Antecedentes Planta medicinal: Ruda (Ruta graveolens L) Origen:Europa meridional. Naturalizada y cultivada en diversas partes del mundo.

o.Su extensin de manera espontnea se ha visto favorecida por el clima templado y clido dentro del hemisferio norte. Principales nombres comunes:Ruda oficinal. Ruda de olor pesado, hoja de ruda. Ingls, rue; portugus, arruda domestica, arruda fedorenta, arruda dos jardins, ruta de cheiro forte, Chiapas: lula (tzeltal / tzotzil), lula wamal, luta (tzeltal), lura (tzotzil); Estado de Mxico: lotav, lotta (mazahua); Michoacn: akuitse uarhrakua. Clasificacin taxonmica: Reino Divisin Clase Orden Familia Subfamilia Gnero Especie Plantae Magnoliophyta Magnoliopsida Sapindales Rutaceae Rutoideae Ruta Ruta Graveolens

Descripcin botnica:Se trata de una planta perenne y pertenece a la familia de las rutceas. Se la considera como una planta vivaz que va adquiriendo un aspecto leoso a medida que crecen sus dimensiones. Es un arbusto de 50 a 90cm de altura, el tallo est muy ramificado. Tiene hojas carnosas, muy divididas de color verde azuloso y con aroma fuerte. Las flores son amarillas de 5 ptalos como con dientecillos, con el centro verde. Los frutos son carnosos por dentro, por encima son rugositos y al madurar se abren en 4 partes, empezando por la punta hasta la mitad. La cpsula que produce el fruto llama la atencin por su olor fuerte. Algunos de sus componentes son el tanino o los glucsidos. Se trata de una planta cultivada en huertos familiares para uso medicinal u ornamental, asociada a bosques tropicales caducifolio, subcaducifolio y perennifolio, matorral xerfilo, bosques de encino, de pino, mixto de pino-encino y bosque de junperos. Usos en la medicina tradicional:La ruda es usada principalmente para el dolor de estmago. En Michoacn se le llama a este padecimiento matzarani y se atribuye su causa a la abundante ingestin de alimentos, para lo cual se recomienda el cocimiento de ramas de ruda y manzanilla (Matricaria chamomilla), tomado sin azcar, como agua de uso o el cocimiento de las hojas con sal. Se dice que este malestar tambin puede ser causado por andar con los pies descalzos (V. frialdad), entonces duele y se

