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AO DESINFETANTE DE ALGUNS PRODUTOS COMERCIAIS SOBRE O VIRUS TIPO "C" WALDMANN DA FEBRE AFTOSA.

Fumio Honma ITO* C ezaiE . ENRIOUEZ ROZAS* Slvio Arruda VAS l ONCELLOS* J. GUERRERO** Jos de A. CRTES***

RFMV-A/9
ITO, F.H.; ENR1QUEZ-ROZAS, C.E.; VASCONDELLOS, S.A.; GUERRERO, J.; CORTES, J.A.

Ao desifetante de alguns produtos comerciais sobre o vrus tipo r Waldmann da febre aftosa. Rev. Fac. Med. vet. Zootec. Univ. S. Paulo. 15 (1); 069-074, 1978
RESUMO: Apreciando a ao desifetante de cinco produtos comerciais sobre o vrus C" Waldmann da febre aftosa, em presena de matria orgnica, os autores verificaram que aps cinco minutos de atuao a atividade virai remanescente expressa em termos de mortalidade de camun dongos lactentes inoculados com a suspenso virai tratada pelos correspondentes produtos foi a seguinte: 1/119 (0,84%): 5/120 (4,16%); 104/119 (87,39%); 116/118 (98,30%); 118/120 (98,33%), respectivamente para o Hidrxido de sdio a 2,0%, Iodofor a 1:250, Paratolueno a 0,3%. Gluconato de clorhexidina 20% a 1.200 e Carbonato de sdio a 4,0%. UNITERMOS: Febre aftosa*; Vrus*: Desinfeco*.

INTRODUO O combate febre aftosa, em reas end micas, fundamenta-se. usualmente, na im u nizao dos suscetveis domsticos, controle das fontes de infeco e desinfeco concorrente de ambientes e materiais conta minados8,11 . As peculiaridades do agente causal desta doena, especialmente no que con cerne sua elevada resistncia s condies ambientais e multiplicidade de mecanismos

de transmisso de que se utiliza para persis tir na natureza3 , impem srias limitaes desinfeco de meios de transporte, equipamentos e dependncias de criao, notadam ente, tratando-se de superfcies impregnadas por matria orgnica. Com o objetivo de promover a descontaminao de ambientes e materiais contaminados pelos vrus da febre aftosa. diversos procedimentos tem sido desenvol vidos.

Trabalho realizado em colaborao entre o Departamento de Medicina Veterinria Preven tiva e Sade Animal da Faculdade de Medicina Veterinria e Zootecnia da USP e a Johnson e Johnson S.A. * Auxiliar de Ensino. ** Professor Assistente Doutor. *** Professor Livre-Docente. Departamento de Medicina Veterinria Preventiva e Sade Animal da Faculdade de Medicina Veterinria e Zootecnia da USP.

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0 calor mido ou seco, largamente empregado na esterilizao de equipamentos de laboratrio, encontra limitaes para a utilizao em instalaes em ambientes de criao. Nestes locais, m uito mais vivel o uso de produtos qumicos, os quais tem sido amplamente experimen tados1 2' 5-6-7-9-12' 13' 14-15. Embora exista um grande nmero de desinfetantes qumicos, com indicao para os vrus da febre aftosa, persiste em nosso pas a falta de estudos acerca de sua eficcia, particularmente quando em pre sena de matria orgnica Deste modo o objetivo do presente estudo foi o de avaliar a ao desinfetante de cinco produtos comerciais sobre o vrus "C" Waldmann da febre aftosa em condi es similares quelas encontradas no meio criatrio.

*a) Paratolueno cloro sulfamida sdica 0,3% (P/V); **b) Carbonato de sdio comercial 4% (P/V ); ***c) Hidrxido de sdio comercial 2% P/V); ****d) Gluconato de clorhexidina 20% a 1:200 (V/V); "****e) Iodofor a 1:250 (V/V). O substrato utilizauo consistiu de um tecido de fibra de algodo com es pessura de 1,0 milmetro, medindo 2,0 metros de com prim ento e 0,5 metros de largura, subdividido em quatro segmentos de 0,5 x 0,5 metros, designados por I, II, III e IV. Utilizando-se um pulverizador tipo costal, manual, marca JACTO, modelo PJH, com capacidade para 20 litros, pres so de trabalho de at 7,0 kg/cm2 e equi pado com bico de spray em forma de cone cheio, procedeu-se a operao de pulverizao do desinfetante sobre o subs trato, mantendo-se o bico orientado por um fio de algodo distendido paralela mente e altura de 40 centm etros do piso e imprimindo-se um movimento de vai e vem contnuo com sobreposio adequada dos jatos, durante 15 segundos de modo a atingir uniformemente tda a rea do segmento do substrato. A titulao da suspenso de vrus foi realizada em diluies seriadas de razo dez, inoculadas pela via intraperitonial em camundongos na dose de 0,05 mililitros por animal. Os animais foram mantidos em observao por sete dias e a determi nao do ttulo foi realizada segundo o m todo de REED e MUENCH10 (1938). A identificao do vrus foi estabele cida atravs da reao de fixao de comple m ento, empregando a tcnica preconizada por CAMARGO e cols.4 (1950). O presente estudo foi conduzido em cinco etapas, cada uma das quais consis tiu no ensaio de um desinfetante conforme

