soluciones salinas diluidas como cloruro de sodio, entre ellas se encuentran las seroglobulinas (sangre), ovoglobulina, inmunoglobulinas, etc. o Glutelinas: Solubles en cidos y bases diluidos, insolubles en solventes neutros. Ejemplo: La Glutenina del trigo. o Prolaminas: Solubles en alcohol del 70 al 80%, insolubles en agua, alcohol absoluto y otros solventes neutros, como la Zena del maz y la Gliadina del trigo.

8. Cul es la diferencia de precipitar y desnaturalizar una protena? Cuando la protena no ha sufrido ningn cambio en su interaccin con el disolvente, se dice que presenta una estructura nativa. Se llama desnaturalizacin de las protenas a la prdida de las estructuras de orden superior (Secundaria, terciaria y cuaternaria), quedando la cadena polipeptdica reducida a un polmero estadstico sin ninguna estructura tridimensional fija.

Cualquier factor que modifique la interaccin de la protena con el disolvente disminuir su estabilidad en disolucin y provocar la precipitacin. As, la desaparicin total o parcial de la envoltura acuosa, la neutralizacin de las cargas elctricas de tipo repulsivo o la ruptura de los puentes de hidrgeno facilitar la agregacin intermolecular y provocar la precipitacin. La precipitacin suele ser
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Qumica orgnica Santillana. Edicin para el Docente. Unidad 6: Compuestos de Inters Bioqumico I. Tema Dos: Aminocidos y protenas. Pgs. 168-169.

consecuencia del fenmeno llamado desnaturalizacin y se dice entonces que la protena se encuentra desnaturalizada. En una protena cualquiera, la estructura nativa y la desnaturalizada tan slo tienen en comn la estructura primaria , es decir, la secuencia de AA que la componen. Los dems niveles de organizacin estructural desaparecen en la estructura desnaturalizada. La desnaturalizacin provoca diversos efectos en la protena: Cambios en las propiedades hidrodinmicas de la protena: Aumenta la viscosidad y disminuye el coeficiente de difusin. Una drstica disminucin de su solubilidad, ya que los residuos hidrofbicos del interior aparecen en la superficie. Perdida de las propiedades biolgicas. Una protena desnaturalizada cuenta nicamente con su estructura primaria. Por este motivo, en muchos casos, la desnaturalizacin es reversible ya que es la estructura primaria la que contiene la informacin necesaria y suficiente para adoptar niveles superiores de estructuracin. El proceso mediante el cual la protena desnaturalizada recupera su estructura nativa se llama renaturalizacin. Esta propiedad es de gran utilidad durante los procesos de aislamiento y purificacin de protenas, ya que no todas las protenas reaccionan de igual forma ante un cambio en el medio donde se encuentra disuelta. En algunos casos, la desnaturalizacin conduce a la prdida total de la solubilidad, con lo que la protena precipita. La formacin de agregados fuertemente hidrofbicos impide su renaturalizacin y hacen que el proceso sea irreversible. Los agentes que provocan la desnaturalizacin de una protena se llaman agentes desnaturalizantes. Se distinguen agentes fsicos (calor) y qumicos (detergentes, disolventes orgnicos, pH, fuerza inica). Como en algunos casos el fenmeno de la desnaturalizacin es reversible, es posible precipitar protenas de manera selectiva mediante cambios en: La polaridad del disolvente. La fuerza inica. El pH. La temperatura7. 9. Elabore el diagrama de flujo de la marcha de la prctica y tablas de resultados en blanco.

http://www.ehu.es/biomoleculas/proteinas/desnaturalizacion.htm

PROCEDIMIENTO OBTENCIN DE LOS ESTRACTOS

MTODOS CUALITATIVOS PARA LA IDENTIFICACIN DE AMINOCIDOS Y PROTENAS

1. Para obtener el estracto, si se trata de alimentos en polvo, colocar unos 30 gramos en un vaso de precipitado.

2. Agregar 100 mL de agua destilada y agitar durante 10 minutos, para luego filtrar el contenido a travs de tela limpia.

Conservar el lquido (filtrado) para las pruebas de protenas.

Recoger lo molido en vasos de precipitado.

3. Para obtener el estracto, si se trata de alimentos concentrados o slidos, se debe molerlos o macerarlos por separado. Recoger los filtrados en vasos de precipitado o en Erlenmeyers previamente marcados. Desechar los residuos.

4. Agregar 100 mL de agua destilada y agitar durante 10 minutos, para luego filtrar el contenido a travs de tela limpia. 5. Para obtener el estracto, si se trata de la solucin de clara de huevo, se debe hacer un orificio en uno de los extremos del huevo y por el se vierte la clara en un vaso de precipitado.

6. Agregar 100 mL de agua destilada y agitar con el fin de disolverla.

FIN DE LA PRCTICA

PARTE UNO
PRUEBA DE BIURET PRUEBA DE MILLN

1. En un tubo de ensayo colocar 2 mL del estracto problema.

1. En un tubo de ensayo colocar 2 mL del estracto problema.

2. Agregar 2 mL de NaOH al 30% y mezclar. 3. Durante el mezclado ir aadiendo gota a gota el sulfato cprico al 1% (CuSO4), agitando despus de cada adicin, hasta la aparicin de un color violeta, azul o amarillo.
El color violeta indica la reaccin positiva.

2. Agregar 0,5 mL del reactivo de milln. 3. Llevar a un bao de maria por 5 minutos. Un color rojo oscuro indica la reaccin positiva.

