Fev.

CuLcnc ce Ciencic /v|cc|c, 2002, 2: 8 - 5

La bronquitis infecciosa aviar (BI) es una
enfermedad respiratoria altamente contagiosa
de los pollos (Cavanagh y Naqui, 1997) y se
considera una de las enfermedades virales
ms importantes de los pollos de difcil control,
debido a la existencia de diferentes serotipos
y variantes antignicas del virus causal (Wang
et al, 1997; Gelb y Jackwood, 2000).
La bronquitis infecciosa se caracteriza por
estertores traqueales, coriza y estornudos en
las aves ms jvenes mientras que en las
ponedoras la sintomatologa respiratoria es
menor pero provoca una disminucin marcada
en la produccin y calidad del huevo, es
producida por un virus del gnero Coronavirus
de la familia Coronaviridae (Cavanagh y Naqui,
1997). La importancia econmica de esta
enfermedad se manifiesta porque los pollos
infectados tienen una pobre ganancia de peso
y una rpida declinacin en la produccin y
Bronquitis Infecciosa Aviar: obtencin de
antgeno y deteccin de anticuerpos por
inhibicin de la hemoaglutinacin
10LIA NODA, $ANDkA C0ELLO Y F. ALFON$O
Grupc ce Virc|cg|c, CenIrc Nccicnc| ce Scniccc /grcpecucric
/pcc 10, Scn Jc: ce |c: Lcjc:, CF 32 Z00
Lc HcLcnc, CuLc.
E-mci|: jnccccen:c.ecu.cu
F. 1. CA$AA$
Fccu|Icc ce VeIerincric,
Univer:iccc /grcric ce Lc HcLcnc, CuLc
E-mci|: jnccccen:c.ecu.cu
Fo|obros c|oves: LrcnuiIi: infeccic:c cvicr, cnI|genc, cnIicuerpc:, hemccg|uIinccicn, cepc, gc||i-
nc pcneccrc, emLricn.
kE$0MEN. Lc LrcnuiIi: infeccic:c cvicr {8l/) e: unc enfermeccc re:pircIcric c|IcmenIe
ccnIcgic:c ue cfecIc |c: pc||c:, ccemc: ce prccucir ci:minucicn ce |c prccuccicn y ce |c
cc|iccc ce| huevc. E| ccnIrc| :e rec|izc pcr vccunccicn ce |c: cve: ce:ce e| c|c ce eccc y en
cc:i: repeIicc: ccn vccunc vivc y unc cc:i: ce refuerzc ccn vccunc inccIivccc c |c:
reprccucIcrc: c| inicic ce |c pc:Iurc. E| mcniIcrec ce |c: pcL|ccicne: vccunccc: e: impcrIcnIe
ccn e| fin ce evc|ucr |c re:pue:Ic c |c: vccunc: y reve|cr pc:iL|e: ccnIccIc: ccn viru: :c|vcje:
y vcric: mIccc: :erc|cgicc:. EnIre e:Ic: mIccc: :e hc cp|icccc |c prueLc ce inhiLicicn ce |c
hemccg|uIinccicn {lH/). En e:Ie IrcLcjc :e ce:crrc||c |c cLIencicn ce cnI|genc hemccg|uIincnIe
c pcrIir ce cc: cepc: ce| viru: 8l/ y :u evc|uccicn pcrc |c ceIeccicn ce cnIicuerpc: pcr lH/. Lc:
|cIe: ce cnI|genc: mc:Ircrcn I|Iu|c: hemccg|uIincnIe: enIre 1:25-1:512 y en |c e:pecificiccc
cnc||Iicc :c|c recccicncrcn ccn e| cnIi:uerc hcmc|cgc y nc frenIe c |c: cnIi:uerc: e:pec|ficc: ce
cIrc: viru: cvicre: hemccg|uIincnIe:. Lc evc|uccicn ccn :uerc: prccecenIe: ce pcL|ccicne:
vccunccc: y nc vccunccc:, ccmpcrccc ccn e| cnI|genc ce referencic ccmc ccnIrc|, reve|c
unc :en:iLi|iccc y e:pecificiccc ce ,2 y 5,Z% re:pecIivcmenIe ccn 5. ce ccincicencic
pcrc un cppc ce 0.88 {muy Luenc). Se cLIuviercn I|Iu|c: ce cnIicuerpc: muy :imi|cre: c|
cnI|genc ce referencic ccn ciferencic: ce :c|c |cg en e| I|Iu|c, |c ue cvc|c |c: ccncicicne:
ccecuccc: ce| cnI|genc cLIenicc pcrc :u uIi|izccicn en |c prueLc ce lH/. Lc: re:u|Iccc: ce |c
evc|uccicn ce |c: :uerc: prccecenIe: ce |c: ciferenIe: ccIegcr|c: ce pc||c: en prccuccicn
reve|crcn pccc: reccIcre: y I|Iu|c: ce cnIicuerpc: muy Lcjc: en |c: pcneccrc:, |c ue :ugiere
ue e:Ic: cve: puecen e:Icr ce:prcIegicc: ccnIrc e:Ic enfermeccc.
