TEMA 3. MOLECULAS DE ADHESION.

RECIRCULACION LINFOCITARIA
Los leucocitos vigilan constantemente nuestro organismo utilizando el sistema circulatorio; cuando se detecta una infeccin las clulas atraviesan la pared de los vasos y se dirigen al sitio de infeccin. Todo ello es posible gracias a la existencia de las llamadas molculas de adhesin, que detienen a los leucocitos en la pared de los vasos locales (del tejido infectado) y los inmovilizan hasta que la accin de otros mediadores (las quimiocinas) los dirigen hacia el foco de infeccin.

MOLCULAS DE ADHESION CELULAR Las clulas de nuestros tejidos se mantienen unidas gracias a las interacciones moleculares que hay entre ellas. En cambio, las clulas del SI pueden atravesar de una a otra parte del organismo. Lo curioso es que las mismas molculas que se utilizan para mantener juntas a las clulas de los tejidos (Molculas de adhesin celular = CAMs) se usan por os leucocitos para interaccionar con las clulas de los tejidos. El endotelio vascular acta de portero, regulando el paso de molculas y clulas desde la sangre a los tejidos; el proceso, en lo que se refiere a las clulas, se denomina extravasacin. Para que los linfocitos alcancen los rganos linfoides perifricos o los sitios de inflamacin Las clulas endoteliales expresan CAMs que son especficas para los leucocitos, aunque algunas de ellas se expresan constitutivamente y otras lo hacen solo en respuesta a la concentracin local de citocinas inflamatorias que se producen durante una respuesta inflamatoria. Aquellas clulas circulantes con un receptor que se une a las CAMs que hay sobre las clulas del epitelio vascular son las que pueden extravasarse a los tejidos. Los linfocitos recirculantes tienen receptores que se fijan a las CAM del endotelio vascular, lo que les permite extravasarse hacia los tejidos. Adems de su papel en la unin de los leucocitos a las clulas endoteliales las CAMs que hay sobre los leucocitos aumentan la fuerza de las interacciones funcionales entre las clulas del SI. Hay varias molculas de adhesin que contribuyen a las interacciones entre: Clulas Th y CPAs Th y clulas B Clulas Tc y clulas blanco La mayora de las CAMs pertenecen a cuatro familias de protenas, que son: Selectinas Tipo mucina Integrinas Inmunoglobulinas (Ig) Selectinas Son glucoprotenas de membrana que tienen un dominio extracelular tipo lectina, lo que les permite unirse de forma especfica a grupo de hidratos de carbono (azcares). La interaccin primaria de las selectinas es con una porcin hidrocarbonada que tiene cido silico (sialilada) y que se denomina sialil-Lewisx y que se encuentra unida con frecuencia a las molculas tipo mucina. La familia incluye tres molculas, llamadas:

L-Selectina (CD62L) que se expresa sobre la mayora de los leucocitos circulantes E-Selectina (CD62E) que se expresa sobre las clulas endoteliales durante una respuesta inflamatoria, tras la estimulacin de su sntesis por citocinas proinflamatorias P-Selectina (CD62P), se almacena en unos grnulos de las clulas endoteliales (llamados de Weibel-Palade) que, tras la estimulacin de la clula endotelial, se funden con la membrana plasmtica quedando las P-Selectinas sobre la superficie celular.

