Pesq. Vet. Bras.

32(1):49-60, janeiro 2012

Aspectos clinicopatolgicos e laboratoriais do envenenamento experimental por Bothrops moojeni e Bothropoides neuwiedi em ovinos1
Aline Diefenbach2, Bruno L. Anjos3, Saulo A. Caldas2, Tiago C. Peixoto2, Marilene F. Brito4, Elise M. Yamasaki2, Paula Helena Santa Rita5 e Carlos H. Tokarnia6*
ABSTRACT.- Diefenbach A., Anjos B.L., Caldas S.A., Peixoto T.C., Brito M.F., Yamasaki E.M., Santa-RitaP.H. & Tokarnia C.H. 2012. [Clinicopathological and laboratory aspects of experimental poisoning by Bothrops moojeni and Bothropoides neuwiedi snake venoms in sheep.] Aspectos clinicopatolgicos e laboratoriais do envenenamento experimental por Bothrops moojeni e Bothropoides neuwiedi em ovinos. Pesquisa Veterinria Brasileira 32(1):49-60. Curso de Ps-graduao em Cincias Veterinrias, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropdica, RJ 97105-900, Brazil. E-mail: tokarnia@ufrrj.br Spontaneous envenoming by snake bite is described as a cause of death in domestic animals. However, there are just few information about the species of snake involved, course, and clinicopathological and laboratory findings. Thus, this research aimed to determine the clinicopathological and laboratory changes induced by Bothrops moojeni and Bothropoides neuwiedi snake venoms in sheep, in order to provide additional information regarding snakebites in farm animals and to help establish the diagnosis of this condition. The lyophilized snake venoms were dissolved in 1mL saline solution and administered subcutaneously into the right face of four sheep, at doses of 0.41mg/kg and 0.82mg/kg of B. moojeni venom for two sheep, and 1.0mg/kg of B. neuwiedi venom for two other sheep. Only the sheep which had received the lowest dose (0.41mg/kg) survived, but developed severe clinical signs, similar to the others. First clinical signs were observed about 10 minutes after inoculation in all sheep. The course varied from 2 to 4 days. The clinical findings in all sheep were characterized by apathy, marked swelling of the face, the ventral neck and esternal region, and mild swelling of the proximal portion of the forelimbs, as well as increased bleeding time, tachycardia, pale mucous membranes, and large quantity of undigested blood in the intestinal lumen. Laboratory exams showed mainly a reduction in serum protein and increased creatine kinase in all sheep. At necropsy, extensive hematomas were observed in the subcutaneous tissue of the swollen areas. Also petechiae, bruises and mild to moderate hemorrhagic suffusions on the serosa of various organs, and blood within the intestinal contents of the distal rectum were observed. In addition to hemorrhages, the main histopathological changes were necrosis of skeletal muscle fibers and blood vessel walls next to the inoculation site. The swollen areas on face, neck, sternum and limbs of the sheep were due the hematomas.
INDEX TERMS: Snake envenoming, Bothrops moojeni, Bothropoides neuwiedi, sheep.
Recebido em 29 de agosto de 2011. Aceito para publicao em 6 de outubro de 2011. Parte da Dissertao de Mestrado do primeiro autor. 2 Curso de Ps-Graduao em Cincias Veterinrias, rea de concentrao em Sanidade Animal, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (UFRRJ), Seropdica, RJ 23890-000, Brasil. 3 Laboratrio de Patologia Veterinria, Universidade Federal do Pampa (Unipampa), Uruguaiana, RS 97500-970, Brasil.
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4 Departamento de Epidemiologia e Sade Pblica, Instituto de Veterinria, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (UFRRJ), Seropdica, RJ 23890-000, Brasil. 5 Biotrio da Universidade Catlica Dom Bosco (UCDB), Avenida Tamandar 6000, Bairro Jardim Seminrio, Campo Grande, MS 79117-900, Brasil. 6 Depto Nutrio Animal e Pastagem, Instituto de Zootecnia, UFRRJ, Seropdica, RJ. *Autor para correspondncia: tokarnia@ufrrj.br

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Aline Diefenbach et al.

TERMOS DE INDEXAO: Envenenamento ofdico, Bothrops moojeni, Bothropoides neuwiedi, ovinos.

RESUMO.- O envenenamento ofdico espontneo, ou acidente ofdico, descrito como causa de morte em animais domsticos. No entanto, dados concretos relativos ao gnero e espcie de serpente envolvida, evoluo do quadro clnico, e s alteraes clinicopatolgicas desenvolvidas, so escassos. Assim sendo, este trabalho teve como objetivo determinar as alteraes clinicopatolgicas e laboratoriais provocadas pelo veneno de Bothrops moojeni e Bothropoides neuwiedi em ovinos no intuito de fornecer informaes adicionais referentes a acidentes ofdicos em animais de produo, auxiliando o estabelecimento do diagnstico dessa condio. Os venenos liofilizados foram diludos em 1 ml de soluo fisiolgica e administrados a quatro ovinos por via subcutnea na face direita, nas doses de 0,41mg/kg e 0,82mg/kg do veneno de B. moojeni em dois ovinos, e de 1,0mg/kg do veneno de B. neuwiedi em dois ovinos. Apenas o ovino que recebeu a menor dose (0,41mg/kg) sobreviveu, apesar de ter desenvolvido quadro clnico muito severo e semelhante aos demais. Os sinais clnicos iniciaram nos primeiros 10 minutos aps a inoculao em todos os ovinos. O perodo de evoluo variou de dois a quatro dias. O quadro clnico dos quatro ovinos caracterizou-se por apatia, acentuado aumento de volume da face, da poro ventral do pescoo e do peito, leve aumento de volume da poro proximal dos membros anteriores, tempo de sangramento aumentado, taquicardia, mucosas plidas e grande quantidade de sangue no digerido nas fezes. Ao exame laboratorial observou-se principalmente reduo das protenas plasmticas e aumento de creatinaquinase em todos os ovinos. necropsia, foram observados extensos hematomas nas reas correspondentes ao aumento de volume subcutneo. Observaram-se petquias, equimoses e sufuses leves a moderadas na serosa de diversos rgos e acmulo de sangue em meio s fezes na poro final do reto. Alm de hemorragias, a principal alterao histopatolgica observada foi necrose das fibras musculares esquelticas e da parede de vasos, nas reas prximas inoculao do veneno. Nos ovinos deste estudo o aumento de volume, observado na face, pescoo, peito e membros, era constitudo por sangue.

cos fatais parecem ocorrer com maior frequncia (Mndez & Riet-Correa 1995). Para esclarecer os aspectos clinicopatolgicos e laboratoriais do envenenamento por serpentes peonhentas em animais de produo no Brasil, iniciou-se o estudo detalhado dessa condio. Primeiramente foram realizados estudos discutindo-se a importncia de acidentes ofdicos como causa de mortes em bovinos no Brasil (Tokarnia & Peixoto 2006). Estudos experimentais com duas importantes serpentes envolvidas em acidentes com bovinos, Crotalus durissus terrificus (Caudisona durissa terrificus) (Graa et al. 2008) e Bothrops alternatus (Rhinocerophis alternatus) (Caldas et al. 2008) tambm foram desenvolvidos. Experimentos envolvendo outras duas espcies importantes de serpentes peonhentas frequentemente encontradas no Brasil, Bothropoides jararaca e Bothrops jararacussu (Arago et al. 2010) na espcie ovina , tambm foram relatados. No entanto, ainda so necessrias avaliaes que contemplem as caractersticas clinicopatolgicas e laboratoriais do envenenamento por serpentes em animais de produo no Brasil, visto que existem diversas outras espcies de serpentes envolvidas em acidentes com animais. O objetivo desse estudo determinar experimentalmente as alteraes clinicopatolgicas e laboratoriais do envenenamento em ovinos causado por outras duas importantes espcies de serpentes no Brasil, Bothrops moojeni e Bothropoides neuwiedi.

