Você está na página 1de 7

UERJ INSTITUTO DE QUMICA DEPARTAMENTO DE TECNOLOGIA DE PROCESSOS BIOQUMICOS BIOTECNOLOGIA EXPERIMENTAL Professora: Mrcia Monteiro Machado Gonalves Prtica

n 3 e ! D"#a$e% &e G'ic(&i"# Re&)t"re# *GR+ , M-t"&" &e Ne'#"n e D"#a$e% &e G'ic(&i"# Re&)t"re# T"tai# *GRT+ 1. OBJETIVO Elaborar uma curva padro para determinao da concentrao de glicdios redutores presentes numa amostra. Determinar a concentrao de G e G! ! presentes no caldo de cana de a"car e a concentrao de G ! na soluo padro de sacarose. 2. MATERIAL UTILIZADO #idraria: $alo volum%trico& erlenme'er& becher& pipetas de (m)& !ubos de Folin Wu. eagentes: *elson +& *elson $& *elson ,. -olu.es: Padro de glicose /(01& padro de sacarose /2301 e caldo de casa de a"car. Espectrofot4metro 3. PROCEDIMENTOS Prtica n 3! D"#a$e% &e G'ic(&i"# Re&)t"re# *GR+ , M-t"&" &e Ne'#"n 3.1. Curva Padro. Preparou5se uma soluo padro de glicose de 23mg6(33ml. +dicionou5se aos tubos de Folin-Wu 37 3&27 3&87 3&97 3&: e (&3 m) da soluo padro de glicose de 23 mg6(33m) e completou5se para (&3m) com gua destilada. Em seguida& adicionou5se em cada tubo (&3 m) da mistura dos reagentes *elson + e *elson $ /28 m) de *elson + ; (&3 m) de *elson $1 e a<ueceu5se em banho5maria em ebulio por 23 minutos. etirou5se do banho5maria& resfriou5se os tubos em gua corrente& adicionou5se (&3 m) do reagente *elson , e agitou5se at% parar de espumar. ,ompletou5 se o volume para 2= m) com gua destilada e homogenei>ou5se para poder ler5se as absorb?ncias em espectrofot4metro a =83 nm& tomando5se como refer@ncia a soluo padro de glicose 23 mg6m) de 3 ml. 3.2. De er!"#a$o de %R #o &a'do de &a#a de a$(&ar. Diluiu5se o caldo de cana nas propor.es (:=3& (:(33 e (:2=3& adicionou5se (&3 m) de casa caldo diludo aos tubos de Folin Wu e fe>5se o mesmo procedimento <ue foi feito com as solu.es de glicose com os reagente *elson +& $ e ,.

Prtica n ! D"#a$e% &e G'ic(&i"# Re&)t"re# T"tai# *GRT+

3.3. )"dr*'"+e ,&"da da +o'u$o -adro de +a&aro+e e do &a'do de &a#a de a$(&ar. ,olocou5se em erlenme'er de 2=3m)& 23m) de amostra e A3m) de gua destilada e depois levou5 se a banho5maria na temperatura de 9=B,. Cuando a temperatura de 9=B, foi alcanada& adicionou5 se (3 m) de D,l 9&2* e foi feita a homogenei>ao. E erlenme'er foi retirado do banho e feito isso& foi necessrio esperar A3 minutos para poder transferir o hidrolisado para um balo de =33m). E volume do mesmo foi completado com gua destilada. Pipetou5se (3m) da soluo do hidrolisado para um balo de =33m)& e o mesmo foi neutrali>ado com 2&3m) de *aED 3&92* e o volume foi completado at% alcanar =33m). 3./. De er!"#a$o de %R #o+ 0"dro'"+ado+ e #o &a'do de &a#a de a$(&ar "# #a ura. E caldo de cana foi diludo in natura na proporo de (:(33. Foram adicionados aos tubos de Folin Gu (m) de cada amostra /duplicata1 e (m) de gua destilada /branco1. Foi adicionado ( m) da mistura dos reagentes *elson + e *elson $ /28m) de *elson + ; (&3m) de *elson $1 em todos os tubos. E sistema foi a<uecido em banho5maria em ebulio por 23 minutos. Feito isso& os tubos foram resfriados em gua corrente. Ento& foi adicionado (&3m) do reagente *elson ,. Es tubos foram agitados at% pararem de espumar e o volume foi completado at% chegar 2=m) com gua destilada e foi feita a homogenei>ao. Foi reali>ada a leitura das absorb?ncias das solu.es em espectrofot4metro a =83Hm& >erando o aparelho com o branco. 3.1 Co!-o+"$o do+ rea2e# e+. *elson +: *a2,EA anidro ......................2= g6) !artarato de I ......................2= g6) *aD,EA ...............................23 g6) *a2-E8 .................................233 g6) *elson $: ,u-E8 . = D2E ......................(=3 g6) /em gua destilada acidificada com D2-E8 J 23 gotas1 *elson ,: Molibdato de +m4nio ..........=3 g6) D2-E8 concentrado................82 m)6) *aD+sE8 . K D2E .................9 g6) /. RESULTADOS /.1. Curva Padro ,lculos da diluio: ,3 L 23 M 3&3 6 (33 L 3&33 mg ,( L 23 M 3&2 6 (33 L 3&38 mg ,2 L 23 M 3&8 6 (33 L 3&3: mg ,A L 23 M 3&9 6 (33 L 3&(2 mg ,8 L 23 M 3&: 6 (33 L 3&(9 mg ,= L 23 M (&3 6 (33 L 3&23 mg Ende ,i L ,oncentrao de cada diluio

