GUIA PRACTICOS de Botanica y Farmacognosia - 2013

MGua de Laboratorio
Botnica y Farmacognosia

QF Rodrigo Daz Viciedo
QF Lorena Sez Lancien
QF Maite Rodrguez Daz

ANLISIS MACRO Y MICROSCPICO DE DROGAS VEGETALES

Previo a la utilizacin de una droga en teraputica, es necesario realizar ensayos
que permitan su identificacin, detectar sus posibles adulteraciones y observar su estado
de conservacin para que su empleo sea seguro y su calidad permita obtener la eficacia
deseada.
La identificacin de la droga vegetal se realiza mediante ensayos botnicos y analticos.
Los ensayos botnicos son indispensables y sirven de punto de partida para los ensayos
posteriores. Adems, son esenciales para la identificacin de drogas trituradas o
pulverizadas, as como cuando se dispone de una pequea cantidad de material vegetal.

Los ensayos botnicos comprenden el estudio macroscpico y microscpico de las
drogas vegetales.

Descripcin macroscpica

Se refiere a la evaluacin y descripcin de:
1. Caractersticas morfolgicas: forma, dimensin, aspecto y textura.
Ejemplos:
Para las hojas, se describe forma de la lmina, el tipo de nervadura, la presencia o
ausencia de pelos.
Para las inflorescencias, se describe disposicin de las flores, presencia o
ausencia de brcteas.
Para las cortezas, se describe color, estriaciones, arrugas.
Para los frutos, se describe tipo, forma, dimensiones, caractersticas del pericarpio,
dehiscencia.

2. Caractersticas organolpticas: color, olor y sabor.
Ejemplos:
Los colores de las drogas provenientes de las hojas, suelen ser verdes.
Los colores de las drogas provenientes de las cortezas, suelen ser caf oscuro o
rojizo.
Si las drogas estn fraccionadas o pulverizadas, el color no uniforme o fragmentos
de color distinto, es indicativo de mezcla de drogas.
Los sabores, pueden describirse como: dulce, amargo, cido, astringente, salino,
nauseabundo, etc.
Algunas drogas poseen sabor caracterstico, como la canela y la vainilla

Descripcin microscpica

Se refiere a la evaluacin y descripcin de:
1. La estructura histolgica de un corte de drogas enteras o trozos (no pulverizadas)
2. Los elementos caractersticos de la droga pulverizada (molida)
3. Reacciones histoqumicas y tinciones

Cortes histolgicos

Para realizar los cortes se emplea el material vegetal fresco (tallo, hoja, raz, etc) que
haya sido recolectado recientemente. Los cortes pueden realizarse con un micrtomo o
bien a mano alzada, empleando una hoja de bistur nueva. La condicin indispensable de
los cortes es que sean delgados, de espesor uniforme y que se obtengan de varias
secciones diferentes del material vegetal a analizar.
Los cortes pueden realizarse de manera transversal o longitudinal. Un corte transversal es
el que se realiza perpendicular al eje longitudinal del rgano. Este tipo de corte es el ms
empleado en el estudio de la anatoma microscpica. Un corte longitudinal es el que se
realiza en la misma direccin del eje longitudinal.

Existen dos tipos de secciones
longitudinales: radial y tangencial

Un corte radial (b) es el que pasa a travs
del centro del rgano, es decir a lo largo
del radio.

Un corte tangencial (c) o superficial, se
extiende paralelo al eje longitudinal y a
una tangente al rgano.

a b c a
Las principales caractersticas anatmicas que pueden observarse en los cortes
histolgicos, dependern del rgano de la planta a analizar. As por ejemplo:

En las hojas se observan clulas epidrmicas, tejido parenquimtico, presencia o
ausencia de estomas y tricomas.
En races y tallos, se observan epidermis, sber. Presencia y naturaleza de elementos
esclerificados en el parnquima cortical y regin pericclica.
En frutos y semillas, se puede observar la estructura del pericarpio y del tegumento.

Droga pulverizada

Las drogas pulverizadas poseen muy pocos caracteres morfolgicos de
identificacin y sus caractersticas organolpticas no suelen aportar en la mayora de los
casos indicaciones suficientes para su identificacin. Adems, las drogas pulverizadas
estn ms expuestas a falsificaciones, de ah la necesidad de recurrir al microscopio, por
su gran utilidad en la confirmacin de la identidad y en la deteccin de falsificaciones y
adulteraciones, mediante el estudio de sus elementos histolgicos, ya que stos al ser
elementos tpicos y constantes suponen un valioso material de diagnstico.
En las drogas pulverizadas, muchas clulas estn rotas, desapareciendo la
ordenacin de los tejidos. Por lo tanto, la observacin microscpica de las drogas
pulverizadas se centra en el estudio de elementos celulares y su contenido celular. Dentro
de los elementos que pueden visualizarse en las drogas pulverizadas, se encuentran:

1.- Elementos celulares:

Son clulas y pueden clasificarse segn la naturaleza qumica de la pared celular en:
celulsicos, suberificados y lignificados.

A) Celulsicos: corresponden a clulas vivas, su pared celular es delgada y por lo
general con estructura primaria.

a.- Clulas epidrmicas: Forman el tejido protector. Estn presentes en todos los
rganos areos de la planta. En la epidermis, adems es posible apreciar la presencia de
(i) estomas (principalmente en hojas jvenes, flores y algunos tallos) y (ii) tricomas
(pelos).
i) Epidermis con Estomas:
son frecuentes
en hojas. Algunas
clulas epidrmicas
tienen formas
especiales (contorno
Gua de Laboratorio Botnica y Farmacognosia

sinuoso, rectangular....), sus paredes son finas y suelen estar recubiertas por
una capa de cutina. Los estomas se diferencian entre s principalmente por el
nmero, forma y disposicin de las clulas anejas, pues las dos clulas
oclusivas que delimitan el ostolo suelen ser similares, reniformes en
dicotiledneas y alargadas en monocotiledneas.
ii) Pelos o tricomas: Son clulas epidrmicas transformadas. Se encuentran
recubiertos de una capa de cutina que puede ser lisa o rugosa. La morfologa
es muy diversa y caracterstica de cada droga. Son tpicos a drogas que
corresponden a partes areas (hojas, flores, frutos y semillas). Poseen gran
valor diagnstico en el anlisis de drogas.
Pueden ser unicelulares o pluricelulares. Cuando son pluricelulares pueden ser
lineales o ramificados.
Se clasifican en:
(i) Pelos tectores (terminan en punta) Uni o pluricelulares y tener diversas formas y
tamaos (curvos, estrellados, etc).
(ii) Pelos secretores: Presentan pie y terminan en cabeza (glndula), los que pueden
ser uni o pluricelulares.
Pueden ser lisos o rugosos dependiendo de la capa de cutina.
Pelos unicelulares

Cutcula rugosa Cutcula lisa

Pelos pluricelulares


Pelo tector Pelo glanduloso

b.- Clulas de parnquima: Forman el tejido fundamental, debido a que en este tejido se
realiza el metabolismo (fotosntesis, respiracin, almacenamiento y conduccin de
nutrientes a corta distancia). Se encuentran en la mayora de los rganos, es posible
distinguir el parnquima cloroflico en rganos verdes (tallos herbceos y hojas). Algunas
de estas clulas tienen formas especiales, pero no suelen ser empleadas en la
identificacin de drogas.

c.- Clulas del colnquima: Forman el tejido mecnico o de sostn, est compuesto por
clulas vivas, con paredes de celulosa, que le otorgan flexibilidad. Est presente en todos
los tallos herbceos jvenes y en el nervio medio de las hojas.

B Suberificados: constituido por clulas cuyas paredes estn impregnadas de suberina,
sustancia hidrfoba. Forma parte de la peridermis y su funcin es aislar al vegetal para
evitar su deshidratacin. Es caracterstico de la capa externa de tallos secundarios, por
tanto de drogas que son cortezas, ramas gruesas o races. Se observa en forma de
clulas poligonales fuertemente apretadas, sin dejar espacios intercelulares. En muchas
ocasiones el contenido es coloreado, por ejemplo en el caso de la corteza de frngula
(Rhamnus frangula) que presenta un contenido rojizo.No se observa en hojas, flores,
frutos o semillas.


C) Lignificados: La lignina se deposita sobre las paredes celulares vegetales para
proporcionarles dureza, resistencia. Todos los elementos lignificados pueden teirse con
floroglucina clorhdrica (solucin de floroglucina en alcohol al 50% con cido clorhdrico
concentrado) de color rosa fucsia.

a.-Elementos conductores o vasculares: Son clulas que tienen como funcin la
conduccin de agua y sales, por ello sus paredes estn engrosadas en lignina para
mantener la forma aunque estn sometidas a diferencias de presin. Los vasos leosos
se originan por la unin de clulas alineadas en sentido vertical y comunicadas a travs
de perforaciones (interrupciones de las paredes primarias y secundarias). A medida que
se desarrolla el vegetal, las perforaciones se hacen cada vez ms grandes hasta
desaparecer por completo dando lugar al vaso. Estas clulas conductoras tambin se
comunican colateralmente a travs de punteaduras (interrupciones de la pared secundaria
que son visibles al microscopio ptico y por ello sirven para diferenciar los distintos tipos).
En determinados vegetales (gimnospermas) los elementos vasculares son traqueidas:
clulas fusiformes que presentan las punteaduras situadas en los polos. En hojas y flores,
rganos de crecimiento rpido, poco desarrollados, los vasos son estrechos (protoxilema)
con la pared secundaria dispuesta en forma de espiral o de anillos para no impedir el
alargamiento celular, nunca anchos. Se observan por lo general enteros, formando haces
e incluidos dentro de los parnquimas. En races y rizomas o ramas gruesas, la mayora
de los vasos son anchos con punteaduras en forma de retcula (vasos reticulados),
escalera (vasos escaleriformes) o puntos (vasos punteados). Se observan fragmentados,
rotos. Junto a los vasos grandes, en estas drogas tambin pueden observarse vasos
estrechos. En drogas que son cortezas nunca podrn existir vasos al corresponder a la
parte del vegetal que se sita entre el cambium y el exterior.


Vasos Estrechos

Vasos Anchos


b.- Elementos de Resistencia y Proteccin:
i) Fibras sencillas: clulas muy alargadas, con la pared secundaria muy gruesa
por lo que el protoplasto queda reducido al mnimo. Carecen de actividad
metablica (clulas muertas) pues su nica funcin es la de sostn. Se sitan
en los parnquimas formando haces o acompaando a tejidos conductores.
Pueden estar ms o menos lignificadas y adoptar formas variables: romas
(quina) o puntiagudas (canela), anchas o estrechas, de aspecto deshilachado,
etc.
ii) Fibras cristaIferas: paquetes de fibras que poseen sobre su superficie
cristales prismticos de oxalato clcico. En muchas ocasiones forman parte de
paquetes fibro-vasculares.
iii) CIuIas ptreas o escIereidas: clulas cuya pared secundaria est tan
fuertemente engrosada en lignina que su contenido celular se encuentra
reducido. Por lo general son isodiamtricas pero en ocasiones, presentan
formas irregulares que son caractersticas de determinadas drogas. (Ej. hojas
de Camellia sinensis hoja de t- con clulas ptreas en forma estrellada
llamadas astroescleritos situadas a modo de contrafuertes entre las dos
epidermis).

Fibras Secillas Fibras Cristalferas
Esclereidas


2.- Contenido Celular:

Puede ser identificado mediante reacciones histoqumicas y tinciones especficas. Dentro
de los componentes se encuentran:

a) Granos de fcula: Acumulacin de amilosa y amilopectina en forma de capas
amorfas y cristalinas (capas de hidratacin), alrededor de un punto (ncleo de
hidratacin o hilo) en orgnulos intracelulares. Reserva energtica en vegetales,
es frecuente en drogas que son rganos de reserva, principalmente races y
rizomas, mdula de tallos primarios y endospermo de semillas. Estn ausentes en
hojas y flores. Se tien con agua de yodo de color azul. Los almidones o fculas
de las drogas se observan al microscopio por lo general, en forma de granos ms
o menos esfricos, hemiesfricos, ovales o polidricos, de color blanquecino
dispersos en el campo del microscopio.

Almidn

b) Grasas y esencias: La grasa es reserva energtica de los vegetales, se localiza
principalmente en frutos y semillas. Se observa al microscopio en forma de gotas
esfricas refringentes, coloreadas o no dependiendo del tipo de pigmentos que
tenga el vegetal, liposolubles o hidrosolubles. Al ser menos densa que el agua,
pueden verse mejor subiendo ligeramente el objetivo pues se sitan entre el
cubreobjetos y el agua de la preparacin. Tambin es fcil su observacin cuando
estn adheridas a los tejidos de la droga. Otros componentes de las drogas
podran tener el mismo aspecto, es el caso de los aceites esenciales, sustancias
de naturaleza oleosa. Se diferencian de las grasas o aceites fijos porque son
voltiles, por ello solo podrn observarse en caso de que la droga haya sido
pulverizada recientemente.


c) Cristales:Los vegetales acumulan en determinadas clulas (idioblastos) residuos
metablicos en forma de sales cristalizadas de oxalato de calcio(en su mayora) o
de carbonato clcico, en ocasiones slice como ocurre en gramneas. Se localizan
en todos los rganos, principalmente en hojas.
Las formas de cristalizacin son diferentes en cada droga y por ello tienen valor
diagnstico.
Son fcilmente reconocibles por su color grisceo y bordes rectos. No pueden
teirse.Los reactivos cidos los disuelven.

Tres son las formas ms frecuentes:

i) Rafidios: en forma de agujas aisladas o en paquetes.
ii) Drusas: rosetas de tamao variable
iii) CristaIes prismticos: rectangulares, de tamao variable, se localizan en el
interior de las clulas, en ocasiones sobre fibras (fibras cristalferas).

Rafideos Drusas


Reacciones histoqumicas y tinciones
Estas reacciones permiten observar estructuras vegetales, elementos de reserva y
subproductos del metabolismo celular, tanto en cortes como en drogas pulverizadas.
Consiste en agregar un reactivo con el cual se desarrolla una determinada coloracin.
Los reactivos ms usados son:

Fluoroglucina / HCl: Reactivo para lignina, coloracin roja intensa.

Lugol (solucin acuosa de yodo y KI): Reactivo para almidones, coloracin azul-
morado.

Sudn III: Reactivo para lpidos, coloracin roja-anaranjada.

lcalis: Para antraquinnicos, coloracin roja de intensidad variable.

cido actico: Reactivo para distinguir cristales, los de carbonato de calcio son solubles
y los de oxalato de calcio, insolubles.

Mukherjee, Pulok K. (2002). Quality Control of herbal drug: An approach to evaluation of
botanicals. 1
st
edition. Business Horizons Pharmaceutical Publishers. New Delhi, India,
pgs. 131 -159
Eschrich W. (1997) Pulver-Atlas der Drogen. Gustav Fischer Verlag, Stuttgart


Trabajo Prctico N 1
Macroscopa y Microscopa vegetal

Segn el grado de organizacin, Endlicher dividi a los vegetales en Thallophyta y
Cormophyta, plantas con talo y cormo respectivamente. Las algas pertenecen al primer
grupo, en ellas se distinguen estructuras anatmicas poco diferenciadas denominadas:
rizoides, cauloides y filoides a modo de races, tallos y hojas respectivamente. En cambio
en las cormofitas, distinguimos un cuerpo vegetal pluricelular con races, tallos y hojas

Este prctico tiene como objetivo observar las diferentes partes de una especie vegetal
desde el punto de vista de su morfologa y organografa. Adems de familiarizar al
estudiante con el uso del microscopio, y la observacin de estructuras propias de los
vegetales. En general seguir el procedimiento que se describe a continuacin:

1. Colocar 1-2 gotas de agua (o del reactivo a emplear) en un portaobjetos
perfectamente limpio.
2. Colocar sobre las gotas de agua, una pequea cantidad del almidn a observar.
Homogeneizar con una esptula.
3. Colocar cuidadosamente un cubreobjeto limpio y presionar suavemente con la
esptula, de manera que la muestra quede fija, homognea y sin burbujas de aire.
Precaucin: No debe quedar agua en la superficie del cubreobjeto.
4. Retire el exceso de agua de los bordes, usando un papel absorbente. Si falta agua en
la preparacin, agregar 2-3 gotas en el borde del cubreobjeto para que difunda al
interior por capilaridad.
5. Observar las muestras al microscopio y dibujar los objetos observados, aunque se
trate de un dibujo rudimentario. Registrar el aumento utilizado para la observacin.
Observar con el objetivo de 10 A y el de 40 A.

