ESCTRUCTURA CELULAR

El microscopio revel por primera vez la presencia de bacterias, y ms tarde los secretos de la estructura celular

METODOS OPTICOS
Microscopios de Luz
De campo Brillante (0.2 micras a 0.2 mm) De contraste de fases De Campo oscuro De Fluorescencia Diferencial de contraste de interferencia

Microscopio electrnico
Electrnico de transmisin (hasta 0.001micras) Electrnico de Barrido Microscopio de lser confocal

Clasificacin:
Procarionte Eucarionte

CLULA
Ausente
nicos Ausentes

Envoltura nuclear
Cromosomas Nuclolos

Presente
Mltiples Presentes

Divisin
Ribosomas Endomembranas

Amitosis
presentes Ausentes

Mitosis o meiosis
Presentes Presentes

Mitocondrias
Cloroplastos

Enzima respiratoria
Fotosntesis en la membrana plasmtica No celulsica ausente Fibrina nica, flagelo

Presentes
Presentes en del clulas vegetales

Pared celular Endocitosis y Exocitosis Locomocin

Celulsica en clulas vegetales Presente Cilios y flagelos

Ncleo
Contiene el gnoma de la clula. Est limitado por una membrana doble; la cual tiene poros. El DNA se puede observar cuando la clula est en divisin, cuando estn condensados.

Ncleolo
Area de sintesis de RNA.

ESTRUCTURAS CITOPLASMATICAS
RE
Red de condutos limitados por membranas y que tienen continuidad con la membrana del ncleo. Rugoso y Liso.

APARATO DE GOLGI
Conjunto de membranas que funcionan en combinacin con RE para modificar y organizar los productos quimicos.

Aparato de Golgi.
El Aparato de Golgi (AG) es un sistema mixto de cisternas apiladas (compartimentos rodeados de membrana, flechas rojas) y de vesculas (flechas azules) que se localiza en el citoplasma de las clulas. Debe su nombre a Camillo Golgi, Premio Nobel de Medicina en 1906 junto a Santiago Ramn y Cajal.

 Las lisosomas son vesculas relativamente grandes, formadas por el retculo endoplasmtico rugoso y luego empaquetadas por el complejo de Golgi que contienen enzimas hidrolticas y proteolticas que sirven para digerir los materiales de origen externo o interno que llegan a ellos.

 Las enzimas ms importantes en el lisosoma:

Lipasa, que digiere lpidos.

Glucosilasas, que digiere carbohidratos. Proteasas, que digiere protenas. Nucleasas, que digiere cidos nucleicos.

PLASTIDOS

Las mitocondrias tienen el tamao de una clula procariota y su membrana carece de esteroles. (endosimbiosis).
Externa permeable Interna
Se invagina y forma unos plegamientos llamados crestas en donde estn las enzimas necesarias para la produccin de ATP. Entre su pliegues se encuentra la matriz en la cual estn las enzimas necesarias para el ciclo de Krebs

Doble membrana

Los cloroplastos son organelos fotosinteticos que convierten la energia solar en energia.

Ambos poseen AdN circular que participa en la transferencia de ARN y codifica algunas proteinas
Algunos microorganismos contienen hidrogenosomas que captan pituvato, H2, CO2 y producen ATP

Esta formada por: Membrana externa (lisa) Membrana interna (plegada)

Matriz (estroma mitocondrial)

Adems posee:

ADN cclico y desnudo

Molculas de ARN Ribosomas

Caractersticas:
Es un organelo flexible

Suelen ser grandes y alargadas.

Algunas pueden ser ms redondeadas

 Peroxisoma Produce perxido por la reduccin de 02 a partir de Hidrogenos donadores. Las funciones de los peroxisomas son la -oxidacin de cidos grasos aminocidos, el cido rico, el cido lctico, etc.; la eliminacin del perxido de hidrgeno y la destoxificacin de las sustancias nocivas para el organismo, como el alcohol. La mitad del etanol ingerido en la dieta se oxida a acetaldehdo en los peroxisomas. Espasa Calpe, S.A.