FIN DE LA PRCTICA FIN DE LA PRCTICA

PRUEBA XANTOPROTECA

PRUEBA DE LIEBERMAN

1. En un tubo de ensayo colocar 2 mL del estracto problema.

1. En un tubo de ensayo colocar 2 mL del estracto problema.

2. Agregar 1 mL de HNO3 concentrado por las paredes del tubo. 3. Meclar bien, calentar a bao de mara y observar un color amarillo calor. Adicionar 2 mL de una solucin de NaOH al 40% lentamente sin agitar y observar.
El color naraja intenso indica la reaccin positiva.

2. Agregar una pizca de cristales de sacarosa. 3. Aadir 5 mL de HCl concentrado. 4. Calentar en bao de mara de agua hirviendo por 5 a 7 minutos. Un color rojo intenso, es prueba positiva.

FIN DE LA PRCTICA

FIN DE LA PRCTICA

PRUEBA DE GRUPOS SH

PRUEBA DE SAKAGUCHI

1. En un tubo de ensayo colocar 1 mL del estracto problema.

1. En un tubo de ensayo colocar 2 mL del estracto problema.

2. Agregar 1 mL de hidrxido de sodio al 40%. 3. Aadir 1 mL de acetato de Plomo al 0,5%. 4. Mezclar bien, calentar a bao de mara hirviendo durante 4 minutos.
Un precipitado negro es pueba positiva.

2. Agregar 0,5 mL del reactivo de Sakaguchi. 3. Llevar a un bao de maria por 5 minutos. Un color rojo oscuro indica la reaccin positiva.

FIN DE LA PRCTICA

FIN DE LA PRCTICA

REACCIN DEL CIDO ALIOXLICO

REACCIN DE LA NINHIDRINA

1. En un tubo de ensayo colocar 2 mL del estracto problema.

1. En un tubo de ensayo colocar 1 mL del estracto problema y ajustar el pH a 7.

2. Aadir 2 mL de cido actico glacial. 3. Agregar 2 mL de H2SO4 concentrado. Dejar caer lentamente por las paredes del tubo inclinado, hasta que se formen dos capas. NO AGITAR. Observar el cambio de color en la interfase.
Si se forma un anillo violeta en la interfase de los dos lquidos la reaccin es positiva.

2. Aadir 1 mL de solucin de ninhidrina y hervir a bao de maria durante 2 minutos. Observar coloracin violeta o morado intenso.

FIN DE LA PRCTICA

FIN DE LA PRCTICA

PRUEBA DE PAULY

PRUEBA DEL NITROPRUSIATO

1. En un tubo de ensayo colocar 1 mL de cido sulfanlico.

1. En un tubo de ensayo colocar 0,5 mL de nitroprusiato de sodio.

2. Agregar problema.

mL

del

estracto

2. Mezclar con 2 mL del estracto problema. 3. Adicionar 0,5 mL de hidrxido de amonio y dejar reposar durante 5 minutos.

3. Enfriar en un bao de hielo.

4. Agregar 1 mL de solucin de NaNO2 y dejar enfriar durante 2 minutos. 5. Adicionar 2 mL de Na2CO3. Anotar los colores formados.

FIN DE LA PRCTICA

FIN DE LA PRCTICA

PARTE DOS
PRECIPITACIN ACDICA PRECIPITACIN ACDICA

1. En un tubo de ensayo colocar 2 mL del estracto problema.

1. En un tubo de ensayo colocar 2 mL del estracto problema.

2. Agregar 1 mL de cido pcrico saturado. 3. Agitar y observar la formacin de un precipitado (enturbamiento).

2. Agregar 2 mL tricloroactico al 10%.

de

cido

3. Agitar y observar la formacin de un precipitado (enturbamiento).

FIN DE LA PRCTICA

FIN DE LA PRCTICA

PRECIPITACIN ACDICA

SOLVENTES ORGNICOS

1. En un tubo de ensayo colocar 2 mL del estracto problema.

1. En un tubo de ensayo colocar 2 mL del estracto problema.

2. Agregar 0,5 mL de cido actico al 30%. 3. Aadir 1 mL de una solucin saturada de cloruro de sodio (NaCl).

2. Agregar 2 mL de etanol al 95%.

3. Agitar y observar la formacin de un precipitado (enturbamiento).

4. Mezclar bien y calentar a la llama durante 1 minuto. Se presenta un enturbamiento ms o menos intenso que persiste al enfriamiento, tambin puede observarse pequeos grumos en las paredes del tubo.

Observe el tubo sobre un fondo oscuro.

FIN DE LA PRCTICA

FIN DE LA PRCTICA

SOLVENTES ORGNICOS

DESNATURALIZACIN POR CALOR

1. En un tubo de ensayo colocar 2 mL del estracto problema.

Observe la formacin de un precipitado.

1. En un tubo de ensayo colocar 2 mL del estracto problema.

2. Agregar 2 mL de acetona.

3. Agitar y observar la formacin de un precipitado (enturbamiento).

2. Calentar en agua hierviendo durante 10 minutos asegurndose que la temperatura interna llegue a los 95 - 100C.

FIN DE LA PRCTICA

FIN DE LA PRCTICA

SULFATO DE AMONIO

METALES PESADOS

1. En un tubo de ensayo colocar 2 mL del estracto problema.

1. En un tubo de ensayo colocar 2 mL del estracto problema.

2. Agregar 2 mL de solucin de sulfato de amonio al 50%. 3. Mezclar bien. Dejar en reposo durante 10 minutos. Observar si se forma un precipitado. Centrifugar a 3.000 r.p.m. durante 10 minutos. La reaccin positiva se manifiesta por la formacin de un precipitado, dependiendo directamente de la concentracin de albmina presente en la muestra.

2. Agregar 5 gotas del metal pesado.

3. Calentar levemente a bao de mara si no se observa una reaccin inmediata.

FIN DE LA PRCTICA

FIN DE LA PRCTICA