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UNIVERSIDADE CASTELO BRANCO CENTRO DE CINCIAS AGRRIAS CURSO DE ESPECIALIZAO EM PATOLOGIA CLNICA VETERINRIA

ALTERAES HEMATOLGICAS ENCONTRADAS EM EQINOS COM Theileria equi (T. equi) E Babesia caballi (B. caballi) EM SOROCABA SO PAULO

Amanda Fabola Lopes Dias

Rio de Janeiro, fev. 2008 AMANDA FABOLA LOPES DIAS

Aluna do Curso de Especializao em Patologia Clnica Veterinria

ALTERAES HEMATOLGICAS ENCONTRADAS EM EQINOS COM Theileria equi (T. equi) E Babesia caballi (B. caballi) EM SOROCABA SO PAULO

Trabalho monogrfico de concluso do curso de Especializao em Patologia Clnica Veterinria (TCC) apresentado UCB como requisito parcial para obteno do titulo de Especialista, sob a orientao da Prof Aline Moreira de Souza

Rio de Janeiro, fev. 2008

ALTERAES HEMATOLGICAS ENCONTRADAS EM EQINOS COM Theileria equi (T. equi) E Babesia caballi (B. caballi) EM SOROCABA SO PAULO

Elaborado por Amanda Fabola Lopes Dias Aluna do Curso de Especializao em Patologia Clnica Veterinria da UCB

Foi analisado e provado com grau: _________________

Rio de Janeiro,_______, de__________________ de _______.

_______________________________ Membro _______________________________ Membro _______________________________ Professor Orientador Presidente

Rio de Janeiro, fev. 2008

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Dedicatria

Dedico este trabalho a minha famlia e especialmente ao meu marido pela fora e pacincia.

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Agradecimentos

minha orientadora Prof. Aline pela sua ateno mesmo nos momentos difceis, ao Dr. Mrcio e ao Prof. Marclio pela grande ajuda no desenvolvimento deste trabalho.

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RESUMO

DIAS, A.F. ALTERAES HEMATOLGICAS ENCONTRADAS EM EQINOS COM Theileria equi (T. equi) E Babesia caballi (B. caballi) EM SOROCABA SO PAULO. Trabalho monogrfico de concluso do curso de Especializao em Patologia Clnica Veterinria (TCC) apresentado UCB como requisito parcial para obteno do titulo de Especialista. p. , 2008.

Babesiose uma doena de grande ocorrncia no Brasil, que atinge os eqinos, promovendo queda na performance, alm da perda econmica com medicamentos. No presente estudo foram analisados os hemogramas e pesquisa de hemoparasitas utilizando o mtodo de esfregao sangneo corado com MGG (May Grunwald Giemsa) de 418 amostras de sangue de eqinos cedidas pelo Laboratrio Dave Assistncia Veterinria, situado no municpio de Sorocaba SP no perodo de 01 de Outubro de 2006 a 01 de Outubro de 2007. Destas 418 (100%) amostras, 346 (82,8%) foram negativas e 72 (17,2%) positivas para babesiose. Os resultados mostraram uma diminuio dos valores de hematimetria (Hm), hemoglobinometria (Hg) e hematcrito (Ht) nas amostras positivas para babesiose quando comparados s amostras negativas e monocitose nas amostras positivas.

ABSTRACT

DIAS, A.F. HEMATOLOGICAL ALTERATIONS FOUND IN EQUINE WITH Theileria equi (T. equi) AND Babesia caballi (B. caballi) IN SOROCABA CITY. So Paulo. Monographic work of conclusion of the course of Specialization in Veterinary (TCC) Clinical Pathology presented to UCB as partial requirement for obtaining of the title of Specialist. p. , 2008.

Babesiosis is a disease of great occurrence in Brazil that reaches the equine ones promoting fall in the performance besides the economical loss with medicines. In the present study the blood counts and parasites research were analyzed using the method of blood smear stained with MGG (May Grunwald Giemsa) of 418 samples of blood of equine given in by the Dave Veterinary Assistance Laboratory, located at Sorocaba city, So Paulo state, in the period of October 01, 2006 to October 01, 2007. Of these 418 (100%) samples, 346 (82,8%) were negative and 72 (17,2%) positive for babesiosis. The results showed a decrease of the red blood cells counts (Hm), hemoglobin values (Hg) and haematocrit (Ht) in the positive samples for babesiose when compared to the negative samples and monocitosis in the positive samples.

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SUMRIO
pgina Resumo................................................................................................ Abstract................................................................................................ ndice de Figuras.................................................................................. ndice de Tabelas................................................................................. v vi viii ix

1 Introduo......................................................................................... 2 Reviso de Literatura........................................................................ 2.1 Agente etiolgico........................................................................ 2.1.1 Classificao..................................................................... 2.1.2 Morfologia......................................................................... 2.2 Etiologia, Distribuio, Transmisso.......................................... 2.3 Patogenia................................................................................... 2.4 Alteraes Clnicas.................................................................... 2.5 Alteraes Laboratoriais............................................................ 2.6 Diagnstico................................................................................ 2.7 Tratamento................................................................................. 2.8 Prognstico................................................................................ 3 Material e Mtodos............................................................................ 4 Resultados........................................................................................ 5 Discusso.......................................................................................... 6 Concluso......................................................................................... Referncias Bibliogrficas...................................................................