Citoesqueleto

ESTRUCTURA DE LAS CELULAS PROCARIOTAS

Nucleoide
No son eucariotas. Conservan su ADN en el nucleoide, se observa con colorante de Fuelgen

ENVOLTURA CELULAR
Las clulas procariotas estn rodeadas por una envoltura compleja en capas que difiere en composicin entre los principales grupos.

Tales estructuras protegen al microorganismo de entornos ambientales hostiles, como osmolaridad extrema, qumicos nocivos e incluso antibiticos.

MEMBRANA CELULAR
A. Estructura
Es una unidad de membrana tpica compuesta por fosfolpidos y hasta 200 diferentes tipos de protenas. Las protenas constituyen casi 70% de la masa de la membrana, una proporcin considerablemente ms elevada en comparacin con las membranas de las clulas de mamferos.

FUNCION
Permeabilidad de transporte
La membrana citoplsmica forma una barrera hidrfoba impermeable a la mayor parte de las molculas hidroflicas. Sin embargo, existen varios mecanismos (sistemas de transporte) que permiten que la clula transporte nutrientes hacia el interior de la misma y productos de desecho hacia el exterior T. Pasivo
Difusion simple de O2 y agua. Difusin facilitada de glicerol

T. Activo
Acoplado con iones: Uniporte, simporte y antiporte Transporte ABC: hidrolisis de ATP abre canales. Translocacin de grupo: Proteina transbordadora fosforilada

 2. Transporte de electrones y fosforilacin oxidativa.

Los citocromos y otras enzimas y componentes de la cadena respiratoria incluyen ciertas deshidrogenasas que se ubican en la membrana celular.
La membrana celular bacteriana es un anlogo funcional a la membrana mitocondrial, una relacin que muchos bilogos han considerado como la base para la teora de que las mitocondrias evolucionaron a partir de bacterias simbiticas.

 3. Excrecin de exoenzimas hidrolticas y patogenia de las protenas.

Todos los organismos que dependen de polmeros orgnicos macromoleculares como fuente energtica (p. ej., protenas, polisacridos, lpidos) excretan enzimas hidrolticas que desdoblan los polmeros hasta subunidades lo suficientemente pequeas para penetrar la membrana celular.

Los animales superiores secretan tales enzimas en la luz del tubo digestivo.

 4. Funciones de biosntesis.

La membrana celular es el sitio de los lpidos transportadores sobre los cuales se ensamblan las subunidades de la pared celular as como de la biosntesis de las enzimas de la pared celular. Las enzimas para la sntesis de fosfolpidos tambin se ubican en la membrana celular.

 5. Sistemas quimiotcticos.

Las sustancias con capacidad de atraccin y repulsin se unen a receptores especficos en la membrana bacteriana. Hay al menos 20 quimiorreceptores diferentes en la membrana de E. coli, algunos de los cuales tambin actan como el primer paso en el proceso de transporte.

Pared celular

La presin osmtica interna de la mayor parte de las bacterias vara de 5 a 20 atm como consecuencia de la concentracin de solutos.
En la mayor parte de los entornos, esta presin sera suficiente para hacer estallar la clula si no se contara con la presencia de una pared celular con fuerza tensil elevada.

 La pared celular debe su resistencia a petidoglucanos, mucopeptidos o mureina.

 A. Capa de peptidoglucanos
El peptidoglucano es un polmero complejo que consiste, con fines de descripcin, de tres partes: una estructura bsica, compuesta de molculas alternadas de Nacetilglucosamina y de cido Nacetilmurmico y un grupo idntico de enlaces peptdicos cruzados.