MATERIAL E MTODOS

Foram utilizados quatro ovinos adultos sem raa definida, dois machos com aproximadamente quatro anos e duas fmeas com trs anos. Todos os ovinos foram avaliados clinicamente e encontravam-se em bom estado corporal, com pesos que variaram entre 29 e 45 kg. Dados mais detalhados dos ovinos como o peso, a dose e o tipo de veneno inoculado em cada animal podem ser observados no Quadro 1. Quadro 1. Dados dos ovinos envenenados experimentalmente por veneno de Bothrops moojeni e Bothropoides neuwiedi
Ovino 1 2 3 4 Sexo Idade (ano) 4 4 3 3 Veneno Peso (kg) 45 39 29 32,5 Dose (mg/kg) 0,41 1,0 0,82 1,0

INTRODUO

O envenenamento ofdico espontneo, ou acidente ofdico, descrito como causa de morte em animais domsticos em todas as regies do Brasil (Bicudo 1999, Melo et al. 2004). No entanto, dados concretos relativos ao gnero e espcie de serpente envolvida, evoluo do quadro clnico, e s alteraes clinicopatolgicas desenvolvidas so escassos. Esses fatores favoreceram erros de diagnstico, principalmente no que diz respeito a bovinos. Apenas recentemente foram descritos estudos acerca dos aspectos ps-morte de casos naturais de envenenamento por serpentes em ovinos (Mndez & Riet-Correa 1995, Tokarnia et al. 2008). Atualmente sabe-se que acidentes ofdicos fatais em bovinos so bem menos frequentes do que se acreditava. J com relao equinos, pequenos ruminantes e ces, os acidentes ofdiPesq. Vet. Bras. 32(1):49-60, janeiro 2012

O experimento foi realizado no biotrio do Setor de Anatomia Patolgica, Projeto Sanidade Animal, Embrapa/UFRRJ, Seropdica, RJ. Os animais foram mantidos em baias individuais de alvenaria de 4,0x3,0m e o processamento do material coletado nas necropsias e a confeco de lminas para exame histopatolgico tambm foram realizados no mesmo setor. Inicialmente os ovinos foram tratados contra endoparasitas e ectoparasitas e mantidos em baias cobertas por duas semanas para adaptao ao ambiente. A dieta consistia de capim elefante (Pennisetum purpureum) picado e inteiro, rao comercial peletizada (1% do peso corporal/dia) e gua vontade. Os venenos liofilizados de Bothrops moojeni e Bothropoides neuwiedi foram oriundos do plantel do Biotrio da Universidade Catlica Dom Bosco (UCDB) de Campo Grande, Mato Grosso do Sul. Os venenos foram colhidos de serpentes fmeas por extrao

Macho Macho Fmea Fmea

B. moojeni B. neuwiedi B. moojeni B. neuwiedi

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manual e liofilizados. No momento da utilizao foram pesados em balana eletrnica de preciso e reidratados em 1mL de soro fisiolgico. Aps trinta dias de adaptao foi realizada a primeira etapa do experimento com a inoculao do veneno de Bothrops moojeni e Bothropoides neuwiedi nos Ovinos 1 e 2, com doses de 0,41mg/ kg e 1,0mg/kg, respectivamente. A dose utilizada do veneno de B. moojeni foi estabelecida tendo como base as doses letais para bovinos (Arajo et al. 1963), uma vez que no h informaes acerca da dose letal especfica para ovinos. A dose do veneno de B. neuwiedi foi a mesma utilizada em bovinos (Arajo et al. 1963), e em um ovino (Arajo & Belluomini, 1960, 1962). A inoculao do veneno foi feita por via subcutnea na face direita sobre o msculo masseter aps tricotomia e limpeza da regio. Essa primeira etapa do experimento serviu de parmetro para o envenenamento dos outros dois ovinos (Ovinos 3 e 4), com o objetivo de utilizar o menor nmero possvel de animais na experimentao. Os Ovinos 3 e 4 foram submetidos aos mesmos procedimentos dos Ovinos 1 e 2, porm, a dose do veneno de Bothrops moojeni utilizada foi de 0,82mg/kg, o dobro da inoculada no Ovino 1, pois a dose inicial (0,41mg/kg) no foi letal. Os ovinos foram mantidos em observao constante durante todo o experimento. O exame clnico detalhado foi realizado a cada 2 horas. O procedimento consistiu de mensurao dos parmetros fisiolgicos, incluindo frequncia cardaca, frequncia respiratria, temperatura retal, movimentos ruminais, tempo de perfuso capilar e tempo de sangramento, de acordo com ficha de acompanhamento clnico. Amostras de sangue foram coletadas em frascos com cido etilenodiaminotetra-actico (EDTA) a 10% para anlise de hemograma e em frascos sem EDTA para anlise bioqumica. Adicionalmente foram coletadas amostras de sangue em frascos contendo citrato de sdio para avaliao do coagulograma. Todas as amostras foram coletadas em trs momentos; uma amostra foi coletada poucos instantes antes da inoculao do veneno (T0) em todos os ovinos e mais duas amostras durante a evoluo do quadro clnico, T19 e T29 (Ovino 1), T22 e T29 (Ovino 2), T22 e T26 (Ovino 3) e T22 e T30 (Ovino 4). Logo aps a coleta as amostras foram devidamente identificadas, acondicionadas sob refrigerao a 4C e em seguida enviadas ao laboratrio de patologia clnica no Centro Clnico de Apoio ao Diagnstico Veterinrio, Campo Grande/ RJ, para avaliao. O material foi avaliado atravs de hemograma Eritrograma: eritrcitos (x106/L), hemoglobina (g/dL), Hematcrito (%), VGM (fL), CHGM (%); plaquetometria (/L), protena plasmtica (g/dL), Leucograma - leuccitos totais (L), basfilos, eosinfilos, mielcitos, metamielcitos, neutrfilos bastonetes, neutrfilos segmentados, linfcitos, moncitos, hematoscopia; bioqumica srica - tempo de protrombina (seg), tempo de tromVeneno Ovino (n) 1 2 3 4 Sexo

boplastina parcial ativada (seg), fibrinognio (mg/dL), uria (mg/ dL) e creatinaquinase (CK) (UI/L). As necropsias foram realizadas imediatamente aps a morte dos ovinos. Foram colhidos fragmentos de diversos rgos, incluindo pele com subcutneo e musculatura (regio da inoculao), msculo masseter, e msculo esqueltico em diversas reas de regies distantes ao local da inoculao do veneno; intestinos, linfonodos submandibulares e mesentricos, rmen, retculo, omaso, abomaso, pncreas, adrenais, rins, bexiga, rgo reprodutor, tireoides, pulmes, corao, globo ocular, e encfalo. As amostras foram imediatamente fixadas em formol 10%, com exceo dos fragmentos de msculo, que permaneceram previamente expostos ao ambiente por aproximadamente 2 horas. Aps fixao, os fragmentos foram processados rotineiramente para histopatologia, includos em parafina, cortados em 3-5m e corados pela hematoxilina e eosina (HE).