calidad de los huevos (Song et al., 1998).
El control de la enfermedad se lleva a cabo
por la vacunacin con vacunas vivas e
inactivadas (Cavanagh y Naqui, 1997). El
monitoreo de la respuesta de anticuerpos es
de gran importancia para evaluar los
programas de vacunacin, y se emplean
diferentes pruebas serolgicas. Las pruebas
serolgicas como la sueroneutralizacin, la
agar gel precipitacin, la inhibicin de la
hemoagl uti naci n (IHA) y l a prueba
inmunoenzimtica (ELISA) son utilizadas con
este fin (de Witt et al.,1997). La suero-
neutralizacin y la IHA son utilizadas de forma
rutinaria para revelar anticuerpos tempra-
namente en la infeccin o vacunacin
(Cavanagh y Naqi,1997) y en la diferenciacin
antignica de las cepas de IB donde se han
podido revelar variantes antignicas por
reaccin cruzada (Capua et al., 1994).
Mientras que el ensayo inmunoenzimtico
(ELISA) se aplica para determinar los perfiles
serol gi cos de pobl aci ones de aves
vacunadas (De Witt et al., 1992; Cuello et al.,
2001).
Virus. La cepa M41 de este virus (SPAFAS),
multiplicada en embrin de pollo y con ttulo
infectivo de 10
6.5
DIEP
50
/ ml (dosis infectiva
en embrin de pollo).
Titulacin viral. Se realiz en EP y diluciones
de 10
-1
- 10
-8
y por va de la cavidad alantoidea
(CA) y colocados en incubacin a 37
0
C
durante 7 das para observar las lesiones
caractersticas que produce este virus (Gelb,
1998) y el ttulo infectivo en DIEP
50
fue
calculado por el mtodo de Spearman-Krberg
(Finney, 1964).
Obtencin del antgeno. Para la obtencin
del antgeno se inocularon EP con la cepa
M41 en la dilucin de 10
4,62
DIEP
50

en volumen
de 100 por va de la CA y se incubaron a 37
0
C por 30 y 48 horas (King et al, 1988) y el
lquido alantoideo fue colectado a ese tiempo.
Se dejaron embriones inoculados hasta 7 das
para verificar la multiplicacin viral con la
observacin de los cambios morfopatolgicos
producidos por este virus (Gelb y Jackwood,
1998).
El lquido alantoideo fue clarificado por cen-
trifugacin a 3 000 g durante 30 minutos, la
concentracin viral se realiz por ultra-
centrifugacin a 20 000 g 2 horas a 4
0
C, el
precipitado fue tratado con el filtrado crudo
de C. perfringens por mtodo referido en el
Manual OIE (2000). Se prepararon cinco lotes
los que se evaluaron por ttulo HA y se
conservaron a 4
0
C.
Ttulo hemoaglutinante. Se realiz en
microplacas de 96 pocillos de fondo en U y
en volumen de 25 L de los reactantes, las
diluciones de los antgenos en log
2
(1:2 hasta
1:2048), en tampn fosfato salino pH7,4, tres
rplicas log
2.
Se agrega la suspensin de
glbulos al 0,5% y 0,7%; se esperan 30 45
minutos hasta que se observe la precipitacin
de los glbulos rojos en los pocillos controles
(Gelb y Jackwood, 1998).