B. Componentes especiales de las paredes celulares de bacterias grampositivas

Acido teicoico :
abarca la totalidad de la pared celular, membrana o polmeros capsulares que contienen glicerofosfato o residuos de ribitol fosfato. En conjunto con los peptidoglucanos, WTA y LTA proporcionan funciones relacionadas con la elasticidad, porosidad, fuerza tensil y propiedades electrostticasde la envoltura.

 2. Polisacridos.
La hidrlisis de paredes celulares de bacterias grampositivas de ciertas especies ha permitido la obtencin de carbohidratos neutros como manosa, arabinosa, ramnosa y glucosamina, as como azcares cidos como el cido glucurnico y cido manurnico.

Componentes especiales de las paredes celulares de bacterias gramnegativas

Membrana externa.

Es una estructura con bicapa cuya hoja interna tiene una composicin similar a la de la membrana celular, en tanto que la hoja externa contiene constituyentes diferentes, LPS.

 La capacidad de la membrana externa para que excluya molculas hidrfobas es una caracterstica poco comn entre las membranas biolgicas y sirve para proteger a la clula.

Sin embargo, dicha membrana posee conductos especiales, formados por protenas denominadas porinas, que permiten la difusin pasiva de compuestos hidroflicos de bajo peso molecular como azcares, aminocidos y ciertos iones.

Las molculas grandes de antibiticos penetran la membrana externa con relativa lentitud, lo que explica la resistencia relativamente elevada a los antibiticos de las bacterias gramnegativas

 El lpido A est formado por un disacrido compuesto por dos unidades de Nacetilglucosamina, al que se le unen cidos grasos mediante enlace ster. A continuacin se dispone la regin R, formado por una serie de monosacridos de seis carbonos (hexosas) como la glucosa, ramnosa y galactosa, entre otros, y tambin formado por monosacridos poco usuales como los didexosiazcares El antgeno O se dispone fuera de la clula como una endotoxina, actuando como receptor para muchos bacterifagos

Lipoprotenas.
Unen la membrana externa con las capas de peptidoglucanos, su funcin es la de estabilizar la membrana y fiajrla a los peptidoglucanos.

ESPACIO PERIPLASMICO
Contiene la capa de peptidoglucano y una solucin de protenas que se comporta como un gel. El espacio periplsmico representa casi 20 a 40% del volumen celular,

Las protenas periplsmicas incluyen protenas fijadoras , enzimas destoxificadoras (p. ej., lactamasa y fosforilasa de aminoglucsidos) que inactivan ciertos antibiticos. Oligosacaridos derivados de la membrana, participan en la regulacin osmtica

D. Pared celular de bacterias acidorresistentes

Algunas bacterias, entre las que sobresale el bacilo tuberculoso (M. tuberculosis) y bacterias relacionadas poseen paredes celulares que contienen grandes cantidades de ceras, que consisten de hidrocarbonos ramifi cados complejos (con longitudes de 70 a 90 carbonos) conocidos como cidos miclicos.

La estructura hidrfoba confiere a estas bacterias resistencia a muchos compuestos qumicos como detergentes y cidos fuertes. Si se introduce un colorante en estas clulas por un proceso de calentamiento breve o el tratamiento con detergentes, no puede eliminarse con la aplicacin de cido clorhdrico diluido, como ocurre con otras bacterias. Dichos microorganismos se denominan acidorresistentes.

Enzimas que atacan la pared celular

El enlace 14 de la estructura bsica de los peptidoglucanos sufre hidrlisis por accin de la enzima lisozima.

Autolisinas propias de las bacterias.

Cpsula y glucocliz
El material que se encuentra fuera de la clula y contiene polisacaridos.

La cpsula contribuye a la capacidad de invasin de la bacteria patgena; las clulas encapsuladas estn protegidas de la fagocitosis a menos que estn cubiertas con anticuerpos anticapsulares.

El glucocliz participa en la adherencia bacteriana a las superficies en su entorno, lo que incluye clulas hospedadoras vegetales y animales. Por ejemplo, S. mutans posee la capacidad para adherirse estrechamente al esmalte de los dientes por medio de su glucocliz.

