Universidad de Santiago de Chile Facultad de Qumica y Biologa Laboratorio Qumica Orgnica I

Informe prcticos 3 y 4:
Obtencin y anlisis por cromatografa en capa fina de la oleorresina de pimentn dulce & Separacin de los carotenos principales por cromatografa en columna y anlisis por cromatografa en capa fina de los compuestos obtenidos

Resultados

Primera parte del prctico: Cromatografa en capa fina

Se utilizaron dos cmaras con diferentes solventes: 1.- Hexano-Cloroformo (1:1) 2.- Cloroformo-Metanol (50:1) Se analizaron dos muestras de aj de color, una de ellas procedente de una feria libre y la otra extrada de un producto embasado Gourmet. Tabla 1: Colores pigmentos obtenidos en la muestra Gourmet. Color del pigmento Rojo Anaranjado Amarillo Compuesto Capsorrubina-Capsantina Capsorrubina -Caroteno

Imagen 1: Placa obtenida al separar compuestos de la muestra Gourmet.

Amarillo1

Rojo Anaranjado

Amarillo

Sistema de desarrollo: Hexano-cloroformo (1:1)

Sistema de desarrollo: cloroformo-metanol (50:1)

Tabla 2: Colores de pigmentos obtenidos en la muestra de la muestra obtenida en una feria libre. Color del pigmento Rojo Amarillo Violeta Compuesto Capsorrubina-Capsantina -caroteno residuo

En la placa se observa un pigmento amarillo muy junto al rojo y que se encuentra sobre este ltimo, pero en la fotografa no se aprecia con claridad.

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Imagen 2: Placa obtenida al separar compuestos de la muestra Feria libre.

Amarillo Violeta

Amarillo Violeta Rojo Sistema de desarrollo: Hexano-cloroformo (1:1) Sistema de desarrollo: cloroformo-metanol (50:1)

Rojo

Tabla3: Distancia recorrida por los pigmentos (distancia de recorrido de los solventes CHCl3-EtOH=6,8cm ; C6H8-CHCl3= 5,0cm ) Muestra de anlisis Gourmet Gourmet Gourmet Gourmet Sistema utilizado CHCl3-EtOH CHCl3-EtOH CHCl3-EtOH C6H8-CHCl3 Color Rojo Anaranjado Amarillo Amarillo Recorrido (cm) 6,0 5,3 6,1 1,7 Rf 0,88 0,78 0,90 0,34

Imagen 3: Reconocimiento en yodo

Cromatografas muestra Gourmet.

Cromatografas muestra Feria

Sistema de desarrollo: hexano-cloroformo Sistema de desarrollo: hexano-cloroformo (derecha) y cloroformo-metanol (izquierda). (derecha) y cloroformo-metanol (izquierda). Segunda parte del prctico: Cromatografa en columna (derecha) y cloroformo-metanol (izquierda).

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 El sistema de desarrollo elegido para realizar la separacin por cromatografa en columna fue Cloroformo: Metanol, pero primero, para separar el pigmento amarillo solo se utiliz cloroformo. Una vez extrado, se trabaj con CHCl3:MeOH (50:1). Se lograron extraer 18 fracciones distintas de muestra, y se realiz la cromatografa de capa fina a 11 de estos. Las CCF de las fracciones extradas fueron hechas en una cmara que contena solo cloroformo. Imagen 4: Fracciones extradas utilizando la muestra Gourmet..

El lugar en que se encuentran en la figura (de izquierda a derecha) corresponde al orden con el que se extrajeron.

Imagen 5: Placas de CCF obtenidas de las distintas fracciones extradas Gourmet.

(1)

(2)

(3)

(4)

(1): Fracciones 1, 2 y 5 ; (2): Fracciones 7 y 10; (3): Fracciones 12, 14 y 15; (4): Fracciones 16 ,17 y 18.

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Tabla 4: Distancia recorrida por los pigmentos de las fracciones extradas. Fraccin 1 2 3 7 10 12 14 15 16 17 18 Color Amarillo Amarillo (plido) Amarillo (plido) Amarillo Anaranjado Amarillo Anaranjado Rojo Anaranjado Rojo Recorrido Pigmento (cm) 4,7 4,6 4,1 4,3 4,2 4,7 3,7 3,5 4,0 3,2 Recorrido Solvente (cm) 5,0 5,0 5,0 6,0 6,0 6,0 6,0 6,0 6,0 4,8 4,8 4,8 4,8 Rf 0.94 0,92 0,82 0,72 0,70 0,78 0,77 0,73 0,83 0,66

Imagen 6: Placas de CCF obtenidas de las distintas fracciones extradas de la muestra de Feria.