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NDICE DE FIGURAS
pgina Figura 1 Lmina com o hemoparasita Babesia caballi em forma e3 globosa....................................................................................... Figura 2 Lmina com o hemoparasita Theileria equi em forma de Cruz de Malta.................................................................................... Figura 4 Mdia dos valores de Hm comparados entre as amostras negativas e positivas para T. equi e B. caballi em exame de esfregao sangneo.................................................................. Figura 5 Mdia dos valores de Hg, VCM, HCM e CHCM comparados entre as amostras negativas e positivas para T. equi e B. caballi em exame de esfregao sangneo................................ Figura 6 Proporo de raas dos animais examinados realizados no perodo, no total de 418 amostras.............................................. Figura 7 Proporo de raas dos animais examinados realizados no perodo, que apresentaram-se positivos, no total de 72 amostras..................................................................................... Figura 8 Relao de raas dos animais examinados realizados no perodo, que apresentaram-se negativos, no total de 346 amostras..................................................................................... Figura 9 Mdia dos valores de Metamielcitos, Bastonetes, Segmentados, Linfcitos, Moncitos, Eosinfilos e Basfilos comparados entre as amostras negativas e positivas para T. equi e B. caballi em exame de esfregao sangneo................. 4

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NDICE DE TABELAS
pgina Tabela 1 Comparao das mdias estatsticas entre amostras negativas e positivas para T. equi e B caballi em exame de esfregao sangneo realizados em 418 amostras..................................... Tabela 2 Relao de raas dos animais examinados realizados no perodo, no total de 418 amostras.............................................. Tabela 3 Relao de raas dos animais examinados realizados no perodo, que apresentaram-se positivos no total de 72 amostras..................................................................................... Tabela 4 Relao de raas dos animais examinados realizados no perodo, que apresentaram-se negativos no total de 346 amostras...................................................................................... 20 19 18 16

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1. Introduo

A doena causada pelos hemoparasitas Theileria equi e Babesia caballi tem se destacado muito principalmente em hipdromos, hpicas e centros de treinamento onde os eqinos so submetidos a estresse e trabalho intenso. Esta doena causa danos aos animais alm de grandes gastos com medicamentos, tempo de restabelecimento e queda na performance. Outro problema trazido pela babesiose que os animais acometidos so impedidos de entrar em paises livres da doena. O presente trabalho tem como objetivo comparar as alteraes hematolgicas encontradas em amostras sangneas negativas e positivas para Theileria equi e Babesia caballi atravs do exame de esfregao sangneo corado com MGG (May Grunwald Giemsa).

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2. Reviso de Literatura

2.1 AGENTE ETIOLGICO

2.1.1 CLASSIFICAO

1.

A classificao dos hemoparasitas Babesia equi (Theileria

equi T. equi) e Babesia caballi (B. caballi), descritos neste trabalho, mais utilizada atualmente : Filo Protozoa, Subfilo Apicomplexa, Classe Aconoidasida, Ordem Piroplasmida, Famlias Babesiidae e Theileriidae, Gneros Babesia e Theileria, Espcie Babesia caballi e Theileria equi. Nestes gneros os protozorios no produzem esporos, no tem flagelos, clios ou formam pseudpodes. Locomoo por flexo ou deslizamento. Reproduo assexuada ocorre por fisso binria ou esquizogonia em eritrcitos ou outras clulas sanguneas de mamferos. Apresentam complexo apical (menos desenvolvido) (MADEIRA, 2007).

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Em 1998 Mehlhorn e Schein editaram a redescrio da espcie Babesia equi para Theileria equi. Isto devido ao fato de que os esporozotos de B. equi injetados no eqino pela saliva do carrapato contaminado entram em linfcitos, formam merozotos que saem na circulao e penetram em hemcias. Nestas estes se dividem em quatro formando a Cruz de Malta sendo que esta uma caracterstica das espcies de Theilerias. Outro fator que foi encontrada uma protena na superfcie da B. equi que homologa as espcies de Theileria. Estas observaes junto com os resultados obtidos por comparao de B. equi com outras espcies de Babesias e Theilerias baseado em mtodos de biologia molecular apiam a suspeita de que B. equi na verdade membro do gnero Theileria.

2.1.2 MORFOLOGIA

Em esfregao sangneo corado com Romanowsky observa-se em eritrcitos o protozorio T. equi como pequenas incluses arredondadas com 1 a 2m de dimetro que se dividem em quatro formas piriformes caracterizadas como Cruz de Malta (Fig. 2). O protozorio B. caballi como pares piriformes juntos em um ngulo agudo com 2 a 3 m (Fig. 1 e 3) (FELDMAN, 2000).