1.- Observacin de almidones

Se observarn diferentes tipos de almidones: almidn de trigo, papa y maz, con la
finalidad de comprobar las diferentes formar que pueden tener los grnulos, segn la
especie vegetal de que provienen.

Elija uno de los almidones observado y utilice la tincin de Lugol.

Observe, dibuje y coloree, indicando el aumento utilizado.

2.- Observacin de Polen


Se observarn de polen provenientes de 2 o ms especies vegetales, con la finalidad de
comprobar las diferentes formar que pueden tener los grnulos, segn la especie vegetal
de que se trate.


3.- Observacin de corte de Hoja fresca de Eucaliptus

Realizar un corte muy fino de la hoja con la ayuda de un bistur. Observe y dibuje las
clulas, estomas y acmulos de aceite esenciales.
Prepare otra muestra y utilice tincin de Sudan III.


4.- Observacin de corte de tallo fresco

Realizar un corte muy fino del tallo con la ayuda de un bistur. Observe y dibuje las
clulas, y haces vasculares.


5.- Frutos y Semillas

a) Tome un fruto verdadero de poroto al cual se le haya hecho un corte longitudinal y
radial.
Observe el interior y exterior del fruto. Observe estructuras como tricomas, pericarpio,
embrin, cotiledones, acmulos de aceite, etc


Aplique Sudan III, observe y dibuje.

b) Tome una semilla del fruto de maqui al cual se le haya hecho un corte longitudinal y
radial.
Observe el interior y exterior de la semilla. Observe clulas del epicarpio, embrin,
cotiledones, acmulos de aceite, etc.

Aplique Sudan III, observe y dibuje.

6.- Bulbo

Realice una preparacin de catfilo de cebolla, lo ms delgado posible. Observe pared
celular, describa la forma de las clulas y su posicin espacial. Observe ncleo celular.

Aplique azul de metileno, observe y dibuje.

Observacion macroscpica. Esto se completar con el paseo a Ro Clarillo

7.- Races axonomorfas: Observe diferencias entre races napiformes de Daucus carota,
Umbelliferae (= Apiaceae), n.v. zanahoria; Beta vulgaris.
Distinga la diferencia entre races napiformes y tallos anmalos.

8.- Flores: Observe una flor de Hibiscus rosaninesis y separe la misma en cada una de sus
partes: pednculo, receptculo, caliz, corola, estambres y pistilos.

9.- Preparacin de un herbario

Trabajo Prctico N 2
Microscopa de drogas vegetales

Montaje de la muestra para el examen microscpico

6. Colocar 1-2 gotas de agua ( o del reactivo a emplear) en un portaobjetos
perfectamente limpio.
7. Colocar sobre las gotas de agua, una pequea cantidad de la muestra vegetal molida.
Homogeneizar con una esptula.
8. Colocar cuidadosamente un cubrobjeto limpio y presionar suavemente con la esptula,
de manera que la muestra quede fija, homognea y sin burbujas de aire. Precaucin:
No debe quedar agua en la superficie del cubreobjeto.
9. Retire el exceso de agua de los bordes, usando un papel absorbente. Si falta agua en
la preparacin, agregar 2-3 gotas en el borde del cubreobjeto para que difunda al
interior por capilaridad.
10. Observar las muestras al microscopio y dibujar los objetos observados, aunque se
trate de un dibujo rudimentario. Registrar el aumento utilizado para la observacin.
Observar con el objetivo de 10 A. Solamente cuando quiera observar algo concreto
utilice el de 40 A.


FLORES DE MANZANILLA

Nombre comn : Manzanilla
Nombre cientfico : Chamomilla recutita (Asteraceae)
Caractersticas organolpticas
Olor agradable, aromtico, sabor aromtico y ligeramente amargo.
Caractersticas macroscpicas
Cabezuelas florales (captulos) constituidos por flores perifricas liguladas de
color blanco y numerosas flores centrales tubulares de color amarillo,
hermafroditas, insertadas en un receptculo cnico, hueco, con un pndulo
largo.
Caractersticas microscpicas
Droga de color amarillo con abundantes grnulos de polen esfricos.


Fuente : Eschrich W. (1997) Pulver-Atlas der Drogen. Gustav Fischer Verlag, Stuttgart

FLORES DE TILO

Nombre comn : Tilo
Nombre cientfico : Tilia sp (Tiliaceae)

Caractersticas macroscpicas
Flores pentamricas, perfumadas y agrupadas en la cima.
El eje de la Inflorescencia (umbelas) tiene una brctea lingiforme, membranosa de
color verde-amarillo, que va soldada aproximadamente hasta la mitad del nervio
medio.

Droga de color verde-amarillento
Se observan clulas con cristales de oxalato de calcio (drusas)
Pelos largos unicelulares aislados
Abundantes fascculos estrellados de tricomas (pelos) y grnulos de polen

Tilia cordata Mill.




BOLDO HOJAS

Nombre comn : Boldo
Nombre cientfico : Peumus boldus Mol. (Monimiaceae)

Droga de color verde
Restos de epidermis con estomas anomocticos
Tricomas unicelulares simples, fcilmente quebradizos, de lumen estrecho, agrupados
en forma de estrella
Fibras de paredes gruesas y restos de parnquima lignificado

Epidermis de las hojas con estomas y pelos
estrellados
Fotografa a microscopio ptico de epidermis
de las hojas de Peumus boldus, con pelos
estrellados

Tricomas estrellados



EUCALIPTUS HOJAS

Nombre comn : Eucaliptus
Nombre cientfico : Eucaliptus globulus Labill. (Myrtaceae)

Fragmentos de hojas a veces gruesos, con manchas parduscas en la epidermis
externa.
En el interior de la hoja estructuras contenedoras de secreciones oleosas y dos a tres
capas de epitelio secretor.
En el envs de la hoja : clulas epidrmicas poligonales con diferentes espesores de
pared, Grandes estomas.
Haces vasculares de gruesas fibras que incluyen una capa de clulas con cristales de
oxalato de calcio.



CORTEZA DE CSCARA SAGRADA

Nombre comn : Cscara sagrada
Nombre cientfico : Rhamnus purshiana D.C. (Rhamnaceae)

Droga de color caf
Fibras esclerenquimticas con cristales de oxalato de calcio (fibras cristalferas)
Trozos de parnquima que se colorean de rojo en presencia de lcalis
Escasos pelos glandulares pequeos
Fragmentos de sber

A. Corteza de cscara sagrada (X 0.66)
B. Diagrama general de seccin transversal de corteza (X 20)
C. Seccin transversal de otros tejidos (X 200)
D. Detalle de floema (X 200)
E. Clulas de la superficie de la corteza (X 250)

F. Fragmentos de floema en muestra de polvo (X 250)



CORTEZA DE QUILLAY

Nombre comn : Quillay
Nombre cientfico : Quillaia Saponaria Mol. (Rosaceae)

Droga de color caf
Gran cantidad de fibras esclerenquimticas cortas y nudosas
Numerosos cristales de oxalato de calcio prismticos muy brillantes y sus fragmentos
Pequeos grnulos de fcula ( 1-6 m)


Fuente : Eschrich W. (1997) Pulver-Atlas
der Drogen. Gustav Fischer Verlag,
Stuttgart


Prctico N 3 : Cromatografa en Capa Fina

Cromatografa

La cromatografa es un mtodo fsico de separacin en el que los componentes a separar
se distribuyen entre dos fases, una de las cuales est en reposo (fase estacionaria)
mientras que la otra (fase mvil) se mueve en una direccin definida.

Definicin (IUPAC)
Mtodo usado principalmente para la separacin de los componentes de una muestra, en
el cual los componentes son distribuidos entre dos fases, una de las cuales es
estacionaria, mientras que la otra es mvil. La fase estacionaria puede ser un slido o un
lquido soportado en un slido o en un gel (matriz). La fase estacionaria puede ser
empaquetada en una columna, extendida en una capa, distribuida como una pelcula, etc.
Historia
El botnico ruso Mikhail Tswett estableci las ventajas de la cromatografa y fue el
primero en utilizar este trmino. Es recordado como el Padre de la Cromatografa.
Ismailov y Scraiber en el Instituto Ucraniano de Farmacia Experimental, utilizaron lminas
de vidrio para colocar capas muy delgadas de almina y analizando extractos vegetales
para buscar alcaloides, dando as la primera forma de Cromatografa de Capa Fina.
Egon Stahl (1956) dio el nombre de Cromatografa de Capa Fina. Estandariz los
procedimientos, equipos y adsorbentes dando gran auge a luna tcnica simple, de bajo
costo y eficiente.

Cromatografa en Capa Fina

La cromatografa en capa fina (c.c.f.) es un mtodo de anlisis que permite que una
mezcla de sustancias se separe en sus distintos componentes. Esta separacin permite
adems la identificacin de los componentes si se disponen de estndares de referencia.

Para realizar este anlisis se requiere de una fina capa de soporte adsorbente que se
conoce como fase estacionaria.


Preparacin de la Placa Cromatogrfica
Se usan como soporte del adsorbente lminas de: Vidrio, plstico metlicos (ej:
Aluminio).

Adsorbentes ms comunes para cromatografa en capa fina:

a) Gel de slice (se utiliza en el 80% de las separaciones)
b) Oxido de Aluminio Almina (cida, neutra bsica)
c) Celulosa (Nativa o micro-cristalina)
d) Poliamidas

Para la seleccin del adsorbente se deben tomar las siguientes consideraciones:
a) Polaridad
b) Tamao de partcula
c) Dimetro
d) rea Superficial
e) Homogeneidad
f) Pureza

Los tamaos convencionales de las placas para TLC son: 20 cm x 20 cm; 10 cm x 20 cm
y 5 cm x 2 cm.
Hay placas que contienen un indicador de Fluorescencia: F
254
F
366
. El nmero que
aparece como subndice nos indica la longitud de onda de excitacin del indicador
utilizado.

Sobre este soporte se aplican o siembran las mezclas de sustancias a analizar.

Proceso de Adsorcin
La muestra aplicada en la capa es adsorbida en la superficie del material por la accin de
fuerzas electrostticas (fuerzas de Van der Waals, puentes de Hidrgeno, efectos
inductivos, etc). Luego, cuando la capa es expuesta a un flujo por accin capilar, se inicia
una competencia de enlaces entre los sitios activos del adsorbente.


Aplicacin de la muestra
La muestra se aplica en la placa en:
Banda
Punto Mancha

Solventes ms comunes para cromatografa en capa fina

Las diferentes fases mviles utilizadas son por lo general mezclas de algunos de estos
solventes, los que se elegirn de acuerdo a la polaridad deseada en esta fase:

ter de petrleo n- hexano Ciclohexano
Tolueno Eter dietlico t-butil-ter
Cloroformo Cloruro de Metileno Acetato de etilo
Acetona Isopropanol Etanol
Metanol Acido Actico Agua

Desarrollo de la placa

El desarrollo se lleva a cabo en cmaras cromatogrficas, que son recipientes de vidrio
con tapa.
La muestra sembrada es arrastrada por una fase mvil (1 ms solventes), la cual
sube por la fase estacionaria debido a fenmenos de capilaridad arrastrando los
componentes a lo largo de la placa produciendo manchas de componentes.
En la cromatografa de capa fina (c.c.f.), el grado de elucin de las sustancias depende
tanto de su polaridad como la polaridad del eluyente utilizado.
Las sustancias de la mezcla son separadas de acuerdo a la afinidad que tenga cada una
de ellas respecto a la fase estacionaria y la fase mvil.
Una vez que la fase mvil alcanza una altura tal que queden slo unos 0,5 cm para el
borde superior de la placa, sta ltima debe ser retirada de la cmara. Marcar
inmediatamente la altura que alcanz el solvente (Frente del solvente).


Deteccin Visualizacin
Las manchas de color, son por supuesto, inmediatamente visibles. Sin embrago, si las
manchas resultantes no son coloreadas se requiere de mtodos que nos permitan
visualizar el(los) componente(s) presente(s).Este procedimiento se conoce como
Revelado.
Estos mtodos son:
Qumicos (por inmersin o rociado). Se obtienen derivados coloreados o
fluorescente
- Vapores de yodo
- H2SO4: Agua
- Liebermann-Burchard
- Dragendorff
- Muchos otros ms
Fsicos (pticos). Generalmente se utiliza radiacin UV (254nm 366 nm)

Factor de retardo (Retardation factor): R f

Indica la posicin de la zona de la sustancia (mancha) en una placa cromatogrfica. Se
define como el cuociente obtenido dividiendo la distancia entre la mancha y la lnea de
origen con la distancia entre el frente de solvente y la lnea de origen. Las medidas se
toman desde el centro de la mancha.


Rf : Factor de retardo
Zs: Distancia entre la zona de la sustancia y la lnea de origen [mm]
Zf : Distancia entre la zona de frente del solvente y la lnea de origen [mm]

El valor de Rf ser siempre 1 el cual puede ser amplificado por 100, obteniendo como
nmero entero lo que en literatura se puede encontrar como hRf para describir
cualitativamente las placas de c.c.f.

Al contar con estndares y/o literatura de referencia podemos con c.c.f. realizar
identificaciones preliminares confirmando la presencia de compuestos en la muestra o
tambin observar que o cuantos compuestos existen.

Precauciones importantes:
Zs
Zf
Rf =

Siempre la atmsfera
interna de la cmara donde
se har correr la fase mvil
debe estar saturada del
solvente.
La lnea de origen siempre
debe estar por sobre el
nivel del solvente.

Etapas de la c.c.f

1.Saturar la Cmara
cromatogrfica con la fase mvil.
2. Sembrar la muestra en la fase estacionaria (placa de gel de slice F254) a 1 cm de la
base.
3. Colocar la placa en la cmara cromatogrfica que contiene la fase mvil.
4. Una vez que la fase mvil (disolvente o mezcla de ellos) haya avanzado hasta quedar
0,5 cm del tope de la placa, retirarla y marcar con lpiz grafito hasta donde avanz el
disolvente. Luego secar y revelar.
5. Medir las distancias recorridas por las manchas de la muestra y por el solvente en la
placa y calcular el Rf.

Trabajo Prctico N3

I.- Cromatografa en capa fina de tintas de rotuladores

a) Ponga en la Cmara de Coplin 5 mL de fase mvil n-Butanol: cido actico glacial: agua
(12:3:5) y cirrela hermticamente. Debe dejar que la cmara se sature. Espere unos 15
minutos.
b) Marque la placa cromatogrfica de Slica Gel 60 F
254
con lpiz grafito a 1 cm de altura.

Siembre las tintas segn se detalla:
Placa 1: rotulador negro
Rotulador rojo
Placa 2: rotulador azul
Rotulador verde

c) Introduzca la placa en la cmara, cuidando que las manchas sembradas no toquen la
fase mvil.
d) Deje avanzar la fase mvil por la placa hasta que quede aproximadamente a 0,5 cm del
tope de sta.
e) Saque la placa de la cmara y marque de inmediato hasta donde lleg el frente del
solvente.
f) Deje secar la placa.
g) Dibuje el cromatograma obtenido.
h) Calcule el Rf para cada una de las sustancias que logr separar.

II.- Cromatografa en capa fina de colorantes con fases mviles de diferentes
polaridades

A) Fase Mvil : n-butanol : acetona (1:1 v/v)
a) Ponga en la Cmara de Coplin 5 mL de fase mvil A y cirrela hermticamente. Debe
dejar que la cmara se sature. Espere unos 10 minutos.
254

Placa 3A: Azul de metileno
Fuscina bsica

Placa 4A: Rojo de Metilo
Naranja de Metilo

fase mvil.
tope de sta.
solvente.
h) Calcule el Rf para cada una de las sustancias que logr separar con la fase mvil A.

B) Fase Mvil: metanol: acido actico: agua (1:1:1 v/v/v)
a) Ponga en la Cmara de Coplin 5 mL de fase mvil B y cirrela hermticamente. Debe
254

Placa 3B: Azul de metileno
Fuscina bsica
Placa 4B: Rojo de Metilo
Naranja de Metilo

fase mvil.
tope de sta.
solvente.

h) Calcule el Rf para cada una de las sustancias que logr separar con la fase mvil B

C) Fase Mvil : hexano : eter etlico (1:1 v/v)
a) Ponga en la Cmara de Coplin 5 mL de fase mvil C y cirrela hermticamente. Debe
254

Placa 3C: Azul de metileno
Fuscina bsica
Placa 4C: Rojo de Metilo
Naranja de Metilo

fase mvil.
tope de sta.
solvente.
h) Calcule el Rf para cada una de las sustancias que logr separar con la fase mvil C.