inflama el estmago, si ste es el caso, se bebe la infusin de las ramas. Cuando el malestar es debido a un coraje, entonces se toma en ayunas todos los das hasta mejorar, un t hecho con la rama con o sin flor de la ruda, como lo hacen en el Estado de Mxico, o t de tallos y hojas como en Oaxaca y Baja California Sur. Con frecuencia se le utiliza para el dolor de odo como sugieren en Guerrero, Michoacn y Morelos. Se dice que es un dolor fuerte, comn en las personas que salen de un lugar caliente a uno ms fro, para quitarlo se soasa una rama de ruda que se envuelve en algodn y se coloca dentro del odo. Adems, para la bilis se toma la infusin de las hojas, durante 9 das o se muelen las hojas y se exprimen en agua o pulque sin azcar. En ambos casos debe tomarse en ayunas. Asimismo es muy usada en diversos problemas de tipo ginecolgico, como clicos menstruales que se caracterizan por fuertes dolores en el vientre durante los das de la menstruacin, se ocasionan porque cuando estn reglando se baan en agua fra o comen cosas acidas o irritantes. En este caso se prepara un t con las ramas de epazote (Chenopodiumambrosioides), las de ruda y las hojas de hierbabuena (Menthapiperita), se toma cuando se tiene el dolor. Para ayudar al parto (oxitcico), regularizar la menstruacin, como abortivas, espasmolticas y para estimular la lactancia se emplean las hojas, tallos y fruta, machacadas y mezcladas con pimienta dulce (sp. n/r), todo esto se hierve y se bebe. Tambin, suele utilizarse en dolores de aire, tomando en ayunas la infusin de las ramas o de las flores con la semilla de durazno (sp. n/r). Cuando estos son ocasionados por salir caliente sin taparse, entonces las hojas se ponen en alcohol, con l se frota el cuerpo hasta que se quiten los dolores. En caso de mal aire se frotan las hojas molidas. Adems, se menciona su uso para aire que enchueca la boca y sacar aire de los odos. Para curar el aire, que se manifiesta por dolor de cabeza, los tzotziles emplean la ruda sola, frita en manteca de cerdo y untada mediante un masaje suave en las sienes. Adems se ponen flores de florifundio en un lienzo, que se ata con fuerza a la cabeza. Los tzotziles de Zinacantn, Chiapas, consideran que "una persona enferma de susto, es cuando prdida del alma y por lo tanto le duele el corazn". Para sanarlo, el curandero pone durante tres das en una botella, ruda, ans y poleo, macerados en pox (aguardiente regional) con piloncillo, este remedio debe quedar destapado al aire libre para que le den los rayos del sol y el sereno de la noche. Debe ser tomada, en ayunas, una copita diario. Otros usos que se le dan a la ruda son en casos de calambres en el estmago, dolor de barriga, "latido y soltar el estmago"; gripe, resfriado, tos; alfereca; artritis, heridas; vrices; para ataques de epilepsia, calentura, dolor de cabeza, enfado, falta de apetito, tariatipirani y para realizar limpias. Estudios farmacolgicos:Se ha demostrado la actividad antihelmntica que posee el extracto etreo de las hojas sobre Strongyloide stercoralis, Artcylostoma caninum y A. duodenale, y el aceite esencial sobre Ascaris suilla, Hirudo medicinalis, Tubifex riuolorum y Anguillula aceti. En un sistema de tejido aislado se ha comprobado el efecto estimulante sobre el tero de coneja normal, preada y rata preada por el extracto fluido, sobre el tero de cuyo hembra por el extracto acuoso y tero de rata por el aceite esencial. El extracto de diclorometano-metanol obtenido de las ramas, ejerci una accin relajante de msculo liso cuando se prob en leon de perro. Esta misma accin se observ usando el aceite esencial sobre tejido uterino de perro y