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Fig. 1

Fig. 2

Fig. 3

Figuras 1 e 3 - a seta indica o hemoparasita Babesia caballi em forma globosa. Figura 2 - a seta indica o hemoparasita Theileria equi em forma de Cruz de Malta.

2.2 ETIOLOGIA, DISTRIBUIO, TRANSMISSO

A babesiose eqina causada pelos hemoprotozrios Theileria equi e Babesia caballi. -4-

Tanto T. equi quanto B. caballi so transmitidos por carrapatos contaminados (HENRY, 1993; KOBLUCK,1995; ZEIMER & BLOOM, 1999; FELDMAN, 2000). Esporozotos so injetados no hospedeiro junto com a saliva do carrapato vetor, durante seu repasto sangneo e diretamente infectam as clulas vermelhas do sangue. A multiplicao do parasita usualmente resulta em duas (s vezes quatro) clulas filhas, as quais deixam a hemcia parasitada e entram em outra hemcia. A multiplicao continua at a morte do hospedeiro, ou mais comumente at que o sistema imune do hospedeiro acabe com a multiplicao do parasita (UILENBERG, 2006). O nome piroplasma originou-se pelo fato de que os parasitas, depois da multiplicao, tm freqentemente forma de pra. A nomenclatura piroplasmose ainda sobrevive neste meio, tambm porque ambos babesioses e theilerioses so comumente agrupadas juntas segundo a designao piroplasmoses (UILENBERG, 2006). Babesia definido como parasita que, uma vez injetado no hospedeiro, entra diretamente nas hemcias. Em contraste, esporozotos de Theileria no infectam hemcias, mas penetram em linfcitos (ou macrfagos) nos quais desenvolvem esquizontes. Os merozotos liberados dos esquizontes entram nas hemcias onde crescem em formas no pigmentadas de piroplasmas e multiplicam em ascenso em quatro clulas, formando ttrades muitas vezes em forma de Cruz de Malta (UILENBERG, 2006). Em um estudo epidemiolgico realizado por BARBOSA et al. (1995) no Rio de Janeiro eles concluram que o carrapato Anocentor nitens (A. nitens) foi implicado como vetor da Babesia caballi, porm nem A. nitens nem Amblyomma cajenense (A. cajenense) foram identificados como vetores de T. equi. Segundo -5-

STILLER & COAN (1995) muito pouca informao disponvel sobre transmisso atravs de carrapatos vetores natural ou experimental de Theileria equi e Babesia caballi no Hemisfrio Norte. SOUZA et al. (2000) sugeriram que a manuteno de eqinos portadores de T. equi, no Planalto Catarinense podem estar associadas possibilidade de transmisso por Boophilus microplus (B. microplus). HEUCHERT et al. (1999) encontraram evidencias epidemiolgicas para a transmisso de T. equi por B. microplus. KERBER et al. (1999), encontraram altas prevalncias de T. equi em fazendas onde eqinos e bovinos dividem o mesmo pasto e no ocorre controle de carrapato. Segundo AVARZED et al (1997) na Monglia os carrapatos vetores de T. equi e B. caballi so desconhecidos. PORTZ et al. (2007) confirmaram a presena de infeco intrauterina por T. equi em reas endmicas. T. equi e B. caballi tem distribuio mundial, incluindo Europa, sia, frica e Amricas, porm endmica em paises tropicais (HENRY, 1993; ZEIMER and BLOOM, 1999; FELDMAN, 2000). Ainda CAMACHO et al. (2005) sugerem que a piroplasmose est difundida na regio da Galicia, Espanha. AVARZED et al. (1997) e BOLDBAATAR et al. (2005) mostraram que a prevalncia de infeco por T. equi na Monglia foi mais alta que por B. caballi, tambm observaram que a prevalncia de babesiose foi mais baixa em reas subtropicais em relao s tropicais e que houve uma alta prevalncia da doena em regies de semi-deserto. KERBER et al. (1999) corroboram com esta observao. A prevalncia de B. caballi foi mais alta do que T. equi em So Paulo Brasil do que em outras regies segundo HEUCHERT et al. (1999) devido possivelmente ao manejo dos haras que foram estudados. PEREIRA et al. (2004) -6-

e BALDANI et al. (2007) encontram uma ocorrncia de T. equi superior na populao de estabelecimentos eqestres do Sul e Sudeste do Brasil do que a B. caballi. BOTTEON et al. (2002) observaram que no estado do Rio de Janeiro Brasil a forma aguda da babesiose ocorre principalmente em animais mantidos em regime de confinamento e que raramente afeta animais criados soltos em pasto.

2.3 PATOGENIA

Uma vez que os protozorios T. equi ou B. caballi invadem as hemcias o sistema mononuclear fagocitrio age na remoo destas clulas parasitadas ocorrendo assim anemia hemoltica (HENRY, 1993). A patogenia da doena pode variar de acordo com o estado nutricional e imunolgico do animal. HAILAT et al. (1997) concluram que exerccio pesado em cavalos pode predispor as manifestaes clinicas de babesiose, resultados tambm encontrados por NOGUEIRA et al. (2005) que concluem que a imunossupresso que predispe s manifestaes clinicas da babesiose pode ser induzida atravs de restrio alimentar, aplicao de corticides e esforo fsico.