Flagelos
A. Estructura Los flagelos bacterianos son apndices fusiformes compuestos en su totalidad por protena, con un dimetro de 12 a 30 nm. Son rganos de locomocin para las estructuras que los poseen.

Se conocen tres tipos de disposicin:

monotrico (flagelo polar nico), lofotrico (mltiples flagelos polares)

peritrico (flagelos distribuidos sobre la totalidad de la clula).

 Un flagelo bacteriano est constituido por varios miles de molculas de subunidades protenicas denominadas flagelina.

El flagelo se forma por la agregacin de subunidades a una estructura de forma helicoidal. Si los flagelos se eliminan por agitacin mecnica de una suspensin de bacterias, con rapidez se forman nuevos flagelos por la sntesis, agregacin y extrusin de subunidades de flagelina; la motilidad se restablece en 3 a 6 min.

 La flagelina es muy antignica y algunas de las respuestas inmunitarias a la infeccin se dirigen contra estas protenas. Los flagelos se unen al cuerpo celular bacteriano por una estructura compleja formada por un gancho y un cuerpo basal.

El gancho es una estructura curvada corta que parece actuar como articulacin universal entre el motor en la estructura basal y el flagelo. Los cuerpos basales cuentan con un grupo de anillos, un par en las bacterias grampositivas y dos pares en las bacterias gramnegativas.
40 productos gnicos participan en el ensamble y funcin de tales estructuras.

 Las subunidades de flagelina son expulsadas a travs de un conducto central hueco en el flagelo y cuando alcanzan la punta, se condensan con las molculas predecesoras, lo que permite que el fi lamento se haga ms largo.

Motilidad
Quimiotaxis

Aerotaxis
Fototaxis

Pilosidades (fimbrias)
Muchas bacterias gramnegativas poseen apndices superficiales rgidos denominados pilosidades (pelos L) o fimbrias (flecos L). Son ms cortos y ms finos que los flagelos y al igual que stos, se componen por subunidades protenicas estructurales denominadas pilinas.

Las protenas menores denominadas adhesinas se ubican en la punta de las pilosidades y participan en sus propiedades de unin.

 La bacteria se mueve en la direccin en que se adhiere la punta. Este tipo de movimiento superficial se denomina fasciculaciones

Endosporas
Microorganismos sufren un ciclo de diferenciacin en respuesta a condiciones ambientales: el proceso, denominado esporulacin, es desencadenado por el casi agotamiento de varios nutrientes (carbono, nitrgeno o fsforo).

Cada clula forma una espora interna nica que es liberada cuando la clula madre sufre autlisis.

La espora es una clula en reposo, muy resistente a la desecacin, al calor y a los compuestos qumicos; cuando se encuentra en condiciones nutricionales favorables y se activa. la espora germina para producir una clula vegetativa.

 Propiedades de las endosporas

1. Regin central. La regin central es el protoplasto de la espora. Contiene un ncleo completo (cromosomas), todos los componentes del aparato de sntesis de protenas y el sistema productor de energa que depende de la gluclisis. La energa para la germinacin se almacena en forma de 3-fosfoglicerato en lugar de almacenarse como ATP Dipicolinato de Calcio la protege del calor.

 Pared de la espora. La capa ms interna, Contiene peptidoglucano normal y se convierte en la pared celular de la clula vegetativa en germinacin. Corteza. Es la capa ms gruesa de la envoltura de la espora. El peptidoglucano inusual de la corteza es extremadamente sensible a las lisozimas y su autlisis participa en la germinacin de la espora.