sobre tejido de intestino delgado en cuyo y conejo. El extracto etanlico de la planta completa ejerci un efecto de antiimplantacin del vulo fecundado en rata cuando se administr por va intramuscular a la dosis de 40 y 8mg/kg, al igual que un extracto acuoso por va oral a la dosis de lml/kg. La actividad antiespasmdica del aceite esencial se comprob en intestino delgado de perro en el que se indujeron contracciones con aceite de ans. Del mismo modo se observ un efecto anticonvulsivo en ratn debido al extracto etanlico de las ramas administrado por va intraperitoneal en dosis de 2-4ml/kg, cuando se indujeron convulsiones en los animales mediante choques elctricos supramaximales y por la administracin de corazol. Se describe en la literatura la accin antiinflamatoria en rata de un extracto etanlico de las partes floridas por intubacin gstrica a la dosis de 100mg/kg probado al inducir edema de la pata con carragenina. Extractos acuosos de las hojas y el aceite esencial ejercieron una actividad antibitica sobre Staphylococcus aureus, sobre Escherichia colli y Bacillussubtilis slo el extracto, y sobre Pseudomonaaeruginosa slo el aceite. Extractos de la raz fueron activos sobre B. subtilis, Serratiamarcescens y Mycobacteriumphlei. Otros estudios: Composicin qumica: Las ramas, hojas, frutos y raz de R. graveolens contienen un aceite esencial cuya composicin qumica vara de acuerdo al rgano o parte de la planta de que se extraiga. En el aceite de la raz se han identificado los monoterpenos beta-ciclocitra, mirceno, acetato de nonilo, metilnonil-carbinol y sabineno; los sesquterpenos 1,4 dimetil-azuleno, alfa-pergapteno, cariofileno, beta-elemeno, elemol, alfa-farneseno y geijereno; los componentes fenlicos fenil-benzaldebdo, isopropil-benzeno, bifenilo, dimetil-bifenilo, xileno, isovalerato de eid-y trans-cinamilo; y los componentes policclicos antraceno y pireno. En el aceite esencial de las hojas se han detectado los monoterpenos alcanfor, carvacrol, para-cimeno y linalol; los bencenoides cido ansico, glicolanetol, guaiacol y vainillina; las cumarinas umbeliferonay xanthotoxin; el flavonoide rutinlido; y el alcaloide metil-amina. El aceite esencial de las ramas est constituido por los monoterpenos, camfeno, alcanfor, para-cimeno, cineol, limoneno, linalol, alfa y beta-pineno; y el sesquiterpeno 4-1-dimetil-azuleno. En el aceite esencial de fruto se han identificado monoterpenos similares a los de las ramas. La raz de esta planta se caracteriza tambin por la presencia de quinolina y cumarinas. En el primer grupo se describen varios derivados metil-hidroximetoxilados de acridona, dictamina, gama-fagara, gama-fagarina, furacridona, grava-cridonclorina, el iso-derivado, gravacridondiol y sus acetato, glucsido y ter monometlco, gravacridoneclorina, grava-cridonol, gravacridontriol y su glucsido kokusaginina, varios derivados de la quinol-4-ona, ribalinium, rutacridona y rutaverina; las cumarinas bergapteno, byakangeliein, exo-dehidro-chalepn, dafnorn, escopoletn, graveliferona, mar-mesn, marmesinn, naftohemiarn, sopimpineln, rutacultn, rutamarn, rutamarimol, rutaretn, rutarn, y el iso compuesto, suberenon, suberonona, xantotoxn y xantiletn. En la hoja se han identificado los alcaloides de quinolina gama-fagarina, kokusaginina, platidesminum, ribalinium skimianna: La cumarinas bergapteno, psoralen, umbeliferona y xantotoxn; y los flavonoides camferol, quercetn, isoramnetn y sus

rutinsidos y rutn. Tanto en los frutos, como en las ramas y en la planta completa se detectaron alcaloides de quinolina y cumarinas similares a las de la raz y hojas.

Principios activos:Se deben al aceite esencial varias de las actividades biolgicas ejercidas por la planta entre las que se incluyen la accin relajante de msculo liso, estimulante del tero, antiespasmdico, antihelmntica y antibitica. Tambin se ha demostrado que una fraccin de alcaloides totales ejerci una accin antiespasmdica en tejido de intestino aislado de cuyo y relajante de msculo liso en rata. Toxicidad:La dosis letal media del aceite esencial de las ramas en ratn fue de 2.543g/kg, en la rata de 5g/kg, y en el conejo de5g/ kg aplicado externamente. En otros estudios se encontr que la dosis letal media del aceite esencial del fruto en el ratn fue de 3.73g/kg, y del aceite esencial de las ramas de 2.54g /kg, aunque no se indic la va de administracin. La tintura obtenida de las ramas ejerci una accin citotxica y mutagnica sobre Salmonella typhimurium TA98 y TA100. Se describen adems la accin embriotxica del extracto clorofrmico de las ramas en ratas preadas al administrarse por va intragstrica a la dosis de 0.8 y lg/kg en los das 1 a 10 despus de la fecundacin del vulo. Igualmente se observ una accin abortiva del aceite esencial en conejas preadas, efecto hepatotxico y nefrotxico. En el hombre se describe la accin irritante y fotosensibilizante del aceite esencial y las hojas aplicadas externamente, lo que provoc severos eritemas, hiperpigmentacin; edema y aparicin de ampollas. Se describe tambin el efecto abortivo y txico al ingerir el extracto acuoso de las hojas en grandes dosis y con frecuencia. La intoxicacin se manifiesta en la mujer embarazada con vmito, claro y luego bilioso, salivacin, dolor estomacal, delirio, temblores, colapso, el pulso baja y se vuelve irregular. De las 12 a 24 hrs despus de la ingestin, empieza el trabajo de parto que con frecuencia es fatal para la madre. El aceite esencial ingerido en grandes cantidades causa los mismos sntomas, adems de hemorroides, convulsiones y la muerte. El efecto externo de la ruda es tan irritante que el manejo continuo de la planta puede ocasionar ardor, eritema, picazn, y vesicacin de la piel. Causa adems dermatitis y fotodermatitis. Tomado internamente el aceite puede causar un severo dolor de estmago, vmito, confusin y convulsin, y hasta la muerte. Las hojas de esta planta pueden inducir fotodermatitis en personas sensibles. Mtodo bioautogrfico:Los mtodos bioautogrficos permiten combinar la capacidad separativa de la cromatografa en capa delgada con la determinacin in situ de la actividad antifngica de los componentes de una mezcla de compuestos qumicos. Esta metodologa consiste en separar por cromatografa en capa fina los componentes de un extracto o sub-extracto y posteriormente revelar la placa cromatogrfica haciendo crecer un hongo sobre su superficie. De esta manera, los componentes activos de la mezcla son detectados por los halos de inhibicin del crecimiento fngico que ellos producen. La bioautografa ha sido mencionada como la metodologa ms eficiente para el descubrimiento de nuevos compuestos antimicrobianos y constituye