2.4 ALTERAES CLNICAS

O perodo de incubao varia de 2 a 10 dias at 21 dias dependo do vetor e desenvolvem os sinais clnicos que consistem em febre, anemia, -7-

depresso, anorexia, membranas ictricas, equimoses, edema de extremidades e abdmen ventral, hemoglobinemia, hemoglobinria (HENRY, 1993; KOBLUCK, 1995; MEHLHORN and SCHEIN, 1998; ZEIMER and BLOOM, 1999; FELDMAN, 2000). Segundo KOBLUCK (1995) pode ocorrer tambm constipao, clica e diarria. J BOTTEON et al. (2005) no constataram estatisticamente a interao entre a ocorrncia de babesiose clinica e clica. Segundo PEREIRA et al. (2004), BOTTEON et al. (2005) e NOGUEIRA et al. (2005) quando ocorre queda de performance em animais atletas a principal suspeita a babesiose.

2.5 ALTERAES LABORATORIAIS

CAMACHO et al. (2005) encontraram uma significativa diminuio da hematimetria (Hm), hemoglobinometria (Hg) e hematcrito (Ht) de animais com sinais clnicos e com presena do parasita no esfregao sangneo, comparados com o controle negativo sem sinais clnicos. Entre os infectados, a anemia foi mais severa nos infectados com T. equi do que os infectados com B. caballi. Tambm observaram uma diminuio na contagem de plaquetas e um significativo aumento nas concentraes de bilirrubina total, uria, AST, GT, CK e LDH. CUNHA et al. (1998) tambm obtiveram uma grande queda no hematcrito de animais inoculados experimentalmente com T. equi comparado com o controle negativo.

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2.6 DIAGNSTICO

O diagnstico diferencial de babesiose inclui outras causas de anemia hemoltica como prpura hemorrgica e arterite viral eqina. O diagnstico definitivo de babesiose depende da demonstrao do organismo em esfregao sangneo corado com Giemsa ou Wright ou sorologia (HENRY, 1993; ZEIMER & BLOOM, 1999). Segundo BSE et al. (1995) como exame diagnstico para deteco do parasita, a microscopia de deteco ainda o melhor mtodo e mais sustentvel para diagnstico em doena aguda e indispensvel em todos os laboratrios. Esta tcnica no cara e razoavelmente porttil, porm a acurcia do diagnstico depende de treinamento e qualificao do microscopista. Eles observaram tambm que a maioria das espcies de Babesia mais numerosa nas amostras coletadas da circulao capilar do que nas coletadas em vasos de maior calibre. A ausncia do organismo Babesia no sangue perifrico no exclui o diagnstico de piroplasmose. (KOBLUCK, 1995). Apesar de alta especificidade, o exame microscpico de esfregao sangneo tem baixa sensibilidade para deteco de animais portadores (BALDANI et al., 2004). A cultura in vitro de espcies de Babesia progrediu bastante na dcada de 80. As espcies de Babesia mais importantes economicamente podem ser mantidas em cultura (BSE et al., 1995). ZWEYGARTH et al. (2002)

concluram que a confiabilidade da tcnica de cultura pode ser melhorada -9-

aumentando o perodo da cultura e que possvel diagnosticar T. equi em infeces mistas por este mtodo. A tcnica de cultura cara e requer pessoal qualificado. A cultura pode ser usada na padronizao de soros utilizados em testes sorolgicos e para a avaliao em teste de deteco de parasitas (BSE et al., 1995). STOBBE et al. (1991) concluram que a tcnica de distenso de gota de cogulo de sangue corada com Giemsa adequada identificao de B. caballi e T. equi. O teste da Fixao de Complemento (FC) um teste para deteco de anticorpos especficos. usado na rotina para deteco de T. equi e B. caballi. baseado primeiramente em reaes de anticorpos IgM, os quais aparecem principalmente em infeces primarias. A sensibilidade do teste baixa na

maioria dos animais com infeco crnica (BSE et al., 1995). A Imunofluorescncia Indireta (IFI) um teste para deteco de anticorpos especficos. Tem baixo custo por teste, os reagentes utilizados so facilmente encontrados ou podem ser produzidos no local. As desvantagens so que quando se tm poucas amostras no compensa o uso desta tcnica, pois se torna bastante cansativo para o operador. Os resultados so influenciados pelo julgamento subjetivo do operador que faz a padronizao (BSE et al., 1995). Segundo TENTER and FRIEDHOFF (1986) o teste de IFI mais sensvel que o teste de FC, j que no obtiveram resultados falso-negativos em seu estudo. O teste ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) utilizado para deteco de anticorpos especficos e pode ser muito eficiente e sensvel. A