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Discusin Durante el laboratorio se utilizaron dos sistemas de desarrollo, uno hexanocloroformo y el otro CHCl3-Metanol. Para analizar el comportamiento de los pigmentos en cada sistema primero se debe tener en cuenta lo siguiente: Primero, el primer sistema est conformado por una molcula apolar y otra polar y el segundo por dos Imagen 7: molculas polares (imagen 7), por lo tanto, al comparar estos dos claramente el segundo sistema es mucho ms polar que el primero, y segundo, en Hexano Cloroformo Metanol las placas obtenidas (Imagen 1) se observa que al separar la muestra utilizando la primera mezcla de solventes, solo subi por la slica un pigmento color amarillo correspondiente al -caroteno1 y al utilizar como solvente la mezcla metanol-cloroformo, subieron muchos ms compuestos a lo largo de la placa, logrando una mejor separacin en comparacin a la CCF utilizando como solvente hexano-cloroformo. La funcionalidad polar del analito es la encargada de interactuar con mayor fuerza con las partculas de la slica2, por lo tanto, aquellos pigmentos que presentan mayor polaridad son los que se quedan retenidos en la slica y los que tienen funciones dbilmente polares, suben a lo largo de esta con mayor facilidad, pero el uso de un solvente altamente polar, como fue el caso del segundo sistema, genera una mayor interaccin de este con el analito, lo cual evita interacciones del analito con la gel de slica , haciendo que los pigmentos suban mucho ms en un sistema altamente polar, lo que lo hace ms apto para la separacin y anlisis de los diferentes compuestos ya que estos no se quedan retenidos en un solo lugar de la slica gel. Por este motivo, el solvente elegido para realizar la cromatografa por columna fue la mezcla CHCl3-MeOH. Durante esta parte del prctico, cuando se realiz la cromatografa por columna, primero se utiliz como solvente solo CHCl3, para hacer Imagen 8: que los compuestos menos polares bajaran primero por la columna, como se puede observar en la Imagen 8, la parte amarilla fue la primera en bajar, y por ende la primera en recolectarse (Imagen 4), luego, para hacer descender al compuesto de color rojo se agreg como solvente la mezcla CHCl3-MeOH (50:1) y se recolectaron las fracciones del color respectivo. Al realizar la CCF de estas muestras, se obtuvieron en las primeras placas claramente, los pigmentos amarillos (Imagen 5 (1)) los cuales eran correspondes al pigmento Columna de cromatografa del -caroteno ya que es el primero en bajar debido a su baja polaridad. En las placas siguientes no se puede observar claramente colores, debido a que estaban muy diluidas por lo que la placa se ve sin manchas. En las posteriores CCF, para hacer descender el pigmento rojo se utiliz
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Didctica de la gentica. Josep Cuello Subirana. Editions Universitad de Barcelona. 1982. Pgina 52 Stahl E., Thin Layer Chromatography. Springer-Verlag New York, Inc. 1969

