I.- OBJETIVOS Aprender a sembrar en tubos con Agar inclinado deadentro hacia fuera.D o m i n a r y p r a c t i c a r l a s i e m b r a d e p l a c a s p o r estras.R e c o n o c e r l a i m p o r t a n c i a d e l p l a q u e a d o y e l flameado II.

- GENERALIDADES: Cuando se trata de estudiar la flora bacteriana de un cuerpo, suelo, agua,alimento o cualquier otra parte de nuestro medio ambiente se ha encontrado que lamayora de las bacterias existen en poblaciones mixtas. Solamente en muy rarassituaciones es que estas se encuentran como especies simples .Para ser capaz deestudiar las caractersticas morfolgicas y fisiolgicas de un cultivo es esencial antetodo que los organismos sean separados de otras especies con las que normalmentes4e encuentran es su hbitat natural, es decir se debe obtener n cultivo puro delmicroorganismo.Existen varios mtodos para obtener un cultivo puro a partir de mezclas decultivos. Los dos mtodos mas frecuentemente usados involucran hacer una estra enuna placa o una sobre una placa. Ambas tcnicas involucran el uso de pequeascantidades de microorganismos de tal forma que las especies individuales puedan ser seleccionadas de las otras. INOCULACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

En microbiologa se entiende por "siembra" la operacin que consiste en depositar ungermen aspticamente en un medio de cultivo.Toda siembra debe adaptarse a los siguientes principios generales:1. Practicarla en medios de cultivo favorable y previamente esterilizado.2. Emplear instrumentos aspticos.3. No contaminar ni destruir el inculo,4. Depositarla aspticamente en los medios elegidos.5. Esterilizar os instrumentos empleados antes y despus de cada operacin.El instrumento corrientemente empleado en las siembras son los siguientes:1 . E l a s a : E s u n a l a m b r e d e c r o m o n q u e l , t i e n e u n d i m e t r o d e 0 , 3 a 1 m m . d e dimetro y est sujeto a un mango de vidrio o de metal. El hilo puede terminar recto(aguja), en anillo (asa) o aplastado (esptula).Los medios de cultivo, como ya se ha dicho, pueden ser slidos o lquidos, y estar contenidos en tubos, placas o frascos.L a tcnica general de las siembras variar segn el estado fsico d e l m a t e r i a l a sembrar y del medio de cultivo. METODOS DE CULTIVO DE USO RUTINARIO: Al inocular debe trabajarse siempre dentro del radio de un mechero Bunsen (30 cm.),o , e n e l a m b i e n t e d e n t r o d e u n a c a m p a n a d e f l u j o l a m i n a r , y a q u e , l a c o r r i e n t e ascendente de aire que va por la llama, o la corriente de aire del flujo laminar arrastrael polvo y otras partculas con el

aire hacia arriba, o hacia afuera; impidiendo lacontaminacin del medio de cultivo.El asa debe ser flameada adecuadamente y enfriada antes de tocar el inculo, o elmedio de cultivo. 1. Siembra en placas: Con el asa ya esterilizada, se toma una gota de lquido o de u n a e m u l s i n d e l producto patolgico y se deposita en un costado del agar de una placa Petri, se estraa partir de ese punto pasando suavemente el asa en zig-zag por la superficie del agar sin rasparlo, rotar la placa en 1/3 y repetir el procedimiento 2 a 3 veces. A menudo ser e c i b e n t r u l a s p a r a c u l t i v o y c o n e l l a s s e p r a c t i c a l a primera de las estras,procediendo despus a diseminar con el asa o pipeta en la forma descrita. 2. Siembra en tubos de agar tendido: El cuello del tubo debe ser flameado antes y despus de ser sembrado. Con el asapreviamente esterilizada a la llama, se toma una pequea cantidad de la muestra y selleva al fondo del tubo, luego se estra suavemente la superficie del medio en formaondulante.Antes de introducir el tubo a la estufa de cultivo, debe dejarse suelto el tapn degoma para evitar que los gases expulsen el tapn.