Sueros. Como suero de referencia se utiliz
un antisuero especfico contra la cepa M41
del virus BIA como control negativo gentilmente
donados por la Dra. Ilaria Capua (Instituto
Zooprofilactico y Experimental de Padova,
Italia) y suero de pollos libre de patgenos
Ju|ic Nccc, Scncrc Cue||c, F. /|fcn:c y cIrc: 2002
En Cuba, la bronquitis infecciosa se ha
informado asociada a la forma respiratoria
crnica (Guilarte et al, 1985) y se ha
empleado la hemoaglutinacin pasiva (HAP)
para l a detecci n de anti cuerpos en
poblaciones de pollos afectados, pero la
misma es de baja sensibilidad y slo revela
la respuesta a infecciones recientes, lo cual
limita su uso en la evaluacin de la respuesta
a las vacunas y la inmunidad materna. Por el
contrario la IHA se utiliza extensivamente
tanto para el diagnstico serolgico (Gutierrez-
Ruiz, et al., 2000), como para diferenciacin
de serotipos y cepas variantes del virus de la
BIA (King, 1988; Parsons et al., 1992) y es
de utilidad en la deteccin de coronavirus de
pavos (Capua et al., 1994). Por lo que el
presente trabajo tiene como objetivo la
obtencin y evaluacin de un antgeno para
su utilizacin en la deteccin de anticuerpos
a BIA por la tcnica de IHA, que permita
incorporarla al desarrollo del diagnstico de
esta enfermedad.
Embriones de pollo. Se utilizan embriones
de pollo (EP) de la raza White Leghorn libre
de patgenos especficos (LPE), de 10 das
de desarrollo procedentes de la unidad de
aislamiento del CENPALAB, para multiplicar
y titular el virus de la BIA.
0
MATERIALES Y MTODOS
especficos (LPE) Antisueros contra otros
virus aviares hemoaglutinantes como el virus
de la enfermedad de Newcastle (EN) y el virus
del sndrome de la cada de la puesta (SCP)
para la prueba de especificidad, los que
proceden del mismo laboratorio. Los sueros
para la evaluacin del antgeno proceden de
pollos White Leghorn con diferentes edades
y ti empos postvacunaci n eval uados
previamente por IHA y por ELISA comercial
como panel se sueros.
Antgeno de referencia. Se emplea un
antgeno de la cepa M41 gentilmente donados
por la Dra. Ilaria Capua del Instituto Zooprofilac-
tico y Experimental de Padova (Centro de refe-
rencia de Diagnstico de Enfermedades
Emergentes de las Aves de Italia).
Inhibicin de la hemoaglutinacin (IHA).
Para la evaluacin del ttulo de anticuerpos
en los sueros se emple la tcnica de IHA
descrita para el virus BIA (Alexander y Chettle,
1977), para lo cual se realizaron diluciones
seriadas de log de base 2 de los sueros
(previamente inactivados a 56 C durante 30
minutos) desde 1:2 hasta 1:2048, en tampn
fosfato salino y volumen de 25 L y empleo
de 4UHA (Gelb y Jackwood, 1998).
Especificidad y sensibilidad. Se determin
la especificidad de tres lotes de antgeno frente
a los antisueros de virus hemoaglutinantes
comparado con el antgeno de referencia citado
anteriormente por la prueba de IHA. La
sensibilidad y especificidad diagnstica (SD
y ED), la eficacia (C) y el valor kappa (), con
un panel de 172 muestras de sueros
previamente evaluados por el antgeno de
referencia (arriba sealado) y un ELISA
comercial (KPL) (Cuello, 2001).
Anlisis estadstico. Las medias geomtricas
de la respuesta de anticuerpos por ANOVA.
Las diferencias entre ambas comparaciones
se determinaron con un nivel de significacin
de p<0.01 mediante la Dcima de Duncan
(1955).
Vc|. 2 CLIencicn ce un cnI|genc pcrc |c ceIeccicn ce cnIicuerpc: 1
tulos infectivos en el lquido al antoideo a las
48 horas PI cuando se inocularon con 10
4,62
DIEP
50
. Este tiempo PI es considerado el p-
timo debido a que se obtienen los mayores
ttulos virales, aspecto que fue evaluado por
King (1988) con varias cepas de este virus
entre ellas la M41, con excepcin de la cepa
H52 que mostr un ttulo superior a las 30 ho-
ras PI. Otros estudios en este sentido rela-
cionan tambin la produccin de mayores
ttulos infectivos con la concentracin del in-
culo y la temperatura de incubacin de los
embriones (King y Cavanagh, 1991) y no reco-
miendan inocular dosis mayores pues oca-
sionan mortalidad temprana del embrin y
menor ttulo infectivo.