III.- Cromatografa en capa fina de muestras de extracto de Quillaja saponaria
Realice una c.c.f. comparativa de saponinas del quillay, sapogeninas y patrn de cido
quillaico (todos disueltos en metanol) utilizando como fase estacionaria gel de slice y
como medio de desarrollo DCM:AcOEt = 1:1.
- Revele con p-anisaldehdo en sulfrico.
- Compare los Rf de ambas muestras y el patrn y compare los colores que presentan
despus de revelar.


Prctico N 4

Mtodos de Extraccin de Principios Activos a partir de Drogas Vegetales

Existen numerosas tcnicas de obtencin de principios activos a partir de drogas
vegetales, dentro de las cuales podemos sealar:

Extraccin mecnica:

Permite obtener los principios activos disueltos en los fluidos propios de la planta, los
cuales una vez extrados se denominan jugo. La extraccin mecnica se puede realizar
por expresin, la cual consiste en ejercer una presin sobre la droga, por calor, o
mediante incisiones por las que fluyen los fluidos de la planta.

Extraccin de ltex de un rbol del caucho Planta de aceite de Olivas (obtenido por expresin de fruto)

Destilacin:

Es una tcnica que se basa en la diferente volatilidad de los componentes de la droga, lo
cual permite la separacin de componentes voltiles de otros que son menos o nada
voltiles como resinas


Se suelen hacer destilaciones por arrastre de vapor o que facilitan la extraccin de los
principios activos voltiles. La destilacin permite obtener, por ejemplo, las esencias de
las drogas, a temperaturas menores al punto de ebullicin del agua.

Es un mtodo en el que se utiliza una fuente de calor, por lo que slo es aplicable a
principios activos termoestables.

Extraccin con solventes:

Consiste colocar en contacto la droga con un solvente capaz de solubilizar los principios
activos. Los principios activos deben de pasar de la droga al disolvente de manera que se
obtenga un extracto lquido.

La extraccin con solventes es uno de los mtodos que se emplea con ms frecuencia
para la obtencin de principios activos.
Para una correcta extraccin con solventes se deben considerar diversos factores:

Caractersticas de la droga: Preferentemente trabajar con drogas desecadas y con un
grado de divisin adecuado para facilitar el mximo contacto entre los principios activos y
el disolvente.
En drogas duras como las cortezas el grado de divisin debe ser mayor, es decir ms
finamente picadas o molidas, mientras que en drogas blandas como flores y hojas, el
grado de divisin debe ser menor.

Naturaleza del solvente: Principalmente se utilizan en las extracciones el agua y las
mezclas hidroalcohlicas (agua y alcohol etlico) en proporcin variable.

Tambin es posible utilizar otros solventes orgnicos como Acetona, ter etlico,
Hexano, Propilenglicol (muy usado en cosmtica), entre otros.


El agua es un buen solvente de muchos principios activos de las drogas, pero por esta
misma razn, resulta generalmente poco selectivo. Adems muchos principios activos se
hidrolizan en agua. Por otra parte, los extractos acuosos tienen una estabilidad poco
duradera una vez preparados y deben de ser obtenidos para su utilizacin en un perodo
de tiempo relativamente corto. La utilizacin de mezclas variables de agua
y alcohol permite seleccionar las sustancias sin inters farmacolgico as como separar
los principios activos entre s.

Temperatura: El aumento de la temperatura favorece la extraccin de principios activos
de las drogas porque aumenta su solubilidad en los solventes utilizados, pero a su vez,
puede favorecer la degradacin de dichos compuestos, por lo que es necesario
controlarla para obtener una mxima extraccin sin consecuencias indeseables. En
ningn caso se pueden utilizar temperaturas elevadas para extraer principios activos
termolbiles.

Tiempo de contacto entre la droga y el disolvente: depende de las caractersticas de
la droga (dureza, grado de divisin) y de la naturaleza de los principios activos (voltiles,
hidrolizables, oxidables, entre otros).

Control de la difusin celular: Una correcta difusin se consigue cuando la droga
Ofrece una mayor superficie de difusin y cuando el solvente utilizado en las extracciones
se renueva constantemente.
Al renovar el solvente se mantiene una diferencia de concentracin de principios activos
entre la droga y el solvente utilizado en la extraccin, por lo que el paso de los principios
activos al solvente se ve favorecido.

Tipos de extracciones con solventes

Los diferentes tipos de extracciones se pueden dividir en dos grandes grupos:

1.- Extracciones discontinuas o simultneas
2.- Extracciones continuas o progresivas

1.- Extraccin discontinua o simultnea: Se sumerge la droga en el solvente, por lo que
la totalidad de la droga contacta con el solvente utilizado para la extraccin y la difusin
de los principios activos se producir en todas las direcciones hasta alcanzar el equilibrio.
La extraccin discontinua incluye varios mtodos de extraccin atendiendo a la
temperatura, tiempo y solventes utilizados:


a) Infusin:
Es una extraccin que se realiza al verter agua a ebullicin o
cercana a ebullicin, sobre la droga vegetal. El tiempo de
extraccin puede ir desde 1-2 minutos hasta media hora.

b) Maceracin:
Es una extraccin que se realiza a temperatura ambiente entre 15 y 20. El lquido para
la solucin puede ser agua o alcohol, mezclas hidroalcohlicas, glicerina.
El tiempo de contacto, pueden ser minutos, horas o das.

c) Decoccin:
Es una extraccin que se realiza con agua a temperatura de ebullicin. Se coloca la droga
vegetal con agua a calentar hasta alcanzar el punto de ebullicin. Una vez que se ha
producido la ebullicin continuar el calentamiento por unos 15-30 minutos ms. Si es
necesario se deber ir reponiendo el agua evaporada.

d) Digestin:
Es una extraccin que se realiza a una temperatura mayor a la ambiente (35- 40 C),
pero no superior a los 50 C. El lquido para la solucin puede ser agua o alcohol, mezclas
hidroalcohlicas, glicerina.
El tiempo de contacto, pueden ser horas o das, y se debe agitar regularmente.

e) Extraccin directa con reflujo:
Es una extraccin que se realiza a temperatura de ebullicin del solvente. El lquido para
la solucin puede ser agua o alcohol, mezclas hidroalcohlicas, o solventes ms apolares
como Hexano, ter de petrleo, Diclorometano, etc.
El tiempo de contacto, pueden ser minutos u horas. Tiene la ventaja de que pese a que
se realiza una extraccin a ebullicin no se pierde solvente, pues condensa y vuelve a
caer al baln.


2.- Extraccin continua o progresiva: El solvente utilizado para la extraccin se va
renovando y acta en una sola direccin. Son mtodos que consisten en poner en
contacto la droga con el solvente adecuado y mantener en todo momento el desequilibrio
entre la concentracin de principio activo en la droga y en el solvente para que se
produzca la difusin celular. Mediante estos procedimientos se puede llegar a la
extraccin prcticamente completa de los principios activos de las drogas.

a) Percolacin:
Es una extraccin continua que se realiza a una temperatura ambiente. El lquido para la
extraccin puede ser agua o alcohol, mezclas hidroalcohlicas, glicerina, solventes
orgnicos, etc. El tiempo de extraccin es variable, pueden ser horas o das. Debe
agregarse solvente en la parte superior a una velocidad similar que cae el extracto por la
parte inferior del percolador.
Para que las drogas no tapen la salida del extracto, debe utilizarse un tapn de algodn,
gasa y en lo posible un tamiz. En la parte superior puede agregarse un papel filtro con
esferas de vidrio para evitar que la droga flote en el solvente.


b) Extraccin con Sohxlet

Es una extraccin continua que se realiza a temperatura de ebullicin del solvente. El
lquido para la extraccin puede ser alcohol, mezclas hidroalcohlicas, solventes
orgnicos, etc. El tiempo de extraccin es variable, pueden ser minutos u horas. Se utiliza
un equipamiento de destilacin especial.
La droga se coloca en un cartucho de papel filtro o similar dentro del aparato Sohxlet. El
solvente que se encuentra en el baln de destilacin ebulle, sus vapores ascienden por el
aparato y se condensan en el refrigerante. El solvente condensado, cae sobre el filtro con
la droga, y se acumula en este sector, extrayendo la droga. Cuando el solvente con los
principios activos que ha ido extrayendo alcanzan una cierta altura, sifonan en el aparato
Sohxlet y vuelven a caer al baln de destilacin.


Concentracin de lquidos extractivos
Los lquidos extractivos que se obtienen en la mayora de los casos se concentran
eliminando parcial o totalmente el solvente mediante los dos mtodos siguientes:

Al vaco: Utilizando un Rotavapor , se trabaja a temperaturas inferiores a 40C y en
ausencia de oxgeno (se aplica vaco). Se utiliza para concentrar lquidos extractivos
obtenidos con solventes orgnicos y mezclas hidroalcohlicas.

Liofilizacin: Consiste en eliminar el solvente mediante una congelacin a
Bajas temperaturas, seguido de una sublimacin del solvente, que pasa directamente
del estado slido a vapor. Este mtodo se aplica principalmente en el caso de
lquidos extractivos acuosos.


Los extractos pueden clasificarse de acuerdo a la concentracin de principio activo
respecto a la droga original y de acuerdo a su consistencia en:

a) Extractos fluidos:
El solvente se ha evaporado en el Rotavapor hasta conseguir una concentracin de
principio activo similar a la concentracin de principio activo en la droga original (se debe
obtener 1 mL de Extracto fluido por gramo de droga utilizada). Tienen consistencia liquida
y se obtienen generalmente por maceracin o percolacin. El solvente suele ser mezclas
hidroalcohlicas o agua. Tambin pueden obtenerse por disolucin de extractos secos.
Los extractos fluidos se alteran fcilmente en contacto con la luz y el aire. Son muy
utilizados para obtener formas liquidas (jarabes, pociones, gotas, entre otras) ya que se
manipulan y dosifican con facilidad.

b) Extractos blandos:
Poseen una concentracin de principio activo superior a la de la droga original y tienen
consistencia semislida. El solvente suele ser agua o mezclas hidroalcohlicas. Los
extractos blandos son poco estables y resultan difciles de manipular, por lo que tienen
menor uso.

c) Extractos secos:
Se obtienen por evaporacin total del solvente y tienen una consistencia de polvo.
Presentan una concentracin muy superior de principio activo que la droga original. Son
preparados bastante estables (aunque en muchas ocasiones resultan higroscpicos) y de
fcil manipulacin que se pueden utilizar para preparar tinturas, extractos fluidos, etc.
Actualmente es posible obtener extractos secos nebulizados todava ms estables que los
extractos secos tradicionales, sobretodo porque son menos higroscpicos.


Trabajo Prctico N4

Mtodos de Extraccin de Principios Activos a partir de Drogas Vegetales

I.- Maceracin
1.-Coloque en un vaso precipitado de 50 mL 0,5 g de la droga a extraer (Sen, Frngula o
Cscara Sagrada) y agregue 25mL de etanol.
2.-Agite con una bagueta .Tape con un vidrio reloj.
3.- Deje macerar por 30 min.
4.-Filtre a travs de un papel filtro, recibiendo el extracto en un vaso precipitado.
5.- Concentre el extracto en un Rotavapor.

+ Et OH

II.- Decocto
1. Fabricar 2 bolsitas de gasa con 2,0 g de flores de manzanilla (Chamomilla recutita L.
Rauschert), flores de tilo (Tilia sp) o bailahun (Haplopappus baylahuen Remy)
2. Poner las dos bolsitas un vaso de precipitado de 250 mL.
3. Agregar 50 mL de agua destilada y calentar suavemente ebullicin, durante 10
minutos. Tape con un vidrio reloj para evitar prdida de solvente.
4. Dejar enfriar el producto.
5. Filtrar a travs de lana de vidrio si es necesario o bien a travs de papel filtro, a un
embudo de decantacin.
6. Agregar al embudo de decantacin 20 mL de acetato de etilo y agite suavemente,
girando el embudo en forma circular. EVITE LA FORMACIN DE EMULSIONES.
7. Separe la fase orgnica, recolectndola en un vaso de precipitado limpio de 50 mL.
8. Concentre la fase orgnica en un Rotavapor.

III.- Percolacin
1.- Coloque una torunda de gasa o algodn en el fondo de un embudo de decantacin con
la ayuda de una bagueta.
2.- Pese 10 gr de hojas de palto (Persea americana Mill.) y agrguelos al embudo de
decantacin preparado en 1.
3.- Cercirese que la llave de embudo est cerrada.
4.- Agregue suavemente 30 mL de solvente extractor (Etanol o Agua destilada). Cuide
que toda la droga quede mojada y cubierta por el solvente. Deben quedar unos 3 cm de
solvente por sobre la droga vegetal. Si es necesario agregue ms solvente.
5.- Deje reposar unos 15 minutos, con la llave cerrada y la tapa del embudo puesta.
6.- Saque la tapa del embudo. Coloque una probeta de 50 mL a la salida del embudo.
7.- Abra la llave del embudo, ajustando la velocidad de percolacin a 4 gotas por minuto.
8.- Detenga la lixiviacin, cuando haya percolado todo el solvente.
9.- Concentre el extracto en Rotavapor.

Solvente
Droga

IV.- Extraccin en equipo Sohxlet
1.- En un dedal o cono de papel de filtro coloque segn se le indique:

7 g de hojas de boldo (Peumus boldus Molina)

Coloque 35 mL de Diclorometano. Agregue 2 mL de NH
3
diludo (0,5%), compruebe que el
pH quede entre 8-9.

2.- Arme el aparato indicado en la figura, utilizando:
soporte universal, pinzas de 3 dedos, refrigerante, baln de fondo redondo con la droga
vegetal y el solvente, manta calefactora y dos mangueras.

Debe cuidar que el ingreso del agua al refrigerante, sea por la entrada inferior. La salida
del agua del refrigerante debe ser por arriba.

3.- Una vez montado el equipo, abra la llave del agua. Asegure un buen flujo de sta y
que el refrigerante est siempre lleno.
4.- Ahora puede encender la manta calefactora. Una vez que haya comenzado a ebullir,
mantenga a ebullicin suave por 30 minutos.
5.- Apague la manta calefactora y deje enfriar.
6.- Concentre el extracto en Rotavapor .


Practico N5: Hidratos de Carbono y Lpidos
I.- Hidratos de Carbono
Los glcidos, tambin llamados azcares o hidratos de carbono o carbohidratos
por poseer como frmula general C
n
(H
2
O)
m
, constituyen uno de los grupos de productos
naturales ms abundantes en los vegetales. Se originan a travs del metabolismo
primario de las plantas siendo los primeros componentes biosintetizados mediante la
fotosntesis y por tanto, constituyendo su principal reserva energtica (sacarosa y
almidn) y un elemento estructural indispensable para su vida (celulosa y pectinas en
plantas superiores y muclagos en algas).
Dependiendo de la complejidad qumica pueden distinguirse dos grandes grupos
de glcidos:
Osas: monosacridos o azcares sencillos
sidos: glcidos que resultan de la unin de esas molculas de osas con otras
molculas.
Si la molcula a la cual se une la osa es otra igual o de naturaleza qumica similar, se
denominar holsido, el que puede ser homogneo (igual molcula) o heterogneo si la
molcula es de naturaleza similar.
Los holsidos a su vez pueden clasificarse atendiendo al nmero de osas que les
constituyen denominndose oligosacridos a aquellos que poseen un nmero menor de
10 osas (disacridos, trisacridos, etc.) y polisacridos a los que resultan de la
condensacin de ms de 10 osas, frecuentemente un nmero muy superior a 10.
Si la molcula a la cual se una la osa tiene una estructura qumica no glucdica se
denomina hetersido.
1.- Azcares Sencillos u Osas
Los azcares sencillos u osas, cuyo nombre es debido a que por lo general poseen sabor
dulce, son polialcoholes lineales o cclicos que en la mayora de los casos poseen una
funcin carbonlica aldehdica (ej. glucosa) o cetnica (ej. fructosa).

