UNIVERSIDAD DE PAMPLONA FACULTAD DE SALUD PROGRAMA DE BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO CORRELACION CLINICA HEMATOLOGIA UNIDAD N.

1 GENERALIDADES OBJETIVOS: Conocer y poner en practica las normas bsicas de bioseguridad impartidas en el laboratorio clnico Adquirir destreza en la lectura del frotis de sangre perifrica y conocer su forma de reporte

FUNDAMENTO: NORMAS DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO CLINICO El bacterilogo cada da tiene mas exigencias en su profesin para dar un resultado de ptima calidad, pero de igual manera es un riesgo mayor que corre con la manipulacin de las muestras que tiene que procesar. Por ello es de gran inters conocer el conjunto de normas y procedimientos que garantizan el control de los factores de riesgos fsicos, qumicos y biolgicos que pudieran afectar al personal vinculado al laboratorio clnico o a los miembros de la comunidad. Normas bsicas de bioseguridad que debe cumplir un trabajador en el laboratorio son: Lavarse las manos con agua y jabn (o el antisptico necesario) antes de iniciar cualquier procedimiento, despus de terminado el procedimiento (sobre todo si manipul material y/o especmenes de carcter infeccioso) e incluso en el momento de abandonar el rea de trabajo. Limpiar y desinfectar previamente el rea de trabajo as no se valla a trabajar con materiales de carcter infeccioso. Una vez limpia, debe lavarse nuevamente las manos. En los mesones no se debe colocar material personal que sirva de vehiculo infeccioso como bolsos, chaquetas, libros, etc. Utilizar el equipo de proteccin para todo tipo de proceso: Bata, uniforme, guantes, gorro, tapabocas, zapatos de suela no deslizable.

Todo el material a colocarse debe estar estril en el momento de uso y una vez termina el procedimiento debe descartarse aquel material que es descabale y desinfectar y/o esterilizar las prendas contaminadas mediante procesos adecuados. No se debe llevar la ropa de laboratorio fuera de este y debe tenerse a la mano otra bata o juego de ropa limpioestril para salir del mismo El personal no debe introducir ni consumir alimentos en las reas del laboratorio. No se debe guardar comida ni bebidas en los refrigeradores ni en ninguna de las zonas de trabajo. Tampoco se debe permitir la aplicacin de cosmticos ni el uso de anillos dentro del laboratorio. Se recomienda que las damas aseguren por detrs su cabello, de forma tal que no entren en contacto con superficies contaminadas. No pipetear con la boca, usar ayudas mecnicas tales como dispensadores, bulbos y/o pipetas automticas. Evitar la exposicin a gases, vapores y aerosoles por medio de la campana de gases y extraccin, especialmente con sustancias voltiles y toxicas Utilizar las diferentes cabinas de seguridad para trabajar tanto elementos infecciosos como txicos. Cada laboratorio debe tener un equipo de emergencia para derrames con el fin de neutralizar reactivos cidos, bases y solventes cuando estos se derramen, e instruir a los empleados sobre su uso. Cada laboratorio debe tener materiales y reactivos necesarios para realizar los procesos de desinfeccin y esterilizacin necesarios No permitir la entrada de nios y animales a las reas de trabajo Autorizar el paso a reas del laboratorio, solo a las personas que hayan sido informadas sobre los posibles riesgos y que satisfagan los requisitos que se exigen para entrar Terminado el proceso tcnico se deben lavar las manos bajo las condiciones de asepsia que tenga estandarizadas el laboratorio Una vez terminada las labores el estudiante debe recoger todo el material de trabajo, descartar cada material en su sitio y condicin apropiada, limpiar y desinfectar nuevamente los mesones, dejar las sillas debajo de los mismos, ordenar el sitio de trabajo, asegurarse que las llaves de gas, agua y otros estn perfectamente cerradas y lavarse las manos antes de abandonar el sitio de trabajo Cada laboratorio de acuerdo con su perfil ocupacional, va agregando normas a sus trabajadores con el fin de garantizar su seguridad en el laboratorio Las agujas y las jeringas usadas antes de descartarlas debe pasar por el Guardin; nunca vuelva a colocar la aguja en su funda, y deben ser incineradas

Al manipular muestras biolgicas utilizar guantes siempre y con mucha precaucin, marcar correctamente todos los reactivos que se utilicen. PRACTICA: ANALISIS DE EXTENDIDO DE SANGRE PERIFERICA FROTIS DE SANGRE PERIFERICA El frotis de sangre perifrica es un modelo evaluativo de las diferentes lneas sanguneas que sirve para valorar el funcionamiento general de la mdula sea a travs de sus componentes celulares, lo cual implica la evaluacin de las lneas eritrocticas, leucocitaria y megacarioctica, determinando anormalidades en forma, tamao, color e inclusiones citoplasmticas, dando una medida cuantitativa y cualitativa de los elementos que lo conforman El FSP es un reflejo del buen funcionamiento de la mdula sea y de los diferentes factores que influyen en la presencia de clulas maduras en calidad y cantidad normal en el tejido sanguneo. Es necesario realizar una evaluacin acertada para poder conducir con acierto los hallazgos patolgicos. Para un buen examen del FSP es necesario realizar un buen extendido de sangre perifrica realizado con muestras de sangre obtenidas por puncin venosa y/o capilar SIN ANTICUAGULANTE MATERIALES Y EQUIPOS: Aceite de inmersin Microscopio Lminas de coleccin.

PROCEDIMIENTO: Escoja una lamina y enfquela en el microscopio En un aumento de bajo poder (10x) y mirando el cuerpo del extendido, escoja 10 campos microscpicos uniformes y homogneos donde los eritrocitos se encuentren bien distribuidos para la observacin de la morfologa de glbulos rojos, glbulos blancos y plaquetas Realizar el informe de forma correcta teniendo en cuenta lo siguiente:

VALORACION DE GLOBULOS ROJOS: Los glbulos rojos que no presentan anormalidades se informa como: NORMALES EN MORFOLOGIA. En aquellos FSP en los que se encontramos anormalidades se reporta cada patologa.

ANISOCITOSIS:

El trmino anisocitosis implica presencia de clulas de diferente tamao, para evaluarla se tiene en cuenta el nmero de estas en el promedio de 10 campos y se reporta as: NORMAL 0-5 ADE LIGERA 6 - 15 16.1 - 18 MODERADA 16 - 30 18.1 - 20 MARCADA Mayor de 30 Mayor de 20.1

Los contadores automatizados actuales nos informan el grado de dispersin en tamao en el eje X de los glbulos rojos contados, utilizando el histograma de frecuencias de hemates calcula el ADE (ancho de distribucin de eritrocitos) o RDW. Por lo tanto, un ADE mayor de 15,5 (valor normal encontrado para nuestra poblacin) podra relacionarse con anisocitosis, si esta acompaado de VCM disminuido, podramos pensar en anisocitosis con microcitosis, y si esta aumentado este VCM, la relacionaramos con macrocitosis. Se debe tener cuidado con estas apreciaciones, ya que en la practica se puede observar el ADE aumentado por causas diferentes a la anisocitosis, como es el caso de poiquilocitosis con microesferocitosis, esquistocitos, anulocitos, leptocitos, debido a que estas clulas son de menor tamao y pueden tener un registro en volumen menor que en un discolito, llegando incluso a ser menores de 30 f. Tambin se puede encontrar un VCM aumentado por el dimetro de ovalocitos, eliptocitos, sin necesidad de hablar de clulas macrocticas, o detectar el ADE aumentado con un VCM normal en pacientes con anemias dimorfas, en los que vamos a encontrar poblaciones tanto de micro como de macro en el FSP. La importancia es corroborar los resultados que arrojan los equipos con la observacin minuciosa del FSP Para evaluar la intensidad de micro y macrocitosis se tiene en cuenta los siguientes parmetros: Se informa por cruces dependiendo de la cantidad de glbulos rojos microcticos o macrocticos en un promedio de 10 campos. Para realizar la macrocitosis y la microcitosis con el VCM tenemos en cuenta los siguientes parmetros: INDICE Micro: VCM (fl) NORMAL 0 -5 81 - 99 LIGERA (+) 6 - 15 80 - 70 MODERADA (++) 16 - 30 69 - 60 MARCADA (+++) Mayor de 30 Menor de 60

Macro: VCM (fl)

80 - 99

100 - 108

109 - 120

Mayor de 120

POIQUILOCITOSIS: Hablamos de poiquilocitosis cuando encontramos variaciones en la forma de los glbulos rojos. Se informa como ligera, moderada o marcada con presencia de y se especifica a expensas de que esta dada y en que intensidad cada una. NORMAL 0 -5 LIGERA (+) 6 - 15 MODERADA (++) 16 - 30 MARCADA (+++) Mayor de 30

Ejemplo: moderada poiquilocitosis con presencia de codocitos (++) y eliptocitos (+) El anterior dato se obtiene del promedio de cada una de las diferentes formas y el valor total de la poiquilocitosis ser la sumatoria de todas. Se tendr en cuenta tanto la sumatoria de todas las clulas de diferente forma como el dato individual de cada una de las formas. Es necesario corroborar todo dato de los equipos con la observacin del FSP. Por ejemplo, los esferocitos, a pesar de tener un tamao menor que los discocitos, el volumen es muy semejante a estos, por lo tanto no afecta el VCM. En la siguiente tabla se observa las diferentes formas con la nomenclatura estandarizada y su relacin con el VCM:
FORMA ANORMAL Esferocito Acantocito Drepanocito Codocito Leptocito Eliptocito Equinocito Esquistocito Ovalocito Anulocito Estomatocito Dacriocito NORMAL 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 LIGERA (+) 1 -5 1 -5 1 -5 2 -5 2 -5 2 -5 2 -5 2 -5 2 -5 2 -5 2 -5 2 -5 MODERADA (++) 6 - 15 6 - 15 6 - 15 6 - 15 6 - 15 6 - 15 6 - 15 6 - 15 6 - 15 6 - 15 6 - 15 6 - 15 MARCADA (+++) Mayor de 15 Mayor de 15 Mayor de 15 Mayor de 15 Mayor de 15 Mayor de 15 Mayor de 15 Mayor de 15 Mayor de 15 Mayor de 15 Mayor de 15 Mayor de 15 RELACION CON EL VCM No afecta No afecta Disminuye Disminuye Disminuye Aumenta No afecta Disminuye Aumenta Disminuye Disminuye Disminuye

HIPOCROMIA:

Se considera los glbulos rojos hipocrmicos, cuando su contenido de hemoglobina es inferior al normal. La carencia de hemoglobina severa o marcada, por lo general, trae como consecuencia que los glbulos rojos se deforman producindose formas anormales y carentes de hemoglobina, como los codocitos, anulocitos, y leptocitos entre otros. Para evaluar la hipocroma se debe contar diez campos, sacar el promedio de glbulos rojos hopocrmicos y compararlo con la tabla que presenta a continuacin: INDICE HCM (pg) NORMAL 0-5 29 - 33 LIGERA (+) 6 - 15 28 - 27 MODERADA (++) 15 30 26 - 25 MARCADA (+++) Mayor de 30 Menor de 24

POLICROMATOFILIA:

Un aumento en la policromatofilia observada en FSP es reflejo de una medula sea en estrs que esta respondiendo a la hipoxia generada por la no disposicin de oxigeno en los tejidos. Estos glbulos rojos policromticos del estrs tienen un tamao superior a los policromticos de respuesta medular normal. La policromatofilia se relaciona directamente con reticulocitos revelados con la coloracin supravital. Observamos policromatofilia en anemias hemolticas congnitas o adquiridas, anemias deficitarias en tratamiento. Para informar la policromatofilia se debe contar diez campos, sacar un promedio y comparar con la siguiente tabla INDICE Reticulocitos (%) NORMAL 0. 1.5 0.5 1.5 LIGERA (+) 1.6 2.5 1.6 - 4 MODERADA (++) 2.6 3.5 4.1 - 6 MARCADA (+++) Mayor de 3.6 Mayor de 6

NORMOBLASTOS: Sin importar el estado de maduracin, su informe se realiza en porcentaje en 100 clulas blancas contadas INCLUSIONES ERITROCITARIAS: 1. PUNTEADO BASOFILO:

El punteado basfilo fino se observa generalmente en trastornos caracterizados por la alteracin en la biosntesis de la hemoglobina como en los sndromes diseritropoyticos, hemoglobinopatias. El punteado basfilo grueso se observa en procesos txicos como en intoxicaciones por plomo, no obstante, cualquiera de los dos fino o grueso se puede encontrar indiscriminadamente en cualquiera de los casos mencionados. 2. CUERPOS DE HOWELL JOLLY: Los observamos en todas las anemias hemolticas graves, anemias diseritropoyticas. Un pequeo nmero de estas inclusiones aparece tras la esplenectoma, la asplenia congnita, en la mielofibrosis avanzada y en la eritroblastosis fetal 3. ANILLOS DE CABOT: El anillo por lo general se encuentra asociado a otras inclusiones como el punteado basfilo. 4. CUERPOS DE PAPPENHEIMER: Son indicativos de alteraciones en la eritropoyesis, especialmente en la observada en las anemias sideroblsticas, talasemias, alcoholismo grave y otros procesos diseritropoyticos. Lo podemos observar tambin en los sndromes postesplenectoma 5. PARASITOS INTRACELULARES: Hablamos especialmente de Plasmdium vivax y falciparum. Se informan como positivo, dejando explicita la especie del Plasmdium Las inclusiones eritrocitarias deben ser informadas individualmente por cruces en los campos observados as:
INDICE C.Howell - jolly C. Pappenheimer Punteado basfilo Anillos de cabot NORMAL 0 0 0 0 LIGERA (+) 1-2 1-2 1-2 MODERADA (++) 3-5 3-5 3-5 MARCADA (+++) Mayor de 6 Mayor de 6 Mayor de 6

FENOMENO DE ROULEAUX:

El fenmeno de rouleaux , o pilas de monedas, se observa frecuentemente en hiperproteinemias (mieloma mltiple) y macroglobulinemias, tambin se puede observar en enfermedades inflamatorias crnicas. La valoracin del fenmeno de rouleaux (promedio en diez campos) y como lo indica la siguiente tabla: NORMAL 0 LIGERA (+) 1-5 MODERADA (++) 6 - 15 MARCADA (+++) Mayor a 15

AUTOAGLUTINACION:

La autoaglutinacin, es provocada especialmente los autoanticuerpos tipo crioaglutininas, se detecta desde el momento de realizar el extendido, ya que se presenta un grado de dificultad al extender la sangre y en los bordes hay evidencia clara de aglutinacin. Se informa como paciente autoaglutinado sin tener en cuenta la intensidad. VALORACION DE GLOBULOS BLANCOS: 1. Se debe realizar la apreciacin de cantidad en 10x, observando campos donde los glbulos rojos apenas se toquen entre si. Se cuentan 10 campos, se saca promedio y el resultado se multiplica por 300. Este es un mtodo indirecto pero que no se compara con la exactitud de su recuento en cmara de neubauer. Este clculo le da un nmero aproximado de leucocitos pero nunca de un valor numrico en su informe. Sin embargo la observacin en 10x le sirve como parte de su control de calidad, ya que la apreciacin de nmero disminuida, aumentada o normal se debe relacionar directamente con el recuento total de leucocitos. 2. Se debe dar el reporte del recuento diferencial incluyendo clulas inmaduras, las cuales se informan en orden, de la ms inmadura a la ms madura. 3. En cuanto a las anormalidades, a medida que se realiza el recuento diferencial se observa la morfologa de clulas encontradas y se anota cualquier tipo de alteracin en su morfologa. Dentro de las principales anormalidades tenemos: FENOMENO DE PELGER HUET O PSEUDOPELGER_ HUET:

Anormalidad en los PMN, los cuales se encuentran hiposegmentados. Hablamos de perder cuando todos los PMN son hiposegmentados y de pseudopelger cuando algunos PMN presentan segmentacin normal. Se considera como precursor de un proceso mieloide agudo MACROPOLICITOS: Son PMN hipersegmentados y de mayor tamao. Los macropolicitos obedecen a un proceso megaloblstico GRANULACIONES TOXICAS, VACUOLAS TOXICAS Y CUERPOS DE DOHLE:

Las granulaciones toxicas son grnulos hipertrofiados, especialmente de los neutrfilos. Las vacuolas txicas se encuentran en neutrfilos y monocitos. Los cuerpos de Dohle no son exclusivos de los PMN, tambin se pueden encontrar en los monocitos, pero se encuentran con mayor frecuencia en los neutrfilos. La presencia de estas inclusiones indica hiperactividad celular, se encuentran en condiciones txicas como escarlatina, septicemia, neumona, quemaduras y exposiciones a drogas citotxicas LINFOCITOS ATIPICOS:

Se debe anotar su presencia en porcentaje del total de los linfocitos contados en el recuento diferencial. Se considera normal encontrar hasta un 30% de los linfocitos atpicos en la poblacin de adultos. Se sugiere que cifras menores a un 30% no se informan. El porcentaje se saca tomando como un 100% el porcentaje total de linfocitos y a partir de estos se saca el porcentaje de los linfocitos atpicos encontrados as: 55 linfocitos totales 9 linfocitos atpicos 55 _______________ 100% 9 _______________ X X: 16% El porcentaje de linfocitos atpicos es de 16 % SI LOS LEUCOCITOS NO PRESENTAN NINGUNA ANORMALIDAD SE INFORMAN NORMALES EN NUMERO Y MORFOLOGIA

VALORACION DE PLAQUETAS:

1.