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la mezcla de solventes sealada anteriormente, para hacer bajar los compuestos con un mayor carcter de polaridad. Las placas obtenidas muestran una mayor gama de colores destacando los rojos, los cuales probablemente corresponderan a una mezcla de Capsorrubina y Capsantida3, ya que el color rojo obtenido en la placa se muestra como una mezcla de tonalidades rojizas y anaranjadas. En la CCF que se le realiz a los extractos obtenidos de las muestras de la feria (Imagen 2) se observa claramente la existencia de un pigmento color rosavioleta, el cual no apareci en la placa que tena la muestra embazada. Este compuesto, muy probablemente correspondera a un colorante agregado al aj de color para darle un color las intenso y un mejor aspecto. A que compuesto corresponde este pigmento, con exactitud, no se puede indicar, ya que la muestra extrada no se le realiz ningn tipo de anlisis de reconocimiento. Los valores Rf dependen directamente de los solventes con los que se trate el sistema, del tipo se capa que se utiliza (fase estacionaria), del espesor del adsorbente, la temperatura, entre otros factores externos4, por este motivo los valores obtenidos de Rf de las CCF realizadas en el laboratorio ( tablas 3 y 4)solo sern valores estimativos con respecto a los Rf encontrados en bibliografa, ya que los factores externos mencionados con anterioridad, tienen una directa implicancia en los resultados de estos. Existen pigmentos que no se pueden observar en la placa ya que solo son visibles en el UV, por este motivo las placas fueron expuestas a la luz ultravioleta, pero no se observ ningn pigmento que resaltara con notoriedad, en cambio al exponer las placas a una cmara de yodo (Imagen 3), se observaron manchas pardas. Esto indica la presencia de dobles enlaces en los compuestos separados, ya que estos al estar en contacto con I2 se rompen y se enlazan a este. Una precaucin que se tom al revelar las placas en yodo fue taparlas con cinta adhesiva, ya que el vapor de yodo es voltil, produciendo que las manchas de la placa desaparezcan (por este mismo motivo a todas las placas de CCF se les coloc cinta adhesiva).

Tecnologa de alimentos. Aditivos alimentarios. N.Cubero, A, Monferrer y J. Villalta. 2002. Madrid, Espaa. Pgina 41.
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Qumica orgnica experimental. H. D. Durst, G.W. Gokel. Editorial Revert. 2007. Espaa. Pgina 90.

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Conclusin La eleccin de un solvente para realizar cromatografa es de suma importancia, ya que dependiendo de estos se podrn separar mejor los pigmentos dependiendo de las interacciones que el analito presente con el solvente y la placa. La cromatografa en capa fina es muy til para realizar un anlisis de los compuestos presentes en de una determinada muestra mediante la separacin de estos, ya que se necesitan pequeas cantidades de analito. Los resultados, dependiendo de cmo y con que se realice la CCF, sern bastante claros pudindose obtener buenos resultados.

La cromatografa en columna es un mtodo que no solo sirve para analizar compuestos, sino que tambin para separar estos en una mayor proporcin, por lo tanto si lo que se desea es extraer mayor cantidades de muestra para luego determinar a qu compuesto pertenece o seguir purificndola mediante este mtodo (obteniendo compuestos con un mayor grado de pureza), lo ms indicado es realizar cromatografa por columna. No todos los compuestos que se separan son detectables en el rango visible, y para poder observarlos se somete la muestra UV y/o se revelan con vapores de yodo. Los Rf son valores que no se pueden utilizar como un dato determinante que seale si un pigmento separado pertenece o a un compuesto, ya que estos valores estn sujetos a muchas condiciones experimentales.

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Bibliografa y webgrafa 1.- Qumica orgnica experimental. H. D. Durst, G.W. Gokel. Editorial Revert. 2007. Espaa. Pgina 78-79, 90. 2.- Tecnologa de alimentos. Aditivos alimentarios. N.Cubero, A, Monferrer y J. Villalta. 2002. Madrid, Espaa. Pgina 40-41. 3.- Didctica de la gentica. Josep Cuello Subirana. Editions Universidad de Barcelona. 1982. Pgina 52 4.- Stahl E., Thin Layer Chromatography. Springer-Verlag New York, Inc. 1969 5.- Experimentos de Qumica orgnica. Anderson Guarnizo, Pedro N. Martnez Y. Ediciones Eliscom. Pgina 101-102 6.- Mtodos de la industria qumica (Orgnica). Ludwig Mayer. Editorial Revert.Barcelona.1987. Pgina 90 7.- Qumica Orgnica. Morrison y Boyd. 5ta edicin. Editorial Pearson, Addison Wesley. 1998. Mxico. Pgina 94. 8.- Blanca Elena Jimnez Cisneros. La contaminacin ambiental en Mxico. (Causas, efectos y tecnologa aplicada). Editorial Limusa S.S de C.V. Mxico 2005. Pgina 688 9.- Revista latinoamericana de Microbiologa.(rgano de la asociacin latinoamericana de microbiologa).Vol 41. Jul-Sep 1999. Mxico. Pgina 188 10.- Qumica orgnica bsica y aplicada (De la molcula a la industria). Eduardo Primo Yefa. Tomo II. Editorial Revert. Espaa. 2007. Pgina 871.

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