Funcin
Aldehdica
Funcin
Cetnica

Desde el punto de vista teraputico es conveniente destacar la importancia del valor
energtico de estos azcares sencillos que son empleados para la preparacin de sueros
y otras preparaciones medicamentosas. Se obtienen, en su mayor parte, por hidrlisis de
estructuras ms complejas como es el disacrido sacarosa o el polisacrido almidn, a
pesar de encontrarse en abundancia en forma libre en muchos vegetales, como es el
caso de la glucosa, o en los frutos y en la miel, como es el caso de la fructosa.
Entre los azcares sencillos debemos mencionar aquellos que poseen reducida su
funcin carbonlica: polialcoholes, que suman a su carcter edulcorante, la propiedad de
ser no cariognicos y por tanto de gran utilidad tanto para la industria farmacutica como
para la industria alimentaria. Entre ellos, los ms utilizados son, manitol, sorbitol y xilitol.
2.- Holsidos
Se incluyen dentro de esta calificacin todos aquellos compuestos de origen natural cuya
estructura qumica resulta de la biocondensacin de varias osas o derivados de osas en
nmero variable. Si el nmero es menor de 10 unidades hablamos de oligosacridos
(oligo = poco) y si el nmero de osas es superior a 10, por lo general muy superior a 10,
de polisacridos.
a) Oligolisacridos
Entre los sidos oligosacridos es conveniente destacar la sacarosa, sustancia
edulcorante por excelencia originada mediante la condensacin, a travs de sus grupos
carbonlicos, de una glucosa y una fructosa (-D-glucopiranosil-(12)--D-
fructofuransido) que carece por tanto, del carcter reductor propio de muchos glcidos.


Las principales fuentes de obtencin de la sacarosa son la remolacha azucarera y la caa
de azcar.

b.1.) Polisacridos Homogneos
A este grupo pertenecen un serie de estructuras polimricas, algunas de gran inters
farmacetico por ser empleadas directamente en la fabricacin de medicamentos o de
productos parafarmacuticos y por constituir una fuente inagotable de derivados de
utilizacin en Farmacia.
Se pueden clasificar atendiendo a la naturaleza qumica de la unidad osdica en: glucanas
o glucosanas por ser su unidad osdica la glucosa, fructanas o fructosanas polmeros de
la fructosa, arabanas polmeros de la arabinosa, mananas de la manosa, etc.
De todos ellos, los que presentan un mayor inters son los correspondientes a la
polimerizacin de la glucosa: almidn y celulosa y de la fructosa: inulina.
Almidn
Principal reserva energtica de los vegetales, estructuralmente corresponde a una mezcla
de dos polmeros de -D-glucosa: la amilosa que es un polmero helicoidal lineal con
uniones -(14) y la amilopectina, fraccin mayoritaria, que es un polmero ramificado
constituido por cadenas lineales de 16 a 60 unidades de -D-glucosa con uniones -
(14) unidas entre s por uniones -(16).

Sus principales fuentes de obtencin son los granos de cereales (arroz, trigo, maiz) y
distintos tipos de rizomas y tubrculos (patata, ame).
Amilosa
Amilopectina


El inters farmacutico del almidn y de sus derivados se basa principalmente en sus
caractersticas fisico-qumicas que les confieren un papel determinante en la formulacin
de comprimidos y en la obtencin de geles, cuyas propiedades reolgicas pueden
mejorarse modificando la estructura inicial del almidn mediante tratamientos fsicos
(almidones pregelatinizados), tratamientos qumicos (oxidacin con hipoclorito sdico,
esterificacin) o tratamientos enzimticos (despolimerizacin controlada).
De todos los derivados obtenidos a partir del almidn de aplicacin en farmacia es
importante destacar las ciclodextrinas, oligosacridos cclicos que estructuralmente
corresponden a 6,7 y 8 unidades de glucosa, que se obtienen por degradacin enzimtica
del almidn. El enzima (ciclodextrina-glucosil-transferasa) procede de diferentes bacilos
(Bacillus macerans y B. circulans). Se emplean como encapsuladores moleculares de
diferentes sustancias (frmacos, aromas, colorantes, etc.) pues presentan una cavidad
central hidrfoba y una superficie exterior hidrfila que puede mejorar su solubilidad y por
ello su biodisponibilidad.

Celulosa
Es el principal constituyente de las paredes celulares de los vegetales.
Qumicamente corresponde a un polmero lineal de la -D-glucosa en forma de silla con
uniones -(14) que es una configuracin muy estable, difcilmente hidrolizable.
Las fuentes de obtencin de la celulosa son en la actualidad el algodn y la
madera (por deslignificacin en medio cido o alcalino). En el futuro es posible que pueda
obtenerse de forma rentable por mtodos biotecnolgicos a partir de una bacteria, el
Acetobacter xylinum, que es capaz de biosintetizar celulosa microcristalina altamente
purificada.
Algodn
Corresponde a los pelos (denominados fibras de algodn) de longitud variable
existentes en las semillas de diversas especies de plantas pertenecientes al gnero
Gossypium de la familia Malvaceae (asiticos: G. arboreum y G. herbaceum; americanos:
G. hirsutum y G. barbadense). Con estas fibras se obtienen los distintos tipos de algodn
descritos en las farmacopeas (Real Farmacopea Espaola: algodn hidrfilo con fibras de
tamao no menor de 10 mm y algodn hidrfilo estril).
Madera
A partir de la celulosa de la madera se obtienen por tratamiento termoqumico seguido de
blanqueo: fibras aisladas no fasciculadas que pueden emplearse para la fabricacin de
distintos productos, entre ellos algodn hidrfilo y distintos tipos de apsitos; celulosa en
polvo y celulosa microcristalina (celulosa parcialmente despolimerizada).
La celulosa en polvo se utiliza en farmacotecnia como diluyente y desintegrante en la
compresin y como estabilizante de suspensiones.

Hay que hacer constar el gran nmero de derivados que pueden obtenerse a partir de
esta celulosa: steres (nitratos, acetatos, ftalatos) o teres (metil-, etil-, propil- y
carboximetilcelulosas) que poseen en solucin caractersticas fisico-qumicas especiales
de utilidad para la fabricacin de medicamentos. Por ejemplo: el ftalato de hidroxipropil-
metil-celulosa se emplea para la obtencin de microencapsulados de liberacin
prolongada o las carboximetilcelulosas empleadas en solucin para la aplicacin de
lentes de contacto.
Inulina
Con el trmino inulina se conoce a un grupo de polmeros de la fructosa (-(21)-
D-fructofuranosil, aproximadamente entre 30 y 35) unidos a una glucosa terminal que se
localizan habitualmente en los rganos subterrneos de plantas Dicotiledneas,
especialmente en las familias Asteraceae, Campanulaceae y Boraginaceae. Se aisl por
primera vez de Inula helenium.
Esta inulina o inulinas presentan la particularidad de que al ser inyectadas por va
intravenosa no son metabolizadas ni se fijan a protenas plasmticas, siendo eliminadas
por el rin por filtracin glomerular, aumentando la presin osmtica del lquido tubular,
sin ser reabsorbidas ni excretadas a nivel tubular. En fitoterapia se emplean varias drogas
precisamente por su contenido en inulina adjudicndoles un efecto diurtico suave
aunque su actividad no se sabe si se debe tambin a la presencia de otros compuestos ya
que no se han efectuado suficientes ensayos farmacodinmicos ni clnicos.
En los vegetales pueden encontrarse tambin otras fructosanas de peso molecular
ms bajo, a veces ramificadas.

b.2.) Polisacridos Heterogneos
Sustancias Pcticas
Con el nombre de sustancias pcticas o pectinas se conoce a un conjunto de
macromolculas glucdicas cuya funcin en el vegetal es formar parte de la laminilla
media de las paredes celulares vegetales. Constituyen la materia cementante que une
unas clulas con otras y en determinadas circunstancias pueden convertirse en sustancia
de reserva para el vegetal. Se encuentran en mayor proporcin en frutos y rganos
subterrneos.
Su estructura qumica corresponde a cadenas de alto peso molecular de cido -
D- galacturnico con distinto grado de metilacin, unidos por enlaces 14 entre los
cuales se intercalan otras osas como ramnosa, arabinosa, galactosa y otros cidos.
Las pectinas evolucionan en el tiempo segn evolucionan los tejidos vegetales,
desde las llamadas protopectinas o pectingenos, productos altamente metilados, hasta
los cidos pcticos, sustancias amorfas prcticamente desprovistas de grupos metilo. El
estado intermedio corresponde a las pectinas que son las de utilidad en farmacia.

Las pectinas tambin llamadas cidos pectnicos o pectinatos, son productos
dbilmente metilados, slidos amorfos, incoloros, que se hinchan en contacto con el
agua. Se obtienen a partir de las materias de desecho de las industrias de zumos de
frutas, principalmente del gnero Citrus (Rutaceae) y de la especie Pyrus malus
(manzana) (Rosaceae), y aunque con peor calidad gelificante, a partir de los desechos de
remolacha azucarera una vez obtenida la sacarosa.
Su inters en farmacia est relacionado con su hidrofilia. Pueden emplearse como
reguladores del trnsito intestinal. Son de utilidad en afecciones gastrointestinales por su
capacidad de absorber agua y toxinas, ya que protegen la mucosa gstrica
comportndose como destoxificantes y bacteriostticos. Por esta razn pueden utilizarse
como antidiarreicos suaves de aplicacin en nios pequeos.
Pueden incluirse dentro del grupo de las fibras solubles. Su empleo regularmente
ha demostrado gran eficacia en el control de los niveles de colesterol, y en base a ello en
la prevencin de enfermedades cardiovasculares.
Asimismo, son de utilidad en tecnologa farmacutica como agentes retardantes de
la eliminacin de medicamentos y por su carcter emulsificante y gelificante para la
fabricacin de pomadas y geles. Por esta misma razn estn incluidas como aditivos en la
industria alimentaria.

Gomas
Las gomas son productos patolgicos de los vegetales. Para su produccin es
necesaria la destruccin de parte del vegetal, de sus paredes o de sus contenidos
celulares, lo que puede originar la muerte celular y en ocasiones la muerte del propio
vegetal. Son sustancias que exudan de los rganos vegetales despus de un
traumatismo, contribuyendo a taponar la herida, caracterstica que les diferencia de otros
polisacridos heterogneos como son los muclagos y las pectinas. Aunque la mayora de
ellas se obtienen a partir de plantas que crecen en zonas ridas, parece no existir una
relacin directa entre su produccin y la climatologa, en todo caso, podran intervenir en
la reserva de agua.
Se diferencian de las resinas, tambin exudados de los vegetales, por su
insolubilidad en disolventes orgnicos, que depende de su diferente estructura qumica.
Qumicamente poseen una estructura compleja con un peso molecular elevado (2
x 10
4
- 10
6
). Son polmeros ramificados de cidos hexaurnicos metilados y acetilados y
otras osas. Algunos de estos polmeros se encuentran asociados a otros compuestos
como terpenos o protenas mediante enlaces covalentes. Precisamente, esa estructura
ramificada condiciona su comportamiento en disolucin, confirindole caractersticas
fsico-qumicas especiales de gran utilidad en tecnologa farmacutica.
La mayora de las gomas se disuelven en agua formando soluciones viscosas.
Algunas slo lo hacen parcialmente, formando en este caso geles.

Ejemplos: Goma Tragacanto, Goma Arbica, Goma Mezquite.
Muclagos
Son constituyentes normales del vegetal, producto de su normal metabolismo, que
se acumulan en clulas especiales dentro de los tejidos por ejemplo en el tegumento
externo de las semillas y en distintos rganos (races, bulbos, tubrculos, flores o
semillas). Se localizan como material de reserva hidrocarbonada o como reserva de agua
en plantas Fanergamas o como elementos estructurales en vegetales inferiores (algas),
proporcionndoles elasticidad y suavidad. A diferencia de las gomas, no salen de forma
espontnea de los vegetales sino que hay que recurrir en muchas ocasiones a la
molienda y a la utilizacin de disolventes para su extraccin.
Su estructura qumica general corresponde a polisacridos heterogneos con un
alto contenido en galactosa, manosa, glucosa y derivados de osas (principalmente
cidos).
Estos compuestos, en contacto con el agua se hinchan formando soluciones
altamente viscosas y geles no adherentes. Algunos de estos muclagos son capaces de
absorber ms de cien veces su peso en agua.
Una importante fuente de obtencin de muclagos de utilidad en Farmacia la
constituyen algunas algas, tanto de Rodoficeas (Gelidium, Pterocladia, Gracilaria,
Gigartina y Chondrus) de las que se obtienen el agar-agar y los carragenatos, como de
Feoficeas (Fucus y Laminaria) de las que se obtiene la algina.
Los muclagos de plantas superiores se clasifican clsicamente en dos grandes grupos:
muclagos neutros y muclagos cidos.
Los muclagos neutros reciben esta denominacin debido a que su estructura qumica
corresponde a polmeros heterogneos de la manosa que incorporan en su estructura un
porcentaje variable de otras osas.
Los ms frecuentes son:
a) Glucomananas, polmeros de D-manosa con un 20 a 50 % de unidades de D-glucosa,
presentes en rganos subterrneos de algunas Monocotiledneas (Amorphophallus
konjac K.Koch.).
b) Galactomananas, polmeros de D-manosa que incluyen, en un porcentaje que vara
entre el 30 y el 100 % dependiendo de las especies vegetales, una galactosa sobre el
hidroxilo del C-5 de la manosa; se localizan en las semillas de distintas plantas
pertenecientes a diversas familias botnicas (Fabaceae, Cesalpiniaceae, Palmeae,
Annonaceae, Convolvulaceae.
c) Falactoglucomananas: cadenas de glucosa y manosa en las cuales algunas manosas
estn sustituidas por D-galactosa, forman parte de hemicelulosas acumuladas como
material de reserva en algunas semillas (Cercis siliquastrum L. Cesalpiniaceae).

Los muclagos cidos reciben esta denominacin porque en su estructura, aunque en
muchas ocasiones no se conoce totalmente, figuran derivados cidos de osas. Se
consideran dentro de ellos varios grupos de muclagos dependiendo de la familia botnica
a la que pertenecen las plantas que los producen:
a) Muclagos de plantas pertenecientes a la familia Plantaginaceae (Plantago afra = P.
psyllium, Plantago indica = P. arenaria, P. ovata, P. major y P. lanceolata).
b) Muclagos de plantas pertenecientes la familia Malvaceae (Malva sylvestris , Althaea
officinalis,Tilia sp).
c) Muclagos de plantas pertenecientes a la familia Linaceae (Linum usitatissimum).
Muchas de estas plantas se utilizan como laxantes mecnicos ya que los muclagos que
contienen al absorber una gran cantidad de agua a nivel del colon aumentan el volumen,
el grado de humedad y la acidez del bolo fecal, incrementando de esta manera el
peristaltismo intestinal y facilitando la evacuacin del mismo.

II.- Lpidos vegetales
En este concepto se rene una gran cantidad de compuestos presentes en todas
las clulas de una planta. Las funciones de estos compuestos son muy variadas: son un
importante constituyente de la membrana celular, pueden ser elementos de revestimiento
como cutina o ceras, adems de ser fuentes de energa y reserva.

Son steres de cido grasos y de un alcohol o de un poliol , y pueden tener en su
estructura otros componentes diferentes.

Se caracterizan por ser sustancias insolubles en agua, solubles en solventes
orgnicos apolares o poco polares. No son voltiles, por lo cual se les denomina aceites
fijos, para diferenciarlos de los aceites esenciales que s tienen esta caracterstica.
Se pueden clasificar en:
Simples
Compuestos o complejos


a) Lpidos simples: en este grupo se incluyen los glicridos, cridos y estridos.
Glicridos: son steres de cido grasos y de la glicerina o glicerol. Los ms importantes
son los triglicridos. Estn presentes en aceites y grasas vegetales, casi ausentes en las
hojas, pues son material de reserva. Se encuentran en grandes cantidades en frutos y
semillas.

Los cidos grasos de los triglicridos, pueden ser saturados o instaurados (con
dobles enlaces).
Los cidos grasos saturados ms comunes en las grasas y aceite vegetales son el
cido palmtico y el esterico, mientras que los instaurados ms comunes son el cido
oleico, linoleico y linolnico.
Las grasas son mezclas slidas de triglicridos, mientras que los aceites son
mezclas lquidas de stos. Los triglicridos pueden reaccionar con hiodrxidos alcalinos
(K, Na , etc) lo que da como resultado, glicerol y cidos grasos en forma de jabones o
sales (proceso llamado saponificacin).

Cridos y estridos: tienen funcin puramente protectora. Recubren junto a la cutina
cutculas epidrmicas de plantas herbceas y plantas jvenes leosas.
Son steres de cido grasos de cadena muy larga (hasta 34 tomos de carbono) y
alcoholes monohdricos, tienen un alto peso molecular.

Si el alcohol del ster es aliftico tendremos un Crido, y si el cido graso esterifica un
esterol, se habla de Estrido.

Son insolubles en agua, de bajo punto de fusin y pueden encontrarse en estado
cristalino a temperatura ambiente.

b) Lpidos complejos o compuestos: se caracterizan por tener en su molcula otros
componentes diferentes a los cidos grasos y los alcoholes. Son de escaso inters en
Farmacognosia pero de alta importancia, pero de gran importancia en la vida celular pues
forman parte de las membranas celulares.
Ejemplos de ellos son los Fosfolpidos y Glucolpidos que en las plantas se encuentran
principalmente en los cloroplastos y mitocondrias en los tejidos de las hojas.