*a tabela 3(& encontram5se a leitura das absorb?ncias em relao a cada concentrao feita apNs a diluio a =83 nm a partir de uma soluo padro de glicose 23 mg6(33m).

!abela 3(: )eitura das absorb?ncias 5 glicose 4$'ic"#e5 *%$6%L+ 3 3&38 3&3: 3&(2 3&(9 3&23 A0#"r01ncia# e% 2 3 n% 3 3&3A= 3&393 3&(33 3&(8= 3&(9=

+ partir dos valores da tabela 3(& pode5se construir o grfico 3(: absorb?ncia M ,oncentrao& uma curva padro de comprimento de onda =K3 nm.
Curva padro
0,18 0,16 Absorbncia (540 nm) 0,14 0,12 0,1 0,08 0,06 0,04 0,02 0 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 [Glicose] (mg/mL) y = 0,8625x - 0,0025 R2 = 0,9861

Grfico 3(: ,urva padro de =K3 nm: +bsorb?ncia M ,oncentrao + partir do grfico 3(& obteve5se a e<uao para a absorb?ncia: +bs L 3&:92=, 5 3&332= /(1

/.2. De er!"#a$o de %R #o &a'do de &a#a de a$(&ar. *a tabela 32& encontram5se a leitura das absorb?ncias em relao a cada concentrao feita apNs a diluio da cana de a"car a =83 nm. !abela 32: )eitura das absorb?ncias J caldo de cana Di')i./e# &" ca'&" &e cana A0#"r01ncia# e% 2 3 n% (:=3 3&8:3

(:(33 (:2=3

3&(83 3&38=

+ partir dos dados da tabela 3( e da e<uao 3( determinou5se a concentra.es de G no caldo de cana. Di')i.7" 8!23 +bs L 3&:92=, 5 3&332= 3&8:3 L 3&:92=, 5 3&332= , L 3&==O8 mg6m) G L 3&==O8 M =3 L 2K&OK mg6m) 2K&OK mg 555555 ( m) M mg 555555 (33 m) M L 2KOK mg6(33 m)

,oncentrao de G no caldo de cana L 2&KOK g6(33 m) Di')i.7" 8!833 +bs L 3&:92=, 5 3&332= 3&(83 L 3&:92=, 5 3&332= , L 3&(9=2 mg6m) G L 3&(9=2 M (33 L (9&=2 mg6m) (9&=2 mg 55555 ( m) M mg 55555 (33 m) M L (9=2 mg6(33m)

,oncentrao de G no caldo de cana L (&9=2 g6(33m) Di')i.7" 8!923 +bs L 3&:92=, 5 3&332= 3&38= L 3&:92=, 5 3&332= , L 3&3==( mg6m) G L 3&3==( M 2=3 L (A&KK= mg6m) (A&KK= mg 55555 ( m) M mg 55555 (33 m) M L (AKK&= mg6m)

,oncentrao de G no caldo de cana L (&AKK= g6(33m)

/.3.Va'ore+ de a3+or34#&"a #a Pr, "&a #5 / *a tabela 3A& encontram5se a leitura das absorb?ncias em relao a cada concentrao feita apNs a diluio a =83 nm para a soluo padro de sacarose& caldo de cana de a"car hidrolisado e caldo de cana de a"car. !abela 3A: )eitura das absorb?ncias J padro sacarose e caldo de cana natural e hidrolisado A%"#tra -oluo padro de sacarose -oluo padro de sacarose ,aldo de cana de a"car ,aldo de cana de a"car ,aldo de cana de a"car hidrolisado ,aldo de cana de a"car hidrolisado A0#"r01ncia# a 2 3 n% 3&293 3&2O3 3&2K3 3&2K= 3&2O= 3&2:=

