PROPIEDADES FISICAS Y QUIMICAS DE LOS AMINOACIDOS ALGUNAS PROPIEDADES DE LAS PROTEINAS

POR: INGRID BEDOYA URAN KILIA PIEDRAHITA MONICA PIEDRAHITA TULIA RUIZ URBIEZ

INFORMES DE LAS PRACTICAS DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA NUMERO 1 Y 2

PRESENTADO A: Q. MARIO NEGRETE GUZMAN (Docente de asignatura)

UNIVERSIDAD DE CORDOBA - FACULTAD DE EDUC. Y CIENCIAS HUMANAS LICENCIATURA EN CIENCIAS NATURALES Y EDUCACIN AMBIENTAL 4 SEMESTRE

CONTENIDO INTRODUCCION OBJETIVO GENERAL OBJETIVOS ESPECIFICOS DESARROLO PRACTICA N 1PROPIEDADES FISICAS Y QUIMICAS DE LOS AMINOACIDOS RESULTADOS ANALISIS DE RESULTADOS CUESTIONARIO PRACTICA N 2 ALGUNAS PROPIEDADES DE LAS PROTEINAS RESULTADOS ANALISIS DE RESULTADOS CUESTIONARIO CONCLUSION BIBLIOGRAFIA

INTRODUCCION La bioqumica es una rama aplicada de la qumica que estudia todo lo que constituye a las clulas vivas, las cuales estn conformadas por molculas, macromolculas, entre otras que son motivo de nuestro inters. Por consiguiente durante la realizacin de la primera gua de laboratorio de bioqumica, se conocieron algunas propiedades fsicas y qumicas de los aminocidos, el comportamiento que presentan con determinados compuestos y las caractersticas que nos permiten reconocerlos, ya sabemos que los aminocidos son esenciales para la vida y por lo tanto nos representan inters de estudio. En la segunda gua de laboratorio, conocimos algunas de las propiedades de las vitaminas, determinando as, los factores que provocan su desnaturalizacin y las caractersticas que presentan cuando esto ocurre.

OBJETIVO GENERAL Aprender de forma practica a identificar las caractersticas que presentan los aminocidos y las protenas.

OBJETIVOS ESPECIFICOS Conocer las caractersticas que presentan los aminocidos al reaccionar con pruebas que sirven para identificarlos. Aprender sobre los grupos funcionales que caracterizan a los aminocidos, los cuales ayudan a reconocerlos. Observar fsicamente el proceso de coagulacin en las protenas, como indicador de su desnaturalizacin por alteraciones de solubilidad, calor, pH, etc.

PRACTICA N 1 PROPIEDADES FISICAS Y QUIMICAS DE LOS AMINOACIDOS RESULTADOS Resultados de la prueba de Ninhidrina Aminocido Glicina Tirosina Triptfano Coloracin Morado oscuro No cambio Morado claro Resultados Positivo Negativo Positivo Observaciones Cambio a violeta antes de ser sometida a calor Durante la ebullicin se torno rosado claro Su coloracin cambio a morado durante la ebullicin

Resultados de la prueba Xantoproteica Aminocido Glicina Tirosina Triptfano Fenilanina Coloracin No cambio Amarillo oscuro Naranja claro Resultados Negativo Positivo Positivo No se realizo Observaciones Mantuvo siempre su coloracin translucida Se torno amarillo despus de aplicar calor Se torno naranja solo despus de agregar NaOH

Resultados de la prueba de Milln Aminocido Glicina Tirosina Fenilanina Coloracin No cambio Rojo ladrillo Resultados Negativo Positivo No se realizo Observaciones Despus de aplicar calor se observo un polvillo en el fondo de tubo. Su coloracin cambio a rojo despus de aplicar calor

Resultados de la prueba de Sakaguchi Aminocido Glicina Arginina Coloracin Piel o crema Rojo Resultados Negativo Positivo Observaciones Despus de agregar agua de bromo se observo el color crema Se torno de color rojo despus de agregar agua de bromo

