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PRACTICA 8-DIFERENCIACIN DE CLULAS VEGETALES Para comprender la estructura y funcin de los tejidos de la planta, hay que entender primero la estructura y la funcin de las clulas que las componen. Mucho de lo que sabemos acerca de las clulas se ha aprendido usando tcnicas bioqumicas y microscopa electrnica. La clula vegetal tpica presenta, por fuera de la membrana plasmtica, la pared celular, compuesta fundamentalmente por celulosa y secretada por el protoplasto. Con el paso del tiempo esta pared puede sufrir una serie de cambios producto del metabolismo y el envejecimiento, manifestndose con deposiciones de diversas sustancias tales como lignina, grasas (suberina, cutina, ceras), taninos, etc., que pueden ser reconocidas mediante pruebas qumicas. La pared celular delimita a la clula vegetal, determina su forma y confina al protoplasma, en el cual se distribuye una serie de orgnulos bien definidos morfolgicamente y limitados por membranas especiales que cumplen funciones vitales especficas. Otra caracterstica tpica de la clula vegetal es la presencia de plstidios, los cuales pueden ser pigmentados (cloroplastos y cromoplastos) o no pigmentados (leucoplastos). La clorofila es el pigmento fundamental de los cloroplastos, mientras que los carotenos dan la coloracin rojiza o anaranjada de los cromoplastos; dentro de los plstidios no pigmentados se encuentran los elaioplastos, que almacenan grasas (lpidos) y los amiloplastos, que almacenan almidn; stos ltimos pueden tener formas diversas e incluso pueden tener valor taxonmico. Este laboratorio se centra en los aspectos de la estructura de clulas vegetales que se pueden observar con microscopio de luz. Despus de completar esta prctica de laboratorio el estudiante debe tener una mejor comprensin de la naturaleza dinmica de las clulas vegetales. Objetivos

Reconocer la variacin de forma y tamao de las clulas vegetales. Distinguir algunos orgnulos y estructuras caractersticas de una clula vegetal, que pueden ser observados con el microscopio ptico.
Materiales y reactivos Microscopio Porta y cubreobjetos Comps* Lpiz* Gotero* Tijeras*Pinzas (depilador)* Cuchillas de afeitar nuevas* Franela*

Un bulbo de cebolla pequeo* Tela ojo de pescado o papel Cajas de Petri Floroglucina (solucin saturada en 20% de HCl)

Lugol (Yoduro de potasio 2% + 0.2% de Yodo en agua) Frasco lavador con agua Toallas de papel*. Limpialentes* Placa de tincin.

*Los materiales sealados con asterisco deben ser suministrados por los estudiantes

Procedimiento para realizar secciones de material vegetal 1. Sintese cmodamente con los antebrazos apoyados y los codos pegados al cuerpo. Sujete el tejido que va a cortar entre el dedo pulgar y el ndice. 2. La hoja de afeitar, El tejido y los dedos deben estar hmedos, El agua debe gotear los dedos al cortar. 3. Cortar el tejido de forma rpida y sin problemas en el plano deseado orientando la hoja de afeitar hacia usted en un movimiento de corte suave, la hoja de afeitar debe descansar en la punta del dedo pulgar. Utilice el pulgar para controlar el grosor y la uniformidad de las secciones. esto toma prctica, concntrese en conseguir porciones muy finas de algunas secciones. No es necesario obtener secciones transversales completas. 4. Traslade las secciones en una caj de petri llena de agua, siempre utilice pinzas 5. Traslade las secciones a una placa de tincin de acuerdo a lo indicado. 6. Posteriormente enjuague en una caj petri que contiene agua. 7. Monte las secciones sobre El portaobjetos limpio con una gota de agua. Para colocar el cubreobjetos, mantngalo en un ngulo de 45 tocando la gota de agua con un borde. Baje el cubreobjetos lentamente para evitar las burbujas de aire. 8. Se pueden realizar montajes semipermanentes mediante la fijacin del tejido en glutaraldehido con buffer fosfato, luego se pasa a glicerol y se sella el cubreobjetos con esmalte de uas transparente. Parte 1. Clulas vegetales en Movimiento 1. Tomar un estambre de una flor de Tradescantia, Astromelia o Agapanto (hojas de elodea o epidermis de cebolla se puede utilizar si las flores no estn disponibles). Observe los finos pelos blancos en el filamento. Retire la antera y haga una preparacin