RESULTADOS

Quadro 2. Dados do delineamento experimental

Peso Dose Dosagem (kg) (mg/kg) (mg) 45 39 29 0,41 1,0 18,45 39 Inoculao data/hora

A dose potencialmente letal do veneno de Bothrops moojeni para bovinos (0,41mg/kg) no foi suficiente para provocar a morte do Ovino 1. O dobro dessa dose (0,82mg/kg) foi letal para o Ovino 3. Os Ovinos 2 e 4 receberam a dose potencialmente letal de Bothropoides neuwiedi (1,0mg/kg) e o quadro foi fatal para ambos os ovinos. Os dados do delineamento experimental, incio dos sinais clnicos e desfecho esto dispostos no Quadro 2. Quadro clnico. Tanto os ovinos que receberam o veneno de Bothrops moojeni (Ovinos 1 e 3) quanto os ovinos que receberam o veneno de Bothropoides neuwiedi (Ovinos 2 e 4) apresentaram quadro clnico semelhante, com incio dos sinais clnicos at os primeiros trinta minutos aps a inoculao do veneno. Entre 11 e 30 minutos todos os ovinos apresentaram apatia, pelos arrepiados e discretos tremores musculares nos membros posteriores. Os Ovinos 1 a 4 apresentaram aumento de volume no local da inoculao do veneno (subcutneo da face direita), que em seguida foi evidente na regio submandibular, bilateralmente na face, nos lbios, regio ventral do pescoo, e por ltimo na regio peitoral (Fig.1). Observou-se ainda leve a moderado aumento de volume na regio proximal nos membros anteriores. Alm disso, todos apresentaram apatia, sonolncia, inapetncia, inquietude, contraes abdominais, mucosas plidas e aumento da frequncia cardaca. Cerca de cinco horas aps a inoculao do veneno o Ovino 1 defecou fezes com consistncia normal e sangue
Incio dos sinais clnicos (hora) 10:35 9:40 9:54 10:45 Desfecho data/hora

Bothrops moojeni Bothropoides neuwiedi Bothrops moojeni Bothropoides neuwiedi

Macho Fmea

Macho

0,82 1,0

23,78 32,5

15/07/2009 10:20 15/07/2009 10:28

Recuperao a Morte 18/07/2009 02:30 Morte 23/07/2009 11:51 Morte 23/07/2009 23:11

Fmea 32,5

22/07/2009 9:29

Apresentou melhora dos sinais clnicos cinco dias aps a inoculao do veneno.

22/07/2009 9:25

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Fig.1. Tumefao submandibular no primeiro dia aps a inoculao do veneno de Bothops moojeni. (A) Cerca de 25 minutos aps a inoculao. (B) Uma hora aps a inoculao. (C) Duas horas aps a inoculao. (D) Duas horas e meia aps a inoculao. Note nas figuras C e D a tumefao ventral do pescoo. (Ovino 3)

no digerido (Fig.2). O mesmo ocorreu com os Ovinos 2 a 4, 7h, 6h e 6h aps a inoculao, respectivamente. Cerca de 15h aps a inoculao o Ovino 1 apresentou gengivorragia; no Ovino 2 pde-se observar leve secreo sanguinolenta na cavidade nasal, 27h aps a inoculao. Cinco dias aps o incio do experimento, o Ovino 1 apresentou regresso dos sinais clnicos e recuperao signifi-

Fig.2. Sangue na regio anal no primeiro dia com cerca de 5 horas aps a inoculao do veneno de Bothops moojeni. No detalhe, sangue recobrindo as fezes. (Ovino 1)
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cativa do quadro geral. Este ovino foi observado por quatro meses sem apresentar nenhum sinal clnico do envenenamento. O Ovino 2, aps quatro dias de evoluo clnica, e os Ovinos 3 e 4, aps 2 dias, apresentaram dificuldade para se levantar e manter o tnus muscular do pescoo e cabea, e quedas que logo evoluiram para decbito esternal e lateral e morte. A frequncia cardaca dos ovinos durante o experimento variou de 56 a 184 batimentos por minuto. A frequncia respiratria variou de 11 a 32 movimentos por minuto. A temperatura retal do Ovino1 foi estvel durante todo o experimento (38,2-39,9C). Houve queda progressiva de temperatura retal do Ovino 2 a partir do T58 (37,7C) at T62 (36,6C), do Ovino 3 a partir do T18 (37,7C) at T26 (34,5C), e do Ovino 4 no T34 (36,4C).Os dados referentes evoluo e principais sinais clnicos esto dispostos no Quadro 3. Hemograma, protenas plasmticas, plaquetas e fibrinognio. Na avaliao do eritrograma verificaram-se valores normais de hematcrito no T0 (tempo zero) para todos os ovinos. Havia policitemia leve no T19 para o Ovino 1. No leucograma verificou-se eosinopenia leve para os Ovinos 1 (T0, T22, T29), 2 (T22, T29), monocitopenia leve para os Ovinos 1 (T0, T22), 2 (T0, T22, T29), e 4 (T22); O Ovino 3 apresentou leucopenia leve por linfopenia no T26. E o Ovino 4 apresentou linfocitose discreta no T0.