Para el clculo de las plaquetas se realiza un recuento indirecto, observando 10 campos, sacar el promedio y se multiplica por 21.000, y concluir si las plaquetas estn aumentadas, disminuidas o normales. Se considera normal encontrar entre 7 y 21 plaquetas por campo donde los glbulos rojos apenas se toquen entre si.

2. Para las caractersticas morfolgicas y tintoriales, a medida que vaya realizando el recuento analice si las plaquetas tienen la agrupacin, caracterstica, grnulos y color adecuado. 3. Para anisocitosis a medida que va haciendo el recuento cuente cuantas plaquetas grandes observa y saque el porcentaje de las plaquetas grandes. Por ejemplo: En 10 campos observo 450 plaquetas y de las 450, 28 son plaquetas grandes. 450 ___________________ 100% 28 ____________________ X X: 6% Si se observa un porcentaje Mayor al 30%, se informa la presencia de Macroplaquetas. Si da ms del 5% y menos del 30% con aumento del nmero total en el recuento se informa presencia de anisocitosis plaquetaria. SI LAS PLAQUETAS NO PRESENTAN NINGUNA ANORMALIDAD SE INFORMA NORMALES EN NUMERO Y MORFOLOGIA

CUESTIONARIO: 1. El recuento de leucocitos por milmetro cbico se calcula teniendo encuenta: volumen del rea contada, numero de clulas contadas y la dilucin empleada; como se realiza este clculo para obtener el resultado final. 2. Realice un cuadro comparativo teniendo encuenta las circunstancias fisiolgicas y patolgicas que se presentan en una leucocitosis y leucopenia diferenciando cada una de las clulas: Neutrfilos, eosinfilos, linfocitos, basfilos y monocitos

3. Cuales son los valores de referencia de cada uno de los parmetros que conforman el cuadro hemtico normal, teniendo encuenta el sexo y la edad de los pacientes

UNIVERSIDAD DE PAMPLONA FACULTAD DE SALUD PROGRAMA DE BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO CORRELACION CLINICA HEMATOLOGIA UNIDAD N. 2 SISTEMA RENAL OBJETIVOS: Determinar el comportamiento de cada uno de los parmetros que conforma un cuadro hemtico, en las diferentes patologas del sistema renal Conocer las caractersticas de las generaciones del cuadro hemtico automatizado Identificar los coeficientes de variacin entre la tcnica manual y electrnica Interpretar los histogramas y dispersogramas en sus parmetros normales y sus variaciones frente hallazgos hematolgicos.

FUNDAMENTO: Al hablar de tipo de tecnologa utilizada para realizar el cuadro hemtico, es usual emplear el trmino generacin, para agruparlos de forma acorde con el grado de automatizacin inherente al equipo: PRIMERA GENERACION: Cuadro hemtico manual SEGUNDA GENERACION: Cuadro hemtico semiautomatizado TERCERA GENERACION: Cuadro hemtico automatizado; presenta grficos de histogramas de glbulos rojos, plaquetas y un recuento diferencial de glbulos blancos en tres partes

CUARTA GENERACION: Cuadro hemtico automatizado, con perforacin de tapa, entrega graficas de histograma para glbulos rojos y plaquetas y un informe de dispersograma para glbulos blancos, a los que agrupa en cinco tipos de clulas.

Estos equipos automatizados para recuentos celulares han sido diseados teniendo en cuenta algunas propiedades de las clulas, entre otras: Son malas conductoras de la electricidad Tienen variedad de tamaos Tienen una densidad caracterizable y diferente para cada una Cada una refracta la luz con una intensidad diferente Tienen una composicin citoqumica diferente y caracterizable para cada una La relacin ncleo-citoplasma es diferente para cada clula. Teniendo en cuenta estas propiedades, se han venido desarrollando desde 1956 diferentes principios que permiten contar y medir partculas, las casas comerciales emplean para el diseo uno o varios de estos, unos mas utilizados que otros, dado los altos costos de algunos. En nuestro medio encontramos los siguientes: Impedancia elctrica Dispersin y absorcin de luz

La tecnologa que utiliza radiofrecuencia o luz electromagntica de alta frecuencia constituye la base para la fabricacin de equipos de cuarta y quinta generacin. INFORME GRAFICO 1. HISTOGRAMA:

Son graficas de frecuencias de volmenes celulares representados en el eje X graficado contra un numero relativo representado en el eje Y; por ser relativo no tiene un equivalente numrico real. El eje X se expresa en fl. En condiciones normales, en el informe se observan curvas cnicas o cncavas, que en su mayora son modales, excepto la de plaquetas. HISTOGRAMA DE GLOBULOS ROJOS:

La curva normal de glbulos rojos es cnica, modal y se encuentra representada en tamaos de 60 a 110 fl, con un pico o curva secundaria modal de plana a ligeramente cncava con muy poca altura que llega a 200 fl. Algunas alteraciones mas frecuentes de la curva de eritrocitos son: Desplazada a la izquierda Desplazada hacia la derecha Curva bimodal ADE aumentado Arranque extenso en Y Aumento de pico secundario HISTOGRAMA DE GLOBULOS BLANCOS: Los glbulos blancos se agrupan formando tres curvas claramente definidas y estas configuran la arquitectura normal del histograma de glbulos blancos. Curva de linfocitos cnica: 50 100 fl Curva de mononucleares plana a cncava : 100 150 fl Curva de granulocitos cncava: 150 380 fl

Algunas de las alteraciones mas frecuentes son: Arranque extenso en Y Unin con granulocitos Unin con linfocitos Unin con mononucleares Aumento cnico con prdida de arquitectura Aumento cnico sin prdida de arquitectura Curva cnica modal Distribucin no normal a la derecha HISTOGRAMA DE PLAQUETAS: La curva normal de plaquetas es cnica, sin distribucin normal y con una representacin amplia en tamaos que va de 2 a 20 fl, dado que el recuento de plaquetas se realiza en la dilucin mayor, la misma de glbulos rojos, el equipo realiza un doble recuento de plaquetas, disminuyen de esta forma el coeficiente de variacin. Algunos equipos grafican el doble recuento donde muestran si ha existido o no coincidencia en los mismos. Algunas de las alteraciones que se presentan en el recuento de plaquetas son: No arranque en Y

Extendida 25-30 fl Aumento celular en la terminacin Tope recto Conformacin de bloques Curvas negativas

2. DISPERSOGRAMAS: Los dispersogramas son otro tipo de representacin grafica utilizada para el recuento diferencial de glbulos blancos, donde se mezclan diferentes tecnologas y tienen en cuenta diferentes propiedades de los grupos celulares. En estos sistemas vemos interactuar volumen, refraccin, conductividad, opacidad celular y absorcin de luz. Las clulas se grafican segn su dispersin en un cubo, teniendo en cuenta algunas de las propiedades individuales de los grupos celulares. Se trata de un anlisis tridimensional de las clulas, donde las diferentes casas comerciales utilizan mnimo tres parmetros que hacen coincidir con las propiedades especficas celulares, permitiendo de esta forma su clasificacin en cinco grupos: neutrfilos, eosinfilos basfilos, linfocitos y monocitos. As mismo permite sospechar con un alto grado de certeza la presencia de clulas diferentes a las mencionadas. La interpretacin del dispersograma es mas sencilla comparada con la del histograma, ya que al ubicar las cinco poblaciones celulares, el grado de coincidencia de los tres parmetros debe haber sido total; por lo tanto el grado de confiabilidad es mas grande y las clulas inmaduras, as como a las anormales y las consideradas como no blancas se ubican en zonas no establecidas. Las alteraciones de los dispersogramas se relacionan con aumento o disminucin de los cinco tipos de glbulos blancos que reporta o con la aparicin de clulas que obedecen a diferentes patologas, sean malignas o no. Aumento de neutrfilos Aumento de eosinfilos Sospecha de granulocitos inmaduros Sospecha de blastos de la lnea mieloide Presencia de clulas viejas Aumento de linfocitos Sospecha de blastos de la lnea linfoide Sospecha de linfocitos atpicos Aumento de monocitos

Sospecha de blastos de la lnea monoctica Sospecha de ncleos de normoblastos Sospecha de gametocitos de Plasmdium Sospecha de macroplaquetas.

PRACTICA: CUADRO HEMATICO AUTOMATIZADO PROCEDIMIENTO: Analice los casos clnicos llevados por el profesor con los resultados de Cuadro hemtico automatizados impresos Anote los parmetros que encuentre anormal y normal en la parte numrica como hematocrito, hemoglobina, plaquetas e ndices corpusculares. Interprete resultados teniendo en cuenta los valores de referencia. Analice los histogramas y dispersogramas, informe si concuerdan con el caso clnico y los datos numricos De acuerdo a todo lo anterior, como estara el extendido de sangre perifrica. Realice un diagnstico del caso clnico y anote las posibles causas de su alteracin.

CUESTIONARIO: 1. Que condiciones debe tener la muestra para ser utilizada en un equipo para la realizacin de un cuadro hemtico automatizado

2. Que parmetros calcula el equipo directamente y en que dilucin. Cuales parmetros son arrojados de forma indirecta 3. Como es el comportamiento de cada uno de los parmetros del cuadro hemtico en las patologas del sistema renal como: Litiasis. Insuficiencia renal. Glomerulonefritis. Sndrome nefrtico y nefrtico.

4. como se graficaran los histogramas y dispersogramas en cada una de las patologas mencionadas. 5. Que parmetros posee un paciente diabtico con dilisis peritoneal

UNIVERSIDAD DE PAMPLONA FACULTAD DE SALUD PROGRAMA DE BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO CORRELACION CLINICA HEMATOLOGIA UNIDAD N. 3 SISTEMA RESPIRATORIO OBJETIVOS: Identificar morfolgicamente los reticulocitos mediante una coloracin supravital e interprete los resultados. Conozca el procedimiento para determinar los eosinfilos en moco nasal y determine cuando son caractersticos como patologa del sistema respiratorio Realizar la velocidad de sedimentacin globular y determinar en unidades de longitud y tiempo la propiedad que tienen los glbulos rojos en formar pilas de monedas.

PRACTICA: RECUENTO DE RETICULOCITOS, RECUENTO DE EOSINOFILOS EN MOCO NASAL Y VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR FUNDAMENTO: RECUENTO DE RETICULOCITOS

Los reticulocitos son eritrocitos jvenes que representa de 0.5 a 1.5% de los eritrocitos totales, se forma cuando se pierde el ncleo del normoblasto ortocromtico. Su tamao varia de 10 a 15ul. Tienen una vida media de dos das en medula sea, de all salen a la circulacin donde requieren de un dia para convertirse en clulas rojas maduras. Su nombre proviene de que contiene una red de material basfilo: acido ribonucleico (RNA) ribosomal y dems organelas citoplasmticas que se precipitan, observndose como grnulos amorfos intracelulares que se tien de azul profundo con colorantes supravitales como el azul de cresilo brillante. Su abundancia en la circulacin perifrica es un ndice de la actividad eritropoytica. As pues, se encuentran cifras altas en los primeros das de vida, despus de una perdida de sangre o hemorragia y despus de tratar la anemia carencial con sustancias especificas (vitamina B12 en la anemia perniciosa, acido flico con la anemia megaloblstica o hierro en la anemia ferropnica por la deficiencia de hierro). En general, la intensidad de la respuesta reticulocitaria en estas condiciones es directamente proporcional a la gravedad de la anemia. Coloreado con wright, el reticulocito se identifica por una basoflia difusa llamada policromatoflia y por poseer un tamao ligeramente ms grande que el eritrocito maduro. MATERIALES Y EQUIPOS: Tubos de ensayo Bao Maria a 37oC Pipeta pasteur Portaobjetos limpios Aceite de inmersin Microscopio Colorante Azul de Cresilo Brillante Sangre venosa con EDTA

PROCEDIMIENTO: Colocar en el tubo de ensayo dos gotas de sangre previamente mezclada Agregue dos gotas de colorante azul de cresilo brillante (filtrado) y mezcle suavemente Incube en el Bao Maria a 37oC durante 10 a 15 minutos. Al finalizar este tiempo mezcle bien el contenido del tubo

Realice un extendido en lamina un poco mas delgado y deje secar al ambiente Coloque el extendido en la platina del microscopio y enfoque en bajo poder (10X) para localizar el rea donde los eritrocitos no estn superpuestos Pase el objetivo a 100X cuidadosamente y agregue una gota de aceite de inmersin Inicie el conteo. Las clulas rojas toman una coloracin griscea verdosa. El RNA presente en los reticulocitos se colorea de azul intenso. El retculo puede ser abundante o escaso dependiendo del estado de desarrollo de la clula. El mas joven muestra mayor cantidad de RNA. Busque el rea mas adecuada para realizar el recuento, donde los glbulos rojos estn separados y se tengan 100 hemates por campo, se cuentan los reticulocitos encontrados en diez campos microscpicos observados.

Para calcular los reticulocitos corregidos, se tienen valores ideales de Hb para: Hombres: 15 g/dl Mujeres: 14 g/dl Nios: 12 g/dl Formula: 1. Hb del paciente 2. Reticulocitos en % 3. Hb ideal HB paciente X % de reticulocitos HB ideal Ejemplo: (Hombre) 1. HB: 8 g/dl 2. Reticulocitos: 8% 3. Hb ideal: 15 g/dl 8 g/dl X 8% de reticulocitos 15 g/dl = 4.2 % Tomando este valor se puede hallar el ndice de reticulocitos, el cual indica el ndice de eritropoyesis en medula sea. Con el valor de los reticulocitos corregidos los relacionamos con un factor de correccin, para saber si la respuesta medular compensa la destruccin.