Los embriones dejados en incubacin durante
7 das, como control de la replicacin de este
virus, presentaron mortalidad entre 2-6 das
PI con di smi nuci n del creci mi ento,
enrollamiento con consistencia gomosa del
embrin, malformaciones de las patas y
enrojecimiento, alteraciones caractersticas
de este virus (King y Cavanagh, 1991; Gelb y
Jackwood, 1998) y lo que permite utilizarlo
como control de multiplicacin viral en el LA
(biomasa viral) para la obtencin de antgeno
HA de BIA. El ttulo viral del lquido alantoideo
para la obtencin de los antgenos fue de 10
6,6
DICT
50
/ ml determinado tanto por mortalidad
embrionaria como por la presencia de las
alteraciones antes descritas.
Los resultados del ttulo hemoaglutinante (HA)
de los antgenos obtenidos segn el mtodo
referido en el Manual OIE (2000) donde se
emplea como fuente de la fosfolipasa C un
filtrado crudo de un cultivo de Clostridium
perfringens en lugar de la enzima comercial;
se muestran en la tabla 1. Se puede observar
que los lotes 1, 2 y 4 presentaron ttulos de
1:256, mientras que el lote 3 y 5 fue de 1:512
similar al antgeno de referencia. Para los
antgenos a utilizar en la prueba de inhibicin
de la hemoaglutinacin, los ttulos superiores
a 1:128 se consideran adecuados y en todos
los lotes estos fueron superiores, resultados
similares fueron obtenidos por King (1988) con
esta mi sma cepa, pero apl i cando el
tratamiento con la fosfolipasa C comercial.
Por lo que el empleo del filtrado crudo de C.
perfringens muestra su utilidad para la
obtencin de antgeno hemoaglutinante del
RESULTADOS Y DISCUSIN
La prueba de IHA para el diagnstico serol-
gico de la BI se ha aplicado por diferentes
procedimientos (King, 1988). En este trabajo
se utiliz la cepa M4 1 obtenida en embrin
de pollo (EP) y se obtuvieron los mayores t-
2 Ju|ic Nccc, Scncrc Cue||c, F. /|fcn:c y cIrc: 2002
virus BIA ya que adems de fosfolipasa C
contiene la enzima neuroaminidasa, la cual
se considera ms efectiva en remover los
residuos del cido silico de la glucoprotena
presente en las espculas de la envoltura del
A8LA 1. LcIe: ce cnI|genc: hemccg|uIincnIe:
ce LrcnuiIi: infeccic:c cvicr y I|Iu|c: cLIenicc:
ccmpcrccc ccn e| cnI|genc ce referencic.
E I C L / H C L U I l I
1 5 2 : 1
2 5 2 : 1
3 2 1 5 : 1
4 5 2 : 1
5 2 1 5 : 1
c v i I i : c F | c r I n c c g /
*
2 1 5 : 1
*
/nI|genc H/ pc:iIivc ce 8l/ cepc |41, ln:I.
Zccprcfi|ccIicc y ExperimenIc| ce Venecic
{lIc|ic).
LcIe: 1, 2, 3, 4 y 5 prepcrccc ccn |c cepc |41
{SF/F/S)
S C F E U S l I N /
S C N E G l I N /
C F E U S
C V l I / G E N
/ l 8 N E F C S
1 E I C L - 8 2 1 : 1 8 : 1 -
2 E I C L - 8 2 1 : 1 8 : 1 -
3 E I C L - 8 2 1 : 1 8 : 1 -
4 E I C L - 8 2 1 : 1 8 : 1 -
5 E I C L - 8 2 1 : 1 8 : 1 -
N E - - 2 1 5 : 1 -
F C S - - - 4 : 1
* / l 8 - 8 2 1 : 1 8 : 1 -
A8LA 2. Evc|uccicn ce |c e:pecificiccc ce |c: cnI|genc: H/ ce 8l/.
*/nI|genc H/ pc:iIivc ce 8l/ cepc |4, ln:I. Zccprcfi|ccIicc y ExperimenIc|
ce Venecic {lIc|ic).
virus y que posee la actividad hemoaglutinante
de este virus.(Schultze et al., 1992).
En la prueba de especificidad analtica se
revel reaccin de todos los lotes de antgeno
con el antisuero de BI con ttulo IHA de 1:128,
con igual reaccin que el antgeno de
referencia utilizado como control positivo y no
se produjo reaccin con el suero negativo
(Tabla 2). Slo se observ reaccin frente al
antisuero de la EN pero con ttulo de 1:8, ya
que en sueros de aves pueden ocurrir
reacciones de IHA las que no son especficas
an con ttulos de 1:16 y se consideran
negativas (Munner et al,1987).