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Quadro 3. Evoluo e sinais clnicos apresentados pelos ovinos envenenados experimentalmente por Bothrops moojeni e Bothropoides neuwiedi
Ovino 1 Veneno Bothrops moojeni Evoluo clnica 4 dias HIb: 10h 20min 15/07/10 Sinais clnicos 1 dia PIa: apatia leve, inchao da face, pescoo, peito e membros anteriores, inapetncia, tremores discretos dos membros posteriores, fezes com sangue, aumento do tempo de sangramento, FCc entre 64 e 68 batimentos/min. 2 dia PI: alerta, leve reduo do volume da face, come normalmente, hemorragia leve na gengiva, eliminao de jatos de sangue com poucas fezes, FC entre 64 e 120 batimentos/min. 3 dia PI: alterna entre alerta e apatia moderada, come normalmente, tremores discretos dos membros posteriores, fezes com pouco sangue, conjuntiva ocular plida, FC entre 132 e 184 batimentos/min. 4 dia PI: alerta, come bem, fezes sem sangue, conjuntiva ocular plida, FC entre 156 e 172 batimentos/min. Recuperou-se cinco dias aps a inoculao do veneno. 1 dia PI: apatia leve, inchao da face, pescoo, peito e membros anteriores, inapetncia, salivao moderada, fezes com sangue, aumento do tempo de sangramento, FC entre 44 e 92 batimentos/ min. 2 dia PI: apatia acentuada, pequena quantidade de sangue na narina, eliminao de sangue com poucas fezes, bebe muita gua, FC entre 56 e 160 batimentos/min. 3 dia PI: apatia acentuada, come pouco, tremores discretos dos membros posteriores, fezes pastosas e com sangue, conjuntiva ocular plida, FC entre 140 e 172 batimentos/min, discreto aumento da FRd, TRe atingiu 37C. 4 dia PI: conjuntiva ocular plida, FC entre 160 e 196 batimentos/min, TR 36C, fraqueza, quedas, morte (2h30min). 1 dia PI: apatia moderada, inchao da face, pescoo, peito e membros anteriores, inapetncia, fezes com sangue, tremores discretos dos membros posteriores, aumento do tempo de sangramento, FC entre 68 e 132 batimentos/min. 2 dia PI: apatia acentuada, fezes com sangue, FC entre 120 e 188 batimentos/min, TR caiu de 38,0C para 34,5C, fraqueza, quedas, morte (11h51min). 1 dia PI: apatia moderada, inchao da face, pescoo, peito e membros anteriores, salivao moderada, inapetncia, fezes com sangue, tremores discretos dos membros posteriores, aumento do tempo de sangramento, FC entre 72 e 92 batimentos/min. 2 dia PI: apatia acentuada, bebe muita gua, fezes com sangue, FC entre 88 e 184 batimentos/min, TR caiu de 38,9C para 36,4C, fraqueza, desequilbrio, quedas, morte (23h11min).

Bothropoides neuwiedi

4 dias HI: 10h 28min 15/07/10

3 4

Bothrops moojeni Bothropoides neuwiedi

2 dias HI: 9h 29min 22/07/10

2 dias HI: 9h 25min 22/07/10

Verificou-se reduo de protenas plasmticas em todos os ovinos, nos tempos T19 e T29 para o Ovino 1, nos tempos T22 e T29 para o Ovino 2, nos tempos T22 e T26 para o Ovino 3, e nos tempos T22 e T30 para o Ovino 4. A contagem de plaquetas apresentou valores normais de referncia para os Ovinos 1-3, o Ovino 4 apresentou queda significativa para 177.000/L (valores normais: 300.000-800.000/L). Observaram-se ainda aglomerados plaquetrios no tempo T19 para o Ovino 1, discreto aumento da contagem de plaquetas no T22 para o Ovino 3 e no T0 para o Ovino 4; discreta reduo no T30 para o Ovino 4. O fibrinognio estava dentro dos valores de referncia para a espcie em todos os ovinos. Bioqumica srica. Todos os animais apresentaram aumento gradativo e significativo nos nveis de creatinaquinase (CK) a partir da segunda avaliao da bioqumica srica. Os valores de CK variaram entre 306 UI/L e 2.880 UI/L entre a segunda e a ltima avaliao. Todos os ovinos apresentaram nveis de uria levemente elevados com relao aos valores de referencia para a espcie (8-20mg/dL) na primeira avaliao. A partir da segunda avaliao laboratorial, observou-se que todos os ovinos j apresentavam aumento significativo dos nveis de uria. Os valores variaram entre 32mg/dL e 113mg/dL entre a segunda e a ltima avaliao srica da uria. Avaliao da coagulao sangunea. Nos quatro ovinos o tempo de sangramento (TS) no T0 foi de aproximadamente 2 min. Duas horas aps a inoculao (T2) todos os ovinos apresentaram leve aumento no tempo de sangramento, com exceo do Ovino 4, porm ainda dentro dos nveis normais para a espcie ovina (at 3 min). J no T4

Ps-inoculao, b Hora da inoculao, c Frequncia cardaca, d Frequncia respiratria, e Temperatura retal.

todos os ovinos tinham tempos de sangramento elevados que variaram entre 4 e 8 min que progrediram para tempos entre 12 e 47 min no T10. A partir do T10 o sangramento provocado pelo teste somente era contido aps aplicao de torniquete em todos os ovinos. Os tempos de ativao da protrombina (TP) permaneceram dentro dos valores para a espcie ovina (22-55 seg) em todas as avaliaes dos Ovinos 1 e 2. Nos Ovinos 3 e 4 o TP atingiu nveis aumentados j a partir da primeira avaliao ps-inoculao (T22) que corresponderam a >2 min e 1,13 min respectivamente; e atingiram mximo de > 2 min no T26 (Ovino 3) e no T30 (Ovino 4). O tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA) permaneceu normal no Ovino 1 (mdia = 52 seg) em todas as avaliaes (valor de referencia = 44-64). O Ovino 2 apresentou aumento no T22 (85 seg), reduzindo levemente no T29 (78 seg). Os Ovinos 3 e 4 apresentaram TTPA acima de dois minutos a partir do T22 (primeira avaliao ps-inoculao). Achados de necropsia. Os principais achados corresponderam a extensos hematomas subcutneos desde a face at a regio ventral do trax, envolvendo os membros torcicos. Nas reas onde os hematomas eram mais acentuados, ou seja, reas prximas ao ponto de inoculao observaram-se msculos vermelho-escuros. Havia inmeras petquias no peritnio; na serosa do rmen e do omaso observavam-se petquias e sufuses. Observaram-se ainda, petquias e equimoses na mucosa do abomaso, e discretas petquias na poro final do intestino grosso, com sangue e/ou cogulos de sangue principalmente na poro final do reto. O Ovino 2 apresentou mucosas plidas, colorao escura na gengiva e discreta secreo sanguinolenta na nariPesq. Vet. Bras. 32(1):49-60, janeiro 2012

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na. Os Ovinos 2 a 4 apresentaram aumento de volume das orelhas, que ao corte fluiu sangue, e presena de sangue ao redor do nus. Todos os ovinos necropsiados (Ovinos 2 a 4) apresentaram acentuada hemorragia bilateral no tecido subcutneo (hematoma) desde o mento at o abdome (Fig.3), abrangendo parte dos arcos costais. Alm de hematomas extensos na musculatura da face, de toda a regio cervical ventral, peitoral e esternal (Ovinos 2 a 4), abrangendo parte dos arcos costais (Ovino 4) e poro abdominal anterior (Ovino 3) (Fig.4). No subcutneo dos membros torcicos foram observados hematomas acentuados.

Todos os ovinos apresentaram petquias, equimoses e sufuses no omento, no bao (subcapsular), na serosa do rmen, do omaso e na mucosa do abomaso (Fig.5), bem como na serosa de algumas pores do intestino delgado (duodeno, jejuno e leo). No reto foram observadas fezes em meio grande quantidade de sangue no digerido. Na faringe, laringe, esfago e traqueia, bem como no tecido adjacente s tireoides observaram-se extensos hematomas (Ovinos 2 a 4). Nesses mesmos ovinos tambm foram visualizadas equimoses subpleurais nos pulmes e no assoalho da cavidade torcica (Ovinos 2 e 4). Observaram-se equimoses e sufuses no epicrdio e no endocrdio nos Ovinos 2 a 4. Apenas no Ovino 4 foram observadas pequenas reas de hemorragia no miocrdio. No Ovino 2 foram encontradas algumas equimoses no parnquima testicular. Nos Ovinos 3 e 4 foram observados fetos com idade aproximada de 2-3 meses. Nestes foram visualizadas poucas equimoses na pele da cabea e na regio cervical. Algumas reas entre os placentomas estavam hemorrgicas nos dois ovinos (Ovinos 3 e 4) (Fig.6). Achados histopatolgicos. Todas as reas de hemorragia observadas macroscopicamente nos trs ovinos ne-

Fig.3. Grande hematoma no tecido subcutneo e muscular que se estende do mento at a regio ventral do esterno. (Ovino 3)

Fig.5. Mltiplas petquias e equimoses na mucosa do abomaso, aps inoculao do veneno de Bothropoides neuwiedi. (Ovino 4).