ANALISIS DE RESULTADOS Los 20 aminocidos difieren entre si en la naturaleza qumica de los grupos R. la glicina y el triptfano reaccionan positivamente con la prueba de Ninhidrina ya que se encuentran entre los aminocidos con pH entre 4 y 8, dando color prpura. A diferencia de estos la tirosina gracias a ser un aminocido fenlico reacciona con reactivo de Milln, dando un precipitado color rojo ladrillo. Tambin encontramos aminocidos con ncleo aromtico como la tirosina y el triptfano los cuales reaccionan con la prueba xantoproteica dando coloracin amarilla. La prueba de sakaguchi permite reconocer la arginina el cual es un aminocido que contiene grupos guanidinos, tornndose de color rojo. CUESTIONARIO 1. Escriba la reaccin para cada prueba realizada Prueba de Ninhidrina: identifica la Glicina y el Triptfano

Prueba Xantoproteica: identifica tirosina y triptfano

Prueba de Sakaguichi: identifica la Arginina

Prueba de Milln: identifica la tirosina y sus derivados

Prueba de acido glioxilico para el triptfano: Identifica el triptfano

2- De acuerdo con las pruebas realizadas en esta prctica proponga una clasificacin para los aminocidos.
Glicina P. Ninhidrina P. Xantoprotei ca P. Sakaguchi Tirosina Triptfano Fenilanina Arginina Caractersticas

X X

X X X

pH. 4-8 Grupo bencnico Grupo guanidinos

P. Milln P. A. G para el Triptfano

X X

Radical hidrobenceno Triptfano y protenas que lo contienen

3- Identifique los grupos qumicos que caracterizan a los aminocidos. Aminocido Tirosina Arginina Triptfano Fenilalanina Glicina Grupo qumico caracterstico -OH Fenol (alcoholes) Guanidinos (Indol) aromticos Bencnico

4- Explique como se encuentran estructuralmente los aminocidos en el plasma sanguneo o lquido intracelular cuyo pH es de 7.4 y 7.1 respectivamente. El contenido total de albmina en el organismo est sobre los 300 gramos, de los cuales 120 g (40%) estn en el plasma (3, 6). Por cada 500 ml de sangre perdida, solamente se pierden 12 g de albmina (4% de la albmina corporal total) y es

reemplazada por sntesis normal en 3 das. En condiciones normales, la concentracin de protenas totales del plasma vara entre 6,2 y 7,9 g/dl, siendo la concentracin de albmina entre 3,6 y 5,2 g/dl. Cuando la concentracin de albmina es inferior a 2 g, habitualmente se presenta edema. La albmina ejerce entre el 75% y 85% de la presin onctica de la sangre, que es de 20 mmHg. 5- Cuales son las explicaciones prcticas de las pruebas realizadas. La prueba de ninhidrina reconoce a los aminocidos como la glicina, con pH entre 4 y 6, dando una coloracin violeta. La prueba xantoproteica reconoce a los aminocidos con ncleo aromtico, para formar nitroderivados, encontramos a los aminocidos tirosina y triptfano, los cuales dan coloracin amarilla. La prueba de Milln, reconoce a los compuestos que contienen radical hidroxibenceno, los cuales reaccionan dando color rojo, solo encontramos la tirosina y sus derivados. La prueba del acido glioxilico para triptfano, reconoce el grupo indolico del triptfano cuando reacciona con acido glioxilico en presencia de acido sulfrico, presentado un precipitado prpura. La prueba de sakaguchi reconoce en la arginina los grupos guanidinos, dando rojo.