Hemoglobina g/dl 10 11 7 -9 Menor de 7

Factor de correccin 1.5 2.0 2.5

Ejemplo: Hb del paciente: 8 g/dl Reticulocitos corregidos: 4.2% Factor de correccin: 2.0 por el rango de Hb esta entre 7 9 4.2 / 2.0 = 2.1 (normoproliferativa) Valor de la eritropoyesis: 0.2 2 -5 5 o mayor Otra forma de obtener el IPR es: Reticulocitos corregidos en % sobre periodo de maduracin en medula sea es de 2 das. 4/2=2 El IPR: Mayor de 3: Indica aumento de la actividad eritropoytica Menor de 2: Indica escasa actividad CALCULOS: Reticulocitos en %: Numero de reticulocitos contados ________________________________ X 100 Numero de Hemates contados 1000 MO Hipoproliferativa Normoproliferativa Hiperproliferativa

Para calcular los reticulocitos absolutos los datos requeridos son: 1. RBC/ml 2. Reticulocitos en % 3. Relacin a 1000 GR Formula: Ejemplo: 1000 GR_________________ % de reticulocitos RBC/ml _________________ X

1. 2.700.000/ml 2. 8% 3. 1000 GR 1000 GR ________________ 8% de reticulocitos 2.700.0000 RBC/ml ________________ X X: 21.600/ml Valores normales: 40.000 y 70.000 / ml Este valor es importante en las anemias hemolticas y en pacientes con tratamiento de anemias carenciales

Porcentaje de reticulocitos corregidos: Tiene por objeto establecer los reticulocitos reales teniendo en cuenta la concentracin de clulas rojas en sangre perifrica, ya que la volemia del paciente afecta su nmero. En otras palabras esta correccin debe hacerse cuando se encuentra un hematocrito por debajo del establecido como normal, aplicando la siguiente formula: % de reticulocitos corregido =: % de reticulocitos X hematocrito del paciente ---------------------------------Hematocrito normal Se acoge un valor medio del hematocrito para hombres de 45% y para mujeres del 42%. Otra forma de correccin a partir del dato de HB: Se tiene en cuenta que solo se realiza si la Hemoglobina es menor de 11 g/dl. Constituye un ndice indirecto de la eritropoyesis en medula sea y son de gran valor para: Conocer la eficacia de la eritropoyesis Clasificar las anemias en regenerativas o arregenerativas Conocer lo antes posible, la eficacia de un tratamiento con Hierro, Vitamina B12 y Acido flico.

0bservaciones: El recuento se puede efectuar en sangre capilar

Se recomienda repetir el conteo cuando se obtienen valores por encima del 3% Los extendidos coloreados pueden guardarse por 24 horas sin afectar los resultados La relacin sangre/colorante no tiene que ser exactamente igual. Para mejores resultados use una mayor proporcin de sangre cuando el paciente tenga un hematocrito bajo. Aada una menor cantidad de muestra cuando el hematocrito sea inusualmente alto El tiempo de coloracin de los reticulocitos no es critico, pero no debe ser menor de 10 minutos La presencia de altos niveles de glucosa en sangre y el uso de heparina como anticoagulante pueden producir, en los reticulocitos, una coloracin plida. Es extremadamente importante que la sangre y el colorante se mezclan bien antes de realizar los extendidos.

VALORES DE REFERENCIA: Valor relativo: Hombres y Mujeres: Recin nacido: En dos semanas es igual al adulto 0.2 2% 2.0 - 6%

Interpretacin: El conteo de reticulocitos es una herramienta diagnostica importante puesto que es el reflejo de la cantidad de clulas rojas efectivas viables que se producen en la medula sea. Su utilidad real es conocer la capacidad de respuesta de la medula en aquellos casos en los cuales hay disminucin de las clulas en sangre perifrica y es necesario que la medula aumente su produccin para as compensar el dficit de dichas clulas. Esta informacin es de fundamental importancia en el diagnostico de anemias por falla en la produccin (anemia aplsica) o por aumento en la destruccin (anemia hemoltica). VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR: Los eritrocitos poseen una carga electrosttica negativa en su membrana, lo cual genera fenmenos de repulsin que llevan a mantener los glbulos rojos suspendidos, conservando su individualidad. Esta fuerza de repulsin se denomina potencial zeta. En condiciones normales si se coloca la sangre en un tubo vertical, las clulas, debido a la fuerza de la gravedad caen por que son ms densas que el plasma.

Si la carga electrosttica disminuye, por alguna causa, los eritrocitos producen mayor cantidad de pilas de monedas que aumentaran la masa de la partcula y en consecuencia, la velocidad de sedimentacin. La velocidad de sedimentacin se expresa como la distancia en milmetros que recorren los eritrocitos al caer por unidad de tiempo, generalmente una hora. La sedimentacin se puede determinar por mtodos manuales o automatizados. El mtodo manual recomendado por el comit Internacional de Estandarizacin en hematologa, es el de Westergreen y entre los mtodos automatizados esta el Coulter Zetafuge y el Ves-matic. METODO DE WESTERGREEN MATERIALES Y REACTIVOS: Sangre venosa anticuagulada con EDTA Tubo de Wintrobe Aguja de Pasteur Soporte para velocidad Jeringa de 2 ml

PROCEDIMIENTO: Mezclar suavemente la sangre, por inversin, durante un minuto para homogenizar la muestra Llenar el tubo Wintrobe con la ayuda de aguja Pasteur y una jeringa teniendo en cuenta que no queden burbujas, que la sangre no este hemolizada y que quede exactamente hasta la marca cero (0) Colocar en el soporte especial y dejar 1 hora, al cabo de la cual, se lee en escala descendente, la cantidad de mm cbicos que descendi.

Se da lectura en mm/hora. VALORES DE REFERENCIA: Hombres: 0 10 mm/h Mujeres: 0 -20 mm/h

Estos valores son constantes entre los 10 y 50 aos EOSINOFILOS EN MOCO NASAL

Se realiza mediante un frotis de sangre perifrica de la mucosa del cornete inferior, usando un hisopo; obtenida la muestra se colorea con Wright o Giemsa y se realiza un conteo celular diferencial. Si la cantidad de leucocitos es adecuada se hace el recuento diferencial de 100 clulas. PMN. Si la cantidad de leucocitos es excasa, los eosinfilos se deben reportar los observados en 10 campos microscpicos y en este caso se reporta por campo. Los eosinfilos en el moco > 20/campo confirman la alergia Los neutrfilos aumentados estn relacionados con las infecciones bacterianas agudas Los linfocitos sugieren procesos infecciosos de tipo crnico

CUESTIONARIO: 1. En que patologas encontramos eosinofllia en moco nasal.

2. Informe los resultados obtenidos en la clase, realice con este resultado, una correccin de reticulocitos con un hematocrito de 28% y halle el IPR 3. Que se entiende por desviacin reticulocitaria. 4. Que factores influyen en la eritrosedimentacin. 5. Como realiza usted una VSG por puncin capilar.

UNIVERSIDAD DE PAMPLONA FACULTAD DE SALUD PROGRAMA DE BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO CORRELACION CLINICA HEMATOLOGIA UNIDAD N. 4 SISTEMA DIGESTIVO OBJETIVO: Identificar que parmetros son caractersticos de un cuadro hemtico manual que identifique la salmonelosis y la apendicitis FUNDAMENTO: SALMONELOSIS La salmonelosis es un conjunto de enfermedades producidas por el gnero microbiano Salmonella. No todas las especies, cepas o serotipos reconocidos tienen igual potencial patognico. Los principales agentes etiolgicos corresponden a Salmonella typhi, Salmonella paratiphi, Salmonella thyphimurium y Salmonella enteritidis2.

Son bacilos Gram negativos, anaerobios facultativos de la familia Enterobacteriaceae. Se encuentran fundamentalmente asociados a la flora intestinal y, por ello, a aguas y alimentos que hayan contactado con material fecal. Producen grandes cantidades de gas durante la fermentacin de azcares, y llevan a cabo una fermentacin cido mixta, produciendo gran cantidad de productos cidos y gases. Aparecen escalofros , cefalea, nuseas, anorexia, tos y diarrea o estreimiento. La fiebre es prolongada y vara de 38,5C a 40C. Entre un 2040% presentan dolor abdominal. APENDICITIS Es la inflamacin del apndice, ubicado en el ciego, que es la porcin donde comienza el intestino grueso. Normalmente los casos de apendicitis leves se pueden curar sin ciruga, sin embargo, la mayor parte de ellos requieren de un procedimiento quirrgico llamado apendicectoma o laparotoma en caso de apendicitis con extirpacin del apndice inflamado. En casos sin tratamiento, el ndice de mortalidad es elevado, principalmente debido a una peritonitis y un shock sptico cuando el apndice inflamado se rompe PRACTICA: CUADRO HEMATICO MANUAL MATERIALES Y REACTIVOS: Sangre total con EDTA Microhematocritos Tabla de lectura o reglilla Cubetas Porta cubetas Pipeta de Salhi Pipeta de glbulos blancos Tubos de 13 x 100 mm Gradilla, pipeta de 5 ml, pipeteadores Pipetas automticas, puntas azules y amarillas Tapones de caucho Cmaras de Neubauer Cajas de petri, papel filtro Reactivo de Drabkin Reactivo de Turk Estndar o patrn de hemoglobina

Aceite de inmersin Colorante de Wright Solucin Buffer, agua destilada Microcentrfuga Espectrofotmetro Microscopio

PROCEDIMIENTO: 1. MEDICION DEL HEMATOCRITO: Llenar el capilar con sangre bien mezclada hasta las 2/3 partes aproximadamente Limpiar el exceso de las paredes del capilar con toalla absorbente Selle bien la parte inferior del capilar con plastilina Colquelo debidamente calibrado en la Microcentrfuga y tenga en cuenta el numero correspondiente en esta Cierre bien y coloque a centrifugar de 5 a 10 minutos entre 1000 y 5000 rpm respectivamente Cuando la microcentrfuga pare, lea el Microhematocrito en la tabla y obtenga el valor directamente y reporte en porcentaje.

2 MEDICION DE LA HEMOGLOBINA: Prenda el espectrofotmetro y espere a que alcance la temperatura adecuada para su funcionamiento Servir en un tubo de ensayo de 13 x 100, 5 ml de Drabkin, con ayuda de un pipeteador Mezcle cuidadosamente la sangre por inversin unas 30 veces para obtener una buena homogenizacin de la muestra Llene la pipeta de salhi con 0.02 ml con ayuda de la boquilla o con 20 ul utilizando la pipeta automtica, teniendo la precaucin de limpiar bien con una gasa las paredes externas de la pipeta cuando finalice el llenado Colocar la pipeta hasta el fondo del tubo y deposite la sangre, soplando bien, enjuagar la pipeta con el reactivo en la parte superior (evitando la formacin de espuma). Tape y mezcle muy bien el tubo por inversin Dejar en reposo por 10 minutos para que se produzca la hemlisis total de las clulas rojas y se complete bien la reaccin Transfiera la solucin a las cubetas del espectrofotmetro y lea a 540 nm, usando como blanco el reactivo de Drabkin

Tome nota de la absorbancia de la muestra y del estndar

3 RECUENTO DE GLOBULOS BLANCOS: A. DILUCION EN TUBO: Mezclar la muestra de sangre con EDTA y mzclela suavemente por inversin unas tres veces Tomar 20 ul de sangre y depostela en un tubo que debe contener 380 ul de liquido de turk (dilucin 1/20). Mezcle por inversin Deje el tubo en reposo al menos por 5 minutos Prepare la cmara de Neubauer con su laminilla, completamente limpios Tome el tubo con la sangre diluida, mzclelo nuevamente y con la pipeta de 0.1 ml deposite 1-2 gotas entre cmara y laminilla Deje en reposo por 8 minutos la cmara para que sedimente la preparacin. Para evitar que se seque coloque sobre el mesn papel filtro hmedo, encima de la cmara y tpela con una caja de petri Seque por debajo la cmara, mntela con mucho cuidado en el carro del microscopio Realice el recuento en los 4 cuadrantes grandes de los extremos

B. DILUCION EN PIPETAS DE BLANCOS: Mezclar la muestra de sangre con EDTA y mzclela suavemente por inversin unas tres veces Llene la pipeta con la muestra de sangre hasta la marca 0.5 exactamente, haga uso del pipeteador Limpie las paredes extremas de la pipeta para que no contamine el liquido diluente Aspire el liquido de Turk hasta la marca 11 exactamente Sujete la pipeta entre los dedos pulgar e in dice, desprenda el microaspirador y agite la pipeta en forma horizontal, durante 3 minutos para obtener hemlisis total de las clulas rojas Descartar las 4 primeras gotas de la dilucin, para eliminar el contenido del capilar que no contiene leucocitos Llene la Cmara de Neubauer controlando la gota que sale de la pipeta Realice el recuento en los 4 cuadrantes grandes de los extremos

4. EXTENDIDO Y COLORACION:

Realizar el frotis y dejarlo secar Cubrir con el colorante de Wright y dejarlo actuar por 1 minuto Sin lavar agregar buffer fosfato o agua destilada, soplando hasta que aparezca una escarcha metlica. Dejar actuar de 3 a 10 minutos Lavar con agua corriente limpiando la superficie posterior del frotis Dejar secar la preparacin 5. RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS: Totalmente seco el extendido enfquelo en objetivo de bajo poder (10X) para localizar el cuerpo del extendido Localizada esta rea del extendido pase a 100X. agregue una gota de aceite de inmersin Realice el recuento en sentido que al mover el carro no se repitan clulas haciendo un zigzag sobre el cuerpo del extendido Cuente 100 leucocitos y vaya estableciendo un diferencial de cada una de las clulas usando un sistema manual de recuento, aunque tambin existen los tabuladores mecnicos.

CUESTIONARIO: 1. Que parmetros son caractersticos del cuadro hemtico frente a las patologas tratadas en clase. 2. Que dilucin se realizara en el caso de una leucocitosis y cual seria su procedimiento.

3. Con que patologas podemos encontrar similitud teniendo encuenta los mismos parmetros del cuadro hemtico de las patologas tratadas.