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qualidade dos antgenos disponveis, entretanto crucial para o desenvolvimento da sensibilidade e especificidade do teste (BSE et al., 1995). Ainda como teste existe a sonda de DNA que pode ser usado para a deteco do DNA do parasita no sangue, tecidos ou em carrapatos. O mtodo baseado na hibridizao especifica de um fragmento de DNA clonado para um DNA alvo. Isto faz com que seja altamente especifico na identificao e diferenciao de Babesia spp. A sensibilidade deste teste limitada pela quantidade de DNA alvo presente na amostra. Comparado com as tcnicas de microscopia, a sonda de DNA muito cara, demorada, requer equipamento especial, falta sensibilidade e no so particularmente teis na identificao de animais portadores (BSE et al., 1995). A Tcnica de PCR (Polymerase Chain Reaction) foi aplicada onde uma alta sensibilidade necessria, e com isso leva grande vantagem em relao sonda de DNA. A PCR repete amplificaes de uma seqncia especifica de DNA do genoma do organismo alvo para produzir um produto facilmente detectvel. uma tcnica tima para deteco de animais portadores e outras aplicaes, mas atualmente muito cara e restrita a laboratrios bem equipados (BSE et al., 1995).

2.7 TRATAMENTO

Babesia caballi pode efetivamente ser eliminado com diproprionato de imidocarb (Imizol) na dosagem de 2mg/kg, intramuscular, uma vez ao dia em dois tratamentos. (HENRY, 1993; KOBLUCK, 1995; ZEIMER and BLOOM, 1999). - 11 -

Theileria equi mais resistente e a terapia recomendada 4mg/kg de diproprionato de imidocarb, intramuscular a cada 72horas em quatro tratamentos. Pode no ser possvel acabar com a infeco e o animal tornar-se portador. (KOBLUCK, 1995; KERBER et al, 1999; ZEIMER and BLOOM, 1999; ZWEYGARTH and LOPEZ-REBOLLAR, 2002). Mesmo em altas doses o Imidocarb apenas 50% efetivo na eliminao de T. equi (HENRY, 1993). Segundo NOGUEIRA et al. (2005) o diproprionato de imidocarb nas doses de 1,2 e 2,4mg/Kg eficaz na quimioprofilaxia da babesiose eqina frente s situaes estressantes em que o eqino portador esteja predisposto a apresentar quadros de reagudizao da doena. Os efeitos txicos do diproprionato de imidocarb incluem: salivao, irritabilidade, clica e hipermotilidade gastrointestinal. (KOBLUCK, 1995). A droga antitheilerial Buparvaquone (Cexon) na dose de 4 6mg/kg em uma nica dose aproximadamente 80% efetivo no tratamento de sinais agudos causados por T. equi (HENRY,1993; KOBLUCK, 1995; MEHLORN and SCHEIN,1998). Segundo Cunha et al. (1997) utilizando diaceturato de diaminazeno (Diazeg) na dosagem de 6mg/kg por trs vezes com intervalo de 24horas os animais mesmo com altas parasitemias de T. equi recuperam a clinica. indicado tambm o uso de amicarbalida (Diampron) na dose de 8,8mg/Kg, intramuscular durante dois dias consecutivos. E fenamidina

(Lomadine) tambm na dose de 8,8mg/Kg por dois dias consecutivos para tratar B. caballi e quatro a cinco dias consecutivos para T. equi. (McDOUGALD e ROBERSON, 1992).

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Todas as drogas contra babesiose so potencialmente txicas, principalmente em teraputicas mltiplas. Podem ocorrer principalmente leses hepticas. (McDOUGALD e ROBERSON, 1992). Devido a esses efeitos txicos utilizado comumente uma terapia de suporte incluindo metionina (Mercepton) na dose de 20 mg/Kg, vitaminas do complexo B (Catosal), na dose de 10mg/Kg e Soluo Glicose 5% a 100mg/kg nos animais com anorexia. (GEOR and WEISS, 1993; HAILAT et al, 1996). No h dvidas que as babesias podem desenvolver resistncia s drogas, no se conhece o grau de resistncia no uso teraputico e profiltico dessas substncias no campo. (McDOUGALD e ROBERSON, 1992). A utilizao de controle de carrapatos e tratamento em animais que apresentam sinais clnicos desejvel para evitar aborto, transmisso intrauterina, doena clnica em situaes de estresse e limitao na exportao e participao de esportes eqestres.( KERBER et al. 1999). A suplementao diettica de Vitamina E na dose de 80mg/100Kg no foi suficiente para modular a resposta imune nas guas e respectivos potros e no houve resposta imunomoduladora de Vitamina E na IgG do colostro das guas. (PORTZ et al., 2007).

2.8 PROGNSTICO

Em condies ideais, onde carrapatos vetores so suficientemente numerosos, a populao hospedeira tem adquirido uma tolerncia natural para a

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infeco, animais jovens tm imunidade passiva, anticorpos esto presentes no colostro. Esta situao chamada endemicamente estvel (UILENBERG, 2006). B. caballi tem baixa mortalidade e os sinais clnicos diminuem em poucas semanas. T. equi tem um curso mais severo e pode matar em 24 a 48horas aps o inicio dos sintomas. (KOBLUCK, 1995). Cavalos infectados com B. caballi podem elimin-lo

espontaneamente depois de 12 a 42 meses, isso parece no ocorrer em animais infectados com T. equi. (KOBLUCK, 1995).