PRACTICA N 2 ALGUNAS PROPIEDADES DE LAS PROTEINAS RESULTADOS II. Punto de coagulacin Temperatura 30 C 40 C 50 C 60 C 70 C 80 C 90 C 100 C Albmina + Buffer Observaciones Ningn cambio Ningn cambio Espuma lechoso Espuma lechoso espeso Blanco espeso - espuma Ya hay coagulacin - espuma Muy espeso casi slido No alcanzo los 100 C Luego de enfriar le agregamos 0.5ml de Buffer y observamos que en la parte superior la albmina solidificada se desintegro un poco, liberando liquido transparente. Albmina + Agua Observaciones Ningn cambio Ningn cambio Ningn cambio Ningn cambio Espeso leve Ya hay coagulacin leve Coagulacin leve

III. Precipitacin (parte A) Albmina 4 gotas de Cloruro de Mercurio 4 gotas de Acetato de plomo + 3 gotas de acido actico 4 gotas de sulfato Cuprico Se torno lechoso Se torno amarillo traslucido Trasparente Casena Se torno lechoso claro Logramos ver un color crema claro Trasparente Gelatina Observamos un color blanco azuloso El color observado fue una azul marino Se torno azul translucido

III. Precipitacin (parte B) Casena 3 gotas de acido pcrico 3 gotas de acido tanico 3 gotas de ferrocianuro de potasio + de acido actico Amarillo brillante Naranjado claro Verde claro traslucido Albmina Amarillo brillante Se torno de un color crema lechoso Verde claro con pequeas partculas negras

IV. Reacciones coloridas Albmina Casena Gelatina Adicin 1 ml de Buiret 1 ml de Buiret 1 ml de Buiret Coloracin Morado Azul claro Morado Resultado Positivo Positivo Positivo

ANALISIS DE RESULTADOS Las protenas debido a alteraciones de su estado nativo, como el calor sufren cambios en su solubilidad, formndose un coagulo. Al realizar la prueba del punto de coagulacin de las protenas, observamos que al tomar la albmina y agregarle Buffer, el cual afecta a la concertacin de los iones de hidrogeno, se inicio el proceso de coagulacin desde los 50C. A diferencia del buffer cuando agregamos agua las fuerzas hidrofilicas, electrostticas y puentes de hidrogeno participan positivamente, aportando un mayor grado de solubilidad y por ende la coagulacin inicio a los 80 C notndose as una inferior coagulacin. Observamos tambin la precipitacin de las protenas con sales metlicas y con reactivos acdicos, las cuales hacen reaccionar a las protenas de acuerdo con su estructura formando diferentes precipitados. Con el reactivo de Buiret detectamos la presencia de protenas, las cuales en la prctica se tornaron color violeta. Demostrando as la presencia de protenas en la clara de huevo, en la leche y en la gelatina.

CUESTIONARIO 1. Consultar en forma clara y breve en que consiste la desnaturalizacin de las protenas. La desnaturalizacin es un efecto visible de descenso de solubilidad, producido por temperaturas elevadas y pH extremos. La desnaturalizacin consiste en el desplegamiento de la estructura nativa plegada caracterstica de las molculas de las protenas globulares. La consecuencia ms significativa de la desnaturalizacin es que las protenas pierden su actividad biolgica caracterstica. 2. Explique que sucede cuando el cabello se somete a los tintes, deriz y alisado, este proceso es reversible o irreversible. Cuando el cabello se somete a estiramiento y este se realiza de forma moderada no superando el 30% y dejndose en reposo el cabello logra recuperar su longitud original. Pero si supera ms del 30%, se provoca una deformacin permanente de la fibra. El cabello puede verse alterado por algunos agentes qumicos, cuando la fibra capilar se somete a soluciones cidas extremas o alcalinas extremas o con demasiada frecuencia, se debilita ocasionando deformaciones que dependiendo su gravedad pueden ser reversibles o irreversibles. Algunos tintes para cabello contienen un bajo nivel de perxido y nada de amonaco, es por eso que no ocasionar ningn dao al pelo, y de hecho en caso de que algn dao se presente no ser grave, El tinte para cabello de tipo semi permanente no contiene perxido ni amonaco, por ende tampoco daar el cabello; El tinte de tipo permanente, suele incluir perxido y amonaco, y su mal uso ocasiona lesiones irreversibles en el cabello. El alisado es un mtodo novedoso pero peligroso que utiliza una gran cantidad de formaldehdo, debe ser aplicado por personas con conocimientos previos y tomando las precauciones necesarias, en algunos casos provoca resequedad y/o quemaduras al cabello las cuales suelen ser tipo irreversible. Tambin suelen presentarse quemaduras en la piel cuando esta no se protege.