La mayora de los leucocitos circulantes expresan L-Selectina, mientras que las otras dos se expresan sobre las clulas endoteliales durante la respuesta inflamatoria. Estas selectinas son las responsables de la adhesin inicial de los leucocitos al endotelio vascular. Mucinas Constituyen un grupo de protenas ricas en serina y treonina y muy glucosiladas. Su estructura extendida les permite presentar porciones como sialil-Lewis y otras estructuras hidrocarbonadas para que se capturen por las selectinas. Integrinas Son protenas hetero-dimricas con una cadena y otra , asociadas de forma no covalente, que se expresan sobre la superficie celular. La mayora interacciona con las molculas de la matriz extracelular y mantienen la estructura de los tejidos en todo el organismo. Algunas subfamilias (con una subunidad comn) se unen a las molculas de adhesin de la superficie celular e intervienen en las interacciones clula-clula. Los leucocitos expresan una subfamilia especfica de integrinas (conocida como 2), as como otras varias, que tambin se expresan sobre otros tipos celulares. Las 2 se unen a las protenas de la SPF de las Ig, y a protenas asociadas a la respuesta inflamatoria. Algunas integrinas necesitan activarse para unirse con alta afinidad a sus ligandos y su agrupamiento sobre la membrana celular aumenta la probabilidad de unin efectiva. Su importancia se refleja en la deficiencia de adhesin de los leucocitos (LAD) tipo 1, unas enfermedades autosmica recesiva que se caracteriza por la presencia de infecciones bacterianas recurrentes y dificultad para curar las heridas. Una deficiencia similar se ve en individuos que tienen alterada la expresin de selectinas y se denomina LAD tipo 2. La combinacin de integrinas que expresa un tipo dado de clula es lo que la permite unirse a las diferentes CAMs que hay sobre la superficie del endotelio vascular. Superfamilia de las Ig (ICAMs) Esta SPF incluye molculas de adhesin con dominios tipo Ig, como ICAM-1 (CD54), ICAM-2 (CD102), ICAM-3 (CD50) y VCAM (CD106), que se expresan sobre las clulas del endotelio vascular y se unen a varias molculas de integrinas. Hay una molcula de adhesin (llamada MadCAM-1) que tiene dominios tipo Ig y tipo mucina, que se expresa sobre el endotelio de la mucosa y dirige la penetracin de los linfocitos en la misma; se une a una integrina va dominio tipo Ig y a L-Selectina va dominio tipo mucina. Tambin hay adhesiones homotpicas entre miembros de la SPF..

La molcula PECAM-1 ([molcula 1 de adhesin clulas endoteliales-plaquetas] CD31) est en la superficie de leucocitos (neutrfilos, monocitos y un subtipo de linfocitos T) y en complejos que unen a las clulas endoteliales. Presenta unin homotpica, donde el PECAM-1 de una clula se une al PECAM-1 de otra. La molcula de adhesin JAM-1 (CD321) tambin se encuentra en las uniones endoteliales y puede interaccionar consigo misma y con Integrinas, lo que le otorga un papel en la migracin trans-endotelial. Tambin puede encontrarse unin homotpica entre miembros de la SPF Ig en otros tipos celulares, como ocurre con L1 y NCAM sobre las clulas neurales. Ejemplos de molculas de adhesin celular (CAM) de distintas familias

Tipo mucina
GliCAM-1 CD34 PSGL-1 MadCAM-1

Selectinas
Selectina L Selectina P Selectina E

SPF Ig
ICAM-1, 2 y 3 VCAM-1 LFA-2 (CD2) LFA-3 (CD58) MadCAM-1

Integrinas
VLA-4 (41) VLA-6 (61) LFA-1 (12) MaC-1 (M2)