/./. De er!"#a$o da &o#&e# ra$o de %RT #a +o'u$o de +a&aro+e e da e6"&"7#&"a da 0"dr*'"+e. /./.1. De er!"#a$o da &o#&e# ra$o de %RT +bs L 3&293 ; 3&2O3 6 2 L 3&2K= +bs L 3&:92=, J 3&332= 3&2K= L 3&:92=, J 3&332= , L 3&A2(K mg6m) PG !Q L 3&A2(K M (2=3 L 832&(K mg6m) 832&(K mg 55555 ( m) M mg 55555 (33 m) M L 832(K mg6(33m) L 83&22 g6(33 m)

PG !Q na soluo padro de sacarose L 83&22 g 6 (33m) /./.2. De er!"#a$o da e6"&"7#&"a da 0"dr*'"+e PsacaroseQ L G ! M MM/glicose ; frutose1 MM/sacarose1 PsacaroseQ L G ! M /A826A931 L G ! M /3&O=1 PsacaroseQ L 83&22 M 3&O= L AK g6(33m) 23 g 55555 (330 AK g 55555 M M L (:= 0

/.1. De er!"#a$o da &o#&e# ra$o de %R #o &a'do de &a#a de a$(&ar +bs L 3&2K3 ; 3&2K= 6 2 L 3&2K2= +bs L 3&:92=, J 3&332= 3&2K2= L 3&:92=, J 3&332= , L 3&A(:: mg6m) PG !Q L 3&A(:: M (33 L A(&:: mg6m) A(&:: mg 55555 ( m) M mg 55555 (33 m) M L A(:: mg6(33m) L A&(O g6(33m)

PG Q no caldo de cana L A&(O g6(33m) /.8. De er!"#a$o da &o#&e# ra$o de %RT #o &a'do de &a#a de a$(&ar +bs L 3&2O= ; 3&2:= 6 2 L 3&2O3 +bs L 3&:92=, J 3&332= 3&2O3 L 3&:92=, J 3&332= , L 3&AAO( mg6m) PG !Q L 3&AAO( M (2=3 L 82A&O( mg6m) 82A&O( mg 55555 ( m) M mg 55555 (33 m) M L 82AO( mg6(33m) L 82&AO g6(33m) 82&AO g6(33m)

PG !Q no caldo de cana hidrolisado L

/.9. De er!"#a$o da &o#&e# ra$o de +a&aro+e #o &a'do de &a#a de a$(&ar PsacaroseQ L / PG !Q 5 PG Q 1 M /A82 6A931 PsacaroseQ L /82&AO J A&(O1 M /3&O=1 PsacaroseQ L AK&28 g6(33m)

1. CONCLUS:ES +trav%s do m%todo de *elson obtivemos a concentrao de glicdios redutores no caldo de cana. E valor de G no caldo de cana obtido atrav%s das tr@s dilui.es era para ser o mesmo& mas devido a erros eMperimentais no preparo das dilui.es& erros de pipetagem& entre outros& houve variao nos resultados obtidos. + porcentagem da efici@ncia da hidrNlise cida da soluo padro de sacarose encontrada& de acordo com os clculos& foi de (:==0& um valor estranho& por<ue no seria possvel hidrolisar al%m de (330. *o entanto& no havia sacarose disponvel na aula para efetuar tal reao& logo& acredito <ue tal erro tenha ocorrido de acordo com algum problema na soluo <ue R se encontrava pronta na aula <ue foi a utili>ada para a leitura no espectrofot4metro /ao inv%s de ser uma soluo de 230 de sacarose& poderia ser uma de 830 aparentemente1. + concentrao de G ! na soluo padro de sacarose encontrada foi de 83&22 g6(33m). E uso dos reagentes *elson +& $ e , diferentes do <ue foram utili>ados para a curva padro tamb%m pode ser uma eMplicao para o valor de (:=0. + concentrao de G ! obtida no caldo de cana foi de 82&AO g6(33m). + concentrao de G no mesmo foi de A&(O g6(33m). )ogo& a concentrao de sacarose no caldo de cana foi de AK&28 g6(33m).