PRIMERA PRACTICA DE BACTERIOLOGIA MEDIO TSI (TRES AZUCARES): Medio diferencial complejo (de color rojo) compues o por

! a"#cares (lac osa$ sucrosa % de& rosa % un li'ador (ue es en es e caso el )ierro)* La siem+ra se reali"a an o en la superficie del a'ar (aero+iosis) como en la profundidad de ,s e (anaero+iosis)* Medio - (alcalino) de color rojo* Medio A (.cido) de color amarillo* K/A /i la +ac eria me a+oli"a s0lo la 'lucosa1 en la superficie la u ili"ar. por 23a respira oria$ % donde la ensi0n de o&3'eno disminu%a lo suficien e$ emplear. una pe(ue4a proporci0n por 23a fermen a i2a* Es o 'enerar. una pe(ue4a can idad de .cidos (ue ser.n neu rali"ados por las aminas deri2adas de la decar+o&ilaci0n o&ida i2a de las pro e3nas* Como resul ado$ el medio man endr. su color rojo en la superficie$ al no )a+er cam+iado de p5* Por el con rario$ las +ac erias crecidas en la profundidad emplear.n desde el primer momen o la 'lucosa por 23a fermen a i2a$ 'enerando .cidos (ue no ser.n neu rali"ados$ pro2oc.ndose un descenso del p5 % el color del medio en el fondo del u+o cam+iar. a amarillo* A/A /i la +ac eria$ adem.s fermen a lac osa1 los .cidos producidos modificar.n am+i,n el p5 de la superficie del medio* Las aminas no son capaces de neu rali"ar la can idad de .cidos producidos en es a fermen aci0n$ %a (ue la lac osa se encuen ra en el medio a ma%or concen raci0n (ue la 'lucosa* El color del medio en la superficie cam+iar. a amarillo* K/K /i la +ac eria es aero+ia es ric a (no fermen adora)$ el medio permanece de color rojo* Los a"#cares son respirados$ de'rad.ndose comple amen e )as a CO6$ (ue se elimina % no modifica el p5* K/A(H2S) aparici0n de un precipi ado de color ne'ro en el fondo del u+o* Al'unas +ac erias respiradoras ano&o+i0n icas son capaces de emplear el iosulfa o s0dio como acep or final de elec rones en la cadena ranspor adora* Es e compues o se reduce a .cido sul)3drico (ue reacciona con el )ierro 7e68 presen e en el medio formando un precipi ado ne'ro de sulfuro de )ierro*

PRUEBA DE HEMOLISIS EN AGAR SANGRE De ec a la presencia de )emolisina$ en"ima (ue permi e la clasificaci0n de los / rep ococcus en alfa ()em0lisis parcial$ incomple a (ue orna color 2erdoso)$ +e a ()em0lisis o al) % 'amma )emol3 icos (no e&is e )em0lisis)* Muc)as o ras +ac erias$ apar e de los / rep ococcus$ pueden ener es a en"ima* /e usa el cul i2o para demos rar el 'rado de )em0lisis ()em0lisis +e a) en la cual se puede o+ser2ar claramen e por de r.s de la siem+ra*

PRUEBA DE COAGULASA PARA Staphyl ! !!"#: Permi e diferenciar / ap)%lococcus aureus (coa'ulasa posi i2o) del res o de especies de / ap)%lococcus (coa'ulasas ne'a i2os)* La ,cnica en u+o de ec a coa'ulasa li+re % li'ada* Mecanismo de acci0n de la coa'ulasa li+re1 procoa'ulasa (en"ima e& racelular +ac eriana) reacciona con un fac or ac i2ador presen e en el plasma san'u3neo similar a la pro rom+ina$ dando lu'ar a un complejo an.lo'o a la rom+ina (coa'ulasa propiamen e dic)a) (ue reacciona con fi+rin0'eno formando un co.'ulo de fi+rina en ausencia de Ca68* La coa'ulasa li'ada o fac or de a're'aci0n ac #a direc amen e so+re el fi+rin0'eno % lo con2ier e en fi+rina* 9o re(uiere la presencia de ac i2adores plasm. icos*