RECIRCULACION DE LOS LINFOCITOS Al contrario del resto de las clulas, los linfocitos recirculan constantemente a travs de la sangre, la linfa y los rganos linfoides secundarios. Tras un breve trnsito por la sangre (unos 30 m.) casi el 45% de ellos la abandona directamente a travs del bazo, donde residen aproximadamente unas 5 horas. Una cantidad casi igual de linfocitos (42%) sale de la sangre a travs de los ganglios linfticos, donde residen unas 12 horas. Un nmero pequeo de linfocitos (10%) migra a los tejidos extralinfoides terciarios atravesando a travs de las clulas endoteliales de los capilares. Estos tejidos normalmente albergan pocos (o ninguno) linfocitos a menos que se reclamen por la presencia de una respuesta inflamatoria. Los tejidos terciarios extra-linfoide ms activos son lo que forman la interfase con el exterior, tales como piel y epitelios mucosos gastrointestinales, pulmonares y genito-urinarios. La recirculacin mantiene una dotacin ptima de linfocitos especficos distintos, que pueden encontrar a cualquier antgeno. Un linfocito individual hace el circuito sangre tejidos linfa sangre entre una y dos veces diarias. Como solo uno entre 100.000 linfocitos reconoce un antgeno particular parece que este mecanismo permite a un ayor nmero de clulas T y B reconocer al antgeno (sobre clulas presentadoras o en forma soluble) y desencadenar la respuesta adaptativa en menos tiempo. Los contactos entre clulas presentadoras y clulas T se aumentan mucho gracias a los factores que regulan, organizan y dirigen la circulacin de linfocitos y clulas presentadoras de antgenos. PASO DE LOS LINFOCITOS A TRAVS DEL ENDOTELIO VASCULAR 1.- Por las vnulas endoteliales altas Aunque algunos linfocitos abandonan la sangre a travs de vnulas no especializadas, la ruta de salida principal en los mamferos es a travs de una seccin especializada de las vnulas post-capilares que se conocen como vnulas endoteliales altas (HEV). Estas HEV abundan en la zona para-cortical de los GL, son menos abundantes en la zona cortical y faltan en la zona medular. Adems de en los GL, las HEV tambin se encuentran en el MALT (Tejido linfoide asociado a las mucosas) y en el timo. Algunos linfocitos, principalmente los T, llegan a travs de los vasos linfticos aferentes (en lugar de a travs de las HEV), que es la ruta principal de llegada de los antgenos al GL.

Las HEV son estructuras permanentes de los tejidos linfoides secundarios, pero tambin pueden desarrollarse a partir del epitelio normal en los sitios de reacciones inflamatorias crnicas; esto puede significar que las clulas T especficas tengan una va directa de acceso (a travs de las HEV recin formadas) a la zona inflamatoria. El movimiento de los linfocitos a travs del endotelio vascular se controla mediante molculas de adhesin y quimiocinas, como p.e.: Mad-CAM-1 que se expresa en las clulas endoteliales de los tejidos intestinales VCAM-1 que est presente en las clulas endoteliales de pulmones y piel En los linfocitos hay otras molculas que, interaccionan directamente con estas molculas de adhesin, les llevan directamente a rganos concretos. En el caso del intestino son las integrinas alfa4beta7 (a4b7) las que median la adhesin de los linfocitos en las HEV de las Placas de Peyer (que expresan Mad-CAM-1). Extravasacin de los linfocitos Varios subtipos de linfocitos presentan una extravasacin dirigida a los sitios inflamatorios y rganos linfoides secundarios. La recirculacin est cuidadosamente controlada para asegurar el reclutamiento apropiado de poblaciones T y B hacia los diferentes tejidos. Como ocurre con los neutrfilos, la extravasacin de linfocitos incluye una serie de interacciones entre molculas de adhesin y las cuatro fases de rodamiento, activacin, detencin y adhesin y, finalmente, migracin trans-endotelial. Las vnulas con endotelios altos (vnulas endoteliales altas o HEV) son los sitios de extravasacin de los linfocitos Algunas regiones del endotelio vascular de las vnulas post-capilares de distintos rganos linfoides estn compuestas por clulas especializadas de formas cuboides y rechoncha (son altas), denominndose a estas regiones vnulas endoteliales altas o HEV. El aspecto de sus clulas contrasta mucho con el aplanado de las clulas endoteliales que recubren el resto del capilar. Todos los rganos linfoides secundarios, con excepcin del bazo, contienen HEV. Cuando se incuban con linfocitos cortes de ganglios linfticos, placas de Peyer o amgdalas y se lavan luego para eliminar a las clulas no fijadas, cerca del 85% de las clulas fijadas estn adheridas a las HEV, aunque estas vnulas representan solo el 1-2% del rea total del corte. Se estima que cada segundo se extravasan, a travs de las HEV, unos 140.000 linfocitos en un solo ganglio linftico. Las citocinas producidas en respuesta a la captacin de antgenos est comprobado que intervienen en el desarrollo y conservacin de las HEV en los rganos linfoides; por ejemplo, los animales criados en condiciones axnicas (sin grmenes) no desarrollan HEVs, mientras que si se bloquea quirrgicamente el linftico aferente del ganglio (con lo que bloquea la entrada de los antgenos) al cabo de poco tiempo las HEVs presentan prdida de funcionalidad y pueden volver a una morfologa ms aplanada. Las HEV expresan una variedad de molculas de adhesin. Como cualquier otra clulas del endotelio vascular expresan: E y P-Selectinas, molculas tipo mucina (GlyCAM-1 y CD34) y molculas de la superfamilia de las Ig(ICAm-1, ICAM-2, ICAM-3, VCAM-1 y MadCAM-1). A algunas molculas de adhesin que se distribuyen especficamente en un tejido se les ha llamado adresinas vasculares pues dirigen la extravasacin de diferentes poblaciones de linfocitos re-circulantes a rganos linfoides particulares. La figura 13-8 presenta las interacciones tpicas en la extravasacin de las clulas T vrgenes a travs de las HEV en los ganglios linfticos. El primer paso es, normalmente,