UNIVERSIDAD DE PAMPLONA FACULTAD DE SALUD PROGRAMA DE BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO CORRELACION CLINICA HEMATOLOGIA UNIDAD N. 5 SISTEMA HEPATOBILIAR OBJETIVOS: Determinar la funcin plaquetaria mediante pruebas de tamizaje que requieren una detallada historia clnica, manifestaciones hemorrgicas y evaluacin del riesgo hemorrgico. Realizar el recuento de plaquetas por el mtodo directo e indirecto Determinar la importancia del recuento de plaquetas en los procesos de coagulacin

PRACTICA: RECUENTO DE PLAQUETAS

FUNDAMENTO: HEMOSTASIA PRIMARIA En la hemostasia primaria interviene los vasos sanguneos y las plaquetas para detener la hemorragia. Los vasos lesionados contribuyen por medio de constriccin y secrecin de una variedad de mediadores bioqumicos que afectan todos los pasos subsecuentes de la hemostasia. Las funciones de las plaquetas consisten en adherirse a las reas lesionadas de las paredes de los vasos sanguneos, agregarse mediante la adhesin entre si y tambin secretar las sustancias almacenadas en sus grnulos. Las sustancias secretadas ayudan a atraer y activar a unas plaquetas que se adicionan al agregado y ayudan al crecimiento del tejido nuevo el cual repara permanentemente la herida. Se requiere de la superficie de las plaquetas agregadas para las reacciones de la hemostasia secundaria. Las pruebas de laboratorio para la evaluacin de la hemostasia primaria incluyen un conteo de la plaquetas, evaluacin de la funcin plaquetaria medidas como el tiempo de sangra (prueba de tamizaje), la prueba de la agregacin plaquetaria (prueba especializada) y la prueba de retraccin del coagulo (procedimiento clnico poco usado). TIEMPO DE SANGRIA El tiempo de sangra es una medicin in vivo de la funcin de las plaquetas. Existen varios factores que afectan el tiempo de sangra, los cuales incluyen el nmero de plaquetas, su funcin y la integridad vascular. En 1910, Duke describi el mtodo de tiempo de sangra como una pequea incisin en el lbulo de la oreja (valor normal de 1 a 3 minutos) y relaciono la prolongacin de este tipo de hemorragia con trombocitopenia. Mas tarde IVY modifico esta prueba para hacerla mas fidedigna y establece una tcnica estandarizada que incluye tres aspectos fundamentales: Zona apropiada de la cara volar proximal del antebrazo Presin por encima del antebrazo a 40 mm Hg para conseguir una presin constante, creando estasis venosa. La venostasia producida por la presin hace que los vasos permanezcan llenos de sangre Bistur (simplate) que permita una incisin de 5 mm de longitud y 1 mm de profundidad.

METODO ESTANDARIZADO IVY:

La hemorragia provocada en la piel, al lesionar pequeos vasos, se detiene por la constriccin de estos (vasoconstriccin) y por la formacin del tapn plaquetario en el sitio de la lesin. MATERIALES: Tensimetro Cronometro Lancetas desechables (Simplate) Papel de filtro Algodn Prepodine

PROCEDIMIENTO: Colocar el tensimetro, en el tercio superior del brazo, elevndolo a una presin de 40 mm Hg. Esta presin es mantenida durante la prueba Seleccionar un rea de la parte extrema del antebrazo, libre de venas y cicatrices Limpiar con prepodine esta zona y dejarla secar Realizar una incisin horizontal con el Simplate, que realiza dos incisiones (estandarizadas) de 1 mm de profundidad por 5 mm de longitud. (la direccin de la incisin en el antebrazo tiene un efecto sobre el resultado. Se registran tiempos ligeramente mas largos cuando la incisin es horizontal que cuando es vertical) Poner en marcha el cronometro Cada 30 segundos limpiar la sangre con papel filtro, tener cuidado de no tocar el sitio de la lesin Detener el cronometro en el momento en que la hemorragia cese y retirar el tensimetro.

Valores Normales: 1 a 9 minutos OBSERVACIONES: El tiempo de sangra es mas corto en nios recin nacidos que en adultos; tiende a ser mas prolongado en mujeres y disminuye con la edad El tiempo de sangra es inversamente proporcional al numero de plaquetas, al volumen de las paquetas y al hematocrito (la anemia aumenta el tiempo de sangra y la eritrocitosis lo disminuye)

Pacientes con recuentos de plaquetas inferiores a 50.000lmm3 no se les debe practicar la prueba Pacientes que estn recibiendo tratamiento a base de acido acetil saliclico deben esperar mnimo de siete a nueve das de ser suspendido el medicamento para poder realizarle la prueba La prueba de tiempo de sangra es ordenada prequirurgicamente para determinar el riesgo de hemorragia perioperatoria y posoperatoria. Sin embargo, esta prueba mide la formacin adecuada del tapn plaquetario en el sangrado superficial de la piel y no necesariamente en los rganos internos Estudios realizados recientemente han demostrado que el tiempo de sangra no es confiable cuando se usa como una prueba de tamizaje para evaluar el riesgo de sangrado excesivo perioperatorio. Un tiempo de sangra anormal puede llevar a posponer innecesariamente una ciruga, a realizar pruebas adicionales, y posiblemente, a un tratamiento inapropiado para normalizar el tiempo de sangra Se demuestra una vez mas, que una prueba nica no reemplaza una buena historia clnica ni el estudio integral prequirrgico, dentro del contexto clnico y de lgica medica. Desde el punto de vista tcnico, el tiempo de sangra es muy difcil de controlar a no ser que se utilice un mtodo estandarizado.

RECUENTO DE PLAQUETAS Las plaquetas representan fragmentos citoplasmticos derivados de los megacariocitos. Estn rodeados por la clsica membrana celular de doble capa lipdica que contiene diversos receptores y fosfolpidos funcionalmente importantes. Las plaquetas en circulacin no se adhieren unas a otras, ni a la superficie endotelial, pero pueden ser estimuladas a agregarse por varios mediadores, jugando un papel importante en la hemostasia. Para ello forman nudos en la red de fibrina, liberan substancias importantes para acelerar la coagulacin y aumentan la retraccin del coagulo sanguneo. En las heridas las plaquetas aceleran la coagulacin, y adems al aglutinarse obstruyen pequeos vasos, y engendran substancias que los contraen. El recuento de plaquetas se realiza en sangre perifrica, las plaquetas se observan con una tonalidad levemente basofila lo cual permite detallar una zona central granular llamada cronomero y una zona perifrica mas clara denominada hialomero. MATERIALES Y EQUIPOS: Sangre con EDTA

Oxalato de amonio al 1% o Citrato de sodio al 3.8% Pipeta de Glbulos rojos Cmara de neubauer Laminilla de cuarzo Microaspirador Caja de petri Papel filtro Laminas Colorante de wright Agua destilada Aceite de inmersin Microscopio

PROCEDIMIENTO: METODO INDIRECTO: Realizar extendido de sangre perifrica Colorear el frotis con colorante de wright Dejar secar la coloracin Primero observar en objetivo de 10X para buscar la zona ideal Pasar a objetivo de 100X, colocar aceite de inmersin Identificado el sitio donde se observan 100 glbulos rojos por campo, contar las plaquetas en 10 campos microscpicos y sumar el numero total, sacar el promedio dividiendo por diez Luego el resultado lo multiplicamos por una constante que es 21.000 y el resultado se da en mm3. Si el resultado es muy bajo contar en 20 campos.

METODO DIRECTO: Mezcle cuidadosamente la sangre anticuoagulada por inversin, por lo menos 30 veces, con el fin de obtener una muestra homognea Llene la pipeta con la muestra de sangre hasta la marca 1.0 exactamente, haga uso del microaspirador Elimine el exceso de sangre de las paredes extremas de la pipeta para no contaminar la solucin diluente. Aspire el liquido diluente hasta la marca 101 exactamente Sujete la pipeta entre los dedos ndice y pulgar, desprenda el microaspirador y agite la pipeta en forma horizontal durante tres minutos

Deje reposar la pipeta durante 10 minutos si esta trabajando con oxalato de amonio al 1% con el fin de lograr hemlisis total de los glbulos rojos En caso de trabajar con citrato de sodio al 3.8% omita este paso Agite suavemente Descarte las primeras 4 gotas, para eliminar el liquido del capilar e inmediatamente llene la cmara de neubauer en ambos lados Coloque la cmara en ambiente hmedo por 10 minutos. El ambiente hmedo se logra cubriendo la cmara con una caja de petri que llevara adherido un disco de papel filtro humedecido con agua Coloque la cmara en el microscopio. Enfoque con objetivo de 40X y observe el llenado de la cmara, no deben existir agregados plaquetarios Cuidadosamente enfoque el cuadrado central Las plaquetas se reconocen como estructuras pequeas, opacas, redondas o alargadas a veces con prolongaciones, que son inmediatamente retractiles El numero esta determinado por el conteo de los 25 cuadrados en que se subdivide el cuadrado central, descartando las plaquetas que tocan las lneas derecha e inferior.

CALCULO: El nmero de plaquetas por mm3 se calcula de acuerdo a: Volumen del rea contada: 0.1 mm3 (1 x 1 x 0.1) Dilucin utilizada: 1:100 Numero de clulas contadas

Plaquetas por mm3 = N0 de clulas contadas X 1 X dilucin Plaquetas por mm3 = N0 de clulas contadas X 10 X 100 Plaquetas por mm3 = N0 de clulas contadas X 1000 VALORES DE REFERENCIA: EL rango normal para el recuento de plaquetas es de Unidades clsicas: 150.000 a 450.000 / mm3 OBSERVACIONES: Correlacione el numero de plaquetas observadas con el recuento obtenido en cmara, usualmente se observan de 8 20 plaquetas individuales por campo con objetivo de lato poder

Observe el tamao de la plaqueta circulante. Frecuentemente se pueden observar en bajo porcentaje, algunas plaquetas con tamao mayor (macroplaquetas) Se debe tener especial cuidado con las soluciones diluentes, estn no deben estar contaminadas, pues tanto las partculas como las bacterias pueden simular plaquetas La limpieza de las cmaras y de las pipetas es extremadamente importante en este procedimiento Los lquidos diluentes se deben mantener refrigerados y filtrar antes del uso Si observa agregados en el recuento, el procedimiento debe repetirse No se debe reportar el recuento de plaquetas Directo sin confrontarlo con el extendido de sangre perifrica coloreado con wright La diferencia del nmero de plaquetas entre los cuadrados centrales de la cmara no deben ser mayor de 10 plaquetas.

CUESTIONARIO: 1. En que circunstancias patolgicas y fisiolgicas podemos encontrar trombocitosis y trombocitopenia 2. Que es el volumen medio plaquetario, ancho de distribucin de las plaquetas y plaquetocrito. Valores de referencia. 3. Explique brevemente la prueba de agregacin plaquetaria.

UNIVERSIDAD DE PAMPLONA FACULTAD DE SALUD PROGRAMA DE BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO CORRELACION CLINICA HEMATOLOGIA UNIDAD N. 6 SISTEMA CARDIOVASCULAR OBJETIVO:

Realizar la determinacin del tiempo parcial de tromboplatina tisular y el tiempo de protombina, como medio para valorar la coagulacin sangunea en un paciente. PRACTICA: PT Y PTT FUNDAMENTO: HEMOSTASIA SECUNDARIA La hemostasia secundaria esta dada a partir de las protenas plasmticas implicadas en la coagulacin sangunea y que circulan como variantes inertes hasta que se activan por exposicin a las superficies cargadas negativamente (va intrnseca) o al factor tisular (va extrnseca). Estas superficies y el FT (factor tisular) son normalmente subendoteliales y extrnsecas a la sangre. Sin embargo cuando los vasos se lesionan las protenas de la coagulacin de la sangre se exponen al tejido subendotelial y a las plaquetas activadas. Esto inicia la activacin de las protenas de la coagulacin. El orden de activacin es secuencial a manera de cascada. La secuencia se inicia con los factores menos concentrados en la sangre y contina hasta el factor ms concentrado, el fibringeno. Los factores dependientes de vitamina K (II, VII, IX, X) son zimgenos y cuando se activan se convierten en proteasas. Estas proteasas forman complejos sobre una superficie fosfolipdica con un cofactor (FT, V u VIII) y sustrato. Aunque originalmente el proceso de coagulacin se dividi en va intrnseca, va extrnseca y va comn, actualmente existe amplia evidencia de que hay gran interaccin y retroalimentacin entre las protenas de estas vas. La va extrnseca parece ser la ms importante en el inicio de la cascada, pero el sistema intrnseco es responsable de ampliar y sostener la coagulacin. Las pruebas de laboratorio de la hemostasia secundaria pueden dividirse en dos grupos: pruebas de deteccin y pruebas especiales. Las pruebas de deteccin estn diseadas para probar la integridad general de la va intrnseca, extrnseca y comn. Las ms comunes de tales pruebas incluyen el tiempo de protrombina (TP), el tiempo de tromboplastina parcial activada (TTPa) y el tiempo de trombina (TT). Algunos laboratorios prefieren agregar otras pruebas a sus perfiles de deteccin antes de realizar pruebas confirmatorias. Si las pruebas de deteccin son anormales, se practican pruebas especiales para identificar la anormalidad especfica, como anlisis del fibringeno, pruebas con mezclas para evaluar deficiencias de factor, tiempo de reptilasa, prueba de deteccin del factor XIII, prueba de Dmero D, entre otras. TIEMPO DE PROTROMBINA (PT)

Cuando se aade calcio y un extracto mstico al plasma, el facto VII reacciona con el factor mstico y se forma un producto que convierte el factor X a su forma activa el factor Xa, este a su vez reacciona con el factor V, con el calcio y con los fosfolpidos para formar la protrombina en trombina. Entonces la trombina convierte el fibringeno en fibrina. La velocidad de formacin de la fibrina depende de los factores V, VII, X, II y I por lo cual, esta prueba es empleada para medir la actividad total de estos factores. MATERIALES Y REACTIVOS: Reactivo de Tromboplastina Agua destilada Plasma control normal Plasma citratado del paciente Bao Maria 370C Tubos de vidrio de 12mm x 7.5 cm Micropipetas graduadas de 100 y 200 microlitros Pipetas volumtricas de 1,2 y 5 ml Cronmetros

PROCEDIMIENTO: Precalentar a 370C los tubos de ensayo Para la reconstitucin y conservacin del reactivo debern seguirse las instrucciones indicadas por el fabricante Precalentar a 370C 0.2 ml de reactivo por cada prueba. Evitar la evaporacin del reactivo no dejndolo a 370C por un tiempo superior a 60 minutos Realizar por duplicado cada prueba iniciando con un control normal Pipetear o.1 ml de plasma en el tubo correspondiente Incubar el plasma 2 3 minutos mnimo y mximo 5 minutos Pipetear 0.2 ml de reactivo preincubado y simultneamente disparar el cronometro Parar el cronometro en el momento de la formacin del cuagulo

RESULTADOS E INTERPRETACION: El control normal debe dar un Tiempo de Protrombina (PT) en 10.5 y 13.5 segundos que corresponde a un INR de 1.0. El cual esta prolongado cuando existe deficiencia congnita adquirida de los factores V, VII, X o protrombina, cuando el fibringeno esta por debajo de 100 mg% y cuando aparecen

productos de degradacin de fibringeno o de fibrina o hay heparina. En la policitemia el PT puede estar prolongado como consecuencia de una desproporcin plasma / anticoagulante. EL PT es la prueba mas comnmente usada para controlar la terapia anticuoagulada oral con antagonistas de la vitamina K para el tratamiento y la prevencin tanto de trombosis venosa como de tromboembolismo arterial. La medicacin debe controlarse regularmente con PT para prevenir la sobreanticoagulante y el riesgo del sangrado. La estandarizacin de la prueba de PT se ha hecho con la introduccin de patrones internacionales de tromboplastina y con la definicin de una escala internacional de actividad anticoagulante. En 1983 la OMS adopto un sistema de normalizacin del PT para permitir la estandarizacin internacional del control anticoagulante oral. Los valores de los pacientes se informan en trminos de la relacin internacional (INR). Este sistema tambin ha sido recomendado por el Comit Internacional de Trombosis y Hemostasis (ICTH) y por el Comit Internacional para Estandarizacin de Hematologa (ICSH). FARMACODINAMICA DE LAS DROGAS CUMARINICAS: La sntesis de factores de coagulacin vitamina K dependientes (II VII IX X) en el hgado puede ser inhibida por derivados de la 4- hidroxicumarina y la indandiona. Normalmente la Vitamina K cataliza la carboxilacin de los residuos de acido glutmico en los factores de coagulacin II, VII, IX y X as como en los inhibidores naturales de la coagulacin protena C y protena S. Los residuos modificados de acido glutmico (acido-gama-carboxi-glutmico) son necesarios para la interaccin, mediada por calcio, de estas protenas con fosfolpidos cargados negativamente. Los antagonistas de la vitamina K bloquean indirectamente la formacin de residuos de acidogamacarboxiglutamico, llevando a la liberacin en la circulacin de proteinas inmodificadas llamadas PIVKA (Protenas induced by vitamina K absebce / antagonist). Las PIVKA no tienen actividad funcional fisiolgicamente importante, pero pueden afectar la determinacin del PT efectuada con algunos reactivos de tromboplastina. RELACION NORMALIZADA INTERNACIONAL (INR):