Fig.4. Acentuada hemorragia no tecido subcutneo e muscular na regio esternal e regio cranial do abdmen ventral, aps inoculao do veneno de Bothropoides neuwiedi. (Ovino 2)
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Fig.6. tero com feto. Moderada hemorragia entre a mucosa uterina e o crion nas reas entre os placentomas. (Ovino 3)

Envenenamento experimental por Bothrops moojeni e Bothropoides neuwiedi em ovinos

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cropsiados foram confirmadas na avaliao histopatolgica (Quadro 4).

Quadro 4. Achados macroscpicos e microscpicos dos ovinos envenenados experimentalmente por Bothrops moojeni e Bothropoides neuwiedi
Ovino Achados macroscpicos (veneno) 2 Extensos hematomas subcut(Bothropoides neos; comprometimento musneuwiedi) cular prximo ao ponto de inoculao; petquias, equimoses, e sufuses no peritnio, na serosa do omaso e do rmen, na mucosa do abomaso, no endocrdio e no parnquima testicular; sangue/cogulos na poro final do reto; sangue na narina. Extensos hematomas subcutneos; comprometimento muscular prximo ao ponto de inoculao; petquias, equimoses e sufuses no peritnio, na serosa do omaso e do rmen, na mucosa do abomaso, no endocrdio; sangue/ cogulos na poro final do reto; prenhez com cerca de 2 meses. 4 Extensos hematomas subcut(Bothropoides neos; comprometimento musneuwiedi) cular prximo ao ponto de inoculao; petquias, equimoses, e sufuses no peritnio, na serosa do omaso e do rmen, na mucosa do abomaso, no endocrdio; sangue/ cogulos na poro final do reto; prenhez com cerca de 3 meses. 3 (Bothrops moojeni) Achados microscpicos

Hemorragia difusa acentuada e necrose hialina e flocular de fibras musculares na regio da inoculao e proximidades. Trombos em veias, vnulas e arterolas; necrose moderada de clulas epiteliais de tbulos contorcidos proximais e distais da cortical renal; cilindros hialinos; necrose de coagulao de pequenos grupos de fibras musculares lisas da parede do rmen; moderada degenerao macro e microvacuolar no fgado; hemossiderose no bao. Hemorragia difusa acentuada e necrose hialina e flocular de fibras musculares na regio da inoculao e proximidades. Trombos em veias, vnulas e arterolas; necrose moderada de clulas epiteliais de tbulos contorcidos proximais e distais da cortical renal; leve degenerao macro e microvacuolar no fgado. Hemorragia difusa acentuada e necrose hialina e flocular de fibras musculares na regio da inoculao e proximidades. Trombos em veias, vnulas e arterolas; leve degenerao macro e microvacuolar no fgado.

Fig.7. Msculo masseter com necrose hialina e flocular acentuada de fibras musculares esquelticas e hemorragia intramuscular. Note a tumefao e o aumento da eosinofilia das fibras musculares necrticas; algumas delas apresentam citoplasma fragmentado e neutrfilos no interior. HE, obj.40x. (Ovino 3)

Alguns achados histopatolgicos foram semelhantes entre os ovinos, principalmente no local da inoculao do veneno e nas reas mais prximas. Na regio da inoculao a principal alterao histolgica foi hemorragia difusa acentuada, alm de congesto e hiperemia acentuadas da derme superficial e profunda. Na musculatura esqueltica correspondente ao local da inoculao e da regio adjacente (msculos faciais e masseter) observou-se necrose hialina e flocular de fibras musculares (Fig.7). Alm disso, hemorragia multifocal acentuada envolvendo o endomsio, perimsio e epimsio de msculos mais externos da face, do masseter e do pescoo. Em todos os ovinos avaliados a hemorragia no local da aplicao encontrava-se associada a vasos sanguneos com necrose ou disrupo, principalmente da parede de veias e vnulas e em menor frequncia da parede de artrias e arterolas. Todos os ovinos apresentaram trombos em veias, vnulas e arterolas nas reas prximas inoculao (Fig.8). O Ovino 4 apresentou maior nmero de trombos aderidos a parede de vasos sanguneos. Em muitos vasos dessa regio era possvel observar necrose de clulas endoteliais e da camada mdia de arterolas e de veias. O Ovino 3 apresentou leve hemorragia no epineuro e perineuro de nervo perifrico da face. Foi observado

Fig.8. Msculo facial (local da inoculao) com acentuada hemorragia intramuscular que circunda vnulas com necrose da parede (setas) e acentuada necrose hialina de fibras musculares esquelticas com leve infiltrado neutroflico. HE, obj.10x. (Ovino 3)

moderado infiltrado, predominantemente neutroflico com raros linfcitos, plasmcitos e histicitos prximo s reas de necrose de fibras musculares esquelticas em todos os animais avaliados (Ovinos 2 a 4). O Ovino 4 apresentou infiltrado neutroflico mais intenso que os demais. Os Ovinos 2 e 3 apresentaram necrose moderada de clulas epiteliais de tbulos contorcidos proximais e distais da regio cortical renal (Fig.9). A necrose foi caracterizada pelo aumento de eosinofilia do citoplasma e de picnose, cariorrexe e/ou carilise de clulas tubulares, bem como pequena quantidade de protena no citoplasma de clulas epiteliais de tbulos urinferos. Foram observados tambm cilindros hialinos na luz de tbulos renais, especialmente da regio medular, em grande quantidade no Ovino 2. Raros cilindros hialinos foram observados nos Ovinos 3 e 4, alm de moderada congesto de vasos na regio cortical e medular e de capilares do tufo glomerular, e material eosinoflico amorfo (protena de vazamento) no espao de Bowman.
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Fig.9. Rim de Ovino 2, com necrose de coagulao de clulas epiteliais de tbulos (setas) proximais e distais e cilindro hialino na luz de um tbulo urinfero (*). HE, obj.20x.