una interaccin selectina-carbohidrato similar a la de la adhesin de los neutrfilos. Los linfocitos T vrgenes se unen inicialmente a las HEVs a travs de L-Selectina, que sirve como un receptor de albergue que dirige los linfocitos a tejidos que expresan las correspondientes adresinas vasculares tipo mucina, tales como CD34 o GlyCAM-1. El rodamiento de los linfocitos es menos acusado que el de l os neutrfilos. Aunque la interaccin inicial selectina-carbohidrato es muy dbil, el flujo tan lento de la sangre en las vnulas post-capilares, especialmente en la regin de HEV, reduce la probabilidad de que el flujo arrastre al linfocito que se arrastra. En el segundo paso, el estmulo de activacin de las integrinas est mediado por quimiocinas que bien se sitan sobre la membrana endotelial o se secretan localmente. El grueso glicocalix que recubre las HEV puede retener estos factores quimioatractantes in situ. La fijacin de quimiocinas a los receptores que hay sobre los linfocitos, acoplados a G-protena, lleva ala activacin de las molculas de integrina que sobre la membrana (como ocurre en la extravasacin de los neutrfilos). Una vez activada la molcula de integrina interacciona con molculas de la superfamilia de las Ig (p.e. ICAM-1), lo que permite a los linfocitos adherirse firmemente al endotelio. Los mecanismos moleculares que rigen el paso final, la migracin trans-endotelial, parece que comprenden a las molculas de adhesin PECAM-1 (CD31) y JAM-1 (CD321). El albergue de los linfocitos est dirigido por perfiles de receptores y seales La extravasacin de los linfocitos es similar, en general, a la extravasacin de los neutrfilos. Un carcter importante que distingue a ambos procesos es que los distintos subtipos de linfocitos migran diferencialmente a tejidos diferentes. Esta migracin especfica depende de combinaciones nicas de molculas de adhesin y quimiocinas; los receptores que dirigen la migracin de varias poblaciones de lilnfocitos a tejidos linfoides concretos y tejidos inflamatorios reciben el nombre de receptores de albergue o receptores guas. Los linfocitos vrgenes recirculan a los tejidos linfoides secundarios Los linfocitos vrgenes no son capaces de montar una respuesta inmune hasta que se han activado para pasar a clulas efectoras. La activacin de las clulas vrgenes tiene lugar en un microambiente especializado en los tejidos linfoides secundarios (ganglios linfticos perifricos, placas de Peyer, amgdalas y bazo). En este microambiente las clulas dendrticas capturan antgenos y los presentan a los linfocitos vrgenes; el resultado es que los linfocitos vrgenes se activan. Las clulas vrgenes no presentan preferencia por un tipo particular de tejido linfoide secundario, sino que circulan indiscriminadamente por todos los tejidos linfoides secundarios del cuerpo. La unin inicial de los linfocitos vrgenes a las HEV est generalmente mediada por la unin de L-Selectina del linfocito a molculas de adhesin tales como GlyCAM-1 y CD34 sobre las HEV. Recientemente se ha encontrado que LFA-1 y VLA-4 tambin median el rodamiento en su conformacin de baja afinidad (antes de la activacin). Son las quimiocinas CCL21, CCL19 y CXCL12 las que inducen el cambio conformacional a la alta afinidad de LFA-1 y VLA-4, que lleva a la adhesin fuerte. Adems de estas quimiocinas CXCL13 activa a las integrinas sobre las clulas B vrgenes. Otras quimiocinas atraen a las subpoblaciones de linfocitos a sus zonas en los ganglios linfticos. El patrn de trfico de las clulas T vrgenes est diseado para tener a estas clulas recirculando constantemente a travs de los tejidos linfoides secundarios, cuya funcin principal es atrapar a los antgenos de la sangre y los tejidos. Una vez que los linfocitos vrgenes encuentran a su antgeno atrapado en un tejido linfoide secundario se activan y aumentan su tamao pasando a linfoblastos. La