Cubierta. La cubierta se compone por protenas similares a la queratina. La impermeabilidad de esta capa confiere a las esporas su relativa resistencia a los agentes qumicos antibacterianos.
Exosporio. El exosporio est compuesto por protenas, lpidos y carbohidratos. Consiste de una capa basal paracristalina y una regin externa con aspecto piloso. La funcin del exosporio es poco clara

GERMINACION
Activacin.
Entre los agentes que pueden activar a una espora en reposo se encuentran el calor, abrasin y acidez

Inicio.
La unin del efector activa una autolisina que degrada con rapidez la corteza de peptidoglucano. Se capta agua, se libera el dipicolinato clcico y diversos constituyentes de la espora sufren degradacin por enzimas hidrolticas.

Proliferacin.

TINCIN

 Los colorantes utilizados a menudo son sales.

Los colorantes bsicos consisten de cationes teidos con un anin incoloro (p. ej., cloruro de azul de metileno+); ocurre lo contrario con los colorantes cidos (p. ej., eosinato de sodio+). Las clulas bacterianas son ricas en cidos nucleicos y portan cargas negativas en los grupos fosfato.

sta se combina con las cargas positivas de los colorantes bsicos. Los colorantes cidos no tien a las clulas bacterianas y por tanto pueden utilizarse para teir el material de fondo a fin de proporcionar un contraste de color.

Los colorantes bsicos tien las clulas bacterianas de manera uniforme a menos que en primer lugar se destruya el RNA citoplsmico. Sin embargo, pueden utilizarse tcnicas de tincin especial para diferenciar los flagelos, cpsulas, paredes celulares, membranas celulares, grnulos, nucleoides y esporas.

Tincin de Gram
Una caracterstica taxonmica importante de las bacterias es su respuesta a la tincin de Gram. Los procedimientos de tincin de Gram inician con la aplicacin de un colorante bsico, violeta de genciana. A continuacin se aplica una solucin de yodo; todas las bacterias se tien de color azul en este punto del procedimiento. Luego la clula se trata con alcohol. Las clulas grampositivas que conservan el complejo de violeta de genciana- yodo adquieren un color azul y las clulas gramnegativas se decoloran por completo con la adicin de alcohol.
Como ltimo paso se aplica otro colorante (como rojo de safranina) de forma que las clulas gramnegativas decoloradas adquieran un color contrastante; las clulas grampositivas adquieren un color violceo.

La base de la reaccin diferencial a la tincin de Gram es la estructura de la pared celular.

Tincin acidorresistente
Un frotis de clulas sobre una laminilla se cubre con carbolfucsina y se calienta en bao Mara.

A continuacin se lleva a cabo la decoloracin con la mezcla de cidoalcohol y por ltimo se aplica una tincin de contraste (azul o verde)

Las bacterias acidorresistentes (micobacterias y algunos actinomicetos relacionados) adquieren un color rojizo en tanto que otras clulas adquieren el color del segundo colorante.

Tincin negativa
Este procedimiento consiste en la atencin del entorno con un colorante cido, dejando a las clulas incoloras. El colorante negro de nigrosina (tinta china) se utiliza a menudo. Dicho mtodo se emplea para aquellas clulas o estructuras difciles de teir en forma directa.

Este mtodo es til para mejorar la visualizacin de bacterias encapsuladas en muestras clnicas como sangre, medios de hemocultivo o lquido cefalorraqudeo.
TINCION DE CAPSULA

Tincin de los flagelos

Los fl agelos son demasiado delgados (12 a 30 nm de dimetro)

Pueden demostrarse al tratar las clulas con una suspensin coloidal inestable de sales de cido tnico, lo que causa la precipitacin intensa sobre las paredes celulares y flagelos. De esta manera, el dimetro aparente de stos se incrementa a un tamao tal que las tinciones subsiguientes con fucsina bsica hacen visibles a los flagelos en la microscopia de luz.

Tincin de esporas
Las esporas se observan de la manera ms simple como cuerpos refringentes intracelulares en suspensiones celulares no teidas (impermeable) o como reas incoloras en clulas teidas por mtodos convencionales.