Para obtener una escala universal de actividad anticoagulante oral la OMS y el ISTH ICSH han recomendado conjuntamente que el PT debiera convertirse a INR. Por definicin el INR es la relacin de PT que se habra obtenido si se hubiera usado la Preparacin Internacional de Referencia de la OMS. En la prctica el INR del plasma de un paciente se deriva de la relacin de PT y del ndice de Sensibilidad Internacional (ISI) de la tromboplastina. El INR se calcula usando la siguiente formula: INR: (PT PACIENTE)ISI (PT NORMAL) La OMS ha propuesto que los fabricantes de tromboplastina indiquen la sensibilidad de cada lote de reactivo con el ISI correspondiente y que proporcionen una tabla de conversin en trminos de los resultados de PT. Es importante tener en cuenta las variaciones que pueden causar imprecisin del INR, estas incluyen: imprecisin en la calibracin del ISI por un mtodo anunciado, estimada en aproximadamente 5%. Variacin entre laboratorios en la relacin mediada para el PT, estimada en aproximadamente 7% para ISI de 1.0 y de 9% para ISI de 2.0. La variacin biolgica del INR de un paciente estimada en aproximadamente 8%,. Para tromboplastina con un ISI de 1.0 parece posible limitar la variacin total en el INR de un paciente de 11 a 13.5%. Para tromboplastinas con un ISI de 2.0 a 2.5 puede observarse una variacin ms grande de hasta 26%. Por lo tanto no se recomienda utilizar para PT tromboplastinas que tengan un ISI superior a 2.5. Entre las ms importantes variables pre-prueba estn, pronta centrifugacin, minimizacin de los efectos de envejecimiento de la muestra, adecuada tcnica de congelacin y descongelacin, presencia de heparina, anticoagulante usado para el plasma, entre otros. Para efectos prcticos de unificacin de resultados, se recomienda informar el resultado de PT as: Resultados en segundos del paciente, control normal en segundos; e INR, correspondiente al resultado del paciente. Se considera prolongado un PT cuando el INR sea superior a 1.3. TIEMPO PARCIAL DE TROMBOPLASTINA TISULAR

Cuando se aade calcio y cantidad suficiente de fosfolpidos plaquetarios al plasma, se activan todos los factores de la coagulacin necesarios para la formacin de protombinasa intrnsica, esta activa la protombina y la trombina as formada convierten el fibringeno en fibrina. MATERIALES Y REACTIVOS: Reactivo para PTT Agua destilada Cloruro de calcio 0.025 M Plasma control normal Cronmetros Bao Maria a 370C Tubos de vidrio de 12 mm x 7.5 cm Micropipetas graduadas de 100 microlitros Pipetas volumtricas de 1.2 y 5 ml

PROCEDIMIENTO: Precalentar a 370C los tubos de ensayo Para la reconstitucin y conservacin del reactivo debern seguirse las instrucciones indicadas por el fabricante Realizar por duplicado cada prueba iniciando con el control normal Calentar a 370C un volumen suficiente de cloruro de calcio 0.025 M Disponer 0.1 ml de reactivo en cada tubo Aadir 0.1 ml de plasma al tubo correspondiente e incubar de 3 a 5 minutos Aadir 0.1 ml de cloruro de calcio 0.025 M precalentado a 370C simultneamente poner el cronometro en marcha Parar el cronometro en el momento de la formacin del coagulo.

VALOR NORMAL: 25 a 35 seg INTERPRETACION: El PTT esta prolongado en las deficiencias congnitas o adquiridas de uno o mas de los factores XII, XI, X, IX, VIII, V, protombina y fibringeno. Esta prolongado si el fibringeno es inferior a 100 mg%; cuando aparecen productos de degradacin de fibringeno o de fibrina. Puede estar prolongado en presencia de anticuerpos antifosfolpido anticoagulante lpico. En individuos normales que no tienen historia hemorrgica ni alteraciones de los factores de coagulacin ocasionalmente se encuentra un PTT ligeramente prolongado.

El PTT es la prueba mas comnmente usada para controlar terapia anticoagulante con heparina. La heparina tiene una vida media de aproximadamente 4 horas, requiere de antitrombina III como cofactor para poder inactivar las proteasas de serina activadas (Factor XIIa, XIa, IXa, Xa y IIa), su efecto anticoagulante es inmediato, dato que se debe tener en cuenta cuando se este monitorizando un paciente heparinizado. FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ANTICUAGULANTE DE LA HEPARINA IN VIVO Destruccin plaquetaria y liberacin del factor plaquetario 4 Tipo de heparina Proporcin de difusin en el espacio extravascular Resistencia del paciente despus de una trombosis Medicamentos que interfieren: Antibiticos, nicotina, glucosa 5% en agua, antihistamnicos.

FACTORES QUE AFECTAN IN VITRO Tiempo de recoleccin Liberacin del factor plaquetario 4 por recoleccin o centrifugacin inadecuada Anticoagulante (citrato u oxalato) Dosificacin incorrecta Pruebas utilizadas para monitorizar Instrumentos

CUESTIONARIO: 1. Interprete las causas por el cual se presentan las siguientes alteraciones: PT anormal y PTTa normal PT anormal y PTT anormal PT normal y PTTa anormal

2. En que consiste el Tiempo de Trombina (TT) y su valor normal 3. 4. En que consiste la prueba del Dmero D. Cuales son los inhibidores naturales del proceso de fibrinolisis y por qu?

UNIVERSIDAD DE PAMPLONA FACULTAD DE SALUD PROGRAMA DE BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO CORRELACION CLINICA HEMATOLOGIA UNIDAD N. 7

SISTEMA GENITAL OBJETIVOS: Determinar la clasificacin sangunea en relacin con sistema ABO y el sistema RH, efectuando pruebas que identifique el tipo sanguneo de cada uno de los pacientes. Conocer la importancia de las clulas LE como diagnstico para el Lupus Eritematoso Sistmico Identificar la existencia de una incompatibilidad sangunea teniendo en cuenta el sistema ABO y el sistema Rh Conocer los parmetros de un cuadro hemtico en las patologas relacionadas al sistema genital como el HIV, Herpes tipo I y II, Sfilis, Neisseria gonorrhoeae Candida, Chlamydia trachomatis, Gardnerella vaginalis, Virus del papiloma humano, Micoplasma, entre otras.

FUNDAMENTO: LUPUS ERITEMATOSO SISTEMICO Es una enfermedad inflamatoria crnica de causa desconocida, que afecta a todas las edades, pero con mayor frecuencia a adultos entre los 18 y 50 anos y a ambos sexos, con predominio del sexo femenino en una proporcin de un hombre por cada 10 a 12 mujeres. Esta es una enfermedad de todos los rganos y sistemas, primordialmente las articulaciones, msculos y piel, pero tambin aunque en menor grado, de estructuras internas como los pulmones, riones y cerebro. Existen tres tipos de lupus, la forma localizada o discoide, la forma generalizada o sistmica y el lupus secundario a medicamentos o lupus por frmacos. De todos ellos, la forma sistmica es la mas frecuente. La forma discoide es tambin llamado lupus benigno, porque en el 90% de los casos se limita a afectar solamente la piel. El lupus por frmacos, desaparece al suspender el medicamento causante. El LES, es una enfermedad donde loa anticuerpos atacan y destruyen los tejidos de nuestro propio cuerpo, produciendo lesiones en todas las estructuras, aunque en grado y extensin variables en cada paciente. Los antgenos en esta enfermedad, son substancias propias, se les denominan auto-antgenos y de aqu el nombre de la enfermedad auto-inmune como tambin se le ha dado al LES. Dado a que estos auto-antigenos son desconocidos como propios en los pacientes con esta enfermedad, se produce una respuesta auto-inmune, como resultado de la enfermedad. El cuerpo se

hace alrgico as mismo, con la produccin de gran cantidad de anticuerpos agresores. DIAGNOSTICO: Se realiza el examen de clulas del Lupus eritematoso (EL) se utiliza primordialmente para diagnosticar el Lupus eritematoso sistmico (LES). Valores Normales: La ausencia de clulas LE es normal. Significado de los resultados anormales: De un 50 a un 75% de los pacientes con LES tienen un examen positivo. Algunos pacientes con artritis reumatoidea, con esclerodermia y con sensibilidad a los medicamentos, tambin muestran un examen de clulas de lupus eritematoso positivo. GRUPOS SANGUINEOS El grupo sanguneo es cada uno de los diversos tipos en que se ha clasificado la sangre de las personas en relacin con la compatibilidad de los hemates y suero de otro individuo que la recibe. Estos grupos son cuatro, segn la clasificacin que hizo Landsteiner, clasificacin hoy universal y se denominan: O, A, B, AB. Se caracterizan por las diferentes combinaciones de dos aglutingenos existentes en los glbulos rojos y de dos aglutininas contenidas en el suero. FACTOR Rh: El factor Rh es un aglutingeno encontrado en 1940 por Landsteiner y Weiner, en los glbulos rojos en unos primates (Macacus rhesus) y que tambin existe normalmente en el 85% de los humanos, que por esta causa se denomina Rh positivos. La sangre de estos transfundida a los Rh negativos (15%), provoca en el suero de estos ltimos la formacin de anticuerpos, que en sucesivas transfusiones pueden destruir los glbulos rojos del donante Rh positivo, invalidando as la transfusin y creando efectos adversos. Tambin en el embarazo un feto Rh + puede provocar en la madre Rh la produccin de aglutininas que podrn ser la causa de la enfermedad hemoltica de los recin nacidos. El factor Rh esta constituido por un complejo de seis antgenos fundamentales, formado por tres pares de genes alelos: Cc, Dd, Ee. El antgeno de mayor poder sensibilizante es el D, le siguen en importancia el e y el E.

Un grupo sanguneo es una forma de agrupar ciertas caractersticas de la sangre que dependen de los antgenos presentes en la superficie de los glbulos rojos y en el suero de la sangre. Las dos clasificaciones ms importantes para describir grupos sanguneos en humanos son los antgenos y el factor Rh. Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden desembocar en hemlisis, anemia, fallo renal, shock y muerte. LOS ANTIGENOS: Las personas con sangre del tipo A tienen glbulos rojos que expresan antgenos de tipo A en su superficie y anticuerpos contra los antgenos B en el suero de su sangre. Anlogamente, las personas con sangre del tipo B tienen la combinacin contraria, glbulos rojos con antgenos de tipo B en su superficie y anticuerpos contra los antgenos A en el suero de su sangre. Los individuos con sangre del tipo O no expresan ninguna de los dos antgenos (A o B) en la superficie de sus glbulos rojos, pero pueden fabricar anticuerpos contra ambos tipos, mientras que las personas con tipo AB expresan ambos antgenos en su superficie y no fabrican ninguno de los dos anticuerpos. A causa de estas combinaciones, el tipo O puede ser transfundido sin ningn problema a cualquier persona con cualquier tipo ABO y el tipo AB puede recibir de cualquier tipo ABO HERENCIA DEL TIPO ABO: Los grupos sanguneos son heredados de los progenitores. Son controlados por un solo gen con tres alelos: O, A, B El alelo A da tipo A, el B da tipos B y el alelo i da tipos O, siendo A y B dominantes sobre i. As las personas que heredan dos alelos ii tienen tipo O; AA o Ai dan lugar a tipo A; y BB o Bi dan lugar a tipos B. Las personas AB tienen ambos fenotipos debido a que la relacin entre los alelos A y B es de codominancia. Por lo tanto, es prcticamente imposible para unos progenitores AB el tener un hijo con tipo O. HERENCIA DEL FACTOR RH: El factor Rh es heredado de la misma forma, con la diferencia de que hay dos alelos y el Rh es dominante. Los alelos son Rh + y Rh

FRECUENCIA: La distribucin de los grupos sanguneos en la poblacin humana no es uniforme. El ms comn es O+, mientras que el mas infrecuente es AB-. Adems, hay variaciones en la distribucin en las distintas subpoblaciones humanas. TIPO FRECUENCIA 0+ 40% A+ 34% B+ 9% O7% A6% AB+ 3% B2% AB1%

PRACTICA: HEMOCLASIFICACION INVERSA Y DIRECTA DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO ABO Las pruebas utilizadas para establecer la hemoclasificacin sangunea relacionada a los diversos grupos sanguneos, aprovechan las caractersticas inmunolgicas que expresa cada individuo de acuerdo a su particular codificacin gentica. En dichas pruebas se evidencian los antgenos y/o anticuerpos del grupo sanguneo, de acuerdo a su comportamiento in Vitro. En cuanto al sistema ABO se investigan tanto antgenos o aglutingenos como los anticuerpos o isoaglutininas naturales. Loa glbulos rojos utilizados en estos procedimientos poseen en la membrana los antgenos, adems nos facilitan la visualizacin de la reaccin como si fuesen los indicadores del punto final de la hemoaglutinacin. La hemoaglutinacin se considera la reaccin de Ag Ac de mayor utilidad en el laboratorio de inmunohematologa, por lo que se hace indispensable recordar las caractersticas y las condiciones que modifican dicha reaccin, para poder determinar con claridad los requerimientos ptimos que permitan obtener la mayor constante de equilibrio en cada prueba especifica y en esta forma se asegure la confiabilidad y contribucin exitosa de los procedimientos empleados en el estudio de los grupos sanguneos. MATERIALES Y REACTIVOS: Suero Anti A, Anti B, Anti A,B Glbulos rojos A, B y O Tubos de ensayo Solucin salina 0.85% Pipetas pasteur

Centrifuga Muestra de sangre con EDTA Suero del paciente Laminas del paciente Palillos

PROCEDIMIENTO 1. HEMOCLASIFICACION DIRECTA: A. Mtodo en tubo: Marque los tubos con Anti A, Anti B, Antti A,B Lavar los glbulos rojos del paciente 3 veces consecutivos en solucin salina y preparar una suspensin final al 3% en dicha solucin. Adicionar: A 2 gotas 1 Gota B 2 Gotas 1 Gota AB 2 Gotas 1 Gota

Reactivo anti-A Reactivo anti-B Reactivo anti AB GR paciente

Mezclar cada tubo y centrifugar 15 30 segundos Resuspender suavemente los botones celulares y observar aglutinacin

POSITIVO: Aglutinacin con cualquier antisuero. Reacciones positivas 3+ o 4+ de aglutinacin. NEGATIVO: La presencia de una suspensin uniforme de GR (O) 1. HEMOCLASIFICACION DIRECTA: B. Mtodo en lamina: Marcar tres laminas portaobjeto como A, B y AB Adicionar: A 2 gotas 1 Gota B 2 Gotas 1 Gota AB 2 Gotas 1 Gota

Reactivo anti-A Reactivo anti-B Reactivo anti AB GR paciente

Mezclar cada preparacin con un palillo Rotar manualmente cada lamina Observar aglutinacin y registrar los resultados

POSITIVO: La aglutinacin fuerte de los glbulos rojos en presencia de cualquier anticuerpo ABO. Las reacciones positivas muestran 3+ de aglutinacin NEGATIVO: La presencia de una suspensin uniforme (O) de glbulos rojos. 2- HEMOCLASIFICACION INVERSA: PRUEBA INVERSA EN TUBO: Marcar tres tubos como A, B, O Adicionar: A 2 Gotas 1 Gota B 2 Gotas 1 Gota 1 Gota O 2 Gotas

Suero paciente GR A GR B GR O

Incubar de 5 15 minutos a temperatura ambiente Mezclar cada tubo y centrifugar por 15 30 segundos Al terminar la centrifugacin observar el sobrenadante para evidencia la presencia de hemlisis. Resuspender los botones celulares y observar aglutinacin.