activacin lleva alrededor de 48 horas y, durante este tiempo, los blastos estn retenidos en la regin paracortical de los tejidos linfoides secundarios. En esta fase, tambin llamada de cierre, los linfocitos especficos del antgeno no pueden detectarse en la circulacin. Es durante la fase de cierre cuando se produce la rpida proliferacin y diferenciacin de las clulas vrgenes. Las clulas efectoras y de memoria que se forman dejan el tejido linfoide y comienzan su propia recirculacin. Las clulas efectoras y de memoria se mueven de forma distinta que las T vrgenes Los patrones migratorios de ambos tipos de clulas difieren del patrn de los linfocitos T vrgenes. Las clulas efectoras tienden a albergarse en las zonas de infeccin pues reconocen el endotelio inflamado as como a las molculas quimiotcticas que se producen durante la respuesta inflamatoria. Los linfocitos de memoria tienden a albergarse selectivamente en el tipo de tejido en el que encontraron por primera vez al antgeno. Al parecer esto asegura que una clula de memoria particular retorne al tejido donde hay mayor probabilidad de que pueda enfrenarse a la amenaza que supone su antgeno. Las clulas efectoras y de memoria expresan cantidades elevadas de ciertas molculas de adhesin, como LFA-1, que interaccionan con ligandos presentes en los tejidos extra-linfoides terciarios (como piel y epitelios mucosos) y en los sitios de inflamacin, lo que permite que las clulas efectoras y de memoria los alcancen. Las clulas inmaduras carecen de las molculas de adhesin correspondientes y no alcanzan ni se albergan en estos sitios. El endotelio inflamado expresa las Selectinas E y P y las molculas de la superfamilia de las Ig VCAM-1 e ICAM-1, que se unen a los receptores correspondientes expresados en gran cantidad por clulas efectoras y de memoria. El resultado de todo ello es que estas clulas presentan una clara vocacin tisular, mientras que evitan a los tejidos linfoides secundarios como consecuencia de su poca expresin de L-Selectina. Un segundo subgrupo de clulas efectoras y de memoria tienen una clara vocacin drmica y su dotacin se caracteriza por la expresin baja de L-Selectina y alta de LCA (antgeno linfoctico cutneo) y LFA-1, molculas que se fijan a la E-Selectina e ICAMs que hay dentro de las vnulas drmicas de la piel. Aunque las clulas efectoras y de memoria, que expresan cantidades reducidas de LSelectina, no tienden a dirigirse a los tejidos linfoides secundarios a travs de las HEV si pueden alcanzar los ganglios linfticos secundarios a travs de la linfa aferente.