Extraccin de aceite vegetales
Hay principalmente dos mtodos:
a) Por presin mecnica: se realiza con prensas y puede realizarse en fro o en
caliente. A algunas semillas se les da una pre coccin a 90C previo a ser sometidas a la
prensa, para facilitar la salida del aceite. Otros aceites como el aceite de Oliva virgen, se
obtiene por presin en fro.
Ej.Esterol
Ej. Alcohol Aliftico

b) Extraccin por disolventes: Se tritura o pulveriza la droga para aumentar la superficie
de contacto con el disolvente. Normalmente el solvente utilizado es el hexano. Terminada
la extraccin se obtiene una mezcla de aceite y disolvente. El disolvente se separa del
aceite por destilacin.
Cualquier mtodo utilizado, dar como resultado un aceite que necesita purificarse para
eliminar cidos grasos libres, gomas, pigmentos, y pasa por una serie de procesos, como
desgomado, decoloracin, desodorizacin, etc.

Actividad Prctica N 5

1.- Valor de Hinchamiento
Valor de hinchamiento es la medida del volumen ocupado por el hinchamiento de 1 g de
droga vegetal cuando se adiciona agua u otro agente de hinchamiento, bajo condiciones
definidas. La droga vegetal debe ser pulverizada.
Utilizar una probeta de 25 mL.
Procedimiento: Pesar exactamente 1 g de droga pulverizada e introducirlo en la probeta
anteriormente descrita. Aadir 1 mL de alcohol y 25 mL de agua y tapar la probeta con
parafilm. Agitar enrgicamente cada 10 min durante la primera hora del ensayo. Dejar en
reposo durante las prximas 2 h.
60 min despus del inicio del ensayo, eliminar por rotacin alrededor del eje vertical la
mayor parte del lquido retenido al nivel de la droga y hacer bajar las partculas de la
misma que flotan en la superficie del lquido. Medir el volumen ocupado por la droga,
incluyendo el muclago que pueda estar adherido a la misma.
Calcule el valor de hinchamiento para cada una de las determinaciones utilizando la
frmula:
VH = VF - VI
En que:
VH = valor de hinchamiento
VF = volumen final de la droga + muclago
VI = volumen inicial de la droga
Calcule el porcentaje de hinchamiento segn la frmula:

VH X 100 = % de hinchamiento
VI
Realizar el Test del Valor Hinchamiento para las siguientes muestras:
- Durvillea antrctica (Chamisso) Hariot : cochayuyo
- Linum usitatissimum L.: semilla de linaza
- Tilia sp : flores de Tilo
Completar el informe con los valores y clculos requeridos.

2.- Determinacin de Azcares Reductores
Fundamento del mtodo

Todos los monosacridos y los disacridos con enlace monocarbonilo, cuando se
encuentran en solucin a pH alcalino, tienen la capacidad de reducir otros compuestos.
Esta capacidad reside en las caractersticas del grupo carbonilo libre.

Esta propiedad, y por tanto, la presencia de un azcar reductor, se pone de
manifiesto mediante la reaccin de FEHLING.

El reactivo de Fehling consta de:

-Fehling A: CuSO
4
disuelto en H
2
O
-Fehling B: NaOH y tartrato Na-K disueltos en agua

Fundamento de la reaccin: En medio alcalino, el cobre procedente del CuSO
4
se
encuentra en forma de hidrxido cprico, y se forma la correspondiente sal Na
2
SO
4
.
Cuando el Cu(OH)
2
(de color azul) se calienta en presencia de un compuesto reductor se
forma xido cuproso (de color rojo ladrillo).

Si hay un compuesto reductor (R), el Cu cambia su estado de oxidacin de (2+ a 1+), lo
que se evidencia por el cambio de color.
CuSO
4
Cu(OH) (azul)
2
Cu O (rojo ladrillo)
2
NaOH
+Calor
+R

Actividad Prctica:
Ud. dispondr de 4 soluciones de diferentes carbohidratos.
a) Solucin de Glucosa
b) Solucin de Sacarosa
c) Solucin de Almidn
d) Solucin de Lactosa

Solucin de Fehling A y B
Poner en un tubo de ensayo, 2 mL de la solucin de azcar. Agregue 0,5 mL de Fehling A
y 0,5 mL de Fehling B. Caliente a ebullicin por 1 min.

Registre
los
resultados para cada solucin en la tabla del informe
En un tubo de ensayo tome nuevamente 1 mL de muestra de sacarosa. Agregue 10 gotas
de HCl 10%. Caliente a la llama del mechero por unos 2 minutos. Enfre y neutralice con
solucin de Bicarbonato de Sodio .Realice nuevamente la Prueba de Fehling .Observe el
resultado.


La reaccin positiva nos dice que hemos conseguido romper el enlace O-glucosdico de
la sacarosa.

3.- Identificacin de Almidn
En solucin acuosa, la amilosa forma estructuras helicoidales lineales y la
amilopectina ramificadas, gracias a la formacin de puentes de H entre los grupos OH de
la glucosa y las molculas de H
2
O.
Si a una solucin de almidn se le agrega Lugol, sta toma un color azul intenso.
Esta caracterstica es especfica del almidn, debido a su estructura, y se debe a la
adsorcin del Lugol por las cadenas helicoidales, especialmente de la amilosa. Por tanto
no es una reaccin qumica, sino una interaccin fsica.

Actividad Prctica:
Ud. dispondr de 4 soluciones de diferentes carbohidratos.
a) Solucin de Glucosa
b) Solucin de Sacarosa
c) Solucin de Almidn

d) Solucin de Lactosa

Solucin de Lugol (solucin acuosa de yodo y yoduro de potasio)
Poner en un tubo de ensayo 3 mL de la solucin de azcar. Agregue 1 gota de solucin
de Lugol. Si la solucin del tubo de ensayo se torna de color azul-violeta, la reaccin es
positiva.

Registre los resultados para cada solucin en la tabla del informe

4.- Extraccin de aceites vegetales con solvente
Se utilizar el mtodo de extraccin bajo reflujo.
1.- En un baln de fondo redondo de 100 mL, coloque segn se le indique:

a) 5 g de semilla de nuez (Juglans regia L.) con 40 mL de Hexano. Agregue algunas
perlas de ebullicin.

O bien:

b) 5 g de semilla de man (Arachis Hypogaea L.) con 40 mL de Hexano.

2.- Arme el aparato de destilacin indicado en la figura, utilizando:
Soporte universal, pinzas de 3 dedos, refrigerante, baln de fondo redondo con la droga
vegetal y el solvente, manta calefactora y dos mangueras.

Muestra + Lugol Muestra Reaccin Positiva

Debe cuidar que el ingreso del agua al refrigerante, sea por la entrada inferior. La salida
del agua del refrigerante debe ser por arriba.

3.- Una vez montado el equipo de destilacin con reflujo, abra la llave del agua. Asegure
un buen flujo de sta y que el refrigerante est siempre lleno.
4.- Ahora puede encender la manta calefactora. Una vez que haya comenzado a ebullir,
mantenga ebullicin suave por 30 minutos.
5.- Apague la manta calefactora y deje enfriar.
6.- Filtre el extracto por lana de vidrio.
7.- El filtrado obtenido contiene el aceite extrado junto al Hexano. Traslade el filtrado a un
baln de Rotavapor previamente tarado.
8.- Elimine el Hexano concentrando el filtrado en el Rotavapor . Una vez eliminado todo
el solvente y enfriado el baln, pese.
9.- Calcule el rendimiento del aceite obtenido.

Prctico N6

Hetersidos Cardiotnicos

Introduccin hetersidos

Los hetersidos o glucsidos cardiotnicos son compuestos de origen vegetal y forman
parte del arsenal teraputico de eleccin, en el tratamiento de la insuficiencia cardaca.

Estructuras de las geninas


Todas las geninas tienen en comn el ncleo esteroidal ciclopentanoperhidrofenantreno,
de 17 tomos de carbono, adems de dos grupos hidroxilos en posicin C
3
y C
14
y un
anillo lactnico, no saturado, como sustituyente en la posicin C
17
.

De acuerdo al tipo de anillo que presenten, pueden distinguirse dos tipos de geninas:

Cardenlidos
1 lactona insaturada pentagonal en la posicin C
17
del ncleo esterodico
La parte glucdica se une al OH de la posicin C
3

Contiene azcares como glucosa y 2,6-desoxiazcares (digitoxosa
cimarosa)

Bufadienlidos Bufanlidos
1 lactona insaturada hexagonal en la posicin C
17
del ncleo esterodico
La parte glucdica se une al OH de la posicin C
3

Contiene azcares como glucosa y 2,6-desoxiazcares (ramnosa)

Estructura de los azcares

La cadena de azcares se encuentra habitualmente unida a la genina, por medio de la
funcin hidroxilo (-OH) de la posicin C
3
. Esta cadena a menudo est compuesta por
osas especficas para stas molculas, como la digitoxosa, adems de glucosa o
ramnosa. El nmero de osas presentes, vara de 1 a 4.

Entre las drogas vegetales con compuestos cardiotnicos, las ms importantes son las
especies del gnero Digitalis: Digitalis pupurea (0,1 0,3% de p.a.) y Digitalis lanata (0,5
1% de p.a.)

Hetersidos Primarios

Se encuentran en la planta fresca y conservan la estructura completa (aglicn +
azcares)

Hetersidos Secundarios

Se forman por prdida de un fragmento de la parte glucdica, generalmente una
glucosa terminal. La hidrlisis se puede producir durante el proceso de extraccin, de
secado o de fermentacin de la planta recolectada, debida a la accin enzimtica.

Reacciones de reconocimiento y valoracin

Los hetersidos cardiotnicos pueden ser analizados cualitativa y cuantitativamente por
medio de reacciones de reconocimiento y por tcnicas cromatogrficas.
Las reacciones de reconocimiento permiten identificar la presencia de determinadas
partes de la molcula y se pueden resumir en la siguiente tabla.

Para los azcares
(Reacciones generales de
Para el anillo esteroidal
(Reacciones inespecficas)
Para el anillo lactnico
(Slo (+) para

azcares) cardenlidos)

Reaccin de Keller-Kiliani

Puede realizarse sobre los
extractos purificados o sobre
los p.a. aislados.

(CH
3
COOH / H
2
SO
4
/ FeCl
3
)

Desarrollo de coloracin
pardo-rojizo en la interfase y
un lento cambio de la fase
actica a color azul.

(+) para 2-desoxiazcar
(+) para 2,6-desoxiazcar

Reactivo de Liebermann-
Brchard

extractos purificados o sobre los
p.a. aislados.

(CH
3
CO)
2
O / H
2
SO
4
)

Coloracin parda a roja o
rosada

Reactivo de Carr-Price

SbCl
3

Reactivo de Baljet

extractos purificados o
sobre los p.a. aislados.

Acido pcrico/NaOH
Color rojo-naranja estable

Reactivo de Kedde

c 3,5-
dinitrobenzoico/NaOH
Color rojo-prpura

Reactivo de Raymond

m-dinitrobenceno/NaOH
Color violeta fugaz

Trabajo Prctico N6

Hetersidos Cardiotnicos

En este prctico usted realizar las siguientes experiencias prcticas:

1. Reaccin de reconocimiento de la digitoxosa (Reaccin de Keller Killiani)

2. Reacciones de reconocimiento de la genina
2.1. Reaccin de Liebermann-Brchard
2.2. Reaccin de Baljet
2.3 Cromatografa en Capa fina de extracto etanlico de Nerium oleander L.
O
H
HO
H
HO
H
HO
OH
H
H
OH

1. Reaccin de Keller Killiani

Pese una cantidad de comprimidos equivalentes a 1 mg de digoxina, tritrelos y
pulvercelos en un mortero. Llevar a un vaso precipitado de 50 mL.
Agregar 3 mL de FeCl
3
en cido actico glacial (Precaucin: Usar mascarilla y
guantes).
Agitar 2 min y filtrar a travs de papel filtro Whatman a un tubo de ensayo limpio y seco.
Agregar al filtrado, 1 mL de H
2
SO
4
concentrado. No agite la preparacin.
Registre la formacin de un anillo caf-rojizo y el cambio de coloracin del cido
actico.

Bibliografa: Kuklinski C., (2000), Farmacognosia Estudio de las drogas y sustancias medicamentosas de
origen natural, Ediciones Omega S.A., Barcelona, Espaa, pp 156-157.

2.1. Reaccin de Liebermann-Brchard
Tome una cantidad de comprimidos equivalentes a 1,5 mg de digoxina, tritrelos y
pulvercelos en un mortero. Llevar a un vaso precipitado de 50 mL
Agregar 10 mL de una mezcla diclorometano (DCM) : etanol (EtOH) = 1:1
Agite durante 5 minutos y filtre a travs de papel filtro Whatman, a un vaso precipitado
de 50 mL
Lave el papel filtro Whatman con 1 a 2 mL de la mezcla DCM : EtOH = 1:1
Transferir 2 mL del filtrado, a un tubo de ensayo y reservar para la reaccin de Baljet
Con el filtrado restante, realizar una CCF usando:

Reaccin de reconocimiento de digitoxosa (Keller-Killiani)
4 Comprimidos
digoxina 0,25 mg
3 mL FeCl3 en
CH3COOH glacial
Vaso pptado de
50 mL
Agitar 2
1 mL H2SO4 (conc)
por las paredes
El azcar se disuelve en el cido actico con trazas de FeCl3 + H2SO4, se forman dos capas y la zona de
contacto entre ellas (anillo) desarrolla coloracin parda rojiza, mientras el cido actico vira, lentamente, a
color azul verdoso.

Fase estacionaria : Cromatoplaca de gel de slice 60 F
254

Fase mvil : acetato de etilo: metanol : agua = (81:11:8)
Patrn : Solucin de estndar de digoxina
Muestra : Extracto DCM/EtOH
Revelador : Reactivo de Lieberman Brchard

Registrar el color de las manchas obtenidas en la cromatografa.
Calcular los Rf de la muestra y del patrn.

Bibliografa: Kuklinski C., (2000), Farmacognosia Estudio de las drogas y sustancias medicamentosas de
origen natural, Ediciones Omega S.A., Barcelona, Espaa, pp 156-157.

Vaso pptado de
50 mL
Reaccin de reconocimiento de la genina (Liebermann-Brchard)
Comprimidos
digoxina 0,25 mg
10 mL DCM/EtOH
Vaso pptado de
50 mL
Agitar 5
Rx de Baljet
(2 mL)
DCM/EtOH: Solucin diclorometano y etanol (1:1)
Lavar con 1-2 mL de
mezcla DCM/EtOH
CCF
Fase mvil = acetato de etilo: MetOH : agua =
(81:11:8)
Muestra: Extracto DCM/EtOH
Patrn Digoxina solucin
Revelador: Reactivo Liebermann - Brchard

2.2. Reaccin de Baljet

Tomar los 2 mL del extracto DCM/EtOH y agregar 1 mL de solucin de picrato de sodio
alcalino.
Observar la aparicin de una coloracin anaranjada estable.

2.3. Cromatografa en Capa Fina de extracto etanlico de Nerium oleander

Realice una cromatografa en capa fina con el extracto etanlico de hojas de Nerium
oleander que le ser proporcionado en el laboratorio, obtenido por percolacin.

254

Fase mvil : acetato de etilo: metanol : agua = (81:11:8)
Patrn : Solucin de estndar de digoxina
Muestra : extracto etanlico de hojas de Nerium oleander
Revelador : Reactivo de Lieberman Brchard

Reaccin de reconocimiento del anillo lactnico no saturado (Baljet)
2 mL de extracto
DCM/EtOH
Coloracin anaranjada
estable, (+) para anillo no
saturado
1 mL de solucin de Picrato
de Sodio alcalino
Nerium oleander


Prctico N7

Hetersidos Flavnicos

Introduccin

Los flavonoides son productos del metabolismo secundario vegetal de naturaleza fenlica,
que proceden de la ruta del cido shikmico y de la ruta de los polictidos. Se encuentran
ampliamente distribuidos entre los vegetales superiores, sobre todo en las partes areas
de ellos (algunos flavonoides son los responsables del color amarillo de ciertas flores).
Las principales familias que contienen flavonoides son: Rutceas, Poligonceas,
Compuestas y Umbelferas.

Los flavonoides poseen un esqueleto de 15 tomos de carbono de estructura C
6
-C
3
-C
6
,
con dos anillos aromticos bencnicos, unidos entre s por una cadena de 3 tomos de
carbono, ciclados a travs de un oxgeno en posicin 2.