POSITIVO: Aglutinacin y/o hemlisis NEGATIVO: Una suspensin homognea de eritrocitos. HEMOCLASIFICACION: SISTEMA Rh (Ag D) En el sistema Rh, existen varios antgenos: D, C, c, E, e; sin embargo, de rutina, solo se determina la presencia del Ag D en los eritrocitos y de acuerdo a su presencia o ausencia se dice que un individuo es Rh D positivo o Rh D negativo. MATERIALES Y REACTIVOS: Suero Anti D Tubos de ensayo

Solucin salina 0.85% Pipetas pasteur Centrifuga Muestra de sangre con EDTA Laminas portaobjetos Palillos Albumina Bovina

PROCEDIMIENTO: 1. Prueba directa en lamina: Marcar dos laminas como D y control Adicionar: D 2 Gotas 1 Gota Control 2 Gotas 1 Gota

Suero Anti-D Albmina Bovina 22% Sangre

Mezclar con palillos cada preparacin Rotar manualmente las laminas y observar aglutinacin.

POSITIVO: Aglutinacin de glbulos rojos NEGATIVO: Una suspensin uniforme de glbulos rojos OBSERVACIONES: Si la preparacin de glbulos rojos con albmina al 22% presenta aglutinacin, la prueba no se puede interpretar. La desecacin en los bordes de la preparacin, no se debe confundir con aglutinacin. 2. Prueba directa en tubo: Lavar los glbulos rojos del paciente tres veces con solucin salina y suspenderlos del 3 5% Marcar dos tubos como D y control Adicionar Suero Anti D Albmina Bovina al D 2 Gotas CONTROL 2 Gotas

22% GR paciente

1 Gota

1 Gota

Mezclar suavemente y centrifugar durante 15 -30 segundos Resuspender el botn celular y observar aglutinacin

POSITIVO: La aglutinacin de los glbulos rojos con anti-D NEGATIVO: Una suspensin uniforme de los glbulos rojos con anti-D OBSERVACIONES: Si en el control se observa aglutinacin, la prueba no se puede interpretar, hasta realizar mas anlisis. DETERMINACION DEL Ag DEBIL Consiste en determinar la variante D dbil en una muestra previamente tipificada como Rh: D negativo La determinacin de la variante D dbil, solo se realiza a muestras que por el mtodo manual usual han resultado D negativas. MATERIALES Y REACTIVOS: Suero Anti D Tubos de ensayo Solucin salina 0.85% Pipetas pasteur Centrifuga Muestra de sangre con EDTA Laminas portaobjetos Palillos Albmina Bovina Bao Maria a 370C

PROCEDIMIENTO: Lavar los eritrocitos a tipificar 3 veces con solucin salina y suspenderlos al 3 5% Marcar dos tubos con D y Control Adicionar: D CONTROL

Anti D Albmina Bovina GR paciente

2 Gotas 1 Gota

2 Gotas 1 Gota

Mezclar e incubar los tubos a 370C durante 15 30 minutos, segn las especificaciones del fabricante Centrifugar 15 45 seg Resuspender los botones celulares suavemente y observar la presencia de aglutinacin. Si el tubo con anti D, los eritrocitos estn fuertemente aglutinados, pero no en el tubo control, registrar la prueba como D positiva y no realizar la fase siguiente con el suero de Coombs Si las clulas no son aglutinadas o los resultados son dudosos, lavar los eritrocitos 3 veces con abundante solucin salina. Decantar la SS. Adicionar: D 1 Gota CONTROL 1 Gota

Suero de Coombs

Mezclar y centrifugar 15 30 seg Resuspender suavemente cada botn celular, examinar para aglutinacin y registrar el resultado teniendo en cuenta la escala de intensidad. Si hay aglutinacin en el tubo de prueba con anti D, entonces el resultado es D positivo. Si el resultado es negativo, adicionar: D 1 Gota CONTROL 1 Gota

Clulas control de Coombs

- Las clulas control de Coombs son GR O Rh D positivo sensibilizados con anti D Repetir la centrifugacin por 15 30 seg. La aglutinacin en este punto refleja la presencia de suero antiglobulina libre y confirma que la reaccin era realmente Negativa

OBSERVACIONES: Si se presenta aglutinacin en cualquier fase de la prueba en el tubo control, no se puede realizar la lectura.

CUESTIONARIO: 1. Realice un cuadro con los parmetros normales del cuadro hemtico para recin nacido, nios de 1 mes, lactantes y nios mayores

2. Que es el Fenotipo Bombay 3. Realice una tabla de compatibilidad entre los grupos sanguneos, teniendo en cuenta para cada grupo el Rh (-) y el Rh (+)..

4. Que parmetros son caractersticos del cuadro hemtico frente a las patologas del sistema genital

RESULTADOS DEL LABORATORIO GRUPO NO: _______ INTEGRANTES:

HEMOCLASIFICACCION ABO: Directa en lamina

ANTI- A ANTI-B ANTI AB

Directa en tubo
ANTI- A AB ANTI-B ANTI

Inversa B

Resultado de la muestra analizada: Grupo:____________

RESULTADOS DEL LABORATORIO

Hemoclasificacin Rh:

Directa en lamina Anti D Control

Directa en tubo Anti D Control

Hemoclasificacin: Ag D DEBIL

D Centrifugacion inmediata Fase Coombs Celulas control de Coombs Resultados de la muestra analizada:

CONTROL

Rh: _________Ag D dbil: ____________

ANALISIS:

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UNIDAD N. 8 SISTEMA ANDROGINECOLOGICO. OBJETIVOS: Identificar por medio del laboratorio las pruebas que son diagnosticas para un sndrome antifosfolpido Diferenciar un dengue hemorrgico de un dengue clsico utilizando los parmetros diagnsticos del cuadro hemtico Adquirir destreza en el recuento de las plaquetas por el mtodo directo e indirecto Clasificar las prpuras de acuerdo a su fisiopatologa e identificar las pruebas de laboratorio que ayudan a su diagnostico

FUNDAMENTO: SINDROME ANTIFOSFOLIPIDO El sndrome antifosfolpido es una enfermedad auto-inmune en la que el cuerpo produce grandes cantidades de anticuerpos antifosfolpidos. Los fosfolpidos son un tipo de grasa especial que contiene el fosfato que constituye las paredes externas de las clulas del cuerpo. Los anticuerpos antifosfolpidos atacan a los fosfolpidos. Esto ocasiona diversos problemas incluyendo un aumento en la coagulacin de la sangre. La cardiolipina es un tipo de fosfolpido y puede desarrollarse anticuerpos anticardiolopinas especficos. La enfermedad es aproximadamente dos veces mas frecuente en mujeres que en hombres. Generalmente se caracteriza por lo siguiente: Trombosis cogulos de sangre en arterias o venas (especialmente en las piernas), cogulos en los vasos sanguneos del sistema nervioso central (cerebro y medula espinal) puede provocar accidentes cerebrovasculares Trombocitopenia Perdida del embarazo (especialmente perdidas repetidas)

En el embarazo puede afectar tanto a la madre como al bebe. En mujeres con el SAF, los riesgos pueden ser los siguientes: Accidentes cerebrovasculares Cogulos sanguneos Hipertensin

La muerte del feto Aborto espontneo recurrente Retardo del crecimiento intrauterino Nacimiento prematuro

El SAF puede ser primario si no acompaa alguna enfermedad autoinmune o secundario cuando se presenta en el contexto de un LES. El SAF primario o secundario, los anticuerpos antifosfolpidos han sido descritos en una amplia variedad de desordenes, sean estos reumticos, inducidos por drogas, malignidad o infecciones. LABORATORIO: Son de utilidad para el diagnostico de esta entidad pruebas reagnicas, inmunolgicas y coagulomtricas. El anticoagulante lpico se determina mediante pruebas que ponen de manifiesto de forma indirecta la presencia de anticuerpos dirigidos contra la fraccin fosfolipdica del complejo activador de la protrombina. Inicialmente se utilizan pruebas que puedan evidenciar alteraciones de los tiempos de la coagulacin, mediante la prolongacin del tiempo parcial de tromboplastina (PTT), tiempo de Caoln y tiempo de veneno de vbora de Russel. Si algunas de estas pruebas es anormal, se repite utilizando una muestra en el cual el plasma del paciente se mezcla con la de un sujeto normal. Si el paciente tuviese dficit de algn factor de la coagulacin, la prueba debera normalizarse, caso contrario ante el anticoagulante lpico, permanece prolongado. As mismo la presencia del AL se confirma con la normalizacin de la prueba al aadir plaquetas o un exceso de fosfolpidos. La determinacin del AL, debe hacerse en plasma pobre en plaquetas, adems estas pruebas carecen del valor si el paciente se encuentra en tratamiento anticoagulante. Pruebas reagnicas: VDRL (+) con FTA_ABS (-) Pruebas inmunolgicas: Anticuerpos anticardiolipinas (por tcnica de ELISA) Isotipos IgG e IgM Pruebas coagulomtricas: Prolongacin del tiempo parcial de tromboplastina (PTT) Prolongacin del tiempo de Caoln Prolongacin del tiempo de veneno de vbora de Russel.

El hecho de que un 30% no coexisten los anticuerpos anticardiolipinas y el anticoagulante lpico hace necesario la realizacin de estas pruebas, con la finalidad de poder identificar los posibles pacientes con este sndrome. CRITERIOS DIAGNOSTICOS: El diagnostico del SAF se basa en el cumplimiento de criterios clnicos y de laboratorio. Manifestaciones clnicas: Trombosis arteriales y / o venosas Abortos y / o muertes fetales a repeticin Trombocitopenia Ulceras en piernas Anemia hemoltica

Parmetros de laboratorio: AAC IgG (titulo medio alto) AAC IgM (titulo medio alto) AL (+) Se requiere de un criterio clnico y uno de laboratorio. Adems la prueba para AAF debe ser positiva por lo menos en dos ocasiones, separadas mas de tres meses. DENGUE Enfermedad infecciosa tropical transmitida por el mosquito Aedes aegypty, caracterizada por fiebre y dolor intenso en las articulaciones y msculos, inflamacin de los ganglios linfticos y erupcin ocasional de la piel. Es producida El dengue es endmico en algunas zonas de los trpicos y han aparecido epidemias en pases tropicales y templados. Carece de tratamiento especfico y de vacuna. Con frecuencia tiene una evolucin de seis a siete das, pero la convalecencia es larga y lenta. El dengue hemorrgico, es una forma mas grave del dengue y puede ser mortal si no se trata adecuadamente. La fiebre puede durar de 3 a 5 das (rara vez mas de 7 das, y suele ser difsica). Cefalea intensa, mialgias artralgias, dolor retroorbital, anorexia, alteraciones del aparato gastrointestinal y exantema rubeliforme. En algunos casos aparece tempranamente eritema generalizado.

En la seccin correspondiente al dengue hemorrgico se presentan un incremento en la permeabilidad vascular, manifestaciones hemorrgicas y ataque de rganos especficos. En cualquier momento durante la fase febril pueden aparecer fenmenos hemorrgicos de poca intensidad, como petequias y epistaxis. En las personas de piel oscura la erupcin a menudo no es visible. La recuperacin puede acompaarse de fatiga y depresin duradera. Son frecuentes las linfoadenopatas. Las epidemias tienen carcter explosivo, pero la tasa de letalidad es muy baja, siempre que no aparezca el dengue hemorrgico. LABORATORIO: Inicia leucopenia con linfocitosis relativa; con menor frecuencia se observan trombocitopenia (menor de 100.000 plaquetas por mm3) e incremento de las aminotransferasas. Dengue comn (clsico) Leucopenia o leucocitosis Trombocitopenia Dengue hemorrgico Trombocitopenia (menos de 100.000/mm3 ) Extravasacin de plasma manifiesta por cualquiera de los siguientes signos: - Hematocrito inicial situado un 20% o ms por encima del correspondiente a esa edad, sexo y poblacin. - Descenso mayor del 20% del hematocrito despus del tratamiento o signos habitualmente asociados a la extravasacin de plasma como derrame pleural u otros derrames serosos, o hiperproteinemia El diagnostico diferencial incluye todas las enfermedades epidemiolgicamente importantes incluidas bajo los episodios febriles vricas transmitidas por artrpodos, sarampin, rubola y otras enfermedades febriles sistmicas. Con tcnicas auxiliares en el diagnostico pueden utilizarse las pruebas de inhibicin de la hemoaglutinacin, fijacin del complemento. ELISA, captacin de

anticuerpos IgG e IgM, as como las de neutralizacin. El virus se asla de la sangre por inoculacin de mosquitos o por tcnicas de cultivo celular de mosquitos o vertebrados, y despus se identifican con anticuerpos monoclonales con especificidad de tipo. PERIODO DE TRANSMISIBILIDAD: No se transmite directamente de una persona a otra. Los enfermos suelen infectar a los mosquitos desde el da anterior hasta el final del periodo febril que es, en promedio, de unos cinco das. El mosquito se vuelve infectante de 8 a 12 das despus de alimentarse con sangre, y as continua durante toda su vida. PERIODO DE INCUBACION: De 3 a 14 das, por lo comn de 7 a 10 das. MEDIDAS PREVENTIVAS: Educacin de la poblacin respecto a medidas personales tales como destruccin de los criaderos y proteccin contra la picadura de mosquitos de actividad diurna, incluso el empleo de mosquiteros, ropas protectoras y repelentes. PRACTICA: CUADRO HEMATICO MANUAL Y RECUENTO DE PLAQUETAS CUADRO HEMATICO MANUAL MATERIALES Y REACTIVOS: Sangre total con EDTA Microhematocritos Tabla de lectura o reglilla Cubetas Porta cubetas Pipeta de Salhi Pipeta de glbulos blancos Tubos de 13 x 100 mm Gradillas Pipeta de 5 ml Pipeteadores Pipetas automticas

Puntas azules y amarillas Tapones de caucho Cmaras de Neubauer Cajas de petri, papel filtro Reactivo de Drabkin Reactivo de Turk Estndar o patrn de hemoglobina Aceite de inmersin Colorante de Wright Solucin Buffer, agua destilada Microcentrfuga Espectrofotmetro Microscopio

PROCEDIMIENTO: 1. MEDICION DEL HEMATOCRITO: 2 MEDICION DE LA HEMOGLOBINA: 3. RECUENTO DE GLOBULOS BLANCOS: A. DILUCION EN TUBO: B. DILUCION EN PIPETAS DE BLANCOS:

4. EXTENDIDO Y COLORACION: 5. RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS: 6. RECUENTO DE PLAQUETAS MATERIALES Y EQUIPOS: Sangre con EDTA Oxalato de amonio al 1% o Citrato de sodio al 3.8% Pipeta de Glbulos rojos Cmara de neubauer Laminilla de cuarzo Microaspirador Caja de petri

Papel filtro Laminas Colorante de wright Agua destilada Aceite de inmersin Microscopio

PROCEDIMIENTO: A. METODO INDIRECTO: B. METODO DIRECTO: CUESTIONARIO: 1. Realiza un cuadro comparativo con las diferentes prpuras mencionadas en clase. 2. Que son las clulas CD3 y CD4 y como se realiza su recuento.