MATERIAL E MTODOS O vrus empregado, consistiu no tipo C Waldmann da febre aftosa, subtipo C3 Indaial, obtido por passagens em cultivo de clulas BHK; i clone 13, apresentando um ttulo infectante em camundongos lactentes igual a 106,7D I5 O por militro e mantido -20C. Tanto para a diluio do vrus, como no preparo das suspenses dos materiais de estudo, empregou-se como diluente a soluo salina de Earle, adicionada de 2,000 unidades de penicilina e 2,0 mi ligramas de estreptom icina por mililitro. O sistema biolgico utilizado para titulao e pesquisa da presena de vrus consistiu em camundongos suios albinos, lactentes de cinco a sete dias de idade, dis tribudos em grupos de oito indivduos acompanhados da respectiva me. Os desinfetantes estudados e as res pectivas diluies de uso so apresentadas a seguir:

* ** *** **** *****

DUP" - Tortura Companhia Zootcnica Agrria. Carbonato de Sdio Comercia) - Usina Colombina S.A. GIANT" - Laboratrios Anakol Ltda. SAVLON - Imperial Chemical Industries Ltd. BIOCID - Pfizer Qumica Ltda.

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a seqncia de procedim entos descrita a seguir: O substrato de algodo foi embe bido, por imerso, na suspenso de vrus e aps a retirada do excesso de lquido, foi extendido sobre o piso de cim ento e submetido a estreito contato com fezes frescas de bovino, impregnando-se cerca de 250 gramas deste material por m etro quadrado de tecido. O sistema assim constitudo foi m antido por cerca de 30 m inutos e a seguir, com o auxlio de uma escova, foi removido 0 excesso de m atria orgnica de sua super fcie. O tratam ento A consistiu na aplica o do desinfetante sobre os segmentos 1 e III, do substrato, conform e o descrito na operao de pulverizao. O volume de desinfetante pulveriza do em cada segmento foi de 190 10 mililitros. O tratam ento B, utilizado como controle do experim ento, consistiu na aplicao, sobre os segmentos II e IV do substrato, de gua destilada com pH 7,0, conforme o mesmo critrio adotado no tratam ento anterior. O final destas operaes foi cuida dosamente controlado deixando-se o novo sistema em contato durante cinco m inu tos. Decorrido este perodo de contato, procedeu-se a colheita aleatria de amostras
TABELA

circulares de tecido com dimetro de seis centm etros, em nm ero de dez para cada tratam ento, contemplando-se, igualmente cada segmento do substrato. Os dez fragmentos assim obtidos foram pesados e em seguida agregados ao diluente de m odo a atingir uma diluio final de 1:5 (P/V), macerados em grau, sendo a correspondente suspenso clari ficada por centrifugao 2.500 r.p jn ., durante 30 minutos. A suspenso resultante do tratam ento A foi inoculada, por via intraperitonial, em 15 grupos de camundongos com uma dose de 0,05 mililitros por animal. A suspenso B foi submetida ao mesmo procedim ento dispensado suspen so A, exceto pelo fato de ser inoculada em apenas cinco grupos de camundongos. Os animais inoculados foram mantidos em observao por um perodo de sete dias, submetendo-se aos exames usuais para comprovao do vrus, os materiais procedentes daqueles que sucumbiram a partir de 24 horas do m om ento da inocula o.

RESULTADOS

Os resultados obtidos encontram-se tabela apresentada a seguir.

na

Atividade virai, em camundongos, das suspenses resultantes dos tratam entos A e B, expressa em termos de mortalidade e identificao do vrus pela reao de fixao de complemento, para cada um dos desinfetantes estudados. So Paulo, 1978. A MORTALI DADE* 104/119 118/120 1/119 116/118 5/120 IDENTIFICA O + + + * + + MORTALIDA DE* 39/40 39/40 39/40 38/40 40/40 B IDENTIFICA O + + + + +

^ '\^ R A T A M E N T O

D E S IN F E T A N T E ^ Paratolueno Carbonato Hidrxido Gluconato lodofor * mortos/inoculados ** 1? passagem