una herramienta muy til para guiar el aislamiento de compuestos antifngicos a partir de mezclas complejas como son los extractos vegetales. Tipos de bioautobiografa: 1) Bioautografa Directa: Se aplica especficamente cuando los microorganismos pueden crecen directamente sobre los cromatogramas como es el caso de los hongos esporulados. En el mtodo de bioautografa directa los cromatogramas son rociados con un medio inoculado con el microorganismo a evaluar puede ser en caldo o agar. Luego las placas de slica gel son incubadas y la visualizacin y localizacin de los compuestos antimicrobianos se realiza usando salesde tetrazolium (MTT), directamente sobre las placas. 2) Bioautografa de contacto: Llamada tambin difusin en agar; en la bioautografa de contacto los compuestos antimicrobianos se difunden desde los cromatogramas, hacia una placa de agar inoculado. Los cromatogramas son colocados sobre la capa de agar inoculado con los microorganismos a ensayar por algunos minutos u horas hasta que ocurra el proceso de difusin de los compuestos. Luego de este proceso los cromatogramas son removidos del medio y el agar es incubado. Las zonas de inhibicin son observadas sobre la superficiedel agar 3) Bioautografa en Agar Overlay: Est mtodo es una versin mejorada del mtodo de difusin en disco clsico. En la bioautografa en agar Overlay se combinan la bioautografa de contacto y directa, y es aplicable a un amplio espectro de microorganismos como son: bacterias, hongos y levaduras. En esta tcnica el medio inoculado se dispersa sobre la placa formando una capa muy fina de aproximadamente 1 mm. La sustancia a evaluar se difunde desde el adsorbente hasta ponerse en contacto con el inoculo en donde ejerce el efecto. Despus de la incubacin las cromatogramas, son rociadas con sales de tetrazolio (MTT), lo cual permite observar zonas de inhibicin claras sobre un fondocoloreado. Ventajas y desventajas: 1) Ventajas: a) Permite la localizacin del compuesto bioactivo. b) Requiere poca cantidad de muestra. c) Permite la separacin de los compuestos a partir delextracto crudo mediantecromatografa de capa fina, parapoder simplificar el proceso de aislamiento eidentificacin de los compuestos activos. d) Es un bioensayo gua para el fraccionamiento de losextractos vegetales. 2) Desventajas a) Se necesita remover completamente el residuo del solvente de las placas TLC. b) El crecimiento de los microorganismos puede estar limitado en las placas de slica gel

Material: Tijeras. Mortero con pistilo. Embudo. Papel filtro. Matraz erlenmeyer 250 ml y 2 matraz. Probeta de 100 ml. 4 frascos 250 ml . Esptula. Pipeta de 10 ml. Papel cromatografico. Papel Aluminio. Cinta adhesiva. 2 vasos de precipitado de 100 ml. Bolsa de plstico. Gasas. Capilar.