3. cuales son los valores de referencia y en qu patologas se encuentran notablemente disminudas y cuales son los valores para predecir la evolucin de la patologa? 4. Clasificar las prpuras de acuerdo a su fisiopatologa e identificar las pruebas de laboratorio que ayudan a su diagnostico

UNIVERSIDAD DE PAMPLONA FACULTAD DE SALUD

PROGRAMA DE BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO CORRELACION CLINICA HEMATOLOGIA UNIDAD N. 9 SISTEMA ENDOCRINO OBJETIVOS: Identificar las diferentes anemias teniendo en cuenta su fisiopatologa y su diagnostico en el laboratorio por medio de casos clnicos y extendido de sangre perifrica Estandarizar los mtodos utilizados para reportar los mtodos utilizados para reportar anormalidades celulares buscando unificar criterios en los sistemas de informacin de los resultados.

FUNDAMENTO: ANEMIAS La anemia es un trastorno frecuente de la sangre que ocurre cuando la cantidad de glbulos rojos es menor que lo normal, o cuando la concentracin de hemoglobina en sangre es baja. La anemia a menudo es un sntoma de una enfermedad ms que una enfermedad en si misma. En general, se desarrolla debido a la presencia de uno de estos factores: Perdida excesiva de sangre o hemorragia Produccin insuficiente de glbulos rojos Destruccin excesiva de glbulos rojos

Que causa la anemia? Generalmente, la anemia puede ser causada por varios problemas incluyendo los siguientes: Infecciones Ciertas enfermedades Ciertos medicamentos La mala nutricin La prdida de sangre

Existe anemia cuando la concentracin de hemoglobina en los eritrocitos y el volumen globular (hto) estn por debajo de los valores normales. Valores normales de hemoglobina Hombre: 14-18 g/dl Mujer: 12-16 g/dl Recin nacidos: 16.5-19.5 g/dl Nios: (varia con la edad) 11.2-16.2 g/dl Signos y sntomas de la anemia Se debe a la disminucin del aporte de oxigeno a los tejidos Los principales signos de un paciente anmico son: 1. 2. 3. 4. 5. fatiga vrtigo desmayos cefalea palpitaciones

Fsicamente los signos son: 1. 2. 3. 4. palidez generalizada presin arterial baja fiebre ligera edema en algunos casos clnicos

CLASIFICACION DE LAS ANEMIAS Teniendo en cuenta el ADE (ancho de distribucin eritrocitaria) VR: 10 -15% Teniendo en cuenta el VCM (volumen corpuscular medio) VR: 80 100 fl ANEMIAS MICROCITICAS HOMOGENEAS

ADE NORMAL Y VCM DISMINUIDO 1. Talasemias 2. Anemias secundarias a enfermedades crnicas

ANEMIAS MICROCITICAS HETEROGENEAS

ADE AUMENTADO Y VCM DISMINUIDO 1. Anemia ferropnica 2. Algunas anemias hemolticas de tipo inmune ANEMIAS MACROCITICAS HOMOGENEAS

ADE NORMAL y VCM AUMENTADO 1. 2. 3. 4. 5. Anemia megaloblstica Anemias aplasia Anemias hemolticas Hemoglobina SS Presencia de aglutininas fras ANEMIAS NORMOCITICAS HOMOGENEAS

VCM NORMAL Y ADE NORMAL 1. 2. 3. 4. 5. 6. Anemias secundarias a enfermedades crnicas Hemoglobina s, c Pacientes transfundidos Pacientes en quimioterapia (LLC) Hemorragias Esferocitosis hereditaria ANEMIAS NORMOCITICAS HETEROGENEAS

VCM NORMAL Y ADE AUMENTADO 1. Deficiencia de hierro, vitamina b12 o folatos 2. Anemia sideroblstica 3. Pacientes transfundidos PRACTICA: ANALISIS DE EXTENDIDO DE SANGRE PERIFERICA ANALISIS DE CASOS CLINICOS CUESTIONARIO: 1. Haga un paralelo entre las diferentes anemias, teniendo en cuenta: etiologa, manifestaciones clnicas, parmetros de laboratorio.

2. Qu tipo de dilucin le haran a la muestra de un paciente con anemia aplsica. Explica el procedimiento con un ejemplo. 3. Qu tipo de anemias requieren pruebas complementarias para su diagnstico, especifique la prueba y el objeto de la misma.

UNIVERSIDAD DE PAMPLONA FACULTAD DE SALUD PROGRAMA DE BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO CORRELACION CLINICA HEMATOLOGIA UNIDAD N. 10 BANCO DE SANGRE, SISTEMA NERVIOSO CENTRAL Y PERIFERICO OBJETIVOS: Conocer el procedimiento de las pruebas de compatibilidad y adquirir destreza en la realizacin del Coombs directo e indirecto Interpretar cada uno de los resultados y tomar decisiones en las incompatibilidad de las pruebas

FUNDAMENTO: ANTIGLOBULINA HUMANA O DE COOMBS La prueba de antiglobulina o de Coombs, es un procedimiento necesario en el trabajo cotidiano de todo Banco de sangre, para demostrar la presencia de anticuerpos incompletos de grupos sanguneos, de significacin clnica, fracciones del complemento o algunos antgenos de los eritrocitos. Los anticuerpos incompletos, usualmente Inmunoglobulina G (IgG), son capaces de unirse a las clulas rojas, pero no de aglutinarlas cuando estn suspendidas en solucin salina, por las caractersticas de su molcula, el tamao muy pequeo; sin embargo cuando se agrega otro anticuerpo, anti Ig G, la aglutinacin se hace posible. Este anticuerpo Ig G en si, es el suero antiglobulina. La prueba tiene una utilidad clnica muy amplia; es imprescindible cuando se trata de establecer la naturaleza inmune de diversas situaciones como: una reaccin transfusional, la enfermedad hemoltica del recin nacido, una anemia hemoltica relacionada con drogas o con mecanismos autoinmunes. Forma parte de estudios pretransfusionales que deben realizarse tanto al donante como al receptor, como las pruebas de compatibilidad y la deteccin e identificacin de anticuerpos inesperados. El principio de la prueba de la antiglobulina es demostrar anticuerpos incompletos, Inmunoglobulina G, o complemento, mediante el suero antiglobulina, el cual contiene un anticuerpo anti Ig G y / o un anticuerpo anticomplemento.

El suero antglobulina se prepara a partir de colonias diferentes de conejos inmunizados con globulinas humanas. Los animales se inyectan con Ig G o betaglobulinas, altamente purificadas, las cuales actan como inmunogenos y provocan una respuesta de anticuerpos contra esas globulinas humanas: anticuerpos anti Ig G o anticuerpos contra el complemento. La prueba de la antiglobulina se hace mediante dos formas, la prueba directa y la prueba indirecta; son mtodos similares, pero se diferencian en la reaccin de sensibilizacin de las clulas rojas, es decir la unin entre antgeno y su correspondiente anticuerpo. En la prueba directa se demuestra esa sensibilizacin in vivo, en la prueba indirecta in Vitro. PRACTICA: COOMBS DIRECTO E INDIRECTO COOMBS DIRECTO Se usa para demostrar in vivo la cobertura de los eritrocitos con globulinas. Es til en la investigacin de anemias hemolticas autoinmunes, hemlisis inducida por drogas, eritroblastosis fetal, reacciones aloinmunes contra eritrocitos recientemente transfundidos. MATERIALES Y REACTIVOS: Muestra de sangre con anticoagulante EDTA Tubos de ensayo Solucin salina al 0.85% Centrifuga Tapones de caucho Centrifuga Gradillas Pipeta pasteur Suero de Coombs

PROCEDIMIENTO: Lavar los eritrocitos 3 veces con SS y suspenderlos del 3 5% Marcar dos tubos como CD y control Adicionar: CD 2 Gotas 1 Gota CONTROL 2 Gotas -

Suero de Coombs GR paciente

GR O positivo

1 Gota

Tambin puede realizar su control adicionando dos gotas del GR del paciente y dos gotas de SS Centrifugar 15 45 seg Resuspender los botones celulares suavemente y observar la presencia de aglutinacin Graduar la aglutinacin 0, 1+, 2+, 3+, 4+. Si el resultado es negativo, adicionar: CD 1 Gota CONTROL 1 Gota

Clulas control de Coombs

Repetir la centrifugacin de 15 45 seg La aglutinacin en este punto refleja la presencia de suero antiglobulina libre y confirma que la reaccin era realmente negativa.

OBSERVACIONES: Si se presenta aglutinacin en cualquier fase de la prueba en el tubo control, no se puede realizar la lectura. Valor normal: La ausencia de aglutinacin (falta de agrupacin de clulas) es lo normal. Significado de los resultados anormales: Un examen de Coombs directo positivo indica anticuerpos contra los glbulos rojos, los cuales a su vez pueden indicar la presencia de una de las siguientes condiciones: Anemia hemoltica autoinmune sin otra causa subyacente Anemia hemoltica inducida por medicamentos Eritroblastosis fetal Mononucleosis infecciosa Infecciones por Micoplasma Sfilis Leucemia linfoctica crnica u otro trastorno linfoproliferativo Lupus eritematoso sistmico u otra condicin reumatolgica

Reaccin a transfusin como la ocasionada por unidades de sangre de compatibilidad inadecuada Esta prueba tambin es anormal en algunas personas sin que exista una causa clara, especialmente en personas de edad avanzada. Hasta el 3% de las personas que estn hospitalizadas sin un trastorno sanguneo conocido tendrn un resultado anormal en el examen de Coombs directo.

COOMBS INDIRECTO Detecta anticuerpos hacia los glbulos rojos en la circulacin. Es importante para la determinacin de la compatibilidad entre dador y receptor en el caso de transfusiones de sangre. Detecta tambin la presencia de anticuerpos anti Rh en la madre durante el embarazo. Evala la necesidad de administrar inmunoglobulina Rh (Ag D). Ayuda a confirmar el diagnostico de anemia hemoltica. MATERIALES Y REACTIVOS: Suero problema Muestra de sangre con anticoagulante EDTA Tubos de ensayo Bao Maria a 370C Micropipetas Albmina Bovina Suero de Coombs Solucin salina al 0.85% Centrfuga Gradillas Pipetas pasteur

PROCEDIMIENTO: Separar el suero del paciente con el que se va a realizar la prueba Lavar los eritrocitos del paciente 3 veces con SS y suspenderlos del 3 5% Marcar dos tubos como CI y Control Adicionar: CI 2 Gotas 2 Gotas CONTROL 2 Gotas 2 Gotas

GR Paciente Suero del paciente

Centrifugar 15 45 seg Resuspender los botones celulares suavemente y observar la presencia de aglutinacin Si el resultado es negativo, adicionar: CI CONTROL Albmina Bovina 2 Gotas Solucin salina al 2 Gotas 0.85% Incubar a 370C por 20 minutos Despus de la incubacin los glbulos rojos se lavan tres veces con SS al 0.85% En el ultimo lavado descartar la SS al 0.85% hasta que quede la muestra en las paredes del tubo. Adicionar. CI 2 Gotas CONTROL 2 Gotas

Suero de Coombs Solucin salina al 0.85%

Centrifugar 15 45 seg Resuspender los botones celulares suavemente y observar la presencia de aglutinacin Graduar la aglutinacin 0, 1+, 2+, 3+, 4+. Si el resultado es negativo, adicionar: CD 1 Gota CONTROL 1 Gota

Clulas control de Coombs

Repetir la centrifugacin de 15 45 seg La aglutinacin en este punto refleja la presencia de suero antiglobulina libre y confirma que la reaccin era realmente negativa.

Valor normal: La ausencia de aglutinacin (falta de agrupacin de clulas) es lo normal. Significado de los resultados anormales:

Test positivo indica la presencia de anticuerpos circulantes contra los glbulos rojos En la embarazada con sangre Rh negativo, un test con titulo positivo alto significa que el feto puede desarrollar la enfermedad hemoltica del recin nacido.

CELULAS CONTROL DE COOMBS Cuando las pruebas de la antiglobulina, directa e indirecta, dan negativas, es necesario verificar el reactivo antiglobulina. Una manera fcil es, a partir de la prueba negativa, poner la suspensin en contacto con eritrocitos O Rh+, sensibilizados con anti D conocidos como clulas control de coombs y leer de nuevo. MATERIALES Y REACTIVOS: Tubos de ensayo Antisuero anti D Glbulos rojos O Rh+, lavados y suspendidos al 3-5% en solucion salina al 0.85% PROCEDIMIENTO: Lavar tres veces glbulos rojos O+ Colocar 8 a 10 gotas de suspensin de glbulos rojos O positivos Colocar la misma cantidad de antisuero anti D al tubo Incubar a 37oC por 30 minutos Lavar de 5 a 6 veces en solucin salina 0.85% Resuspender al 3-5% en solucin salina 0.85% Probar estos glbulos rojos con una gota de suero de Coombs y buscar aglutinacin Este control dura 4-5 das a 4oC

INTERPRETACION: La lectura con las clulas control de Coombs deben dar positivas, no mayor de dos cruces. Es importante recordar que una prueba de la antiglobulina negativa, sin control, puede interpretarse como una prueba negativa, falsa. PRUEBA DE COMPATIBILIDAD

Cuando a un paciente se le va a realizar una transfusin de cualquier componente que contenga glbulos rojos, se debe clasificar para los sistemas ABO y Rh (Ag D) y buscar el componente del mismo grupo ABO y Rh (Ag D). Adems debe realizarse pruebas de compatibilidad, entre el suero o plasma del receptor y los eritrocitos del donante. La prctica consiste en buscar 1 unidad de sangre compatible. Recolectar una muestra de sangre del receptor en tubo seco para obtener suero y en tubo con EDTA para lavar glbulos rojos Separar el suero del receptor Lavar los eritrocitos del receptor tres veces con solucin salina y resuspenderlos del 3-5% Disponer de los tubos pilotos la bolsa proveniente del donante Lavar los glbulos rojos provenientes de los pilotos del donante tres veces con solucin salina y resuspenderlos del 3-5% El procedimiento que se describe a continuacin se debe realizar para cada una de las unidades a transfundir Marcar dos tubos uno con el numero de la bolsa y el otro como autocontrol Adicionar:

FASE SALINA: Suero receptor GR donante GR receptor PRUEBA CRUZADA 2 Gotas 1 Gota AUTOCONTROL 2 Gotas 1 Gota

Centrifugar 30 45 seg Observar la presencia de hemlisis en el sobrenadante. Resuspender los botones para observar aglutinacin; si existe graduarla segn la escala La presencia de hemlisis o aglutinacin, constituye una prueba cruzada incompatible, una suspensin homognea de eritrocitos se considera como una prueba cruzada compatible en la Fase Salina o inmediata.