en fresco del filamento. Examine los pelos estaminales utilizando el microscopio compuesto. 2. Cada pelo estambre se compone de un grupo de las clulas. Enfoque cuidadosamente en una sola clula y observe el ncleo grande. Si usted observa el citoplasma con cuidado debera ver pequeas partculas que se mueven en un proceso llamado corriente citoplasmtica. La corriente citoplasmtica es impulsada por las mismas protenas que son responsables del movimiento muscular, la actina y la miosina. Las partculas que se mueven se recubren con la miosina, que los mueve a lo largo de los cables de actina utilizando la energa derivada a partir de ATP. Intente recorrer el movimiento que se produce en las clulas vegetales vivas. 3. Dibuje una clula de pelo de estambre y etiquete el ncleo, citoplasma y la vacuola Parte 2. Plstidios Los plstidios se derivan de proplastidios, que son orgnulos autorreplicantes que se encuentran en el tejido meristemtico. El plastidio ms comn es el cloroplasto que contiene los pigmentos fotosintticos como la clorofila. Otros tipos de plstidos incluyen cromoplastos que contienen pigmentos carotenoides rojo, naranja o amarillo y los amiloplastos que almacenan grandes cantidades de almidn. Las clulas de las hojas de plantas que han germinado en la oscuridad contienen etioplastos, que se desarrollan en cloroplastos tan pronto como las hojas son expuestas a la luz. Los plstidios se derivan de proplastidios, que son orgnulos autorreplicantes que se encuentran en el tejido meristemtico. El plastidio ms comn es el cloroplasto que contiene los pigmentos fotosintticos como la clorofila. Otros tipos de plastidos incluyen cromoplastos que contienen pigmentos carotenoides rojo, naranja o amarillo y los amiloplastos que almacenan grandes cantidades de almidn. Las clulas de las hojas de plantas que han germinado en la oscuridad contienen etioplastos, que se desarrollan en cloroplastos tan pronto como las hojas son expuestas a la luz. 1. Cloroplastos: Hacer una preparacin en fresco de hojas de elodea, examinar con el microscopio compuesto. Los cuerpos verdes, en forma de disco son los cloroplastos. 2. Amiloplastos: Los embriones a menudo contienen grandes cantidades de almidn almacenado. Por qu? Examinar un preparado embrin de trigo o maz maduro e

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identificar los granos de almidn. Cada amiloplasto contiene varios granos de almidn, pero los lmites de los orgnulos no suelen ser visibles con el microscopio de luz. Dibuje comparativamente los cloroplastos de elodea y amiloplastos del embrin de trigo o maz. 3. Cromoplastos: Hacer preparaciones hmedas de rodajas de pimientos verdes y rojos. Los plstidios verdes del pimiento verde son cloroplastos pero los cloroplastos se han diferenciado en cromoplastos en el pimiento rojo. Los pigmentos carotenoides rojoanaranjadas en estos plstidos son hidrofbicos (liposoluble). Compare, dibuje y etiquete clulas que contienen cloroplastos y cromoplastos en el pimiento verde y rojo respectivamente. Parte 3. Vacuolas 1. Pigmentos vacuolares: En contraste con cromoplastos, las vacuolas contienen pigmentos de antocianina, que son hidrfilos (soluble en agua). Pelar un trozo de epidermis de un bulbo de la cebolla roja o una hoja de Tradescantia y realizar una preparacin en fresco. Los pigmentos rojo-violeta que observa estn contenidos dentro de la vacuola. Adems de contener pigmentos y otros materiales, las vacuolas funcionan de manera similar a los lisosomas de las clulas animales. 2. Taninos: Las vacuolas de algunas clulas acumulan sustancias fenlicas llamados taninos. Estos compuestos son complejos con protenas que ayudan a proteger las plantas contra insectos y patgenos. Realice un montaje con corte transversales de hojas de pino usando como colorante (Negro amido al 1% en cido actico al 7% 1 minuto, transferir a cido actico al 7% y despus lavar con agua). Examine la preparacin de hojas de pino, identifique la tincin rojo en clulas que contienen vacuolas con tanino. Dibuja y rotula comparativamente clulas con vacuolas pigmentadas (Tradescantia) y vacuolas que contienen taninos (hoja de pino). 3. Cristales: Algunas clulas acumulan oxalato de calcio cristalino en sus vacuolas. Los cristales de oxalato de calcio inhiben la depredacin y pueden servir de depsito o de almacenamiento de calcio. Los materiales cristalinos se pueden observar mejor con luz polarizada. Utilice filtros polarizadores para examinar una preparacin en fresco de hojas y tallos de Monstera deliciosa (balazo) hojas de cebra, peciolos de begonia y otras.