Reactivos: Acetona. Metanol. colorante cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazolio. revelador sulfato cerico amoniacal (

METODOLOGIA COLECTA DEL MATERIAL VEGETAL: Se realizo la colecta de la planta de Ruta graveolens el corte se realizo con tijeras de acero inoxidable se corto en la parte del tallo para posteriormente separar las hojas de la planta y el tallo y secarlos por separado.

PREPARACIN DE LOS EXTRACTOS: Una vez que se ha secado por separado las hojas y tallos posteriormente se triturar en el mortero hasta obtener un polvo fino de la hoja y tallo de la planta Ruta graveolens.

Despus que las hojas y tallos se redujeron sus tamaos se utilizaron dos frascos previamente lavados y se utilizo acetona para solubilizar el polvo fino obtenido y se utilizo una relacin ( ) se dejo reposar. Se filtraron las hojas y tallos para posteriormente utilizar el solvente metanol. Se utilizo la misma relacin dependiendo del peso de la hoja y tallo de la planta Ruta graveolens. Por ltimo que se taparon y sellaron con aluminio y cinta adhesiva. Se les hicieron unos orificios en el papel aluminio para que se evaporara el solvente y quedara el extracto.

MTODO BOIAUTOGRAFICO: En este paso las soluciones que se dejaron reposar con la acetona y metanol lo que es el tallo y hoja de la planta Ruta graveolens se harn unas pruebas si tiene actividad microbiana. 1. Primero consiste en marcar unas laminas o pelculas reveladoras depende del extracto y solvente (hoja y tallo) y una marca de referencia. 2. Despus de marcar y ordenar se toma un capilar con punta para obtener una alcuota de los extractos y ponerlos en la punta donde se marcaron.

3. Posteriormente se tomo una lamina y se le puso un colorante cloruro de 2,3,5trifeniltetrazolio con una brocha.

4. Despus que se le agrego el colorante se pone en una caja de petri con gasas previamente hmedas para someterse a una mufla y mantener la temperatura entre ( ) durante 24 hrs despus que transcurren las 24 hrs se aplica el revelador sulfato cerico amoniacal ( ) para saber que parte de la planta tiene mayor actividad microbiana.

RESULTADOS Se realizaron dos diferentes comparaciones con respecto a solventes metanol y acetona en la hoja y tallo de la planta Ruta graveolens en el proceso de la acetona se observaron que se encuentra mayor actividad microbiana en la hoja.

En comparacin con el tallo de la planta Ruta graveolens se obtuvo un menor incremento de actividad microbiana debido a que esta planta en las hojas presenta una actividad antihelmntica. En el caso de los solventes el que la acetona fue el mejor solvente para demostrar si existe actividad microbiana. El solvente de metanol se observo una actividad mucho menor para las hojas y tallos de la planta.

DISCUSIONES El solvente metanol no es bueno para el mtodo bioautografico debido que no presento ninguna actividad microbiana para el tallo y hoja de la planta. Es mejor considerar como solvente para realizar el mtodo bioautografico la acetona. (me falta en discusiones si alguien quieres agregar mas esta libre).

REFERENCIAS: Aplicacin de Mtodos Bioautogrficos para laidentificacin de compuestos antimicrobianos en extractostotales de cuatro especies vegetales de las Provincias deLoja y Zamora Chinchipe: Pipersp., Piperecuadorense(Matico), LepechiniamuticaBenth (Turuyante) y Niphogetondissecta (Culantrillo del cerro). Palacios C. Diana Carolina, Cartuche F. Luis Emilio. Loja Ecuador, 2009. http://www.botanical-online.com/alcaloidesruda.htm http://www.plantasparacurar.com/usos-medicinales-y-aplicaciones-curativas-de-laruda/ http://www.botanical-online.com/florruda.htm http://www.medicinatradicionalmexicana.unam.mx/monografia.php?l=3&t=&id=7464 http://www.conicet.gov.ar/new_scp/detalle.php?keywords=glifosato&id=30223&capitulo s=yes&detalles=yes&capit_id=1072970