Todos los flavonoides poseen un carbonilo en la posicin 4 del anillo C y las variaciones
se producen en las posiciones 1,2 y 3 del mismo anillo. Son estructuras hidroxiladas en
los anillos aromticos siendo por lo tanto polifenlicas.

Clasificacin de acuerdo a estructura qumica de las geninas:

1. Con doble enlace entre C2 y C3 2. Sin doble enlace entre C2 y C3
1.1 Flavonas : H en C3 2.1 Flavononas : H en C3
1.2 Flavonoles : OH en C3 2.2 Flavanololes : OH en C3

B
B
C A
A
(2-fenil--cromona)

3. Anillo C abierto: Chalconas

4. Anillo B en la posicin 3: Isoflavonoides (3-fenil--cromona)

Estructuras de las osas

La parte osdica del hetersido flavnico, puede ser muy sencilla como una glucosa,
ramnosa, xilosa, o un oligosacridos. Los O-hetersidos son los ms frecuentes y la unin
de la genina con el grupo osdico se produce preferentemente por intermedio del grupo
hidroxlico en posicin C-3 para las flavonas y en posicin C-7 en los flavonoles. La
mayor diversidad estructural las presentan los flavonoles, donde se conocen por ejemplo
ms de 100 hetersidos cuya genina es la quercetol. Tambin hay C-hetersidos donde la
unin se establece entre un carbono de la osa, y el cabono 6 u 8 de la genina, la cual es
normalmente una flavona.

R
Flavona R =H
Flavonol R = OH
R
Flavonona R =H
Flavononol R = OH
Chalconas
R
Isoflavonoides


Identificacin

Usualmente se pueden identificar por medio de CCF y revelado al UV. Las reacciones
para su identificacin se describen en la siguiente tabla:

Reaccin Reactivo Coloracin desarrollada
Reaccin de la
Cianidina Reaccin de
Shivata
Mg
0
/HCl
Naranja ,rojo , violeta (los flavonoles
dan coloracin roja por formacin de
cloruro de cianidina)
Reaccin de
Constantinescu
AlCl
3
Amarillo
Reaccin con FeCl
3
FeCl
3
Azul-verdoso
Ionizacin en medio
bsico
NaOH NH
3
Amarillo intenso

Reaccin de Shivata o Reaccin de la Cianidina

Permite el reconocimiento de flavonoides. Esta reaccin se fundamenta en que al poner
en contacto cido clorhdrico con magnesio metlico se genera hidrgeno, este ltimo
reduce al flavonoide desarrollando coloraciones que van del rojo anaranjado al violeta.

Mg
0

HCl:EtOH

Propiedades

a. Solubilidad: Dependiendo si se encuentran como agliconas libres o hetersidos
(unidos a azcares), se comportan de la siguiente manera:

Agliconas: Insolubles en agua
Poco solubles en mezclas hidroalcohlicas
Solubles en disolventes orgnicos polares (etanol, metanol) o
apolares (ter etlico, cloroformo)

Hetersidos: Solubles en agua y en mezclas hidroalcohlicas
Insolubles en disolventes orgnicos apolares

b. Acidez: Debido a la presencia de grupos fenol, son ionizables en medio bsico y
reaccionan con ciertos reactivos produciendo compuestos coloreados.
Generalmente producen coloraciones amarillas que al acidificar se vuelven
incoloras.

c. Agentes quelantes: Ciertos grupos funcionales de los flavonoides, son capaces
de formar complejos con metales como Fe
3+
(FeCl
3
) o Al
3+
(AlCl
3
).

d. Fluorescencia: Muchos flavonoides presentan fluorescencia bajo la radiacin UV
(200 a 400 nm), la que puede modificarse en medio bsico, con los agentes
quelantes, entre otros.

e. Capacidad antioxidante: Los flavonoides son sustancias fcilmente oxidables.


Trabajo Prctico N 7
Flavonoides

En este prctico usted realizar tres metodologas para detectar la presencia e identificar
flavonoides en una muestra conocida. Para la realizacin de las metodologas de
deteccin e identificacin, usted preparar un extracto por medio de la tcnica de
Decoccin.

Preparacin del decocto

9. Fabricar 2 bolsitas de gasa con 2,5 g de flores de manzanilla (Chamomilla recutita L.
Rauschert ), flores de tilo (Tilia sp) o bailahun (Haplopappus baylahuen Remy)
10. Poner las dos bolsitas un vaso de precipitado de 250 mL.
11. Agregar 50 mL de agua destilada y calentar a ebullicin, durante 10 minutos.
12. Dejar enfriar el producto.
13. Filtrar a travs de lana de vidrio si es necesario o bien a travs de papel filtro, a un
embudo de decantacin.
14. Agregar al embudo de decantacin 20 mL de acetato de etilo y agite suavemente,
girando el embudo en forma circular. EVITE LA FORMACIN DE EMULSIONES.
15. Separe la fase orgnica, recolectndola en un vaso de precipitado LIMPIO de 50 mL.

El producto del decocto, extrado con acetato de etilo, es su extracto de trabajo.

Adems dispondr de un segundo extracto de trabajo preparado con anterioridad:
Extracto de Ruda (Ruta graveolans L.)

Metodologas para Deteccin e Identificacin de Flavonoides

1. Reaccin de Shivata
2. Anlisis Cromatogrfico
3. Observacin a luz UV y revelado con AlCl
3

Reaccin de Shivata

- Disponer 2 tubos de ensayo.
- Transferir 3 mL del extracto de trabajo, al primer tubo y rotular.
- Transferir 3 mL del extracto de ruda, al segundo tubo y rotular.

- Bajo campana: Agregar a cada tubo 5 mL de alcohol clorhdrico y un trozo de cinta de
Mg.

- Observe la coloracin que se desarrolla lentamente en los tubos y registre sus
resultados.


-
254
- Fase mvil
Acetato de etilo : cido frmico : cido actico glacial : agua = (100:11:11:26)
Diclorometano : MeOH ( 100:15)

Procedimiento

Poner la fase mvil en la cmara cromatogrfica con la debida anticipacin.
En una placa sembrar el extracto de trabajo y patrn de quercetina en la placa
cromatogrfica.
En una segunda placa sembrar el extracto de Ruda y patrn de rutina.
Desarrollar las placas en la fase mvil, secar y observar a luz UV (254 y 365 nm).
Revelar con reactivo FeCl
3
al 1%. Marcar con lpiz de mina las manchas correspondientes
al extracto de trabajo y a los patrones utilizados. Calcular los Rf correspondientes.

Observacin a Luz UV y revelado con AlCl
3

- Disponer de 2 papeles Whatman, en cada uno de ellos, sembrar unas gotas del
extracto de trabajo, gotas de rutina patrn y gotas de quercetina patrn. Observar la
fluorescencia a Luz UV (254 y 365 nm).
- Revelar uno de los papeles con AlCl
3
y observar la coloracin obtenida a luz visible y
luz UV.
- Comparar las coloraciones del papel revelado con el de la muestra no tratada.

Realizar el mismo procedimiento para el Extracto de Ruda.

Comment [LSL1]: Tratar con un revelador
mejor NP/PEG

Prctico N8

Antocianos y Taninos

Antocianos

Introduccin
Los antocianos son compuestos polifenlicos de origen vegetal y que son responsables
de la coloracin azul, prpura, violeta, magenta, rosado y rojo de flores (amapola, malva e
hibisco), frutos (cereza, berenjena), hojas (repollo morado), races (rbano) o tallos
(cebolla morada) de las plantas.

Estructuras de los antocianos
Estructuralmente estos pigmentos derivan del catin 2-fenilbenzopirilo (catin flavilio),
que comparte algunas caractersticas estructurales con los flavonoides.

Estructura de los azcares
En los individuos vegetales, los antocianos
se encuentran como hetersidos, siendo la
parte osdica un mono, di o ms raramente
un trisacrido. Los azcares presentes en los
antocianos son: glucosa, ramnosa,
galactosa, xilosa y arabinosa.
Catin flavilio

Para designar a los hetersidos, se emplea el trmino antociansido y para las geninas,
el trmino antocianidol. Los antocianidoles ms frecuentemente distribuidos en la
O
OH
X
(-)


naturaleza son: pelargonidol (color rojo escarlata), el cianidol (color rojo carmes) y el
delfinidol (color prpura).

Fuente: Bruneton J., Farmacognosia. Fotoqumica, Plantas Medicinales. Segunda Edicin, Zaragoza, Editorial
Acribia, S.A., 2001, pp. 352

O
OH
HO
OH
R
1
OH
R
2
X
R1 = R2 = H pelargonidol
R1 = OH; R2 = H cianidol
R1 = OCH3; R2 = H peonidol
R1 = R2 = OH delfinidol
R1 = OCH3; R2 = OH petunidol
R1 = R2 = OCH3 malvidol

Solubilidad de los antocianos
Agua Solubles
Alcoholes Solubles
Disolventes orgnicos apolares Insolubles

Extraccin
Estos metabolitos secundarios se extraen desde la droga vegetal con un alcohol (metanol
o etanol, si el producto est destinado a ingesta por va oral), al que se agrega una
pequea cantidad de cido (0,1-1% de CH
3
COOH, HCl, C
6
H
8
O
7
(cido ctrico), entre
otros). La adicin del cido permite estabilizar al catin flavilio, ya que los antosiansidos
son INESTABLES a pH neutro o alcalinos.

Coloracin

Propiedades y usos
Los antocianos juegan un rol relevante en los procesos de polinizacin y dispersin de las
semillas de las plantas, dado que aportan el color caracterstico a las estructuras
vegetales encargadas de atraer a insectos y pjaros. Poseen un alto poder colorante y
dado que carecen de toxicidad son ampliamente usados en la industria alimenticia.
En teraputica se utilizan como agentes venotnicos, para el tratamiento de trastornos
vasculares, fragilidad capilar y como agentes antioxidantes.

Taninos
O
OH
HO
OH
R
1
OH
R
2
X
O
OH
HO
OH
R
1
OH
R
2
X
O
OH
HO
OH
R
1
OH
R
2
X
OH
OGlucosa
OGlucosa
A pH cido (pH = 3), el pigmento se
encuentra en su forma catinica (sal
del catin flavilio), color rojo.
A pH bsico (pH = 8), el pigmento se
encuentra como cianina base, que es
de color violeta.
OGlucosa
OGlucosa
OH O-
OGlucosa
OGlucosa
A pH = 11, el pigmento se encuentra en
su forma aninica, que es de color azul.

Introduccin
Los taninos corresponden a un gran nmero de sustancias complejas que estn
ampliamente distribuidas en el reino vegetal y en casi todas las familias botnicas existen
especies que los contienen. Los taninos aparecen en los frutos inmaduros y desaparecen
durante la maduracin, lo que sugiere que el fruto utiliza en su metabolismo la energa
proveniente de la oxidacin de los taninos. De acuerdo a otra teora, los taninos evitaran
el ataque de insectos y hongos, gracias a sus propiedades antispticas.
Los taninos son compuestos qumicos fenlicos de alto peso molecular, no cristalizan y
forman en agua soluciones coloidales, de sabor caractersticamente astringente.

Clasificacin
Los taninos se agrupan en hidrolizables y condensados.

A. Taninos hidrolizables

Denominados tambin taninos glicos o taninos piroglicos, se hidrolizan con facilidad en
presencia de cidos, bases o por accin enzimtica (ejemplo, enzima tanasa, producida
por Aspergillus niger). Qumicamente son polisteres de un azcar, generalmente glucosa,
o de un poliol y un nmero variable de cidos fenlicos. De acuerdo al tipo de cido que
se encuentra unido a la glucosa o al poliol, se distinguen dos subtipos de taninos
hidrolizables: taninos glicos y taninos elgicos.
Los taninos glicos son aquellos en los que el cido fenlico es el cido glico y los
taninos elgicos son aquellas estructuras en las que el cido fenlico es el cido
hexahidroxidifnico o sus derivados oxidados (cido dehidroxihexehidroxidifnico y el
cido cheblico)

Los taninos hidrolizables se caracterizan por la coloracin azul que producen cuando son
tratados con soluciones de FeCl
3
.

B. Taninos Condensados

Llamados tambin taninos no hidrolizables o taninos catquicos o proantocianidinas. Se
caracterizan por presentar dificultad para hidrolizarse y al ser tratados con calor y cidos
minerales tienden a polimerizar formando estructuras de alto peso molecular,
denominadas flobfenos. Qumicamente, se forman por condensacin de catequinas o
catecoles (flavan-3-oles) con uniones directas C-C entre las molculas y NO contienen
azcares en su estructura.

Los taninos no hidrolizables se caracterizan por la coloracin verde que producen cuando
son tratados con soluciones de FeCl
3
.


Propiedades y usos

Los taninos son compuestos qumicos no cristalizables que forman soluciones coloidales
en agua, de reaccin cida y de sabor muy acre. Producen precipitacin de gelatina y
alcaloides. Tambin precipitan protenas y se combinan con ellas, hacindolas resistentes
a la accin de enzimas proteolticas. Esta propiedad se utiliza en el proceso de curtido de
las pieles, para transformarlas en cuero. Las soluciones de taninos son tiles como
antdotos en cuadros de intoxicacin por alcaloides, pues los inactivan formando tanatos
insolubles.


Trabajo Prctico N8
Antocianos y Taninos

Antocianos

En este prctico usted realizar los siguientes procedimientos:
1. Extraccin de pigmentos de Brassica oleracea L. var. capitata subvar. rubra (Brasicceas)
extraccin de pigmentos de fruto de Aristotelia chilensis (Molina) Stuntz
2. Coloracin de los pigmentos extrados de la muestra a diferentes pH.

1. Extraccin de pigmentos de Brassica oleracea L. var. capitata subvar. rubra (repollo
morado) Aristotelia chilensis (Molina) Stuntz (maqui).
Pesar aproximadamente 30 g de material vegetal cortado en trozos pequeos. Agregar
100 mL de agua destilada, llevar a ebullicin durante 10 minutos.
Transcurrido el tiempo de ebullicin, filtrar el decocto a travs de papel filtro a un matraz
aforado de 100 mL.
Aforar el matraz con agua destilada.

2. Coloracin de los pigmentos de repollo morado a diferentes pH
Preparar 6 tubos de ensayo y rotularlos para disponer en ellos las soluciones de Buffer
y muestra, de acuerdo a la siguiente tabla:

Tubo N 1 Tubo N 2 Tubo N 3 Tubo N 4 Tubo N 5 Tubo N 6
Tubo N 7
Solucin
buffer
Agua
destilada
8 mL
Buffer pH
1 8 mL
Buffer pH
3 8 mL
Buffer pH
5 8 mL
Buffer pH
7 8 mL
Buffer pH 8
8 mL
Buffer pH
10 8
mL
Pigmentos
extrados
de la
muestra
2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL

Registrar los colores resultantes para cada tubo


Taninos

1. Preparacin de decocto de hojas de Camellia sinensis (L.) O. Kuntze (Theaceae) (nv: t)
2. Preparacin de decocto de hojas de de Buddleja globosa Hope (Buddlejaceae) (nv: matico)
3. Reacciones de reconocimiento y diferenciacin de taninos glicos y taninos catquicos
3.1. Reaccin con FeCl
3

3.2. Formacin de flobfenos
3.3. Reaccin de Stiasny

1. Preparacin de decocto de hojas de Camellia sinensis (L.) O. Kuntze (t)

Pese aproximadamente 2,5 g de la droga vegetal, agregue 50 mL de agua y lleve a
ebullicin durante 5 minutos en un vaso precipitado de 100 mL, tapando con un vidrio
reloj para evitar prdida de solvente. Transcurrido el tiempo de ebullicin, filtre el decocto
en caliente a travs de papel filtro, reciba en un vaso precipitado de 50 mL. Reserve para
realizar las reacciones de reconocimiento descritas en el punto 3.

2. Preparacin de decocto de hojas de de Buddleja globosa Hope (matico)

Pese aproximadamente 2,5 g de la droga vegetal, agregue 50 mL de agua y lleve a
ebullicin durante 5 minutos en un vaso precipitado de 100 mL, tapando con un vidrio
reloj para evitar prdida de solvente. Transcurrido el tiempo de ebullicin, filtre el
decocto en caliente a travs de papel filtro, reciba en un vaso precipitado de 50 mL.
Reserve para realizar las reacciones de reconocimiento descritas en el punto 3.