3. Material e Mtodos

Foram avaliados os exames realizados no laboratrio Dave Assistncia Veterinria Ltda, situado dentro do Jockey Club de Sorocaba, na cidade de Sorocaba - SP, no perodo de 01/10/2006 a 01/10/2007. No h um controle sobre a coleta das amostras nem sobre os animais coletados, pois elas so trazidas ao laboratrio por veterinrios, treinadores ou proprietrios aleatoriamente. No h acesso a informaes sobre sinais clnicos dos animais. As amostras so trazidas em tubo a vcuo contendo anticoagulante EDTA. Os resultados dos hemogramas foram obtidos da seguinte forma: Hematimetria, Hemoglonometria, Leucometria por contador de clula automtico (Celmm CC-530); - 14 -

Hematcrito por microcentrifugao 11.500 rpm por 3 minutos; Contagem diferencial manual; O mtodo de deteco na pesquisa de hemoparasitas por esfregao em lmina com material coletado em EDTA, corado com MGG (May Grunwald Giemsa) e observado ao microscpio em aumento de 1000x, com auxilio de leo de imerso, onde so contados 106 eritrcitos podem ser analisadas por aproximadamente 10 minutos. Um parasita pode ser observado entre 105 e 106 eritrcitos. A vantagem desta tcnica uma excelente demonstrao de detalhes morfolgicos, diferenciando assim as espcies dos hemoparasitas (BSE et al., 1995). Foi utilizado o teste estatstico de Tukey da metodologia A Statistical Analysis System (SAS 1999) para organizar os dados fornecidos pelo laboratrio. Este teste compara a mdia ajustada para os efeitos e faz um clculo sob a diferena mnima estatstica, levando assim, em considerao o desvio padro.

4. Resultados

Foi observada uma significativa diminuio estatstica (p<5) nos valores de Hm, Hg e Ht das amostras positivas quando comparados com as negativas, porm na mdia, tanto as amostras positivas quanto negativas no apresentaram estes valores abaixo dos da normalidade (Tabela 1). A mdia dos valores de moncitos foi maior estatisticamente nas amostras positivas quando comparada com as negativas (Tabela 1). - 15 -

Tabela 1: Comparao das mdias estatsticas entre amostras negativas e positivas para T. equi e B caballi em exame de esfregao sangneo realizados em 418 amostras. AMOSTRAS NEGATIVAS (mdias) (n=346) 8901.2a 13.6653a 37.9451a 42.7919 15.4162 35.9971
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PARMETROS (valores de ref.) Hemcias (6,0 11,0 x 1012 cls/L) Hemoglobina (12,5 - 17g%) Hematcrito (32 - 48%) VCM (35 - 50 fl) HCM (13 - 18pg.) CHCM (34 - 39g%) Leuccitos (5,5 12,0 x 10 cls/L) Metamielcitos (0%) Bastonetes (0 - 2%) Segmentados (35 - 71%) Linfcitos (27 - 59%) Moncitos (1 - 7%) Eosinfilos (0 - 7%)
a,b

AMOSTRAS POSITIVAS (mdias) (n=72) 7820.3b 12.0236b 33.3056b 43.4861 15.6944 36.0972 9620.8 0.00000 1.0417 56.708 36.514 5.0417a 1.1806

10115.6 0.02312 0.8208 56.832 37.075 3.8815 1.3786


b

Basfilos (0 - 4%) 0.10983 0.12500 So as mdias que obtiveram diferena estatstica significativa (p<5).

Fonte: dados cedidos pelo Laboratrio DAVE Assistncia Veterinria no perodo de 01 de Outubro de 2006 a 01 de Outubro de 2007. (SAS 1999).

5. Discusso

Com os resultados deste trabalho observa-se uma diminuio das mdias dos valores de Hm, Hg e Ht das amostras positivas quando comparados com as negativas, porm a mdia das amostras positivas no est abaixo dos valores normais de referncia (Figuras 4 e 5).

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Mdia das amostras negativas 12000 10000 8000 mm/l 6000 4000 2000 0 HEMCIAS Mdia das amostras positivas

Figura 4: Mdia dos valores de Hm comparados entre as amostras negativas e positivas para T. equi e B. caballi em exame de esfregao sangneo.
Fonte: dados cedidos pelo Laboratrio DAVE Assistncia Veterinria no perodo de 01 de Outubro de 2006 a 01 de Outubro de 2007.

Mdia dos valores de Hg, Ht, VCM, HCM, CHCM


50,0 40,0 30,0 20,0 10,0 0,0 HEMOG. HEMAT. V.C.M. H.C.M. C.H.C.M. Mdia de amostras positivas Mdia de amostras negativas

Figura 5: Mdia dos valores de Hg, Ht, VCM, HCM e CHCM comparados entre as amostras negativas e positivas para T. equi e B. caballi em exame de esfregao sangneo.
Fonte: dados cedidos pelo Laboratrio DAVE Assistncia Veterinria no perodo de 01 de Outubro de 2006 a 01 de Outubro de 2007.