3. Explique por que las pezuas, los cuernos, las uas, el cabello y las plumas no se disuelven con el agua. Las pezuas, cuernos, uas, cabello y plumas no se disuelven en agua debido a que contienen queratinas las cuales son protenas fibrosas cuya principal

caracterstica es la insolubilidad en agua ya que son materiales fsicamente resistentes. 4. Consultar de qu depende la solubilidad de las protenas. La solubilidad de una protena est influenciada por los siguientes factores: a) Su composicin en aminocidos (una protena rica en aminocidos polares es en general ms soluble que una rica en aminocidos hidrofbicos) b) su estructura tridimensional (las protenas fibrosas son en general menos solubles que las globulares) c) el entorno de la propia protena. En este ltimo sentido, podemos decir que los principales factores ambientales que influyen en la solubilidad de una protena son los siguientes: la temperatura, la constante dielctrica del medio, el pH del mismo y la fuerza inica. 5. Explique cuando es positiva la reaccin de biuret, escriba la reaccin. Las protenas en presencia del Ion Cuprico y en medio alcalino desarrollan un color violeta o azulado, debido a los enlaces peptidicos de la molcula proteica

C H N

C N H C u2+ H C C O N H C H H C R

R O

C H C

H N R

6. Consulte otras tcnicas utilizadas para la cuantificacin de protenas. Mtodo de Bradford: Este mtodo constituye una forma rpida y confiable para la Determinacin de protenas. Se basa en la cuantificacin de la unin del Colorante Azul Brillante de Coomassie a una protena desconocida y la Comparacin de esta unin con la de diferentes cantidades de una protena Standard.

Mtodo de BCA: El cido bicinconnico, sal sdica, es un compuesto capaz de formar un complejo prpura intenso con inones Cu1+ en medio alcalino. Este reactivo forma la base de un mtodo analtico capaz de monitorizar el in cuproso producido en una reaccin entre las protenas con Cu2+ en medio alcalino. La estabilidad del reactivo y el cromforo proporciona un mtodo para la cuantificacin de protenas que es sencillo, rpido, muy sensible. Mtodo de Lowry: Dependen de la concentracin de tirosina y triptfano de la muestra. Consiste en dos reacciones: Reaccin de Biuret mas Reaccin de Folin: caracterstica de los grupos OH reductores de los Aminocidos Este reactivo genera un color azul, en presencia de protenas.

CONCLUSION Es importante reconocer que la realizacin de estas practicas de laboratorio lograron reafirmar nuestros conocimientos tericos, fue importante tener claridad sobre lo que bamos a realizar, conociendo con anterioridad las guas de laboratorio, liderando siempre el orden, el respeto y la seguridad misma. Aprendimos a conocer a los aminocidos debido a examen fsico, de igual forma ha aplicar las diversas pruebas que nos ayudan a identificar tipos de aminocidos los cuales tienen grupos funcionales que los hacen diferentes de los otros. Comprobamos el proceso de desnaturalizacin de las protenas, observando el coagulo formado debido a los efectos que alteraron su solubilidad. Notando as la diferencia entre dos tipos de solventes como el agua y el buffer. Tambin aprendimos a detectar la presencia de protenas gracias al reactivo de Biuret.

BIBLIOGRAFIA Jos M. Macarulla, Bioqumica Humana, segunda edicin. Editorial Reverte S.A. Barcelona- Bogota Buenos Aires Caracas Mxico, cap. 6 Pginas: 121, 114 Lehninger L Albert, Bioqumica, Segunda edicin, Ediciones Omega, Barcelona 1190 cap. 3, pagina 64 Pea Daz Antonio, Bioqumica segunda edicin, editorial Limusa, Mxico 1990