3. Reacciones de reconocimiento y diferenciacin de taninos glicos y taninos
catquicos

3.1. Reaccin con FeCl
3

* Disponga de 2 tubos de ensayo. Coloque 1 mL de decocto de t en uno de los
tubos y 1 mL de decocto de matico en el otro.
* Agregue 9 mL de agua destilada a cada tubo de ensayo y agite para
homogeneizar.
* Agregue gota a gota, una solucin de FeCl
3
a cada uno de los tubos.
* Observe y registre la aparicin de una coloracin, que puede variar del verde al
azul.


3.2. Formacin de flobfenos
* Disponga de 2 tubos de ensayo. Coloque 5 mL de decocto de t en uno de los
* Agregue 1 mL de HCl concentrado a cada tubo de ensayo y caliente
cuisadosamente a ebullicin.
* Observe y registre la aparicin de una coloracin rojo-ladrillo.

3.3. Reaccin de Stiasny
* Disponga de 4 tubos de ensayo. Coloque5 mL de decocto de t en uno de los
* Agregue 2 mL del Reactivo de Stiasny a cada tubo de ensayo y caliente a
ebullicin, durante 15 minutos. Observe y registre la aparicin de un precipitado
de color rojo (indicativo de presencia de taninos catquicos).
* Filtre cada una de las muestras, a travs de papel filtro en tubos de ensayo
limpios.
* Al lquido del filtrado agregue 1 mL de solucin de alumbre frrico y luego 3 gr
de Acetato de Sodio, agite. Observe y registre la aparicin de una coloracin
azul-violeta (indicativo de presencia de taninos glicos).


Prctico N9

Antraquinonas

Introduccin

Los derivados de antraquinonas han sido histricamente empleados por sus propiedades
farmacolgicas como laxantes o purgantes (sustancia que produce expulsin violenta de
las heces. Sinnimo: catrtico)

Este tipo de compuestos se puede obtener a partir de varios vegetales, tales como:
Cscara sagrada, Sen, Ruibarbo, Frngula y Aloe.

En la naturaleza, los compuestos antraquinnicos se pueden encontrar como hetersidos
(unidos a azcares) o libres, es decir como geninas. Lo O-hetersidos de antraquinnicos
(tambin llamados O-hetersidos antracnicos o antracensidos) se hidrolizan fcilmente,
de modo que cuando se extraen desde el material vegetal, es comn encontrar geninas
libres y compuestos glucdicos junto con los hetersidos.

Segn la estructura qumica de las geninas, estas se pueden clasificar en:

A. Antraquinonas: Pueden ser dihidroxifenoles (OH en posiciones 1 y 8) o
trihidroxifenoles (OH en posiciones 1, 6 y 8). Se pueden encontrar O-hetersidos
(unidos al azcar en posicin 8) y C-hetersidos, donde la unin al azcar se produce
en el C
6
o C
8
.
B. Antranoles y Antronas: Son los derivados antraquinnicos reducidos.
C. Oxantronas: Son productos intermedios entre antraquinonas y antranoles.
D. Diantronas: Compuestos derivados de dos molculas de antrona, que pueden ser
iguales o no.

Con respecto a la estructura de las osas, los azucares ms comnmente unidos a las
geninas son: glucosa (Cscara sagrada y Sen), ramnosa (Aloe y Frngula) y apiosa,
pentosa ramificada (Frngula).

Oxidacin

Reduccin


Propiedades fisicoqumicas

Son slidos cristalizables, coloreados (amarillo, anaranjado o
rojo). Con los lcalis se disuelven dando colores que van del anaranjado al rojo e incluso
violceo, lo cual sirve para caracterizarlos.

Solubilidad de las Geninas
Solubles en disolventes orgnicos apolares (ter, diclorometano, cloroformo)

Solubilidad de los O-Hetersidos
Solubles en mezclas hidroalcohlicas y alcohol y medianamente solubles en agua.

Hidrlisis
O-hetersidos Se hidrolizan en medio cido
C-hetersidos Se hidrolizan en medio cido + FeCl
3

Diantronas Se hidrolizan en medio neutro + FeCl
3
para dar antraquinonas

Ejemplo
Sensidos (p.a. del Sen) son hetersidos de diantronas, generan por hidrlisis cida,
sanidinas (diantronas) y glucosa. Las sanidinas, por hidrlisis oxidativa generan rena
(antraquinona).

Reaccin de Identificacin (Reaccin de Borntrger)

La reaccin de Borntrger permite la identificacin de antraquinonas libres. Consiste en
agregar un reactivo alcalino (NH
3
, solucin de NaOH, solucin de KOH) directamente
sobre la droga vegetal pulverizada o a un extracto. La reaccin es positiva cuando
aparece una coloracin anaranjada o roja que indica la presencia de agliconas o geninas
Oxidacin

Reduccin


libres y oxidadas.La intensidad del color es directamente proporcional a la concentracin
de principios activos en la muestra.

Esta reaccin tambin puede usarse para identificar hetersidos de antraquinonas, pero
precisan de hidrlisis previa. Asimismo, los antranoles y antronas, para ser identificados
por medio de esta reaccin, requieren un proceso anterior de oxidacin. La reaccin de
Borntrger tambin puede realizarse sobre una placa cromatogrfica, usando como
revelador un reactivo alcalino.

Trabajo Prctico N9
Antraquinonas


1.- Identificacin de antraquinonas libres oxidadas: Reaccin de Borntrger
Se realizar con: fololos de Cassia angustifolia Vahl. (sen), corteza de Rhamnus purshiana
D.C. (cscara sagrada) y corteza de Rhamnus frangula L. (frngula)

-Disponga de 3 tubos de ensayo.
- En cada uno de ellos pese por separado 0,2 g de cada una de las drogas a examinar y
agregue bajo campana 5 mL de clorformo.
- Agite cada tubo y deje en reposo por 15 min.
- Con una pipeta extraiga 2 mL de la fase clorofrmica y colquelos en un tubo limpio.
- Agregue 1 mL de NaOH 5%.
- Observe y anote la coloracin obtenida.

2. Extraccin de hetersidos antracnicos de fololos de Cassia angustifolia Vahl. (sen),
corteza de Rhamnus purshiana D.C. (cscara sagrada) y corteza de Rhamnus frangula L.
(frngula).

Pese por separado aproximadamente 0,3 g de cada una de las drogas en un vaso
precipitado de 50 mL.
Agregue 15 mL de metanol y macerar a temperatura ambiente por 15 minutos.
Transcurrido el tiempo, filtre a travs de papel filtro.

3. Extraccin de compuestos antraquinnicos oxidados totales provenientes de
hetersidos. Hidrlisis cida y extraccin con disolvente orgnico.

Se realizar con corteza de cscara sagrada.

- Coloque 0,3 g de cscara sagrada en un baln de fondo redondo de 250 mL. Agregue
30 mL de H
2
SO
4
al 20 % y 60 mL de diclorometano (CH
2
Cl
2
).
- Caliente a reflujo durante 30 minutos.
- Filtre a travs de lana de vidrio a un embudo de decantacin de 250 mL. Lave la lana de
vidrio con 3 porciones de 10 mL de CH
2
Cl
2
.
-Agite cuidadosamente la solucin bifsica contenida en el embudo para extraer los
compuestos de inters desde la fase acuosa hacia la fase orgnica.
- Separe la fase orgnica recibindola en un vaso de precipitado.

4. Extraccin de derivados antraquinnicos cidos y residuos procedentes de O-
hetersidos.
Hidrlisis oxidativa, hidrlisis cida y extraccin con disolvente orgnico.

Se realizar con fololos de sen.

- Coloque 0,3 g de fololos y/o frutos de sen en un baln de baln redondo de 250 mL y
agregue 30 mL de agua destilada, agite enrgicamente.
- Ajuste a pH 7-8 con una solucin de bicarbonato de sodio al 5% y agite.
- Agregue 20 mL de cloruro frrico al 10% (FeCl
3
). Agite y caliente a reflujo por 15 min.
- Transcurridos los 15 minutos, enfre y agregue lentamente por la parte superior del
refrigerante10 mL de solucin de HCl al 10% y 50 mL de CH
2
Cl
2
.
- Caliente a reflujo por 20 min y luego enfre.
- Filtre a travs de lana de vidrio a un embudo de decantacin de 250 mL. Lave la lana de
vidrio con 3 porciones de 10 mL de CH
2
Cl
2
.
- Agite cuidadosamente la solucin bifsica contenida en el embudo para extraer los
compuestos de inters desde la fase acuosa hacia la fase orgnica.
- Separe la fase orgnica recibindola en un vaso de precipitado.

5. Anlisis cromatogrfico
- Realice una c.c.f. utilizando como fase estacionaria gel de slice 60 F
254
y como fase
mvil acetato de etilo : metanol : agua = 100 : 13,5 : 10 (V/V/V).
- Siembre los extractos globales obtenidos en el procedimiento2, y los extractos
hidrolizados obtenidos en los procedimientos3 y 4.
- Observe a la luz UV y revele con KOH 10% en etanol. Marque con un lpiz grafito las
manchas correspondientes a derivados antraquinnicos.
- Calcule los Rf.

Observacin: anote las coloraciones observadas antes y despus de revelar.
Con KOH las antraquinonas presentan coloracin roja al visible y al UV-365 nm. Las
antronas y antranoles presentan coloracin amarilla al visible y amarillo brillante al UV-365
nm. Las diantronas no reaccionan.


Prctico N10

Saponinas y Aceites Esenciales

Saponinas

Introduccin
Las saponinas son hetersidos (azcar + aglicn) que se caracterizan por su capacidad
para producir espuma cuando se agita una solucin acuosa que las contiene. Este
fenmeno se produce debido a la que las saponinas tienen la capacidad de disminuir la
tensin superficial del agua, son por lo tanto, tensioactivos naturales.

Estructura qumica
Las saponinas estn formadas por una parte glucdica (azcar) y una no glucdica
(aglicn), denominada sapogeninas. Los azcares que contienen, pueden tener
caractersticas cidas o neutras. De acuerdo al nmero de uniones de las unidades
glucdicas al aglicn, las saponinas se agrupas en mono o bidesmosdicas, segn se unan
a travs de uno o ms carbonos al los azcares.

Saponinas Bidesmosdicas: Se unen a los azcares por medio de dos puntos al aglicn.
Se subclasifican segn la naturaleza del aglicn en triterpnicas (aglicn = triterpeno) o
esterodicas (aglicn = ncleo esteroidal). A su vez, estas se agrupan es las siguientes
categoras:

Saponinas triterpnicas (C
30
) Saponinas esterodicas (C
27
)
Pentacclicas (-amirina; -amirina; lupeol) Derivados del espirostano
Tetracclicas (dammarano) Derivados del furostanol

Caractersticas
La solubilidad de las saponinas vara cuando se trata del hetersido o de los aglicones, es
as como:


Solubilidad Saponinas (hetersidos) Sapogeninas (aglicones)
Agua Solubles Insolubles
Alcohol diluido Solubles Insolubles
Disolventes orgnicos apolares Insolubles Solubles

ndice de Espuma

El ndice de Espuma (I.E.) se define como el mximo volumen en que disuelto 1 g de
sustancia, produce una espuma de 1 cm de altura, persistente luego de 15 minutos.
Se determina utilizando una serie de tubos, donde se coloca el extracto a analizar, se
agita durante 15 segundos y luego se deja en reposo por 15 minutos. Debido a la
agitacin se forma la espuma y al reposar el nivel de espuma desciende. Se considera
espuma persistente, si transcurridos los 15 minutos, sta tiene una altura igual o superior
a 1 cm.

Clculo del I.E.
Ejemplo

Tubo N 1 N 2 N 3 N 4 N 5 N 6 N 7 N 8 N 9 N 10 N 11 N 12

Cantidad de extracto (mL) 0,25 0,5 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 7,0 8,0 9,0 10,0

Tubo que present espuma persistente de 1 cm/15 = N 4
Cantidad del extracto en el tubo N 4 = 2 mL
Concentracin del extracto de origen = 1g/100 mL

Entonces,
100 mL de extracto 1 g de droga vegetal
2 mL de extracto X

X = 0,02 g en los 2 mL de extracto (Concentracin de saponsidos en el Tubo N 4)
Como cada tubo contena un volumen final de 10 mL, entonces:

0,02 g de droga 10 mL
1 g de droga Y Y = 500 = I.E.


Por lo tanto, el ndice de Espuma, para esa droga vegetal, es igual a 500. Es decir, 500
mL es el volumen mximo en el que disuelto 1 g de sustancia, produce una espuma
de 1 cm de espesor, persistente luego de 15 minutos.

Clculo del contenido de saponinas

Este ensayo busca determinar el contenido de saponinas en una muestra, comparndolo
con una solucin de saponinas de concentracin conocida (Ejemplo: 50 mg/100 mL). Se
realiza el mismo procedimiento anterior, con la batera de tubos, se selecciona aquel que
alcanza una espuma persistente de 1 cm, luego de 15 de reposo. Luego se compara el
tubo de la muestra que presenta la espuma persistente con el tubo del estndar que
presenta la espuma persistente de 1 cm por 15 minutos.

Ejemplo

Concentracin de la solucin muestra : 300 mg/mL
Tubo de la muestra que presenta la espuma persistente : N 6
Cantidad de muestra en el tubo N 6 : 4 mL

Cantidad de muestra en el tubo que presenta dicha espuma persistente:
1 mL 300 mg de muestra
4 mL X X = 1200 mg de muestra

Concentracin del estndar de saponina : 15,6 mg/mL

Tubo del estndar que presenta la espuma persistente : N 10
Cantidad de estndar en el tubo N 3 : 8 mL

Cantidad de estndar en el tubo que presenta dicha espuma persistente:
1 mL 15,6 mg de estndar
8 mL Y Y = 124,8 mg de estndar

Por lo tanto, 124,8 mg de saponina pura, producen una espuma persistente de 1 cm,
luego de 15 min.

Entonces,
1200 mg de muestra 124,8 mg de estndar

100 mg Z

Z = 124,8*100/1200 = 10,4% de saponina en la muestra

Aceites Esenciales

Introduccin

Los aceites esenciales son compuestos formados por varias substancias orgnicas
voltiles, que pueden ser alcoholes, fenoles, terpenos, acetonas, cetonas, teres,
aldehdos, y que se producen en pelos glandulares o tricomas de la epidermis y se
almacenan en los canales secretores de las plantas.
Normalmente son lquidos a temperatura ambiente, y por su volatilidad, son
extrables por destilacin en corriente de vapor de agua, aunque existen otros mtodos. En
general son los responsables del olor de las plantas.

Las plantas con aceites esenciales se ubican principalmente en las familias de las
Labiadas (menta, lavanda, tomillo, espliego, romero) y las umbelferas (ans, hinojo). Sin
embargo, estn tambin ampliamente distribuidos en conferas (pino, abeto), mirtceas
(eucaliptus), rutceas (Citrus spp) y compuestas (manzanilla).
Pueden estar en diferentes rganos: raz, rizoma (jengibre), leo (alcanfor), hoja
(eucaliptus), fruto (ans), sumidades floridas (F. Labiatae).
La composicin vara con el lugar de origen. Tambin vara con el hbitat en que se
desarrolle, (por lo general climas clidos tienen mayor contenido de aceites esenciales), el
momento de la recoleccin, el mtodo de extraccin, etc.
Entre las principales propiedades teraputicas debidas a la presencia de aceites
esenciales, cabe destacar la antisptica, antiespasmdica, expectorante, carminativa y
eupptica, etc.
Se debe tener en cuenta que algunos aceites esenciales, sobre todo a dosis
elevadas, son txicos, principalmente a nivel del sistema nervioso central. Otros, como el

de ruda o enebro, se considera que poseen propiedades abortivas. Algunos tambin
pueden ocasionar problemas tpicos, irritacin o alergias. Adems de sus propiedades
teraputicas, los aceites esenciales tienen un gran inters industrial en la industria
farmacutica, en alimentacin y sobre todo en perfumera.
La destilacin por arrastre con vapor de agua es una tcnica aplicable para la
separacin de sustancias insolubles en agua y ligeramente voltiles de otros productos no
voltiles. Las sustancias arrastrables con vapor de agua son inmiscibles en agua, tienen
presin de vapor baja y punto de ebullicin alto.
Los vapores saturados de los lquidos inmiscibles, siguen la Ley de Dalton sobre las
presiones parciales. Es as como al destilar una mezcla de dos lquidos inmiscibles, su
punto de ebullicin ser la temperatura a la cual la suma de las presiones de vapor de cada
lquido es igual a la presin atmosfrica.

Trabajo Prctico N10
Saponinas

1. Determinacin del ndice de Espuma (I.E.) de decocto de quillay
2. Determinacin del contenido de saponinas en decocto de quillay, por medio del I.E.