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Isto pode ser explicado pelo fato que a maioria das amostras realizadas neste perodo so de animais da raa Quarto de Milha que possuem como principal finalidade esporte como, por exemplo, corrida, e estes animais so chamados de cavalos sangue quente (Tabelas: 2, 3 e 4) e (Figuras 6, 7 e 8). Segundo LASSEN & SWARDSON (1995) o Ht, Hg e Hm podem se elevar subseqente ao excitamento, devido contrao esplnica em 41%, 39% e 5% respectivamente. Os parmetros eritrocitrios tambm so influenciados pela raa. Cavalos sangue quente tm aumento nos nveis de Hm, Hg e Ht.

Tabela 2: Relao de raas dos animais realizados no perodo, no total de 418 amostras.
TOTAL DE EXAMES POR RAA ANGLO RABE APPALOOSA BRETO HOLSTEINER/PONEY MANGALARGA MESTIO QM P.S.A.* P.S.I.* P.S.L.* PAINT PONEY QUARTO DE MILHA S.R.D.* TOTAL 2 10 2 1 6 3 8 8 2 4 1 329 42 418 0,5% 2,4% 0,5% 0,2% 1,4% 0,7% 1,9% 1,9% 0,5% 1,0% 0,2% 78,7% 10,0% 100,0%

Fonte: dados cedidos pelo Laboratrio DAVE Assistncia Veterinria no perodo de 01 de Outubro de 2006 a 01 de Outubro de 2007. *P.S.A. Puro Sangue rabe; P.S.I. Puro Sangue Ingls; P.S.L. Puro Sangue Lusitano; S.R.D Sem raa definida.

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Raas avaliadas

ANGLO RABE APPALOOSA BRETO HOLSTEINER / PONEY MANGALARGA MESTIO QM P.S.A. P.S.I. P.S.L. PAINT PONEY QUARTO DE MILHA S.R.D.

Figura 6 - Proporo de raas dos animais realizados no perodo, no total de 418 amostras.
Fonte: dados cedidos pelo Laboratrio DAVE Assistncia Veterinria no perodo de 01 de Outubro de 2006 a 01 de Outubro de 2007.

Tabela 3:Relao de raas dos animais realizados no perodo, que apresentaramse positivos no total de 72 amostras.
EXAMES POSITIVOS POR RAA ANGLO RABE APPALOOSA BRETO HOLSTEINER/PONEY MANGALARGA MESTIO QM P.S.A.* P.S.I.* P.S.L.* PAINT PONEY QUARTO DE MILHA S.R.D.* TOTAL 1 3 1 1 2 1 3 2 1 1 0 45 11 72 1,4% 4,2% 1,4% 1,4% 2,8% 1,4% 4,2% 2,8% 1,4% 1,4% 0,0% 62,5% 15,3% 100,0%

Fonte: dados cedidos pelo Laboratrio DAVE Assistncia Veterinria no perodo de 01 de Outubro de 2006 a 01 de Outubro de 2007. *P.S.A. Puro Sangue rabe; P.S.I. Puro Sangue Ingls; P.S.L. Puro Sangue Lusitano; S.R.D Sem raa definida.

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Animais positivos

ANGLO RABE APPALOOSA BRETO HOLSTEINER / PONEY MANGALARGA MESTIO QM P.S.A. P.S.I. P.S.L. PAINT PONEY QUARTO DE MILHA S.R.D.

Figura 7- Proporo de raas dos animais examinados realizados no perodo, que apresentaram-se positivos, no total de 72 amostras.
Fonte: dados cedidos pelo Laboratrio DAVE Assistncia Veterinria no perodo de 01 de Outubro de 2006 a 01 de Outubro de 2007.

Tabela 4:Relao de raas dos animais examinados realizados no perodo, que se apresentaram negativos no total de 346 amostras.
EXAMES NEGATIVOS POR RAA ANGLO RABE APPALOOSA BRETO HOLSTEINER/PONEY MANGALARGA MESTIO QM P.S.A.* P.S.I.* P.S.L.* PAINT PONEY QUARTO DE MILHA S.R.D.* TOTAL 1 7 1 0 4 2 5 7 1 3 1 283 31 346 0,3% 2,0% 0,3% 0,0% 1,2% 0,6% 1,4% 2,0% 0,3% 0,9% 0,3% 81,8% 9,0% 100,0%

Fonte: dados cedidos pelo Laboratrio DAVE Assistncia Veterinria no perodo de 01 de Outubro de 2006 a 01 de Outubro de 2007. *P.S.A. Puro Sangue rabe; P.S.I. Puro Sangue Ingls; P.S.L. Puro Sangue Lusitano; S.R.D Sem raa definida.