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No corao foram visualizadas hemorragias subepicrdicas multifocais leves a moderadas (Ovinos 2 a 4), que se estendiam ao miocrdio em apenas um animal (Ovino 4), leve congesto de alguns vasos no miocrdio (Ovino 4) e leve infiltrado linfoplasmocitrio e neutroflico junto s reas de hemorragia (Ovinos 2 e 4). Em algumas reas do intestino delgado verificou-se leve hiperemia, congesto na submucosa com tumefao de clulas endoteliais (Ovinos 2 a 4), bem como edema leve da regio submucosa. reas de hemorragia e leve infiltrado neutroflico puderam ser observados prximos a vasos hipermicos no Ovino 3. No intestino grosso de todos os ovinos foi possvel observar hiperemia e edema leves na submucosa, e contedo intestinal com grande quantidade de eritrcitos ntegros. Todos os animais apresentaram hemorragia focalmente extensa na submucosa do rmen. O Ovino 2 apresentou ainda necrose de coagulao de pequenos grupos de fibras musculares lisas da parede do rmen, estas com aumento da eosinofilia do citoplasma, picnose, carilise e cariorrexe de algumas das fibras acometidas. No fgado de todos os ovinos observou-se leve vacuolizao macrovacuolar e microvacuolar de hepatcitos predominantemente da regio centrolobular. Os Ovinos 2 e 3 apresentaram leve bilestase. Em dois ovinos (Ovinos 3 e 4) foi observada congesto com dilatao leve a moderada de veias centrolobulares e sinusoides hepticos; havia leve infiltrado neutroflico e linfoplasmocitrio em espaos periportais (Ovino 4) e aumento dos neutrfilos em sinusoides (Ovino 3). Tambm foi observada, no Ovino 2, uma rea focalmente extensa de hemorragia no interstcio entre a vescula biliar e o fgado, bem como na submucosa da vescula. No bao do Ovino 2 foi observada leve hemossiderose livre no parnquima linfoide e eritrofagocitose no citoplasma de macrfagos, tambm visualizada no Ovino 4, alm de leve congesto (Ovino 3). Nos Ovinos 2 a 4 observaram-se linfonodos submandibulares com moderada a acentuada eritrofagocitose e sangue livre nos seios subcapsulares e medulares, alguns seios estavam oblite-

rados por fagcitos com citoplasma repleto de eritrcitos ntegros (Ovinos 2 a 4), bem como dilatao de vasos linfticos prximos a cpsula linfoide (Ovino 3). Dois dos ovinos (Ovinos 3 e 4) apresentaram hemossiderose leve e moderada, respectivamente, nos seios medulares dos linfonodos submandibulares. Nos pulmes havia pequenas reas multifocais de hemorragia prximas serosa (Ovino 2) e leve hiperemia e congesto com leve espessamento de septos interalveolares (Ovinos 3 e 4). Foram observadas reas hemorrgicas multifocais leves no interstcio testicular do Ovino 2. Os Ovinos 3 e 4, que encontravam-se prenhes, foram encontrados placentomas com acentuada congesto dos vasos sanguneos placentrios maternos e hemorragias multifocais na interface carncula-cotildone que se estendia entre a mucosa do tero e da placenta. No sistema nervoso central (crtex frontal, ncleos da base, mesencfalo, tlamo, hipocampo e pednculos cerebelares) havia leve hiperemia e congesto de arterolas e vnulas da neurpila (Ovinos 2 e 3) com leve tumefao de clulas endoteliais (Ovino 2). O Ovino 3 apresentou tambm congesto de vasos das leptomeninges (Ovino 3). Os Fetos 1 e 2 provenientes dos Ovino 3 e 4, respectivamente, apresentaram necrose multifocal moderada de tbulos urinferos do crtex renal com congesto difusa moderada de veias, vnulas, e capilares dos tufos glomerulares; observaram-se ainda reas multifocais de hemorragia principalmente na regio cortical prximo as reas de necrose. Tanto a necrose de tbulos urinferos como a hemorragia foram mais acentuadas no Feto 2 (Fig.10). O fgado de ambos os fetos continha reas multifocais de hemorragia subcapsular, bem como no parnquima, sempre associadas a vasos com disrupo da parede. Adicionalmente, foi observada moderada congesto de veias, vnulas e sinusoides hepticos nos dois fetos. No pulmo havia congesto multifocal moderada (Fetos 1 e 2) e reas multifocais de hemorragia (Feto 1).

Fig.10. Crtex renal de Feto 2 do Ovino 4, com necrose de coagulao de clulas epiteliais de tbulos urinferos e rea de hemorragia no interstcio renal entre os tbulos. HE, obj.40x.

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DISCUSSO
A via e o local de inoculao eleitos para a aplicao do veneno nos quatro ovinos foram definidos com base nos casos espontneos de envenenamento, pois normalmente as presas das serpentes no chegam a atingir a musculatura dos animais, devido espessura de suas peles. A face frequentemente envolvida devido aos hbitos de pastejo dos ovinos, que so rasteiros e frequentemente o fazem em campos sujos, coincidindo com possveis refgios de serpentes (Mndez & Riet-Correa 1995). Inicialmente foram utilizadas as doses de 0,41 mg/kg para B. moojeni, descrita como letal para bovinos por via subcutnea (Arajo et al. 1963) e 1,0mg/kg para Bothropoides neuwiedi, descrita como letal para bovinos por via subcutnea (SC) (Arajo et al. 1963), e tambm indicada como letal para um ovino inoculado por via intramuscular (IM) (Arajo & Belluomini 1960, 1962). As doses foram definidas tendo como base as doses letais para bovinos via SC, uma vez que no h descrio de doses letais e no-letais para ovinos por essa via. Observou-se que a dose inicial de 0,41mg/kg da peonha de B. moojeni no foi suficiente para provocar a morte do Ovino 1, embora este animal tenha desenvolvido um quadro clnico muito severo. Dessa forma optou-se por duplicar a dose para 0,82mg/kg, esta letal para o Ovino 3. Conforme j descrito em casos naturais (Tokarnia et al. 2008) e experimentais (Arajo & Belluomini 1960, 1962, Caldas et al. 2008, Arago et al. 2010) do envenenamento botrpico em animais observou-se rpido aumento de volume na regio da inoculao. No envenenamento pela peonha das serpentes Rhinocerophis alternatus e Bothropoides jararaca (Caldas et al. 2008, Tokarnia et al. 2008, Arago et al. 2010) o aumento de volume era constitudo por sangue (hemorragia), semelhante ao descrito no presente trabalho, diferentemente do que ocorreu nos experimentos realizados com Bothrops jararacussu, nos quais se observou que o aumento de volume era constitudo principalmente por edema (Arago et al. 2010). A hemorragia ocorreu por consequncia da acentuada necrose e disrupo da parede de vasos na regio da inoculao do veneno, e pelo aumento do tempo de sangramento, decorrentes da intensa ao dos venenos. Todos os ovinos desse experimento apresentaram dificuldade para ingerir gua e apreender alimento, provavelmente pela dor e pelo aumento de volume dos lbios. Sinais clnicos como dor e grande aumento de volume no local da inoculao do veneno so descritos tanto em casos naturais (Grunert & Grunert, 1969, Mndes & Riet-Correa 1995, Menezes 1995, 1996) quanto experimentais (Arajo & Belluomini 1960, 1962, Caldas et al. 2008) de envenenamento por serpentes do antigo gnero Bothrops, independente da espcie acometida. A simples manipulao dos ovinos no momento da conteno para exame clnico, favorecia/acelerava o aparecimento da tumefao devido leso vascular e consequente hemorragia, fato observado tambm por outros autores (Novaes et al. 1986, Caldas et al. 2008). As coletas de sangue da veia jugular e as punes nas orelhas (mensurao do tempo de sangramento) induziam rpido aumento de volume e

