Você está na página 1de 4

ANEXO C

ORIENTAÇÕES PARA A REALIZAÇÃO DE UMA EXPERIÊNCIA ALTERNATIVA QUE INCLUI

CONSTRUÇÃO DA TINA DE ELECTROFORESE

Material

Para a “tina” de electroforese


 Uma pequena caixa de plástico com aproximadamente 8x12 cm (por exemplo,
uma caixa de pontas de micropipetas vazia)
 Dois pauzinhos de gelado normais
 Dois pauzinhos de gelado mais estreitos
 Tesouras
 Fita adesiva/cola
 Dois pedaços de fino de aço inoxidável com 5’’ (polegadas)
 Dois fios eléctricos com pinças de crocodilo
 Cinco pilhas de 9 V

Para o gel e o padrão


 Água
 Bicarbonato de Sódio
 Agar em pó ou agarose
 Faca ou outro objecto cortante

Para as amostras
 Água
 Corante alimentar
 Glicerina (disponível nas farmácias)
 Pipetas descartáveis
Preparação

1. Construir um pente para criar poços no gel, onde


serão colocadas as amostras. Cortar os paus estreitos
de gelado, de forma a que estes fiquem ligeiramente
acima da base da caixa de electroforese, quando
A
suspensos a partir de um pau de gelado normal
(aproximadamente 3-4cm dependendo da altura da
caixa). Colar os paus de gelado estreitos no pau de
gelado normal, de forma a obter um pente com cinco
dentes, distribuídos uniformemente. Colar o outro pau de gelado normal do outro
lado do pente para fixar bem os dentes, verificar se estes estão distribuídos
uniformemente e se não tocam no fundo quando colocados na caixa. Colocar o
pente verticalmente perto do topo da caixa.(Ilustração B
A)

2. Fazer uma solução tampão com 0,2% de bicarbonato de


sódio, dissolvendo 2g de bicarbonato num litro de água.
Serão necessários aproximadamente 100ml (Ilustração
B)

3. Fazer uma solução de gel a 1%, adicionando 1g de


agar-agar em pó a 100ml de solução tampão de
bicarbonato de sódio. Serão necessários cerca de 40-50ml de solução de gel. Para
dissolver o pó, aqueça a solução num microondas,
parando de vez em quando para agitar vigorosamente a C

solução. Tenha atenção pois a solução irá ferver assim


que esteja quente o suficiente. Quando vir bolhas
desligue o microondas e agite até que as partículas de
agar-agar estejam totalmente dissolvidas. A solução
deverá ser translúcida e solidificará à temperatura
ambiente. Cortar aqui

4. Logo que a solução esteja pronta a utilizar, deite-a na


caixa de forma a cobrir cerca de 0,5cm dos dentes do pente.
5. O gel só necessita de ter metade do tamanho da caixa. Além disso, é necessário
reservar espaço para os eléctrodos. Logo que o gel solidifique (5-10minutos) corte
parte da extremidade do gel mais distante do pente. Sem
descolar o pente, corte uma tira fina dessa extremidade
também, para colocar o eléctrodo. O gel terá agora cerca de
6cm de comprimento e 8 de largura. As partes cortadas
podem ser reutilizadas aquecendo-as novamente (Ilustração
C) D

6. Dobre cada um dos fios de aço inoxidável e coloque-os ao


longo da largura da caixa, em cada uma das extremidades do
gel. Se necessário use fita para fixar os fios à caixa. Estes
serão os eléctrodos positivo e negativo (Ilustração D)

E
7. Ligue as 5 pilhas, encaixando o pólo positivo de umas no
pólo positivo das outras. Ligar uma das extremidades dos
cabos aos dois pólos das pilhas disponíveis e a outra
extremidade aos eléctrodos. O sistema eléctrico deverá
agora estar pronto a utilizar (Ilustração E)

8. Prepare 5 amostras diferentes misturando 1-2 gotas de corante alimentar com 1 ml


de glicerina e 1 ml água num tubo pequeno. Utilize azul, vermelho, verde, amarelo e
violeta (obtido a partir da mistura de corante alimentar azul e vermelho).

9. Quando a preparação de gel estiver pronta, verta a solução tampão suficiente para
cobrir o gel solidificado. Verifique se encheu o espaço deixado pelo gel cortado e se
o gel está completamente submerso.

10. Remova o pente puxando suavemente sem contrair o gel. Os poços devem ser
preenchidos com solução tampão.

11. Utilize a pipeta com ponta de agulha para transferir ~ 10 μl de cada amostra para um
poço vazio. O volume da ponta fina da pipeta é de cerca 10 μl. Coloque a ponta
directamente em contacto com a solução tampão acima do poço e esprema a amostra
suavemente para dentro do poço. Ela deve cair no poço,
pois é mais densa do que a solução tampão ao redor. Deve
usar uma nova pipeta para cada amostra para evitar a
contaminação entre amostras. Se tiver apenas algumas
pipetas, enxagúe bem a ponta numa taça de água antes da
reutilização (Ilustração F).

F
12. Quando todas as amostras estiverem carregadas, ligue o fio
condutor desde a bateria aos eléctrodos presos em fios de
aço inoxidável fixados à caixa. Ligue o terminal negativo
ao eléctrodo na parte superior do gel (perto do pente) e o
terminal positivo ao eléctrodo na parte inferior do gel.
Deve ver bolhas a formar-se ao longo dos eléctrodos,
quando o circuito estiver pronto (Ilustração G).
G

13. Aguarde entre 15-20 minutos e observe o que acontece a cada amostra.

14. Analise os resultados

Nota: as imagens deste anexo foram retiradas/adaptadas de Gel Electrophoresis - Draft, in


Julie Yu, Exploratorium, 2007