Siembra en superficie y picadura: El inculo es introducido con el asa recta o pipeta pasteur hasta el fondo del mediocon un solo movimiento y teniendo cuidado en hacer el mismo trayecto de entradaque de salida, se retira hacia la superficie inclinada del agar haciendo suavementeu n a e s t r a o n d u l a d a . D e b e f l a m e a r s e l a b o c a d e l t u b o a n t e s y d e s p u s d e l a siembra. Antes de introducir el tubo a la estufa de cultivo debe soltarse el tapn degoma para evitar que los gases expulsen el tapn. 5. Siembra en profundidad: Al inocular un medio lquido como es el tioglocolato, el tubo se inclina y el material seextrae del asa por frotamiento contra la pared del tubo, cuando ste se endereza elmaterial se encuentra bajo la superficie del medio. Al inocular el medio lquido contrula o con inculo lquido se deposita este en el fondo de l tubo. Debe flamearse laca del tubo antes y despus de efectuada la siembra. Antes de introducir el tubo al a e s t u f a d e c u l t i v o d e b e s o l t a r s e e l t a p n d e g o m a p a r a e v i t a r q u e l o s g a s e s expulsen el tapn. 6.INCUBACION: Los medios de cultivo pueden ser: inoculados en estufa a 35 C e n a e r o b i o s i s , anaerobiosis o en atmsfera de C02.Para aerobiosis se incuban las placas y tubos en estufa de cultivo a 35C.Para anaerobiosis se colocan las placas y tubos dentro de una jarra Anaerobia yl u e g o s t a s e c o l o c a e n e s t u f a d e c u l t i v o a 3 5 C . C o n

u n s o b r e p r o d u c t o r d e atmsfera anaerobia. Para incubar en atmsfera de C02 se colocan las placas ytubos dentro de la Jarra de C02 y sta se coloca en la estufa de cultivo a 35C con unsobre productor de atmsfera microaerofila. II.MATERIALPARALAPRCTICA 1 tubo de ensayo1 mechero para flamear Alcohol, para esterilizar la zona de trabajo1 asa de siembra Torula de algodn Muestras: Papa con huevo Cebiche de pota(Muestra de nuestro grupo analizado) Queso YogurtPipeta Pasteur Agar : Manitol salado Para su preparacin: Esptula Balanza analtica Luna de reloj Agua destilada Agitador Probeta graduada Matraz EXPERIMENTO Siga cada uno de los pasos como lo indica su Profesor, Tcnico o Instructor. PREPARACION DEL MANITOL SALADO Permite el crecimiento de microorganismosTolerante a la sal.Genero Staphylococcus aureus. LA SIEMBRA SE REALIZA POR ESTRA Se debe desinfectar previamente la zona de trabajoSe procede a someter al calor el asa de siembra hasta que este al rojo vivo,luego se dejara enfriar por breves segundos.Con ayuda del asa de siembra se tomara una pequea muestra a sembrar.Se debe flamear el pico del tubo donde se va a depositar la sustancia a sembrar.De inmediato se introduce el asa de siembra con la muestra dentro del tubo, sedebe introducir el asa primero al fondo, luego a la mitad y por ltima vez a lasuperficie donde se encuentre el caldo.Para el momento de la siembra el tubo debe estar ligeramente inclinado .Luegode alcanzar el limite deseado con el asa, es decir la parte de la mitad del tubo, seproceder a establecer la muestra la cual se esparcir de forma pareja de abajohacia arriba y luego se barrera de derecha a izquierda.Luego se retira el asa de siembra y se tapa el tuvo todo esto en presencia delcalor dado por el mechero. VI.- CONCLUSIONES Hay que ser minuciosos en la composicin de los caldos nutritivos porque eli n c o r r e c t o u s o d e e l l o s p u e d e l l e v a r a l f r a c a s o d e n u e s t r a e x p e r i e n c i a d e manipular microorganismos.Hemos aprendido a reconocer un caldo a diferencia de un agar. El caldo es paramuestras liquidas y el agar para muestras slidas.Los medios qumicamente definidos se preparan aadiendo al agua destiladac a n t i d a d e s p r e c i s a s d e c o m p u e s t o s o r g n i c o s o i n o r g n i c o s a l t a m e n t e purificados.Los diferentes medios y tcnicas

de cultivo son esenciales en el laboratorio dem i c r o b i o l o g a p u e s s i r v e n p a r a i d e n t i f i c a r l a s b a c t e r i a s c a u s a n t e s d e l a s enfermedades infecciosas y los antibitic o s a l o s q u e s o n s e n s i b l e s e s a s bacterias.La mayora de las bacterias se desarrolla en un medio de cultivo bsico quecontiene agua extracto de carne y pepsina.Un mtodo fundamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un mediolquido o en la superficie de un medio slido de agar . Hemos aprendido a reconocer y clasificar medios de cultivo por su origen animal,vegetal y mineral