sangramento logo aps ou durante os procedimentos. Essas observaes tambm foram feitas em experimentos com bovinos (Caldas et al. 2008) e em experimentos com ces (Prez et al. 1997, Santos et al. 2003). Estas alteraes esto relacionadas com o aumento do tempo de sangramento e com o dano vascular grave, decorrentes da ao dos venenos. Todos os ovinos apresentaram sonolncia. Esse comportamento tambm pode ser interpretado como depresso e fraqueza, decorrentes da hipotenso e da dor (Radostits et al. 2000). O aumento da frequncia cardaca, observado em todos os animais, pode ter sido determinado pela dor e pela hipovolemia. A frequncia respiratria de todos os ovinos manteve-se normal, exceto nos momentos que precediam a morte, que ocorria possivelmente pelo quadro de choque por hipovolemia. A atonia ruminal observada em todos os ovinos foi decorrente, principalmente, da anorexia desenvolvida durante o quadro clnico. Essa condio leva diminuio do preenchimento ruminal, que diminui as informaes excitatrias para a musculatura da parede do rmen, levando hipomotilidade (Smith 2006). A temperatura retal manteve-se nos parmetros fisiolgicos em todos os animais, porm, havia queda acentuada pouco antes da morte. A hipotermia um dos fatores que acompanham o choque hipovolmico, o que pode ter contribudo para a morte dos ovinos (Radostits et al. 2000). Em bovinos (Grunert & Grunert 1969) e equinos (Raposo et al. 2000, 2001) naturalmente envenenados, e em bovinos (Caldas et al. 2008) e ovinos (Arajo & Belluomini, 1960, 1962, Arago et al. 2010) experimentalmente envenenados descrito sangue no digerido nas fezes (hematoquesia), achado tambm observado em todos os animais deste experimento (Ovinos 1 a 4). A presena de sangue no digerido nas fezes resultado de hemorragia no trato intestinal distal causado pela movimentao do contedo intestinal ou pelo simples atrito durante o exame retal (Smith 2006). A quadro de gengivorragia apresentado pelo Ovino 1 e o sangue na narina do Ovino 2 so alteraes que podem estar relacionadas ao acentuado dano em vasos dessas regies; sendo estas bastante irrigadas, hemorragias poderiam facilmente ocorrer secundrias a mastigao e ao ranger de dentes ou pela manipulao. Todos os ovinos apresentaram ranger de dentes. Esse sinal clnico pode ser indicativo de estresse (Radostits et al. 2000). O tempo de evoluo do quadro clnico divergiu entre os Ovinos 1 e 3 (Bothrops moojeni) e Ovinos 2 e 4 (Bothropoides neuwiedi). Os Ovinos 3 e 4 (fmeas) tiveram evoluo clnica duas vezes mais rpida do que o tempo apresentado pelos Ovinos 1 e 2 (machos). Essa diferena provavelmente ocorreu pelo fato das fmeas estarem prenhes. Visto que os Ovinos 2 e 4 (macho e fmea prenhe, respectivamente) receberam a mesma dose do veneno de Bothropoides neuwiedi. No caso dos Ovinos 1 e 3, essa diferena foi determinada tambm pela dose administrada, que foi no-letal para o Ovino 1 e, o dobro e letal para o Ovino 3. possvel que a mesma dose utilizada no Ovino 1 fosse letal para o Ovino 3, uma vez que este ltimo encontrava-se prenhe.
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Na avaliao do eritrograma os valores normais de hematcrito observados diferem de outros ovinos submetidos a inoculao do veneno de Bothropoides jararaca e Bothrops jararacussu, que provocaram moderada anemia normoctica normocrmica (Arago et al. 2010), tambm observada no envenenamento por Bothrops alternatus (Rhinocerophis alternatus) em bovinos (Caldas et al. 2008). Em todos os ovinos, apesar do quadro hemorrgico, no houve diminuio do hematcrito, do volume globular mdio e nem da concentrao de hemoglobina. H casos em que pode haver retardo na queda do hematcrito aps a hemorragia, por contrao esplnica, que pode aumentar temporariamente o nmero de hemcias circulantes e o hematcrito atinge valores mais baixos aps 12-24h da hemorragia (Radostits et al. 2000). A palidez das mucosas foi secundria a rpida diminuio do volume total de sangue (hipovolemia), o que possivelmente contribuiu para falncia circulatria perifrica e anemia (Radostits et al. 2000). O discreto aumento do hematcrito, observado nos Ovinos 1 e 2, ocorreu devido hemoconcentrao por desidratao. No leucograma dos ovinos foram observadas alteraes leves e pouco significativas, como discreta leucopenia, caracterizada por eosinopenia, e monocitose. No foi possvel estabelecer a causa da eosinopenia apresentada pelos ovinos. Esse pode ser inespecfico para a condio pois animais clinicamente sadios podem conter poucos eosinfilos, mas pode ter ocorrido secundariamente ao aumento de corticosteroides endgenos, ou ainda aos processos inflamatrios ativos (Smith 2006). A linfopenia, observada no Ovino 4, pode estar associada tambm ao estresse (Smith 2006). As protenas plasmticas apresentaram-se moderadamente diminudas em todos os ovinos, conforme descrito em trabalhos anteriores (Arago et al. 2010) no envenenamento por Bothropoides jararaca. Nos casos em estudo as protenas plasmticas estavam diminudas provavelmente pela perda secundria ao aumento da permeabilidade vascular, perda intestinal e renal (Smith 2006). A perda aguda de sangue no causa inicialmente mudana no volume globular (VG) ou na protena plasmtica total, embora a rpida mobilizao do fluido extracelular para manter o volume sanguneo circulante cause declnio do VG e da protena plasmtica entre 12 e 24 horas. A gravidade da perda de sangue pode ser parcialmente mascarada pela contrao esplnica (Smith 2006). Quanto contagem de plaquetas observaram-se valores normais para os Ovinos 1 a 3. Diferentemente do quadro evidenciado em humanos (Barraviera 1999), em bovinos (Caldas et al. 2008), e em ovinos (Arago et al. 2010), que cursa com trombocitopenia. Esse achado estava presente na avaliao do Ovino 4. Todos os ovinos apresentaram variaes na contagem de plaquetas, porm, dentro dos valores de referncia para a espcie, exceto o Ovino 4, para o qual a contagem ficou um pouco abaixo do valor de referncia. Os nveis de fibrinognio permaneceram normais, diferentemente do observado em ovinos envenenados por Bothropoides jararaca e Bothrops jararacussu (Arago et al. 2010) e do envenenamento descrito em humanos (Barra-

