TCNICAS GENERATES DE AISLAMIENTO Y CULTIVO DE MICROORGANISMOS En Microbiologa, todas las manipulaciones deben ser llevadas a cabo de modo que

se impida cualquier tipo de contaminacin en el rea de trabajo. Se aconseja que la siembra de todas las muestras a los medios de cultivos se realice bajo una cabina de flujo de aire laminar o en un gabinete de seguridad biolgica, con los protectores de plstico o vidrio para el cuello y la cara, las muestras procesadas se las debe considerar como potencialmente infecciosas y manipularlos adecuadamente. Tambi n se deben utili!ar guantes de goma o late" biolgicos #a mesada de trabajo debe estar equipada con todos los materiales necesarios para efectuar las siembras, tambi n se debe contar con todos los medios de cultivos necesarios para reali!ar las siembras. $#as asas deben esterili!arse antes de utili!arlas y enfriarse sobre el agar o el material de vidrio %en !onas est riles& antes de tomar la muestra de microorganismos, con objeto de no destruirlos por calor. $'espu s de utili!arlas, las asas se vuelven a esterili!ar en todo su permetro $#as bocas de los tubos y matraces de vidrio se flamean ligeramente una ve! destapadas, antes y despu s de la inoculacin. $'urante la inoculacin, los tapones se mantienen en la mano sujetndolos por la parte que no entra en contacto con tubos y matraces. $#os tubos abiertos deben mantenerse en posicin inclinada (acia el frente para que el riesgo de contaminacin sea mnimo. $#as tapas de las placas )etri no deben colocarse nunca sobre la mesa de trabajo boca arriba trabajando con bacterias. Los pasos de un proceso de aislamiento de una especie microbiana se pueden resumir en los siguientes: $Siembra en placa de la muestra de partida. $Tomar una colonia de la placa una ve! incubada y sembrar una segunda placa, en la que todas las colonias que cre!can deben ser id nticas. $* partir de la segunda placa se puede resuspender una de las colonias en medio lquido, consigui ndose ya un cultivo puro. $)ara la conservacin de los cultivos puros de un microorganismo e"isten diversos m todos, el ms simple es la resiembra en tubos inclinados que se mantienen, normalmente refrigerados, durante +$, meses. El equipo necesario para la inoculacin es muy simple. -onsta de un alambre, con una punta en ojal, recta o en ganc(o, y el otro e"tremo insertado en un mango cilndrico %el conjunto es llamado asa u ansa&. #a inoculacin primaria puede (acerse con un asa, (isopo u otro material sobre la superficie del medio agari!ado en la placa de petri o sobre caldos de cultivos. SIEMBRA Objetivos $ .amiliari!arse con el manejo de microorganismos y con las t cnicas de aislamiento en placa de )etri. $ /btener colonias separadas, utili!ando uno o ms m todos. $ Estudiar la morfologa de cada colonia. Material *sa de siembra, Tubo con cultivo, placas de )etri con medio de cultivo slido y cultivo de microorganismo.

Toma

e m!estras"

#$%Tcnica de siembra para aislamiento" #$#$%ESTR&A M'LTI(LE" -on un asa de siembra, previamente esterili!ada, se toma una muestra del cultivo de microorganismos y se e"tiende sobre un rea peque0a de la superficie de la placa con agar nutritivo, en forma de estras muy juntas, pero sin (acer presin para no da0ar el agar.

Se flamea el asa, se enfra y despu s de ro!ar la siembra reali!ada previamente, se e"tiende de nuevo por otra !ona de la placa (aciendo nuevas estras. Este proceso se repite sucesivamente, flameando y enfriando el asa al comien!o de las sucesivas siembras en estra. Se lleva la placa a incubar, a la temperatura adecuada, siempre en posicin invertida. Mediante esta t cnica se obtienen colonias aisladas a partir de una muestra que contenga un elevado n1mero de g rmenes.

ejem)lo

e res!lta o *o+ estr,a m-lti)le

ejem)lo #$.%TCNICA DE LOS CUATRO CUADRANTES"

e estr,a m-lti)le *re*i a

Se divide la placa en cuatro cuadrantes. Se toma el inculo y se siembra consecutivamente en 2$3$+$4.5ncubar. En el cuarto cuadrante, al menos, obtendramos colonias aisladas.

#$/$% SIEMBRA (OR AGOTAMIENTO 0O EN SU(ER1ICIE2 Se reali!a una descarga y se reali!a estra por toda la placa.

.$%SIEMBRA PARA RECUE T!: .$#$%%T3*+i*a e Barr4

En una placa de )etri vaca se deposita un peque0o volumen conocido de muestra y a continuacin se a0ade el medio de cultivo %agar nutritivo& fundido y atemperado apro"imadamente a 467-. Se me!clan ambos por rotacin suave de la placa. 'e esta forma los microorganismos se distribuirn de forma (omog nea en el medio de cultivo, permitiendo el desarrollo de colonias separadas por todo el agar. .$.$% e i+o*!lo a il!*i5+ *o+o*i a 4 *o+ asa e D46ras7i 0Barr4 mo i8i*a a2" 'epositar sobre la superficie de una placa con agar nutritivo una gota 8,2 ml de una determinada dilucin del cultivo de microorganismos problema y e"tenderlo con ayuda del cayado, previamente esterili!ado, en todas las direcciones (asta que est completamente seco. 5ncubar la placa, en posicin invertida, a la temperatura deseada %durante 34, 49 :3 (oras& seg1n el tipo de microorganismo. #a posicin invertida evitar que el agua de condensacin se deposite sobre la superficie del medio, dificultando la obtencin de colonias aisladas. Es una t cnica usada para el aislamiento de colonias, que permite igualmente el recuento de bacterias viables en la muestra, si conocemos e"actamente la dilucin.

Di8ere+*ia e+tre 9aislar: 4 9e;te+ er:

Le*t!ra

e )la*as"