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Los cristales o rafidios son aciculares. Los cristales drusas pueden ser identificados en las secciones del peciolo de Begonia. Examine cortes transversales de hojas, peciolos y tallos de las especies mencionadas observe e identifique los cristales que se acumulan en vacuolas. Dibuja y rotula en forma comparativa clulas con cristales rafidios (hoja de cebra o balazo) y cristales drusa (begonia). Parte 4. Paredes celulares Clulas de las plantas en crecimiento producen las paredes celulares primarias compuestas principalmente de polisacridos. Algunos tipos de clulas producen una pared celular secundaria que puede llegar a ser impregnada con un aromtico polmero llamado lignina. Las clulas con paredes celulares primarias y los que tienen paredes celulares secundarias lignificadas se puede observar en la pulpa de la pera. Obtener un pequeo trozo de pulpa de la pera y colocarlo en un portaobjetos con una gota de floroglucina (Precaucin: el floroglucina se disolvi en HCl 20%). Coloque un cubreobjetos sobre el material y presione suavemente para extender las clulas. Examine el portaobjetos con el microscopio compuesto. El floroglucina reacciona con la lignina para producir un color rojo, slo se tien las clulas con paredes celulares secundarias. Las clulas que aparecen sin teir slo tienen paredes primarias. Dibuje un diagrama que distinga a las clulas con paredes celulares primarias de las que tienen paredes celulares secundarias.

Cuestionario Con base en sus observaciones y tomando como gua los siguientes enunciados, redacte la discusin de la prctica relacionando estructuras celulares y su funcin: 1. cul es la importancia del movimiento celular especialmente el movimiento de cloroplastos? 2. Cul es la funcin de diferentes pigmentos en cloroplastos y cromoplastos 3. Porque algunos compuestos se acumulan en la vacuola celular 4. Realice una breve consulta sobre la estructura y la funcin de la pared celular Bibliografa

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1. Karp, G. 2009. Biologa celular y molecular: conceptos y experimentos. McGrawHill/Interamericana. Mxico. 2. Roberts A. 2012. Plant structure and development. Lab Manual. Department of Biological Sciences. University of Rode Islan. 45 pp. 3. Salisbury F.C. y Ross C. 2000. Fisiologa de las plantas 1. Clulas: agua soluciones y superficies. Paraninfo Thomson Learning. Madrid. Captulo 1 3-36 p.

5.8. PRACTICA 9-IDENTIFICACIN DE CLULAS SANGUNEAS Dentro de la extraordinaria complejidad que presenta la estructura y funcionalidad en los animales nos encontraremos con elevados niveles de especializacin que revertirn en una gran diversidad celular y por lo tanto de tejidos. Sin embargo todos las clulas animales presentan una caracterstica comn: la ausencia de la pared celular; carecen por ello de la rigidez tpica de la clula vegetal. De manera general podemos clasificar cinco tipos de tejidos animales: epitelial, sanguneo, muscular, nervioso, sostn. El tejido conjuntivo a diferencia del epitelial, est formado por clulas de diferente tipo (fibroblastos, adipocitos, macrfagos, fibras de colgeno, etc.) inmersas en un abundante matriz en donde predominan los compuestos sulfatados como el condrioitin sulfato. Forman parte de huesos cartlagos, tendones, ligamentos, de las cubiertas de la mayor parte de los rganos internos y de la sangre. La sangre humana est compuesta de plasma (55%) y elementos celulares (45%). El plasma est constituido por agua, iones, protenas plasmticas y sustancias transportadas por la sangre, y los elementos celulares son los eritrocitos, leucocitos y las plaquetas. Eritrocitos (glbulos rojos): su principal funcin es transportar oxgeno y dixido de carbono, en mamferos son anucleados. La hemoglobina (Hb) es una protena importante en los glbulos rojos que lleva oxgeno desde los pulmones a todas las partes del cuerpo. Leucocitos (glbulos blancos): constituyen la principal defensa del organismo y asisten en el proceso inmunolgico, ayudan a curar las heridas no solamente combatiendo la infeccin, sino tambin ingiriendo clulas muertas, restos de tejido y glbulos rojos viejos. Nos protegen de los cuerpos extraos que entran en la corriente sangunea, como los alrgenos. Se dividen en dos grandes grupos: Granulocitos y agranulocitos:

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1. Granulocitos con ncleo multilobulado o segmentado e incluyen: Neutrfilos: principal sistema de defensa del organismo que participan en la destruccin de agentes infecciosos, mediante la produccin de toxinas y/o fagocitosis. Aproximadamente son el 70 % de los leucocitos. Basfilos: secretan sustancias como la heparina con propiedades