viera 1999) e em ces (Prez et al. 1997). O fibrinognio aumentado na doena inflamatria ativa, e sua reduo pode ser resultado do consumo aumentado. No entanto, o aumento compensatrio na produo de fibrinognio mascara o seu consumo aumentado (Smith 2006), e possivelmente foi um dos motivos de termos observado valores normais de fibrinognio. Todos os ovinos apresentaram acentuado aumento nos nveis de creatinaquinase (CK), que um indicador altamente sensvel de dano muscular. A elevao persistente da CK sugere processo resultante de atividade e continuidade da leso muscular (Smith 2006). Quanto maior o tempo em que o individuo fica em choque, maiores sero as leses tissulares e os nveis de CK (Smith 2006), fato observado no Ovino 2 e semelhante a outros casos naturais e experimentais de envenenamento por serpentes do gnero Bothrops e Bothropoides em humanos e animais (Caldas et al. 2008, Arago et al. 2010). Os nveis de uria estavam igualmente aumentados em todos os ovinos. Essa elevao pode estar relacionada com alteraes no fluxo sanguneo renal, causadas por diminuio do volume efetivo de lquido circulante (hipovolemia). Essa situao ocorre com frequncia em animais com hemorragias acentuadas, animais debilitados e desidratados (Smith 2006). Em casos em que h um comprometimento renal suficiente para provocar a reduo da taxa de filtrao glomerular ocorre azotemia, ou seja, aumento dos nveis de uria plasmtica (Alpers 2005) observado nos animais desse estudo. O tempo de sangramento estava aumentado em todos os animais, principalmente, pouco antes da morte. Esta alterao foi observada tanto em humanos (Ribeiro & Jorge 1997) quanto em bovinos (Menezes 1995, 1996, Caldas et al. 2008), caninos (Takahira 1996) e ovinos (Arago et al. 2010). O tempo de ativao da protrombina (TAP) e tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA) estavam acentuadamente aumentados. O TAP se torna aumentado quando o nvel de fibrinognio cai abaixo de 100 mg/dL ou quando h deficincia acentuada/consumo de protrombina e/ ou fatores de coagulao V, VII e X (Smith 2006), ou fibrinognio (Aster 2005). Geralmente, o consumo aumentado dos fatores causado por coagulao intravascular disseminada (CID), que tambm causa TTPA prolongado (Smith 2006). A avaliao do TTPA examina o funcionamento da via intrnseca da coagulao e sensvel deficincia ou atividade anormal dos fatores VIII, IX, XI e XII, que nesse caso, ocorre por ao do veneno (Smith 2006). Os ovinos que receberam veneno de Bothrops moojeni e Bothropoides neuwiedi neste trabalho, tambm apresentaram extensas reas hemorrgicas no tecido subcutneo, que se estendiam do focinho at ventralmente a regio esternal e tambm aos membros torcicos. As hemorragias intramusculares ocorreram principalmente bilateralmente na face e pescoo. J nos experimentos realizados em bovinos inoculados por via subcutnea com o veneno de Bothrops alternatus (Rhinocerophis alternatus), as hemorragias intramusculares eram restritas ao local de inoculao (Caldas et al. 2008). O aumento de volume local, no s em bovinos, mas tambm em humanos e em outras espcies de mamferos

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foi descrito em outros estudos como edema (Arajo et al. 1963, Novaes et al. 1986, Menezes 1995, 1996, Prez et al. 1997, Ribeiro & Jorge 1997, Barraviera 1999, Bicudo 1999). Isso decorria do fato de no serem feitas avaliaes ps-morte. No caso do envenenamento por Bothrops moojeni e Bothropoides neuwiedi trata-se de acentuada hemorragia subcutneas e intramusculares nos locais prximos da inoculao, ou seja, hematomas, onde h muito derramamento de sangue. As desordens hemorrgicas so causadas pelas aes coagulantes e hemorrgicas do veneno. A ao coagulante provocada por substncias que causam coagulao do fibrinognio e so ativadoras do fator X e da protrombina, podem levar a um quadro de coagulao intravascular disseminada (CID) com formao de micro-cogulos na rede capilar. A ao hemorrgica causada por fatores hemorrgicos que atuam provocando lise de clulas endoteliais dos capilares (Mndez & Riet-Correa 2007). Os achados microscpicos caracterizados por necrose tubular aguda observada nos rins pode ser consequncia da exposio nefrotoxinas contidas no veneno ou nefropatia vasomotora por dficit de volume intravascular grave (Alpers 2005, Smith 2006). No caso do envenenamento por serpentes, estudos em ratos com ao do veneno de Bothrops moojeni concluram que h efeito nefrotxico direto em clulas tubulares renais (Boer-Lima et al. 1999). As leses vasculares acentuadas tiveram influncia dominante no que se refere formao de trombos na regio de inoculao nos animais desse experimento. No entanto, o endotlio no necessita estar lesado ou rompido para contribuir no desenvolvimento de trombos; qualquer perturbao no equilbrio dinmico do endotlio pode influenciar os eventos de coagulao (Aster 2005,Mitchell 2005). A necrose coagulativa de fibras musculares nas adjacncias do local de inoculao pode estar associada hipxia celular ocasionada pela intensa hemorragia, que impede a adequada oxigenao dos tecidos nessa rea (Pai & Santo Neto 1999), ou pode ser decorrente do efeito direto dos fatores miotxicos do veneno. O veneno de serpentes, como B. moojeni e B. neuwiedi, possui vrias miotoxinas que provocam dano nas clulas musculares (miotoxinas com estrutura de fosfolipase A2). A mionecrose causada pela ao direta das miotoxinas na membrana plasmtica das clulas musculares e, indiretamente pela isquemia decorrente das alteraes na microvasculatura, induzidas pela liberao de substncias vasoativas, como bradicinina e histamina, que causam intensa reao local, como edema, congesto, hemorragia e necrose (Mndez & Riet-Correa 2007). A leso vascular tambm foi descrita em camundongos inoculados com o veneno de Bothropoides jararaca, Bothrops jararacussu e B. alternatus (Rhinocerophis alternatus) (Queirz & Petta 1984). A hemossiderose e a eritrofagocitose observadas nos linfonodos sugerem dano aos eritrcitos e intensa drenagem destes, decorrente da intensa hemorragia promovida pelo veneno na regio da cabea e pescoo. As alteraes observadas no rmen possivelmente contriburam para a queda de motilidade do rgo. A dor, especialmente abdominal, um estmulo para que os receptores de dor aumentem o tnus simptico e provoquem inibio dos centros gstricos, o que resulta em queda de

motilidade ruminal. Por outro lado, a falha na contratilidade da musculatura lisa tambm contribui para a disfuno motora ruminal (Smith 2006). Existem muitas enfermidades em ruminantes que cursam com manifestaes clnicas semelhantes s verificadas no envenenamento por serpentes dos gneros Bothrops e Bothropoides, por este motivo, muito importante obterem-se informaes detalhadas do histrico e do quadro clinicopatolgico. No que se refere aos aspectos epidemiolgicos, faz-se necessrio o conhecimento da distribuio geogrfica e o habitat das serpentes.

CONCLUSES

O quadro clnico do envenenamento por Bothrops moojeni e Bothropoides neuwiedi, com inoculao subcutnea, caracteriza-se por intensa hemorragia e formao de hematomas na regio da inoculao e proximidades. As doses de 0,82mg/kg para o veneno de Bothrops moojeni e 1,0mg/kg para o veneno de Bothropoides neuwiedi so potencialmente letais para ovinos. Os venenos de Bothrops moojeni e Bothropoides neuwiedi demonstraram efeito nefrotxico para ovinos.
Agradecimentos.- CAPES pelo financiamento do projeto de pesquisa.

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