La evaluacin con el panel de sueros nega-
tivos y positivos comparado con el antgeno
de referencia revel una sensibilidad de 96.2%
y especificidad de 95.7%, la eficacia de 95.9
y un =0.88, resultados muy favorables
(Jacobson, 1998). Tambin se puede apreciar
que en cuanto a los reactores positivos y no
reactores los resultados fueron muy similares
(Tabla 3).
En cuanto a los ttulos de anticuerpos, los
pollitos de un da de edad presentaron
reacciones positivas 1:16 y slo 3 resul-
taron negativos y se corresponden con
anticuerpos pasivos transferidos a la progenie
ya que provienen de reproductoras vacunadas,
las vacunas inactivadas oleosas aplicadas
antes del comienzo de postura provocan en
general la induccin de altos y prolongados
niveles de anticuerpos (Glisson y Kleven,
1991). La presencia de estos niveles altos de
anticuerpos es de gran importancia ya que
son capaces de proteger los pollitos contra
las infecciones tempranas con virus de
virulentos (Naqi et al., 2003).y reducir las
aplicacin al da de edad de las vacunas vivas
el virus BIA (Cook,J.K.L et al ,1991). En las
ponedoras por el contrario se detectaron slo
cinco reactores positivos con ttulos 1:16,
Vc|. 2 CLIencicn ce un cnI|genc pcrc |c ceIeccicn ce cnIicuerpc: 3
A8LA 3. Ccmpcrccicn ce| cnI|genc prccucicc
re:pecIc c| cnI|genc ce referencic pcrc reve|cr
cnIicuerpc: inhiLiccre: ce |c hemccg|uIinccicn.
C D l C U D C F F G /
N F
F
c c i c u c c r F g /
N
2 5 5
2 3 1 1
IcL|c ce ccnIingencic 2x2
S=.2%, E=5.Z%, C=5., k=0.88
con ttulo de 1:8, los que se consideran nega-
tivos (Alexander y Chettle, 1977; Munner et
al, 1987), aspecto que tambin fue deter-
minado por Toro et al. (2002) al utilizar la IHA
con antgeno de la cepa M41 y dos cepas
variantes antignicas de este virus en una
encuesta serolgica, donde consideraron 4 a
5 log
2
de los ttulos IHA como positivos a fin
de garantizar la especificidad de esta prueba;
el resto de los sueros no reaccionaron. La
A8LA 4. FeccIcre: pc:iIivc: pcr lH/ frenIe c| cnI|genc prccucicc y e| ce referencic
S C L L C F
/ l F C G E I / C
C D l C U D C F F C N E G l I N / / l C N E F E F E F C N E G l I N /
S C V l I l S C F S C V l I / G E N L / I C I S C V l I l S C F S C V l I / G E N L / I C I
E F L
c
0 0 0 0 0 0
: c r c c e n c F
L
5 2 5 Z 5 0 Z 5 Z 5
c c c e c | c 1
c
2 5 3 5 5 4 5 1 5 5
| c I c I Z 5 5 1 1 2 Z 1 4 5 8 1 1 2 Z 1
c) Fc||c: |iLre: ce pcIcgenc: e:pec|ficc:.
L) Fcneccrc: ccn Ire: cc:i: ce vccunc vivc, me:e: pc:Ivccunccicn ce |c |Iimc
cc:i:.
c) Frcgenie ce reprccucIcrc: vccunccc: ccn |c mu|Iivc|enIe cvicr ue inc|uye e|
V8l/ , Z me:e: pc:Ivccunccicn
presencia de slo cinco aves con reaccin
positiva en el grupo de las ponedoras an
cuando recibieron tres vacunaciones de la
vacuna viva (Tabla 4), sugiere una baja pro-
teccin de estas aves y pueden ser sus-
ceptibles a la infeccin, pues se considera
que los niveles de anticuerpos en esta cate-
gora de aves con 3 vacunaciones aplicadas
deben ser superiores a 1:80 (Ibarra et al,
1993.) Estos autores recomiendan ttulos de
13:20 de IHA antes de comenzar la postura
para evitar prdidas significativas en la pro-
duccin ya que se ha informado una corre-
lacin entre los ttulos de IHA y la resistencia
contra VBI homlogo (Cavanagh, D. y Naqi,
S.A. (1997), es decir cepas semejantes a las
vacunales.