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Na tabela I, esto registrados os resul tados da atividade virai das suspenses oriundas dos tratam entos A e B, expressos em termos da mortalidade de camundongos e a identificao do vrus pela reao de fixa o de com plem ento, para cada desinfetan te estudado. Observando-se esta tabela, constata-se uma m enor mortalidade entre os camun dongos inoculados com a suspenso tra tada pelo hidrxido de sdio a 2%. De fato, a suspenso virulenta trata da com este produto foi capaz de matar apenas um camundongo lactente em 119 inoculados (0,84%) e mesmo assim a iden tificao do vrus s foi possvel em material obtido aps nova passagem em camun dongos. Mortalidade igualmente baixa foi cons tatada entre os camundongos inoculados com a suspenso tratada pelo Iodofor onde sucumbiram cinco dos 120 animais inoculados (4,16%). As suspenses tratadas pelos demais produtos revelaram os seguintes valores de m ortalidade: Paratolueno 104/119 (87,39%); Gluconato 116/118 (98,30%) e Carbonato de Sdio 118/120 (98,33%). Note-se que em todos os casos o grupo inoculado com a suspenso B (con trole), apresentou valores esperados de mortalidade. DISCUSSO Os resultados obtidos no presente estudo ressaltam alguns aspectos que convem discutir. A atividade virai da suspenso virulen ta tratada pelo Hidrxido de sdio, expressa em termos de mortalidade de camundongos, denota a eficiente ao desinfetante deste produto sobre o vrus C Waldmann da febre aftosa. De fato, dos 199 camundongos inoculados com a referida suspenso apenas um dos animais sucumbiu em decorrncia da ao virai, mesmo assim a identifica o do vrus pela reao de lixao de com plem ento, somente foi possvel quanto o material foi subm etido a nova passagem em camundongos o que sugere tratar-se

de uma quantidade de vrus m uito pequena. A ao desinfetante do Hidrxido de sdio para os vrus da febre aftosa tem sido amplamente demonstrada: FELKAI6 (1972), LUCAM e cols.7 (1964) e WISNLEWSKI15 (1971), sendo relatado que, sobre os vrus da febre aftosa a atividade desinfetante deste produto, in vitro , bastante rpida, todavia, a presena de m atria orgnica exige um maior tempo de contacto, quando se deseja a mesma eficincia. Estes autores ressaltam ainda que a aplicao do Hidrxido de sdio na prtica, encontra srias limitaes devido sua ao corrosiva para metais, seres vivos e artefatos de borracha. Estes incon venientes tambm foram observados durante a execuco deste estudo Apreciado pelo mesmo critrio, o iodofor revelou uma considervel ativi dade desinfetante sobre o vrus C Waldmann da febre aftosa, pois apenas cinco dos 120 camundongos inoculados com a suspenso virulenta, tratada pelo produtos em apreo, morreram em decor rncia da ao virai. Para os outros trs produtos ensaiados, o nmero de camundongos mortos sobre inoculados foi m uito elevado, sendo prticamente idntico ao dos grupos controle, o que leva a concluso de que, nas condi es do presente estudo, tais produtos apresentaram pouca ou nenhuma ao letal sobre o vrus C Waldmann da febre aftosa.

AGRADECIMENTOS Para a realizao deste trabalho contamos com a colaborao da Diretoria Estadual do Ministrio da Agricultura em So Paulo, a cuja direo apresentamos nossos melhores agradecimentos. De m odo particular, queremos agradecer ao Chefe do Laboratrio de Febre Aftosa do Ministrio da Agricultura, em Barretos, Dr. Iracdio Marques de Souza e sua equipe pela dedicao e facilidades que nos pro piciaram.

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ITO, F.H.: ENRIOUEZ-ROZAS, C.E.; VASCONCELLOS, S.A.: GUERRERO, J.; CORTES, J.A. Disinfectant efficacy o f several commercial products against type V " Waldmann virus o f fo o t and mouth disease. Rev. Fac. Med. vet. Zootec. Univ. S. Paulo. 15 (1): 069-074, 1978 SUMMARY: Five commercially available disinfectant products were studied on their activity over Type C Waldmann virus o f fo o t and mouth disease. These disinfectants were tested in pre sence o f organic matter. It was determined that after five minutes o f contact between the virus and disinfectant, the viral suspension intraperitoneally inoculated into suckling mice caused the following mortality depending on the type o f disinfectant utilized: 1/119 (0.84%) mortality after use 2% sodium hydroxide; 5/120 (4.16%) mortality after use o f lodophor at 1:250; 104/119 (87.39%) mortality after use o f 0.3% Paratoluene; 116/118 (98.3%) mortality after use o f 20% Gluconate o f chlorhexidine at 1:200; and 118/120 (98.33%) mortality after use o f 4% sodium carbonate. UNITERMS: F oot and mouth disease*; Virus*; Disinfection*.

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