FASE ALBUMINA: Albmina bovina PRUEBA CRUZADA 2 Gotas AUTOCONTROL 2 Gotas

Incubar 15-30 minutos a 370C

Centrifugar 30 45 seg Observar la presencia de hemlisis en el sobrenadante. Resuspender los botones para observar aglutinacin; si existe graduarla segn la escala La presencia de hemlisis o aglutinacin, constituye una prueba cruzada incompatible, una suspensin homognea de eritrocitos se considera como una prueba cruzada compatible en la Fase de Albmina Lavar tres veces con SS y decantar bien el sobrenadante en el ultimo lavado

FASE DE COOMBS: Suero de Coombs PRUEBA CRUZADA 2 Gotas AUTOCONTROL 2 Gotas

Centrifugar 30 45 seg Resuspender los botones para observar aglutinacin. Si existe, graduarla segn la escala La presencia de hemlisis o aglutinacin, constituye una prueba cruzada incompatible, una suspensin homognea de eritrocitos se considera como una prueba cruzada compatible en la Fase de Coombs Si el resultado es negativo, adicionar: PRUEBA CRUZADA 1 Gota AUTOCONTROL 1 Gota

Clulas control de Coombs

Centrifugar 30 45 seg Observar aglutinacin y registrar los resultados La presencia de hemlisis o aglutinacin, confirma que la prueba era realmente negativa en la fase de Coombs y que se ha trabajado correctamente. (Este es un control interno que no se informa).

OBSERVACIONES: En algunos centros se emplean medios diferentes a la albmina para disminuir el potencial Z; entre ellos estn la solucin salina de baja fuerza inica (LISS), el Polietilenglicol (PEG) y el Polibreno de baja intensidad (LIP). Para cada uno existen protocolos que se deben seguir cuidadosamente El autocontrol debe permanecer negativo siempre

Se deben registrar los resultados para cada unidad. Si la prueba es incompatible la unidad no se debe trasfundir, se debe buscar otra unidad de sangre y realizar las pruebas cruzadas correspondientes.

CUESTIONARIO: 1. Qu es un Banco de Sangre

2. Qu tipos de Banco de Sangre existen 3. Qu es un donante y cuales son los criterios para proteger al donante 4. Qu es el receptor y cuales son los criterios para proteger al receptor 5. Defina: Flebotoma teraputica. Donacin autloga. Hemafresis. Receptor especifico. Donacin dirigida. Donacin Voluntaria

6. Cuales son las pruebas fsicas y de laboratorio que se realizan antes de la donacin 7. Cuales son las condiciones que se deben tener en cuenta para que la flebotoma sea un xito. 8. Cuales son los criterios de autoexclusin de un paciente 9. Cuales son los parmetros postdonacin 10. Enumere algunas reacciones adversas a la donacin 11. Cuales son los componentes que conforma la sangre total 12. Cuales son las pruebas de laboratorio que se le realiza a cada unidad de sangre. 13. Cuales son las alteraciones hematolgicas de acuerdo a la etiologa de las meningitis.

RESULTADOS DEL LABORATORIO GRUPO N0 _______ INTEGRANTES:

1. Hemoclasificacin Receptor: Hemoclasificacin ABO: Hemoclasificacin Rh: Directa en lamina Anti D Control

Interpretacin: Grupo: __________ Rh:___________ 2. Hemoclasificacin Donante (bolsa): Hemoclasificacin ABO: Directa en lamina Directa en tubo Inversa

ANTI- A AB

ANTI-B

ANTI

ANTI- A AB

ANTI-B

ANTI

Hemoclasificacin RH: Directa en lamina Anti D Control

Interpretacin: Grupo: __________ Rh:___________ 3. Prueba Cruzada: Prueba Cruzada Fase Salina Fase Albmina Fase de Coombs Clulas control de Coombs Interpretacin: ______________________________________________________ Autocontrol

UNIVERSIDAD DE PAMPLONA FACULTAD DE SALUD PROGRAMA DE BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO CORRELACION CLINICA HEMATOLOGIA UNIDAD N. 11 SISTEMA INMUNE OBJETIVOS: Diferenciar las leucemias agudas de las crnicas teniendo en cuenta sus hallazgos principales Identificar las leucemias mieloides y linfoides morfolgicamente por medio de las caractersticas de las clulas inmaduras Conocer los parmetros citoqumicos que complementan el diagnostico de las anemias

FUNDAMENTO: LEUCEMIAS AGUDAS Se caracterizan por la presencia de clulas blsticas y leucocitos inmaduros en sangre perifrica y en medula sea, casi siempre en estas leucemias va haber anemia, leucocitosis, aunque algunos pacientes pueden presentar nmeros normales o bajos y casi siempre se presenta trombocitosis. El promedio de vida de un paciente con leucemia aguda sin tratamiento es de 3 meses. La posible curacin de la leucemia aguda se lleva a cabo mediante la destruccin mxima de clulas cuando la enfermedad se acaba de diagnosticar. Las leucemias agudas se dividen en Leucemias mieloides agudas y Leucemias linfoides agudas.

Esta clasificacin se basa en las caractersticas morfolgicas de las clulas tenidas con wright, en ESP o en medula sea y con la tincin citoqumica de las clulas blsticas. La clasificacin reciente de la OMS propone enfatizar en los rasgos genticos comunes en los signos y sntomas clnicos una evaluacin adicional, de los blastos leucmicos mediante anlisis molecular y citometra de flujo. LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA: La FAB clasifica la LMA de la MO a la M7 y la LLA de L1 a L3. En cualquiera de las categoras para definir las leucemias agudas debe de haber mayor de 30% de blastos. MO: Con diferenciacin mnima o Blastos mieloides indiferenciados M1: LMA sin maduracin M2: LMA con maduracin M3: Leucemia promieloctica aguda M4: Leucemia mielomonoctica aguda M5: M5a: Leucemia monoblstica aguda M5b: Leucemia monoctica aguda M6: Leucemia eritroide aguda M7: Leucemia megaloblstica aguda LEUCEMIA LINFOIDE AGUDA: La LLA se divide en FAB L1 (nios), L2 (nios mayores y adultos) y L3 (pacientes con leucemia secundaria al linfoma de burkitt) La L1, L2 y L3, se diferencian en la morfologa, el tamao, la cantidad de nucleolos y la apariencia del citoplasma. Del 60 70% de los pacientes hay leucocitosis, en el 25% hay leucopenia. En el FSP casi el 100% son linfoblastos y linfocitos. Los blastos no tienen bastones de Auer y tienen de 1 a 2 nucleolo, hay granulocitopenia, aunque en la L2 pueden haber clulas inmaduras de tipo mieloide, hay anemia y trombocitosis. TINCIONES CITOQUIMICAS: tiles para la diferenciacin de las leucemias. Las tinciones reflejan la composicin qumica de las clulas mediante el uso de reaccin de color sin daar la clula. Las tinciones citoqumicas son:

Sudan Negro B Mieloperoxidasa Acido peryodico de schiff (PAS) Naftol AS-D cloracetato NASDCA Esterosol Fosfatasa acida Fosfatasa alcalina TDT: Desoxinucleotidil transferasa Terminal Antgeno CALLA Inmunoglobulina de superficie

LEUCEMIAS CRONICAS: LEUCEMIA MIELOIDE CRONICA: Existe un aumento de clulas blsticas en el FSP y medula sea y se disminuye el espacio para GB, GR y PQ, esto puede producir infecciones, anemia y hemorragias, dolor en los huesos. El nmero de clulas blsticas en la sangre y en la medula sea y los sntomas, determinan la fase de la enfermedad. Se presentan en pacientes mayores de 50 anos. Existe una traslocacin gentica de 2 cromosomas, el 9 y 22 que se conoce como el cromosoma Filadelfia, aunque se presenta en pacientes de 50 a 60 anos, tambin pueden haber presentaciones infantiles y juveniles. Los hallazgos ms comunes al inicio de la enfermedad son: aumento de los GB y crecimiento de bazo y menos frecuente crecimiento del hgado, anemia, cansancio y sangrados. En muchos casos los pacientes son asintomtico y se diagnostica la enfermedad de manera accidental al realizar un cuadro hemtico. ETAPAS DE LA LMC: 1. Fase crnica 2. Fase acelerada 3. Fase blstica De recada LEUCEMIA LINFOIDE CRONICA:

Pacientes mayores de 50 aos, se caracteriza por aumento de linfocitos en el numero y estos son normales. Comnmente es diagnosticada por casualidad, cuando se realiza un cuadro hemtico. En general es una enfermedad asintomtica pero algunas veces puede presentar debilidad, sudoracin nocturna, fiebre sin infeccin, perdida de peso, aumento en las infecciones. La enfermedad varia en algunos pacientes, avanza rpidamente y en otras puede durar 10 a 20 aos sin presentar problemas. Los linfocitos son normales, pero no son capaces de combatir infecciones. La LLC progresa con lentitud, en las primeras etapas de la enfermedad no hay sntomas a medida que pasa el tiempo, los linfocitos se reproducen cada vez ms y empiezan aparecer sntomas. El pronstico depende de la etapa en la que se encuentra el paciente, la edad del paciente y su estudio de salud en general. ETAPAS DE LA LLC: Etapa O Etapa I Etapa II Etapa III Refractaria

MATERIALES Y REACTIVOS: Aceite de inmersin Microscopio Lminas de coleccin.

PROCEDIMIENTO: 1. Prepare la lmina entregada por el profesor de medula sea o extendido de sangre perifrica para la observacin en el microscopio. En un aumento de bajo poder (10x) y mirando el cuerpo del extendido, observe los campos microscpicos uniformes y homogneos donde los eritrocitos se encuentren bien distribuidos para la observacin de la morfologa de glbulos rojos, glbulos blancos y plaquetas. Identifique en 100 X las clulas inmaduras y maduras realizando un diferencial de 100 clulas Realice el reporte de la lamina entregada y analice los resultados

2. Analice los casos clnicos entregados por el profesor e informe el tipo de leucemia y la razn por la cual da su diagnostico. CUESTIONARIO: 1. La LMA segn FAB esta clasificada de la MO a la M7, defina cada una de ellas, teniendo en cuenta sus caractersticas principales para su diferenciacin. 2. La LLC segn FAB esta clasificada de la L1 a la L3, defina cada una de ellas, teniendo en cuenta sus caractersticas principales para su diferenciacin. 3. Que es la reaccin leucemoide 4. Realiza un cuadro comparativo con las tinciones citoqumicas, identificando el tipo de leucemia para la cual es diagnostico cada tincin. 5. Haga un esquema de los linajes que conforma la hematopoyesis (eritroide, linfoide, monoctica, mieloide y megacarioctica).

UNIVERSIDAD DE PAMPLONA FACULTAD DE SALUD PROGRAMA DE BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO CORRELACION CLINICA HEMATOLOGIA UNIDAD N. 13 SISTEMA HEMATOPOYETICO OBJETIVOS: Identificar las neoplasias del sistema inmune. Enfermedad de Hodgkin y no Hodgkin Diferenciar cada una de las mielodisplasias Elaborar un caso clnico de las enfermedades tratadas en el curso de hematologa

FUNDAMENTO: LINFOMAS: Neoplasias del sistema inmunitario (clula B o T), que por lo comn nacen en el ganglio linftico CAUSA: DESCONOCIDA EBV (BURKIT) ENFERMEDAD DE HODGKIN:

La Enfermedad de Hodgkin corresponde a un linfoma maligno con caractersticas inmunitarias y linfocticas nicas. En esta enfermedad, los sitios primarios de afeccin tisular son los ganglios linfticos. Desde el punto de vista histolgico se caracteriza por la presencia de clulas de Reed-Stemberg, que son clulas multinucleadas aparentemente derivadas de los macrfagos. La Enfermedad de Hodgkin presenta los siguientes subgrupos: Con predominio de linfocitos Con celularidad mixta Esclero nodular Depresin de linfocitos CLINICA: Linfoadenopata indolora Sntomas sistmicos (b) fiebre > 38c sudores nocturnos perdida de peso Prurito Lesin pulmonar(adenopata) INMUNES: Alergia e hipersensibilidad Trastorno de inmunidad celular Citoquinas. trastornos inmunes humoral/cell PROBLEMAS POCO FRECUENTES Infiltrado pulmonar Herpes zoster Sepsis post-esplenectoma Mononucleosis infecciosa

PREDOMINIO DE LINFOCITOS 10% Etapa i el 70% de los pacientes Ataca ganglios axilares ESCLEROSIS NODULAR

40 a 70 % de los pacientes Adems de cell de reed s. Mujeres jvenes. Ganglios axilares inferiores Ganglios supraclaviculares Ganglios mediastnicos 70% limitada

CELULARIDAD MIXTA 30 a 50 % Frecuentes en nios y ancianos Relacionado siempre con EBV DEPLESION DE LINFOCITOS Menos frecuente Ancianos y enfermedad avanzada Sntomas sistmicos El linfoma de Burkitt (BL) tambin est relacionado con la inmunosupresin en sujetos con SIDA, y a la malaria en los casos de endemia de BL. Este ltimo fenmeno explica los hallazgos originales de Burkitt, donde los factores climticos estn ligados a la etiologa de la endemia de BL, ya que la temperatura y la altitud condicionan el crecimiento y distribucin de los mosquitos que transmiten la malaria. Todos los casos de BL estn tambin marcados por la presencia de traslocaciones cromosmicas especficas, las cuales producen la activacin del c-myc proto-oncogene. La mayora de stos comprenden una traslocacin recproca entre el cromosoma 8, en cerca del c-myc loci, y el loci de las cadenas pesadas de las inmunoglobulinas en el cromosoma 14. PRACTICA: CUADRO HEMATICO MANUAL MATERIALES Y REACTIVOS: Sangre total con EDTA Microhematocritos Tabla de lectura o reglilla Cubetas Porta cubetas Pipeta de Salhi

Pipeta de glbulos blancos Pipeta de glbulos rojos Tubos de 13 x 100 mm Gradilla, pipeta de 5 ml, pipeteadores Pipetas automticas, puntas azules y amarillas Tapones de caucho Cmaras de Neubauer Cajas de petri, papel filtro Reactivo de Drabkin Reactivo de Turk Reactivo de amonio al 1% o Citrato de sodio al 3.8% Estndar o patrn de hemoglobina Aceite de inmersin Colorante de Wright Solucin Buffer, agua destilada Microcentrfuga Espectrofotmetro Microscopio

PROCEDIMIENTO: 1. MEDICION DEL HEMATOCRITO: 2. MEDICION DE LA HEMOGLOBINA: 3. RECUENTO DE GLOBULOS BLANCOS: a. DILUCION EN TUBO: b. DILUCION EN PIPETAS DE BLANCOS: 4. EXTENDIDO Y COLORACION: 5. RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS: 6. RECUENTO DE PLAQUETAS CUESTIONARIO: 3. De cada uno de los siguientes temas ample su fundamento a. Enfermedad de no Hodgkin

b. Mielodisplasias c. Mononucleosis infecciosa 4. Haga un paralelo entre los estados de hemoconcentracin por causas fisiolgicas y por causas patolgicas. 5. Investigue un caso clnico mencionados en esta gua. de cualquiera de los temas