La utilidad de la tcnica de IHA para la
evaluacin de vacunas se ha referido estar
sustentada sobre la base de que la actividad
hemoaglutinante est en la protena S1
inductora tambin de anticuerpos neutralizantes
(Koch et al, 1992; Ignjatovic, J. y Galli, L.,1995).
Tambin se aplica en el diagnstico de la
enfermedad que permite relacionar los
resultados sero-lgicos con problemas
respiratorios en aves no vacunadas (Gutierrez-
Ruiz, et al., 2000). Los resultados que se
obtuvieron con el an-tgeno de IHA producido
demuestran sus condiciones para revelar
anti cuerpos i nhi -bi dores de l a
hemoaglutinacin segn lo
descrito para la
realizacin de esta prueba en el manual OIE
(2000) para el diagnstico serolgico. Adems
se evidenci, en la ca-tegora de ponedoras
donde se produjo reac-cin positiva en pocas
aves y con niveles muy bajos de los
anticuerpos lo cual sugiere una pobre
protecci n contra esta enfermedad y
representa un alerta de la necesidad de re-
vacunaciones de estas aves en produccin.
4 Ju|ic Nccc, Scncrc Cue||c, F. /|fcn:c y cIrc: 2002
C/FU/ l, FE GCUGH, |. |/NClNl , C. C/S/CCl/ /ND C. WElSS. 14 / ncve| infecIicu:
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REFERENCIAS
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ccu:ing recucIicn in egg prccucIicn cnc uc|iIy. lI: ccnIrc| i: ccne vic vcccincIicn
cf chicken cI Ihe cge cf cne ccy, in repecIec cc:e:, wiIh c |ive vcccine cnc c
reinfcrcemenI cc:e wiIh inccIivcIec vcccine Ic reprccucer: cI Ihe Leginning cf
Ihe |cying. |cniIcring vcccincIec pcpu|cIicn: i: very impcrIcnI in crcer Ic
evc|ucIe Ihe re:pcn:e Ic vcccine: cnc revec| pc::iL|e ccnIccI: wiIh wi|c viru:e:
cnc :everc| :erc|cgic meIhcc:. /mcng Ihi: meIhcc: hcve Leen cpp|iec Ihe
hemccg|uIincIicn inhiLiIicn c::cy {Hl/). Ihi: wcrk IrecI: cn cLIcining hemccg|uIining
cnIigen frcm Iwc :Ircin: cf Ihe 8l/ viru: cnc iI evc|ucIicn fcr ceIecIing cnIiLccie:
Ic Hl/. /nIigen |cI: :hcwec hemccg|uIining IiI|e: LeIween 1:25-1:512 cnc wiIh
re:pecI Ic Ihe cnc|yIicc| :pecificiIy, Ihey reccIec cn|y Ic Ihe hcmc|cgue, hcving
nc reccIicn Ic :pecific cnIi:erum: frcm cIher hemccg|uIining pcu|Iry viru:e:.
Evc|ucIicn wiIh :erum: frcm vcccincIec cnc ncn-vcccincIec pcpu|cIicn:,
ccmpcrec wiIh Ihe reference cnIigen u:ec c: c ccnIrc|, revec|ec c :en:iLi|iIy cnc
:pecificiIy cf ,2 y 5,Z% re:pecIive|y, wiIh c ccincicence cf 5., fcr c kcppc cf
0.88 {very gccc). CLIcinec cnIiLccy IiI|e: were very :imi|cr Ic Ihe reference cnIigen,
pre:enIing cn|y cifference: cf |cg in Ihe IiI|e, which :hcw: IhcI Ihe cLIcinec cnIigen
i: cpprcpricIe Ic Le u:ec in Ihe Hl/. Ihe re:u|I: cf Ihe evc|ucIicn cf :erum: frcm
cifferenI ccIegcrie: cf chicken: in prccucIicn revec|ec cn|y c few reccIcr: cnc
very |cw IiI|e: cf cnIiLccie: in |cying hen, which :ugge:I: IhcI Ihi: pcu|Iry ccu|c Le
ncn prcIecIec cgcin:I Ihi: ci:ec:e.
Poultry infectious bronchitis: obtaining an
antigen and detecting antibodies
by hemoaglutination inhibition
Key words: |cying hen, pcu|Iry infecIicu: LrcnchiIi:, egg uc|iIy, vcccincIicn,
hemccg|uIincIicn, cnIigen.
Vc|. 2 CLIencicn ce un cnI|genc pcrc |c ceIeccicn ce cnIicuerpc: 5
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