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Animais negativos

ANGLO RABE APPALOOSA BRETO HOLSTEINER / PONEY MANGALARGA MESTIO QM P.S.A. P.S.I. P.S.L. PAINT PONEY QUARTO DE MILHA S.R.D.

Figura 8 - Relao de raas dos animais examinados realizados no perodo, que apresentaram-se negativos, no total de 346 amostras.
Fonte: dados cedidos pelo Laboratrio DAVE Assistncia Veterinria no perodo de 01 de Outubro de 2006 a 01 de Outubro de 2007.

Os valores de VCM, HCM e CHCM no tiveram diferenas estatsticas (Figura 5). Este fato ocorreu pela possibilidade de na mdia os animais terem idades parecidas apesar de no haver a informao da idade correta, a maioria dos animais est em treinamento de corrida como dito anteriormente e nesta fase eles esto em idades aproximadas. A idade influencia os parmetros eritrocitrios. Do nascimento at 4 semanas de idade os valores de Hg, Ht e VCM diminuem. De 1 ms a 9 meses Hm aumenta enquanto que Hg e VCM so mais baixos. Hg, Ht e VCM aumentam de 9 meses a 2 anos enquanto que Hm diminuem (LASSEN and

SWARDSON,1995).

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CAMACHO et al. (2005) observaram que animais infectados naturalmente com sinais clnicos e positivos no exame de esfregao sangneo possuem valores de Hm, Hg e Ht diminudos quando comparados com o grupo controle (no parasitados). Relatam ainda que entre os animais do grupo controle no parasitados, existem alguns soropositivos que no apresentaram mudanas significativas nos parmetros hematolgicos, exceto para o Ht, o qual foi significativamente baixo nos soropositivos e sugerem que estes so portadores e possuem infeco subclnica. HAILAT et al. (1997) tambm obtiveram como resultado uma diminuio nos valores de Hm, Ht, e Hg nos animais que apresentaram sinais clnicos e positivos no exame de esfregao sangneo aps serem submetidos a exerccio extenuante quando comparados a animais portadores e animais livres de babesiose. Eles tambm no observaram diferenas significativas em VCM, HCM e CHCM. O trabalho de DE WAAL et al. (1987) com animais infectados experimentalmente tambm mostrou uma queda nos parmetros de Hm, Hg e Ht tanto em animais infectados com T. equi como em infectados com B. caballi. CUNHA et al. (1997) detectaram uma queda de 73% no Ht de um animal portador aps a esplenectomia. J NOGUEIRA et al. (2005) no obtiveram uma queda relevante no Ht de animais submetidos imunossupresso. Neste estudo no foi encontrada uma diferena significativa de Leucometria global entre amostras positivas comparadas com negativas.

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Podemos sugerir ento que a babesiose no altera o parmetro de leuccitos totais. J Hailat et al. (1996) encontraram um aumento de Leuccitos nos animais com sintomatologia e positivos no exame de esfregao sangneo. Este resultado pode ser explicado porque no trabalho deles os animais foram submetidos a exerccio intenso o que pode ter causado leses musculares elevando assim os leuccitos.

Foi observado um aumento significativo em moncitos nas amostras positivas quando comparadas com as negativas (Figura 9).
Mdia dos valores de Meta, Bast, Seg, Linf, Mon, Eos, Baso
60 50 40 30 20 10 0 METAMIE. BAST. SEG. LINF. MON. EOS. BASO amostras positivas amostras negativas

Figura 9: Mdia dos valores de Metamielcitos, Bastonetes, Segmentados, Linfcitos, Moncitos, Eosinfilos e Basfilos comparados entre as amostras negativas e positivas para T. equi e B. caballi em exame de esfregao sangneo.
Fonte: dados cedidos pelo Laboratrio DAVE Assistncia Veterinria no perodo de 01 de Outubro de 2006 a 01 de Outubro de 2007.

A principal funo dos moncitos e dos macrfagos a fagocitose, particularmente de partculas grandes tais como debris celulares, sendo os nicos capazes de fagocitar grandes microorganismos como protozorios (ALBERTS, 1994; KERR, 2003). - 23 -

PORTZ et al. (2007) observaram que uma das guas do seu experimento apresentou alm da reduo no Ht e Hg uma evidente monocitose.

6. Concluso
Conclumos que apesar de existirem exames com maior

sensibilidade para diagnosticar babesiose como Imunofluorescncia Indireta, Elisa, PCR, o exame de esfregao sangneo ainda o mais eficaz para diagnosticar a babesiose quando o animal est com os sintomas e imprescindvel sua realizao em laboratrios clnicos. Pelo fato de as amostras positivas apresentarem queda dos valores de Hm, Hg e Ht podemos concluir que estes animais mesmo no apresentando uma evidente anemia sofrem uma diminuio na capacidade de oxigenao e isto quando associado com intenso trabalho como ocorre em animais de corrida, sem dvida acarretar em prejuzo de seu potencial. Existem ainda poucos trabalhos sobre as alteraes hematolgicas causadas por babesiose eqina e observamos a necessidade de novos trabalhos com mais parmetros a serem analisados.

Referncias Bibliogrficas

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