anticoagulantes y la histamina que estimula el proceso de inflamacin. Eusinfilos: se activan y aumenta su nmero en infecciones y alergias. 2. Agranulocitos: Ncleo redondo u oval no segmentado. Son mononucleares. Los dos estn asociados con el sistema inmunolgico. Son producidos en el tejido linfoide del bazo, el timo y los ganglios linfticos. Monocitos: Ncleo de mayor tamao, en forma de herradura, de rin o de frjol, son las leucocitos ms grandes, y aumentan en caso de infeccin, emigrando a los tejidos donde se convierten en macrfagos, se acumulan en pulmones, hgado, bazo, medula sea, donde sobreviven muchos meses. Digieren sustancias extraas no bacterianas durante las infecciones crnicas, adems de clulas muertas o daadas. Linfocitos: Son clulas destructoras, principalmente cuando ocurren infecciones agudas. Producen importantes anticuerpos, son importantes en la inmunidad celular, se diferencian de dos tipos T y B. Su ncleo es redondo u oval con una pequea escotadura en la parte superior. Plaquetas (trombocitos): su funcin principal es la coagulacin de la sangre. Las plaquetas tienen un tamao mucho ms pequeo que el resto de las clulas sanguneas. Se aglutinan en el orificio de un vaso sanguneo formando un cogulo, o trombo, que detiene la hemorragia. La produccin de linfocitos se puede realizar en diversas partes (mencionado arriba). Pero la produccin de neutrfilos, monocitos, eosinfilos y basfilos se realiza exclusivamente en la mdula sea. Tambin podemos encontrar otro tipo de leucocitos como las clulas plasmticas y los macrfagos en la mdula sea y en otros sitios (Figura 18). Neutrfilos (60-70 %): tienen un dimetro de 12 a 15 y un ncleo dividido en 3 o 5 lbulos Linfocitos (25- 30%): tienen un dimetro de 5 a 8 y el ncleo ocupa la mayor parte de la clula.

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Monocitos (5-10%): tienen un dimetro de 12 a 18 y el ncleo tiene forma arrionada y abundante citoplasma. Eusinfilos (1-4%): tienen un dimetro de 12 a 15 y un ncleo con dos lbulos unidos por cromatina Basfilos (0.5 %): tienen un dimetro de 12 a 15 y un ncleo bilobulado en forma de S (Figura 19).

Figura 18. Hematopoyesis

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Figura 19. Diferenciacin de clula sanguneas Objetivos Aprender cmo se hacen preparaciones en fresco, semi-fijas de frotis sanguneos. Conocer y aplicar la tcnica de tincin ms utilizada para la diferenciacin del tejido sanguneo Reconocer caractersticas para identificar clulas sanguneas. Materiales y reactivos Muestras biolgicas sanguneas de Microscopio Mechero Lancetas Colorante de Wright Muestra de sangre de ser humano ave y perro conseguidas en la clnica veterinaria

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Solucin buffer pH 6.0 Agua destilada Lminas y laminillas Palillos de dientes* Lanceta estril Guantes quirrgicos desechables*

*Los materiales sealados con asterisco deben ser suministrados por los estudiantes

Procedimiento Observacin de clulas sanguneas 1. Con una lanceta estril pnchese el dedo pulgar para extraer una gota de sangre. Colquela en el extremo de un portaobjetos, haga un extendido y deje secar al aire. 2. Coloque igualmente una gota de sangre de perro y de ave en un portaobjetos, realice el mismo procedimiento del punto anterior. 3. Agregue colorante de Wright cubriendo el extendido durante cinco minutos. Elimine el exceso de colorante, agregue solucin buffer pH 6.0 y deje por tres minutos. Lave la placa y observe en mayor aumento. Dibuje los diferentes tipos de glbulos blancos y dems clulas sanguneas en los tres tipos de muestras observadas. 4. Realice los dibujos 40X de las diferentes muestras observadas, sealando las clulas que los conforman y los componentes celulares que alcance a diferenciar.

Cuestionario 1. Revise cada una de las laminillas, identifique las diferencias de forma y tamao relativo entre las clulas sanguneas de los diferentes taxa. 2. Enumera los diferentes tipos de clulas sanguneas encontradas. (Identificar eritrocitos y leucocitos). 3. Identificar los diferentes tipos de leucocitos de acuerdo a la forma y tamao del ncleo. 4. Determinar la proporcin de los tipos clulas sanguneas encontradas en las muestras de las personas sanas y enfermas. 5. Elaborar cuadro sinptico con las caractersticas de las clulas sanguneas de los taxa observados. 6. Para qu sirve un recuento leucocitario? 7. Bajo que patologas se incrementan las diferentes lneas celulares granulocticas y agranulocticas en el humano?

8. Teniendo en cuenta las observaciones del laboratorio anterior complete el siguiente cuadro comparativo: Caractersticas Tamao Forma Estructuras celulares observadas Clulas procariticas Clulas eucariticas Vegetales Clulas eucariticas Animales

Bibliografa 1. Lechuga Granados, Adriana., Tafolla Venegas, David., Garca Garrido, Pedro., Cancino Murillo, Ramn., Soria Baltazar, Romn., Manzo Avalos, Salvador. 2011. Manual de Prcticas de Laboratorio de Fisiologa Animal. Universidad Michoacana de San Nicols de Hidalgo. Facultad de Biologa.