PRUEBA DE CATALASA (PARA DI$ERENCIAR Staphyl ! !!"# %& St'&pt ! !!"#): Bac erias (ue 2i2en en am+ien es aero+ios re(uieren de ca alasa para con2er ir el per0&ido de )idr0'eno en a'ua % o&3'eno molecular* Es posi i2a la prue+a cuando se ponen en con ac o una +ac eria con ac i2idad ca alasa con 56O6 !: % se producen +ur+ujas de o&3'eno* /e emplea para diferenciar el ',nero / ap)%lococcus (ca alasa posi i2o) del ',nero / rep ococcus (ca alasa ne'a i2o)*

MANITOL SALADO AGAR* Medio de cul i2o selec i2o % diferencial$ u ili"ado para el aislamien o % diferenciaci0n de es afilococos* Es recomendado para el aislamien o de es afilococos pa o',nicos a par ir de mues ras cl3nicas$ alimen os$ produc os cosm, icos % o ros ma eriales de impor ancia sani aria* Tam+i,n$ es e medio puede u ili"arse para el cul i2o de especies )al0filas de ;i+rio$ si no se dispone de medios apropiados (TCB/ Medio$ Medio Marino$ e c*)$ aun(ue al'unas especies pueden no desarrollar* 7undamen o /e ra a de un medio al amen e selec i2o de+ido a su al a concen raci0n salina* Los es afilococos coa'ulasa posi i2a )idroli"an el mani ol acidificando el medio< las colonias aparecen rodeadas de una "ona amarilla +rillan e* Los es afilococos coa'ulasa ne'a i2os$ presen an colonias rodeadas de una "ona roja o p#rpura* Las colonias sospec)osas$ se repicar.n en un medio sin e&ceso de cloruro de sodio para efec uarles$ pos eriormen e$ la prue+a de la coa'ulasa* En el medio de cul i2o$ el e& rac o de carne % la pluripep ona$ cons i u%en la fuen e de car+ono$ ni r0'eno$ 2i aminas % minerales$ el mani ol es el )idra o de car+ono fermen a+le$ el cloruro de sodio ((ue se encuen ra en al a concen raci0n) es el a'en e selec i2o (ue in)i+e el desarrollo de la flora acompa4an e$ % el rojo fenol es el indicador de p5* Las +ac erias (ue crecen en un medio con al a concen raci0n de sal % fermen an el mani ol$ producen .cidos$ con lo (ue se modifica el p5 del medio % 2ira el indicador de p5 del color rojo al amarillo* Los es afilococos crecen en al as concen raciones de sal$ % pueden o no fermen ar el mani ol* Los es afilococos coa'ulasa posi i2a fermen an el mani ol % se 2isuali"an como colonias amarillas rodeadas de una "ona del mismo color* Los es afilococos (ue no fermen an el mani ol$ se 2isuali"an como colonias rojas$ rodeadas de una "ona del mismo color o p#rpura* TECNICA DE TINCION GRAM(Staphyl ! !!"# %& St'&pt ! !!"# # ( )'a*(+)): REALIZACIN =* Preparar los fro is +ac erianos* 6* Te4ir con cris al 2iole a =min* !* La2ar con a+undan e a'ua el e&ceso de coloran e* >* Cu+rir con Lu'ol =min* ?* La2ar con a'ua el e&ceso de Lu'ol* @* Decolorar con alco)olAace ona o simplemen e con alco)ol )as a (ue la preparaci0n deje de perder color (!Bse') C* La2ar con a+undan e a'ua para eliminar el res o de disol2en e* D* Te4ir con safranina =min* E* La2ar con a'ua para eliminar el coloran e de con ras e* =B* /ecar la preparaci0n* ==* E&aminar al microscopio fij.ndose so+re odo en el color de cada preparaci0n* MEDIO O$( O,IDACI-N . $ERMENTACI-N) Staphylococcus1 es fermen aci0n posi i2a (amarillo) $OTOS MAESTRA

(/ rep ococcus pneumoniae)

(/ rep ococcus p%o'enes)

(/ rep ococcus a'alac iae)