1. Determinacin del ndice de Espuma (I.E.) de decocto de Quillay
Colocar exactamente medido, alrededor de 1 g de corteza de Quillaja saponaria Mol.
(Rosaceae) en un vaso precipitado de 250 mL y agregar 100 mL de agua purificada.
Llevar a ebullicin durante 10 min y filtrar el decocto a travs de papel filtro.
Disponer de una serie de 12 tubos de ensayo (todos de igual longitud y dimetro),
distribuyendo las siguientes alcuotas del decocto obtenido:

Tubo N 1 0,25 mL Tubo N 7 5,0 mL

Llevarlos tubos a volumen final de 10 mL, con agua del equipo de osmosis reversa.
Agitar cada tubo durante 15 seg, a razn de dos agitaciones por segundo.

Dejar reposar durante 15 min y medir la altura de la espuma de cada uno de los
tubos.

2. Determinacin del contenido de saponinas en una muestra, por medio del I.E.
* Usar la solucin de saponina patrn que se encuentra en el laboratorio.
* Usar el decocto de quillay obtenido en el punto anterior como muestra.
* Preparar una serie de 12 tubos con la siguiente cantidad de saponina patrn:


Llevar los tubos a volumen final de 10 mL, con agua del equipo de osmosis reversa.
Agitar cada tubo durante 15 seg, a razn de dos agitaciones por segundo.
Dejar reposar durante 15 min y medir la altura de la espuma de c/u de los tubos.
Expresar en trminos del estndar, la cantidad de saponinas en la muestra. Realizar
los clculos de acuerdo a lo sealado en la Gua.

Aceites Esenciales

En esta sesin de trabajo prctico usted realizar la obtencin de aceite esencial desde
material vegetal fresco o desecado, utilizando el mtodo de arrastre con vapor de agua.

Objetivos
1. Aislar el aceite esencial de un producto natural utilizando la metodologa de arrastre con
vapor de agua
2. Conocer las caractersticas de la tcnica y los factores crticos de ella


En este prctico usted realizar el siguiente procedimiento:

Extraccin de aceite esencial de sumidades floridas de Lavandula angustifolia Miller o de
cscara del fruto de Citrus limonun Risso.

Colocar 200 mL de agua purificada en el Matraz N 1 (Generador de vapor).
Colocar 25 g de flores del material vegetal en el Matraz N 2. Al tapar este matraz cuide
que la conexin de vidrio no se obstruya con el material vegetal, de ser as no habr
paso para la corriente de vapor.
Cierre el sistema, tal como se indica en la Figura A. Verifique que todas las conexiones
estn hermticamente selladas. Verifique el paso de agua por el destilador.
Lleve el matraz N 1 a ebullicin, a fin de generar el vapor que pasar por el material
vegetal contenido en el Matraz N 2, extrayendo el aceite esencial, el que ser
inmediatamente arrastrado por el vapor de agua en un proceso de codestilacin.
Suspenda el calentamiento cuando el volumen del destilado sea de 100 o 150 mL
aproximadamente.
Traslade el destilado a un embudo de decantacin de 250 mL.
Realice 3 extracciones sucesivas del aceite esencial, con 20 mL de acetato de etilo
cada vez. Las fases acuosas se desechan y las fases orgnicas se colectan en un
matraz Erlenmeyer.
Agregue sulfato de sodio anhidro en c.s.p. eliminar el agua remanente.
Filtre el extracto a travs de papel piltro Whatman.



Prctico N11
Alcaloides

Introduccin

El trmino alcaloide comnmente se aplica a compuestos nitrogenados bsicos de
origen vegetal, que son fisiolgicamente activos. Realmente no existe una definicin
sencilla de alcaloides, ya que en ella es difcil tener en cuenta las diferencias en cuanto a
las estructuras y propiedades de cerca de 12.000 compuestos descritos en este grupo.
Contienen generalmente un tomo de nitrgeno que forma parte de un heterociclo,
aunque se pueden encontrar compuestos hasta con cinco tomos de este elemento.

Biogenticamente proceden de aminocidos.El nitrgeno puede formar parte de
una amina primaria (RNH2), de una amina secundaria (R2NH), o de una amina terciaria
(R3N). Todos estos compuestos son bsicos, pero el grado de basicidad vara mucho
segn la estructura de la molcula, y segn la presencia y ubicacin de otros grupos
funcionales.

Propiedades fsicas y qumicas

A pesar de lo difcil que es precisar las caractersticas de los alcaloides, stos
muestran un nmero sorprendente de propiedades fsicas y qumicas que les son
comunes. Sus solubilidades en diferentes solventes varan en funcin del pH, es decir, si
se encuentran al estado de bases o al estado de sales. As al estado de bases son
solubles en solventes orgnicos no polares como benceno, cloroformo, cloruro de
metileno, ter etlico e insolubles en agua. En medio cido, los alcaloides forman sales,
siendo stas solubles en agua e insolubles en solventes orgnicos apolares.

Aunque algunas bases no oxigenadas (nicotina, espartena) son lquidas a
temperatura ambiente, los alcaloides bases son normalmente slidos cristalizables,
raramente coloreados.

Estado natural y distribucin

La mayora de los alcaloides oxigenados son slidos cristalinos aunque existen
algunos amorfos. Otros que carecen de oxgeno en su molcula son lquidos. En el
vegetal, los alcaloides se encuentran formando combinaciones solubles al estado de
sales: citratos, maleatos, tartratos, isobutiratos, benzoatos, etc.
Los alcaloides se encuentran distribuidos en todo el reino vegetal, abundan especialmente
en plantas de regiones clidas. Algunos ejemplos de fuentes de alcaloides en los distintos
taxa son:

- en los hongos: cornezuelo del centeno
- en monocotilas: en las familias Liliaceae yAmarilidaceae,
- en dicotilas: en las familias Papaveraceae, Rutaceae, Solanaceae, Apocinaceae,
Rubiaceae,Leguminosae.


Se habla de plantas alcalodeas cuando tiene este principio en proporcin mayor a 0,01
%. La mayora contiene entre 0,1 a 2-3 % (peso seco). En general se encuentran en baja
proporcin, ubicndose en cualquier rgano de la planta: races, hojas, cortezas, frutos,
entre otras.

Importancia farmacolgica
Los alcaloides van a poseer estructuras qumicas muy diversas lo que adems de
dificultar su definicin, explica el abanico de actividades farmacolgicas que pueden
presentar.
Entre las diferentes actividades podemos destacar:

- actividad sobre el sistema nervioso central, como por ejemplo la morfina aislada de
las cpsulas de adormidera y del opio, que deprime el SNC y produce una marcada
analgesia, o la cafena, que por el contrario excita el SNC.

- actividad sobre el sistema nervioso autnomo, como por ejemplo la pilocarpina de
las hojas de jaborandi, con propiedades parasimpaticolticas, la atropina aislada de las
hojas de belladona con actividad anticolinrgica, o la efedrina de las sumidades de efedra
til como vasoconstrictor por sus propiedades simpaticomimticas.

- actividad anestsica local como en el caso de la cocana aislada de las hojas de
coca (hoy prcticamente este alcaloide no tiene utilidad en teraputica, pero s un extenso
comercio como droga de abuso).

- actividad sobre el corazn, como la quinidina aislada de las cortezas de quina, con
propiedades antiarrtmicas.

- la colchicina, alcaloide que se encuentra en el clchico y presenta actividad en el
ataque agudo de gota.

-alcaloides como vincristina o vinblastina del Catharanthus roseus, con actividad
antitumoral que han resultado de gran eficacia en el tratamiento de determinado tipos de
cncer.

Por otra parte, se encuentran en algunas especies vegetales alcaloides especialmente
txicos y que es preciso conocer como la aconitina de la raz de acnito, o la conina de la
cicuta o alcaloides pirrolizidnicos del gnero Senecio responsables de la toxicidad
heptica originada por estas especies.

Dada la actividad/toxicidad tan marcada en muchos de estos compuestos, en muchas
ocasiones no se emplean las plantas que contienen alcaloides sino los alcaloides aislados
de las mismas, bien controlados y dosificados.


CLASIFICACIN QUMICA DE ALCALOIDES

I. Alcaloides no heterocclicos

1. Derivados del ncleo de la tropolona cuyo N se encuentra en una cadena acetamida
lateral.

2. Aminas alcalodeas: protoalcaloides

II. Alcaloides heterocclicos

1. Derivados del ncleo de la piridina y piperidina

A este ncleo tambin se le pueden relacionar los derivados de:


a) La quinolizidina = nor - lupinano( octahidropiridocolina )

b) Del tropano = N - metilpirrolidina + N - metilpiperidina

c) de la quinolena

d) de la isoquinolena


e) de la aporfina

Aporfina

2. Derivados del ncleo del pirrol, pirrolina y pirrolidina

que se encuentran relacionados con derivados de :

a) la pirrolizidina

b) indol o benzopirrol

III.- Alcaloides heterocclicos con dos tomos de Nitrgeno.

a) Derivados del ncleo imidazol

b) de la pirimidina

c) de la purina = imidazol + pirimidina

IV. Alcaloides con estructura esterodea.
a) derivados del ciclopentanoperhidrofenantreno


Reacciones de reconocimiento

Los alcaloides como otras aminas, forman sales dobles de mercurio, oro, platino y otros
metales pesados. Estas sales suelen obtenerse como precipitado. Entre las reacciones de
reconocimiento de estas sustancias podemos nombrar:
a) Reacciones de precipitacin:
R. de yodo iodurado (Bouchardat) pp. pardo
R. de yoduro doble de Hg y K (Mayer) pp. blanco-amarillento
R. de yoduro doble de Bi y K (Dragendorff) pp. Anaranjado

b) Reacciones de coloracin: generalmente son reacciones a base de cidos
concentrados, dando coloracin caracterstica con ciertos alcaloides, por ej.: nitrosulfrico.

Extraccin de alcaloides

Las tcnicas de extraccin se basan en las siguientes propiedades generales:
a) En las plantas los alcaloides se encuentran al estado de sales de cidos minerales u
orgnicos y a veces en forma de combinaciones con otros productos como por ej.:
taninos. Por lo tanto ser necesario pulverizar la droga para hacerla permeable al lquido
extractor.
b) Los alcaloides bases son generalmente (aunque existen excepciones) insolubles en
agua y solubles en solventes orgnicos poco polares.
c) Las sales de alcaloides son por el contrario solubles en agua, alcoholes, mezclas
hidroalcohlicas e insolubles en solventes poco polares.

Basado en estas propiedades se han propuesto los dos mtodos siguientes:


Extraccin por solvente en medio alcalino
1) La droga pulverizada se humedece con solucin acuosa alcalina, cuya naturaleza
depende del grado de basicidad del alcaloide que se desee obtener. La solucin
amoniacal es de uso bastante generalizado. Para compuestos dbilmente bsicos se
usan soluciones de carbonatos alcalinos.
2) El polvo as alcalinizado se trata con un solvente orgnico que disuelve las bases
desplazadas. Se emplea frecuentemente benceno, cloroformo, cloruro de metileno, ter
etlico o mezclas de solventes. Esta extraccin se puede hacer en fro por percolacin o
en caliente mediante el uso de un aparato Soxhlet.
3) El solvente orgnico es separado y concentrado por destilacin a presin reducida.
Este concentrado es entonces extrado en forma sucesiva por varias porciones de una
solucin acuosa diluida (1-2 %) de un cido (clorhdrico, sulfrico, trtrico, actico o
frmico) que disuelve los alcaloides y deja en solucin las grasas, esteroles, pigmentos,
etc. Este proceso se puede hacer en el laboratorio por simple agitacin en un embudo de
decantacin o en un extractor lquido-lquido.
4) Las soluciones acuosas de las sales de alcaloides, decantadas y reunidas, son
alcalinizadas hasta pH 8 a 13 segn la naturaleza de la base y extradas por un solvente
orgnico no miscible, que disuelve las bases libres. Esto se hace en el aparataje
semejante al punto 3).
5) El solvente separado, es desecado sobre sulfato de sodio anhidro y concentrado a
presin reducida. Se obtiene as un residuo de alcaloides brutos.

Extraccin por alcohol cido
La droga pulverizada es extrada por una mezcla hidroalcohlica (50: 50 70:30)
acidificada con cido trtrico al 5 %, o cido sulfrico al 1 %, que disuelve los alcaloides al
estado de sal. Se concentra a presin reducida para eliminar el alcohol. La solucin
acuosa se lava en fro con ter de petrleo, en medio cido este solvente no disuelve
generalmente los alcaloides, pero si permite eliminar diversos compuestos que le
acompaan.
Despus de separar el ter, se alcaliniza el licor acuoso y se extrae igual que antes con
un solvente orgnico no miscible. Este mtodo aplicado a anlisis toxicolgico se conoce
con el nombre de Stas-Otto.
En el curso de la extraccin, los reactivos de precipitacin de alcaloides sirven para
verificar si la extraccin es suficiente.
Estos mtodos generales dan buenos resultados con la mayora de los alcaloides.


Trabajo Prctico N11
Alcaloides


1.- Extraccin de alcaloides en medio alcalino de:

a) Hojas de Boldo: Peumus boldus Mol, Monimiaceae
b) Hojas de Maqui: Aristotelia chilensis (Molina) Stuntz, Elaeocarpaceae

- Coloque 1 g de droga vegetal en un matraz Erlenmeyer de 50 mL.
- Humedezca con 10 mL de amonaco diluido (0,5%) hasta pH= 8 a 9 (compruebe con
papel pH).
- Agregue 8 mL de diclorometano y deje reposar 30 min agitando de vez en cuando.
- Filtre y lleve el filtrado a un embudo de decantacin.
- Agregue 4 mL de solucin de HCl 0,1 N y agite.
- Retire la fase superior acuosa y filtre a travs de papel filtro plegado y mojado
recogiendo el filtrado en un tubo de ensayo.
El filtrado resultante de la extraccin del Boldo lo llamaremos (A), y la de extraccin de
Maqui (B).

2. Reacciones de identificacin

-Dividir la solucin A B segn le haya tocado preparar en tres tubos de ensayo.

Las soluciones acuosas cidas de alcaloides dan con muchos reactivos yodados
precipitados coloreados caractersticos:

Con R. de Bouchardat (sol. de yodo yodurado) da precipitado caf.
Con R. de Dragendorff (sol. cida de yodobismutato de K) da precipitado anaranjado.
Con R. de Mayer (sol. cida de yoduro de mercurio y potasio) da precipitado blanco
crema.

Agregue al primero 2 gotas de R. Bouchardat, al segundo 2 gotas de R. Dragendorff y al
tercero 2gotas de R. Mayer.

- Observe los precipitados.

3.- Anlisis por c.c.f. de un extracto obtenido desde hojas de Boldo:
Peumus boldus Mol, Monimiaceae

- Extraiga 1 un gramo de droga pulverizada (hoja de boldo) con 5 mL diclorometano.
- Agregue 8 gotas de amonaco diluido al 0,5% para asegurar el medio alcalino
(comprobar con papel pH = 8-9) y macere durante 5 min. Filtre.
Comment [LSL2]: Para este ao 2013
tendremos standard de Boldina

- Siembre el extracto (siembre unas 10 veces) en el cromatofolio.
Fase estacionaria: Gel de slice F254
Fase mvil: acetato de etilo: metanol = (1: 1)
Reactivo revelador: Dragendorff
La boldina presenta fluorescencia a la luz U.V. a 365 nm y presenta un color caf al
revelar con reactivo de Dragendorff.

4.-Extraccin de Metilxantinas desde hojas de T rojo:
Camellia sinensis (L.) Kuntze, Theaceae
Pese 1 g de la droga pulverizada en un matraz Erlenmeyer de 100 mL. Agregue bajo
campana 3 mL de NH
3
25% y 40 mL de diclorometano. Agite por 15 min en un agitador
magntico bajo campana. Filtre a travs de lana de vidrio y reciba el filtrado en un vaso
precipitado. Tome 5 mL del filtrado y pngalo en un vaso precipitado de 50 mL. Evapore
a sequedad en un bao mara y bajo campana. Resuspenda el extracto seco en 1 mL de
metanol.
5.- Identificacin de Cafena en el extracto de T rojo por C.C.F.
- Siembre el extracto (al menos 4 veces) en el lado izquierdo del cromatofolio, y el
standard de Cafena (1mg/mL) en el lado derecho.
Fase estacionaria: Gel de slice F 254
Fase mvil: Cloroformo, Etanol, Acido Frmico (90:8:2)
Reactivo revelador: Solucin Yodo/yodurado.

Examinar la placa con luz UV (254 nm), la cafena presenta fluorescencia a la luz UV
Revele con solucin yodo/yodurado, caliente cuidadosamente en placa calefactora sin
dejar de observar la placa.


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